Стабилизированный кардиолипиновый антиген для реакции микропреципитации при диагностике сифилиса и способ его получения

Авторы патента:

Марданлы Сейфаддин Гашим Оглы (RU)

Бахилина Наталья Владимировна (RU)

Амелина Елена Анатольевна (RU)

Ермолаева Ирина Анатольевна (RU)

Ротанов Сергей Владимирович (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2633087:

Марданлы Сейфаддин Гашим Оглы (RU)

Группа изобретений относится к медицине и касается диагностических реагентов для клинической лабораторной диагностики сифилитической инфекции. Заявлены стабилизированный кардиолипиновый антиген и способ его получения. Кардиолипиновый антиген получен способом, включающим приготовление буферного раствора с последовательным добавлением друг к другу ЭДТА динатриевой соли, натрия фосфорнокислого 2-замещенного, калия фосфорнокислого 1-замещенного, холин-хлорида, тимеросала (мертиолята), воды очищенной, далее получившийся раствор перемешивают и фильтруют, после чего приготавливают спиртовой раствор липидов, для этого смешивают кардиолипин, лецитин, холестерин и спирт этиловый абсолютированный, затем осуществляют смешение буферного раствора и спиртового раствора. Техническими результатами группы изобретений является:

- законченный цикл получения готовой к применению суспензии кардиолипинового антигена на производственном предприятии,

- контроль качества и обеспечение длительной специфической активности приготовленного реагента в реакции микропреципитации при диагностике сифилиса с исключением этапа лабораторного приготовления рабочей эмульсии Аг Кл. 2 н.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к медицине и касается диагностических реагентов для клинической лабораторной диагностики сифилитической инфекции.

В соответствии с действующими Национальными стандартами и клиническими рекомендациями при обследовании населения с целью выявления больных сифилисом, а также при установлении клинической формы этого заболевания и оценке динамики гуморального иммунитета после проведенной антибактериальной терапии в учреждениях здравоохранения большинства стран мира широко применяются лабораторные тесты, оценивающие качественное и полуколичественное содержание антител к кардиолипиновому антигену (в крови у больных сифилисом или в ликворе у больных нейросифилисом).

Приоритет в разработке кардиолипинового антигена (Аг Кл), используемого в современных иммунохимических лабораторных исследованиях, принадлежит шведской исследовательнице Margaret С. Pangborn (1941) [1], несколько позже оригинальная методика получения этого антигена для реакции микропреципитации (РМП) была предложена в СССР профессором Л.С. Резниковой (1951) [2]. Кроме этого в Лабораториях по изучению венерических заболеваний (Venereal Diseases Research Laboratories) американского Центра по контролю заболеваемости (Center Diseases Control - CDC) также была создана оригинальная пропись этого реагента и особая методика проведения лабораторного исследования - VDRL тест [3, 4].

По своей сути современные иммунохимические исследования с Аг Кл являются нетрепонемными тестами, так как применяемый антиген по своему происхождению не имеют прямого отношения к возбудителю сифилиса (Treponema pallidum). При разработке состава Аг Кл отдельные его компоненты первоначально получали из сырьевых материалов животного происхождения: водных, водно-спиртовых, ацетоновых или эфирных экстрактов ткани сердечной мышцы крупного рогатого скота и из куриных яиц. Позднее в качестве антигена для лабораторных целей стали применять сложную пропись очищенных липоидных субстанций производственного выпуска: кардиолипин - 0,033%, лецитин - 0,27% и холестерин - 0,9%, растворенных в абсолютизированном этиловом спирте.

При определении содержания гуморальных антител в иммунохимических реакциях (РМП и VDRL) кардиолипиновый антиген применяют в виде рабочей эмульсии Аг Кл; для ее получении перед началом исследования в клинических лабораториях медицинских учреждений кардиолипиновый антиген переводят из спиртового раствора в водную фазу (10% раствор холина хлорида на основе 0,89-0,9% раствора натрия хлорида). Смесь липоидов в водной среде представлена в мелкодиспергированном эмульгированном состоянии, даже при кратковременном хранении в спокойном состоянии эмульсия расслаивается с образованием осадка белого цвета и бесцветной надосадочной жидкости [5, 6].

