Способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе



Способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе
Способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе
Способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе

Владельцы патента RU 2639382:

Федеральное государственное бюджетное учреждение Гематологический научный центр Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и онкогематологии, и может быть использовано для контроля качества исследуемого образца при мониторинге минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе методом проточной цитофлуориметрии аспирата костного мозга. Для этого вначале проводят лизис аспирата костного мозга и после центрифугирования оценивают клеточность полученной суспензии на наличие ядросодержащих клеток и до 3×106 ядросодержащих клеток образца из полученного осадка окрашивают моноклональными антителами, инкубируют и анализируют образец. При этом полученный осадок окрашивают с использованием шестицветной панели моноклональных антител: CD38, меченого флуоресцеин изотиоцианатом, CD138, меченого фикоэритрином, CD45, меченого аллофикоцианином-Су7, CD19, меченого перидинин-хлорофиллом-Су5.5, CD56, меченого фикоэретрином-Су7, CD27, меченого аллофикоцианином. После инкубации производят цитометрический анализ и выделяют всю популяцию плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45. Оценивают уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27 и при наличии на плазматических клетках двух или более признаков их аномальности, в частности отсутствие экспрессии CD19, отсутствие экспрессии CD45, отсутствие экспрессии CD27 или наличие экспрессии CD56, плазматическую клетку считают резидуальной. И при выявлении таких клеток в исследуемом образце его анализируют на наличие В-клеточных предшественников по маркерам CD45 и CD38, и при их количестве менее 0,33% от всей популяции ядросодержащих клеток суспензии костного мозга оценивают качество аспирата костного мозга как неудовлетворительное, то есть образец чрезмерно разведен периферической кровью, и во избежание ложноотрицательного результата на наличие минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе рекомендуют повторное проведение пункции костного мозга, а при наличии 0,33% и более В-клеточных предшественников оценивают качество образца костного мозга как удовлетворительное и указывают долю найденных резидуальных плазматических клеток от всех ядросодержащих клеток. Использование данного способа позволяет проводить оценку качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе, включающего его исследование на наличие популяции клеток многоцветной проточной цитофлуориметрией. 2 пр., 3 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и онкогематологии, и может быть использовано для контроля качества исследуемого образца костного мозга (КМ) при мониторинге минимальной резидуальной болезни (МРБ) при множественной миеломе (ММ) методом проточной цитофлуориметрии аспирата КМ.

Для оценки ответа на проводимую противоопухолевую терапию в ряде онкогематологических заболеваний выполняется исследование на наличие минимальной резидуальной болезни. МРБ - это состояние, связанное с наличием остаточных опухолевых клеток, не выявляющихся морфологическим методом, но обнаруживающихся более чувствительными методами: многоцветной проточной цитофлуориметрией (МПЦ), полимеразной цепной реакцией, секвенированием. Данные методы позволяют установить наличие остаточных опухолевых клеток с чувствительностью до 10-5-10-6. Актуальным является мониторинг МРБ при множественной миеломе - заболевании, связанном с клональной пролиферацией плазматических клеток (ПК) в костном мозге (реже в экстрамедуллярных очагах) и секрецией моноклональных иммуноглобулинов.

На сегодняшний день известны иммунологические методы лабораторной диагностики - иммунофиксация и иммунофенотипирование, позволяющие получать данные, необходимые для верификации диагноза ММ и оценки клинико-иммунологической ремиссии. Согласно рекомендациям Международной группы по мониторингу ММ иммунофиксация принята в качестве обязательного метода для верификации ремиссии и отсутствия МРБ (Зуева Е.Е., Русанова Е.Б. и др. Множественная миелома: современные направления иммунологического мониторинга. «Эффективная фармакотерапия. Онкология, Гематология и Радиология», 2011, №4; Менделеева Л.П., Вотякова О.М и др. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению множественной миеломы. «Гематология и трансфузиология». 2016. Т. 61. №1S (2). С. 1-24).

