Способ генетического контроля экзоцитоза на основе генетических конструкций для трансфекции клеток астроглии

Авторы патента:

Тучина Оксана Павловна (RU)

Доминова Ирина Николаевна (RU)

Касымов Виталий Анварович (RU)

Патрушев Максим Владимирович (RU)

C12N15/86 - вирусные векторы

C12N15/00 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2633691:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Балтийский федеральный университет имени Иммануила Канта" (БФУ им. И. Канта) (RU)

Изобретение относится к области молекулярной биологии и касается генетической конструкции для осуществления способа генетического контроля экзоцитоза. Представленная конструкция имеет последовательность SEQ ID NO:4 и получена с использованием лентивирусного вектора на основе ВИЧ-1 модифицированного последовательностями, кодирующими пост-транскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка (WPRE), генетически кодируемый кальциевый индикатор (GCaMP3) и клеточно-специфический промотор глиального фибриллярного кислого белка (GFAP). Изобретение позволяет контролировать экзоцитоз посредством специфической трансфекции клеток астроглии, а также осуществлять визуализацию in vitro трансфецированных клеток за счет встраивания в разрабатываемую генетическую конструкцию генетически кодируемого кальциевого индикатора и может быть использовано в области медицины, в частности для исследования нейродегенеративных заболеваний. 2 ил.

Область техники

Изобретение относится к области молекулярной биологии для генетического контроля экзоцитоза посредством специфической трансфекции клеток астроглии с целью контроля везикулярного транспорта астроглии, в частности для исследования нейродегенеративных заболеваний, может быть использовано в области медицины для коррекции нейродегенеративных заболеваний.

Уровень техники

Известно изобретение «Пептиды, ингибирующие нейронный экзоцитоз» (патент РФ №2461568), при котором используется химическое соединение, обладающее способностью регулировать нейронный экзоцитоз.

Недостатком этого способа является то, что с помощью описанного в нем химического соединения (пептида) не представляется возможным контролировать везикулярный транспорт астроглии, стимулировать или ингибировать экспрессию определенных (целевых) генов в популяциях клеток астроглии мозга, а также экспрессировать в клетках астроглии генетически кодируемый кальциевый индикатор.

Известно изобретение «Усовершенствование генетических конструкций для повышения эффективности антивич терапии» (патент РФ №2533817), при котором используется сходное по своей природе с используемым в заявленном способе химическое соединение, обладающее антивирусной активностью в отношении вируса иммунодефицита человека.

Недостатком этого способа является то, что с помощью описанного в нем химического соединения (генетической конструкции) не представляется возможным контролировать экзоцитоз, а также стимулировать или ингибировать экспрессию определенных (целевых) генов в популяциях клеток астроглии мозга, экспрессировать в клетках астроглии генетически кодируемый кальциевый индикатор.

Наиболее близким по технической сущности заявляемому способу, выбранному в качестве прототипа, является изобретение «Пептиды, ингибирующие нейронный экзоцитоз» (патент РФ №2461568, 2007 г., C07K 14/705, C07K 14/47, C07K 7/06, C07K 7/08, A61K 8/64, A61Q 19/08), при котором используется химическое соединение, обладающее способностью регулировать нейронный экзоцитоз, а также лечить состояния, требующие регулирования нейронного экзоцитоза, таких как, например, мышечная спастичность, асимметрия лица и/или морщины на лице.

Недостатком этого способа является отсутствие возможности контроля везикулярного транспорта астроглии, стимуляции или ингибирования экспрессии таргетных генов в популяциях клеток астроглии мозга, а также экспрессии в них генетически кодируемого кальциевого индикатора.

Раскрытие изобретения

Задачей заявляемого изобретения является реализация механизма таргетного генетического контроля экзоцитоза путем специфической трансфекции клеток астроглии с целью контроля везикулярного транспорта астроглии, в частности, для исследования нейродегенеративных заболеваний, может быть использовано в области медицины для коррекции нейродегенеративных заболеваний.

Поставленная задача решается тем, что в способе генетического контроля экзоцитоза на основе генетических конструкций для трансфекции клеток астроглии, при котором используют химическое соединение, обладающее способностью контролировать экзоцитоз на основе модификации везикул клеток астроглии головного мозга, для создания нового типа терапии нейродегенеративных заболеваний, согласно изобретению, разрабатывают способ генетического контроля экзоцитоза на основе генетической конструкции для трансфекции клеток астроглии, обладающей способностью осуществлять таргетный контроль внутриклеточных каскадов, ассоциированных с везикулярным транспортом астроглии, а также экспрессировать в них генетически кодируемый кальциевый индикатор.

