Композиции кожных наполнителей

Группа изобретений относится к области косметологии, а именно к композиции кожного наполнителя для лечения морщин на коже, содержащей гиалуроновую кислоту, поперечно-сшитую с диаминным сшивателем, выбираемым из лизина или метилового эфира лизина, и карбодиимидный связывающий агент; к способу получения указанной композиции, согласно которому проводят поперечное сшивание гиалуроновой кислоты с диаминным сшивателем, выбираемым из лизина или метилового эфира лизина, в присутствии карбодиимидного связывающего агента; а также к способу лечения тонких линий на коже, включающему введение данной композиции в дермальную область пациента. Группа изобретений обеспечивает инъецируемую композицию кожного наполнителя, которая не приводит к посинению после введения в область кожи пациента, не является цитотоксичной, имеет хорошие механические свойства и обладает улучшенной биосовместимостью. 3 н. и 8 з.п. ф-лы, 18 пр., 6 табл., 2 ил.

 

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[001] В настоящей заявке заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США №61/568618, поданной 8 декабря 2011 года, которая частично является продолжением заявки на патент США №13/615193, поданной 13 сентября 2012 года, в которой заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США №61/534780, поданной 14 сентября 2011 года, и которая частично является продолжением заявки на патент США с серийным номером №13/593313, поданной 23 августа 2012 года, в которой заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США №61/527335, поданной 25 августа 2011 года, и которая частично является продолжением заявки на патент США с серийным номером 13/486754, поданной 1 июня 2012 года, в которой заявляется приоритет по предварительной заявке на патент США №61/493309, поданной 3 июня 2011 года, и полное содержание каждого из этих документов включено в настоящий документ посредством специальной ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[002] Настоящее изобретение относится, в основном, к композициям кожных наполнителей, например, но не ограничиваясь этим, к композициям кожных наполнителей, которые эффективны для лечения мелких морщин на коже.

[003] Старение кожи представляет собой прогрессирующее явление, возникающее с течением времени и которое может усиливаться под действием факторов образа жизни, таких как употребление алкоголя, курение табака и воздействие солнечного света. Старение кожи лица может характеризоваться атрофией, провисанием и ожирением. Атрофия относится к масштабному снижению толщины кожной ткани. Слабость подкожных тканей приводит к избытку кожи и опущению и приводит к возникновению впалых щек и век глаз. Ожирение относится к увеличению избыточного веса за счет припухлости нижней части лица и шеи. Эти изменения обычно сопровождаются сухостью, снижением эластичности и грубой текстурой.

[004] Гиалуроновая кислота (ГК), известная также как гиалуронан, представляет собой несульфатированный гликозаминогликан, который широко распространен в организме человека в соединительной, эпителиальной и нервной тканях. Гиалуроновая кислота распространена в различных слоях кожи, где она выполняет множество функций, таких как, например, обеспечение хорошего увлажнения, содействие организации внеклеточного матрикса, действие в качестве наполняющего материала; а также участвует в механизмах восстановления ткани. Однако с возрастом снижается количество гиалуроновой кислоты, коллагена, эластина и других матриксных полимеров, присутствующих в коже. Например, многократное воздействие ультрафиолетового света, например от солнца, вызывает уменьшение выработки гиалуронана дермальными клетками, а также увеличение скорости его разрушения. Такое уменьшение материалов приводит к различным кожным состояниям, таким как, например, сморщивание, пустотелость, снижение содержание влаги, и другим нежелательным состояниям, которые способствуют возникновению признаков старения. Инъецируемые кожные наполнители успешно используют для лечения старения кожи. Эти наполнители могут заменять потерянные эндогенные матриксные полимеры или усиливать/улучшать функцию существующих матриксных полимеров для лечения этих кожных состояний.

[005] У людей время удержания немодифицированной гиалуроновой кислоты составляет несколько дней, поскольку полимерные цепи легко разрушаются ферментами и свободными радикалами, находящимися в организме. Имеющиеся в продаже кожные наполнители, как правило, получают поперечным сшиванием гидроксильных групп ГК с помощью химических сшивателей. Доступны коммерческие гели кожных наполнителей, которые содержат гиалуроновую кислоту, синтезированную с дивинилсульфоном (DVS), диглицидиловым эфиром 1,4-бутандиола (BDDE) или 1,2,7,8-диэпоксиоктаном (DEO). Эффект мягкости и наращивания ткани, обеспечиваемый кожными наполнителями, можно контролировать изменением плотности поперечного сшивания различными сшивателями.

[006] Для увеличения времени удержания линейные цепи гиалуроновой кислоты обычно сшивают низкомолекулярным сшивателем типа BDDE. Поперечное сшивание выполняют при очень высоком pH (>12) и при температурах около 50°C. Было описано, что константа скорости разложения ГК увеличивается примерно в 100 раз при повышении температуры и pH с 40 до 60°C и с 7 до 11 соответственно. Этот недостаток приводит к необходимости поиска новых сшивателей и химизма поперечного сшивания для ГК, которые обеспечат более мягкие условия.

[007] В настоящем изобретении поперечно-сшитую ГК сшивают связывающим агентом и используют полиаминные сшиватели, которые образуют амидные связи с карбоксильными функциональными группами цепей ГК. В настоящем изобретении сшивание может быть выполнено при низких значениях pH, например, при pH от 4 до 7 и при температурах между 20 и 37°C, в таких условиях разрушение ГК минимально.

[008] В публикации Bioconjugate Chemistry, 2010, 21, 240-247: Joem Y., et al., Effect of cross-linking reagents for hyaluronic acid hydrogel dermal fillers on tissue augmentation and regeneration, описано применение HMDA для получения поперечно-сшитого ГК кожного наполнителя для наращивания ткани. Полное содержание этой публикации включено в настоящий документ посредством специальной ссылки.

[009] Феномен Тиндаля представляет собой неблагоприятное явление, возникающее у некоторых пациентов, которым вводят кожные наполнители на основе гиалуроновой кислоты (ГК). Феномен Тиндаля характеризуется появлением посинения участков кожи, в которые инъецировали кожный наполнитель, что представляет собой видимую гиалуроновую кислоту, наблюдаемую через прозрачный эпидермис. Клинические отчеты позволяют предположить, что способ введения наполнителя и свойства кожи могут влиять на проявление этого неблагоприятного явления. Наполнители с высокой густотой и упругостью успешно используются для коррекции областей лица, таких как носогубные складки, щеки и подбородок, без какого-либо опасения изменения цвета лица, поскольку эти материалы инъецируют в средние и глубокие слои кожи. Однако при использовании этих наполняющих материалов для коррекции поверхностных, мелких морщин, например слезной борозды, межбровных морщин, морщин в уголках глаз, линий улыбки или лба, или при ошибочном использовании слишком поверхностно в верхних слоях кожи, зачастую наблюдается посинение кожи. Это явление, которое предположительно является результатом феномена Тиндаля, оставляет полупостоянное изменение цвета участков нанесения, и иногда исчезает только после введения гиалуронидазы для разложения материала наполнителя. Следовательно, феномен Тиндаля более распространен у пациентов, проходивших лечение поверхностных мелких морщин. Продолжительное проявление феномена Тиндала, как правило, в течение нескольких месяцев, пока гель сохраняется в коже, является причиной большинства жалоб пациентов.

[0010] Гели кожных наполнителей на основе ГК были специально созданы для лечения «мелких» морщин, находящихся вокруг слезной борозды, на лбу, в уголках глаз, межбровных морщин и так далее. Многие демонстрируют феномен Тиндаля при слишком поверхностной инъекции. Хотя эти гели созданы так, что они обладают низким модулем упругости за счет легкого поперечного сшивания линейных цепей ГК небольшим количеством BDDE и уменьшения конечной концентрации ГК в геле, большинство из имеющихся в продаже гелей для мелких морщин все еще демонстрируют феномен Тиндаля при поверхностном инъецировании, и, к сожалению, in vivo продолжительность действия этих гелей крайне ограничена.

[0011] Все еще существует необходимость в лучших кожных наполнителях для лечения и улучшения внешнего вида стареющей кожи.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

[0012] В настоящем изобретении описаны композиции кожных наполнителей и способы составления композиций для получения кожных наполнителей на основе ГК с использованием нового химизма поперечного сшивания. Было обнаружено, что действие многих из описанных здесь наполняющих гелей настоящего изобретения длится in vivo существенно дольше, чем у существующих имеющихся в продаже гелей. В некоторых аспектах настоящего изобретения композиции могут быть введены в сосочковый слой дермы без посинения кожи или по меньшей мере без значительного или заметного посинения. В некоторых аспектах настоящего изобретения композиции кожного наполнителя являются оптически прозрачными и могут быть использованы для улучшения внешнего вида кожи, например для добавления объема, полноты и уменьшения морщин и тонких линий, не вызывая посинения, известного как «феномен Тиндаля», который в некоторых случаях связан с обычными оптически прозрачными кожными наполнителями.

[0013] В одном аспекте настоящего изобретения представлены терапевтические композиции кожных наполнителей длительного действия, которые, в основном, содержат биосовместимый полимер, например компонент гиалуроновой кислоты, поперечно сшитый с диаминным или полиаминным сшивателем.

[0014] В другом аспекте такие композиции являются, в основном, оптически прозрачными и демонстрируют уменьшенное или отсутствие видимого посинения при введении в участок кожи пациента.

[0015] Представлены также способы получения инъецируемых композиций кожного наполнителя. В одном из вариантов реализации указанный способ включает стадии поперечного сшивания гиалуроновой кислоты (ГК) с полиаминным сшивателем с помощью карбодиимидного связывающего агента.

[0016] В одном аспекте указанный сшиватель состоит по меньшей мере из трех и максимально из восьми ПЭГ цепей, расходящихся из центральной точки, и каждая цепь содержит концевую аминогруппу.

[0017] Сшиватель может содержать ПЭГ цепи, например ПЭГ цепи, имеющие по меньшей мере одно этиленгликольное звено и не более 55 этиленгликольных звеньев.

[0018] В одном аспекте сшиватель представляет собой метиловый эфир лизина.

[0019] В другом аспекте сшиватель представляет собой 3-[3-(3-амино-пропокси)-2,2-бис(3-амино-пропоксиметил)-пропокси]-пропиламин (4 АА) и содержится в концентрации от около 10 до около 50 мкМ.

[0020] В одном аспекте ГК поперечно связана вместе с карбодиимидным связывающим агентом, например с водорастворимым связывающим агентом, например с водорастворимым карбодиимидом.

[0021] В другом варианте реализации связывающий агент представляет собой 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида гидрохлорид (EDC) и содержится в концентрации от около 20 до 100 мкМ.

[0022] Связывающий агент может быть использован в сочетании с водорастворимым активирующим агентом, например N-гидроксисукцинимидом (NHS) или N-гидроксисульфосукцинимидом (сульфоNHS), содержащимся в концентрации от около 5 до около 25 мкМ.

[0023] В одном из вариантов реализации полимер представляет собой полисахарид, например гиалуроновую кислоту. Гиалуроновая кислота включает поперечно-сшивающий компонент и может дополнительно включать несшивающий компонент. Добавка может включать витамин, например витамин C, например стабилизированную форму витамина С, или производное витамина C, например 2-глюкозид L-аскорбиновой кислоты (AA2G), аскорбил-3-аминопропилфосфат (Vitagen) или натрия аскорбилфосфат (АА2Р).

[0024] В одном аспекте настоящего изобретения добавка представляет собой производное витамина, которое ковалентно сопряжено с полимером посредством подходящего способа реакции, например этерификации, амидирования или эстерификации.

[0025] Композиция может быть, в основном, оптически прозрачной. Композиции, как правило, имеют значение G' от около 20 до около 150 Па, например не более чем около 150 Па и, например, не менее чем около 20 Па.

[0026] В другом аспекте настоящего изобретения представлены способы лечения мелких морщин на коже пациента. В одном из вариантов реализации указанный способ включает стадии введения в кожу пациента композиции, содержащей компонент гиалуроновой кислоты, поперечно сшитый с диаминным или полиаминным сшивателем; и карбодиимидный связывающий агент. Указанная композиция может быть, в основном, оптически прозрачной и демонстрировать уменьшенное или незаметное посинение при введении в участок кожи пациента.

[0027] В другом аспекте настоящего изобретения представлены способы улучшения эстетического внешнего вида лица, которые, как правило, включают стадии введения в участок кожи пациента практически оптически прозрачной композиции кожного наполнителя, которая демонстрирует отсутствие или незначительный феномен Тиндаля. Указанная композиция может быть получена с помощью стадий поперечного сшивания гиалуроновой кислоты (ГК) с диаминным или полиаминным сшивателем в присутствии карбодиимидного связывающего агента.

[0028] В другом аспекте настоящего изобретения представлены способы уменьшения видимости тонких линий в тонких участках кожи пациента, при этом указанный способ, в основном, включает введение пациенту композиции кожного наполнителе на глубину не более чем около 1 мм практически оптически прозрачной композиции кожного наполнителя на основе гиалуроновой кислоты, содержащей компонент гиалуроновой кислоты, поперечно сшитый с диаминным или полиаминным сшивателем.

[0029] В некоторых вариантах реализации композицию вводят инъекциями поверхностно, то есть на глубину не более чем около 0,8 мм, не более чем около 0,6 мм или не более чем около 0,4 мм.

[0030] В другом аспекте настоящего изобретения представлена композиция кожного наполнителя, которая, в основном, содержит компонент гиалуроновой кислоты, поперечно-сшитый с диаминным или полиаминным сшивателем в присутствии карбодиимидного связывающего агента. Указанная композиция может иметь концентрацию гиалуроновой кислоты от около 14 до около 30 мг/мл. Гиалуроновая кислота может быть низкомолекулярной гиалуроновой кислотой, например гиалуроновой кислотой, имеющей среднюю молекулярную массу менее чем около 100 КДа, менее чем около 800 КДа, менее чем около 600 КДа или менее чем около 400 КДа. Эти композиции могут быть особенно полезны и эффективны при лечении складок и морщин, включая мелкие морщины или поверхностные линии на коже, например даже на очень тонкой коже, например на коже, имеющей толщину не более чем около 1 мм. В некоторых вариантах реализации композиции настоящего изобретения имеют продолжительность действия по меньшей мере 3 месяца, по меньшей мере 6 месяцев или до одного года после их введения в кожу.

[0031] Эти и другие аспекты и преимущества настоящего изобретения легче понятны и оценены со ссылкой на следующие чертежи и подробное описание.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0032] Фигура 1 иллюстрирует изображения кожи млекопитающего, которому инъецировали композицию в соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения и два промышленных кожных наполнителя.