Технология приготовления рабочей эмульсии Аг Кл, которая является наиболее близким по осуществлению аналогом (прототипом), включает несколько этапов:

- смешивание спиртового концентрата кардиолипинового антигена с равным объемом физиологического раствора с целью «высаливания» активных компонентов антигена и созревание смеси;

- осаждение кардиолипинового антигена при мягком центрифугировании;

- удаление надосадочной жидкости;

- ресуспендирование кардиолипинового антигена путем осторожного размывания осадка 10% раствором холина хлорида, приготовленным на основе 0,9% раствора натрия хлорида (при наличии - с добавлением 0,01% раствора метриолята до конечной концентрации 1:10000).

При этом свежеприготовленная в разных лабораториях рабочая эмульсия Аг Кл может существенно различаться по своей специфической активности в РМП, что зависит от особенностей ее приготовления (использование разных вариантов получения 0,9% раствора натрия хлорида, точность соблюдения лабораторными специалистами инструкции по приготовлению реагента). Свежеприготовленная рабочая эмульсия Аг Кл сохраняет свою специфическую активность и пригодна для использования в РМП только в течение 7 дней, а при добавлении мертиолята (1:10000) - 14 дней; в эти сроки реагент должен сохраняться при температуре +4-8°C в посуде темного стекла или иным способом должна обеспечиваться его защита от нагревания и прямого воздействия солнечного света, которые снижают активность суспензии Аг Кл [6].

Другим вариантом обеспечения возможности длительного сохранения активности кардиолипинового антигена (вариант VDRL) является внесение в свежеприготовленный реагент 1,0% спиртового раствора бензойной кислоты до конечной концентрации 0,01% [3].

Технической задачей изобретения является разработка раствора стабилизированного кардиолипинового антигена и способа получения готовой к применению суспензии кардиолипинового антигена с длительным сроком годности и контролируемым уровнем его специфической активности в реакции микропреципитации (РМП).

Эта задача достигается за счет изменения состава водной фазы и технологии приготовления рабочей суспензии Аг Кл, а также включения в ее состав стабилизирующих и консервирующих добавок. В качестве водной используется фосфатный буфер стандартной прописи.

Новый состав и технология получения рабочей суспензии Аг Кл предполагает дробное поэтапное внесение спиртовых растворов липидов, входящих в состав Аг Кл, в фосфатный буферный раствор с добавлением в качестве стабилизатора этилен-дитетрамина ацетата (ЭДТА) и консерванта мертиолята (тимеросала) при постоянном активном перемешивании всего объема изготавливаемой серии реагента.

Состав готовой к применению суспензии кардиолипинового антигена отличается от прототипа сохранением всего количества этилового спирта (в прототипе подавляющая его часть удалялась после центрифугирования в составе супернатанта), использованием буферного раствора вместо физиологического раствора и добавлением стабилизатора ЭДТА и консерванта мертиолята (тимеросала).

Техническими результатами группы изобретений является

Также преимуществами предлагаемого способа получения суспензии Аг Кл заключается в:

- замене лабораторного кустарного процесса получения рабочей эмульсии Аг Кл производственным, контроль осуществления которого на всех этапах централизованно осуществляется специалистами-технологами ОБТК предприятия и средствами автоматического слежения; обеспечении стабильности и сохранении специфических свойств готового реагента Аг Кл путем внесения в его состав стабилизирующих и консервирующих добавок и фасовке готового продукта во флаконы темного стекла;

- обеспечении выпускающего и текущего контроля качества специфической активности полученного реагента в РМП сотрудниками ОБТК предприятия на всех этапах производства и при хранении музейных образцов в период срока годности набора реагентов;

- экономии затрат рабочего времени специалистами лабораторной медицины за счет исключения этапа приготовления рабочей суспензии реагента Аг Кл при проведении лабораторного исследования методом РМП;

- переводе РМП в разряд лабораторных исследований, которые позволяют оперативно обеспечивать обследование пациентов.