Для эффективного таргетного контроля внутриклеточных каскадов, ассоциированных с везикулярным транспортом астроглии, предусмотрено встраивание в последовательность генетической конструкции клеточно-специфического промотора, обеспечивающего синтез интересующих генов только в определенном типе клеток.

Для таргетного контроля внутриклеточных каскадов, ассоциированных с везикулярным транспортом астроглии, предусмотрено встраивание в последовательность генетической конструкции генов, экспрессия которых активируется под воздействием химических стимулов, что, в свою очередь, приводит к повышению концентрации определенных веществ, оказывающих влияние на выделение глиотрансмиттеров, которые, в свою очередь, оказывают влияние на жизнедеятельность нейронов, а также обеспечивающих возможность визуализировать отдельные клетки головного мозга за счет флуоресценции.

Причем в наиболее близком по технической сущности заявляемому способу используется химическое соединение, отличное по своему строению от вирусного вектора и не способное встраиваться в геном клеток мозга.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлено схематическое изображение генетической конструкции на основе лентивирусного вектора, специфически трансфецирующего клетки астроглии для осуществления генетического контроля экзоцитоза. Генетическая конструкция для трансфекции клеток астроглии с целью генетического контроля экзоцитоза содержит:

LTR - длинный терминальный повтор лентивируса;

GAL4 - химерный трансактиватор, состоящий из части трансактиваторного домена мышиного белка NF-κBp65, слитого с ДНК-связывающим доменом белка дрожжей GAL4;

CMV - минимальный промотор цитомегаловируса человека;

GFAP - компактный промотор глиального фибриллярного кислого белка;

GCaMP3 - последовательность, кодирующая генетически кодируемый кальциевый индикатор GCaMP3;

WPRE - посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка.

На фиг. 2 представлена карта плазмиды LVV-GFAP-GCaMP3, характеризующейся:

5' LTR (1-75) - длинный терминальный повтор лентивируса;

SV40 poly(A) сигнал (75-196) - сигнал полиаденирования SV40;

GAL4 (1045-1485) - химерный трансактиватор, состоящий из части трансактиваторного домена мышиного белка NF-κBp65, слитого с ДНК-связывающим доменом белка дрожжей GAL4;

CMV (1586-1624) - промотор цитомегаловируса человека;

GFAP (1743-2425) - укороченный промотор клеточно-специфического маркера глиального фибриллярного кислого белка (астроглия-специфичный промотор);

GCaMP3 (2448-3920) - последовательность, кодирующая генетически-кодируемый кальциевый индикатор GCaMP3;

ECFP (2748-3017) - усиленный синий флуоресцентный белок;

EGFP (3039-3470) - усиленный зеленый флуоресцентный белок;

Кальмодулин (3477-3920) - кальцийсвязывающий белок;

WPRE (3923-4540) - посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка;

bGH poly(A) сигнал (4741-4965) - сигнал полиаденилирования;

ori (6309-6897) - высококопийная точка начала репликации плазмид Co1E1/pMB1/pBR322/pUC;

AmpR (7068-7928) - последовательность, обеспечивающая устойчивость к ампецилину, карбенциллину и другим связанным антибиотикам;

AmpR промотор (7929-8033) - промотор, обеспечивающий резистентность к ампициллину;

RRE (8534-8767) - rev-отвечающий элемент ВИЧ-1, который обеспечивает Rev-зависимый экспорт мРНК из ядра в цитоплазму;

3' LTR (8768-9186) - длинный терминальный повтор лентивируса;

9186 bp - длина последовательности плазмиды, равная 9186 нуклеотидам.

Осуществление изобретения

Способ осуществляется следующим образом.

Заявленный способ основан на применении генетических конструкций для трансфекции клеток астроглии, несущих клеточно-специфический промотор для управления одновременной экспрессией нужного трансгена и сильный искусственный активатор транскрипции для усиления транскрипции посредством связывания специфических сайтов связывания, введенных в последовательность промотора. Таким образом, задействуют два клеточно-специфических промотора: один для транскрипции интересующего трансгена, другой для экспрессии трансактиватора.