В мировых рекомендациях также представлены панели моноклональных антител (мАТ), необходимые для мониторинга МРБ при ММ с помощью МПЦ. При этом используют 6 и более цветов. А в качестве панели используют моноклональные антитела для мониторинга МРБ при ММ методом проточной цитофлуориметрии: CD38, CD138, CD19, CD45, CD20, CD27, CD28, CD56, CD81, CD117, CD200 [Stetler-Stevenson М. et al. Consensus guidelines for myeloma minimal residual disease sample staining and data acquisition // Cytometry Part B: Clinical Cytometry. - 2016. - T. 90. - №.1. - C. 26-30].

Антитела к антигенам дифференцировки CD38 и CD138 используются для четкой идентификации популяции плазматических клеток, а остальные антигены применяются для дифференциации аномальных и нормальных ПК по аберрантной экспрессии.

Материалом для проведения мониторинга МРБ при ММ является образец аспирата КМ. При осуществлении забора образца в связи со спецификой процедуры возможно значительное разведение КМ периферической кровью. ПК при ММ персистируют в КМ, и при значительном разведении образца кровью возможно получение ложноотрицательных результатов.

Известен способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга МРБ при множественной миеломе, для предотвращения получения ложноотрицательных результатов с целью констатации наличия значительной примеси периферической крови в КМ. Для решения данной задачи определяют количество зрелых (CD13+/CD16+) гранулоцитов, которые характерны для периферической крови. При этом для определения количества зрелых гранулоцитов необходимо дополнительно осуществлять окрашивание клеток моноклональными антителами к CD13 и CD16 и антителами, позволяющими дифференцировать гранулоциты от остальных клеток, например, комбинация CD45 и CD33. При обнаружении в исследуемом образце более 30% зрелых гранулоцитов делают вывод о том, что образец КМ имеет значительную примесь периферической крови и количественные данные о наличии МРБ не могут быть получены [Loken М.R. et al. Normalization of bone marrow aspirates for hemodilution in flow cytometric analyses // Cytometry Part B: Clinical Cytometry. - 2009. - T. 76. - №.1. - C. 27-36]. Использование данного метода оценки качества образца сказывается на общей стоимости анализа, так как увеличивается количество используемых мАТ к антигенам, которые нужно исследовать, что, в свою очередь, приводит к значительному увеличению и времени исследования. Данный источник информации рассмотрен нами в качестве ближайшего аналога.

Технический результат заявленного технического решения заключается в упрощении способа за счет исключения использования в процессе анализа дополнительных моноклональных антител, что ведет к экономии материальных средств и уменьшению времени проводимого исследования при высокой точности оценки.

Технический результат достигается тем, что оценку качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе проводят путем его исследования на наличие популяции клеток многоцветной проточной цитофлуориметрией, причем вначале проводят лизис аспирата костного мозга и после центрифугирования оценивают клеточность полученной суспензии на наличие ядросодержащих клеток и до 3×106 ядросодержащих клеток образца из полученного осадка окрашивают моноклональными антителами, инкубируют и анализируют образец, при этом полученный осадок окрашивают с использованием шестицветной панели моноклональных антител: CD38, меченого флуоресцеин изотиоцианатом, CD138, меченого фикоэритрином, CD45, меченого аллофикоцианином-Су7, CD19, меченого перидинин-хлорофиллом-Су5.5, CD56, меченого фикоэретрином-Су7, CD27, меченого аллофикоцианином, а после инкубации производят цитометрический анализ, выделяют всю популяцию плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45 и оценивают уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27 и при наличии на плазматических клетках двух или более признаков их аномальности, в частности отсутствие экспрессии CD19, отсутствие экспрессии CD45, отсутствие экспрессии CD27 или наличие экспрессии CD56, плазматическую клетку считают резидуальной и при выявлении таких клеток в исследуемом образце его анализируют на наличие В-клеточных предшественников по маркерам CD45 и CD38, и при их количестве менее 0,33% от всей популяции ядросодержащих клеток суспензии костного мозга оценивают качество аспирата костного мозга как неудовлетворительное, то есть образец чрезмерно разведен периферической кровью, и во избежание ложноотрицательного результата на наличие минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе рекомендуют повторное проведение пункции костного мозга, а при наличии 0,33% и более В-клеточных предшественников оценивают качество образца костного мозга как удовлетворительное и указывают долю найденных резидуальных плазматических клеток от всех ядросодержащих клеток.

