Новые соединения

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающим свойствами индуктора интерферона α (IFN-α) и фактора некроза опухолей α (TNF-α). Соединения могут найти применение для лечения аллергических заболеваний и воспалительных состояний, например аллергического ринита и астмы, инфекционных заболеваний и рака. Соединения могут быть также полезны в качестве вакцинных адъювантов. В формуле (I)

R₁ представляет собой н-С_3-6алкил; R₂ представляет собой водород или метил; R₃ представляет собой водород или С_1-6алкил; m означает целое число, имеющее значение от 1 до 4. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 пр.

 

Техническая область изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, способам их получения, композициям, содержащим их, к их применению в лечении различных расстройств, в частности аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, например аллергического ринита и астмы, инфекционных заболеваний и рака, и в качестве вакцинных адъювантов.

Предшествующий уровень техники

Позвоночные животные постоянно находятся под угрозой заражения микроорганизмами, и у них развиты механизмы иммунной защиты для уничтожения инфекционных патогенов. У млекопитающих эта иммунная система содержит две ветви: врожденный иммунитет и приобретенный иммунитет. Первой линией защиты хозяина является врожденная иммунная система, которая опосредована макрофагами и дендритными клетками. Приобретенный иммунитет вызывает уничтожение патогенов на последних стадиях инфекции, а также обеспечивает формирование иммунологической памяти. Приобретенный иммунитет высокоспецифичен благодаря широкому спектру лимфоцитов с антиген-специфическими рецепторами, которые претерпели перестройку генов.

Основную роль в формировании эффективного врожденного иммунного ответа у млекопитающих выполняют механизмы, вызывающие индуцирование интерферонов и других цитокинов, которые воздействуют на клетки, вызывая ряд эффектов. У человека интерфероны типа I являются семейством родственных белков, кодируемых генами, расположенными на хромосоме 9 и кодирующими по меньшей мере 13 изоформ интерферона альфа (IFNα) и одну изоформу интерферона бета (IFNβ). Интерферон был впервые описан как вещество, которое может защищать клетки от вирусной инфекции (Isaacs & Lindemann, J. Virus Interference. Proc. R. Soc. Lon. Ser. В. Biol. Sci. 1957: 147, 258-267). Рекомбинантный IFNα был первым разрешенным к применению биологическим терапевтическим средством и стал важной терапией при вирусных инфекциях и при раке. Помимо прямой противовирусной активности на клетках, интерфероны известны как мощные модуляторы иммунного ответа, действующие на клетках иммунной системы (Gonzalez-Navajas J. M. et al Nature Reviews Immunology, 2012; 2, 125-35).

Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой семейство из десяти образраспознающих рецепторов, описанных у человека (Gay, N.J. et al, Annu. Rev. Biochem., 2007: 46, 141-165). TLR экспрессируются преимущественно врожденными иммунными клетками, где их роль заключается в контролировании окружения в отношении признаков заражения и, при активации, в мобилизации защитных механизмов, целью которых является уничтожение инвазивных патогенов. Ранние врожденные иммунные ответы, запускаемые TLR, ограничивают распространение инфекции, а провоспалительные цитокины и хемокины, которые они индуцируют, приводят к рекрутингу и активации антиген-презентирующих клеток, В-клеток и Т-клеток. TLR могут модулировать характер адаптивных иммунных ответов, обеспечивая соответствующую защиту через активацию дендритных клеток и высвобождение цитокинов (Akira S. et al, Nat. Immunol., 2001: 2, 675-680). Профиль ответа, наблюдаемого от разных агонистов TLR, зависит от типа активируемых клеток.

TLR7 является членом подгруппы TLR (TLR 3, 7, 8 и 9), который локализуется в эндосомальном компартменте клеток и специализируется на распознавании чужеродных нуклеиновых кислот. TLR7 играет ключевую роль в противовирусной защите посредством распознавания оцРНК (одноцепочечной РНК) (Diebold S.S. et al, Science, 2004: 303, 1529-1531; и Lund J. M. et al, PNAS, 2004: 101, 5598-5603). TLR7 имеет ограниченный профиль экспрессии у человека и экспрессируется преимущественно В-клетками и плазмацитоидными дендритными клетками (pDC) и в меньшей степени моноцитами. Плазмацитоидные DC являются уникальной популяцией дендритных клеток лимфоидного происхождения (0,2-0,8% мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС)), которые являются основными продуцирующими интерфероны типа I клетками, секретирующими высокие уровни интерферона-альфа (IFNα) и интерферона-бета (IFNβ) в ответ на вирусные инфекции (Liu Y-J, Annu. Rev. Immunol., 2005: 23, 275-306).

Введение соединения, имеющего небольшую молекулу, которое способно стимулировать врожденный иммунный ответ, включая активацию интерферонов типа I и других цитокинов через Toll-подобные рецепторы, может стать важной стратегией для лечения или предупреждения заболеваний человека. Были описаны имеющие небольшую молекулу агонисты TLR7, которые могут индуцировать интерферон-альфа у животных и у человека (Takeda K. et al, Аппи. Rev. Immunol., 2003: 21, 335-76). Агонисты TLR7 включают имидазохинолиновые соединения, такие как имиквимод и резиквимод, оксоадениновые аналоги, а также нуклеозидные аналоги, такие как локсорибин и 7-тиа-8-оксогуанозин, которые, как давно известно, индуцируют интерферон-альфа (Czarniecki. M., J. Med, Chem., 2008: 51, 6621-6626; Hedayat M. et al, Medicinal Research Reviews, 2012: 32, 294-325). Этот тип иммуномодуляторной стратегии перспективен для идентификации соединений, которые могут быть полезны в лечении аллергических заболеваний (Moisan J. et al, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2006: 290, L987-995), вирусных инфекций (Horcroft N.J. et al, J. Аntimicrob. Chemther, 2012: 67, 789-801), рака (KriegA., Curr. Oncol. Rep., 2004: 6(2), 88-95), других воспалительных состояний, таких как синдром раздраженного кишечника (Rakoff-Nahoum S., Cell, 2004, 23, 118(2): 229-41), и в качестве вакцинных адъювантов (Persing et al. Trends Microbiol. 2002: 10(10 Suppl), S32-7).

Более конкретно, аллергические заболевания связаны с Th2-смещенным иммунным ответом на аллергены. Th2 ответы связаны с повышенными уровнями IgE, который в результате его воздействия на тучные клетки промотирует гиперчувствительность к аллергенам, вызывая симптомы, наблюдаемые, например, при астме и аллергическом рините. У здоровых индивидуумов иммунный ответ на аллергены является более сбалансированным со смешанным Th2/Th1 и регуляторным Т-клеточным ответом. Было показано, что лиганды к TLR7 снижают высвобождение Th2 цитокина и усиливают высвобождение Th1 цитокина in vitro и улучшают воспалительные ответы Th2-типа в аллергических легочных моделях in vivo (Duechs M.J., Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 2011: 24, 203-214; Fill L. et al, J. All. Clin. Immunol., 2006: 118, 511-517; Tao et al, Chin. Med. J., 2006: 119, 640-648; Van LP. Eur. J. Immunol., 2011: 41, 1992-1999). Таким образом, лиганды к TLR7 имеют потенциал повторно балансировать иммунный ответ, наблюдаемый у аллергических индивидуумов, и приводить к изменению течения заболевания. Недавние клинические исследования с использованием агониста TLR7 показали, что повторная интраназальная стимуляция TLR7 вызывает длительное снижение восприимчивости к аллергену у пациентов с аллергическим ринитом и аллергической астмой (Greiff L. Respiratory Research, 2012: 13, 53; Leaker B.R. et al, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 2012: 185, A4184).

При поиске новых небольших молекул-индукторов человеческого интерферона IFNα была разработана стратегия анализа для определения характеристик небольшой молекулы (независимо от механизма), которая основана на стимуляции первичных донорских клеток или цельной крови человека соединениями, и она раскрыта в данном документе.

Краткое изложение сущности изобретения

В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их солям:

где R₁ представляет собой н-С_3-6алкил;

R₂ представляет собой водород или метил;

R₃ представляет собой водород или C_1-6алкил;

m означает целое число, имеющее значение от 1 до 4.

Было показано, что некоторые соединения по изобретению являются индукторами человеческого интерферона и могут обладать желаемым профилем способности к развитию по сравнению с известными индукторами человеческого интерферона. Кроме того, некоторые соединения по изобретению могут также проявлять селективность к IFNα относительно TNFα. Соединения, которые индуцируют человеческий интерферон, могут быть полезны в лечении различных расстройств, например в лечении аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, например аллергического ринита и астмы, в лечении инфекционных заболеваний и рака. Соответственно, изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль. Настоящее изобретение также относится к способам лечения расстройств, связанных с ним, с использованием соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

Соединения по изобретению можно применять также в качестве вакцинных адъювантов. Следовательно, настоящее изобретение также относится к вакцинной композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и антиген или антигенную композицию.

Некоторые соединения по изобретению являются сильнодействующими иммуномодуляторами, и, соответственно, следует соблюдать осторожность при обращении с ними.

Подробное описание изобретения

В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I) и их солям:

где R₁ представляет собой н-С_3-6алкил;

R₂ представляет собой водород или метил;

R₃ представляет собой водород или C_1-6алкил;

m означает целое число, имеющее значение от 1 до 4.

В дополнительном аспекте R₁ представляет собой н-бутил.

В дополнительном аспекте R₂ представляет собой водород.

В дополнительном аспекте R₂ представляет собой метил.

В дополнительном аспекте m означает целое число, имеющее значение 1, 2, 3 или 4.

В дополнительном аспекте m означает целое число, имеющее значение 1 или 3.

В дополнительном аспекте R₃ представляет собой изопропил или этил.

Примеры соединений формулы (I) приведены в следующей далее группе, и они составляют еще один аспект изобретения:

2-бутил-7-(5-(пиперазин-1-ил)пентил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин,

2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пентил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин,

2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пентил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин,

2-бутил-7-(5-(4-этилпиперазин-1-ил)пентил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин,

2-бутил-7-(3-(пиперазин-1-ил)пропил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин,

2-бутил-7-(4-(4-изопропилпиперазин-1-ил)бутил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин и

2-бутил-7-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)пропил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин; и их соли.

В данном документе термин "алкил" относится к насыщенной углеводородной цепи, имеющей конкретное количество атомов-членов цепи. Если не указано иное, термин "алкил" охватывает прямые и разветвленные алкильные группы. Например, C_1-6алкил относится к насыщенной прямой или разветвленной углеводородной цепи, имеющей от 1 до 6 атомов углерода, такой как этил и изопропил, и н-С_3-6алкил относится к насыщенной прямой углеводородной цепи, имеющей от 3 до 6 атомов углерода, такой как н-пропил и н-бутил.

Следует иметь в виду, что ссылки на соединения по изобретению означают соединение формулы (I) в форме свободного основания или в форме соли, например фармацевтически приемлемой соли.

В одном аспекте изобретения соединение формулы (I) находится в форме свободного основания.

Соли соединений формулы (I) включают фармацевтически приемлемые соли и соли, которые могут не быть фармацевтически приемлемыми, но могут быть полезными в получении соединений формулы (I) и их фармацевтически приемлемых солей. В одном аспекте изобретения соединение формулы (I) находится в форме фармацевтически приемлемой соли. Соли могут быть получены из некоторых неорганических или органических кислот.

Примерами солей являются фармацевтически приемлемые соли. Фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты. Информацию о подходящих солях смотри в Berge et al., J. Pharm. Sci., 66: 1-19 (1977).

Примеры фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты соединения формулы (I) включают соли присоединения неорганических кислот, таких как, например, соляная кислота, бромоводородная кислота, ортофосфорная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота или серная кислота, или органических кислот, таких как, например, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, пара-толуолсульфоновая кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, лимонная кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, салициловая кислота, малеиновая кислота, глицерофосфорная кислота, винная, бензойная, глутаминовая, аспарагиновая, бензолсульфоновая, нафталинсульфоновая, например 2-нафталинсульфоновая, гексановая кислота или ацетилсалициловая кислота.

В объем изобретения входят все возможные стехиометрические и нестехиометрические формы солей соединений формулы (I), например соль дималеат или гемисукцинат соединения формулы (I).

