Способ оценки фибринолитической активности слезной жидкости


G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2624256:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу оценки фибринолитической активности слезной жидкости. Способ оценки фибринолитической активности слезной жидкости включает отбор слезы из нижнего конъюнктивального свода глаз, титрование анализируемой слезной жидкости путем проведения серии из двукратных разведений с помощью буферного раствора, добавление к полученным образцам латексного реагента, содержащего мышиные моноклональные антитела к Д-димеру фибрина, далее смесь перемешивают, регистрируют реакцию агглютинации в пробе при наибольшей величине разведения и рассчитывают концентрацию Д-димера по формуле:

С(Д-димер)=200×d, нг/мл,

где С - концентрация Д-димера (нг/мл), d - наибольшая величина разведения, 200 - чувствительность реагента, при этом концентрацию Д-димера 3200 нг/мл считают пороговой для подтверждения повышения активности системы фибринолиза слезной жидкости для оценки фибринолитической активности слезной жидкости с использованием в качестве маркера концентрацию Д-димера в слезной жидкости в слезной жидкости. Вышеописанный способ позволяет эффективно проводить оценку фибринолитической активности слезной жидкости. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для оценки фибринолитической активности слезной жидкости /далее «СЖ»/ с использованием в качестве маркера концентрацию Д-димера в слезной жидкости в СЖ.

В настоящее время для диагностики различных заболеваний глаз, помимо инструментальных способов, используют СЖ как информативную биологическую среду, профиль изменения биохимических показателей которой имеет выраженный характер по сравнению с сывороткой крови.

Известно, что СЖ продуцируется главным образом слезной железой, которая кровоснабжается слезной артерией, являющейся ветвью глазничной артерии. Это дает основание полагать, что состав СЖ отражает процессы, протекающие в сосудистой системе глаза. Слеза - единственная доступная жидкость, которая может дать прижизненную информацию о состоянии локальных систем, в частности коагуляционного и фибринолитического звена, поэтому исследование фибринолитической и коагуляционной активности СЖ является более информативным для пациентов с острой сосудистой патологией сетчатки в отличие от анализа крови из локтевой вены [Мошетова Л.К., Яценко О.Ю., Яровая Г.А., Нешкова Е.А. Роль слезной жидкости в диагностике острой сосудистой патологии сетчатки и зрительного нерва // Росс. мед. Вести. - 2004. - №4. - С. 50-53].

Система фибринолиза - протеолитическая система, осуществляющая разрушение фибринового сгустка по мере восстановления поврежденной ткани. Плазминоген является проферментом фибринолитической системы, активация молекулы которого активаторами, обнаруженными во многих тканях и биологических жидкостях организма, ведет к образованию плазмина. Основной физиологической функцией плазмина является протеолиз фибрина, в результате чего образуются продукты его деградации разной молекулярной массы, в том числе Д-димер.

К настоящему времени функциональная оценка системы фибринолиза остается нерешенной проблемой. Основным, если не единственным, методом функциональной оценки системы фибринолиза в сыворотке крови является время лизиса эуглобулинового сгустка. Однако тест эуглобулинового лизиса не учитывает влияния ингибиторов фибринолиза, свойства самого фибринового сгустка с точки его резистентности фибринолизу, а его результаты в сильной степени зависят от концентрации фибриногена.

Современные исследования дают основание полагать, что D-димер является уникальным маркером деградации фибрина и поэтому в последние годы определение его содержания в плазме крови становится важным диагностическим и прогностическим тестом диагностики и мониторинга тромбозов различной этиологии [Мамаев А.Н. Коагулопатии: руководство. - Москва. 2012]. Концентрация Д-димера позволяет судить как о тромбообразовании, так и о тромболизисе независимо от локализации тромба, его объема и причины образования. Измерение концентрации Д-димера в крови является наиболее приемлемым и эффективным неинвазивным диагностическим тестом при ведении пациентов с подозрением на тромбоз не только для подтверждения факта тромбоза, но и для его исключения.