Способ осуществляется следующим образом.

Плазматические клетки при ММ характеризуются аберрантным иммунофенотипом, что и легло в основу поиска данных клеток с помощью МПЦ. Задача заявляемого изобретения состоит в создании нового и точного способа оценки качества исследуемого образца КМ при осуществлении мониторинга МРБ при ММ. Для этого аспират костного мозга больного ММ в количестве 0,5 мл помещают в пробирку и вносят 4,5 мл разведенного лизирующего раствора PharmLyse (Becton Dickinson, США), после чего проводят инкубацию в течение 15 минут при комнатной температуре. Далее осуществляют центрифугирование в течение 3 мин 30 секунд, при ускорении 400 g, из пробирки удаляют супернатант и вносят 2 мл раствора CellWash (Becton Dickinson, США). Далее вновь проводят центрифугирование в течение 3 мин 30 секунд, при ускорении 400 g, из пробирки удаляют супернатант и оценивают клеточность полученной суспензии на наличие ядросодержащих клеток. Количество ядросодержащих клеток оценивалось по параметрам прямого и бокового светорассеяния. Около 3×106 ядросодержащих клеток образца из полученного осадка окрашивают моноклональными антителами. При этом используют шестицветную панель моноклональных антител: 1 мкл CD38, меченого флуоресцеин изотиоцианатом (FITC), 1 мкл CD138, меченого фикоэритрином (РЕ), 1 мкл CD45, меченого аллофикоцианином-Cy7 (АРС-Cy7), 1 мкл CD19, меченого перидинин-хлорофиллом-Cy5.5 (PerCP-Cy5.5), 1 мкл CD56, меченого фикоэретрином-Cy7 (PE-Cy7), 1 мкл CD27, меченого аллофикоцианином (АРС). Инкубируют 15 минут в темноте при комнатной температуре, добавляют 2 мл буферного раствора CellWash, далее центрифугируют в течение 3 мин 30 секунд, при ускорении 400 g, удаляют супернатант, добавляют 500 мкл буферного раствора CellWash и анализируют на проточном цитофлуориметре BD FACSCanto II (Becton Dickinson, США). Цитометрический анализ на проточном цитофлуориметре проводят незамедлительно. При этом выделяют всю популяцию плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45. Выявление одновременной экспрессии CD38, CD138 и CD45 позволяет уверенно отделить ПК от других лейкоцитов. Для последующего анализа создают логическое ограничение (гейт), объединяющее CD138+-клетки с определенными характеристиками светорассеяния. Позитивная экспрессия CD38 служит подтверждением принадлежности исследуемой популяции к ПК.

Затем оценивают уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27 и при наличии на плазматических клетках двух или более признаков их аномальности, в частности отсутствие экспрессии CD19, отсутствие экспрессии CD45, отсутствие экспрессии CD27 или наличие экспрессии CD56, плазматическую клетку считают резидуальной и при выявлении таких клеток проводят анализ на наличие В-клеточных предшественников по маркерам CD45 и CD38. Анализ на наличие В-клеточных предшественников также проводят на проточном цитофлуориметре по параметрам прямого и бокового светорассеяния и распределения интенсивности флуоресценции по каналу APC-Cy7 (CD45), в зависимости от интенсивности флуоресценции по каналу FITC (CD38). При наличии В-клеточных предшественников, имеющих среднюю экспрессию CD38 и низкую экспрессию CD45, менее 0,33% от всей популяции ядросодержащих клеток суспензии костного мозга, оценивают качество аспирата костного мозга как неудовлетворительное, то есть образец чрезмерно разведен периферической кровью и во избежание ложноотрицательного результата анализа МРБ при ММ рекомендуют повторное проведение пункции КМ, а при наличии 0,33% и более В-клеточных предшественников определяют качество аспирата костного мозга как удовлетворительное и указывают долю найденных резидуальных ПК от всех ядросодержащих клеток.