Соли могут быть образованы с использованием методов, общеизвестных в данной области, например путем осаждения из раствора с последующей фильтрацией или путем выпаривания растворителя.

Обычно фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты может быть образована в результате реакции соединения формулы (I) с подходящей кислотой (такой как бромоводородная, соляная, серная, малеиновая, пара-толуолсульфоновая, метансульфоновая, нафталинсульфоновая или янтарная кислота), возможно в подходящем растворителе, таком как органический растворитель, с образованием соли, которую обычно выделяют, например, кристаллизацией или фильтрацией.

Понятно, что многие органические соединения могут образовывать комплексы с растворителями, в которых они реагируют или из которых они осаждаются или кристаллизуются. Эти комплексы известны как "сольваты". Например, комплекс с водой известен как "гидрат". Растворители с высокими точками кипения и/или растворители с высокой склонностью к образованию водородных связей, такие как вода, этанол, изопропиловый спирт и N-метилпирролидинон, могут быть использованы для образования сольватов. Методы идентификации сольватов включают, без ограничения, ЯМР и микроанализ. Сольваты соединений формулы (I) входят в объем изобретения. В данном документе термин "сольват" охватывает сольваты как соединения в форме свободного основания, так и в форме любой его соли.

Некоторые соединения по изобретению могут содержать хиральные атомы и/или кратные связи и поэтому могут существовать в одной или более стереоизомерных формах. Настоящее изобретение охватывает все стереоизомеры соединений по изобретению, включая оптические изомеры, будь то индивидуальные стереоизомеры или их смеси, в том числе рацемические модификации. Любой стереоизомер может содержать менее 10% масс. например менее 5% масс. или менее 0,5% масс. любого другого стереоизомера. Например, любой оптический изомер может содержать менее 10% масс. например менее 5% масс. или менее 0,5% масс. его антипода.

Некоторые соединения по изобретению могут существовать в таутомерных формах. Следует иметь в виду, что настоящее изобретение охватывает все таутомеры соединений по изобретению, будь то индивидуальные таутомеры или их смеси.

Соединения по изобретению могут находиться в кристаллической или аморфной форме. К тому же, некоторые кристаллические формы соединений по изобретению могут существовать в виде полиморфов, которые все входят в объем настоящего изобретения. Особый интерес представляют наиболее термодинамически стабильные полиморфные формы соединений по изобретению.

Полиморфные формы соединений по изобретению могут быть охарактеризованы и дифференцированы с использованием ряда общепринятых аналитических методов, включая, без ограничения, дифракцию рентгеновских лучей на порошке (ДРЛП), инфракрасную спектроскопию (ИК), рамановскую спектроскопию, дифференциальную сканирующую калориметрию (ДСК), термогравиметрический анализ (ТГА) и твердотельный ядерный магнитный резонанс (ттЯМР).

Настоящее изобретение также охватывает все подходящие изотопные варианты соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солей. Изотопный вариант соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли определяют как вариант, в котором по меньшей мере один атом заменен атомом, имеющим то же самое атомное число, но атомную массы, отличающуюся от атомной массы, обычно встречающейся в природе. Примеры изотопов, которые могут быть введены в соединения по изобретению, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фтора и хлора, такие как ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁷O, ¹⁸O, ¹⁸F и ³⁶Cl соответственно. Некоторые изотопные варианты соединения формулы (I) или его соли или сольвата, например те, в которые введен радиоактивный изотоп, такой как ³Н или ¹⁴С, полезны в исследованиях тканевого распределения лекарственных средств и/или субстратов. Тритиированный изотоп, т.е. ³Н, и изотоп углерод-14, т.е. ¹⁴С, являются особенно предпочтительными благодаря легкости их получения и детектирования. Кроме того, замещение изотопами, такими как дейтерий, т.е. ²Н, может иметь некоторые терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например увеличением периода полувыведения in vivo или снижением требований по дозировке, и, следовательно, может быть предпочтительным в некоторых обстоятельствах. Изотопные варианты соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, могут быть получены, как правило, обычными способами, такими как иллюстративные способы или получения, описанные в Примерах, приведенных ниже, с использованием соответствующих изотопных вариантов подходящих реагентов.

Из указанного выше очевидным образом следует, что в объем изобретения входят сольваты, гидраты, изомеры и полиморфные формы соединений формулы (I) и их солей и сольватов.

Получение соединений

Соединения формулы (I) и их соли могут быть получены по описанной ниже методологии, составляющей дополнительные аспекты данного изобретения.

Соединения формулы (I) и их соли могут быть получены по описанной ниже методологии, составляющей дополнительные аспекты данного изобретения.

Соответственно, предложен способ получения соединения формулы (I), включающий удаление защитных групп с соединения формулы (II):

где R₁, R₂ и m такие, как определено выше для соединения формулы (I), R₄ представляет собой R₃ или является подходящей защитной группой, такой как, например, трет-бутоксикарбонил (ВОС), R₅ представляет собой защитную группу, такую как, например, бензилоксиметил (ВОМ), 2-(триметилсилил) этоксиметил или пара-толуолсульфонил, и после этого, если требуется, получение соли образованного таким образом соединения.

Например, соединение формулы (II), где R5 эквивалентен ВОМ, растворяют в подходящем растворителе, например в метаноле или этаноле, и пропускают через подходящий катализатор, например 10%-ный палладий на углероде, в присутствии водорода при подходящей температуре, например 20-60°С, в аппарате, таком как Thales H-cube™. Продукт (I) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.

Например, соединение формулы (II), где R₄ представляет собой ВОС, растворяют в подходящем растворителе, например метаноле, и обрабатывают раствором хлористого водорода в подходящем растворителе, например в 1,4-диоксане, при температуре окружающей среды в течение подходящего периода времени, например 21 часа, с получением соединения формулы (II), где R₄=H, которое после удаления R₅, как указано выше, может давать соединение формулы (I), где R₃=H.

Соединение формулы (II) может быть получено в результате взаимодействия соединения формулы (III):

где R₁, R₂, R₄, R₅ и m такие, как определено выше, с водородом в присутствии катализатора.

Например, соединение формулы (III) растворяют в подходящем растворителе, например в метиловом спирте или в этиловом спирте, и пропускают через подходящий катализатор, например 10%-ный палладий на углероде, в присутствии водорода при подходящей температуре, например 20-60°С, в подходящем проточном аппарате гидрирования, таком как Thales Н-Cube™. Продукт (II) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.

Когда защитная группа R₅ представляет собой группу ВОМ, реакция восстановления алкина может протекать с одновременным удалением защитной группы с получением соединения формулы (I) напрямую.

Соединение формулы (III) может быть получено в результате взаимодействия соединения формулы (IV):

где R₁, R₂ и R₅ такие, как определено выше, a Y представляет собой уходящую группу, например галоген, такой как йод или бром, или алкилсульфонат, такой как трифторметансульфонат, с соединением формулы (V):

где R₄ и m такие, как определено выше.

Например, соединение формулы (IV) и соединение формулы (V) растворяют в подходящем растворителе, например DMF, в присутствии йодида меди(I), подходящего катализатора, например дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия(II) и подходящего основания, например триэтиламина, и нагревают при подходящей температуре, например 20-55°С, в течение подходящего периода времени, например 0,5-17 часов. Продукт (III) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединение формулы (V) может быть получено в результате взаимодействия соединения формулы (VI):

где m такой, как определено для соединения формулы (I), а X представляет собой уходящую группу, такую как галоген, например хлор, бром или йод, или алкилсульфонат, например пара-толуолсульфонат, с соединением формулы (VII):

где R₄ такой, как определено выше.

Например, соединение формулы (VI), соединение формулы (VII) и подходящее основание, например гидрокарбонат натрия, растворяют в подходящем растворителе, например N,N-диметилформамиде, и нагревают при подходящей температуре, например 80-100°С, в течение подходящего периода времени, например 16-18 часов. Продукт (V) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (VI) и формулы (VII) либо коммерчески доступны, либо могут быть получены способами, описанными в литературе.

Альтернативно, соединение формулы (III) может быть получено в результате взаимодействия соединения формулы (VIII):

где R₁, R₂, R₅ и m такие, как определено выше, а X представляет собой уходящую группу, как определено для соединения формулы (VI), с соединением формулы (VII):

Например, соединение формулы (VIII), соединение формулы (VII) и подходящее основание, например триэтиламин, растворяют в подходящем растворителе, например ацетонитриле, и нагревают при подходящей температуре, например 60-80°С, в течение подходящего периода времени, например 16-26 часов. Продукт (III) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (VIII) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (IV) с соединениями формулы (VI). Например, соединение формулы (IV) и соединение формулы (VI) растворяют в подходящем растворителе, например DMF, в присутствии йодида меди(I), подходящего катализатора, например дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия(II), и подходящего основания, например триэтиламина, и нагревают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 18-20 часов. Продукт (VIII) выделяют после водной обработки и очистки.

Альтернативно, соединение формулы (II) может быть также получено в результате реакции соединения формулы (II), где R₄=Н. Например, подходящий восстановитель, например триацетоксиборгидрид натрия, добавляют к смеси соединения формулы (II), где R₄=Н, соединения формулы (VII) и осушителя, например молекулярных сит 4Å, в подходящем растворителе, например дихлорметане, и перемешивают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 2-16 часов. Соединение формулы (II) выделяют после водной обработки и очистки.

Кроме того, соединение формулы (II) может быть также получено в результате реакции соединения формулы (IX)

где R₁, R₂, R₅ и m такие, как определено выше.

Например, подходящий восстановитель, например триацетоксиборгидрид натрия, добавляют к смеси соединения формулы (IX), соединения формулы (VII) и осушителя, например молекулярных сит 4Å, в подходящем растворителе, например дихлорметане, и перемешивают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 2-16 часов. Соединение формулы (II) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (IX) могут быть получены в результате реакции соединения формулы (X):

где R₁, R₂, R₅ и m такие, как определено выше.

Например, соединение формулы (X), подходящий окислитель, например перрутенат тетрапропиламмония, в присутствии N-оксида 4-метилморфолина, в подходящем растворителе, например в смеси дихлорметана и ацетонитрила, перемешивают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 2 часов. Соединение формулы (IX) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.

Соединения формулы (X) могут быть получены в результате реакции соединений формулы (XI):

где R₁, R₂, R₅ и m такие, как определено выше.

Соединения формулы (X) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XI) с водородом в присутствии катализатора. Например, соединение формулы (XI) растворяют в подходящем растворителе, например этаноле, и пропускают через подходящий катализатор, например 10%-ный палладий на углероде, в присутствии водорода, при подходящей температуре, например 20-60°С, в аппарате, таком как Thales Н-cube™. Соединение формулы (X) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.

Соединения формулы (XI) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (IV) с соответствующими алкин-1-олами. Например, соединение формулы (IV) и алкин-1-ол растворяют в подходящем растворителе, например DMF, в присутствии йодида меди(I), подходящего катализатора, например дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия(II), и подходящего основания, например триэтиламина, и нагревают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 1-17 часов. Соединение формулы (XI) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (IV) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XII):

где R₁, R₂ и R₅ такие, как определено выше, и Y такой, как определено для соединения формулы (IV), с раствором аммиака.

Например, водный раствор аммиака (0,88) добавляют к раствору соединения формулы (XII) в подходящем растворителе, например изопропиловом спирте. Полученную смесь затем нагревают в микроволновом нагревателе при подходящей температуре, например 120-150°С, в течение подходящего периода времени, например 1-2 часов. Продукт (IV) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (XII) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XIII):

где R₁ и R₂ такие, как определено выше для соединения формулы (I), с соединением формулы (XIV):

где соединение формулы (XIV) представляет собой подходящий предшественник для защитной группы R₅, например бензил-хлорметиловый эфир или (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан.

Например, соединение формулы (XIII) в подходящем растворителе, например N,N-диметилформамиде или тетрагидрофуране, обрабатывают подходящим основанием, например суспензией гидрида натрия в масле. Добавляют соединение формулы (XIV), например бензил-хлорметиловый эфир или (2-(хлорметокси)этил)триметилсилан, реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 1-4 часа. Соединение формулы (XII) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (XIII) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XV):

где R₁ и R₂ такие, как определено выше для соединения формулы (I), с галогенирующим реагентом, например N-йодсукцинимидом.

