Способ диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у лиц с нормолипидемией по содержанию cd4+ т-лимфоцитов в периферической крови

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у пациентов с концентрацией холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) <3,5 мМ (нормолипидемией). Способ включает анализ образца для определения популяции CD4+Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что проводят фенотипирование лимфоцитов с использованием меченных флуоресцентными метками моноклональных антител к CD4, при этом содержание CD4+клеток, выраженное в процентном (%) отношении от лимфоцитов, более 39,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза. Использование данного способа позволяет выявить пациентов с высоким риском прогрессирования атеросклероза, что дает возможность своевременной коррекции терапии у данной категории пациентов. 2 пр., 1 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к диагностике сердечно-сосудистых заболеваний, а именно к лабораторным диагностическим способам определения предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у лиц с нормолипидемией, т.е. с «целевыми» (менее 3,5 мМ) значениями концентрации холестерина липопротеидов низкой плотности крови.

Прогрессирование атеросклероза сонных артерий повышает риск развития нарушений мозгового кровообращения. Одним из основных факторов риска атеросклероза является увеличение концентрации в крови холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП), однако в ряде случаев атеросклероз может развиваться даже при коррекции его уровня. Своевременное выявление таких пациентов, усиление контроля над ними и назначение соответствующей терапии позволят уменьшить количество повторных госпитализаций и сократить затраты на оперативное лечение.

В настоящее время нет лабораторных показателей, однозначно указывающих на вероятность прогрессии атеросклероза сонных артерий и развития осложнений у пациентов, не имеющих традиционных факторов риска заболевания, в частности с уровнем холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) в крови менее 3,5 мМ, что соответствует целевым значениям в группе лиц с невысоким сердечно-сосудистым риском (Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. Российские рекомендации V пересмотр. Атеросклероз и дислипидемии. 2012, N4 (9) С. 5-53).

Известен способ экспресс-диагностики предрасположенности больного с ишемической болезнью сердца (ИБС) к прогрессированию атеросклероза. Сущность способа заключается в том, что проводят оценку степени стимуляции атерогенной функции моноцит-производных макрофагов из крови больных с ИБС по способности макрофагов а) продуцировать активные формы кислорода, оцененные по величине люминолзависимой хемилюминесценции, б) окислять липопротеины низкой плотности, оцененные по накоплению в них продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой, в) поглощать липопротеины низкой плотности, оцененные по накоплению в макрофагах общего холестерина, и г) по сохранению 50-70% жизнеспособных макрофагов в процессе 1 часа инкубации в безбелковой субстрат-дефицитной среде.

(Патент РФ №2408019, МПК G01N 33/50, опубл. 27.12.2010 г.)

Назначением способа является «диагностика предрасположенности к прогрессированию атеросклероза», однако в нем не приведены клинические подтверждения прогрессирования атеросклероза у лиц с повышенной проатерогенной функцией моноцитов и макрофагов, в частности нет данных ультразвукового исследования сонных артерий или коронарной ангиографии, указывающих на изменение размеров атеросклеротических поражений сосудов в отдаленном периоде. Кроме того, данный способ предполагает получение от пациентов существенного количества биоматериала (периферической крови) и использование сложных методик, включающих выделение мононуклеарных лейкоцитов, их культивирование в контролируемых условиях, соблюдение правил асептики, нормирование суммарного клеточного ответа (измеряемого по величине хемилюминисценции или светопоглощения) на количество моноцитов/макрофагов.

Известен также способ диагностики, определения прогноза или идентификации предрасположенности к атеросклерозу и восприимчивости к развитию атеросклеротических бляшек (АСБ) и/или обструкции сосудов, где способ включает анализ образца для определения процентной частоты по меньшей мере двух субпопуляций Т-лимфоцитов и сравнение данных со сравнительными и/или контрольными данными, где по меньшей мере одна из указанных субпопуляций Т-лимфоцитов представляет собой популяцию CD8 Т-клеток, выбранную из списка, состоящего из CD8+CD11L+CD45RA+, CD8+CD11L+CD45RO+, CD8+CD11a+, CD8+CD62L+, CD8+CD11highRO+ и CD8+CD38+RO+ и по меньшей мере одна другая из указанных субпопуляций Т-лимфоцитов представляет собой популяцию CD4 Т-клеток, выбранную из списка, состоящего из CD4+CD62L+, CD4+CD49d+, CD4+CD25+, CD4+DRII+, CD4+CD44+ и CD4+CD3+CD45RO+.