[0033] Фигура 2 иллюстрирует диаграмму, показывающую продолжительность действия in vivo композиций в соответствии с одним из аспектов настоящего изобретения, по сравнению с промышленным кожным наполнителем.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0034] Гиалуроновая кислота (ГК) представляет собой природный глюкозамингликан, используемый для составления композиции кожных наполнителей, которые используются, в основном, для уменьшения морщин и придания объема лицу. У людей время удерживания немодифицированной гиалуроновой кислоты составляет несколько дней, поскольку полимерные цепи легко разрушаются ферментами и свободными радикалами, находящимися в организме. Для улучшения времени удерживания линейные цепи гиалуроновой кислоты обычно сшивают с низкомолекулярным сшивателем типа BDDE.

[0035] Настоящее изобретение относится отчасти к кожным наполнителям, содержащим поперечно-сшитую ГК с небольшими диаминными и полиаминными сшивателями, которые образуют амидные связи с карбоксильными функциональными группами ГК цепей. В идеальных условиях EDC активирует группы карбоновой кислоты в ГК, а активированные группы карбоновой кислоты затем взаимодействуют с аминами. В одном из аспектов поперечное сшивание выполняют при pH от около 4 до около 7 и при температурах от около 20 до около 37°C. Было обнаружено, что в этих условиях разрушение ГК минимально.

[0036] Для поперечного сшивания ГК для различных применений использовали линейные диаминные сшиватели типа гексаметилендиамина (HMDA), лизин, метиловый эфир лизина. Проблема с поперечным сшиванием ГК за счет химизма EDC заключается в конкурентном образовании сложноэфирных связей между группами карбоновой кислоты и гидроксильными группами ГК даже в присутствии этих полиаминов.

[0037] Сложноэфирные связи очень подвижны и легко гидролизуются при высоких температурах. Гидрогели ГК, полученные сложноэфирным сшиванием, обычно не прочные и не могут быть стерилизованы влажным паром.

[0038] Проблема заключалась в минимизации образования сложноэфирных связей при поперечном, опосредованном EDC сшивании ГК с помощью аминов. В одном подходе использовали высокое исходное соотношение NH₂:HA, а также перед добавлением EDC к гидратированной ГК добавляли амин. Видимо, это увеличивает количество образованных амидных связей относительно количества сложноэфирных связей. Предполагается, что, поскольку аминогруппы являются лучшими нуклеофилами, чем гидроксильные группы, то, предположительно, может быть образовано большее количество амидных связей. Другой подход заключается в выполнении поперечного связывания при высоком pH для минимизации образования сложноэфирных связей, поскольку эти связи менее стабильны при более высоких pH. Один из способов заключается в использовании очень низкой концентрации ГК в реакции, например от около 1 до около масс. 5%. При таких низких концентрациях цепи ГК находятся далеко друг от друга, минимизируя возможность близкого контакта гидроксильных и активированных карбоксильных групп для возникновения реакции. Успех этих способов для улучшения стабильности геля был лишь ограниченным. Более того, некоторые из этих способов обусловливают появление других проблем. Например, эффективность EDC значительно уменьшается при высоком pH, поэтому поперечное сшивание ГК при высоком pH сильно снижает сшивающую структурную прочность геля, и, хотя сшивание при очень низкой концентрации ГК должно снижать образование сложноэфирных связей, оно усиливает неэффективное сшивание диаминов, что приводит к получению гелей с слишком большим количеством подвешенных аминогрупп.

[0039] В соответствии с одним из вариантов реализации настоящего изобретения представлены способы составления композиций для получения стабильных гидрогелей на основе ГК с химизмом EDC. Вместо использования линейных низкомолекулярных веществ, имеющих на концах аминогруппы, в качестве сшивателя используют «4-лучевой ПЭГ амин», 3-[3-(3-amino propoxy)-2,2-бис(3-амино-пропоксиметил)-пропокси]-пропиламин или 4 АА (см. ниже).

[0040] В отличие от диаминов, имеющих лишь две аминные функциональности, 4 АА имеет четыре аминные функциональные группы, которые все могут быть использованы в поперечном сшивании. В отличие от диаминов, когда молекула диамина в лучшем случае может сшивать максимум две цепи ГК, одна молекула 4 АА может сшивать максимум 4 цепи ГК. Было обнаружено, что использование 4 АА обладает более высокой сшивающей эффективностью, что приводит к образованию прочных гидрогелей, которые легко стерилизуются влажным паром без опасения структурного повреждения геля.

[0041] В настоящем документе представлены также способы получения ГК гидрогелей, поперечносшитых с HMDA, и способы получения ГК-лизиновых гидрогелей с помощью метилового эфира лизина в качестве сшивателя. Эти гели биосовместимы и могут быть легко выдавлены через шприц и иглу для минимально-инвазивной имплантации.

[0042] В одном аспекте настоящего изобретения представлены композиции кожных наполнителей для уменьшения видимости тонких линий или поверхностных морщин на лице.

[0043] Указанная композиция, как правило, содержит биосовместимый полимер, например полисахарид, такой как гиалуроновая кислота, поперечно-сшитый с диаминным или полиаминным сшивателем. Указанная композиция является практически оптически прозрачной и демонстрирует уменьшенное или отсутствие видимого посинения при введении в участок кожи пациента.

[0044] Полимер может быть выбран из группы полимеров, состоящей из белков, пептидов и полипептидов, полилизина, коллагенов, про-коллагенов, эластинов и ламининов.

[0045] Полимер может быть выбран из группы полимеров, состоящей из синтетических полимеров с гидроксильными, аминными и карбоксильными функциональными группами: поли(виниловый спирт), полиэтиленгликоль, поливиниламин, полиаллиламин, дезацетилированный полиакриламид, полиакриловая кислота и полиметакриловая кислота. Полимер может быть выбран из группы полимеров, состоящей из ветвистых или разветвленных полимеров, включая ветвистые полиолы и ветвистые полиамины. Полимер может быть выбран из группы полимеров, состоящей из твердых тел с гидроксильными, аминными и карбоксильными функциональными группами.

[0046] Полимер может быть полисахаридом, например выбранным из группы полисахаридов, включая крахмал и его производные; декстран и его производные, целлюлозу и ее производные; хитин и хитозан, а также альгинат и его производные.

[0047] В иллюстративном варианте реализации настоящего изобретения полимер представляет собой гликозаминогликан. Композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может дополнительно содержать два или более различных гликозаминогликановых полимеров. При использовании в настоящем документе термин «гликозаминогликан» является синонимом «ГАГ» и «мукополисахарида» и относится к длинным неразветвленным полисахаридам, состоящим из повторяющихся дисахаридных звеньев. Повторяющееся звено состоит из гексозы (шестиатомного сахара) и гексуроновой кислоты, связанной с гексозамином (шестиатомным сахаром, содержащим азот), и ее фармацевтически приемлемых солей. Члены семейства ГАГ могут варьироваться по типу звеньев гексозамина, гексзоы или гексуроновой кислоты, которые они содержат, такие как, например, глюкуроновая кислота, идуроновая кислота, галактоза, галактозамин, глюкозамин), и также могут варьироваться по геометрии гликозидной связи. Любой гликозаминогликановый полимер пригоден в композициях гидрогеля, описанных в настоящем документе, при условии, что указанный гликозаминогликановый полимер улучшает состояние кожи. Неограничивающие примеры гликозаминогликаны включают хондроитина сульфат, дерматана сульфат, кератана сульфат, гиалуронан. Неограничивающие примеры приемлемой соли гликозаминогликанов включают натриевые соли, калиевые соли, магниевые соли, кальциевые соли и их комбинации. Гликозаминогликан и его результирующие полимеры, пригодные в композициях гидрогеля и способах, описанных в настоящем документе, описаны, например, в публикациях Piron and Tholin, Polysaccharide Crosslinking, Hydrogel Preparation, Resulting Polysaccharides(s) and Hydrogel(s), uses Thereof, публикация патента США 2003/0148995; Lebreton, Cross-Linking of Low and High Molecular Weight Polysaccharides Preparation of Injectable Monophase Hydrogels; Lebreton, Viscoelastic Solutions Containing Sodium Hyaluronate and Hydroxypropyl Methyl Cellulose, Preparation and Uses, публикация патента США 2008/0089918; Lebreton, Hyaluronic Acid-Based Gels Including Lidocaine, публикация патента США 2010/0028438; и Polysaccharides and Hydrogels thus Obtained, публикация патента США 2006/0194758; а также Di Napoli, Composition and Method for Intradermal Soft Tissue Augmentation, публикация Международного патента WO 2004/073759, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. ГАГ, применимые в композициях гидрогеля и способах, описанных в настоящем документе, доступны в продаже, такие как, например, кожные наполнители на основе гиалуронана JUVEDERM^®, JUVEDERM^® 30, JUVEDERM^® Ultra, JUVEDERM^® Ultra Plus, JUVEDERM^® Ultra XC и JUVEDERM^® Ultra Plus XC (Allergan Inc, Ирвин, штат Калифорния). В Таблице 1 представлены иллюстративные ГАГ.

[0048] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, содержащая гиалуронановый полимер. При использовании в настоящем документе термин «полимер гиалуроновой кислоты» является синонимом «ГК полимера», «полимера гиалуроновой кислоты» и «гиалуронатного полимера» и относится к анионному не сульфатированному гликозаминогликановому полимеру, содержащему дисахаридные звенья, которые сами содержат D-глюкуроновую кислоту и D-N-ацетилглюкозаминные мономеры, связанные вместе чередующимися β-1,4 и β-1,3 гликозидными связями, а также их фармацевтически приемлемые соли. Гиалуронановые полимеры могут быть выделены из животных и неживотных источников. Полимеры гиалуронана могут варьироваться по размеру от около 5000 до около 20000000 Да. Любой гиалуронановый полимер применим в композициях, описанных в настоящем документе, при условии, что указанный гиалуронан улучшает состояние кожи. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых солей гиалуронана включают гиалуронан натрия, гиалуронан калия, гиалуронан магния, гиалуронан кальция и их комбинации.

[0049] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, содержащая поперечно-сшитый гликозаминогликановый полимер. При использовании в настоящем документе термин «поперечно-сшитый» относится к внутримолекулярным связям, соединяющим отдельным молекулы полимеры или мономерные звенья в более стабильную структуру типа геля. Поэтому поперечно-связанный гликозаминогликановый полимер имеет по меньшей мере одну межмолекулярную связь, соединяющую по меньшей мере одну отдельную полимерную молекулу с другой. Сшивание гликозаминогликановых полимеров обычно приводит к образованию гидрогеля. Такие гидрогели обладают высокой вязкостью и требуют существенных усилий для их выдавливания через тонкую иглу.

[0050] Гликозаминогликановые полимеры, описанные в настоящем документе, могут быть сшиты с помощью диальдегидных и дисульфидных сшивающих агентов, включая, без ограничения, полифункциональные поперечно-сшивающие агенты на основе ПЭГ, дивинилсульфоны, диглицидиловые эфиры и бис-эпоксиды, бискарбодиимид. Неограничивающие примеры гиалуронановые поперечно-сшивающих агентов включают полифункциональные поперечно-сшивающие агенты на основе ПЭГ, такие как тетраглицидиловый эфир пентаэритрита (PETGE), дивинилсульфон (DVS), диглицидиловый эфир 1,4-бутандиола (BDDE), 1,2-бис(2,3-эпоксипропокси)этилен (EGDGE), 1,2,7,8-диэпоксиоктан (DEO), (фениленбис-(этил)-карбодиимид и 1,6-гексаметиленбис(этилкарбодиимид), адипиновый дигидразид (ADH), бис(сульфосукцинимидил)суберат (BS) гексаметилендиамин (HMD А), 1-(2,3-эпоксипропил)-2,3-эпоксициклогексан, лизин, метиловый эфир лизина или их комбинации.

[0051] В других аспектах настоящего изобретения сшивающий агент представляет собой диаминный или полиаминный сшиватель. В другом аспекте сшиватель состоит по меньшей мере из трех и максимально из восьми ПЭГ цепей, исходящих из центральной точки, каждая цепь имеет концевую аминогруппу. Сшиватель может содержать ПЭГ цепи, имеющие по меньшей мере одно этиленгликольное звено и не более чем 55 этиленгликольных звеньев.

[0052] Другие применимые поперечно-сшивающие агенты описаны в публикациях Stroumpoulis and Tezel, Tunably Crosslinked Polysaccharide Compositions, заявка на патент США 12/910466, поданная 22 октября 2010 года, которая включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Неограничивающие примеры способов поперечного сшивания гликозаминогликановых полимеров описаны, например, в публикации, гликозаминогликановые полимеры, применимые в композициях и способах, описанных в настоящем документе, описаны, например, в публикации Piron and Tholin, Polysaccharide Crosslinking, Hydrogel Preparation, Resulting Polysaccharides(s) and Hydrogel(s), uses Thereof, публикация патента США 2003/0148995; Lebreton, Cross-Linking of Low and High Molecular Weight Polysaccharides Preparation of Injectable Monophase Hydrogels; Lebreton, Viscoelastic Solutions Containing Sodium Hyaluronate and Hydroxypropyl Methyl Cellulose, Preparation and Uses, публикация патента США 2008/0089918; Lebreton, Hyaluronic Acid-Based Gels Including Lidocaine, публикация патента США 2010/0028438; и Polysaccharides and Hydrogels thus Obtained, публикация патента США 2006/0194758; а также Di Napoli, Composition and Method for Intradermal Soft Tissue Augmentation, публикация Международного патента WO 2004/073759, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.

[0053] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, содержащая поперечно-сшитый гликозаминогликановый полимер, имеющий определенную степень сшивания. При использовании в настоящем документе термин «степень поперечного сшивания» относится к проценту мономерных звеньев гликозаминогликанового полимера, таких как, например, дисахаридные мономерные звенья гиалуронана, которые связаны с поперечно-связывающим агентом. Степень сшивания выражают как процентное массовое отношение сшивающего агента к гликозаминогликану. Степень сшивания в некоторых преимущественных вариантах реализации настоящего изобретения составляет от около 3 до около 12%, например, от около 5 до около 10%. Сшивающий агент содержится в композиции в концентрации от около 1 до около 100 мкМ, например от около 10 до около 50 мкМ.

[0054] В одном из вариантов реализации композиция гидрогеля содержит поперечно-связанный гликозаминогликановый полимер, например сшитую гиалуроновую кислоту, при этом поперечно-сшитый гликозаминогликановый полимер содержится в композиции в концентрации, например, от около 10 до около 40 мг/мл, например от около 18 до около 30 мг/мл. В некоторых вариантах реализации указанные композиции имеют общую концентрацию гиалуроновой кислоты около 22 мг/мл, около 23 мг/мл, около 24 мг/мл или около 25 мг/мл.

[0055] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, содержащая гиалуронановые полимеры с низкой молекулярной массой, гиалуронановые полимеры с высокой молекулярной массой или гиалуронановые полимеры с низкой и высокой молекулярной массой.