Соединение формулы (XV) растворяют в подходящем растворителе, например тетрагидрофуране, и подвергают взаимодействию с N-йодсукцинимидом при подходящей температуре, например 20°С, в течение подходящего периода времени, например 1-2 часов. Соединение формулы (XIII) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (XV) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XVI):

где R₁ и R₂ такие, как определено выше для соединения формулы (I), с хлорирующим реагентом, например оксихлоридом фосфора.

Соединение формулы (XVI) суспендируют в оксихлориде фосфора и нагревают при подходящей температуре, например 120°С, в течение подходящего периода времени, например 3-4 часов. Избыток оксихлорида фосфора может быть удален в вакууме, затем остаток выливают на лед, и рН смеси доводят до значения 7-9. Продукт затем экстрагируют в подходящий органический растворитель, например этилацетат. Соединение формулы (XV) выделяют путем удаления растворителя и очистки, если требуется.

Соединения формулы (XVI) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XVII):

где R₁ и R₂ такие, как определено выше для соединения формулы (I), с подходящим основанием, например гидроксидом натрия.

Раствор соединения формулы (XVII) в подходящем растворителе, например этиловом спирте, обрабатывают водным раствором гидроксида натрия, и реакционную смесь перемешивают при подходящей температуре, например 80-100°С, в течение подходящего периода времени, например 4-18 часов. Соединение формулы (XVI) выделяют после водной обработки и очистки.

Соединения формулы (XVII) могут быть получены в результате взаимодействия соединений формулы (XVIII):

с соединением формулы (XIX):

где R₁ и R₂ такие, как определено выше для соединения формулы (I).

Например, суспензию соединения формулы (XVIII) в соединении формулы (XIX) обрабатывают раствором хлористого водорода в подходящем растворителе, например раствором хлористого водорода в 1,4-диоксане, и нагревают при подходящей температуре, 50-70°С, в течение подходящего периода времени, например 16-18 часов. Соединение формулы (XVII) выделяют фильтрованием после добавления подходящего растворителя, например трет-бутил-метилового эфира.

Альтернативно, соединение формулы (XVI) может быть получено в результате взаимодействия соединения формулы (XVIII) с соединением формулы (XX):

где R₁ такой, как определено выше для соединения формулы (I).

Например, смесь соединения формулы (XVIII) и соединения формулы (XX) нагревают в подходящем растворителе, например opmo-ксилоле, при подходящей температуре, например при температуре дефлегмации, в течение подходящего периода времени, например в течение 3 суток. После охлаждения до температуры окружающей среды продукт (XVI) выделяют после фильтрования.

Соединения формул (VI), (VII), (XIV), (XVIII), (XIX) и (XX) либо известны из литературы, либо коммерчески доступны, например от Sigma-Aldrich, UK, или могут быть получены по аналогии с известными методиками, например теми, которые описаны в стандартных справочных руководствах по синтетической методологии, таких как J. March, Advanced Organic Chemistry, 6th Edition (2007), WileyBlackwell, или Comprehensive Organic Synthesis (Trost B.M. and Fleming I., (Eds.), Pergamon Press, 1991), каждое их которых включено в данное описание посредством ссылки в той мере, в какой оно относится к таким методикам.

Примеры других защитных групп, которые могут быть использованы в путях синтеза, описанных в данном документе, и способы их удаления можно найти в монографии Т. W. Greene 'Protective Groups in Organic Synthesis', 4th Edition, J. Wiley and Sons, 2006, включенной в данное описание посредством ссылки в той мере, в какой она относится к таким методикам.

Для любых описанных выше реакций и способов можно использовать стандартные методы нагревания и охлаждения, например масляные бани с регулируемой температурой или нагревательные плитки с регулируемой температурой и бани лед/соль или бани сухой лед/ацетон соответственно. Можно использовать стандартные методы выделения, например экстракцию из водных или неводных растворителей или в водные или неводные растворители. Можно использовать стандартные методы сушки органических растворителей, растворов или экстрактов, такие как встряхивание с безводным сульфатом магния или безводным сульфатом натрия, или пропускание через гидрофобную фритту. При необходимости, можно использовать стандартные методы очистки, например кристаллизацию и хроматографию, например хроматографию на силикагеле или хроматографию с обращением фаз. Кристаллизация может быть осуществлена с использованием обычных растворителей, таких как этилацетат, метанол, этанол или бутанол или их водные смеси. Понятно, что конкретные реакционные времена и температуры обычно могут быть определены методами мониторинга протекания реакции, например методами тонкослойной хроматографии и ЖХ-МС.

Если это целесообразно, индивидуальные изомерные формы соединений по изобретению могут быть получены в виде индивидуальных изомеров стандартными методами, такими как фракционная кристаллизация диастереоизомерных производных или хиральная высокоэффективная жидкостная хроматография (хиральная ВЭЖХ).

Абсолютная стереохимия соединений может быть определена стандартными методами, такими как рентгеновская кристаллография.

Способы применения

Примеры болезненных состояний, при которых соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли оказывают потенциально благотворный эффект, включают аллергические заболевания и другие воспалительные состояния, например аллергический ринит и астму, инфекционные заболевания и рак. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно также применять в качестве вакцинных адъювантов.

Модуляторы иммунного ответа соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть также полезны в лечении и/или предупреждении иммуно-опосредованных расстройств, включая, без ограничения, воспалительные или аллергические заболевания, такие как астма, аллергический ринит и риноконъюнктивит, пищевая аллергия, гиперчувствительные легочные заболевания, эозинофильный пневмонит, расстройства гиперчувствительности замедленного типа, атеросклероз, панкреатит, гастрит, колит, остеоартрит, псориаз, саркоидоз, пневмофиброз, респираторный дистресс-синдром, бронхиолит, хроническая обструктивная болезнь легких, синусит, муковисцидоз, старческий кератоз, кожная дисплазия, хроническая крапивница, экзема и все типы дерматита.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть также полезны в лечении и/или предупреждении реакций на респираторные инфекции, включая, без ограничения, вирусные обострения дыхательных путей и тонзилит. Соединения могут быть также полезны в лечении и/или предупреждении аутоиммунных заболеваний, включая, без ограничения, ревматоидный артрит, псориатический артрит, системную красную волчанку, болезнь Шегрена, анкилозирующий спондилит, склеродерму, дерматомиозит, диабет, отторжение трансплантата, включая заболевание трансплантат-против-хозяина, воспалительные кишечные заболевания, включая, без ограничения, болезнь Крона и неспецифический язвенный колит.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть также полезны в лечении инфекционных заболеваний, включая, без ограничения, заболевания, вызываемые вирусами гепатита (например вирусом гепатита В, вирусом гепатита С), вирусом иммунодефицита человека, папилломавирусами, герпесвирусами, респираторными вирусами (например вирусами гриппа, респираторным синцитиальным вирусом, риновирусом, метапневмовирусом, вирусом парагриппа, SARS) и вирусом Западного Нила.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть также полезны в лечении микробных инфекций, вызываемых, например, бактериями, грибами или простейшими. Эти инфекции включают, без ограничения, туберкулез, бактериальную пневмонию, аспергиллез, гистоплазмоз, кандидоз, пневмоцитоз, лепру, хламидии, криптококковое заболевание, криптоспоридиоз, токсоплазмоз, лейшманию, малярию и трипанозомоз.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть также полезны в лечении различных видов рака, в частности в лечении видов рака, о которых известно, что они реагируют на иммунотерапию, и включая, без ограничения, почечноклеточную карциному, рак легкого, рак молочной железы, колоректальный рак, рак мочевого пузыря, меланому, лейкоз, лимфомы и рак яичника.

Специалистам в данной области будет понятно, что упоминания в данном описании лечения или терапии могут, в зависимости от состояния, распространяться на профилактику, а также на лечение установленных состояний.

Таким образом, в качестве еще одного аспекта изобретения предложено соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии.

Понятно, что когда соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль применяют в терапии, тогда его (ее) применяют в качестве активного терапевтического агента.

Поэтому предложено также соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака.

Предложено также соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении аллергического ринита.

Предложено также соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль для применения в лечении астмы.

Предложено также применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака.

Предложено также применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения аллергического ринита.

Предложено также применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения астмы.

Предложен также способ лечения аллергических заболеваний и других воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака, включающий введение субъекту-человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Предложен также способ лечения аллергического ринита, включающий введение субъекту-человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Предложен также способ лечения астмы, включающий введение субъекту-человеку, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли также можно применять в качестве вакцинных адъювантов.

Таким образом, в еще одном аспекте изобретения предложена вакцинная композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и антиген или антигенную композицию, для применения в терапии.

В еще одном аспекте изобретения предложено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и антигена или антигенной композиции в изготовлении лекарственного средства для применения в терапии.

Предложен также способ лечения или предупреждения заболевания, включающий введение субъекту-человеку, страдающему заболеванием или чувствительному к заболеванию, вакцинной композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и антиген или антигенную композицию.

Композиции

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли обычно, но необязательно, включают в состав фармацевтических композиций для введения пациенту. Соответственно, в другом аспекте изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены для введения любым традиционным путем. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены, например, для перорального, местного, ингаляционного, интраназального, трансбуккального, парентерального (например внутривенного, подкожного, интрадермального или внутримышечного) или ректального введения. В одном аспекте соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли приготовлены для перорального введения. В дополнительном аспекте соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли приготовлены для местного введения, например интраназального или ингаляционного введения.

Таблетки и капсулы для перорального введения могут содержать стандартные эксципиенты, такие как связывающие агенты, например сироп, аравийскую камедь, желатин, сорбит, трагакант, клейкое вещество крахмала, целлюлозу или поливинилпирролидон; наполнители, например лактозу, микрокристаллическую целлюлозу, сахар, маисовый крахмал, фосфат кальция или сорбит; смазывающие вещества, например стеарат магния, стеариновую кислоту, тальк, полиэтиленгликоль или диоксид кремния; разрыхлители, например картофельный крахмал, натрий-кросскармелозу или натрий-крахмалгликолят; или увлажняющие агенты, такие как лаурилсульфат натрия. Таблетки могут быть покрыты оболочкой способами, общеизвестными в данной области.

Пероральные жидкие препараты могут быть изготовлены в форме, например, водных или масляных суспензий, растворов, эмульсий, сиропов или эликсиров или могут быть представлены в виде сухого продукта для разведения водой или другим подходящим носителем перед применением. Такие жидкие препараты могут содержать традиционные добавки, такие как суспендирующие агенты, например сироп из сорбита, метилцеллюлозу, глюкозный/сахарный сироп, желатин, гидроксиметилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гель стеарата алюминия или гидрированные пищевые жиры; эмульгаторы, например лецитин, моноолеат сорбитана или аравийскую камедь; неводные носители (которые могут включать пищевые масла), например миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, масляные эфиры, пропиленгликоль или этиловый спирт; или консерванты, например метил- или пропил-пара-гидроксибензоаты или сорбиновую кислоту. Препараты могут также содержать буферные соли, корригенты, красители и/или подсластители (например маннит), если это целесообразно.

Композиции для интраназального введения включают водные композиции, которые вводят в нос каплями или с помощью нагнетательного насоса. Подходящие композиции содержат воду в качестве разбавителя или носителя для этой цели. Композиции для введения в легкое или нос могут содержать один или более эксципиентов, например один или более суспендирующих агентов, один или более консервантов, одно или более поверхностно-активных веществ, один или более агентов, регулирующих тоничность, один или более сорастворителей, и могут включать компоненты для контролирования рН композиции, например буферную систему. Далее, композиции могут содержать другие эксципиенты, такие как антиоксиданты, например метабисульфит натрия, и агенты, маскирующие неприятный вкус. Композиции можно вводить также в нос или другие области дыхательных путей пульверизацией.

Интраназальные композиции могут обеспечивать доставку соединения(й) формулы (I) или его (их) фармацевтически приемлемой соли(ей) во все области носовой полости (ткань-мишень), а также могут давать возможность соединению(ям) формулы (I) или его (их) фармацевтически приемлемой соли(ей) оставаться в контакте с тканью-мишенью в течение более длительных периодов времени. Подходящим режимом введения доз интраназальных композиций для пациента может быть медленная ингаляция через нос после того, как носовая полость очищена. Во время ингаляции композицию можно вводить в одну ноздрю, в то время как другая зажата рукой. Эту процедуру затем повторяют в отношении другой ноздри. Обычно один или два впрыскивания в ноздрю можно производить посредством вышеуказанной процедуры один, два или три раза в сутки, идеально один раз в сутки. Особый интерес представляют интраназальные композиции, подходящие для введения один раз в сутки.