Было проведено исследование, как описано выше, аспиратов КМ 24-х здоровых доноров с выделением у них всей популяции ядросодержащих клеток, которые были окрашены моноклональными антителами. Было получено не менее 2×106 ядросодержащих клеток. Затем после выявления всей популяции плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45 оценивали уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27. При этом ни в одном образце не было обнаружено резидуальных клеток (ПК с аномальным иммунофенотипом). После чего осуществляли определение количества В-клеточных предшественников. На фигуре 1а представлен точечный график распределения интенсивности флуоресценции по каналу PerCP-Cy5.5 (CD19), в зависимости от бокового светорассеяния (SSC-A). На фигуре 1б представлен точечный график распределения интенсивности флуоресценции по каналу АРС-Cy7 (CD45), в зависимости от интенсивности флуоресценции по каналу FITC (CD38). Из гейта "CD19+ cells" выбираются только клетки со средней экспрессией CD38 и имеющие более низкую интенсивность флуоресценции по каналу APC-Cy7 (CD45), нежели зрелые лимфоциты, что соответствует гейту "B-progenitors". На фигуре 1в представлен точечный график распределения интенсивности флуоресценции (ИФ) по каналу РЕ (CD10), в зависимости от бокового светорассеяния (SSC-A). На графике показаны клетки из гейта "В-progenitors", и проиллюстрировано, что они являются положительными по каналу РЕ (CD10).

Из всех ядросодержащих клеток выбираются клетки, имеющие высокую ИФ по каналу PerCP-Cy5.5 (CD 19) и низкий показатель бокового светорассеяния (SSC-A), что соответствует гейту "CD19+ cells". В данном исследовании показано, что в КМ CD19+ клетки (фиг. 1а) со средней ИФ по каналу FITC (CD38) и более низким значением ИФ по каналу APC-Cy7 (CD45) (фиг. 1б), чем зрелые лимфоциты, имеют иммунофенотип CD19+/CD10+ (фиг. 1в), то есть являются В-клеточными предшественниками. Было определено среднее значение доли В-клеточных предшественников от всех ядросодержащих и плазматических клеток 1,13±0,60% (минимум 0,33%, максимум 2,63%, медиана 1,08%). Таким образом, если при исследовании образца КМ при мониторинге МРБ при ММ обнаруживается менее чем 0,33% клеток со средней ИФ по каналу FITC (CD38) и более низким значением ИФ по каналу APC-Cy7 (CD45) от всех ядросодержащих клеток, то образец считается разведенным периферической кровью, и количественное заключение о наличии МРБ не может быть дано, так как возможно получение ложноотрицательного результата.

Было также проведено исследование 314 образцов аспиратов костного мозга больных множественной миеломой, как описано выше. При этом количество В-предшественников менее 0,33% было выявлено в 12 образцах аспиратов костного мозга, что составило 3,8%. В этих случаях были даны заключения о неудовлетворительном качестве образца, то есть разведенном периферической кровью, и было рекомендовано проведение повторной пункции с последующим повторным анализом. В остальных случаях количество В-предшественников было более 0,33%, что указывало на удовлетворительное качество образца костного мозга. В заключение была указана доля найденных резидуальных плазматических клеток от всех ядросодержащих клеток. При проведении исследования каждого образца время, затраченное на его анализ составляло на 30 минут меньше по сравнению со временем исследования в ближайшем аналоге.

Примеры осуществления способа.

Пример 1. Больной Б., 56 лет. Диагноз: множественная миелома. Через 3 месяца после проведенной трансплантации аутологичных стволовых клеток крови было проведено исследование образца КМ больного. Вначале проводят лизис аспирата костного мозга и после центрифугирования оценивают клеточность полученной суспензии на наличие ядросодержащих клеток. Было выявлено 2,5×105 ядросодержащих клеток образца из полученного осадка, который окрашивали моноклональными антителами с использованием шестицветной панели: CD38, меченого флуоресцеин изотиоцианатом, CD138, меченого фикоэритрином, CD45, меченого аллофикоцианином-Cy7, CD19, меченого перидинин-хлорофиллом-Cy5.5, CD56, меченого фикоэретрином-Cy7, CD27, меченого аллофикоцианином. После инкубации производили цитометрический анализ и выделяли всю популяцию плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45. Оценили уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27. Было выявлено два признака аномальности: отсутствие экспрессии CD19 и наличие экспрессии CD56. Обнаружено 20 резидульных клеток. Далее был проведен анализ исследуемого образца на наличие В-клеточных предшественников по маркерам В-клеточных предшественников, имеющих среднюю экспрессию CD38 и низкую экспрессию CD45. Их количество составило 0,20% от всей популяции ядросодержащих клеток суспензии костного мозга. На фигуре 2 приведен точечный график распределения интенсивности флуоресценции по каналу APC-Cy7 (CD45), в зависимости от интенсивности флуоресценции по каналу FITC (CD38). Из гейта "CD19+ cells" выбирали только клетки со средней экспрессией CD38 и имеющие более низкую интенсивность флуоресценции по каналу APC-Cy7 (CD45), нежели зрелые лимфоциты, что соответствует гейту "B-progenitors". Так как рассчитанное количество В-клеточных предшественников менее 0,33% (0,20%), то отмечено неудовлетворительное качество образца, то есть что он разведен периферической кровью, и в заключении не могут быть представлены количественные данные о наличии МРБ. Было рекомендовано провести повторно пункцию костного мозга у данного больного с последующим исследованием пунктата.