Таким образом, нами разработан стабилизированный кардиолипиновый антиген, содержащий кардиолипин, лецитин, холестерин, спирт этиловый абсолютированный, ЭДТА динатриевая соль, натрий фосфорнокислый 2-замещенный, калий фосфорнокислый 1-замещенный, холин-хлорид, тимеросал (мертиолят), воду очищенную при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас %:

кардиолипин	0,0029-0,0033
лецитин	0,021-0,027
холестерин	0,069-0,090
спирт этиловый абсолютированный	6,03-7,83
ЭДТА динатриевая соль	0,32-0,42
натрий фосфорнокислый 2-замещенный	0,086-0,11
калий фосфорнокислый 1-замещенный	0,094-0,12
холин-хлорид	6,92-9,00
тимеросал (мертиолят)	0,069-0,090
вода очищенная	остальное

Кроме того, нами разработан способ получения стабилизированного кардиолипинового антигена, включающий приготовление буферного раствора с последовательным добавлением друг к другу ЭДТА динатриевой соли, натрия фосфорнокислого 2-замещенного, калия фосфорнокислого 1-замещенного, холин-хлорида, тимеросала (мертиолята), воды очищенной, далее получившийся раствор перемешивают и фильтруют, после чего приготавливают спиртовой раствор липидов, для этого смешивают кардиолипин, лецитин, холестерин и спирт этиловый абсолютированный, затем осуществляют смешение буферного раствора и спиртового раствора.

Группа изобретений в частных случаях осуществления поясняется следующими примерами.

Пример приготовления стабилизированного Аг Кл осуществляют следующим образом.

1. Приготовление буферного раствора.

1.1. Сделать на электронных весах навески необходимых реактивов. Для приготовления 10 л буферного раствора:

ЭДТА динатриевая соль	46,5 г
Натрий фосфорнокислый 2-замещенный	14,2 г
Калий фосфорнокислый 1-замещенный	13,6 г
Холин-хлорид	1000 г
Тимеросал (мертиолят)	10 г
Вода очищенная	до 10000 мл

1.2. Последовательно перенести навески в чистую промаркированную емкость и добавить до необходимого объема воды очищенной.

1.3. Включить магнитную мешалку и тщательно перемешать приготовленный раствор до полного растворения солей.

При необходимости довести pH приготовленного буферного раствора до 6,9±0,2 путем добавления 0,1 моль/л раствора гидроокиси натрия.

1.4. Провести фильтрацию буферного раствора с помощью перистальтического насоса через фильтр мембранный ФМАЦ-0,45 в чистую маркированную емкость. Допускается хранение при температуре 2- 8°C.

2. Приготовление спиртового раствора липидов

2.1. Сделать навески липидов исходя из следующего расчета:

Кардиолипин	0,33 г
Лецитин	2,7 г
Холестерин	9,0 г
Спирт этиловый абсолютированный	до 1000 мл

2.2. Перенести навеску кардиолипина в чистую сухую мерную колбу и добавить немного спирта этилового абсолютированного, затем добавить навеску лецитина в ту же мерную колбу и вновь добавить немного спирта, внести навеску холестерина и довести общий объем до метки 1000 мл.

2.3. Перемешивать содержимое на магнитной мешалке не менее одного часа до полного растворения компонентов. Емкость с раствором плотно укупорить. Наклеить этикетки утвержденного образца.

Раствор выдержать при комнатной температуре не менее 15 часов.

3. Приготовление взвеси стабилизированного Аг Кл

3.1. В чистую сухую емкость вносят 1 часть общего объема буфера и частями при непрерывном перемешивании добавляют приготовленный спиртовой раствор липидов (приготовление взвеси стабилизированного Аг Кл осуществляют из расчета: на 1 часть раствора липидов - 9 частей буферного раствора).

3.2. Перемешивают в течение 10-15 минут и добавляют оставшийся буфер; взвесь перемешать еще в течение 30 минут.

3.3. Емкость плотно укупоривают. Наклеивают этикетки утвержденного образца. Взвесь стабилизированного Аг Кл выдерживают в холодной комнате при температуре 2-8°C не менее 24 часов (допускается хранение в течение 1 месяца).