Суспендирующий(ие) агент(ы), если он(и) входят в состав, обычно будут присутствовать в количестве от 0,1 до 5% (мас./мас.), например от 1,5% до 2,4% (мас./мас.) в расчете на общую массу композиции. Примеры фармацевтически приемлемых суспендирующих агентов включают, без ограничения, Avicel® (микрокристаллическая целлюлоза и натрий-карбоксиметилцеллюлоза), натрий-карбоксиметилцеллюлозу, вигум, трагакант, бентонит, метилцеллюлозу, ксантановую камедь, карбопол и полиэтиленгликоли.

Композиции для введения в легкие или нос могут содержать один или более эксципиентов и могут быть защищены от заражения микробами или грибами и их роста путем включения в состав одного или более консервантов. Примеры фармацевтически приемлемых антимикробных агентов или консервантов включают, без ограничения, четвертичные аммониевые соединения (например хлорид безалкония, хлорид бензетония, цетримид, хлорид цетилпиридиния, хлорид лауралкония и хлорид миристилпиколиния), ртутные агенты (например нитрат фенилртути, ацетат фенилртути и тимеросал), спиртовые агенты (например хлорбутанол, фенилэтиловый спирт и бензиловый спирт), антибактериальные эфиры (например эфиры пара-гидроксибензойной кислоты), хелатирующие агенты, такие как динатрий-эдетат (EDTA), и другие антимикробные агенты, такие как хлоргексидин, хлоркрезол, сорбиновая кислота и ее соли (такие как сорбат калия) и полимиксин. Примеры фармацевтически приемлемых противогрибковых агентов или консервантов включают, без ограничения, бензоат натрия, сорбиновую кислоту, пропионат натрия, метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен и бутилпарабен. Консервант(ы), если он(и) входит(ят) в состав, могут присутствовать в количестве от 0,001 до 1% (мас./мас.), например от 0,015% до 0,5% (мас./мас.) в расчете на общую массу композиции.

Композиции (например те, в которых по меньшей мере одно соединение присутствует в суспензии) могут содержать одно или более поверхностно-активных веществ, которые способствуют растворению частиц лекарственного средства в водной фазе композиции. Например, количество используемого поверхностно-активного вещества представляет собой количество, которое не вызывает пенообразование во время смешивания. Примеры фармацевтически приемлемых поверхностно-активных веществ включают жирные спирты, сложные эфиры и простые эфиры, такие как моноолеат полиоксиэтилен(20)-сорбинана (Polysorbate 80), простые эфиры макрогола и полоксамеры. Поверхностно-активное вещество может присутствовать в количестве примерно от 0,01 до 10% (мас./мас.), например от 0,01 до 0,75% (мас./мас.), например примерно 0,5% (мас./мас.) в расчете на общую массу композиции.

Один или более агентов, регулирующих тоничность, могут быть включены в состав композиции для достижения тоничности с жидкостями организма, например жидкостями носовой полости, что приводит к снижению уровней раздражения. Примеры фармацевтически приемлемых агентов, регулирующих тоничность, включают, без ограничения, хлорид натрия, декстрозу, ксилит, хлорид кальция, глюкозу, глицерин и сорбит. Агент, регулирующий тоничность, если он присутствует, может присутствовать в количестве от 0,1 до 10% (мас./мас.), например от 4,5 до 5,5% (мас./мас.), например примерно 5,0% (мас./мас.) в расчете на общую массу композиции.

Композиции по изобретению могут быть забуферены добавлением подходящих буферных агентов, таких как цитрат натрия, лимонная кислота, трометамол, фосфаты, такие как динатрийфосфат (например додекагидрат, гептагидрат, дигидрат и водные формы) или фосфат натрия и их смеси.

Буферный агент, если он присутствует, может присутствовать в количестве от 0,1 до 5% (мас./мас.), например от 1 до 3% (мас./мас.) в расчете на общую массу композиции.

Примеры агентов, маскирующих неприятный вкус, включают сукралозу, сахарозу, сахарин или его соль, фруктозу, декстрозу, глицерин, кукурузный сироп, аспартам, ацесульфам-K, ксилит, сорбит, эритритол, глицирризинат аммония, тауматин, неотам, саннит, ментол, эвкалиптовое масло, камфору, природный корригент, искусственный корригент и их комбинации.

Один или более сорастворителей могут быть включены в состав композиции для увеличения растворимости лекарственного(ых) соединения(й) и/или других эксципиентов. Примеры фармацевтически приемлемых сорастворителей включают, без ограничения, пропиленгликоль, дипропиленгликоль, этиленгликоль, глицерин, этанол, полиэтиленгликоли (например PEG300 или PEG400) и метанол. В одном воплощении сорастворителем является пропиленгликоль.

Сорастворитель(и), если он(и) присутствует(ют), могут быть включены в состав композиции в количестве от 0,05 до 30% (мас./мас.), например от 1 до 25% (мас./мас.), например от 1 до 10% (мас./мас.) в расчете на общую массу композиции.

Композиции для ингаляционного введения включают водные, органические или водные/органические смеси, сухие порошковые или кристаллические композиции, вводимые в дыхательные пути с помощью нагнетательного насоса или ингалятора, например с помощью сухих порошковых ингаляторов резервуарного типа, однодозовых сухих порошковых ингаляторов, многодозовых дозирующих сухих порошковых ингаляторов, назальных ингаляторов или аэрозольных ингаляторов под давлением, небулайзеров или инсуффляторов. Подходящие композиции содержат воду в качестве разбавителя или носителя для этой цели и могут быть снабжены стандартными эксципиентами, такими как буферные агенты, агенты, модифицирующие тоничность, и т.п. Водные композиции можно также вводить в нос и другие участки дыхательных путей посредством пульверизации. Такие композиции могут представлять собой водные растворы или суспензии или аэрозоли, доставляемые из упаковки под давлением, например из дозирующего ингалятора, с использованием подходящего сжиженного пропеллента.

Композиции для введения местно в нос (например для лечения ринита) или в легкие включают аэрозольные композиции под давлением и водные композиции, доставляемые в носовые полости нагнетательным насосом. Композиции, которые не находятся под давлением и являются подходящими для введения местно в носовую полость, представляют особый интерес. Подходящие композиции содержат воду в качестве разбавителя или носителя для этой цели. Водные композиции для введения в легкие или нос, могут быть дополнены традиционными эксципиентами, такими как буферные агенты, агенты, модифицирующие тоничность, и т.п. Водные композиции можно также вводить в нос посредством пульверизации.

Жидкостной дозатор обычно может быть использован для доставки жидкостной композиции в носовые полости. Жидкостная композиция может быть водной или неводной, но обычно водной. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль может быть приготовлена в виде суспензии или раствора. Такой жидкостной дозатор может иметь дозировочное сопло или дозировочную насадку, через которую отмеренная доза жидкостной композиции распыляется, когда пользователь нажимает на насосный механизм жидкостного дозатора. Такие жидкостные дозаторы обычно снабжены резервуаром, в котором содержится множество отмеряемых доз жидкостной композиции, причем эти дозы распыляются при последовательных срабатываниях насоса. Альтернативно, жидкостной дозатор для доставки жидкостной композиции в носовые полости может быть сконструирован с ограничением по дозе, например одноразовый дозатор, содержащий однократную дозу. Дозировочное сопло или насадка может иметь конфигурацию, подходящую для введения в ноздри пользователя для распылительного дозирования жидкостной композиции в носовую полость. Жидкостной дозатор вышеупомянутого типа описан и проиллюстрирован в публикации Международной патентной заявки WO 2005/044354 (Glaxo Group Limited). Дозатор имеет корпус, в котором находится выпускающее жидкость устройство с нагнетательным насосом, установленным на контейнере, в котором находится жидкая композиция. Корпус имеет по меньшей мере один приводимый в действие пальцами боковой рычаг, который двигается внутрь относительно корпуса, перемещая контейнер вверх в корпусе посредством эксцентрика и заставляя насос сжимать и нагнетать отмеренную дозу композиции из ствола насоса через назальное сопло корпуса. Особенно предпочтительным жидкостным дозатором является дозатор общего типа, проиллюстрированный на Фиг. 30-40 в WO 2005/044354.

Водные композиции, содержащие соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, можно также доставлять с помощью насоса, как раскрыто в публикации Международной патентной заявки WO 2007/138084 (Glaxo Group Limited), например как раскрыто со ссылкой на приведенные там Фиг. 22-46 или как раскрыто в патентной заявке Великобритании GB0723418.0 (Glaxo Group Limited), например как раскрыто со ссылкой на приведенные там Фиг. 7-32. Насос можно приводить в действие так, как показано на Фиг. 1-6 в GB0723418.0.

Сухие порошковые композиции для местной доставки в легкие ингаляцией могут находиться, например, в капсулах и картриджах, например желатиновых, или в блистерах, например из алюминиевой фольги, для использования в ингаляторе или инсуффляторе. Порошковые смесевые композиции содержат, как правило, порошковую смесь для ингаляции соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и подходящую порошковую основу (носитель/разбавитель/эксципиент), такую как моно-, ди- или полисахариды (например лактоза или крахмал). Сухие порошковые композиции могут также содержать, помимо лекарственного средства и носителя, дополнительный эксципиент (например третий агент, такой как сложный эфир сахара, например октаацетат целлобиозы, стеарат кальция или стеарат магния.

В одном воплощении композиция, подходящая для ингаляционного введения, может находиться во множестве герметично закрытых дозовых контейнеров (например содержащих сухую порошковую композицию), которыми снабжена(ы) упаковка(и) лекарственного средства, вставленная(ые) внутрь подходящего ингаляционного устройства. Контейнеры могут быть разрываемыми, вскрываемыми путем снятия предохранительной пленки или иным образом вскрываемыми каждый в отдельности, и дозы сухой порошковой композиции могут быть введены ингаляцией из мундштука ингаляционного устройства, как известно в данной области. Упаковка лекарственного средства может иметь различные формы, например форму диска или длинной полоски. Репрезентативными ингаляционными устройствами являются устройства DISKHALER™ и DISKUS™, продаваемые фирмой GlaxoSmithKline.

Сухая порошковая композиция, пригодная для введения ингаляцией, может находиться в виде объемной массы в резервуаре в ингаляционном устройстве, и это устройство снабжено дозирующим механизмом для отмеривания и подачи дозы композиции из резервуара в ингаляционный канал, откуда отмеренную дозу пациент может вдыхать через мундштук устройства. Примерами имеющихся в продаже устройств этого типа являются TURBUHALER™ (AstraZeneca), TWISTHALER™ (Schering) и CLICKHALER™ (Innovata).

Еще одним способом доставки ингалируемой сухой порошковой композиции является способ доставки отмеренных доз композиции, находящихся в капсулах (одна доза на капсулу), которые вставляют в ингаляционное устройство, и обычно это делает пациент по мере необходимости. Устройство имеет средства для разрывания, прокалывания или иного вскрытия капсулы, чтобы доза могла поступить в легкие пациента, когда он вдыхает через мундштук устройства. В качестве примеров таких устройств, имеющихся в продаже, могут быть упомянуты ROTAHALER™ (GlaxoSmithKline) и HANDIHALER™ (Boehringer Ingelheim.)

Аэрозольные композиции под давлением, подходящие для ингаляции, могут представлять собой либо суспензию, либо раствор и могут содержать соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и подходящий пропеллент, такой как фторуглерод или водородсодержащий хлорфторуглерод или их смеси, в частности гидрофторалканы, особенно 1,1,1,2-тетрафторэтан, 1,1,1,2,3,3,3-гептафтор-н-пропан или их смесь. Аэрозольная композиция возможно может содержать дополнительные эксципиенты, известные в данной области, такие как поверхностно-активные вещества, например олеиновая кислота, лецитин или олигомолочная кислота или их производные, например как описано в WO 94/21229 и WO 98/34596 (Minnesota Mining and Manufacturing Company), и сорастворители, например этанол. Композиции под давление обычно будут находиться в баллоне (например алюминиевом баллоне), закрытом клапаном (например дозирующим клапаном) и вставленном в исполнительный механизм, снабженный мундштуком.