Используемые генетические конструкции представляют собой разнонаправленную лентивирусную векторную систему (Фиг. 1), содержащую усиленные в части транскрипционной активности промотор компактного глиального фибриллярного кислого белка (GFAP, клеточно-специфический промотор для клеток астроглии), а также в противоположной ориентации промотор, полученный из цитомегаловируса человека (CMV), расположенный в нуклеотидной последовательности выше клеточно-специфического промотора. Таким образом, создают синтетические разнонаправленные промоторы, фланкированные двумя генами экспрессионной кассеты. Искусственный активатор транскрипции транскрибирует 5'-конец кассеты. Последовательность кассеты, расположенная по ходу транскрипции, управляет синтезом интересующего гена.

Генетическая конструкция для специфической трансфекции клеток астроглии с целью генетического контроля экзоцитоза (Фиг. 2) построена с использованием лентивирусного вектора на основе самоинактивированного ВИЧ и включает, по меньшей мере,

rev-отвечающий элемент (RRE),

химерный трансактиватор, состоящий из части трансактиваторного домена мышиного белка NF-κBp65, слитого с ДНК-связывающим доменом белка дрожжей GAL4 (GAL4),

промотор цитомегаловируса человека (CMV) в противоположной ориентации,

укороченный промотор клеточно-специфического маркера глиального фибриллярного кислого белка (GFAP) для трансфекции клеток астроглии,

генетически-кодируемый кальциевый индикатор (ГККИ) (GCaMP3 и др.) в качестве маркерного гена,

посттранскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка (WPRE) для повышения титра вектора и улучшения экспрессии трансгена.

Генетическая конструкция для трансфекции клеток астроглии LVV-GFAP-GCaMP3 была сконструирована на основе усовершенствованного лентивирусного шаттл-вектора pTYF-SW-Linker, содержащего в своей последовательности сайты узнавания для нескольких эндонуклеаз рестрикции (SceI, EcoRV, NheI, SalI, SmaI, BamHI, SacII, SpeI, MluI, XhoI, NotI, ClaI, I-SceI, KpnI), Rev-чувствительный элемент ВИЧ-1, обеспечивающий Rev-зависимый экспорт мРНК из ядра в цитоплазму, CMV-TATA-TAR - рекомбинантный непосредственно-ранний промотор/энхансер цитомегаловируса с заменой в 5'-U3 длинного концевого повтора, gag - белок вирусного ядра, cPPT-FLAP - последовательность центрального полипуринового тракта и сайт полиаденилирования.

Для повышения титра вектора и улучшения экспрессии трансгена в структуру шаттл-вектора pTYF-SW-Linker, предварительно гидрализованного по сайтам NotI и ClaI, был клонирован амплифицированный фрагмент посттранскрипционного регуляторного элемента вируса гепатита сурка (WPRE) - последовательность SEQ ID N1. Для чего нами была проведена полимеразная цепная реакция со специфически подобранными праймерами WPRE_Forw (CCGCTCCCGTTATTT) WPRE_Rev (TTTATTGCCCTCGCC). Полученную плазмиду нарабатывали в препаративных количествах для последующего клонирования в нее ГККИ.

С помощью пары праймеров GCaMP3_Forw (AGAGCTGGTTTAGTGA) и CCaMP3_Rev (AATGTGGTATGGCTG), используя в качестве матрицы плазмиду pN1-Lck-GCaMP3 (Clontech), был амплифицирован ПЦР-продукт длиной 1570 п.о. - последовательность SEQ ID N2, которую клонировали pTYF-SW-Linker-WPRE, предварительно гидролизованный по сайтам Bg1II и NotI. Полученную плазмиду нарабатывали в препаративных количествах для последующего клонирования в нее клеточно-специфичного промотора.

Для специфической трансфекции клеток астроглии головного мозга в последовательность генетической конструкции был клонирован клеточно-специфический промотор глиального фибриллярного кислого белка (GFAP). ПЦР-продукт длиной 704 п.о. - последовательность SEQ ID N3 была получена посредством амплификации с помощью пары праймеров GFAP_Forw (GACGCTGCTCTGACA) и GFAP_Rev (CTGAGACTGGGGAAT), используя в качестве матрицы плазмиду pGfaABC1D-nLac. Полученный таким образом фрагмент нуклеотидной последовательности был клонирован в pTYF-SW-Linker-WPRE-GCaMP3, предварительно гидролизованный по сайтам MluI и SpeI.

Таким образом, нами была получена SEQ ID N4 генетическая конструкция - LVV-GFAP-GCaMP3 для трансфекции клеток астроглии и экспрессирования в них ГККИ GCaMP3.

Продуцирование генетической конструкции осуществляется в культуре клеток HEK293FT посредством транзиентной ко-трансфекции сконструированной генетической конструкции, упаковочного вектора pNHP и плазмиды pHEF-VSVG, кодирующей оболочку лентивируса.