Ранее предпринимались немногочисленные попытки разработать способы определения фибринолитической активности в СЖ, но все они имели недостатки и применения в лабораторной практике не получили.

Так, известен способ оценки фибринолитической системы СЖ у пациентов с тромбозом центральной вены сетчатки и ее ветвей с помощью определения зоны лизиса на фибриновой пластине [В.В. Никольская, 1987; Л.А. Кацнельсон, Т.М. Форофонова, А.Я. Бунин. Сосудистые заболевания глаза, М.: Мед. 1990]. В.В. Бржеский (1990) помимо оценки фибринолитической активности СЖ по вышеуказанной методике, определял коагуляционную активность СЖ путем смешивания цитратной донорской плазмы с СЖ и регистрации времени образования сгустка. Несмотря на то что авторы в своих исследованиях отмечали снижение общей фибринолитической активности СЖ у пациентов с окклюзией вены сетчатки /далее «ОВС»/, эти способы весьма продолжительны по времени, имеют низкую чувствительность, специфичность, плохую воспроизводимость и дают возможность определения лишь суммарной фибринолитической активности СЖ, кроме того, недостатком этих способов является сложность, большая трудоемкость и отсутствие возможности произвести дифференциальную диагностику.

Известен способ оценки фибринолитической активности СЖ путем определения уровня плазминогена (А.И. Муха, 1988).

Несмотря на доступность, этот способ малоинформативен, так как повышение уровня плазминогена может свидетельствовать не только о снижении фибринолитической активности СЖ (замедление образования плазмина и тем самым накопление плазминогена), но и об ее активации: повышение уровня плазминогена за счет увеличения его продукции.

Также известен способ оценки фибринолитической активности СЖ по активности тканевого активатора плазминогена /далее «tPA»/ с использованием иммуноферментного анализа [RU 2107917 C1, RU 2119315 С1].

Однако, помимо трудоемкости, длительности и необходимости дополнительной аппаратуры, этот способ обладает низкой специфичностью, а также предназначен лишь для определения показаний к лазерной коагуляции сетчатки у пациентов с окклюзией вены сетчатки, а также для выбора способа медикаментозного лечения.

В качестве ближайшего аналога принят способ оценки показателей состояния СЖ (индекса коагуляции, фибринолитической активности, уровня а2-макроглобулина) с целью диагностики острой сосудистой патологии глаза [Мошетова Л.К, Яценко О.Ю., Яровая Г.А., Нешкова Е.А. Роль слезной жидкости в диагностике острой сосудистой патологии сетчатки и зрительного нерва // Росс. мед. Вести. - 2004. - №4. - С. 50-53], но помимо трудоемкости выполнения и сложности математических расчетов, данный способ позволяет оценить лишь суммарный потенциал фибринолитической системы СЖ, и не пригоден для дифференциальной диагностики ОВС в сомнительных случаях.

Задачей изобретения является создание эффективного, простого и точного способа оценки активности фибринолитической активности СЖ, позволяющего производить мониторинг изменений системы фибринолиза СЖ, в том числе на фоне лечения антикоагулянтными и фибринолитическими препаратами.

Способ дает возможность полуколичественно определить концентрацию Д-димера в СЖ у пациентов с сосудистыми патологиями сетчатки, в частности с ОВС, что является достаточным для оценки фибринолитической активности СЖ на фоне лечения.

Авторами впервые предложен способ, который объективно на основе полуколичественного анализа дает возможность определить концентрацию Д-димера в СЖ, что позволяет быстро, без использования дополнительного оборудования, и своевременно дать представление об активности фибринолитической системы СЖ.

Технический результат достигается за счет того, что на основании сопоставления офтальмологической картины и данных об уровне Д-димера в СЖ авторами предложены критерии оценки фибринолитической активности СЖ, по которым можно судить об эффективности лечения антикоагулянтными и фибринолитическими препаратами. Способ может быть эффективно использован в клинических лабораториях для оценки активности системы фибринолиза СЖ.