Мази, кремы и гели могут быть приготовлены, например, на водной или масляной основе с добавлением подходящего загустителя и/или гелеобразующего агента и/или растворителя. Такие основы могут включать, например, воду и/или масло, такое как вазелиновое масло или растительное масло, такое как арахисовое масло или касторовое масло, или растворитель, такой как полиэтилен гликоль. Загустители и гелеобразующие агенты, которые могут быть использованы в соответствии с природой основы, включают мягкий парафин, стеарат алюминия, цетостеариловый спирт, полиэтиленгликоли, ланолин, пчелиный воск, производные карбоксиполиметилена и целлюлозы и/или глицерилмоностеарат и/или неионные эмульгаторы.

Лосьоны могут быть приготовлены на водной или масляной основе и будут, как правило, содержать также один или более эмульгаторов, стабилизаторов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов или загустителей.

Порошки для наружного применения могут быть образованы с помощью подходящей порошковой основы, например талька, лактозы или крахмала. Капли могут быть приготовлены на водной или неводной основе, также содержащей один или более диспергирующих агентов, солюбилизирующих агентов, суспендирующих агентов или консервантов.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены, например, для трансдермальной доставки путем введения композиции в пластыри или другие устройства (например устройства, содержащие газ под давлением), которые доставляют активный компонент в кожу.

Для трансбуккального введения композиции могут иметь форму таблеток или пастилок, изготовленных обычным образом.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены также в виде суппозиториев, содержащих, например, традиционные суппозиторные основы, такие как масло какао или другие глицериды.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены также для парентерального введения болюсной инъекцией или непрерывной инфузией и могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например в виде ампул, флаконов, вливаний небольшого объема или предварительно заполненных шприцев, или в многодозовых контейнерах с добавленным консервантов. Композиции могут иметь такие формы, как растворы, суспензии или эмульсии в водных или неводных носителях, и могут содержать технологические агенты, такие как антиокислители, буферные агенты, противомикробные агенты и/или агенты, регулирующие тоничность. Альтернативно, активный ингредиент может быть в форме порошка для разведения перед использованием подходящим носителем, например стерильной, апирогенной водой. Сухая твердая презентация может быть получена путем асептического заполнения стерильного порошка в индивидуальные стерильные контейнеры или путем асептического заполнения стерильного раствора в каждый контейнер и сублимационной сушки.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли могут быть приготовлены также с вакцинами в качестве адъювантов для модулирования их активности. Такие композиции могут содержать антитело(а) или фрагмент(ы) антитела или антигенный компонент, включая, без ограничения, белок, ДНК, живые или мертвые бактерии и/или вирусы или вирусоподобные частицы, вместе с одним или более компонентами с адъювантной активностью, включая, без ограничения, соли алюминия, масляные и водные эмульсии, белки теплового шока, препараты на основе липида А и производные, гликолипиды, другие агонисты TLR, такие как CpG ДНК или подобные агенты, цитокины, такие как GM-CSF или IL-12 или подобные агенты.

В еще одном аспекте изобретения предложен вакцинный адъювант, содержащий соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

Предложена также вакцинная композиция, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и антиген или антигенную композицию.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять сами по себе или в комбинации с другими терапевтически активными агентами. Согласно изобретению в дополнительном аспекте предложена комбинация, содержащая соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вместе с по меньшей мере одним другим терапевтически активным агентом.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли и другой(ие) терапевтически активный(ые) агент(ы) можно вводить вместе или по отдельности, и при введении по отдельности введение можно осуществлять одновременно или последовательно в любом порядке. Количества соединения(й) формулы (I) или его(их) фармацевтически приемлемой соли(ей) и другого(их) терапевтически активного(ых) агента(ов) и относительное время введения будут выбирать для достижения желаемого терапевтического эффекта. Введение комбинации соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с другими терапевтическими агентами можно осуществлять параллельно в единой фармацевтической композиции, содержащей оба соединения, или в отдельных фармацевтических композициях, каждая из которых содержит одно из соединений. Альтернативно, комбинацию можно вводить по отдельности последовательно, когда один агент лечения вводят первым, а другой вторым или наоборот. Такое последовательное введение может быть близким по времени или отдаленным по времени.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно использовать в комбинации с одним или более агентами, полезными в предупреждении или лечении вирусных инфекций. Примеры таких агентов включают, без ограничения; ингибиторы полимераз, такие как те, которые раскрыты в WO 2004/037818-А1, а также те, которые раскрыты в WO 2004/037818 и WO 2006/045613; JTK-003, JTK-019, NM-283, HCV-796, R-803, R1728, R1626, а также те, которые раскрыты в WO 2006/018725, WO 2004/074270, WO 2003/095441, US2005/0176701, WO 2006/020082, WO 2005/080388, WO 2004/064925, WO 2004/065367, WO 2003/007945, WO 02/04425, WO 2005/014543, WO 2003/000254, ЕР 1065213, WO 01/47883, WO 2002/057287, WO 2002/057245, и подобные агенты; ингибиторы репликации, такие как ацикловир, фамцикловир, ганцикловир, цидофовир, ламивудин и подобные агенты; ингибиторы протеаз, такие как ингибиторы протеазы ВИЧ саквинавир, ритонавир, индинавир, нелфинавир, ампренавир, фосампренавир, бресанавир, атазанавир, типранавир, палинавир, лазинавир, и ингибиторы протеазы HCV (вирус гепатита С), BILN2061, VX-950, SCH503034 и подобные агенты; нуклеозидные и нуклеотидные ингибиторы обратной транскриптазы, такие как зидовудин, диданозин, ламивудин, залцитабин, абакавир, ставидин, адефовир, адефовира дипивоксил, фозивудин, тодоксил, эмтрицитабин, аловудин, амдоксовир, элвуцитабин и подобные агенты; ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (включая агент, имеющий антиоксидантную активность, такой как иммунокал, олтипраз и т.д.), такие как невирапин, делавиридин, эфавиренц, ловирид, иммунокал, олтипраз, каправирин, ТМС-278, ТМС-125, этравирин и подобные агенты; ингибиторы проникновения, такие как энфувиртид (Т-20), Т-1249, PRO-542, PRO-140, TNX-355, BMS-806, 5-Helix и подобные агенты; ингибиторы интегразы, такие как L-870,180 и подобные агенты; ингибиторы почкования, такие как РА-344 и РА-457 и подобные агенты; ингибиторы рецепторов хемокинов, такие как викривирок (Sch-C), Sch-D, TAK779, маравирок (UK-427,857), TAK449, а также те, которые раскрыты в WO 02/74769, WO 2004/054974, WO 2004/055012, WO 2004/055010, WO 2004/055016, WO 2004/055011 и WO 2004/054581, и подобные агенты; ингибиторы нейраминидазы, такие как CS-8958, занамивир, оселтамивир, перамивир и подобные агенты; блокаторы ионных каналов, такие как амантадин или римантадин и подобные агенты; и олигонуклеотиды интерферирующей РНК и антисмысловые олигонуклеотиды и такие как ISIS-14803 и подобные агенты; противовирусные агенты неустановленного механизма действия, например те, которые раскрыты в WO 2005/105761, WO 2003/085375, WO 2006/122011, рибавирин и подобные агенты. Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно использовать также в комбинации с одним или более другими агентами, которые могут быть полезны в предупреждении или лечении вирусных инфекций, например иммунных терапиях (например интерферон или другие цитокины/хемокины, модуляторы рецепторов цитокинов/хемокинов, агонисты или антагонисты цитокинов и подобные агенты); и терапевтические вакцины, антифибротические агенты, противовоспалительные агенты, такие как кортикостероиды или NSAID (нестероидные противовоспалительные лекарственные средства) и подобные агенты.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять в комбинации с одним или более другими агентами, которые могут быть полезны в предупреждении или лечении аллергического заболевания, воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, например с антигенной иммунотерапией, антигистаминными средствами, стероидами, NSAID, бронхорасширяющими средствами (например бета 2 агонистами, адренергическими агонистами, антихолинергическими агентами, теофиллином), метотрексатом, модуляторами лейкотриенов и подобными агентами; терапией моноклональными антителами, такими как анти-IgE, анти-TNF, анти-IL-5, анти-IL-6, анти-IL-12, анти-IL-1 и подобные агенты; рецепторными терапиями, например энтанерцептом и подобными агентами; антигенными неспецифическими иммунотерапиями (например интерфероном или другими цитокинами/хемокинами, модуляторами рецепторов цитокинов/хемокинов, агонистами или антагонистами цитокинов и подобными агентами, агонистами TLR и подобными агентами).

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно применять в комбинации с одним или более другими агентами, которые могут быть полезны в предупреждении или лечении рака, например с химиотерапевтическими средствами, такими как алкилирующие агенты, ингибиторы топоизомеразы, антиметаболиты, антимитотические агенты, ингибиторы киназ и подобные агенты; терапиями моноклональными антителами, такими как трастузумаб, гемтузумаб и другие подобные агенты; и гормональной терапией, такой как тамоксифен, госерелин и подобные агенты.

Фармацевтические композиции по изобретению можно применять сами по себе или в комбинации с по меньшей мере одним другим терапевтическим агентом в других терапевтических областях, например в области желудочно-кишечных заболеваний. Композиции по изобретению можно также применять в комбинации с генной заместительной терапией.

В еще одном аспекте изобретение охватывает комбинацию, содержащую соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль вместе с по меньшей мере одним другим терапевтически активным агентом.

Комбинации, упомянутые выше, для удобства могут быть представлены для применения в форме фармацевтической композиции, и поэтому фармацевтические композиции, содержащие комбинацию, как определено выше, вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, составляют еще один аспект изобретения.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли будет зависеть от целого ряда факторов. Например, вид, возраст и масса тела реципиента, точное состояние, требующее лечения, и его тяжесть, природа композиции и путь введения все являются факторами, которые следует учитывать. В конечном счете, терапевтически эффективное количество будет на усмотрении лечащего врача. Тем не менее, эффективное количество соединения по настоящему изобретению для лечения людей, страдающих уязвимостью, обычно должно находиться в диапазоне от 0,0001 до 100 мг/кг массы тела реципиента в сутки. Чаще эффективное количество будет находиться в диапазоне от 0,001 до 10 мг/кг массы тела в сутки. Так, для взрослого человека с массой тела 70 кг в качестве одного примера фактическое количество в сутки обычно будет составлять от 7 до 700 мг. Для интраназального и ингаляционного путей введения типичные дозы для взрослого человека с массой тела 70 кг будут находиться в диапазоне от 0,1 микрограмма до 1 мг в сутки, например 1 мкг, 10 мкг или 100 мкг. Это количество можно вводить однократной дозой в сутки или несколькими (например двумя, тремя, четырьмя, пятью или более) субдозами в сутки, так чтобы общая суточная доза была той же. Эффективное количество фармацевтически приемлемой соли соединения формулы (I) может быть определено как пропорциональная часть эффективного количества соединения формулы (I) или как количество непосредственно его фармацевтически приемлемой соли. Подобные дозировки должны быть подходящими для лечения других состояний, упомянутых в данном описании.

Соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли можно также вводить с любой подходящей частотой, например 1-7 раз в неделю. Разумеется, точный режим введения доз будет зависеть от таких факторов, как терапевтическое показание, возраст и состояние пациента и конкретный выбранный путь введения. В одном аспекте изобретения соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить один раз в неделю на протяжении периода времени 4-8 недели, например 4, 5, 6, 7 или 8 недель.

Фармацевтические композиции могут быть представлены в стандартных лекарственных формах, содержащих предопределенное количество активного ингредиента на стандартную дозу. Такая стандартная доза может содержать, в качестве не ограничивающего примера, от 0,5 мг до 1 г соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в зависимости от состояния, которое лечат, пути введения и возраста, массы тела и состояния пациента. Предпочтительными композициями стандартных лекарственных форм являются композиции, содержащие суточную дозу или субдозу активного ингредиента, как указано выше, или соответствующую ее долю. Такие фармацевтические композиции могут быть получены любыми способами, известными в области фармации.

Предложен также способ получения такой фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами.