Пример 2. Больной К., 60 лет. Диагноз: множественная миелома. Через 6 месяцев после проведенной трансплантации аутологичных стволовых клеток крови было проведено исследование образца КМ больного. Вначале проводят лизис аспирата костного мозга и после центрифугирования оценивают клеточность полученной суспензии на наличие ядросодержащих клеток. Было выявлено 1,5×105 ядросодержащих клеток образца из полученного осадка, который затем окрашивали моноклональными антителами с использованием шестицветной панели: CD38, меченого флуоресцеин изотиоцианатом, CD138, меченого фикоэритрином, CD45, меченого аллофикоцианином-Cy7, CD19, меченого перидинин-хлорофиллом-Cy5.5, CD56, меченого фикоэретрином-Cy7, CD27, меченого аллофикоцианином. После инкубации производили цитометрический анализ и выделяли всю популяцию плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45. Оценивали уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27. Было выявлено два признака аномальности: отсутствие экспрессии CD19, отсутствие экспрессии CD45. Обнаружена 31 резидульная клетка. Далее был проведен анализ исследуемого образца на наличие В-клеточных предшественников по маркерам В-клеточных предшественников, имеющих среднюю экспрессию CD38 и низкую экспрессию CD45. При анализе В-клеточных предшественников обнаружено, что их количество составило 0,41% от всех ядросодержащих клеток. На фигуре 3 приведен точечный график распределения интенсивности флуоресценции по каналу APC-Cy7 (CD45), в зависимости от интенсивности флуоресценции по каналу FITC (CD38). Из гейта "CD19+ cells" выбираются только клетки со средней экспрессией CD38 и имеющие более низкую интенсивность флуоресценции по каналу APC-Cy7 (CD45), нежели зрелые лимфоциты, что соответствует гейту "B-progenitors". Количество этих клеток составило 0,41% от всех ядросодержащих клеток.

Так как рассчитанное количество В-клеточных предшественников более 0,33% (0,41%), то определяют качество аспирата костного мозга как удовлетворительное, и в заключении было указано на наличие резидуальной болезни в количестве 0,021% ПК от всех ядросодержащих клеток.

Таким образом, заявленный способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе позволяет оценивать качество образца без применения дополнительных моноклональных антител для определения В-клеточных предшественников, что ведет к экономии материальных средств и уменьшению времени проводимого исследования, которое сокращается на 30 минут. При этом точность оценки сохраняется на прежнем уровне.