4. Контроль качества и специфической активности взвеси стабилизированного Аг Кл.

4.1. Контроль осуществляют с использованием проверенной серии Набора реагентов «Сифилис - АгКл-РМП» и охарактеризованных образцjd положительных и отрицательных сывороток (содержащих и не содержащих антитела к кардиолипиновому антигену).

4.2. При получении нормированных результатов контроля приготовленную серию взвеси стабилизированного Аг Кл передают на розлив с маршрутной картой за подписью ответственного микробиолога.

5. Розлив взвеси стабилизированного Аг Кл в первичную упаковку.

5.1. Взвесь стабилизированного Аг Кл разливают с помощью дозатора в предварительно подготовленные флаконы из темного стекла вместимостью 5 мл по 5,0±0,05 мл; в процессе розлива контролируют точность дозирования.

5.2. Флаконы укупоривают крышками.

5.3. На флаконы наклеивают этикетки и передают их на участок комплектации наборов.

Эффективность разработанного способа иллюстрируются примерами выпуска опытно-экспериментальных серий реагента стабилизированного Аг Кл и проведения исследований его специфической активности в натурных испытаниях с целью определения возможного срока годности.

Пример 1:

В лаборатории перспективных разработок ЗАО «ЭКОлаб» в период с 27 по 31 января 2010 г. были приготовлены 3 опытно-экспериментальные серии нового разработанного реагента «стабилизированный Аг Кл для РМП» в соответствии с последовательностью действий и количественными показателями, описанныvb выше. А 31 января 2010 г. на основе 3 производственных серий набора реагентов «Сифилис АгКл-РМП» (производства ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск Московской обл.) были приготовлены 3 лабораторные серии рабочей суспензии кардиолипинового антигена.

Проведена серия сравнительных испытаний специфической активности приготовленных вариантов Аг Кл с использованием панели охарактеризованных стандартных образцов (ОСО) предприятия - контрольных сывороток крови, полученных от пациентов со вторичным сифилисом (n=3) и от здоровых доноров крови (n=2).

Исследования в РМП выполнялись 2 разными специалистами. При этом показано полное совпадение результатов определения антител к кардиолипину в реакции микропреципитации и оценки их полуколичественного содержания при исследовании серии 2-кратных разведений образцов (титрования антител).

Результаты примера подтверждали тождественную активность в РМП образцов рабочей суспензии кардиолипинового антигена, приготовленных по способу, описанному в инструкции по применению компонентов набора реагентов «Сифилис АгКл-РМП», и по вновь разработанному способу.

Пример 2:

Специфическую активность 3 опытно-экспериментальных серий готового к применению жидкого реагента Аг Кл (приготовленных, как описано в примере 1, в лаборатории перспективных разработок ЗАО «ЭКОлаб» с 27 по 31 января 2010 г.) оценивали в РМП при их длительном хранении.

Флаконы с готовым к применению Кл Аг сохраняли в условиях бытового холодильника при температуре 4-8°C на протяжении 1,75-1,8 лет. Исследование специфической активности проверяли в РМП через каждые 10-14 дней разными лабораторными специалистами. Исследованию в РМП подвергали образцы панели ОСО предприятия (полученных от пациентов со вторичным сифилисом и содержавших антикардиолипиновые антитела (n=3) и от здоровых доноров крови (n=2), не содержавших указанные антитела).

Сопоставление полученных данных позволило установить, что специфическая активность 2-х серий реагентов за 1,5-летний период времени их сохранения не претерпела изменений, а в 1 серии через 14 месяцев понизилась на одну степень разведения (с титра 1:8 до титра 1:4), что в соответствии с существующими требованиями к воспроизводимости результатов исследования в РМП не является ошибкой полуколичественного измерения этим методом.