Способ осуществляется следующим образом.

Слезу собирают из нижнего конъюнктивального свода глаз обследуемых одноканальной микропипеткой со специальным одноразовым пластиковым наконечником и в ближайшие часы подвергают исследованию. Анализируемую слезную жидкость объемом 18 мкл титруют, производя серию из двукратных разведений образца (1:2, 1:4, 1:8 и 1:16) с помощью буферного раствора. К полученным разведениям образцам добавляют латексный реагент, содержащий мышиные моноклональные антитела к Д-димеру фибрина (DD-3B6/22), и аккуратно перемешивают смесь пластиковой палочкой. Способ основан реакции латекс-агглютинации, с чувствительностью теста ~ 200 нг/мл. Показатели ниже этой концентрации являются отрицательными, показатели более высоких концентраций - положительные. Тест определяет поперечно сшитые продукты деградации - Д-димер. Регистрацию реакции агглютинации проводят визуально в течение 3-х минут при комнатной температуре, для лучшей регистрации слабой реакции используют боковую подсветку. При полуколичественном анализе оценивают агглютинацию при наибольшей величине разведения. Концентрацию Д-димера рассчитывают по формуле:

Где С - концентрация Д-димера (нг/мл), d - наибольшая величина разведения, 200 - чувствительность реагента.

В качестве контроля произведен анализ СЖ у 30 пациентов, не имеющих глазных заболеваний, связанных с изменением в фибринолитической системе. Все пациенты проходили лечение в филиале №1 ГБУЗ ГКБ им. СП. Боткина по поводу катаракты. В результате биохимических исследований определения концентрации Д-димера в СЖ у данных пациентов получены следующие результаты: у 9 пациентов (30%) концентрация Д-димера в СЖ составила 800 нг/мл, у остальных 21 пациента (70%) концентрация Д-димера в СЖ составила 1600 нг/мл.

Пример 1

Больная С., 57 лет. Поступила на лечение в филиал №1 ГБУЗ ГКБ им. СП. Боткина с диагнозом: тромбоз в/височной ветви центральной вены сетчатки правого глаза.

Анамнез заболевания: 3 дня назад снизилось зрение правого глаза, при обращении к врачу поставлен диагноз: ОД-тромбоз в/височной ветви центральной вены сетчатки.

Анамнез жизни: страдает гипертонической болезнью II ст., 2 ст. в течение 3-х лет.

Глазной статус:

Острота зрения: ОД 0,2 н/к / ОС - 1,0.

Глазное дно: ОД - диск зрительного нерва бледно-розовый, границы четкие, вены расширены, извиты, по ходу в/височной сосудистой аркады свежие геморрагии, в макулярной области признаки отека.

ОС - диск зрительного нерва б/розовый, границы четкие, в макулярной области и по периферии без патологии.

В слезной жидкости пораженного и здорового глаза определен уровень Д-димера. В пораженном глазу он составил 6400 нг/мл, а в интактном - 800 нг/мл. Полученные данные свидетельствуют о повышении уровня Д-димера в пораженном глазу в 8 раз по сравнению со здоровым глазом.

Пациентке была назначена комплексная терапия, включающая также фибринолитические и антикоагулянтные препараты.

После проведенного лечения: острота зрения ОД - 0,4 н/к, глазное дно: геморрагии и отек сетчатки частично резорбировались.

ОС - без динамики.

В слезной жидкости: ОД - концентрация Д-димера - 3200 нг/мл. ОС - 800 нг/мл.

Учитывая эти результаты, можно сделать вывод, что при окклюзии вены сетчатки происходит повышение уровня Д-димера в СЖ, которое имеет тенденцию к нормализации при назначении лечения.

Пример 2

Больной К., 77 лет. Поступил на амбулаторное лечение в филиал №1 ГБУЗ ГКБ им. С.П. Боткина с диагнозом: ОС-тромбоз центральной вены сетчатки.