Способ оценки качества аспирата костного мозга в процессе проведения мониторинга минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе, включающий его исследование на наличие популяции клеток многоцветной проточной цитофлуориметрией, причем вначале проводят лизис аспирата костного мозга и после центрифугирования оценивают клеточность полученной суспензии на наличие ядросодержащих клеток и до 3×106 ядросодержащих клеток образца из полученного осадка окрашивают моноклональными антителами, инкубируют и анализируют образец, отличающийся тем, что полученный осадок окрашивают с использованием шестицветной панели моноклональных антител: CD38, меченого флуоресцеин изотиоцианатом, CD138, меченого фикоэритрином, CD45, меченого аллофикоцианином-Cy7, CD19, меченого перидинин-хлорофиллом-Cy5.5, CD56, меченого фикоэретрином-Cy7, CD27, меченого аллофикоцианином, а после инкубации производят цитометрический анализ, выделяют всю популяцию плазматических клеток на основе экспрессии маркеров CD38, CD138 и CD45 и оценивают уровни экспрессии на плазматических клетках маркеров CD19, CD56, CD45 и CD27, и при наличии на плазматических клетках двух или более признаков их аномальности, в частности отсутствие экспрессии CD19, отсутствие экспрессии CD45, отсутствие экспрессии CD27 или наличие экспрессии CD56, плазматическую клетку считают резидуальной и при выявлении таких клеток в исследуемом образце его анализируют на наличие В-клеточных предшественников по маркерам CD45 и CD38, и при их количестве менее 0,33% от всей популяции ядросодержащих клеток суспензии костного мозга оценивают качество аспирата костного мозга как неудовлетворительное, то есть образец чрезмерно разведен периферической кровью, и во избежание ложноотрицательного результата на наличие минимальной резидуальной болезни при множественной миеломе рекомендуют повторное проведение пункции костного мозга, а при наличии 0,33% и более В-клеточных предшественников оценивают качество образца костного мозга как удовлетворительное и указывают долю найденных резидуальных плазматических клеток от всех ядросодержащих клеток.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для визуализации биологических объектов. Для этого осуществляют мечение анализируемых клеточных компонент, клеток, тканей или органов флуоресцентными зондами.

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии и эндокринологии, и представляет собой способ диагностики степени тяжести гиперандрогении, включающий определение индекса свободного тестостерона (ИСТ) на основе глобулина, связывающего половые стероиды, и тестостерона крови, отличающийся тем, что ИСТ рассчитывают по формуле где Тобщий – уровень общего тестостерона, нмоль/л, ГСПС – уровень глобулина, связывающего половые стероиды, нмоль/л, и при величине ИСТ от 31 до 36 и наличии клинических проблем, выбранных из гирсутизма, дермопатии и нарушений менструального цикла, диагностируют легкую степень тяжести заболевания, при величине ИСТ от 36 до 100 диагностируют среднюю степень тяжести заболевания, а при величине ИСТ более 100 диагностируют тяжелую степень тяжести заболевания.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и представляет собой способ определения в одной постановке цист лямблий и ооцист криптоспоридий в биологическом материале - кале, в смывах объектов окружающей среды и в почве, заключающийся в подготовке пробы, внесении в пробу иммуномагнитных частиц, иммунохимическом связывании, в результате чего образуются агрегаты цист и ооцист с магнитными частицами, улавливании агрегатов цист и ооцист в магнитном поле, отмывке зафиксированных агрегатов цист и ооцист буферным раствором, диссоциации меркаптоэтанолом или соляной кислотой, разделении цист, ооцист и магнитных частиц в магнитном поле, переносе выделенных цист и ооцист на предметное стекло для последующего иммунофлуоресцентного мечения и последующей оценки микроскопированием с применением насадки «Опти-Люм» на микроскоп, где результат учитывают исходя из того, что цисты лямблий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от округлых до овальных от 8 до 14 мкм в длину на 7-10 мкм в ширину, с ярко подсвеченными краями, ооцисты же криптоспоридий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических от 3 до 5 мкм в диаметре, с ярко подсвеченными краями.
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, детским инфекционным болезням, и предназначено для диагностики формы тяжести вызванного вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) и бактериями инфекционного мононуклеоза у детей.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения аналитической тест-системы на основе суспензионных микрочипов для детекции маркеров заболеваний.