Таким образом, приведенные примеры 1 и 2 демонстрируют:

- возможность успешного воспроизведения технологии получения готовой к применению суспензии кардиолипинового антигена по новому предлагаемому способу и его специфической активности для реакции микропреципитации (подтверждено в сравнительных испытаниях с реагентом, приготовленным по способу-прототипу);

- возможность длительного сохранения специфической активности готовой к использованию суспензии кардиолипинового антигена для РМП, приготовленной по предлагаемому способу, при условии соблюдения рекомендуемых условий хранения: обеспечения температуры плюс 4…8°C и первичной упаковки в стеклянные флаконы темного цвета с завинчивающейся крышкой (что явилось обоснованием выбора сроков годности реагента); - достоверность полученных результатов подтверждается результатами исследований в РМП, которые выполнялись в течение длительного периода времени разными специалистами лабораторной медицины.

Список источников информации

1. Pangborn М.С. Cardiolipin and its application in a chemically purified antigen for the serodiagnosis of syphilis. // Proc NY State Assoc Public Health Lab. 1946; 26(1): 26-9.

2. Резникова Л.С. Кардиолипиновые антигены в серодиагностике сифилиса. // Советская медицина, 1953; 1: 40-42.

3. Serologic tests for syphilis: 1959 Manual. Public Health Service Publication No 411. // United States Government Printing Office, Washington, 1959.

4. Larsen S.A., Pope V., Johnson R.E., Kennedy E.J. [Eds]. Manual of tests for syphilis. 9 ^-th Ed. // Washington: DC, 1998.

5. Приказ Министерства здравоохранения Российской Федерации №87 от 26 марта 2001 года «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса» (Приложение №1. «Постановка отборочных и диагностических тестов на сифилис»).

6. Приказ Председателя Комитета контроля медицинской и фармацевтической деятельности МЗ РК от 27 июня 2011 года №350 (Инструкциия по применению изделия медицинского назначения для потребителя).

1. Стабилизированный кардиолипиновый антиген, содержащий кардиолипин, лецитин, холестерин, спирт этиловый абсолютированный, ЭДТА динатриевая соль, натрий фосфорнокислый 2-замещенный, калий фосфорнокислый 1-замещенный, холин-хлорид, тимеросал (мертиолят), воду очищенную при следующем количественном соотношении ингредиентов, мас %:

кардиолипин	0,0029-0,0033
лецитин	0,021-0,027
холестерин	0,069-0,090
спирт этиловый абсолютированный	6,03-7,83
ЭДТА динатриевая соль	0,32-0,42
натрий фосфорнокислый 2-замещенный	0,086-0,11
калий фосфорнокислый 1-замещенный	0,094-0,12
холин-хлорид	6,92-9,00
тимеросал (мертиолят)	0,069-0,090
вода очищенная	остальное

2. Способ получения стабилизированного кардиолипинового антигена, включающий приготовление буферного раствора с последовательным добавлением друг к другу ЭДТА динатриевой соли, натрия фосфорнокислого 2-замещенного, калия фосфорнокислого 1-замещенного, холин-хлорида, тимеросала (мертиолята), воды очищенной, далее получившийся раствор перемешивают и фильтруют, после чего приготавливают спиртовой раствор липидов, для этого смешивают кардиолипин, лецитин, холестерин и спирт этиловый абсолютированный, затем осуществляют смешение буферного раствора и спиртового раствора.

Изобретение относится к медицине и предназначено для выделения и исследования иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛНП), из сыворотки крови человека.

Способ определения цитотоксической активности nk-клеток // 2632109

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения цитотоксической активности NK-клеток в отношении клеток трофобласта.

Способ диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии // 2632101

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике гастроэнтерологии, может быть использовано для диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии.Способ диагностики степени тяжести цирроза печени смешанной этиологии с помощью анализа крови заключается в том, что у пациентов в сыворотке крови определяют уровень интерлейкина-6, и при значении интерлейкина-6 менее или равном 12,7 пг/мл диагностируют легкую (компенсированную) степень цирроза печени, при концентрации интерлейкина-6 более 12,7 пг/мл и менее или равной 26,2 пг/мл диагностируют умеренную (субкомпенсированную) степень, при уровне интерлейкина-6 более 26,2 пг/мл - тяжелую (декомпенсированную) степень цирроза печени.Технический результат: повышение доступности и простоты выполнения при высокой чувствительности, специфичности и объективности способа.