Анамнез заболевания: 2 месяца назад был поставлен диагноз ОС - тромбоз центральной вены сетчатки, проходил консервативное лечение в 67 ГКБ с временным улучшением остроты зрения.

Анамнез жизни: страдает гипертонической болезнью III ст., 3 ст. в течение 15 лет, перенес инфаркт миокарда в 2007 году.

Глазной статус: Острота зрения: ОД с корр. 0,4; ОС 0,05 н/к.

Глазное дно: ОД - диск зрительного нерва бледно-розовый, границы четкие, детали за флером из-за наличия катаракты.

ОС - диск зрительного нерва гиперемирован, границы стушеваны, отечен, по ходу сосудистых аркад геморрагии, отек сетчатки, распространяющийся на макулярную область.

Слезная жидкость: ОД - уровень Д-димера - 1600 нг/мл. ОС - 3200 нг/мл.

В данном случае отмечается повышение концентрации Д-димера в 2 раза в СЖ пораженного глаза, по сравнению с интактным.

В данном случае лечение с использованием фибринолитических препаратов было нецелесообразно в связи с давностью заболевания. Было определено, что повышенная концентрация Д-димера в СЖ пораженного глаза у пациентов с ОВС может сохраняться длительное время, что, скорей всего, отражает тяжесть окклюзии вены сетчатки.

Интерпретация результатов. Концентрация Д-димера в СЖ, составляющая от 3200 нг/мл и более, свидетельствует о повышении активности системы фибринолиза СЖ.

Способ испытан на кафедре офтальмологии ГБОУ ДПО Российской медицинской академии последипломного образования Минздрава Российской Федерации на базе ГКБ им. С.П. Боткина, Филиал 1.

Способ оценки фибринолитической активности слезной жидкости, предусматривающий отбор слезы из нижнего конъюнктивального свода глаз, титрование анализируемой слезной жидкости путем проведения серии из двукратных разведений с помощью буферного раствора, отличающийся тем, что к полученным образцам добавляют латексный реагент, содержащий мышиные моноклональные антитела к Д-димеру фибрина, смесь перемешивают, регистрируют реакцию агглютинации в пробе при наибольшей величине разведения и рассчитывают концентрацию Д-димера по формуле:

С(Д-димер)=200×d, нг/мл,

где С - концентрация Д-димера (нг/мл), d - наибольшая величина разведения, 200 - чувствительность реагента, при этом концентрацию Д-димера 3200 нг/мл считают пороговой для подтверждения повышения активности системы фибринолиза слезной жидкости.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии, и может быть использовано у недоношенных новорожденных с очень низкой и экстремально низкой массой тела. Способ заключается в том, что у новорожденного с очень низкой и экстремально низкой массой тела на 1-2 сутки жизни определяют показатель тромбоэластограммы 30-минутный лизис сгустка крови (LY30).
Группа изобретений относится к медицине и касается способа диагностики дифтерии, предусматривающего забор клинического материала от больного, выделение из него ДНК, смешивание выделенной ДНК и смеси №1, содержащей ПЦР буфер, смесь нуклеотидов (dNTP), MgCl2, раствор Betaine, праймеры, нагревание, последующее охлаждение, добавление смеси №2, содержащей рабочее разведение Bst полимеразы; проведение изотермальной амплификации, детекцию продуктов амплификации при горизонтальном электрофорезе в агарозном геле путем сравнения электрофоретической подвижности полученных фрагментов ДНК с подвижностью контрольного образца ДНК токсигенного штамма Corynebacterium diphtheriae и диагностику дифтерии.

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, и предназначено для прогнозирования риска снижения эффективности антиагрегантной терапии клопидогрелем и препаратами ацетилсалициловой кислоты (АСК) у больных ишемической болезнью сердца (ИБС), подвергшихся стентированию коронарных артерий.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии и инфекционным болезням, и может быть использовано для прогнозирования развития постинфекционной гастроэнтерологической патологии у детей, реконвалесцентов острых вирусных гастроэнтеритов.