Заявленный способ генетического контроля экзоцитоза на основе генетических конструкций осуществляется посредством трансфецирования культур первичных клеток астроглии, полученных из трехдневных крысят и выращиваемых на модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) (с 4,5 г/л глюкозы, глутамином, и пируватом) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки. При этом за день до трансфекции клетки высеивают в 24-луночные культуральные планшеты с плотностью клеток 5×10⁴ на лунку и инкубируют в течение 8-14 часов, после чего клетки астроглии трансфецируют разработанной генетической конструкцией -SEQ ID N4 - LVV-GFAP-GCaMP3 в присутствии полибрена (8 мкг/мл), промывают фосфатным буфером и культивируют в течение 40-52 часов в среде DMEM. После чего контроль экзоцитоза осуществлялся посредством индуцирования каскадов пуринорецепторов Р2Х и P2Y, β-адренорецепторов. Покровные стекла с клетками отмывают от ростовой среды DMEM полным сбалансированным раствором Хенкса (HBSS) при комнатной температуре и переносятся в экспериментальную ячейку. Клетки оставляют в покое на 30 минут при комнатной температуре. Экспериментальная ячейка переносится на предметный столик лазерного сканирующего конфокального микроскопа и устанавливаются настройки возбуждающего флуоресценцию лазера и светофильтров для регистрации флуоресценции. Для активации Р2У зависимых Са²⁺ каскадов в экспериментальную ячейку добавляется 10 мкМ 2-MeSATP и регистрируется изменение уровня флуоресценции. Для активации Р2Х зависимых Са²⁺ каскадов в экспериментальную ячейку добавляется 10 мкМ а,b-мАТФ и регистрируется изменение уровня флуоресценции. Для активации р-адренергических зависимых Са²⁺ каскадов в экспериментальную ячейку добавляется 50 мкМ изопротеренола и регистрируется изменение уровня флуоресценции.

Использование заявленного изобретения позволяет осуществлять генетический контроль экзоцитоза на основе генетических конструкций (для трансфекции клеток астроглии (SEQ ID N4 -LVV-GFAP-GCaMP3), поскольку в разработанную генетическую конструкцию встроен генетически-кодируемый кальциевый индикатор - GCaMP3, что позволяет контролировать характерный для клеток астроглии Са²⁺ - зависимый экзоцитоз. Кроме того, использование заявленного изобретения позволяет осуществлять визуализацию in vitro трансфецированных клеток за счет встраивания в разрабатываемую генетическую конструкцию генетически кодируемого кальциевого индикатора.

Генетическая конструкция SEQ ID N4 для осуществления способа генетического контроля экзоцитоза посредством трансфекции клеток астроглии, обладающая способностью осуществлять таргетный контроль внутриклеточных каскадов, ассоциированных с везикулярным транспортом астроглии, а также экспрессировать в них генетически кодируемый кальциевый индикатор, что обеспечивает генетический контроль экзоцитоза, в которой в качестве вектора используется лентивирусный вектор на основе ВИЧ-1, модифицированный последовательностями SEQ ID N1, кодирующей пост-транскрипционный регуляторный элемент вируса гепатита сурка (WPRE), SEQ ID N2, кодирующей генетически кодируемый кальциевый индикатор (GCaMP3), SEQ ID N3, кодирующей клеточно-специфический промотор глиального фибриллярного кислого белка (GFAP), экспрессия которых приводит к клеточно-специфической экспрессии генетически кодируемого кальциевого индикатора в клетках астроглии головного мозга.

Изобретение относится к областям медицинской и молекулярной генетики. Предложенная кассетная генетическая конструкция anti-HIV-4R-anti-HIV-5R-anti-CCR5-8 получена на основе вектора GeneClip-U1-neo и продуцирует три siPHK - ингибиторы репродукции вируса иммунодефицита человека 1 типа и гена CCR5 человека.

Аттенуированные гриппозные векторы для профилактики и/или лечения инфекционных заболеваний, а также для лечения онкологических заболеваний // 2628690

Изобретения относятся к области медицины и вирусологии. Представлены аттенуированные вирусы гриппа А, векторы на их основе и содержащие их фармацевтические композиции.

Экспрессионный плазмидный лентивирусный вектор для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка cd47 // 2627181

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к плазмидному лентивирусному вектору для гетерологичной экспрессии рекомбинантного человеческого белка CD47 в клетках млекопитающих.