Штамм вируса эбола заир h.sapiens-wt/gin/2015/kalidie-kindia-1022 для получения антигена, используемого в качестве компонента иммуноферментной тест-системы для выявления антител классов g и м к вирусу эбола // 2631937

Изобретение относится к области медицинской вирусологии и микробиологии и касается штамма вируса Эбола Заир. Представленный штамм вируса Эбола Заир H.sapiens-wt/GIN/2015/Kalidie-Kindia-1022 выделен из крови больного лихорадкой Эбола во время эпидемии в Гвинее 2014-2015 гг.

Способ прогнозирования риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии // 2631606

Изобретение относится к медицине, а именно к онкоурологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития стеноза везикоуретрального анастомоза после радикальной простатэктомии.

Способ определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи // 2630607

Изобретение относится медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для определения субпопуляционного состава клеток кожи. Способ определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи включает забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°С, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°С.

Способ прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей // 2630063

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, педиатрии и аллергологии, и может использоваться для прогнозирования степени тяжести атопического дерматита у детей.

Способ диагностики псориатического артрита // 2629627

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и клинической иммунологии. У больных определяют клинико-анамнестические и лабораторно-инструментальные критерии диагностики псориатического артрита и присваивают им баллы.

Способ диагностики параимплантарного воспаления после эндопротезирования крупных суставов // 2629598

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ диагностики параимплантарного воспаления после эндопротезирования крупных суставов, характеризующийся тем, что производят забор крови, готовят образцы сыворотки крови, осуществляют исследование сыворотки крови с помощью иммуноферментного анализа, определяя количественные значения показателей: фактора, ингибирующего миграцию макрофагов (MIF), и белка, стимулирующего макрофаги (MSP), а также интерлейкинов 1, 4, 8, 10 (IL1, IL4, IL8, IL10), рассчитывают коэффициент выраженности макрофагальной реакции и коэффициент выраженности гуморального ответа , определяют показатель развития параимплантарного воспаления К, равный (К1+К2)-2.7, и при его отрицательных значениях констатируют регресс патологического процесса, при положительных значениях - прогресс патологического процесса.

Способ оценки влияния алюминия на иммунный статус // 2629597

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки влияния алюминия на иммунный статус. Для этого в пробе крови пациента определяют содержание алюминия, и в тех пробах крови пациентов, где содержание алюминия выше референтного значения, извлекают иммунокомпетентные клетки.

Штамм e.coli - продуцент полноразмерного протективного антигена bacillus anthracis в форме вирусоподобных частиц // 2633504

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis. Представленный штамм получен на основе протективного антигена Bacillus anthracis путем введения в штамм E. coli BL21 (DE3) плазмиды pGEM-TTPPAG. Плазмида pGEM-TTPPAG содержит в своем составе промотор фага Т7, который контролирует экспрессию слитого гена, представляющего собой полноразмерный ген ТТP бактериофага DT57C (кодирует белок трубки хвоста pb6), слитый через 3’-конец с геном протективного антигена B. anthracis, и экспрессирующегося в форме вирусоподобных частиц. Изобретение обеспечивает выход целевого продукта в оптимальных условиях культивирования не ниже 1 г/л культуры, а также позволяет получить основной защитный антиген возбудителя сибирской язвы B. anthracis в форме вирусоподобных частиц (ВПЧ), имеющих размер 225,4 нм, что облегчает его очистку и потенциально повышает иммуногенность. Полученные ВПЧ, свободные от растворимого клеточного белка, могут использоваться в качестве антигена для иммунизации. 5 ил., 3 табл.