Изобретение относится к области медицинской диагностики и касается способа прогнозирования риска развития преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования степени вероятности выполнения циторедуктивной операции в оптимальном объеме у больных диссеминированным раком яичников.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для обнаружения антитела в тестируемом образце, содержащем жидкость организма субъекта-млекопитающего.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и неврологии, и предназначено для прогнозирования развития рассеянного склероза (PC) у больных с оптическим невритом (ОН) подострого течения.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к трасплантологии, и может быть использована для обнаружения циркулирующих в крови клеток, полученных из ткани пуповины человека, после их введения.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, перинатологии и клинической иммунологии, и предназначено для прогнозирования эффективности стандартного лечения задержки роста плода. У женщин в сроке 32-36 недель беременности в периферической крови определяют относительное содержание CD27+ клеток в популяции CD19+ В-лимфоцитов. При его значении, равном 19,4% или менее, прогнозируют эффективность стандартного лечения задержки роста плода. Использование изобретения обеспечивает точность, чувствительность и специфичность прогнозирования эффективности стандартного лечения задержки роста плода, что позволяет определить тактику ведения беременных женщин и своевременно провести дополнительные лечебные мероприятия в группе женщин при данной патологии беременности. 1 табл., 3 пр.

Способ определения стадии грибовидного микоза относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и может быть использован для определения стадии грибовидного микоза - наиболее часто встречаемой нозологической разновидности первичных кожных лимфом. Сущность способа: у больного берут биопсию кожи из очага поражения, затем проводят иммуногистохимические исследования с использованием моноклональных антител CD3, CD4 и Ki67 путем компьютерной морфометрии. Затем усредняют данные показатели и рассчитывают суммарную удельную значимость иммунопозитивности указанных моноклональных антител по формуле: F=1,75*Х1+2,03*Х2+12,81*Х3+0,22, где: F - суммарная удельная значимость иммунопозитивности моноклональных антител CD3, CD4 и Ki67; X1 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD3; Х2 - среднее значение объемной доли позитивной окраски CD4; Х3 - среднее значение объемной доли позитивной окраски Ki67; 1,7; 2,03; 12,81 и 0,22 - поправочные коэффициенты. При значении F от 0,220 до 1,535 диагностируют эритематозно-пятнистую стадию, при значении F от 1,536 до 2,888 диагностируют инфильтративно-бляшечную стадию, а при значении F от 2,889 до 4,700 - опухолевую стадию грибовидного микоза. Изобретение обеспечивает повышение объективности и точности диагностирования стадии грибовидного микоза. 8 ил., 4 табл., 3 пр.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложены антитело и его фрагмент, которые связываются с фосфо-эпитопом на белке Тау, а также кодирующие их полинуклеотиды; линии клеток, продуцирующие антитела; вектор, содержащая его клетка-хозяин и способ получения антитела и его функционального фрагмента. Кроме того, предложены фармацевтический состав, способ лечения, облегчения или защиты от таупатии; способ индукции пассивной иммунной реакции у животного; способ диагностики связанного с белком тау заболевания, расстройства или состояния или предрасположенности к связанному с белком тау заболеванию; способ мониторинга минимального остаточного заболевания у пациента после лечения антителом против тау; способ прогнозирования ответа больного на лечение антителом против тау; способы обнаружения мультимеров фосфо-Тау (pTau) в образце мозга, в том числе посмертного обнаружения; диагностический набор. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии заболеваний, связанных с Тау-белком. 19 н. и 23 з.п. ф-лы, 10 ил., 15 табл., 11 пр.