Конструкции рекомбинантного непатогенного вируса болезни марека, кодирующие антигены вируса инфекционного ларинготрахеита и вируса болезни ньюкасла // 2624037

Изобретения касаются рекомбинантного непатогенного вируса болезни Марека (rMDVnp), представляющего собой рекомбинантный вирус герпеса индеек (rHVT), а также вакцины, содержащей такой вирус, и способа защиты кур против вируса инфекционного ларинготрахеита (ILTV) и вируса болезни Ньюкасла (NDV).

Вирусная частица, высвобождающаяся после инфицирования клеток млекопитающих цитомегаловирусом человека (hcmv), содержащая слитый белок, и ее применение // 2623172

Изобретения относятся к вирусной частице, высвобождающейся после инфицирования клеток цитомегаловирусом человека (HCMV), ее применения для профилактики или лечения заболевания путем образования нейтрализующих антител к по меньшей мере одному антигенному гетерологичному пептиду или путем индукции CD8+ Т-лимфоцитарного ответа против такого гетерологичного пептида и вакцины, содержащей такую вирусную частицу.

Рекомбинантные векторы hvt, экспрессирующие антигены патогенов птиц и их применение // 2620936

Настоящая группа изобретений относится к биотехнологии и иммунологии. Предложены рекомбинантный вирусный вектор из герпесвируса индейки (HVT), содержащий гетерологичный кодон-оптимизированный полинуклеотид, кодирующий полипептид F вируса болезни Ньюкасл (NDV-F), функционально связанный с промотором SV40, а также иммунологические композиции, для индукции иммунного ответа в животном, и способы индуцирования иммуногенной реакции и вакцинации животных против птичьих патогенов.

Способ получения in vitro популяций активированных антигенспецифических противоопухолевых цитотоксических т-лимфоцитов, специфичных к эпитопам опухоль-ассоциированного антигена // 2619186

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано для получения противоопухолевых ЦТЛ. Способ предусматривает антигенную активацию полученных зрелых ДК с использованием ДНК-конструкции, кодирующей эпитопы KIFGSLAFL и RLLQETELV опухоль-ассоциированного белка HER2, совместное культивирование с аутологичными зрелыми антиген-активированными ДК из прилипающей фракции всех клеток неприлипающей фракции МНК, с последующим выделением из совместной культуры ДК и МНК специфичных к указанным эпитопам ЦТЛ методом магнитной сепарации с использованием антигенспецифических реагентов, обеспечивающих обратимое окрашивание выделяемых клеток.

Элементы рекомбинантной днк для экспрессии рекомбинантных белков в клетке-хозяине // 2619161

Настоящая группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены рекомбинантный бакуловирус для экспрессии рекомбинантного белка, вектор переноса, клонирующий вектор и последовательность нуклеиновой кислоты, подходящие для получения указанного бакуловируса, и их применение, а также клетка-хозяин и способ продукции рекомбинантного белка.

Лентивирусные векторы, псевдотипированные мутантными baev гликопротеинами // 2618864

Настоящая группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены псевдотипированная вирусная векторная частица для переноса биологического материала в гемопоэтические клетки, способ ее получения и ее применение, медикамент для лечения гемопоэтических нарушений или аутоиммунных заболеваний, содержащий указанную частицу, способ трансдукции гемопоэтический клетки и стабильная пакующая вирус клеточная линия.

Аптамер против ngf и его применение // 2633510

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к аптамеру, специфически связывающемуся с фактором роста нервов (NGF), и может быть использовано в медицине как противовоспалительное или обезболивающее средство.

Способ получения днк из яйцеклеток рыб // 2632649

Изобретение относится к области биотехнологии и рыбоводства и касается способа получения ДНК из яйцеклеток рыб. Представленный способ включает пробоподготовку и выделение ДНК.

Способ получения безмаркерных трансгенных растений каланхоэ перистого, экспрессирующих ген цекропина р1 // 2631929

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения безмаркерных трансгенных растений каланхоэ перистого, экспрессирующих ген цекропина Р1. Изобретение обеспечивает получение и тестирование безмаркерных растений каланхоэ с повышенными антибиотическими свойствами за короткий промежуток времени для использования в фармакологии и медицине.

Антикоагулянт прямого действия на основе модульного бивалентного днк аптамера, селективного к тромбину // 2631829

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Описан способ химической модификации антитромбинового аптамера и к получения нового антитромбинового аптамера, обладающего антикоагулянтными свойствами и пролонгированной антитромботической активностью.