[0056] При использовании в настоящем документе термин «высокая молекулярная масса» в отношении «гиалуронана» относится к гиалуронановым полимерам, имеющим среднюю молекулярную массу 100000 Да или более. Неограничивающие примеры гиалуронановых полимеров с высокой молекулярной массой включают гиалуронановые полимеры с массой около 1500000 Да, около 2000000 Да, около 2500000 Да, около 3000000 Да, около 3500500 Да, около 4000000 Да, около 4500000 Да и около 500000 Да. При использовании в настоящем документе термин «низкую молекулярную массу» в отношении «гиалуронана» относится к гиалуронановым полимерам, имеющим среднюю молекулярную массу менее 1000000 Да. Неограничивающие примеры гиалуронановых полимеров с низкой молекулярной массой включают гиалуроновые полимеры с массой около 200000 Да, около 300000 Да, около 400000 Да, около 500000 Да, около 600000 Да, около 700000 Да, около 800000 Да и около 900000 Да.

[0057] В одном из вариантов реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры с низкой молекулярной массой. В аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, например, около 100000 Да, около 200000 Да, около 300000 Да, около 400000 Да, около 500000 Да, около 600000 Да, около 700000 Да, около 800000 Да или около 900000 Да. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, например, не более 100000 Да, не более 200000 Да, не более 300000 Да, не более 400000 Да, не более 500000 Да, не более 600000 Да, не более 700000 Да, не более 800000 Да, не более 900000 Да или не более 950000 Да. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, например, от около 100000 до около 500000 Да, от около 200000 до около 500000 Да, от около 300000 до около 500000 Да, от около 400000 до около 500000 Да, от около 500000 до около 950000 Да, от около 600 до около 950000 Да, от около 700000 до около 950000 Да, от около 800000 до около 950000 Да, от около 300000 до около 600000 Да, от около 300000 до около 70000 Да, от около 300000 до около 800000 Да или от около 400000 до около 700000 Да.

[0058] В другом варианте реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры с высокой молекулярной массой. В аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, например, около 1000000 Да, около 1500000 Да, около 2000000 Да, около 2500000 Да, около 3000000 Да, около 3500000 Да, около 4000000 Да, около 4500000 Да или около 50000000 Да. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалурнонановые полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, например, по меньшей мере 1000000 Да, по меньшей мере 150000 Да, по меньшей мере 200000 Да, по меньшей мере 2500000 Да, по меньшей мере 3000000 Да, по меньшей мере 350000 Да, по меньшей мере 4000000 Да, по меньшей мере 450000 Да или по меньшей мере 5000000. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, имеющие среднюю молекулярную массу, например, от около 1000000 до около 500000 Да, от около 1500000 до около 5000000 Да, от около 2000000 до около 5000000 Да, от около 2500000 до около 5000000 Да, от около 2000000 до около 3000000 Да, от около 2500000 до около 3000000 Да.

[0059] В другом варианте реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, при этом указанные поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры содержат комбинацию гиалуронановых полимеров с высокой молекулярной массой и гиалуронановых полимеров с низкой молекулярной массой, в различных соотношениях. В аспектах этого вариантах реализации композиция содержит поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры, в которых указанные поперечно-сшитые гиалуронановые полимеры содержат комбинацию гиалуронановых полимеров с высокой молекулярной массой и гиалуронановых полимеров с низкой молекулярной массой в соотношении около 20:1, около 15:1, около 10:1, около 5:1, около 1:1, около 1:5 около 1:10, около 1:15 или около 1:20.

[0060] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, содержащая несшитый гликозаминогликановый полимер. При использовании в настоящем документе термин «несшитый» относится к отсутствию межмолекулярных связей, соединяющих отдельные гликозаминогликановые полимерные молекулы или мономерные цепи. Поэтому несшитый гликозаминогликановый полимер не связан с каким-либо другим гликозаминогликановым полимером межмолекулярной связью. В аспектах этого варианта реализации композиция содержит несшитый полимер хондрдоитина сульфата, несшитый полимер дерматана сульфата, несшитый полимер кератана сульфата, несшитый полимер гепарана, несшитый полимер гепарана сульфата или несшитый полимер гиалуронана. Несшитые гликозаминогликановые полимеры являются водорастворимыми и зачастую смешиваются с композицией гидрогеля на основе гликозаминогликанового полимера в качестве смазывающего вещества для облегчения выдавливания композиции через тонкую иглу.

[0061] В одном из вариантов реализации композиция содержит несшитый гликозаминогликановый полимер, при этом указанный несшитый гликозаминогликановый полимер содержится в концентрации, например, около 2 мг/г, около 3 мг/г, около 4 мг/г, около 5 мг/г, около 6 мг/г, около 7 мг/г, около 8 мг/г, около 9 мг/г, около 10 мг/г, около 11 мг/г, около 12 мг/г, около 13 мг/г, около 13,5 мг/г, около 14 мг/г, около 15 мг/г, около 16 мг/г, около 17 мг/г, около 18 мг/г, около 19 мг/г, около 20 мг/г, около 40 мг/г или около 60 мг/г. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит несшитый гликозаминогликан, где указанный несшитый гликозаминогликан содержится в концентрации, например, по меньшей мере 1 мг/г, по меньшей мере 2 мг/г, по меньшей мере 3 мг/г, по меньшей мере 4 мг/г, по меньшей мере 5 мг/г, по меньшей мере 10 мг/г, по меньшей мере 15 мг/г, по меньшей мере 20 мг/г, по меньшей мере 25 мг/г, по меньшей мере 35 мг/г или по меньшей мере 40 мг/г. В других аспектах этого вариантах реализации композиция содержит несшитый гликозаминогликан, при этом указанный гликозаминогликан содержится в концентрации, например, не более 1 мг/г, не более 2 мг/кг, не более 3 мг/кг, не более 4 мг/г, не более 10 мг/г, не более 15 мг/г, не более 20 мг/г или не более 25 мг/г. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит несшитый гликозаминогликан, при этом указанный несшитый гликозаминогликан содержится в концентрации, например, от около 1 до около 60 мг/г, от около 10 до около 40 мг/г, от около 7,5 до около 19,5 мг/г, от около 8,5 до около 18,5 мг/г, от около 9,5 до около 17,5 мг/г, от около 10,5 до около 16,5 мг/г, от около 11,5 до около 15,5 мг/г или от около 12,5 до около 14,5 мг/г.

[0062] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, содержащая соотношение поперечно-сшитого гликозаминогликанового полимера и несшитого гликозаминогликанового полимера. Это соотношение поперечно-сшитого и несшитого гликозаминогликанового полимера также известно как соотношение геля: жидкости. Для получения композиций, описанных в настоящем документе, применимо любое соотношение геля : жидкости, при условии, что такое соотношение обеспечивает получение композиции, описанной в настоящем документе, которая улучшает состояние кожи, как описано в настоящем документе. Неограничивающие примеры соотношений гель: жидкость в композициях настоящего изобретения включают 100:0, 98:2, 90:10, 75:25, 70:30, 60:40, 50:50, 40:60, 30:70, 25:75, 10:90; 2:98 и 0:100.

[0063] В аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитый гликозаминогликановый полимер и несшитый гликозаминогликановый полимер, где отношение гель: жидкость составляет, например, около 0:100, около 1:99, около 2:98, около 3:97, около 4:96, около 5:95, около 6:94, около 7:93, около 8:92, около 9:91 или около 10:90. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитый гликозаминогликановый полимер и несшитый гликозаминогликановый полимер, где отношение гель : жидкость составляет, например, не более 1:99, не более 2:98, не более 3:97, не более 4:96, не более 5:95, не более 6:94, не более 7:93, не более 8:92, не более 9:91 или не более 10:90. В других аспектах этого варианта реализации композиция содержит поперечно-сшитый гликозаминогликановый полимер и несшитый гликозаминогликановый полимер, где отношение гель : жидкость составляет, например, от около 0:100 до около 3:97, от около 0:100 до около 5:95 или от около 1:100 до около 10:90.

[0064] Композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может дополнительно содержать другой агент или комбинацию агентов, которые обеспечивают благотворный эффект при введении композиции индивидууму. Такие полезные агенты включают, без ограничения, антиоксидант, противозудный агент, антицеллюлитный агент, агент против образования рубцов, противовоспалительный агент, обезболивающий агент, агент против раздражения, сосудосуживающее средство, сосудорасширяющее средство, кровоостанавливающий агент типа гемостатического агента или антифибринолитического агента, отшелушивающий агент, натягивающий агент, противоугревой агент, агент пигментации, агент антипигментации или увлажняющий агент.

[0065] Для целей настоящего описания, если не указано иное, «%» в композиции обозначает процентное отношение массы к массе (то есть масс./масс.).

[0066] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, которая может содержать связывающий агент. Связывающий агент может быть водорастворимым связывающим агентом, например водорастворимым карбодиимидом. В одном из вариантов реализации связывающий агент представляет собой 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида гидрохлорид (EDC). Концентрация связывающего агента может составлять от около 10 до около 50 мкМ.

[0067] В аспектах настоящего описания показано, помимо прочего, что связывающий агент может быть использован вместе с водорастворимым активирующим агентом. Активирующий агент может быть N-гидроксисукцинимидом (NHS) или N-гидроксисульфосукцинимидом (сульфоNHS). Активирующий агент содержится в концентрации от около 5 до около 25 мкМ.

[0068] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, которая может необязательно содержать обезболивающий агент. Обезболивающий агент предпочтительно представляет собой местный обезболивающий агент, то есть обезболивающий агент, который вызывает обратимую местную анестезию и снижение ноцицепции, такой как аминоамидные местные анестетики и аминоэфирные местные анестетики. Количество обезболивающего агента, входящего в композицию, описанную в настоящем документе, представляет собой количество, эффективное для устранения боли, испытываемой индивидуумом при введении композиции. Следовательно, количество обезболивающего агента, входящего в композицию, описанную в настоящем описании, составляет от около 0,1 до около 5% по массе от общей массы композиции. Неограничивающие примеры обезболивающих агентов включают амбукаин, амоланон, амилокамин, беноксинат, бензокаин, бетоксикаин, бифенамин, бупивакаин, бутакаин, бутамбен, бутаниликаин, бутетамин, бутоксикаин, картикаин, хлорпрокаин, кокаэтилен, кокаин, циклометикаин, дибукаин, диметизохин, диметокаимн, диперодон, дициклонин, экгонидин, экгонин, этилхлорид, этидокаин, бета-эукаин, эупроцин, феналкомин, формокаин, гексилкаин, гидрокситетракаин, изобутил п-аминобензоат, бейцинокаина мезилат, левоксадрол, лидокаин, мепивакаин, меприлкаин, метабутоксикаин, метилхлорид, миртекаин, наепаин, октакаин, ортокаин, оксетазаин, паретоксикаин, фенакаин, фенол, пиперокаин, пиридокаин, полидоканол, прамоксин, прилокаин, прокаин, пропанокаин, пропаракаин, пропипокаин, пропоксикаин, псевдококаин, пиррокаин, ропивакаин, салициловый спирт, тетракаин, толикаин, тримекаин, золамин, их комбинации и их соли. Неограничивающие примеры аминоэфирных местных анестетиков включают прокаин, хлорпрокаин, кокаин, циклометикаин, циметокаин (ларокаин), пропоксикаин, прокаин (новокаин), пропаракаин, тетракаин (аметокаин). Неограничивающие примеры аминоамидных местных анестетиков включают артикаин, бупивакаин, цинхокаин (дибукаин), этидокаин, левобупивакаин, лидокаин (лигнокаин), мепивакаин, пиперокаин, прилокаин, ропивакаин и тримекаин. Композиция, описанная в настоящем документе, может содержать единственный обезболивающий агент или множество обезболивающих агентов. Неограничивающий пример комбинации местных анестетиков представляет собой лидокаин/прилокаин (EMLA).

[0069] Так, в одном из вариантов реализации композиция, описанная в настоящем документе, содержит обезболивающий агент и его соль. В аспектах этого варианта реализации композиция, описанная в настоящем документе, содержит аминоамидный местный анестетик и его соли или аминоэфирный местный анестетик и его соли. В других аспектах этого варианта реализации композиция, описанная в настоящем документе, содержит прокаин, хлорпрокаин, кокаин, циклометикаин, циметокаин, пропоксикаин, прокаин, пропаракаин, тетракаин или их соли, или любую их комбинации. В других аспектах этого варианта реализации композиция, описанная в настоящем документе, содержит артикаин, бупивакаин, цинхокаин, этидокаин, левобупивакаин, лидокаин, мепивакаин, пиперокаин, прилокаин, ропивакаин, тримекаин или их соли, или любую их комбинацию. В других аспектах этого варианта реализации композиция, описанная в настоящем документе, содержит комбинацию лидокамина/прилокаина.

[0070] В других аспектах этого варианта реализации композиция, описанная в настоящем документ, содержит обезболивающий агент в количестве, например, около 0,1%, около 0,2%, около 0,3%, около 0,4%, около 0,5%, около 0,6%, около 0,7%, около 0,8%, около 0,9%, около 1,0%, около 2,0%, около 3,0%, около 4,0%, около 5,0%, около 6,0%, около 7,0%, около 8,0%, около 9,0% или около 10% по массе от общей массы композиции. В других аспектах композиция, описанная в настоящем документе, содержит обезболивающий агент в количестве, например, по меньшей мере 0,1%, по меньшей мере 0,2%, по меньшей мере 0,3%, по меньшей мере 0,4%, по меньшей мере 0,5%, по меньшей мере 0,6%, по меньшей мере 0,7%, по меньшей мере 0,8%, по меньшей мере 0,9%, по меньшей мере 1,0%, по меньшей мере 2,0%, по меньшей мере 3,0%, по меньшей мере 4,0%, по меньшей мере 5,0%, по меньшей мере 6,0%, по меньшей мере 7,0%, по меньшей мере 8,0%, по меньшей мере 9,0% или по меньшей мере 10% по массе от общей массы композиции. В других аспектах композиция, описанная в настоящем документе, содержит обезболивающий агент в количестве, например, не более 0,1%, не более 0,2%, не более 0,3%, не более 0,4%, не более 0,5%, не более 0,6%, не более 0,7%, не более 0,8%, не более 0,9%, не более 1,0%, не более 2,0%, не более 3,0%, не более 4,0%, не более 5,0%, не более 6,0%, не более 7,0%, не более 8,0%, не более 9,0% или не более 10% по массе от общей массы композиции. В дополнительных аспектах композиция, описанная в настоящем документе, содержит обезболивающий агент в количестве, например, от около 0,1 до около 0,5%, от около 0,1 до около 1,0%, от около 0,1 до около 2,0%, от около 0,1 до около 3,0%, от около 0,1 до около 4,0%, от около 0,1 до около 5,0%, от около 0,2 до около 0,9%, от около 0,2 до около 1,0%, от около 0,2 до около 2,0%, от около 0,5 до около 1,0% или от около 0,5 до около 2,0% по массе от общей массы композиции.