(Патент РФ №2384847, МПК G01N 33/50, опубл. 20.03.2010 г.)

Недостатки данного способа заключаются в том, что он предполагает многопараметрический анализ нескольких (по меньшей мере, двух) субпопуляций Т-лимфоцитов. Для этого требуются набор антител, меченных разными флуоресцентными метками, и цитофлуориметры, оснащенные соответствующими детекторами флуоресценции.

Задачей изобретения является создание эффективного, недорогого, достоверного, легко воспроизводимого и не требующего большого количества биоматериала способа диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий по содержанию CD4+ T-лимфоцитов в периферической крови, позволяющего в краткосрочной перспективе выявлять пациентов с высоким риском прогрессирования атеросклероза сонных артерий с последующим индивидуальном подбором терапии и, как следствие, уменьшение количества повторных госпитализаций и сокращение затрат на лечение.

Технический результат изобретения заключается в повышении эффективности и достоверности способа выявления пациентов с высоким риском прогрессирования атеросклероза и уменьшении количества повторных госпитализаций.

Это достигается тем, что в заявляемом способе диагностики предрасположенности к прогрессировании атеросклероза сонных артерий у пациентов с концентрацией холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) <3,5 мМ в образце периферической крови определяют содержание CD4+ Т-лимфоцитов с использованием моноклональных антител к CD4, меченных флуоресцентной меткой, и цитофлуориметрии в потоке, при этом относительное содержание CD4+ Т-лимфоцитов, выраженное в процентах (%) от лимфоцитов, более 39,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза.

Получение достоверной диагностической информации по указанным иммунологическим показателям объясняется следующим. Известно, что атеросклероз представляет собой хронический воспалительный процесс в артериальной стенке, протекающий на фоне накопления проатерогенных факторов - модифицированных липопротеидов, гликированных белков, клеточного «дебриса» и т.д. Лимфоциты, прежде всего CD4+ клетки, присутствующие в атеросклеротической бляшке (АСБ) на всех стадиях ее развития, модулируют течение воспалительного процесса. Определение содержания данных лимфоцитов в крови позволяет получить информацию о характере и интенсивности воспалительного процесса в артериальной стенке.

Для осуществления способа исследуют периферическую венозную кровь, взятую в пробирки с антикоагулянтом, в количестве 1 мл. Производят типирование лимфоцитов методами прямой иммунофлуоресценции и цитофлуориметрии в потоке.

Содержание CD4+ лимфоцитов, выраженное в % от лимфоцитов, более 39,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза в краткосрочной перспективе (1 год).

Клинический пример 1

Пациент С., мужчина, 46 лет. Не курит. Жалоб нет. Артериальную гипертония (АГ), ишемическую болезнь сердца (ИБС) и острую недостаточность мозгового кровообращения (ОНМК) в анамнезе отрицает. Лекарственную терапию не получал.

Лабораторные показатели при поступлении: лейкоциты 5,0 млн/мл, лимфоциты 1,5 млн/мл, общий холестерин 5,9 ммоль/л, холестерин липопротеидов низкой плотности 2,4 ммоль/л. По вышеописанной методике подготовили пробы для исследования. Содержание CD4+ (% от лимфоцитов) - 48,5, что указывает на высокий риск прогрессирования атеросклероза.

При ультразвуковом дуплексном сканировании (УЗДС) брахиоцефальных артерий выявлено утолщение и уплотнение стенки в устье и проксимальной трети правой внутренней сонной артерии (ВСА), задней стенки в бифуркации левой общей сонной артерии (ОСА), в устье левой ВСА; стеноз 30-35% в бифуркации правой ОСА за счет гомогенной атеросклеротической бляшки (АСБ) средней уз-плотности, расположенной преимущественно по задней стенке.