Композиции и способы ингибирования экспрессии генов аполипопротеина с-iii (арос3) // 2631805

Изобретение относится к биохимии. Описана двухцепочечная рибонуклеиновая кислота (дцРНК) для ингибирования экспрессии гена АРОС3, где указанная дцРНК содержит (а) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности AAuACUGUCCCUUUuAAGCdTsdT; (b) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GCUUAAAAGGGACAGUAUUdTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности AAUACUGUCCCUUUUAAGCdTsdT, (c) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GfcUfuAfaAfaGfgGfaCfaGfuAfuUfdTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности aAfuAfcUfgUfcCfcUfuUfuAfaGfcdTsdT, или (d) смысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности GcuuAAAAGGGAcAGuAuudTsdT, и антисмысловую цепь, состоящую из нуклеотидной последовательности AAuACuGUCCCuuuuAagcdTsdT, где нуклеотиды, обозначенные строчными буквами, представляют собой 2'-О-метилнуклеотиды; Gf, Af, Uf и Cf представляют собой 2'-фторнуклеотиды; и s представляет собой фосфоротиоатную связь.

Способ молекулярного маркирования, основанный на микросателлитных локусах, предназначенный для идентификации генотипов ивы // 2630662

Изобретение относится к области биохимии и генетики растений. Предлагается способ молекулярно-генетической идентификации растений ивы на основе микросателлитных (SSR) маркеров, который включает в себя выделение ДНК из исследуемых образцов, проведение ПЦР, электрофоретическое разделение продуктов амплификации ДНК, документирование результатов ПЦР, определение длин амплифицированных фрагментов ДНК путем сравнения со стандартами молекулярной массы, получение таблицы многолокусных генотипов по микросателлитным локусам и сравнение полученных генотипов с генотипами исходных растений.

Способ хемогенетической регистрации и коррекции нейрогенеза на основе генетических конструкций для трансфекции астроцитов и нейронов // 2630654

Изобретение относится к медицине. Изобретение представляет собой способ хемогенетической регистрации и коррекции нейрогенеза на основе генетических конструкций для трансфекции астроцитов и нейронов, при котором используют химическое соединение, обладающее активностью стимуляции и образования нервной ткани и/или ингибирования дегенерации нейронов, где разрабатывают генетические конструкции на основе лентивирусного вектора для специфической трансфекции астроцитов и нейронов, приведенных на фиг.

Способ получения синтетической cg-богатой генетической последовательности и ее использование в растениях // 2630650

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения синтетической CG-богатой генетической последовательности для синтеза гетерологичных белков.

Гуманизированное антитело к конформационному эпитопу с3 компонента комплемента человека, последовательность днк (варианты), экспрессионный вектор, содержащий последовательность днк (варианты), и штамм клеток яичников китайского хомячка cho-humc34-продуцент данного гуманизированного антитела // 2630647

Изобретение относится к области биохимии, в частности к гуманизированному антителу, которое связывается с эпитопом С3 компонента комплемента человека. Также раскрыты ДНК, кодирующая указанное антитело, экспрессионный вектор, для экспрессии указанного антитела, а также штамм клеток яичников китайского хомячка, который продуцирует указанное антитело.

Способ стимуляции ангиогенеза в ишеминизированных тканях и комбинированное лекарственное средство для осуществления способа // 2628706

Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к способу стимуляции ангиогенеза в ишемизированных тканях и комбинированному лекарственному средству для его осуществления.

Нуклеиновая кислота, содержащая или кодирующая структуру "стебель-петля" гистонов и последовательность поли(а) или сигнал полиаденилирования, для повышения экспрессии кодируемого терапевтического белка // 2634391

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены нуклеиновая кислота, кодирующая терапевтический белок или антитело, структуру «стебель-петля» гистонов, и последовательность поли(А) или сигнал полиаденилирования, набор и фармацевтическая композиция, содержащие одну или более указанную нуклеиновую кислоту, для использования в генной терапии, а также способ повышения экспрессии кодируемого белка и применение указанных нуклеиновой кислоты, набора или композиции для повышения экспрессии кодируемого белка. Строение предложенной нуклеиновой кислоты, заключающееся в комбинации элементов последовательности поли(А) или сигнала полиаденилирования совместно со структурой «стебель-петля» гистонов, обеспечивает повышение экспрессии белка значительно выше уровня, наблюдаемого при использовании указанных элементов отдельно. Предложенная группа изобретений может быть использована в медицине в генной терапии. 6 н. и 15 з.п. ф-лы, 25 ил., 15 табл., 11 пр.