[0071] В одном аспекте настоящего изобретения представлен инъецируемый кожный наполнитель, содержащий полимер, например гликозаминогликановый полимер, например полимер гиалуроновой кислоты, например гиалуроновую кислоту, по меньшей мере часть которой является поперечно-сшитой, и добавку или полезный агент, смешанный с указанным полимером.

[0072] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, демонстрирующая определенный модуль упругости или динамический модуль упругости. Композиции, описанные в настоящем документе, являются вязкоэластичными, поскольку указанные композиции имеют упругий компонент (твердообразный, такой как, например, поперечно-сшитые гликозаминогликановые полимеры) и вязкий компонент (жидкоподобный, такой как, например, несшитые гликозаминогликановые полимеры или фаза носителя) при наложении силы (давления, деформации).

[0073] Модуль упругости или модуль эластичности относится к способности материала гидрогеля противостоять деформации или, напротив, склонность объекта к временной деформации при применении в отношении него силы. Модуль упругости характеризуется прочностью композиции и известен также как динамический модуль упругости, поскольку он описывает накопление энергии в результате движения композиции. Модуль упругости описывает взаимодействие между упругостью и силой (G'=давление/деформация) и, следовательно, дает количественную меру жесткости или мягкости композиции. Модуль упругости объекта определяют как угол наклона его кривой давления-деформации в области упругой деформации: λ - давление/деформация, где λ представляет собой модуль упругости в Паскалях; давление представляет собой силу, вызывающую деформацию, деленную на площадь, в отношении которой приложена эта сила; и деформация представляет собой отношение изменения, вызванного этим давлением, к исходному состоянию объекта. Хотя в зависимости от скорости, с которой прилагается сила, более прочная композиция будет иметь более высокий модуль упругости и для деформации материала на заданную величину потребуется более высокая сила, например, при инъекции. Определение способов измерения давления, включая направления измерения, позволяет определить модуль упругости многих типов. Три основных модуля упругости представляют собой модуль упругости при растяжении, модуль упругости при сдвиге и модуль объемной упругости.

[0074] В аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля демонстрирует модуль упругости, например, по меньшей мере от около 20 до около 3000 Па. Например, композиция демонстрирует модуль упругости в диапазоне по меньшей мере от около 50 до около 2500 Па, по меньшей мере от около 100 до около 2000 Па, от около 500 до коло 1000 Па. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля демонстрирует модуль упругости, например, по меньшей мере около 20 Па, по меньшей мере около 25 Па, по меньшей мере около 50 Па, по меньшей мере около 75 Па, по меньшей мере около 100 Па, по меньшей мере около 125 Па, по меньшей мере около 150 Па, по меньшей мере около 175 Па, по меньшей мере около 200 Па, по меньшей мере около 250 Па, по меньшей мере около 300 Па, по меньшей мере около 35 Па, по меньшей мере около 400 Па, по меньшей мере около 450 Па, по меньшей мере около 500 Па, по меньшей мере около 550 Па, по меньшей мере около 600 Па, по меньшей мере около 650 Па, по меньшей мере около 700 Па, по меньшей мере около 750 Па, по меньшей мере около 800 Па, по меньшей мере около 850 Па, по меньшей мере около 900 Па, по меньшей мере около 950 Па, по меньшей мере около 1000 Па, по меньшей мере около 1200 Па, по меньшей мере около 1300 Па, по меньшей мере около 1400 Па, по меньшей мере около 1500 Па, по меньшей мере около 1600 Па, по меньшей мере около 1700 Па, по меньшей мере около 1800 Па, по меньшей мере около 1900 Па, по меньшей мере около 2000 Па, по меньшей мере около 2100 Па, по меньшей мере около 2200 Па, по меньшей мере около 2300 Па, по меньшей мере около 2400 Па или по меньшей мере около 2500 Па. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля демонстрирует модуль упругости, например, по меньшей мере от около 20 не более чем до около 3000 Па.

[0075] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, обладающая прозрачностью и/или полупрозрачностью. Оптическая прозрачность представляет собой физическое свойство возможности прохождения видимого света через материал, тогда как полупрозрачность (называемая также просвечиванием или частичной прозрачностью) обеспечивает лишь диффузное прохождение света. Обратное свойство представляет собой мутность. Прозрачные материалы пропускают свет, тогда как через полупрозрачные материалы нельзя получить четкое изображение. Гидрогели, описанные в настоящем документе, могут быть оптически прозрачными или по меньшей мере полупрозрачными.

[0076] В одном из вариантов реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, является оптически полупрозрачной. В аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля диффузно пропускает, например, около 75% света, около 80% света, около 85% света, около 90% света, около 95% света или около 100% света. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля диффузно пропускает, например, по меньшей мере 75% света, по меньшей мере 89% света, по меньшей мере 85% сета, по меньшей мере 90% света или по меньшей мере 95% света. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля диффузно пропускает, например, от около 75 до около 100% света, от около 80 до около 100% света, от около 85 до около 100% света, от около 90 до около 100% света или от около 95 до около 100% света. В одном из вариантов реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, является оптически прозрачной и пропускает 100% видимого света.

[0077] Композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть дополнительно переработана распылением гидрогеля на частицы и необязательным смешением с фазой носителя, такой как, например, вода или солевой раствор, с образованием инъецируемой или локальной субстанции типа раствора, масла, лосьона, геля, мази, крема, взвеси, бальзама или пасты. Поэтому описанные композиции гидрогеля могут быть однофазными или многофазными композициями. Гидрогель может быть измельчен до размера частиц диаметром от около 10 до около 1000 мкм, такого как от около 15 до около 30 мкм, от около 50 до около 75 мкм, от около 100 до около 150 мкм, от около 200 до около 300 мкм, от около 450 до около 550 мкм, от около 600 до около 700 мкм, от около 750 до около 850 мкм или от около 900 до около 1000 мкм.

[0078] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция, описанная в настоящем документе, для инъекций. При использовании в настоящем документе термин «инъецируемый» относится к материалу, обладающему свойствами, необходимыми для введения композиции в участок кожи индивидуума с помощью инъецирующего устройства с тонкой иглой. При использовании в настоящем документе термин «тонкая игла» относится к игле, которая имеет калибр 27 или менее. Возможность инъецирования композиции, описанной в настоящем документе, может быть достигнута измельчением частиц гидрогеля, как описано выше.

[0079] В аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, является инъецируемой через тонкую иглу. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, является инъецируемой через иглу, например, около 27 калибра, около 30 калибра или около 32 калибра. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, является инъецируемой через иглу, например, 22 калибра или менее, 27 калибра или менее, 30 калибра или менее или 32 калибра или менее. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, является инъецируемой через иглу, например, от около 22 калибра до около 35 калибра, от 22 калибра до около 34 калибра, от 22 калибра до около 33 калибра, от 22 калибра до около 32 калибра, от 22 калибра до около 27 калибра или от около 27 калибра до около 32 калибра.

[0080] В аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть инъецирована с усилием выдавливания около 150 Н, около 100 Н, около 80 Н, около 60 Н, около 55 Н, около 50 Н, около 45 Н, около 40 Н, около 35 Н, около 30 Н, около 25 Н, около 20 Н или около 15 Н при скорости 100 мм/мин. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть инъецирована через иглу 27 калибра с усилием выдавливания около 150 Н или менее, около 100 Н или менее, около 80 Н или менее, около 60 Н или менее, около 55 Н или менее, около 50 Н или менее, около 45 Н или менее, около 40 Н или менее, около 35 Н или менее, около 30 Н или менее, около 25 Н или менее, около 20 Н или менее, около 15 Н или менее, около 10 или менее или около 5 Н или менее. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть инъецирована через иглу 30 калибра с усилием выдавливания около 150 Н или менее, около 100 Н или менее, около 80 Н или менее, около 60 Н или менее, около 55 Н или менее, около 50 Н или менее, около 45 Н или менее, около 40 Н или менее, около 35 Н или менее, около 30 Н или менее, около 25 Н или менее, около 20 Н или менее, около 15 Н или менее, около 10 Н или менее или около 5 Н или менее. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть инъецирована через иглу 32 калибра с усилием выдавливания около 150 Н или менее, около 100 Н или менее, около 80 Н или менее, около 60 Н или менее, около 55 Н или менее, около 50 Н или менее, около 45 Н или менее, около 40 Н или менее, около 35 Н или менее, около 30 Н или менее, около 25 Н или менее, около 20 Н или менее, около 15 Н или менее, около 10 Н или менее или около 5 Н или менее.

[0081] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, демонстрирующая когезивность. Когезивность, упоминаемая также как когезионное, когезивное притяжение, когезивная сила или сжимающая сила, представляет собой физическое свойство материала, обусловленное межмолекулярным притяжением между схожими молекулами и материалом, который действует для объединения этих молекул. Когезивность выражают в единицах грамм-силы (гс). На когезивность влияют, среди других факторов, отношение молекулярной массы исходного свободного гликозаминогликанового полимера, степень поперечного связывания гликозаминогликановых полимеров, количество остаточных свободных гликозаминогликановых полимеров после поперечного сшивания и pH композиции гидрогеля. Композиция должна быть достаточно когезивной, чтобы оставаться локализованно в зоне введения. Кроме того, в некоторых применениях достаточная когезивность важна для сохранения композицией ее формы и, следовательно, функциональности в случае периодической механической нагрузки. Следовательно, в одном варианте реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, демонстрирует когезивность, идентичную воде. В другом варианте реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, демонстрирует когезивность, достаточную для сохранения локализованно в зоне введения. В другом варианте реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, демонстрирует достаточную когезивность для сохранения своей формы. В дополнительном варианте реализации композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, демонстрирует достаточную когезивность для сохранения своей формы и функциональности.

[0082] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, которая демонстрирует значительную стабильность. При использовании в настоящем документе термин «стабильность» или «стабильная», при использовании в отношении композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, относится к композиции, которая не склонна к разложению, разрушению или расщеплению до какой-либо значимой или существенной степени при хранении до введения индивидууму. При использовании в настоящем документе термин «значительная тепловая стабильность», «значительно теплостойкая», «стабильная для автоклава» или «стабильная для паровой стерилизации» относится к композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, которая является значительно стабильной при воздействии тепловой обработки, как описано в настоящем документе.

[0083] Стабильность композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может быть определена воздействием на композицию гидрогеля тепловой обработки, такой как, например, паровая стерилизация при нормальном давлении или под давлением (например, автоклавирование). Тепловая обработка может быть осуществлена при температуре по меньшей мере около 100°C в течение от около одной минуты до около 10 минут. Значительная стабильность композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может быть оценена 1) определением изменения усилия выдавливания (ΔF) композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, после стерилизации, при этом изменение усилия выдавливания менее 2 Н является показателем значительной стабильности композиции гидрогеля, измеренной по уравнению (усилие выдавливания композиции гидрогеля с определенными добавками) минус (усилие выдавливания композиции гидрогеля без добавления добавок); и/или 2) определением изменения реологических свойств описанной композиции гидрогеля после стерилизации, где изменение tan δ при 1 Гц менее 0,1 является показателем значительной стабильности композиции гидрогеля, измеренной по уравнению (tan δ при 1 Гц композиции геля с добавками) минус (tan δ при 1 Гц композиции геля без добавок). Следовательно, значительно стабильная композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, сохраняет одну или более из следующих характеристик после стерилизации: гомогенность, усилие выдавливания, когезивность, концентрация гиалуронана, концентрация агента(-ов), осмолярность, pH или другие реологические характеристики, заданные для гидрогеля до тепловой обработки. В одном из вариантов реализации композиции является значительно стабильной после стерилизации с влажным паром при температурах от около 121 до около 124°C или выше в течение от около 3 минут до около 15 минут или более.

[0084] В одном из вариантов реализации композицию гидрогеля, содержащую гликозаминогликановый полимер, перерабатывают с помощью тепловой обработки, которая сохраняет заданные свойства гидрогеля, описанные в настоящем документе. В аспектах этого варианта реализации композицию гидрогеля, содержащую гликозаминогликановый полимер и по меньшей мере один агент, описанный в настоящем документе, перерабатывают с помощью тепловой обработки, например, около 100°C, около 105°C, около 110°C, около 115°C, около 120°C, около 125°C или около 130°C. В других аспектах этого варианта реализации композицию гидрогеля, содержащую гликозаминогликановый полимер и по меньшей мере один агент, описанный в настоящем документе, перерабатывают с помощью тепловой обработки, например, по меньшей мере 100°C, по меньшей мере 105°C, по меньшей мере 110°C, по меньшей мере 115°C, по меньшей мере 120°C, по меньшей мере 125 или по меньшей мере 130°C. В других аспектах этого варианта реализации композицию гидрогеля, содержащую гликозаминогликановый полимер и по меньшей мере один агент, описанный в настоящем документе, перерабатывают с помощью тепловой обработки, например, от около 100 до около 120°C, от около 100 до около 125°C, от около 100 до около 130°C, от около 100 до около 135°C, от около 110 до около 120°C, от около 110 до около 125°C, от около 110 до около 130°C, от около 110 до около 135°C, от около 120 до около 125°C, от около 120 до около 130°C, от около 120 до около 135°C, от около 125 до около 130°C или от около 125 до около 135°C.

[0085] Долговременная стабильность композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может быть определена воздействием на композицию гидрогеля тепловой обработки, такой как, например, хранение при температуре около 45°C в течение около 60 дней. Долговременная стабильность композиции гидрогеля композиции, описанной в настоящем документе, может быть оценена 1) сравнением прозрачности и цвета композиции гидрогеля после обработки нагреванием до 45°C с прозрачной и бесцветной композицией, являющейся показательной и значительно стабильной композицией гидрогеля; 2) определением изменения усилия выдавливания (ΔF) композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, после обработки нагреванием до 45°C, при этом изменение усилия выдавливания менее 2 Н является показателем значительной стабильности композиции гидрогеля, измеренной по уравнению (усилие выдавливания композиции гидрогеля с определенным добавками до обработки нагреванием до 45°C) минус (усилие выдавливания композиции гидрогеля с определенными добавками после обработки нагреванием до 45°C); и/или 3) определением изменения реологических свойств композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, после стерилизации, при этом изменение tan δ при 1 Гц менее 0,1 является показателем значительно стабильной композиции гидрогеля, измеренной по уравнению (tan δ при 1 Гц композиции гидрогеля с определенными добавками до обработки нагреванием до 45°C) минус (tan δ при 1 Гц композиции геля с определенными частицами после обработки нагреванием до 45°C). Следовательно, долговременную стабильность композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, оценивают по сохранению одной или более из следующих характеристик после обработки нагреванием до 45°C: прозрачность (прозрачность и полупрозрачность), гомогенность и когезивность.