Изобретение относится к медицине и касается способа определения активности ангиотензин-превращающего фермента в тканях сердца, характеризующегося тем, что получают гомогенат биоптата ткани сердца, супернатант, полученный путем центрифугирования гомогената, разбавляют, затем один объем разбавленного супернатанта добавляют к пяти объемам смеси, состоящей из пептидного субстрата, содержащего дипептид His-Leu на С-конце, и ингибитора аминопептидазы, растворенных в буфере с рН 7,5-8,3, проводят реакцию, после чего определяют в реакционной среде содержание образованного дипептида His-Leu, при этом активность ангиотензин-превращающего фермента определяют по количеству микромолей His-Leu, образованному в единицу времени.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики вагинита у девочек в возрасте до 8 лет, заключающийся в том, что используют ПЦР в режиме реального времени с определением в образце числа геномов Lactobacillus spp.

Изобретение относится к области профилактической медицины, экологии человека, педиатрии и может быть использовано для диагностики у детей функционального расстройства центральной нервной системы, ассоциированного с сочетанным техногенным воздействием.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ) тяжелой или средней степени тяжести в программе ЭКО.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения протеогликанов из мочи. Способ заключается в том, что мочу первоначально охлаждают, выдерживают до образования агрегатов, центрифугируют для выпадения осадка, не содержащего протеогликана, после чего к надосадочной жидкости для осаждения протеогликана добавляют осадитель в соотношении 1:1, состав которого включает 4 объема 96° этилового спирта и 1 объем 0,01 N раствора гидроксида натрия, после чего смесь оставляют, не изменяя температурный режим, на 20 мин для образования агрегатов, которые отделяют центрифугированием, а затем осадок протеогликана отделяют от надосадочной жидкости в режиме охлаждения при 0°C центрифугированием, осадок отмывают повторным добавлением охлажденного до 0°C осадителя в соотношении 1:10, выдерживают в течение 5 мин для образования агрегатов, вновь центрифугируют, отделяют надосадочную жидкость, полученный осадок растворяют добавлением 0,01 N раствора HCl, снижая значения pH конечного продукта до pH 7,2, оставшийся незначительный нерастворимый осадок отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость, содержащую очищенный протеогликан, используют по назначению.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ отбора веществ для направленной модуляции иммунного ответа при вакцинации против чумы людей, характеризующийся тем, что выполняется ex vivo на суспензии клеток крови, полученной до и через месяц после вакцинации, инкубированных с тестируемым веществом при 37°С в течение 24 ч с определением в образцах продукции цитокинов - IL-17, IFN-γ, TNF-α, IL-4 и последующей математической обработкой полученных данных с использованием коэффициентов и индексов, и при значении коэффициента эффективности стимуляции тестируемым веществом Т-клеточного звена иммунной системы (КЭИ) тестируемого вещества, превышающего КЭИ для контроля 2 в диапазоне от 1,5 до 3,0 раз, тестируемое вещество считается пригодным для направленной модуляции иммунного ответа.

Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторному исследованию биологической жидкости (супернатанта, плазмы или сыворотки крови), и может быть использовано для определения оптимального для конкретного больного моноэндоцеллюлярного криоконсерванта для хранения клеток при -80°С.

Изобретение относится к области хранения образцов биологического материала, а именно к твердофазным носителям иммобилизации и хранения биологических образцов. Твердофазный носитель для иммобилизации и хранения образцов, содержащих нуклеиновые кислоты, представляет собой пористую целлюлозную основу, обработанную композицией, содержащей детергент, слабое основание, хелатообразующий агент и дисахарид.

Изобретение относится к области медицины, а именно к ветеринарии, и может быть использовано для биохимического определения активности протеолитических ферментов в крови.