При УЗДС брахиоцефальных артерий через 1 год: утолщение и уплотнение стенки в устье и проксимальной трети правой ВСА, задней стенки в бифуркации левой ОСА, в устье левой ВСА; стеноз 25-30% в бифуркации правой ОСА за счет гомогенной АСБ средней уз-плотности, расположенной преимущественно по задней стенке; стеноз до 20% в бифуркации левой ОСА за счет гетерогенной АСБ средней уз-плотности.

Таким образом, выявленное высокое содержание CD4+ лимфоцитов у данного пациента было связано с прогрессированием атеросклероза (возникновение новых атеросклеротических бляшек в бифуркации правой и левой ОСА).

Клинический пример 2

Пациент Р., мужчина, 61 год. Не курит. Жалоб нет. АГ, ИБС и ОНМК в анамнезе отрицает. Лекарственную терапию не получал.

Лабораторные показатели при поступлении: лейкоциты 8,0 млн/мл, лимфоциты 2,6 млн/мл, общий холестерин 5,4 ммоль/л, холестерин липопротеидов низкой плотности 2,6 ммоль/л. По вышеописанной методике подготовили пробы для исследования. Иммунологические показатели: содержание CD4+ (% от лимфоцитов) - 27,0, что исключает риск прогрессирования атеросклероза.

При УЗДС брахиоцефальных артерий выявлено утолщение и уплотнение стенки в устье правой ВСА, в бифуркации левой ОСА.

При проведении УЗДС брахиоцефальных артерий через 1 год признаков прогрессирования заболевания (увеличение степени стеноза, появление новых АСБ) не выявлено.

Таким образом, у данного пациента при низком содержании CD4+ клеток прогрессии атеросклероза сонных артерий за период наблюдения в течение 1 года не зарегистрировано.

По заявляемому способу содержание CD4+ -лимфоцитов было определено в пробах периферической венозной крови 33 пациентов, среди которых у 17 уровень ХС ЛНП составлял <3,5 мМ. У 18 пациентов (9 с нормолипидемией) наблюдалась прогрессия заболевания, т.е. появление нового стеноза в общей сонной артерии и внутренней сонной артерии и/или увеличение степени имевшегося ранее стеноза на 5% и более, по данным повторного ультразвукового дуплексного сканирования сонных артерий, проведенного через 10-13 мес. Пациенты с прогрессией заболевания имели исходно более высокое содержание CD4+ лимфоцитов в % от лимфоцитов (42,0 (38,0; 48,5) против 38,0 (32,0; 43,0); р=0.05). При анализе данных, полученных для лиц с «целевым» (менее 3,5 мМ) уровнем ХС ЛНП, различия оказались достоверными (против 42,0 (42,0; 48,5) против 38,0 (30,5; 40,0); р=0.007).

На Фиг. 1 показан результат ROC-анализа для относительного содержания CD4+ лимфоцитов в периферической крови больных, где отражена высокая диагностическая значимость в выявлении лиц, наклонных к прогрессированию атеросклероза сонных артерий, в группе пациентов с уровнем ХС ЛНП менее 3,5 мМ, но не в общей группе обследованных пациентов: показатель площади под характеристической кривой составил 0,89 (95% ДИ 0,72-1,05), что соответствовало высокому качеству построенной модели. На фиг. обозначены: AUC - площадь под ROC кривой, 95% CI - 95% доверительный интервал. Показатели чувствительности и специфичности определения содержания CD4+ клеток для прогнозирования прогрессии атеросклероза сонных артерий также были выше в группе пациентов с «целевыми» значениями ХС ЛНП по сравнению с общей группой обследованных больных (табл.).

Таким образом, заявляемый способ позволяет выявлять высокий риск прогрессирования атеросклеротического поражения артерий сонных артерий в ранние сроки (1-2 года), что делает возможным своевременное усиление контроля и терапии у данной категории пациентов с целью уменьшения количества повторных госпитализаций и сокращения затрат на оперативное лечение таких пациентов.