[0086] В аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля является значительно стабильной при комнатной температуре, например, в течение около 3 месяцев, около 6 месяцев, около 9 месяцев, около 12 месяцев, около 15 месяцев, около 18 месяцев, около 21 месяца, около 24 месяцев, около 27 месяцев, около 30 месяцев, около 33 месяцев или около 36 месяцев. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля является значительно стабильной при комнатной температуре, например, в течение по меньшей мере 3 месяцев, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 15 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев, по меньшей мере 21 месяца, по меньшей мере 24 месяцев, по меньшей мере 24 месяцев, по меньшей мере 27 месяцев, по меньшей мере 30 месяцев, по меньшей мере 33 месяцев или по меньшей мере 36 месяцев. В других аспектах этого варианта реализации композиция гидрогеля является значительно стабильной при комнатной температуре в течение, например, от около 3 до около 12 месяцев, от около 3 до около 18 месяцев, от около 3 до около 24 месяцев, от около 3 до около 30 месяцев, от около 3 до около 36 месяцев, от около 6 до около 12 месяцев, от около 6 до около 18 месяцев, от около 6 до около 24 месяцев, от около 6 до около 30 месяцев, от около 6 до около 36 месяцев, от около 9 до около 12 месяцев, от около 9 до около 18 месяцев, от около 9 месяцев до около 24 месяцев, от около 9 месяцев до около 30 месяцев, от около 9 месяцев до около 36 месяцев, от около 12 до около 18 месяцев, от около 12 до около 24 месяцев, от около 12 до около 30 месяцев, от около 12 до около 36 месяцев, от около 18 до около 24 месяцев, от около 18 до около 30 месяцев или от около 18 до около 36 месяцев.

[0087] Композиции настоящего изобретения могут необязательно содержать, без ограничения, другие фармацевтически приемлемые компоненты, включая, без ограничения, буферы, консерванты, регуляторы тоничности, соли, антиоксиданты, агенты для регуляции осмоляльности, эмульгирующие агенты, смачивающие агенты и тому подобные.

[0088] Фармацевтически приемлемый буфер представляет собой буфер, который может быть использован для получения композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при условии, что полученный препарат является фармацевтически приемлемым. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых буферов включают ацетатные буферы, боратные буферы, цитратные буферы, нейтральные буферные солевые растворы, фосфатные буферы и фосфатно-солевые буферные растворы. При составлении фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, может быть использована любая концентрация фармацевтически приемлемого буфера, при условии, что терапевтически эффективное количество активного агента восстанавливается с помощью этой эффективной концентрации буфера. Неограничивающие примеры концентраций физиологически приемлемых буферов, находятся в диапазоне от около 0,1 до около 900 мМ. pH фармацевтически приемлемых буферов может быть отрегулирована, при условии, что полученный препарат является фармацевтически приемлемым. Следует понимать, что при необходимости могут быть использованы кислоты или основания для регуляции pH фармацевтической композиции. При составлении фармацевтической композиции может быть использован любой буферный уровень pH при условии, что с помощью такого эффективного уровня pH восстанавливается терапевтически эффективное количество активного ингредиента матриксного полимера. Неограничивающие примеры физиологически приемлемого pH находятся в диапазоне от около pH 5,0 до около 8,5. Например, pH композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может составлять от около 5,0 до около 8,0 или от около 6,5 до около 7,5, от около 7,0 до около 7,4 или от около 7,1 до около 7,3.

[0089] Фармацевтически приемлемые консерванты включают, без ограничения, метабисульфит натрия, тиосульфат натрия, ацетилцистеин, бутилированный гидроксианизол и бутилированный гидрокситолуол. Фармацевтически приемлемые консерванты включают, без ограничения, хлорид бензалкония, хлорбутанол, тимеросал, фенилртути ацетат, фенилртути нитрат, стабилизированную композицию оксидов хлора, такую как, например, PURITE^® (Allergan, Inc., Ирвин, штат Калифорния), и комплексообразователи, такие как, например, DTPA или DTPA-бисамид, кальция DTPA и CaNaDTPA-бисамид.

[0090] Фармацевтически приемлемые регуляторы тоничности, пригодные в композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, включают, без ограничения, соли, такие как, например, хлорид натрия и хлорид калия; и глицерин. Композиция может быть представлена в виде соли и может быть образована со многими кислотами, включая, но не ограничиваясь этим, хлороводородную, серную, уксусную, молочную, винную, яблочную, янтарную и т.д. Соли обычно более растворимы в водных или других протонных растворителях, чем соответствующие формы свободного основания. Понятно, что эти и другие вещества, известные в области фармакологии, могут быть включены в фармацевтическую композицию, описанную в настоящем документе. Другие неограничивающие примеры фармакологически приемлемых компонентов представлены, например, в публикациях Ansel, supra, (1999); Gennaro, supra, (2000); Hardman, supra, (2001); и Rowe, supra, (2003), каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.

[0091] В аспектах настоящего описания представлен, помимо прочего, способ лечения состояния мягкой ткани индивидуума путем введения композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе. При использовании в настоящем документе термин «лечение» относится к уменьшению или устранению у индивидуума косметического или клинического симптома состояния мягкой ткани, характеризующегося несовершенством, дефектом, болезнью и/или расстройством мягкой ткани; или к отсрочке или предотвращению возникновения у индивидуума косметического или клинического симптома состояния, характеризующегося несовершенством, дефектом, заболеванием и/или расстройство мягкой ткани. Например, термин «лечение» может обозначать уменьшение симптома состояния, характеризующегося дефектом, заболеванием и/или расстройством мягкой ткани, например, по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 90% или по меньшей мере на 100%. Эффективность композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при лечении состояния, характеризующегося дефектом, заболеванием и/или расстройством мягкой ткани, может быть определена наблюдением одного или более косметических, клинических симптомов и/или физиологических индикаторов, связанных с указанным состоянием. На улучшение дефекта, заболевания и/или расстройства мягкой ткани также может быть указывать снижение необходимости в сопутствующем лечении. Специалистам в данной области известны соответствующие симптомы или показатели, связанные с определенным дефектом, заболеванием и/или расстройством мягкой ткани, и они могут определить, нуждается ли индивидуум в лечении соединением или композицией, описанной в настоящем документе.

[0092] Композицию гидрогеля в соответствии с настоящим изобретением вводят индивидууму. Индивидуум, как правило, представляет собой человека любого возраста, пола или расы. Как правило, любой индивидуум, являющийся кандидатом для стандартной процедуры лечения определенного состояния мягкой ткани, является также кандидатом для способа, описанного в настоящем документе. Хотя субъект, испытывающий признаки старения кожи, является взрослым, субъекты, испытывающие преждевременное старение или другие состояния кожи, пригодные для лечения (например, шрам), также могут проходить лечение с композицией гидрогеля, описанной в настоящем документе. Кроме того, описанные в настоящем документе композиции гидрогеля и способы могут быть использованы в отношении индивидуумов, нуждающихся в небольшом/среднем увеличении, изменении формы или изменении контура какой-либо части или участка тела, что может быть технически невозможно или эстетически неприемлемо с существующими технологиями имплантатов мягких тканей. Дооперационная оценка, как правило, включает стандартное изучение истории болезни и медицинский осмотр, помимо полного информированного согласия, описывающего все релевантные риски и преимущества процедуры.

[0093] Композиция гидрогеля и способы, описанные в настоящем документе, пригодны для лечения состояний мягкой ткани. Состояния мягкой ткани включают, без ограничения, несовершенство, дефект, заболевание и/или расстройство мягкой ткани. Неограничивающие примеры состояний мягкой ткани включают несовершенство, дефект, заболевание и/или расстройство молочной железы, такое как, например, увеличение молочной железы, реконструкция молочной железы, мастопексия, микромастия, торакальная гипоплазия, синдром Поланда, дефекты из-за осложнений трансплантации, такие как капсулярное сжатие и/или разрыв; несовершенство, дефект, заболевание или расстройство лица, такое как, например, увеличение лица, реконструкция лица, мезотерапия, синдром Пари-Ромберга, глубокая красная волчанка, кожные складки, шрамы, впалые щеки, тонкие губы, несовершенства или дефекты носа, ретроорбитальные несовершенства или дефекты, лицевые складки, линии и/или морщины типа межбровной линии, носогубной линии, околоротовой линии и/или линии марионеток, и/или другие контурные дефекты или несовершенства лица; несовершенство, дефект, заболевание или расстройство шеи; несовершенство, дефект, заболевание и/или расстройство кожи; несовершенства, дефекты, заболевания и/или расстройства других мягких тканей, такие как, например, увеличение или реконструкция плеча, предплечья, кисти, лопатки, спины, туловища, включая живот, ягодицы, бедра, голени, в том числе лодыжки, ступни, включая подошвенные жировые подушки, глаз, половых органов или другой части, области или зоны тела, или заболевание или расстройство, поражающее эти части, области или зоны тела; недержание мочи, недержание кала, другие формы недержания; и гастроэзофагеальное рефлюксное заболевание (GERD). При использовании в настоящем документе термин «мезотерапия» относится к нехирургическому косметическому приему лечения кожи, включающему интра-эпидермальную, интра-дермальную и/или подкожную инъекцию агента, вводимого в виде множества мелких капель в эпидермис, дермо-эпидермальное соединение и/или дермис.

[0094] Количество композиции гидрогеля, используемой в любых способах, описанных в настоящем документе, как правило, определяют на основе заданного изменения и/или улучшения, заданного снижения и/или исключения симптома состояния мягкой ткани, клинического и/или косметического эффекта, желаемого индивидуумом или врачом, части или области тела, подлежащей лечению. Эффективность введения композиции может проявляться по одной или более из следующих клинических и/или косметических мер: изменение и/или улучшение формы мягкой ткани, изменение и/или улучшение размера мягкой ткани, изменение и/или улучшение контура мягкой ткани, изменение и/или улучшение функции ткани, увеличение прорастания ткани и/или новое отложение коллагена, устойчивое приживление композиции, повышение удовлетворенности пациента и/или качества жизни, а также уменьшение использования имплантируемого чужеродного материала.

[0095] Эффективность композиций и способов при лечении лицевой мягкой ткани может проявляться по одной или более из следующих клинических и/или косметических мер: увеличение размера, формы и/или контура детали лица, такое как увеличение размера, формы и/или контура губ, щек или области глаз; изменение размера, формы и/или контура детали лица, такое как изменение размера, формы и/или контура губ, щек или формы области глаз; уменьшение или исключение морщин, складок или линий на коже; стойкость к образованию морщин, складок или линий на коже; восстановление водного баланса кожи; увеличение упругости кожи; уменьшение или исключение шероховатости кожи; увеличение и/или улучшение натянутости кожи; уменьшение или исключение линий или признаков растягивания; увеличение и/или улучшение тонуса, блеска, яркости и/или сияния кожи; увеличение и/или улучшение цвета кожи, уменьшение или исключение бледности кожи; устойчивое приживление композиции; уменьшение побочных эффектов; улучшение удовлетворенности пациента и/или качества жизни.

[0096] В другом примере, для процедур по недержанию мочи, эффективность указанных композиций и способов для поддержки сфинктера может проявляться по одной или более из следующих клинических мер: снижение частоты недержания, устойчивое приживление, улучшение удовлетворенности пациента и/или качества жизни и уменьшение использования имплантируемого чужеродного наполнителя.

[0097] В аспектах этого варианта реализации количество вводимой композиции гидрогеля составляет, например, около 0,01 г, около 0,05 г, около 0,1 г, около 0,5 г, около 1 г, около 5 г, около 10 г, около 20 г, около 30 г, около 40 г, около 50 г, около 60 г, около 70 г, около 80 г, около 90 г, около 100 г, около 150 г или около 200 г. В других аспектах этого варианта реализации количество вводимой композиции гидрогеля составляет, например, от около 0,01 до около 0,1 г, от около 0,1 до около 1 г, от около 1 до около 10 г, от около 10 до около 100 г или от около 50 до около 200 г. В других аспектах этого варианта реализации количество вводимой композиции гидрогеля составляет, например, около 0,01 мл, около 0,05 мл, около 0,1 мл, около 0,5 мл, около 1 мл, около 5 мл, около 10 мл, около 20 мл, около 30 мл, около 40 мл, около 50 мл, около 60 мл, около 70 мл, около 80 мл, около 90 мл, около 100 мл, около 150 мл или около 200 мл. В других аспектах этого варианта реализации количество вводимой композиции гидрогеля составляет, например, от около 0,01 до около 0,1 мл, от около 0,1 до около 1 мл, от около 1 до около 10 мл, от около 10 до около 100 мл или от около 50 до около 200 мл.

[0098] Продолжительность лечения обычно определяют на основании косметического и/или клинического эффекта, заданного индивидуумом и/или врачом, а также части или области тела, подлежащей лечению. В аспектах этого варианта реализации введение композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может оказывать лечение состояния мягкой ткани в течение, например, около 6 месяцев, около 7 месяцев, около 8 месяцев, около 9 месяцев, около 10 месяцев, около 11 месяцев, около 12 месяцев, около 13 месяцев, около 14 месяцев, около 15 месяцев, около 18 месяцев или около 24 месяцев. В других аспектах этого варианта реализации введение композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может оказывать лечение состояния мягкой ткани в течение, например, по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 7 месяцев, по меньшей мере 8 месяцев, по меньшей мере 9 месяцев, по меньшей мере 10 месяцев, по меньшей мере 11 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мер 13 месяцев, по меньшей мере 14 месяцев, по меньшей мере 15 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев или по меньшей мере 24 месяцев. В других аспектах этого варианта реализации введение композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может оказывать лечение состояния мягкой ткани, например, в течение от около 6 до около 12 месяцев, от около 6 до около 15 месяцев, от около 6 до около 18 месяцев, от около 6 до около 21 месяца, от около 6 до около 24 месяцев, от около 9 до около 12 месяцев, от около 9 до около 15 месяцев, от около 9 до около 18 месяцев, от около 9 до около 21 месяца, от около 6 до около 24 месяцев, от около 12 до около 21 месяца, от около 12 до около 24 месяцев, от около 15 до около 18 месяцев, от около 15 до около 21 месяца, от около 15 до около 24 месяцев, от около 18 до около 21 месяца, от около 18 до около 24 месяцев или от около 21 до около 24 месяцев.

[0099] В аспектах настоящего описания представлено, помимо прочего, введение композиции, описанной в настоящем документе. При использовании в настоящем документе термин «введение» означает любой механизм доставки, который обеспечивает доставку индивидууму композиции, описанной в настоящем документе, что потенциально приводит к клинически, терапевтически или экспериментально благоприятному результату. Фактический механизм доставки, используемый для введения композиции индивидууму, может быть определен специалистом в данной области с учетом различных факторов, включая, без ограничения, тип кожного состояния, локализацию кожного состояния, причину кожного состояния, тяжесть кожного состояния, необходимую степень облегчения, заданную продолжительность облегчения, конкретную используемую композицию, скорость экскреции конкретной используемой композиции, фармакодинамику конкретной используемой композиции, природу других соединений, входящих в конкретную используемую композицию, конкретный способ введения, конкретные характеристики, историю болезни и факторы риска индивидуума, такие как, например, возраст, вес, общее состояние здоровья и тому подобное, или любую их комбинацию. В одном из аспектов этого варианта реализации композицию, описанную в настоящем документе, вводят в область кожи индивидуума путем инъекции.