Штамм e. coli - продуцент изолированного домена 1 протективного антигена bacillus anthracis в форме вирусоподобных частиц // 2633508

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантного штамма E. coli, являющегося продуцентом антигена возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis. Представленный штамм получен на основе протективного антигена Bacillus anthracis путем введения в штамм E. coli BL21 (DE3) плазмиды pTrPPA. Плазмида pTrPPA содержит в своем составе промотор фага Т7, который контролирует экспрессию слитого гена, представляющего собой продукт гена 142 Т5-подобного фага DT57C, известного как белок, терминирующий хвост (TrP), слитый через 3’-конец с доменом 1 протективного антигена B. anthracis, что позволяет при протеолитическом отщеплении в процессе транспорта токсина в цитоплазму клетки-мишени сохранять структурную стабильность антигена, и экспрессирующегося в форме вирусоподобных частиц. Изобретение обеспечивает выход целевого продукта не ниже 1 г/л культуры в оптимальных условиях культивирования, а также позволяет получать изолированный домен 1 основного защитного антигена возбудителя сибирской язвы B. anthracis в форме вирусоподобных частиц, что облегчает его очистку и потенциально повышает иммуногенность. 6 ил.

Способ диагностики пищевой аллергии // 2633749

Изобретение относится к медицине, а именно к аллергологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики аллергии. Для этого осуществляют подготовку пробы биологического материала (копрофильтрат) с последующей спектрофотометрией при 405 нм. При этом берут утреннюю пробу фекалий в количестве 1 г, растворяют ее в 9 мл фосфатно-солевого буфера с 0,05% Твином 20 (ФСБТ) рН=7,2. Затем перемешивают до однородной консистенции. После чего центрифугируют в течение 10-20 мин при 3500 об/мин. Отбирают надосадочную жидкость и проводят иммуноферментный анализ на наличие аллергенспецифических IgE-антител к пищевым аллергенам с последующей спектрофотометрией. При определении оптической плотности 0,15 ед. оптической плотности и более диагностируют аллергию к конкретному аллергену. А при определении оптической плотности менее 0,15 ед. диагностируют отсутствие аллергии к конкретному аллергену. Изобретение позволяет повысить точность диагностики пищевой аллергии на 10-12%. 3 пр.

Способ диагностики бруксизма // 2633753

Изобретение относится к области медицины, лабораторной диагностики и представляет собой способ диагностики бруксизма путем проведения клинического обследования и исследования крови, отличающийся тем, что в сыворотке крови больного определяют содержание серотонина и при его концентрации ниже 180 нг/мл диагностируют бруксизм. Результатом осуществления изобретения является упрощение и ускорение процесса при высокой эффективности способа. 2 пр.

Способ прогнозирования развития жизнеопасных предсердных аритмий у пациентов с гипертонической болезнью // 2634246

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, может быть использовано для прогнозирования развития жизнеопасных предсердных аритмий у больных с гипертонической болезнью. Для прогнозирования развития жизнеопасных предсердных аритмий у пациентов с гипертонической болезнью определяют содержание интерлейкина-6, интерлейкина-18 и интерлейкина-10 в сыворотке крови пациента методом твердофазного иммуноферментного анализа. Далее рассчитывают коэффициент К по оригинальной формуле. При величине К более 3 прогнозируют развитие фибрилляции предсердий. Использование данного изобретения обеспечивает раннюю диагностику, объективизацию, конкретизацию прогностических критериев риска развития жизнеопасных предсердных аритмий у пациентов с гипертонической болезнью, что позволяет обеспечить адекватную лечебную тактику у данного контингента больных. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.

Способ диагностики прерывания беременности на 7-9 неделях гестации вследствие подавления активности мембранных рецепторов к прогестерону при обострении цитомегаловирусной инфекции // 2634252

Изобретение относится к медицине, а именно, к способу определения угрозы прерывания беременности на 7-9 неделях гестации вследствие подавления активности мембранных рецепторов к прогестерону при обострении цитомегаловирусной инфекции. Способ включает определение титра антител IgG к ЦМВ на 7-9 неделе беременности и определение рецепторов к прогестерону в гомогенате хориона, и при определении на 7-9 неделе гестации титра антител IgG к ЦМВ 1:1600 и снижении в гомогенате хориона активных рецепторов к прогестерону до 14,00±0,85 нмоль/л, определяют угрозу прерывания беременности в виде самопроизвольного выкидыша. 3 пр.