Сокращения

Ниже приведен список, в котором даны определения некоторых сокращений, использованных в данном документе. Следует иметь в виду, что этот список не является исчерпывающим, но значение тех сокращений, которые не приведены ниже, будут очевидны специалистам в данной области.

DCM	дихлорметан
DMF	N,N-диметилформамид
DMSO	диметилсульфоксид
DME	1,2-диметоксиэтан
THF	тетрагидрофуран
ЕЮА	этилацетат
МеОН	метанол
EtOH	этанол
MeCN	ацетонитрил
HCl	соляная кислота
ВЭЖХ	высокоэффективная жидкостная хроматография
MDAP	масс-направленная автоматизированная препаративная ВЭЖХ
SPE	твердофазная экстракция
МеОН	метанол
TFA	трифторуксусная кислота
DIPEA	N,N-диизопропилэтиламин
ТВМЕ	трет-бутил-метиловый эфир

Подробности экспериментов

¹Н ЯМР

¹Н ЯМР спектры регистрировали либо в CDCl₃, либо в DMSO-d₆ на спектрометре либо Bruker DPX 400, либо Bruker Avance DRX, Varian Unity 400, либо JEOL Delta, которые все работают при 400 МГц. Внутренним стандартом служил либо тетраметилсилан, либо остаточный протонированный растворитель при 7,25 м.д. (миллионные доли) для CDCl₃ или 2,50 м.д. для DMSO-d₆.

ЖХ/МС (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия)

Система А

Колонка: 50 мм × 2,1 мм в.д. (внутренний диаметр), 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН C₁₈

Скорость потока: 1 мл/мин.

Температура: 40°С

Детектирование в УФ диапазоне: от 210 до 350 нм

Масс-спектр: Регистрировали на масс-спектрометре в режиме электрораспылительной ионизации с попеременной регистрацией положительных и отрицательных ионов.

Растворители:	А: 0,1% об./об. муравьиная кислота в воде
	В: 0,1% об./об. муравьиная кислота в ацетонитриле

Система В

Колонка: 50 мм × 2,1 мм в.д., 1,7 мкм Acquity UPLC ВЕН C₁₈

Скорость потока: 1 мл/мин.

Температура: 40°С

Детектирование в УФ диапазоне: от 210 до 350 нм

Масс-спектр: Регистрировали на масс-спектрометре в режиме электрораспылительной ионизации с попеременной регистрацией положительных и отрицательных ионов.

Растворители:	А: 10 мМ бикарбонат аммония в воде, доведенный до
	рН 10 раствором аммиака
	В: ацетонитрил

Масс-направленная автоматизированная препаративная ВЭЖХ (MDAP)

Масс-направленную автоматизированную препаративную ВЭЖХ выполняли в условиях, приведенных ниже. УФ-детектирование представляло собой усредненный сигнал длиной волны от 210 нм до 350 нм, и масс-спектры регистрировали на масс-спектрометре в режиме электрораспылительной ионизации с попеременной регистрацией положительных и отрицательных ионов.

Метод А

Метод А осуществляли на колонке Sunfire C₁₈ (обычно 150 мм × 30 мм в.д., диаметр насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды. Использовали следующие растворители:

А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде

В = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле.

Метод В

Метод В осуществляли на колонке XBridge C₁₈ (обычно 100 мм × 30 мм в.д., диаметр насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды. Использовали следующие растворители:

А = 10 мМ водный бикарбонат аммония, доведенный до рН 10 раствором аммиака

В = ацетонитрил.

Метод С

Метод С осуществляли на колонке Sunfire C₁₈ (обычно 150 мм × 30 мм в.д., диаметр насадки 5 мкм) при температуре окружающей среды. Использовали следующие растворители:

А = 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в воде

В = 0,1% об./об. раствор трифторуксусной кислоты в ацетонитриле.

Получение промежуточных соединений

Промежуточное соединение 1: Этил-3-пентанимидамидо-1Н-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорид

Раствор хлористого водорода в диоксане (12 мл, 4M, 48 ммоль) по каплям добавляли в суспензию этил-3-амино-1Н-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорида (2,04 г, 10,7 ммоль) (J. Org. Chem. 1999, 64(22), 8411) в валеронитриле (30 мл). Полученную смесь нагревали при 50°С в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и твердое вещество собирали фильтрованием и промывали ТВМЕ. Указанное в заголовке соединение было получено в виде не совсем белого твердого вещества (2,19 г).

Дополнительную порцию ТВМЕ добавляли в фильтрат, и смесь повторно фильтровали, осадок промывали ТВМЕ и сушили с получением дополнительной порции указанного в заголовке соединения (0,275 г).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 12.22 (br. s., 1H) 10.88 (s, 1H) 9.39 (br. s., 1H) 8.25 (br. s., 1H) 7.09 (t, J=2.9 Гц, 1H) 6.19 (t, J=2.5 Гц, 1H) 4.23 (q, J=7.0 Гц, 2H) 2.52-2.60 (m, 2H) 1.63-1.77 (m, 2H) 1.34-1.47 (m, 2H) 1.27 (t, J=7.2 Гц, 3H) 0.94 (t, J=7.4 Гц, 3H)

Промежуточное соединение 2: 2-Бутил-3H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4(5Н)-он

Раствор гидроксида натрия (1,44 г, 35,9 ммоль) в воде (7 мл) добавляли в раствор этил-3-пентанимидамидо-1Н-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорида (2,46 г, 8,99 ммоль) в этаноле (30 мл). Полученную смесь нагревали при температуре дефлегмации в течение в сумме 4 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и рН доводили до рН 6,5 водной лимонной кислотой. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄) фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества (1,69 г).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,66 мин; МН⁺ 192

Промежуточное соединение 3: 2-Бутил-4-хлор-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин

Оксихлорид фосфора (20 мл, 21,46 ммоль) добавляли к 2-бутил-3Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4(5H)-ону (1,69 г). Полученную смесь нагревали при 100°С. Через 4 часа реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем выливали на лед. Водную фазу обрабатывали водным раствором гидроксида натрия (5М) до рН 7. Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (2×150 мл). Объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили (Na₂SO₄) фильтровали и упаривали с получением указанного в заголовке соединения (1,69 г).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,90 мин; МН⁺ 210, 212

Промежуточное соединение 4: 2-Бутил-4-хлор-7-йод-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин

N-Йодсукцинимид (2,09 г, 9,29 ммоль) добавляли порциями в перемешиваемый раствор 2-бутил-4-хлор-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина (1,69 г, 8,06 ммоль) в THF (35 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Реакционную смесь разбавляли ТВМЕ (50 мл), затем промывали водным раствором тиосульфата натрия (50 мл), затем насыщенным водным раствором хлорида натрия (20 мл). Органическую фазу сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния с использованием градиента 0-100% дихлорметана-циклогексан за 30 минут, затем градиента 0-100% ТВМЕ-циклогексан, затем 0-20% метанола за 15 минут. Соответствующие фракции идентифицировали методом ЖХ-МС, затем объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (2,2 г).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,14 мин; МН⁺ 336, 338

Промежуточное соединение 5: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-4-хлор-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин

Гидрид натрия (0,338 г, 60% в масле, 14,08 ммоль) добавляли порциями в перемешиваемый раствор 4-хлор-7-йод-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина (2,19 г, 6,53 ммоль) в DMF (30 мл), охлажденный в ледяной бане. Через 30 минут добавляли бензил-хлорметиловый эфир (1,13 мл, 1,278 г, 8,16 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре. Реакционную смесь гасили водой, и полученную смесь распределяли между этилацетатом (150 мл) и водой (150 мл). Органическую фазу промывали водой, затем насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и упаривали. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния (100 г) с использованием градиента 0-100% этилацетата-циклогексан за 30 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (2,82 г).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,49 мин; МН⁺ 456, 458

Промежуточное соединение 6: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-4-хлор-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин (1 г, 2,2 ммоль) суспендировали в 2-пропаноле (5 мл) и 35%-ном (0,88) растворе аммиака (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 90 минут в микроволновом реакторе Biotage Initiator. В реакционную смесь дополнительно добавляли 1 мл 35%-ного (0.88) раствора аммиака. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 90 минут в микроволновом реакторе Biotage Initiator. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением бледно-желтого масла. Это масло растворяли в минимальном объеме 20%-ного метанола в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния с использованием градиента 0-100% этилацетата в циклогексане за 80 минут. Фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (768 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,19 мин; МН⁺ 437

Промежуточное соединение 7: Этил-5-метил-3-пентанимидамидо-1Н-пиррол-2-карбоксилата гидрохлорид

Хлористый водород в диоксане (4M, 308 мл, 1,2 моль) по каплям добавляли к этил-3-амино-5-метил-1Н-пиррол-2-карбоксилату (38,3 г, 228 ммоль) (J. Med. Chem. 2008, 51, 68) в валеронитриле (383 мл). Полученную смесь нагревали при 50°С в течение ночи. Добавляли дополнительную порцию кислоты (160 мл, 0,64 моль), и смесь нагревали при 55°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали, и фильтрат упаривали. Остаток суспендировали в ТВМЕ (1200 мл) в течение 30 минут, затем твердое вещество отфильтровывали и промывали ТМВЕ и сушили. Указанное в заголовке соединение было получено в виде коричневого твердого вещества (58,9 г).

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. включает 11.90 (br. s, 1H) 11.09 (s, 1H) 9.52 (br. s, 1H) 8.14 (br. s, 1H) 5.82 (br. s, 1H) 4.12 (q, J=7A Гц, 2H) 3.48 (br. s, 1H) 2.14 (s, 3H) 1.51-1.70 (m, 2H) 1.05-1.40 (m, 6H) 0.84 (t, J=7.1 Гц, 3 H)

Промежуточное соединение 8: 2-Бутил-6-метил-3H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4(5H)-он

Водный раствор гидроксида натрия (6М, 138 мл) по каплям добавляли в раствор этил-5-метил-3-пентанимидамидо-1H-пиррол-2-карбоксилата (58,9 г, 0,2 моль) в этаноле (550 мл), охлажденный в ледяной бане. Реакционную смесь нагревали при температуре дефлегмации в течение 2,5 часов, затем охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду (700 мл), и рН доводили до рН 6,5, используя водную лимонную кислоту (2М). Полученную смесь перемешивали в течение 45 минут, затем фильтровали, и твердое вещество промывали водой. Это вещество сушили в вакуумном термостате при 50°С с получением указанного в заголовке соединения.

¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. включает 11.60 (s, 1H) 11.53 (s, 1H) 5.91 (s, 1H) 2.33-2.50 (m, 2H) 2.19 (s, 3H) 1.45-1.60 (m, 2H) 1.10-1.26 (m, 2H) 0.70-0.84 (m, 3H)

Промежуточное соединение 9: 2-Бутил-4-хлор-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин

Оксихлорид фосфора (42,8 мл, 70,4 г, 0,459 моль) по каплям добавляли в раствор 2-бутил-6-метил-3Н-пирроло[3,2-а]пиримидин-4(5H)-она (37,5 г, 0,183 моль) в ацетонитриле (750 мл) в атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали при температуре дефлегмации в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры по каплям добавляли дополнительную порцию оксихлорида фосфора (42,8 мл, 70,4 г, 0,459 моль), и нагревание продолжали в течение еще 3,5 часов. Реакционную смесь снова охлаждали до комнатной температуры, и по каплям добавляли дополнительную порцию оксихлорида фосфора (42,8 мл, 70,4 г, 0,459 моль), и нагревание продолжали в течение 3 часов. Реакционную смесь оставляли стоять при комнатной температуре в течение ночи, затем нагревали при температуре дефлегмации в течение 3,5 часов. Реакционную смесь охлаждали, затем концентрировали. Остаток охлаждали в ледяной бане и осторожно добавляли ледяную воду (650 мл). рН доводили до 8, используя водный раствор гидроксида калия, и затем смесь перемешивали в течение 45 минут. Смесь распределяли между дихлорметаном (1000 мл) и водой (1000 мл). Водный слой и твердое вещество реэкстрагировали дихлорметаном (2×500 мл). Объединенные органические слои сушили (Na₂SO₄) и фильтровали через слой нейтрального оксида алюминия. Фильтрат концентрировали до желтого масла и добавляли затравочный кристалл и гексан. Твердое вещество отфильтровывали, промывали гексаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (15,5 г).