[00100] Способ введения композиции гидрогеля индивидуальному пациенту, как правило, определяют на основании косметического и/или клинического эффекта, заданного индивидуумом и/или врачом, а также части или области тела, подлежащей лечению. Композиция, описанная в настоящем документе, может быть введена любыми способами, известными специалистам в данной области, включая, без ограничения, шприц с иглой, пистолет (например, гидропневматический-компрессионный пистолет), катетер, наружно, или прямой хирургической имплантацией. Композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть введена в области кожи, такие как, например, дермальный слой или гиподермальный слой. Например, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть инъецирована с помощью игл с диаметром от около 0,26 до около 0,4 мм и длиной от около 4 до около 14 мм. Альтернативно, иглы могут быть от 21 до 32 калибра и могут иметь длину от около 4 до около 70 мм. Предпочтительно, игла представляет собой одноразовую иглу. Игла может быть соединена со шприцем, катетером и/или пистолетом.

[00101] Кроме того, композиция, описанная в настоящем документе, может быть введена однократно или несколько раз. Главное, чтобы используемый график соответствовал стандартам качества обслуживания. Например, композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, может быть введена однократно или в течение нескольких сеансов, при этом указанные сеансы разделены несколькими днями или неделями. Например, индивидууму может быть введена композиция гидрогеля, описанная в настоящем документе, каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6 или 7 дней, или каждые 1, 2, 3 или 4 недели. Введение индивидууму композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, может выполняться на месячном или двухмесячном базисе или вводиться каждые 3, 6, 9 или 12 месяцев.

[00102] В аспектах настоящего описания представлена, помимо прочего, область кожи. При использовании в настоящем документе «область кожи» относится к области кожи, содержащей эпидермально-дермальное соединение и дерму, включая поверхностную дерму (сосочковый слой) и глубокую дерму (ретикулярный слой). Кожа состоит из трех основных слоев: эпидермис, который обеспечивает защиту от воды и служит барьером для инфекций; дерму, которая служит в качестве места расположения придатков кожи; и гиподермис (подкожный жировой слой). Эпидермис не содержит кровеносных сосудов и питается диффузией из дермы. Основные типы клеток, которые составляют эпидермис, представляют собой кератиноциты, меланоциты, клетки Лангерганса и клетки Меркеля.

[00103] Дерма представляет собой слой кожи под эпидермисом, который состоит из соединительной ткани и защищает организм от ударов и толчков. Дерма плотно соединена с эпидермисом базальной мембраной. Она также удерживает многие механические рецепторы/нервные окончания, которые обеспечивают ощущение прикосновения и тепла. Она содержит волосяные фолликулы, потовые железы, сальные железы, апокринные железы, лимфатические сосуды и кровеносные сосуды. Кровеносные сосуды в дерме обеспечивают питание и вывод отходов из собственных клеток, а также из базального слоя эпидермиса. Дерма структурно подразделяется на две области: поверхностная область, соседняя с эпидермисом, именуемая сосочковой областью, и глубокая, более толстая область, называемая ретикулярной областью.

[00104] Сосочковая область состоит из рыхлой волокнистой соединительной ткани. Она получила свое название за похожие на пальцы выступы, называемые сосочками, которые выступают в сторону эпидермиса. Эти сосочки обеспечивают дерме «бугристую» поверхность, которая переплетается с эпидермисом, упрочняя связь между этими двумя слоями кожи. Ретикулярная область лежит глубоко в сосочковой области и обычно гораздо толще. Она состоит из плотной неравномерной соединительной ткани и получила свое название по высокой плотности коллагеновых, эластических и ретикулярных волокон, которые переплетаются в ней. Эти белковые волокна обеспечивают свойства дермы, такие как прочность, растяжимость и упругость. В ретикулярной области расположены также корни волос, сальные железы, потовые железы, рецепторы, ногти и кровеносные сосуды. Чернила для татуировок удерживаются именно в дерме. Растяжки при беременности также расположены в дерме.

[00105] Гиподермис расположен под дермой. Он предназначен для присоединения дермальной области кожи к нижележащим костям и мышцам, а также для ее снабжения кровеносными сосудами и нервами. Он состоит из рыхлой соединительной ткани и эластина. Основные типы клеток представляют собой фибробласты, макрофаги и адипоциты (гиподермис содержит 50% жира организма). Жир служит прокладкой и изоляцией тела.

[00106] В одном из аспектов этого варианта реализации композицию гидрогеля, описанную в настоящем документе, вводят в участок кожи индивидуума путем инъекции в дермальную область или гиподермальную область. В аспектах этого варианта реализации композицию гидрогеля, описанную в настоящем документе, вводят в дермальную область индивидуума путем инъекции, например, в область эпидермально-дермального соединения, в сосочковую область, в ретикулярную область или любую их комбинацию.

[00107] Преимущественно, некоторые из композиций настоящего изобретения особенно пригодны и эффективны для уменьшения видимости тонких линий, например, в тонких участках кожи пациента. Обрабатываемый участок кожи может быть любым участком кожи, имеющим тонкие линии или морщины, например, из-за возраста или УФ-воздействия, и может быть особенно пригодным для лечения, например, и для сглаживания видимости в области слезной борозды, на лбу, межбровных линий или в периорбитальной области.

[00108] Например, представлены способы для лечения тонких линий, включающие стадии введения в кожную область пациента композиции кожного наполнителя, описанной где-либо в настоящем документе, на глубину, не превышающую около 1 мм. При таком введении композиции этих вариантов реализации демонстрируют уменьшенное или отсутствие видимого посинения при введении на глубину не более чем около 1,0 мм, не более чем около 0,8 мм, не более чем около 0,6 мм или не более чем около 4 мм или менее в дермальную область.

[00109] В других аспектах настоящего описания, помимо прочего, описан способ лечения кожного состояния, включающий стадию введения индивидууму, страдающему от кожного состояния, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом указанное введение композиции улучшает состояние кожи, обеспечивая посредством этого лечение кожного состояния. В аспектах этого варианта реализации кожное состояние представляет собой обезвоживание кожи, а лечение обезвоживания кожи включает стадию введения индивидууму, страдающему от обезвоживания кожи, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции восстанавливает водный баланс кожи, посредством этого обеспечивая лечение обезвоживания кожи. В другом аспекте этого варианта реализации способ лечения недостатка упругости кожи включает стадию введения индивидууму, страдающему от недостатка упругости кожи, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции увеличивает упругость кожи, обеспечивая посредством этого лечение недостатка упругости кожи. В другом аспекте этого варианта реализации способ лечения шероховатости кожи включает стадию введения индивидууму, страдающему от шероховатости кожи, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции снижает шероховатость кожи, обеспечивая посредством этого лечение шероховатости кожи. В другом аспекте этого варианта реализации способ лечение недостатка натянутости кожи включает стадию введения индивидууму, страдающему от недостатка натянутости кожи, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции делает кожу более натянутой, обеспечивая посредством этого лечение недостатка натянутости кожи.

[00110] В дополнительном аспекте этого варианта реализации способ лечения растяжек кожи или пятен включает стадию введения индивидууму, страдающему от растяжек кожи или пятен, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции уменьшает или устраняет растяжки кожи или пятна, обеспечивая посредством этого лечение растяжек кожи или пятен. В другом аспекте этого варианта реализации способ лечения бледности кожи включает стадию введения индивидууму, страдающему от бледности кожи, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции усиливает оттенок или сияние кожи, обеспечивая посредством этого лечение бледности кожи. В другом аспекте этого варианта реализации способ лечения морщин на коже включает стадию введения индивидууму, страдающему от морщин на коже, композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции снижает или устраняет морщины на коже, обеспечивая посредством этого лечение морщин на коже. В другом аспекте этого варианта реализации способ лечения морщин на коже включает стадию введения индивидууму композиции гидрогеля, описанной в настоящем документе, при этом введение указанной композиции делает кожу устойчивой к морщинам на коже, обеспечивая посредством этого лечение морщин на коже.

[00111] В одном аспекте настоящего изобретения представлены кожные наполнители, которые особенно эффективны для лечения и исключения видимости тонких линий, например, относительно поверхностных, складок кожи, например, но не ограничиваясь этим, мелких линий возле глаз, в области слезной борозды, на лбу, в периорбитальной области, межбровных линий и т.д.

[00112] Появление посинения в участках кожи, куда был инъецирован кожный наполнитель, (феномен Тиндаля) представляет собой значительное неблагоприятное явление, испытываемое некоторыми пациентами, которым вводили кожный наполнитель. Феномен Тиндаля шире распространен среди пациентов, проходивших лечение поверхностных мелких морщин. Были разработаны варианты реализации настоящего изобретения, которые обеспечивают полупрозрачные наполнители длительного действия, которые могут быть инъецированы поверхностно для лечения мелких линий и морщин, даже в областях относительно тонкой кожи, без какого-либо посинения в результате феномена Тиндаля. Тонкие линии или поверхностные морщины обычно понимаются как морщины или складки кожи, которые обычно находятся в тех областях лица (лоб, внешние углы глаз, красная кайма губ/околоротовые линии), где кожа самая тонкая, то есть кожа имеет толщину дермы менее 1 мм. На лбу средняя толщина кожи составляет около 0,95 мм для нормальной кожи и около 0,81 мм для морщинистой кожи. Дерма вокруг внешних углов глаз еще тоньше (например, около 0,61 мм для нормальной кожи и около 0,41 мм для морщинистой кожи). Средний внешний диаметр иглы 30 или 32 калибра (иглы, которые обычно используются для нанесения геля в тонкие линии) составляет около 0,30 и около 0,24 мм.

[00113] В настоящем изобретении представлена композиция кожного наполнителя, описанная в любом месте настоящего документа, не вызывающая феномен Тиндаля или не вызывающая какого-либо видимого посинения в результате феномена Тиндаля.

[00114] Представлены также способы лечения мелких линий на коже пациента. Эти способы, в основном, включают стадии введения в кожу пациента композиции, описанной в настоящем документе. Например, композиции содержат смесь компонента гиалуроновой кислоты, поперечно-сшивающий компонент, сшивающий гиалуроновую кислоту, и добавку, отличную от поперечно-сшивающего компонента; указанная композиция практически оптически прозрачна, и при этом указанная композиция кожного наполнителя демонстрирует пониженный феномен Тиндаля по сравнению с композицией, практически идентичной ей, за исключением отсутствия добавки.

[00115] В конкретных вариантах реализации настоящего изобретения представлены гели, которые поперечно сшиты с HMDA и имеют G' до около 70 Па, Gʺ/G' более чем около 0,65, усилие выдавливания около 24 H или менее и конечную концентрацию ГК до 25 мг/мл.

[00116] В других вариантах реализации представлены гели, которые поперечно сшиты с 4 АА и имеют G' до около 60 Па, Gʺ/G' более чем около 0,70, усилие выдавливания около 30 Н или менее и конечную концентрацию ГК до 24 мг/мл.

[00117] В других вариантах реализации представлены гели, которые поперечно сшиты с метиловым эфиром лизина и имеют G' до около 70 Па, Gʺ/G' более чем около 0,65, усилие выдавливания около 24 Н или менее и конечную концентрацию ГК до 25 мг/мл.

[00118] Многие гели кожных наполнителей в соответствии с настоящим изобретением содержат лидокаин, например, с концентрацией лидокаина около 0,3 масс. %.

[00119] Эти гели могут быть получены так, как описано в настоящем документе, и они представлены лишь в качестве конкретных примеров композиций по настоящему изобретению. Дополнительные примеры представлены ниже.

ПРИМЕРЫ

Гели ГК, сшитые с помощью химизма 1-этил-3-[3-диметиламинопропил] карбодиимида гидрохлорида (EDC)

[00120] Получение поперечно-сшитых гелей на основе ГК, в соответствии с некоторыми вариантами реализации настоящего изобретения, описаны ниже в Примерах 1 и 2. В Примере 1 гель получают с помощью химизма EDC, используя сшиватель гексаметилендиамин (HMDA), а в Примере 2 - 3-[3-(3-амино-пропокси)-2,2-бис(3-амино-пропоксиметил)-пропокси]-пропиламин (4-лучевой амин-4 АА). Поперечное сшивание выполняют при мягких условиях, например при комнатной температуре, например при температуре от около 20 до около 25°C, и, например, при низком pH, например pH 5,4. Условия реакции подбирают для получения высокосетчатых гелей с оптимальными свойствами геля, превосходной инъецируемостью и высокими конечными концентрациями ГК (~24 мг/мл). Авторы настоящего изобретения обнаружили, что может быть выгодно сшивать ГК при очень низкой гидратации или концентрациях реакции с умеренным количеством HMDA или 4 АА, вместе со связывающими агентами, 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида гидрохлоридом (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) или сульфонил-NHS (сульфо-NHS). Преимущество может заключаться в том, что может быть восстановлена сложноэфирная связь между ГК.

[00121] В одном из вариантов реализации настоящего изобретения представлена композиция кожного наполнителя для лечения морщин на коже, при этом указанная композиция содержит компонент гиалуроновой кислоты, поперечно-сшитый с 3-[3-(3-амино-пропокси)-2,2-бис(3-амино-пропоксиметил)-пропокси]-пропиламином (4 АА) и карбодиимидным связывающим агентом.

Пример 1

Композиция гидрогеля ГК-4 АА

[00122] 13,33 г 100 мМ буфера MES с pH 5,2 добавили в шприц, содержащий 400, 2 мг низкомолекулярной (НММ) ГК. НММ ГК может иметь средний молекулярный вес от около 310 до около 840 кДа, например менее чем около 600 кДа.

[00123] Раствор 4 АА приготовили растворением 492,1 мг 4 АА в 999,2 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2 и добавлением 757 мкл 6 М HCl, чтобы довести pH до 5,2.

[00124] Раствор EDC получили растворением 509,2 мг EDC в 1156,4 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2, а в отдельной пробирке 175 мг NHS растворили в 2635,8 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2. После полной гидратации ГК, в течение около 1 часа, добавили 99 мкл раствора 4 АА к гидратированной ГК. Смесь гомогенизировали 10 раз смешиванием «шприц в шприц».

[00125] Затем к гомогенизированной пасте добавили 115 мкл раствора EDC, 115 мкл раствора NHS и 140 мкл 100 мМ буфера MES с pH 5,2 и перемешивали 10 раз смешиванием «шприц в шприц».

[00126] Затем смесь перенесли в пробирку и выполняли поперечное сшивание при комнатной температуре в течение 5 часов, затем добавили 1,55 мл 10X буфера PBS с pH 7,4. Гель оставили набухать в течение 3 дней на вальцах, после чего его продавили через сито с размером ячеек 60 мкм.