Способ диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у пациентов с концентрацией холестерина липопротеидов низкой плотности (ХС ЛНП) <3,5 мМ (нормолипидемией), включающий анализ образца для определения популяции CD4+Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что проводят фенотипирование лимфоцитов с использованием меченных флуоресцентными метками моноклональных антител к CD4, при этом содержание CD4+клеток, выраженное в процентном (%) отношении от лимфоцитов, более 39,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной клинической диагностике и фтизиатрии. Способ прогнозирования увеличения объема поражения легочной ткани при инфильтративном туберкулезе включает определение количества CD3+CD25+, CD8+- и CD3+-клеток, отношения CD4+/CD8+, а также числа моноцитов, продуцирующих супероксид-анион (О2-) в крови больных инфильтративным туберкулезом легких.

Группа изобретений относится к медицине и иммунологии и может быть использована для выделения, обогащения или истощения популяции отдыхающих Tr1 клеток и/или активированных Tr1 клеток.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ отбора клетки, экспрессирующей биспецифическое антитела, который включает следующие этапы: создание популяции эукариотических клеток путем трансдукции популяцией лентивирусных частиц, где каждая лентивирусная частица содержит бицистронную экспрессионную кассету, кодирующую секретируемое биспецифическое антитело, которая содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный домен первой тяжелой цепи в локусе «замок» или «ключ» до EV71-IRES, и нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельный домен второй тяжелой цепи в соответствующем другом локусе после EV71-IRES, где вариабельный домен первой тяжелой цепи связывается с первым антигеном, а второй вариабельный домен связывается со вторым антигеном, где первый антиген и второй антиген могут быть одинаковыми или разными, где эукариотическая клетка экспрессирует общую легкую цепь, и отбор из популяции эукариотических клеток клетки, где клетка выбрана по способности антитела, представленного на ее поверхности, специфически связываться с указанными первым и вторым антигенами.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования аллергических реакций при использования дентальных имплантатов на основе сплавов оксида титана в реконструктивной хирургии.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено гуманизированное антитело и его антиген-связывающий фрагмент, специфически связывающиеся с рецептором фолиевой кислоты 1 (FOLR1) человека и охарактеризованные аминокислотными последовательностями участков, определяющих комплементарность с антигеном (CDR).
Изобретение относится к онкологии, иммунологии и предназначено для диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты. Способ диагностики риска формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты включает определение содержания лимфоцитов CD25+, CD10+, CD71+, HLADR+ и цитокина IL-1β в периферической венозной крови, определение соотношения концентрации IL-1β к сумме абсолютного содержания активированных лимфоцитов CD25+, CD10+, CD71+, HLADR+, расчет диагностического индекса (ДИ): ДИ=1L-1β/Σ (CD25+CD10+CD71+HLADR+) и при величине ДИ, равной 20,04 и более, диагностируется риск формирования дефицита противоопухолевой иммунной защиты.

Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и может быть использовано при диагностике вируса герпеса 6 типа. Способ определения авидности иммуноглобулинов класса G к вирусу герпеса 6 типа заключается в том, что сыворотку вносят в лунки двух стрипов иммобилизованного антигеном вируса герпеса 6 типа планшета, одновременно инкубируют в течение 60 минут, после чего ячейки первого стрипа обрабатывают водным раствором 4 М мочевины, затем оба стрипа промывают и вносят в них конъюгат моноклональных антител к IgG антителам человека, стрипы инкубируют в течение 40 минут, после промывания окрашивают 0,05% водным раствором тетраметилбензидина и выдерживают 20-25 минут при комнатной температуре, реакцию останавливают раствором 0,5 М серной кислоты, после чего определяют оптическую плотность с помощью спектрофотометра и на основании полученных данных проводят расчет индекса авидности.

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и описывает способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока.