ЖХ/МС (Система A): t_RET = 0,81 мин; МН⁺ 224/226

Промежуточное соединение 10: 2-Бутил-4-хлор-7-йод-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин

Это соединение было получено аналогично Промежуточному соединению 4 из 2-бутил-4-хлор-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,20 мин; МН⁺ 350, 352

Промежуточное соединение 11: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-4-хлор-7-йод-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин

Это соединение было получено аналогично Промежуточному соединению 5 из 2-бутил-4-хлор-7-йод-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,54 мин; МН⁺ 470, 472

Промежуточное соединение 12: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Это соединение было получено аналогично Промежуточному соединению 6 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-4-хлор-7-йод-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,24 мин; МН⁺ 451

Промежуточное соединение 13: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-хлорпент-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

В дегазированную суспензию 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (2,768 г, 6,34 ммоль), йодида меди(I) (0,242 г, 1,269 ммоль) и дихлорида бис(трифенилфосфин)палладия(II) (0,445 г, 0,634 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (40 мл) добавляли раствор 5-хлорпент-1-ина (0,781 г, 7,61 ммоль) и триэтиламина (1,231 мл, 8,88 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (20 мл) по каплям в течение 2 минут. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 17 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме, и полученное коричневое масло распределяли между водой (500 мл) и этилацетатом (500 мл). Органический слой отделяли, и водный слой реэкстрагировали этилацетатом (250 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (400 мл), сушили (MgSO₄) фильтровали и концентрировали в вакууме. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния (Si) (2×100 г), используя градиент 0-100% этилацетата-циклогексан за 60 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением красного масла. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния, используя градиент 0-100% этилацетата-циклогексан за 80 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (1,13 г).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,29 мин; МН⁺ 411,413

Промежуточное соединение 14: трет-Бутил-4-(5-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)пент-4-ин-1-ил)пиперазин-1-карбоксилат

В раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-хлорпент-1-ин-1-ил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (100 мг, 0,243 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (2 мл) добавляли 1-ВОС-пиперазин (50 мг, 0,268 ммоль) и триэтиламин (51 мкл, 0,366 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 22 часов. Дополнительно 100 мг (0,537 ммоль) 1-ВОС-пиперазина и 0,1 мл (0,717 ммоль) триэтиламина добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение еще 24 часов. Охлажденную реакционную смесь упаривали в вакууме и распределяли между дихлорметаном и водой. Органический слой пропускали через гидрофобную фритту и упаривали в вакууме с получением желтого масла. Это масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (2×1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (80 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,35 мин; МН⁺ 561.

Промежуточное соединение 15: 1-Изпропил-4-(пент-4-ин-1-ил)пиперазин

Смесь 1-(1-метилэтил)пиперазина (6 г, 46,8 ммоль), 5-хлор-1-пентина (4,91 мл, 46,8 ммоль) и бикарбоната натрия (3,93 г, 46,8 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (75 мл) нагревали при 80°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, затем распределяли между диэтиловым эфиром (100 мл) и водой (100 мл). Органическую фазу промывали рассолом (25 мл), затем сушили, используя гидрофобную фритту, и упаривали. Неочищенное вещество очищали на 50 г SCX картридже (предварительно кондиционированном МеОН), элюируя МеОН и промывая 2М ΝΗ₃/ΜeΟΗ. Соответствующие фракции концентрировали и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-коричневого масла (3,22 г).

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) содержит следующие сигналы: δ м.д. 2.39-2.69 (m, 10H) 2.19-2.27 (m, 2H) 1.93-1.97 (m, 1H) 1.67-1.78 (m, 2H) 1.01-1.10 (m, 6H)

Промежуточное соединение 16: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

В дегазированный раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (223 мг, 0,511 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (3,5 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли йодид меди(I) (19 мг, 0,10 ммоль), дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия(II) (40 мг, 0,057 ммоль) и в конце триэтиламин (0,128 мл, 0,920 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 10 минут и затем добавляли раствор 1-(1-метилэтил)-4-(4-пентин-1-ил)пиперазина (159 мг, 0,818 ммоль) в водном дегазированном Ν,Ν-диметилформамиде (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 40 минут. Добавляли раствор 1-(1-метилэтил)-4-(4-пентин-1-ил)пиперазина (60 мг, 0,309 ммоль) в водном дегазированном Ν,Ν-диметилформамиде (0,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 30 минут. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением темно-желтого масла. Это масло распределяли между водой и дихлорметаном. Органический слой отделяли, и водный слой реэкстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты пропускали через гидрофобную фритту и упаривали в вакууме с получением темно-желтого масла. Это масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (4×1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (80 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,17 мин; МН⁺ 503.

Промежуточное соединение 17: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

В дегазированный раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (159 мг, 0,353 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (3 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли йодид меди(I) (19 мг, 0,100 ммоль), дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия(II) (40 мг, 0,057 ммоль) и в конце триэтиламин (0,088 мл, 0,636 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 10 минут и затем добавляли раствор 1-(1-метилэтил)-4-(4-пентин-1-ил)пиперазина (110 мг, 0,565 ммоль) в водном дегазированном Ν,Ν-диметилформамиде (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 40 минут. Дополнительно добавляли 1-(1-метилэтил)-4-(4-пентин-1-ил)пиперазин (110 мг, 0,565 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 45 минут. Добавляли 1-(1-метилэтил)-4-(4-пентин-1-ил)пиперазин (110 мг, 0,565 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 55°С в течение 45 минут. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением темно-желтого масла. Это масло распределяли между водой и дихлорметаном. Органический слой отделяли, и водный слой реэкстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты пропускали через гидрофобную фритту и упаривали в вакууме с получением темно-желтого масла. Неочищенный продукт растворяли в 6 мл смеси 50:50 DMSO/MeOH и очищали методом MDAP (Метод В). Фракции, которые содержали продукт, концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (61 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,22 мин; МН⁺ 517.

Промежуточное соединение 18: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-этилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Это соединение было получено аналогично Промежуточному соединению 17 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина и 1-этил-4-(пент-4-ин-1-ил)пиперазина (Bioorg. Med. Chem. Lett. 2011, 21(6), 1601; WO 2006/105372).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,17 мин; МН⁺ 503

Промежуточное соединение 19: трет-Бутил-4-(3-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)проп-2-ин-1-ил)пиперазин-1-карбоксилат

В дегазированный раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (150 мг, 0,344 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (3 мл) в атмосфере азота при комнатной температуре добавляли йодид меди(I) (13 мг, 0,068 ммоль), дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия(II) (27 мг, 0,038 ммоль) и в конце триэтиламин (0,086 мл, 0,619 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 10 минут и затем одной порцией добавляли трет-бутил-4-(проп-2-ин-1-ил)пиперазин-1-карбоксилат (139 мг, 0,619 ммоль).

Реакционную смесь нагревали до 55°С в предварительно нагретой масляной бане и перемешивали при 55°С в течение 40 минут. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением темно-коричневого масла. Это масло распределяли между водой и дихлорметаном. Органический слой отделяли, и водный слой реэкстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические экстракты пропускали через гидрофобную фритту и упаривали в вакууме с получением темно-коричневого масла. Это масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (2×1 мл) и очищали методом M DAP (Метод В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла (180 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,26 мин; МН⁺ 533

Промежуточное соединение 20: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(пиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

В раствор трет-бутил-4-(3-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)проп-2-ин-1-ил)пиперазин-1-карбоксилата (85 мг, 0,160 ммоль) в водном метаноле (5 мл) добавляли 4M хлористый водород в 1,4-диоксане (0,5 мл, 2,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 19 часов. Дополнительно 0,5 мл (2,0 ммоль) 4M хлористого водорода в 1,4-диоксане добавляли в реакционную смесь. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь упаривали досуха в потоке азота с получением зеленого масла. Это масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (2×1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (38 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,97 мин; МН⁺ 433

Промежуточное соединение 21: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

В раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(пиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (38 мг, 0,088 ммоль) в водном Ν,Ν-диметилформамиде (1 мл) при комнатной температуре добавляли триэтиламин (25 мкл, 0,179 ммоль) и йодэтан (10 мкл, 0,125 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь упаривали в вакууме с получением бледно-желтого масла. Это масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующую фракцию упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (28 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,04 мин; МН⁺ 461

Промежуточное соединение 22: 4-(4-Амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бут-3-ин-1-ол

В раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-йод-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (3,04 г, 6,97 ммоль) в N,N-диметилформамиде (35 мл) добавляли дихлорид бис(трифенилфосфин)палладия(II) (0,489 г, 0,697 ммоль) и йодид меди(I) (0,265 г, 1,394 ммоль). Раствор перемешивали и дегазировали азотом в течение 5 минут, затем реакционную смесь помещали в атмосферу азота. Раствор бут-3-ин-1-ола (0,733 г, 10,45 ммоль) и триэтиламина (1,457 мл, 10,45 ммоль) в N,N-диметилформамиде (15 мл) по каплям добавляли в течение 5 минут. Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 24 часов. Реакционную смесь концентрировали в вакууме при 60°С, и остаток распределяли между 3:1 CHCl₃ (250 мл) и водой (250 мл). Органический слой отделяли, и водный слой реэкстрагировали смесью 3:1 CHCl₃:IPA (2×100 мл). Объединенные органические фазы сушили (MgSO₄) фильтровали и концентрировали в вакууме с получением вязкого коричневого масла (5.34 г). Образец растворяли в смеси 3:1 CHCl₃:IPA и предварительно наносили на Florisil. Образец очищали хроматографией на диоксиде кремния (2×100 г), используя градиент 0-10% метанола-ТВМЕ за 40 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением оранжевого твердого вещества (2,064 г). Это твердое вещество растирали с диэтиловым эфиром, фильтровали и сушили при 50°С в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества (1,53 г).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,95 мин; МН⁺ 379

Промежуточное соединение 23: 4-(4-Амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бутан-1-ол

Раствор 4-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бут-3-ин-1-ола (948 мг, 2,505 ммоль) в этилацетате (50 мл) и этаноле (50 мл) гидрировали, используя H-cube (параметры: 25°С, полностью Н₂, скорость потока 1 мл/мин) и 10% Pd/C CatCart 70 в качестве катализатора. Реакционную смесь концентрировали в вакууме при 60°С с получением указанного в заголовке соединения в виде вязкого желтого масла, которое кристаллизовалось при стоянии (884 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,98 мин; МН⁺ 383

Промежуточное соединение 24: 4-(4-Амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бутаналь

Смесь 4-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бутан-1-ола (884 мг, 2,311 ммоль), N-оксида N-метилморфолина (420 мг, 3,59 ммоль), порошкообразных молекулярных сит 4Å и перрутената тетрапропиламмония (58 мг, 0,165 ммоль) помещали в атмосферу азота и добавляли смесь водного дихлорметана (27 мл) и водного ацетонитрила (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 часов, добавляли дополнительно N-оксид N-метилморфолина (390 мг, 3,33 ммоль) и перрутенат тетрапропиламмония (38 мг, 0,108 ммоль) в водном DCM (5 мл), и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение еще 2 часов. Дополнительно добавляли N-оксид N-метилморфолина (130 мг, 1,11 ммоль) и перрутенат тетрапропиламмония (100 мг, 0,284 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение еще 30 минут. Реакционную смесь фильтровали через целит, и остаток на фильтре промывали DCM три раза. Реакционный растворитель удаляли в вакууме, и остаток растворяли в DCM и пропускали через целит второй раз. Остаток на фильтре промывали DCM три раза, и растворитель удаляли в вакууме с получением черной смолы. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния (100 г) с использованием градиента 0-25% метанола-дихлорметан за 40 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением оранжевой смолы с черным оттенком. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на диоксиде кремния (100 г) с использованием градиента 0-25% метанола-дихлорметан за 80 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтой смолы (268 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,08 мин; МН⁺ 381

Промежуточное соединение 25: трет-Бутил-4-(4-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бутил)пиперазин-1-карбоксилат