[00127] Измельченный гель перенесли в диализную трубку с мембраной из целлюлозного эфира, номинальное отсечение по молекулярной массе 20 кДа, и выполняли диализ против 1X PBS в течение 4 дней, меняя буфер два раза в день.

[00128] Гель разделили по 1 мл шприцам СОС, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут и стерилизовали влажным паром. Конечная концентрация ГК в геле составила 26 мг/мл.

[00129] В другом варианте реализации настоящего изобретения представлена композиция кожного наполнителя для лечения поверхностных морщин на коже, при этом указанная композиция содержит компонент гиалуроновой кислоты, поперечно связанный с линейным диаминным сшивателем, например гексаметилендиамином (HMDA) и карбодиимидным сшивающим агентом. HMDA представляет собой органическое соединение формулы H₂N(CH₂)₆NH₂. Молекула представляет собой диамин, состоящий из гексаметиленовой углеводородной цепи, имеющей на концах аминные функциональные группы. Указанные композиции кожного наполнителя вводят в дермальную область пациента для улучшения внешнего вида кожи.

Пример 2

Композиция геля ГК/HMDA

[00130] 20,0 г 100 мМ буфера MES с pH 5,2 добавили в шприц, содержащий 1000,7 мг НММ ГК.

[00131] Раствор HMDA приготовили растворением 522 мг HMDA. HCl в 2008,5 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2 и добавлением 10 мкл 1 М NaOH, чтобы довести pH до 5,2.

[00132] Раствор EDC приготовили растворением 508 мг EDC в 1188,5 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2, а в отдельной пробирке растворили 44,2 мг NHS в 1340,7 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2. После полной гидратации ГК, в течение около 1 часа, 790 мкл раствора HMDA добавили к гидратированной ГК. Смесь гомогенизировали 10 раз смешиванием «шприц в шприц».

[00133] Затем к гомогенизированной пасте добавили 490 мкл раствора EDC и 490 мкл раствора NHS. Смесь снова перемешивали 10 раз смешиванием «шприц в шприц», а затем перенесли в пробирку и выполняли поперечное сшивание при комнатной температуре в течение 5 часов, затем добавили 18,0 мл 1X буфера PBS с рН 7,4.

[00134] Гель оставили набухать в течение 3 дней на вальцах, затем продавили через сито с размером ячеек 60 мкм. Измельченный гель поместили в диализную трубку с мембраной из целлюлозного эфира, номинальное отсечение по молекулярной массе 20 кДа, и выполняли диализ против 70% IPA в течение 30 минут, затем диализную среду заменили на 1X PBS. Затем гель диализировали в течение 4 дней, меняя буфер два раза в день.

[00135] Гель разделили по 1 мл шприцам СОС, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут для удаления пузырьков воздуха и стерилизовали влажным паром. Конечная концентрация ГК в геле составила 25 мг/мл.

[00136] В другом варианте реализации настоящего изобретения представлена композиция кожного наполнителя для лечения поверхностных морщин на коже, при этом указанная композиция содержит компонент гиалуроновой кислоты, поперечно-сшитый с метиловым эфиром лизина и карбодиимидным связывающим агентом. Лизин представляет собой незаменимую аминокислоту и имеет химическую формулу C₆H₁₄N₂O₂.

Пример 3

Композиция гидрогеля ГК/лизина

[00137] 400,5 мг НММ ГК гидратировали в течение 30 минут в шприце путем добавления 100 мМ буфера MES с pH 5,2. Раствор метилового эфира лизина (LME) приготовили растворением 400,3 мг LME. HCl в 1046,6 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2 в пробирке. Раствор EDC получили растворением 288 мг EDC в 1357,1 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2 в небольшой пробирке, а раствор NHS приготовили растворением 61,0 мг NHS в 962,8 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2 в отдельной пробирке. После завершения гидратации ГК 261 мкл раствора LME добавили к гидратированной ГК. Смесь гомогенизировали смешиванием «шприц в шприц», 10 раз, затем добавили 387 мкл раствора EDC и 372 мкл раствора NHS. Пасту снова перемешали 10 раз смешиванием «шприц в шприц», затем смесь перенесли в пробирку и выполняли поперечное сшивание при комнатной температуре в течение 5 часов. Затем к поперечно-сшитому гелю добавили 6,21 мл 1X PBS буфера с pH 7,4. Гель оставили набухать в течение 3 дней на вальцах, затем измельчили продавливанием через сито из нержавеющей стали с размером пор 60 мкм. Для превращения этого гидрогеля ГК-метилового эфира лизина в гидрогель ГК-лизина к гелю добавили небольшое количество NaOH и перемешали, чтобы увеличить pH геля до 12. Затем смесь на 5 минут поместили на водяную баню, установленную на 50°C, затем добавили хлороводородную кислоту, чтобы вернуть pH до ~7,4. Затем гель поместили в диализную трубку с мембраной из целлюлозного эфира, номинальное отсечение по молекулярной массе 20 кДа, и выполняли диализ против 70% IPA в течение 30 минут, затем диализную среду заменили на 1X PBS. Гель распределили по 1 мл шприцам СОС, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут для удаления воздушных пузырьков и стерилизовали влажным паром. Конечная концентрация ГК в геле составила 26 мг/мл.

Пример 4

Определение реологических свойств гелей Примеров 1-3.

[00138] Для измерения реологических свойств гелей использовали осциллирующий реометр с плоскопараллельным зазором, Anton Paar Physica MCR 301. Использовали пластину диаметром 25 мм при высоте зазора 1 мм. Измерения выполняли при постоянной температуре 25°C. Каждое измерение состояло из развертки по частоте от 1 до 10 Гц при постоянной деформации 2% и логарифмическом увеличении частоты с последующей разверткой по деформации от 1 до 300% при постоянной частоте 5 Гц с логарифмическим увеличением деформации. Динамический модуль упругости (G') и модуль вязкости (Gʺ) получили по развертке деформации при 1% деформации.

Пример 5

Измерение усилия выдавливания гелей Примеров 1-3

[00139] Силу, необходимую для выдавливания гелей из иглы 30 калибра, измеряли с помощью программ Instron 5564 и Bluehill 2. Гели выдавливали из 1 мл шприца СОС через иглу TSK калибра 30G½. Поршень продавливали со скоростью 100 мм/мин на расстояние 11,35 мм и записывали усилие выдавливания.

Пример 6

Испытание биосовместимости гелей Примеров 1-3

[00140] 50 мкл болюсные инъекции геля имплантировали интрадермально в спинную поверхность крыс Спрага-Доули. Имплантаты удалили через 1 неделю и анализировали гистологией с окрашиванием гематоксилином и эозином (Н&Е), а также с окрашиванием CD68, который является маркером мононуклеарных воспалительных клеток. Оценили три 20Х изображения с CD68 по шкале от 0 до 4 по степени окрашивания. Эти значения затем усреднили для получения оценки образца. Анализировали четыре образца каждого геля. Материалы с оценкой более 3,1 предположительно являются провоспалительными.

Пример 7

Испытание цитотоксичности гелей Примеров 1-3

[00141] In vitro испытания цитотоксичности гелей были выполнены Североамериканской научной ассоциацией (NAMSA) в соответствии с агарозным способом наложения по ISO 10993-5: биологическая оценка медицинских устройств - часть 5: испытания in vitro цитотоксичности. В трипликатные лунки поместили 0,1 мл исследуемого образца, помещенного на фильтровальный диск, а также 0,9% раствор NaCl, 1 см полоску полиэтилена высокой плотности в качестве отрицательного контроля и 1×1 см² кусочек латекса в качестве положительного контроля. Каждый поместили на поверхность агарозы, непосредственно закрывая монослой мышиных фибробластных клеток L929. После инкубации при 37°C в 5% СО₂ в течение 24 часов культуры исследовали макроскопически и микроскопически на наличие какой-либо аномальной клеточной морфологии и клеточного лизиса. Исследуемые образцы оценили по шкале от 0 до 4 по зоне лизиса вблизи образцов. Исследуемые материалы из Примеров 1, 2 и 3 получили оценку 0, поскольку исследуемые образцы не показали никаких признаков инициации клеточного лизиса или токсичности.

Пример 8

Поперечное сшивание ГК с помощью 4 АА с использованием EDC и NHS в качестве связывающих агентов.

[00142] 32,55 г 100 мМ буфера MES с pH 5,2 добавили в шприц, содержащий 1000,4 мг НММ ГК. Раствор 4 АА приготовили растворением 256,3 мг 4 АА в 1039,8 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2 и добавлением 380 мкл 6 М HCl, чтобы довести pH до 5,2. Раствор EDC приготовили растворением 251,2 мг EDC в 1013,8 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2, а в отдельной пробирке растворили 74,7 мг NHS в 2020,0 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2. После полной гидратации ГК, ~1 час, 260 мкл раствора 4 АА добавили к гидратированной ГК. Смесь гомогенизировали, смешивая 10 раз «шприц в шприц». Затем к гомогенизированной пасте добавили 277 мкл раствора EDC и 273 мкл раствора NHS и снова перемешивали 10 раз смешиванием «шприц в шприц». Затем смесь перенесли в пробирку и выполняли поперечное сшивание при комнатной температуре в течение 5 часов, затем добавили 6,4 мл 10Х буфера PBS с pH 7,4. Гель оставили набухать в течение 3 дней на вальцах, затем продавили через сито с размером ячеек 60 мкм. Измельченный гель поместили в диализную трубку с мембраной из целлюлозного эфира, номинальное отсечение по молекулярной массе 20 кДа, и выполняли диализ против 1X PBS в течение 4 дней, заменяя буфер два раза в день. Гель распределили по 1 мл шприцам СОС, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут и стерилизовали влажным паром. Конечная концентрация ГК в геле составила 23 мг/мл.

Пример 9

Поперечное сшивание ГК с помощью HMDA с использованием EDC и NHS в качестве связывающих агентов

[00143] 20,0 г 100 мМ буфера MES с pH 5,2 добавили в шприц, содержащий 1000,0 мг НММ ГК. Раствор HMDA приготовили растворением 260,9 мг HMDA гидрохлорида в 2010,5 мг 100 мМ буфере MES С pH 5,2, и добавлением 2 мкл 1 М NaOH, чтобы довести pH до 5,2. Раствор EDC приготовили растворением 254,2 мг EDC в 1188,4 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2, а в отдельной пробирке растворили 44,3 мг NHS в 1341,8 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2. После полной гидратации ГК, ~1 час, 790 мкл раствора HMDA добавили к гидратированной ГК. Смесь гомогенизировали, выполняя 10 раз смешивание «шприц в шприц». Затем к гомогенизированной пасте добавили 490 мкл раствора EDC и 490 мкл раствора NHS и снова перемешивали 10 раз смешиванием «шприц в шприц». Затем смесь перенесли в пробирку и выполняли поперечное сшивание при комнатной температуре в течение 5 часов, затем добавили 17,9 мл 1X PBS буфера с pH 7,4. Гель оставили набухать в течение 3 дней на вальцах, затем продавили через сито с размером ячеек 60 мкм. Измельченный гель поместили в диализную трубку с мембраной из целлюлозного эфира, номинальное отсечение по молекулярной массе 20 кДа, и выполняли диализ против 1X PBS в течение 4 дней, заменяя буфер два раза в день. Гель распределили по 1 мл шприцам СОС, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут и стерилизовали влажным паром. Конечная концентрация ГК в геле составила 25 мг/мл.

Пример 10

Гидрогели ГК-лизина с использованием EDC и NHS в качестве связывающих агентов

[00144] 8,06 г 100 мМ буфера MES с pH 5,2 добавили в шприц, содержащий 400,3 мг НММ ГК. Раствор гидрохлорида метилового эфира лизина приготовили растворением 400,3 мг гидрохлорида метилового эфира лизина в 1046,6 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2. Раствор EDC приготовили растворением 287,6 мг EDC в 1364,6 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2, а в отдельной пробирке растворили 60,2 мг NHS в 962,8 мг 100 мМ буфера MES с pH 5,2. После полной гидратации ГК, ~1 час, к гидратированной ГК добавили 132 мкл раствора гидрохлорида метилового эфира лизина. Смесь гомогенизировали, смешивая 10 раз «шприц в шприц». Затем к гомогенизированной пасте добавили 196 мкл раствора EDC и 190 мкл раствора NHS и снова смешивали 10 раз смешиванием «шприц в шприц». Затем смесь перенесли в пробирку и выполняли поперечное сшивание при комнатной температуре в течение 5 часов, затем добавили 6,67 мл 1X буфера PBS с pH 7,4. Гель оставили набухать в течение 3 дней на вальцах, затем продавили через сито с размером ячеек 60 мкм. Для превращения гидрогеля ГК-метилового эфира лизина в гидрогель ГК-лизина, к гелю добавили небольшое количество раствора NaOH и перемешали, чтобы повысить pH геля до около 12. Затем смесь на 5 минут поместили на водяную баню, установленную на 50°C, затем добавили хлороводородную кислоту, чтобы довести pH обратно до значения ~7,4. Измельченный гель поместили в диализную трубку с мембраной из целлюлозного эфира, номинальное отсечение по молекулярной массе 20 кДа, и выполняли диализ против 1X PBS в течение 4 дней, заменяя буфер два раза в день. Гель распределили по 1 мл шприцам СОС, центрифугировали при 5000 об/мин в течение 5 минут и стерилизовали влажным паром. Конечная концентрация ГК в геле составила 26 мг/мл.

Пример 11

Гели, содержащие лидокаин

[00145] 1858 мг лидокаина HCl добавили в 5 мл волюметрическую колбу. Колбу заполнили до метки 1X буфером PBS с получением концентрации лидокаина HCl 372 мг/мл. 200 мкл этого лидокаинового раствора затем добавили к 24,5 мг геля из Примеров 8, 9 и 10 в шприце. Смесь выдавили в другой шприц через соединитель. Этот процесс повторили 20 раз для получения однородной смеси.

Пример 12

Определение реологических свойств гелей в Примерах 8-10

[00146] Для измерения реологических свойств гелей использовали осциллирующий реометр с плоскопараллельным зазором, Anton Paar Physica MCR 301. Использовали пластину диаметром 25 мм при высоте зазора 1 мм. Измерения выполняли при постоянной температуре 25°C. Каждое измерение состояло из развертки по частоте от 1 до 10 Гц при постоянной деформации 2% и логарифмическом увеличении частоты с последующей разверткой по деформации от 1 до 300% при постоянной частоте 5 Гц с логарифмическим увеличением деформации. Динамический модуль упругости (G') и модуль вязкости (Gʺ) получили по развертке деформации при 1% деформации.

Пример 13

Измерение усилия выдавливания гелей Примеров 8-10

[00147] Силу, необходимую для выдавливания гелей из иглы 30 калибра, измеряли с помощью программ Instron 5564 и Bluehill 2. Гели выдавливали из 1 мл шприца СОС через иглу TSK калибра 30G½. Поршень продавливали со скоростью 100 мм/мин на расстояние 11,35 мм и записывали усилие выдавливания.