Изобретение относится к диагностике, а именно к способу диагностики крови на наличие паразитарных заболеваний по изменению лейкограммы после ультразвукового воздействия, включающему: воздействие на образцы крови, помещенные в термостатируемую кювету, бегущей модулированной ультразвуковой волной; обработку образцов крови в абсолютно одинаковых условиях; поддержание постоянной температуры образцов в кюветах с проточным охлаждением и анализ морфологического состояния клеток методами световой микроскопии; при начале гемолиза эритроцитов через 18-30 с, уменьшении количества лимфоцитов в 1,7-3,5 раза, а сегментоядерных нейтрофилов в 1,5-4,0 раза, деформации и разрушении ядер и изменении структуры цитоплазмы, ее вакуолизации, а также при ядерном сдвиге влево диагностируют наличие паразитарного заболевания.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования достоверности динамики фиброза печени у пациентов с ХГС, генотипом 1, не ответивших на двухкомпонентную противовирусную терапию пегилированными интерферонами и рибавирином.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы у пациенток с плохим ответом на неоадъювантную химиотерапию, согласно которому осуществляют исследование инфильтративного компонента новообразования на светооптическом уровне, отличающийся тем, что проводят морфологическое исследование строения ткани опухоли и в ходе гистологической оценки инфильтративного компонента новообразования определяют альвеолярные, тубулярные, трабекулярные, солидные структуры и дискретные группы опухолевых клеток, и при наличии альвеолярных структур прогнозируют высокий риск гематогенного метастазирования.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки тяжести состояния больного и риска летального исхода по уровню фенилмолочной кислоты в крови. Сущность способа заключается в том, что в крови больных количественно определяют концентрацию фенилмолочной кислоты (ФМК).

Изобретение относится к медицине и касается способа комплексной оценки эффективности полихимиотерапии у больных с рецидивной лимфомой Ходжкина, заключающегося в том, что до начала лечения и после проведения трех противорецидивных курсов полихимиотерапии исследуют развернутую протеинограмму в комплексе с оценкой морфоструктуры сыворотки крови методами клиновидной и краевой дегидратации и при появлении дефектных форм сферолитов, нарушении агрегации макро- и микросферолитов, трансформации анизоморфонов злокачественного роста вплоть до скелетирования остаточных структур крупных сферолитов, формировании нормотипов фаций с радиальной и частично радиальной симметрией трещин, восстановлении системы концентрационных волн в краевой зоне фаций, при нормализации показателей белкового обмена режим полихимиотерапии признают эффективным и полихимиотерапию продолжают по той же схеме, в обратном случае выполняют смену схемы лечения с заменой применяемых цитостатиков.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки мукозального иммунитета слизистой оболочки носа и носоглотки. В эпителиальных клетках слизистой оболочки полости носа определяют экспрессию генов рецептора врожденного иммунитета (TLR2) и противомикробного пептида (HBD2), и при соотношении показателя HBD2 к TLR2 меньше 0,1 диагностируют нарушение мукозального иммунитета, что является обоснованием хирургического метода лечения.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы формирования плацентарной недостаточности при повреждающем действии цитомегаловирусной инфекции на содержание общего холестерола в третьем триместре гестации.

Способ относится к медицине и предназначен для выбора тактики лечения острых кишечных инфекций у детей раннего возраста. При выявлении в остром периоде заболевания интоксикационного синдрома и уровня сывороточной мочевины 2 ммоль/л и ниже определяют дисбиоз кишечника, протекающий с метаболической эндотоксемией на фоне избыточного размножения протеолитических кишечных бактерий, и назначают проведение дезинтоксикационной терапии. При выявлении воспалительного синдрома и уровня мочевины более 2 ммоль/л определяют дисбиоз кишечника, протекающий с дефицитом функциональной активности микрофлоры, и назначают антибактериальное лечение. Способ позволяет повысить точность и обоснованность выбора предлагаемого лечения. 1 пр., 1 табл., 1 ил.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2015-12-23 2017-07-12T21:26:12
Наверх