Прогнозирование развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза на основании оценки экспрессии cd15 в биоптатах эндометрия // 2634263

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования развития распространенных форм инфильтративного эндометриоза. Для этого оценивают результат экспрессии иммуногистохимического маркера CD15 в биоптатах эндометрия. Проводят иммуногистохимическое исследование на депарафинированных срезах толщиной 4-5 мкм. Экспрессию CD15 определяют в эпителиальных клетках эндометрия, результаты иммуногистохимической реакции оценивают полуколичественным методом в баллах. При этом отсутствие иммуноокрашенных клеток (-) - 0 баллов; менее 5% иммуноокрашенных клеток (+) - 0,5 балла, менее 20% иммуноокрашенных клеток (+) - 2 балла; от 20 до 40% окрашенных клеток (++) - 4 балла; более 40% окрашенных клеток (+++) - 6 баллов. При оценке экспрессии CD15 от 2 до 6 диагностируют распространенные формы инфильтративного эндометриоза. Изобретение позволяет прогнозировать развитие распространенных форм инфильтративного эндометриоза путем определения экспрессии маркера CD15 в образцах ткани эндометрия. 1 ил., 4 пр.

Способы идентификации иммунных связующих веществ поверхностных антигенов клетки // 2635186

Группа изобретений относится к медицине и касается способа идентификации В-клеточного клона, который специфически связывается с мишеневым антигеном, предусматривающего наличие множества В-клеток; взаимодействие В-клеток с мишеневым антигеном, где мишеневый антиген содержит первую сортируемую метку, и окрашивание множества В-клеток анти-IgG антителами, содержащими вторую сортируемую метку, и анти-IgM антителами, содержащими третью сортируемую метку; отделение от множества В-клеток одной или нескольких В-клеток, которые могут специфически связываться с мишеневым антигеном, используя клеточный сортер. Группа изобретений также касается способа идентификации В-клеточного клона, который специфически связывается с мишеневым антигеном, предусматривающего дополнительно иммунизирование животного мишеневым антигеном и выделение множества В-клеток из иммунизированного животного. Группа изобретений обеспечивает идентификацию В-клеточного клона, который специфически связывается с мишеневым антигеном. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 14 ил., 13 табл., 5 пр.

Способ диагностики злокачественной опухоли и набор для диагностики путем измерения активности nk-клеток // 2635194

Группа изобретений относится к медицине и касается способа измерения активности натуральных клеток-киллеров (NK-клеток), включающего стимулирование NK-клеток в образце цельной крови посредством инкубирования образца цельной крови со средством, включающим по меньшей мере один стимулирующий цитокин, выбранный из группы, состоящей из интерлейкина 2, интерлейкина 15 и интерлейкина 18, и измерение количества секретируемых NK-клетками цитокинов, секретированных в образце цельной крови. Группа изобретений также касается набора для измерения активности натуральных клеток-киллеров. Группа изобретений обеспечивает большую точность измерения активности натуральных клеток-киллеров по сравнению с измерением активности натуральных клеток-киллеров с использованием PBMC. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 9 пр., 12 ил., 2 табл.

Способ дифференциальной экспресс-диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота // 2635515

Изобретение относится к ветеринарии, эпизоотологии, а именно к способам дифференциальной экспресс-диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Способ дифференциальной экспресс-диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота, включающий исследование сывороток животных в иммуноферментном анализе с использованием специфического антигена из типичных бруцелл вида abortus, ОПС-антигена и конъюгата на основе рекомбинантного белка G, отличается тем, что исследование сывороток проводят параллельно непрямым и конкурентным методами иммуноферментного анализа с использованием ОПС-антигена в качестве конкурирующего агента, а интерпретацию результатов проводят по формуле Кэо=D1/D2*100, где D1 - оптическая плотность, измеряемая в лунке, содержащей ОП-С антиген; D2 - оптическая плотность, измеряемая в лунке, не содержащей ОП-С антиген; Кэо - коэффициент, определяющий степень эпизоотической опасности по бруцеллезу животного, от которого получен исследованный образец сыворотки крови, и при 0≤К≤60 - отсутствие у животного эпизоотической опасности по бруцеллезу; 61≤К≤100 и выше - наличие у животного высокой эпизоотической опасности по бруцеллезу. 3 пр., 3 табл.