Пример 14

Испытание цитотоксичности гелей, ISO 10993-5, Примеры 8-10

[00148] In vitro испытания цитотоксичности гелей были выполнены Североамериканской научной ассоциацией (NAMSA) в соответствии с агарозным способом наложения по ISO 10993-5: биологическая оценка медицинских устройств - часть 5: испытания in vitro цитотоксичности. В трипликатные лунки поместили 0,1 мл исследуемого образца, помещенного на фильтровальный диск, а также 0,9% раствор NaCl, 1 см полоску полиэтилена высокой плотности в качестве отрицательного контроля и 1×1 см² кусочек латекса в качестве положительного контроля. Каждый поместили на поверхность агарозы, непосредственно закрывая монослой мышиных фибробластных клеток L929. После инкубации при 37°C в 5% СО₂ в течение 24 часов культуры исследовали макроскопически и микроскопически на наличие какой-либо аномальной клеточной морфологии и клеточного лизиса. Исследуемые образцы оценили по шкале от 0 до 4 по зоне лизиса вблизи образцов. Исследуемые материалы из Примеров 8, 9 и 10 получили оценку 0, поскольку исследуемые образцы не показали никаких признаков инициации клеточного лизиса или токсичности.

Пример 15

Оценка феномена Тиндаля для гелей

[00149] Для дополнительного подкрепления визуальных наблюдений и для выполнения сравнительного анализа характеристик ГК наполнителей выполнили количественный анализ феномена Тиндаля. На основании существующего научного понимания рассеивания света и взаимодействия света с кожей использовали два отдельных подхода на основании (а) колориметрии и (b) спектроскопии для количественной оценки феномена Тиндаля в коже. На основании этих приемов определили три отдельных количественных параметра (описанные ниже) для измерения феномена Тиндаля in vivo.

[00150] Визуальная оценка феномена Тиндаля: эта шкала имеет диапазон от 1 до 5 с приращениями 0,5. Оценку 1 давали участкам инъекции с нормальным оттенком кожи и без посинения. Максимальную оценку 5 давали густому и выраженному посинению (как правило, связанную с продуктами Restylane или Juvederm Ultra Plus). Три независимых наблюдателя прошли обучение работе со шкалой, а затем слепым образом оценили исследуемые образцы.

[00151] Синий компонент цвета кожи - "b": использовали хромаметр (CM2600D, Konica Minolta, штат Нью-Джерси) для количественной оценки синей составляющей света, отраженного от участков кожи, инъецированных различными наполнителями. Это было достигнуто с помощью компонента «b» цветовой шкалы L-a-b.

[00152] «% Синего света», отраженного от кожи: Использовали переносной спектрофотометр (CM2600D, Konica Minolta, штат Нью-Джерси) для количественной оценки % синего света, отраженного от кожи во всем диапазоне видимого света. Это было достигнуто с помощью интегрирования площади под видимым спектром света в диапазоне 400-490 нм и нормализации ее по общей площади под спектром (400-700 нм).

[00153] Гели настоящего описания и имеющиеся в продаже гели инъецировали интрадермально через иглу 27G½ TSK, используя прием линейного прошивания, в бедра двухмесячных безшерстных крыс. Гели имплантировали поверхностно для имитации клинической процедуры на тонких линиях. Испытания феномена Тиндаля выполнили через 48 часов после имплантации геля. Перед выполнением испытаний Тиндаля животных подвергли эвтаназии для улучшения контраста феномена Тиндаля.

[00154] Через 2 дня после имплантации геля было обнаружено, что гели Примеров 8-10 не демонстрируют заметного феномена Тиндаля. Имеющиеся в продаже гели для тонких линий (Juvederm Refine и Restylane Touch) демонстрируют заметное посинение (см. Фигуру 1).

[00155] Для оценки участков инъекции использовали визуальную шкалу от 1 до 5 с приращениями 0,5. Участки инъекции с оценкой 1 не демонстрировали изменения цвета кожи, тогда как участки инъекции с оценкой 5 демонстрировали сильное посинение кожи. Выполнили также спектроскопические анализы участков инъекции с помощью хроматометра (CM2600D, Konica Minolta, штат Нью-Джерси). Независимо измерили синий компонент цвета кожи «b», а также % синего света, отраженного от кожи (400-700 нм). Гели Примеров 8-10 демонстрируют отсутствие заметного феномена Тиндаля и имеют более низкую визуальную оценку феномена Тиндаля и значения % отраженного синего света. Оценка Тиндаля и значения % отраженного синего света были выше для промышленных гелей.

Пример 16

Оценка in vivo продолжительности действия гелей, по МРТ.

[00156] 150 мкл гелевых композиций Примеров 8 и 9 в соответствии с настоящим изобретением инъецировали интрадермально в шести различных положениях самкам крыс Спрага-Доули со стороны спины; два противоположных участка, расположенные каудально к лопаткам, два срединных участка непосредственно между каудальными и ростральными участками, и два противоположных участка, расположенные слегка рострально относительно коленей, каждое положение содержит различные композиции. Сканирование МРТ выполнили с помощью прибора Bruker Biospec 70/30, 7 тесла. Сканирование МРТ выполнили сразу после имплантации геля (базовая линия), через 12 недель после имплантации геля и через 24 недели после имплантации геля. In vivo разложение и стабильность геля определили расчетом объема, площади поверхности и отношением площади поверхности к объему в каждой точке времени.

[00157] Как показано, гели настоящего изобретения демонстрируют существенное улучшение продолжительности действия in vivo, по сравнению с коммерческим кожным наполнителем на основе ГК, Commercial Fine Line Filler III (Belotero Soft), продающимся на рынке в качестве средства для лечения поверхностных морщин на коже.

Пример 17

Композиции настоящего изобретения для лечения периорбитальных линий

[00158] 40-летняя худощавая женщина с мелкими морщинами в периорбитальной области обратилась за лечением с помощью кожного наполнителя. С помощью иглы 30 калибра врач ввел 0,6 мл геля на основе ГК в соответствии с настоящим изобретением (такого, как описан в Примере 8), поверхностно в тонкие линии под глазами и в область слезной борозды, используя прием линейного прошивания. Хотя гель был введен поверхностно, никакого посинения не наблюдали, и пациент остался удовлетворен результатами.

Пример 18

Композиции настоящего изобретения для лечения периорбитальных линий

[00159] 35-летний мужчина с типом кожи по Фицпатрику III и мелкими морщинами в межбровной области обратился за лечением с помощью кожного наполнителя. С помощью иглы 27 калибра врач ввел 1,0 мл геля на основе ГК в соответствии с настоящим изобретением (такого, как описан в Примере 9), поверхностно, на глубину около 0,8 мм, в межбровные линии, используя стандартный прием. Несмотря на введение геля никакого посинения не наблюдали. Через две недели после лечения посинения все еще не было. Пациент сообщил, что он удовлетворен результатами.

[00160] В завершение, следует понимать, что хотя аспекты настоящего описания были описаны со ссылкой на различные варианты реализации, специалисты в данной области могут легко определить, что конкретные описанные примеры являются лишь иллюстративными для принципов предмета обсуждения, описанного в настоящем документе. Поэтому следует понимать, что описанный предмет обсуждения никоим образом не ограничивается конкретной методологией, протоколом и/или реагентом и т.д., описанным в настоящем документе. Следовательно, специалисты в данной области могут сделать многочисленные и различные модификации или изменения, или могут быть сделаны альтернативные конфигурации описанного предмета обсуждения в соответствии представленными в настоящем документе указаниями, без отклонения от общей идеи настоящего описания. Могут быть сделаны изменения в деталях, без отклонения от общей идеи настоящего изобретения, определенной в приложенной формуле изобретения. Наконец, используемая в настоящем документе терминология предназначена лишь для целей описания конкретных вариантов реализации и не предназначена для ограничения рамок настоящего изобретения, которые определяются исключительно формулой изобретения. Кроме того, предполагается, что весь предмет обсуждения, содержащийся в представленном выше описании или показанный в сопровождающих графических материалов, следует интерпретировать лишь как иллюстративный, а не ограничивающий. Соответственно, настоящее изобретение не ограничивается в точности тем, что показано и описано в настоящем документе.

[00161] В настоящем документе описаны некоторые варианты реализации настоящего изобретения, включая наилучший способ для осуществления настоящего изобретения, известный авторам изобретения. Конечно, при прочтении вышеизложенного описания специалистам в данной области станут очевидны вариации этих описанных вариантов реализации. Авторы изобретения ожидают, что опытные специалисты осуществят такие варианты надлежащим образом, и авторы изобретения полагают, что настоящее изобретение может быть осуществлено на практике другим способом, чем конкретно описано в настоящем документе. Соответственно, настоящее изобретение включает все модификации и эквиваленты предмета обсуждения, изложенного в формуле изобретения, приложенной к этому документу, насколько допускается применимыми правовыми нормами. Кроме того, любая комбинация вышеописанных элементов охватывается настоящим изобретением во всех их возможных вариантах, если иное не указано в настоящем документе или явно не противоречит контексту.

[00162] Группировки альтернативных элементов или вариантов реализации настоящего изобретения, раскрытого в настоящем документе, не должны истолковываться как ограничения. Каждый член группы может упоминаться и заявляться индивидуально или в любой комбинации с другими членами этой группы или с другими элементами, представленными в настоящем документе. Предусматривается, что один или более членов группы могут быть включены или исключены из группы по соображениям удобства и/или патентоспособности. При возникновении любого такого включения или исключения подразумевается, что настоящее описание содержит эту группу в модифицированном виде, осуществляя, таким образом, письменное описание всех групп Маркуша, используемых в приложенной формуле изобретения.

[00163] Если не указано иное, все числа, выражающие количества компонентов, свойства, такие как молекулярная масса, условия реакции и тому подобные, используемые в описании и формуле изобретения, следует понимать как измененные во всех случаях термином «около». При использовании в настоящем документе термин «около» означает, что предмет, параметр или термин, описанный таким образом, охватывает диапазон плюс или минус десять процентов выше и ниже значения для указанного предмета, параметра или термина. Соответственно, если не указано обратное, числовые параметры, представленные в описании и в приложенной формуле изобретения, являются приближениями, которые могут варьироваться в зависимости от заданных свойств, которые необходимо получить в соответствии с настоящим изобретением. По крайней мере, но не в качестве попытки ограничить применение принципа эквивалентов до рамок формулы изобретения, каждый числовой параметр должен по меньшей мере толковаться в свете числа представленных значащих цифр и путем применения обычных стандартных методик. Несмотря на то что числовые диапазоны и параметры, представленные выше в широком описании настоящего изобретения, являются приближениями, числовые значения, представленные выше в конкретных примерах, записаны максимально точно. Однако любое числовое значение, по сути, содержит определенные ошибки, неизбежно возникающие из стандартных отклонений, содержащихся в их соответствующих испытательных измерениях.

[00164] Термины в единственном числе, используемые в контексте описания настоящего изобретения (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует толковать как включающие единственное и множественное число, если в настоящем документе не указано иное или очевидно не опровергается контекстом. Перечисление диапазонов значений в настоящем документе служит только в качестве сокращенного способа индивидуального упоминания каждого отдельного значения, входящего в этот диапазон. Если не указано иное в данном документе, каждое отдельное значение включено в описание так, как если бы оно было проведено индивидуально в настоящем документе. Все описанные в данном документе способы могут быть выполнены в любом подходящем порядке, если не указано иное или иное явным образом не противоречит контексту. Применение любого или всех примеров или иллюстративной формулировки (например, «такой как»), представленных в настоящем документе, предназначено только для лучшего освещения настоящего изобретения и не ориентировано на ограничение рамок настоящего изобретения, если не заявлено иное. Никакие формулировки настоящего описания не следует толковать как указывающие на незаявленный элемент, существенный для практического осуществления настоящего изобретения.

[00165] Конкретные варианты, описанные в настоящем документе, могут дополнительно быть ограничены в формуле изобретения с использованием формулировки «состоящий из» и/или «состоящий, преимущественно из». При использовании в формуле изобретения, как в записанном виде, так и в виде дополнений поправок, переходный термин «состоящий из» исключает любой элемент, этап или компонент, не указанный в формуле изобретения. Переходный термин «состоящий, преимущественно из» ограничивает рамки формулы изобретения до конкретных материалов или этапов и действий, которые материально не влияют на основные и новые характеристики. Варианты реализации настоящего изобретения, заявленные таким образом, являются по существу или точно описанными и включенными в настоящий документ.

[00166] Все патенты, патентные публикации и другие публикации, упоминаемые и указанные в настоящем описании, индивидуально и явно включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме для целей описания и раскрытия, например, композиций и способов, описанных в таких публикациях, которые должны быть использованы в связи с настоящим изобретением. Эти публикации представлены исключительно в отношении их описания до даты подачи настоящей заявки. В этой связи ничто не должно быть истолковано как признание того, что авторы настоящего изобретения не имеют права пометить задним числом такое описание на основании предшествующего изобретения или по любой другой причине. Все заявления в отношении даты или утверждения в отношении содержания этих документов основаны на информации, которой располагают заявители, и не представляют собой какое-либо допущение в отношении правильности дат или содержания этих документов.

1. Способ получения инъецируемой композиции кожного наполнителя, содержащей гиалуроновую кислоту (ГК), поперечно-сшитую с лизином, для лечения морщин на коже, включающий стадии поперечного сшивания гиалуроновой кислоты (ГК) с диаминным сшивателем в присутствии карбодиимидного связывающего агента, причем диаминный сшиватель представляет собой лизин или метиловый эфир лизина.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сшиватель представляет собой метиловый эфир лизина.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что связывающий агент представляет собой 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида гидрохлорид (EDC).

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что поперечное сшивание происходит в присутствии 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида гидрохлорида (EDC).

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что поперечное сшивание происходит в присутствии N-гидроксисукцинимида (NHS) или N-гидроксисульфосукцинимида (сульфоNHS).

6. Композиция кожного наполнителя, содержащая гиалуроновую кислоту (ГК), поперечно-сшитую с лизином, для лечения морщин на коже, содержащая компонент гиалуроновой кислоты, поперечно-сшитый с диаминным сшивателем в присутствии карбодиимидного связывающего агента,

где диаминный сшиватель представляет собой лизин или метиловый эфир лизина.

7. Композиция по п. 6, предназначенная для лечения морщин на коже в области слезной борозды, межбровных линий, периорбитальной области или лобной области.

8. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что сшиватель представляет собой метиловый эфир лизина.

9. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что связывающий агент представляет собой водорастворимый карбодиимид.

10. Композиция по п. 6, отличающаяся тем, что связывающий агент представляет собой 1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимида гидрохлорид (EDC).

11. Способ лечения тонких линий на коже, включающий введение композиции кожного наполнителя по п. 6 в дермальную область пациента.