Изобретение относится к области иммунологии. Предложено гуманизированное антитело, специфичное к STEAP-1, и его антигенсвязывающий фрагмент. Описаны: полинуклеотид, кодирующий антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, вектор, клетка-хозяин, способ получения анти-STEAP-1-антитела. Также раскрыты: способ визуализации опухоли, фармацевтическая композиция, лекарственное средство для лечения клеточно-пролиферативного нарушения, иммуноконъюгаты и цистеин-встроенное антитело на основе указанного антитела. Данное изобретение обеспечивает новые антитела к STEAP-1 и может найти применение в медицине. 14 н. и 16 з.п. ф-лы, 29 ил., 2 табл., 9 пр.
Изобретение используют в медицине, педиатрии, инфекционных болезнях и касается способа оценки активности инфекции, вызванной вирусами герпеса 4, 5, 6 типа у детей. Сущность способа: у детей с подозрением на герпесвирусную инфекцию (ГВИ) 4, 5, 6 типа определяют количество ДНК вируса методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе из эпителия ротоглотки и при количестве ДНК более 1000 копий на 105 клеток для 4 типа ГВИ, и более 10000 копий на 105 клеток для 5 и 6 типа ГВИ, определяют активную стадию инфекции. Изобретение обеспечивает объективную оценку герпесвирусной инфекции 4, 5, 6 типа по показателям вирусной нагрузки, отражающим активность инфекционного процесса с помощью неинвазивного экспресс-метода со 100%-ной специфичностью и высокой чувствительностью. 6 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к бис-Met-гистонам, и может быть использовано в медицине. Молекула нуклеиновой кислоты кодирует полипептид, состоящий из двух остатков метионина в качестве первого и второго N-концевых аминокислотных остатков, соединенных через пептидную связь со зрелым эукариотическим гистоном H1. 3. Полипептид получают путем культивирования клетки-хозяина, трансформированной вектором экспрессии, включающим указанную молекулу нуклеиновой кислоты. Полипептид используют в составе фармацевтической композиции для лечения рака, бактериальных, вирусных или грибковых инфекций. Также полипептид используют в составе композиции для диагностики пациента в отношении наличия ответа на фармацевтическую композицию, содержащую указанный полипептид, или в отношении излечимости с ее помощью. Изобретение позволяет увеличить эффективность рекомбинантной экспрессии и облегчить определение указанного полипептида в присутствии эндогенных гистонов при сохранении биологической активности зрелого эукариотического гистона H1. 3. 12 н. и 4 з.п. ф-лы, 3 ил., 6 табл., 7 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии. Предложен способ морфологической диагностики тяжести преэклампсии. Проводят оценку уровня оптической плотности цитоплазмы синцитиотрофобласта промежуточных ворсин плаценты посредством иммуногистохимии с первичными антителами к DAI-1. При значениях оптической плотности менее 0,15 у.е. диагностируют преэклампсию тяжелого течения, при значениях выше 0,15 у.е. - преэклампсию умеренного течения и артериальную гипертензию беременных. Изобретение обеспечивает эффективную диагностику тяжести преэклампсии на основании оценки экспрессии ДНК-распознающих рецепторов DAI-1 в ткани плаценты. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, патологической анатомии, а также к гистологии, цитологии и клеточной биологии, и может быть использовано в диагностике в миопатии центрального стержня. Проводят иммуногистохимическое выявление маркеров наружной митохондриальной мембраны и митохондриального комплекса IV: готовят гистологические образцы-срезы, наносят на них усилитель флуоресцентного сигнала, далее на срезы наносят белок-блокатор, обеспечивая уменьшение фонового неспецифического окрашивания, и затем наносят вторичные флуоресцентные антитела и фотозащитный реагент с последующим исследованием с помощью люминесцентного микроскопа. Осуществление изобретения позволяет повысить надежность диагностики миопатии центрального стержня за счет расширения технических возможностей исследования биоптатов скелетных поперечнополосатых мышц пациентов при использовании иммуногистохимического метода на парафиновых биопсийных препаратах. 2 ил.,1 пр.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для определения степени индивидуального генетического риска атеросклероза, ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда. Изобретение основано на измерении степени гетероплазмии мтДНК по мутациям 652ins/delG, A750G, A1555G, С3256Т, Т3336С, С5178А, 8516insА/С/АС, 8528insA, 8930insG, G9477A, 10958insC, A12308G, G12372A, 13047insC, 13050insC, C14766T, G15059A и A15326G. Измеренные показатели гетероплазмии используют в качестве переменных величин в формуле, по которой рассчитывают степень суммарной мутационной нагрузки митохондриального генома. При превышении порогового значения данного показателя, принятого равным 40,3 балла, диагностируют наличие атеросклероза и индивидуальной генетической предрасположенности к атеросклерозу, ишемической болезни сердца и инфаркту миокарда.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложены способ диагностики рака предстательной железы и способ мониторинга реакции на терапию рака предстательной железы, включающие контактирование раковых клеток эпителиального происхождения с анти-STEAP-l антителом, которое специфически связывается с простата-специфическим маркером STEAP-1 с KD≤1000 нМ, где анти-STEAP-1 антитело представляет собой антитело 15А5, продуцированное клеткой гибридомы, имеющей номер депонирования микроорганизмов РТА-12259. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные способы диагностики и мониторинга рака предстательной железы. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 11 ил., 8 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2016-12-26 2017-12-30T11:36:46
Наверх