Изобретение относится к биохимии. Описано моноклональное антитело, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, в частности с липоарабиноманнаном туберкулезной бациллы.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ повышения антагонистической активности моноклонального антитела, содержащего константную область IgG1 человека и направленного против специфической молекулы-мишени, включающий модификацию аминокислотной последовательности шарнирной области.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования осложненного течения беременности у женщин с генитальным эндометриозом. Для этого в крови беременных женщин с генитальным эндометриозом в сроке 11-13 недель гестации определяют содержание фактора роста плаценты (ФРП), фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), лимфоцитов с фенотипом CD95+ (Л CD95+) с последующим анализом данных. Дополнительно в указанном сроке беременности производят определение концентрации углеводного антигена СА125, альфа-2-микроглобулина фертильности (АМГФ), ассоциированного с беременностью протеина-А плазмы (РАРР-А) и плацентарного альфа-1-микроглобулина (ПАМГ). При значении этих показателей: концентрация ФРП (пкг/мл) - 93±14; концентрация ФНОα (пкг/мл) - 42,8±5,1; содержание Л CD95+ (%) - 38,4±4,7; концентрация СА125 (ЕД/мл) - 62,3±3,6; концентрация АМГФ (нг/мл) - 527±43; концентрация РАРР-А (мг/л) - 6,8±1,9; концентрация ПАМГ (нг/мл) - 16,5±2,8 прогнозируют осложненное течение беременности у женщин с генитальным эндометриозом. Использование данного изобретения позволяет неинвазивно прогнозировать патологическое течение беременности у женщин с генитальным эндометриозом.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложены способ диагностики рака предстательной железы и способ мониторинга реакции на терапию рака предстательной железы, включающие контактирование раковых клеток эпителиального происхождения с анти-STEAP-l антителом, которое специфически связывается с простата-специфическим маркером STEAP-1 с KD≤1000 нМ, где анти-STEAP-1 антитело представляет собой антитело 15А5, продуцированное клеткой гибридомы, имеющей номер депонирования микроорганизмов РТА-12259. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные способы диагностики и мониторинга рака предстательной железы. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 11 ил., 8 пр.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики H. pylori. Иммунохроматографическая тест-система для выявления патогенных штаммов H. pylori по белку cagA представляет собой мультимембранный композит, состоящий из нитроцеллюлозной мембраны, на поверхность которой наклеена мембрана, пропитанная конъюгатом моноклональных антител, клон НР-387 в концентрации 20 мкг⋅см-3 с наночастицами колоидного золота со средним диаметром 30 нм, мембрана для образца и адсорбирующая мембрана. На аналитическую мембрану в тестовой зоне нанесены моноклональные антитела, клон НР-1811 в концентрации 12 мкг⋅см-3, а в контрольной зоне - антивидовые антитела козы против Ig мыши в концентрации 10 мкг⋅см-3. Изобретение обеспечивает определение белка cagA H. pylori в различных биологических материалах. 1 ил., 1 табл., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, а именно способам и композициям для терапевтического и диагностического применения в лечении заболеваний и расстройств, которые вызваны нейрофибриллярными клубками или связаны с ними. В частности настоящее изобретение относится к гуманизированным антителам, которые специфически распознают и связываются с фосфорилированными патологическими конформерами белка тау, а также к способам и композициям, включающим указанные антитела, для терапевтического и диагностического применения в лечении таупатий, в том числе болезни Альцгеймера (AD). Изобретение позволяет эффективно диагностировать и повышать качество лечения болезней, связанных с белком тау. 23 н. и 26 з.п. ф-лы, 6 ил., 10 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза сонных артерий у пациентов с концентрацией холестерина липопротеидов низкой плотности <3,5 мМ. Способ включает анализ образца для определения популяции CD4+Т-лимфоцитов, отличающийся тем, что проводят фенотипирование лимфоцитов с использованием меченных флуоресцентными метками моноклональных антител к CD4, при этом содержание CD4+клеток, выраженное в процентном отношении от лимфоцитов, более 39,5 свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза. Использование данного способа позволяет выявить пациентов с высоким риском прогрессирования атеросклероза, что дает возможность своевременной коррекции терапии у данной категории пациентов. 2 пр., 1 табл., 1 ил.

Наверх