Суспензию 4-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бутаналя (268 мг, 0,704 ммоль) и молекулярных сит 4Å в водном дихлорметане (20 мл) помещали в атмосферу азота и добавляли трет-бутил-пиперазин-1-карбоксилат (262 мг, 1,409 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1 минуты, затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (299 мг, 1,409 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение еще 30 минут. Дополнительно добавляли молекулярные сита 4Å, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение дополнительно 16,5 часов. Реакционную смесь фильтровали через целит, и остаток на фильтре промывали DCM. Растворитель удаляли в вакууме с получением вязкого желтого масла. Это масло растворяли в DCM (50 мл). Органический слой промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), слои разделяли, и водный слой реэкстрагировали DCM (2×25 мл). Объединенные органические фазы сушили, используя гидрофобную фритту, и концентрировали в вакууме с получением желтой смолы (488 мг). Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на картридже с диоксидом кремния (100 г), используя градиент 0-10% МеОН:ТВМЕ, за 40 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтой смолы (338 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,31 мин; МН⁺ 551

Промежуточное соединение 26: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(4-(пиперазин-1-ил)бутил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

трет-Бутил-4-(4-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)бутил)пиперазин-1-карбоксилат (338 мг, 0,614 ммоль) растворяли в 1,4-диоксане (3 мл) и затем медленно добавляли HCl (4M раствор в диоксане) (2 мл, 8,00 ммоль). Реакционный сосуд герметично закрывали, и реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 15 ч, и в это время образовывался желтый осадок. Реакционную смесь концентрировали в вакууме при 55°С и растирали с диэтиловым эфиром с получением желтой смолы. Эту смолу растворяли в метаноле и подвергали азеотропной перегонке с диэтиловым эфиром с получением указанного в заголовке соединения в виде клейкого желтого твердого вещества (298 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,03 мин; МН⁺ 451

Промежуточное соединение 27: 5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(4-(4-изопропилпиперазин-1-ил)бутил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

В перемешиваемую суспензию 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(4-(пиперазин-1-ил)бутил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина гидрохлорида (227 мг, 0,466 ммоль), триэтиламина (0,071 мл, 0,513 ммоль) и молекулярных сит 4Å в водном дихлорметане (15 мл) добавляли ацетон (0,05 мл, 0,681 ммоль), затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (198 мг, 0,932 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 1,5 ч. В реакционную смесь добавляли дополнительно ацетон (0,05 мл, 0,681 ммоль) и дополнительно триэтиламин (0,035 мл, 0,256 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 40°С в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивали в течение еще 45 минут, после чего снова добавляли ацетон (0,05 мл, 0,681 ммоль) и снова триацетоксиборгидрид натрия (100 мг, 0,46 ммоль), и перемешивание при 40°С продолжали в течение 16 ч. В реакционную смесь снова добавляли ацетон (0,05 мл, 0,681 ммоль) и снова триацетоксиборгидрид натрия (100 мг, 0,46 ммоль), и перемешивание при 40°С продолжали в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли DCM (35 мл) и фильтровали через слой Celite. Остаток на фильтре промывали DCM (10 мл), объединенные фильтраты промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (50 мл). Органический слой сушили, используя гидрофобную фритту, и концентрировали в вакууме. Образец растворяли в дихлорметане и очищали хроматографией на картридже с аминопропил-функционализированным диоксидом кремния (20 г) с использованием градиента 0-100% этилацетата-циклогексан за 40 минут. Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветной смолы (57 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 1,14 мин; МН⁺ 493

Примеры получения соединений по изобретению

Пример 1: 2-Бутил-7-(5-(пиперазин-1-ил)пентил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

трет-Бутил-4-(5-(4-амино-5-((бензилокси)метил)-2-бутил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-7-ил)пент-4-ин-1-ил)пиперазин-1-карбоксилат (80 мг, 0,143 ммоль) в этаноле (15 мл) пропускали через H-cube (параметры: 45°С, полностью водород, скорость потока 1 мл/мин и 10%-ный палладий на углероде CatCart30 в качестве катализатора). Раствор снова пропускали через H-cube (установки: 45°С, полностью водород, скорость потока 1 мл/мин). Раствор упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества. Это твердое вещество растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества (37 мг). Это твердое вещество растворяли в водном метаноле (2,5 мл) и 4М хлористом водороде в 1,4-диоксане (0,5 мл, 2 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 17 часов. Реакционную смесь упаривали досуха в потоке азота с получением желтого масла. Это масло растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующие фракции объединяли и упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (26 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,80 мин; МН⁺ 345

Пример 2: 2-Бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пентил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

5-((Бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин (77 мг, 0,153 ммоль) в этаноле (20 мл) пропускали через H-cube (параметры: 45°С, полностью водород, скорость потока 1 мл/мин и 10%-ный палладий на углероде CatCart30 в качестве катализатора). Новый картридж с 10%-ным палладием на углероде CatCart30 вставляли в H-cube, и раствор снова пропускали через H-cube (параметры: 45°С, полностью водород, скорость потока 1 мл/мин). Раствор упаривали в вакууме с получением белого твердого вещества. Это твердое вещество растворяли в смеси MeOH:DMSO (1:1) (1 мл) и очищали методом MDAP (Метод В). Соответствующую фракцию упаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединение в виде белого твердого вещества (21 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,90 мин; МН⁺ 387

Пример 3: 2-Бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пентил)-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Раствор 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина (61 мг, 0,118 ммоль) в метаноле (15 мл) пропускали через H-cube (параметры: 40°С, полностью водород, скорость потока 1 мл/мин и 10%-ный палладий на углероде CatCart30 в качестве катализатора) три раза. Раствор упаривали в вакууме с получением 29 мг бледно-желтого твердого вещества. Неочищенный продукт растворяли в 1 мл смеси 50:50 DMSO/MeOH и очищали методом MDAP (Метод В). Фракции, которые содержали продукт, концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (14 мг).

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,93 мин; МН⁺ 401

Пример 4: 2-Бутил-7-(5-(4-этилпиперазин-1-ил)пентил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Это соединение было получено аналогично соединению Примера 3 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-этилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,91 мин; МН⁺ 387

Пример 5: 2-Бутил-7-(3-(пиперазин-1-ил)пропил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Это соединение было получено аналогично соединению Примера 1 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(5-(4-этилпиперазин-1-ил)пент-1-ин-1-ил)-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,68 мин; МН⁺ 317

Пример 6: 2-Бутил-7-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)пропил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Это соединение было получено аналогично соединению Примера 1 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)проп-1-ин-1-ил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,72 мин; МН⁺ 345

Пример 7: 2-Бутил-7-(4-(4-изопропилпиперазин-1-ил)бутил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амин

Это соединение было получено аналогично соединению Примера 3 из 5-((бензилокси)метил)-2-бутил-7-(4-(4-изопропилпиперазин-1-ил)бутил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

ЖХ/МС (Система В): t_RET = 0,85 мин; МН⁺ 373

Оценка биологической активности

Соединения по изобретению тестировали в отношении биологической активности in vitro в соответствии с описанным ниже анализом.

Анализ на индуцирование интерферона-α и TNF-α с использованием свежей цельной крови человека (WB)

Подготовка соединений

Соединения подготавливали в 100х требуемой концентрации в DMSO в микротитровальных планшетах с плоским дном в объеме 1,5 мкл. Лунки столбцов 1-10 содержали 1 из 4 последовательное разведение тестируемого соединения. На каждом планшете содержалось последовательное разведение агониста TLR7/8 резиквимода в качестве стандарта, и лунки колонки 11 содержали 1,5 мкл 200 мкМ резиквимода (что дает 2 мкМ конечную концентрацию, используемую для определения приблизительного максимального ответа на резиквимод). Каждое соединение анализировали в двух повторах для каждого донора.

Инкубирование и анализы на интерферон-α и TNF-α

Образцы крови от трех доноров-людей собирали в гепарин натрия (10 ед./мл). 150 мкл цельной крови дозировали в лунки столбцов 1-11 аналитических планшетов, содержащих 1,5 мкл тестируемого соединения или стандарта в DMSO. Планшеты помещали в инкубатор на ночь (37°С, 95% воздуха, 5% СО₂). После инкубирования в течение ночи планшеты вынимали из инкубатора и встряхивали на орбитальном шейкере в течение приблизительно 1 минуты. 100 мкл 0,9%-ного физиологического раствора добавляли в каждую лунку, и планшеты снова встряхивали на орбитальном шейкере. Планшеты затем центрифугировали (2500 об/мин, 10 минут), после чего извлекали образец плазмы, используя Biomek FX, и анализировали его в отношении как IFN-α, так и TNF-α, используя платформу для электрохемилюминисцентного анализа MSD (Mesoscale Discovery). Анализ IFN-α проводили аналогично описанному выше. Анализ TNF-α проводили согласно инструкциям к набору (каталожный номер K111BHB).

Высвободившийся цитокин выражали в процентах от контрольного 2 мкМ резиквимода (лунки столбца 11). Этот процент наносили на график против концентрации соединения, и рЕС₅₀ для ответа определяли путем аппроксимации кривой методом наименьших квадратов. Для IFN-α ответов выбирали, как правило, 4-параметрическую логистическую модель. Для TNF-α ответов, если получали четкий максимальный ответ (т.е. в ответе наблюдалось вполне определенное плато), то обычно использовали 4-параметрическую модель. Если верхняя асимптота кривой четко не определялась, то аппроксимацию кривой обычно ограничивали максимальным ответом 100% (т.е. ответом на 2 мкМ резиквимод) или ответом на наивысшую протестированную концентрацию, если он был больше, чем ответ на резиквимод. Некоторые кривые имели куполообразную форму для одного или обоих цитокинов, и данные для цитокинов на нисходящем наклоне куполообразного ответа (т.е. концентрации выше концентраций, дающих максимальный ответ) обычно исключали из аппроксимации, обычно за исключением концентрации непосредственно выше пика ответа. Таким образом, аппроксимация кривых фокусировалась на восходящем наклоне кривой доза-ответ.

Результаты

Соединения Примеров 1-7 имели среднее значение рЕС₅₀ для IFN-α ≥ 5,8.

Соединения Примеров 1-7 имели среднее значение рЕС₅₀ для TNF-α ≥ 5,3.

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль:

где R₁ представляет собой н-С_3-6алкил;

R₂ представляет собой водород или метил;

R₃ представляет собой водород или С_1-6алкил;

m означает целое число, имеющее значение от 1 до 4.

2. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R₁ представляет собой н-бутил.

3. Соединение по п. 1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где R₂ представляет собой водород.

4. Соединение по п. 1 или 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где R₂ представляет собой метил.

5. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где m означает целое число, имеющее значение 1, 2, 3 или 4.

6. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где m означает целое число, имеющее значение 1 или 3.

7. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где R₃ представляет собой изопропил или этил.

8. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, выбранное из группы, состоящей из

2-бутил-7-(5-(пиперазин-1-ил)пентил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина;

2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пентил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина;

2-бутил-7-(5-(4-изопропилпиперазин-1-ил)пентил)-6-метил-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина;

2-бутил-7-(5-(4-этилпиперазин-1-ил)пентил)-6-метил-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина;

2-бутил-7-(3-(пиперазин-1-ил)пропил)-5Н-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина;

2-бутил-7-(3-(4-этилпиперазин-1-ил)пропил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина; и

2-бутил-7-(4-(4-изопропилпиперазин-1-ил)бутил)-5H-пирроло[3,2-d]пиримидин-4-амина.

9. Соединение по п. 1 в форме фармацевтически приемлемой соли.

10. Соединение по п. 1 в форме свободного основания.

11. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами индуктора интерферона α (IFN-α) и фактора некроза опухолей α (TNF-α), содержащая в терапевтически эффективном количестве соединение по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых эксципиентов.

12. Применение соединения по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли в качестве вакцинного адъюванта.

13. Соединение по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства, обладающего свойствами индуктора интерферона α (IFN-α) и фактора некроза опухолей α (TNF-α).

14. Соединение по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающие свойствами индуктора интерферона α (IFN-α) и фактора некроза опухолей α (TNF-α), для применения в лечении аллергических заболеваний и воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака.

15. Применение соединения по любому из пп. 1-8 или его фармацевтически приемлемой соли в изготовлении лекарственного средства для лечения аллергических заболеваний и воспалительных состояний, инфекционных заболеваний и рака.