Способ восстановления дефектов покровных тканей

Авторы патента:

C12N9/32 - альфа-амилаза растительного происхождения

A61L27/38 - животные клетки (для использования при получении искусственной кожи A61L 27/60)[7]

A61B17/03 - для закрывания ран или удерживания ран закрытыми, например хирургические скобки; вспомогательные приспособления для этого

A61B17/00 - Хирургические инструменты, устройства или способы, например турникеты (A61B 18/00 имеет преимущество; контрацептивы, пессарии или аппликаторы для них A61F 6/00; глазная хирургия A61F 9/007, хирургия уха A61F 11/00)

Владельцы патента RU 2644306:

Общество с ограниченной ответственностью "ДЖИ-Групп" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к общей хирургии, комбустиологии и эстетической хирургии. Осуществляют подготовку раны и накладывают на нее гистоэквивалент-биопластический материал, в лунки которого помещают жизнеспособные аутоткани. При этом жизнеспособные кусочки ткани кожи предварительно помещают в культуральную среду, которая содержит суммарно 0,01% массовой доли ферментов коллагеназы и гиалуронидазы, на 72 часа с температурой 36-37°С. Полученную аутоклеточную взвесь распределяют по лункам гистоэквивалент-биопластического материала, который затем помещают на 24 часа в бокс для клеточного культивирования, после чего гистоэквивалент-биопластический материал укладывают на раневую поверхность. Способ позволяет сократить сроки регенерации покровных тканей в условиях ведения раневого процесса для заживления раны без перевязок. 3 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к общей хирургии, комбустиологии, эстетической хирургии, косметологии и может найти применение при лечении дефектов покровных тканей различной этиологии, в том числе на фоне сахарного диабета.

Область техники

В современной реконструктивной и восстановительной хирургии получили развитие и широко применяются методы органоспецифического замещения поврежденных структур с помощью биосовместимых материалов.

Одной из ключевых и актуальных проблем является создание материалов с оптимальными биоинженерными свойствами (Волова Т.Г., Севастьянов В.И., Шишацкая Е.И., 2006; Василец В.Н. и др., 2010). Достижения в области молекулярной и клеточной биологии демонстрируют принципиальную возможность восстановления поврежденных тканей и органов с помощью материалов, способных имитировать свойства замещаемых биологических структур. Для производства биопластических материалов используются биодеградируемые полимеры: альгинаты, коллаген, желатин, хитозан, фиброины шелка, полиэфиры бактериального происхождения - полиоксибутираты и их сополимеры. Отличительная особенность биоматериалов - их способность к биодеградации и включение в метаболизм клеток продуктов распада, которыми являются моносахара; молочная и гликолевые кислоты и др. (Севастьянов В.И., Кирпичников М.П., 2011).

При создании современных конструкций для реконструктивной и восстановительной хирургии разработчики используют гиалуроновую кислоту (ГК) - гликозаминогликан, естественный компонент внеклеточного матрикса тканей позвоночных. Благодаря своим уникальным физико-химическим свойствам, таким как высокая гидрофильность и мультиполярность, молекула ГК способствует формированию оптимального внеклеточного матрикса для восстановления пораженных органов, предотвращая явления фиброза и формирование рубцовых тканей. В большинстве своем наноструктурированные материалы на основе ГК получают с помощью технологии химической модификации и биосинтеза дополнительных протеиновых компонентов (Хабаров В.Н., 2012). Высокая эффективность микро- и наноструктурированных биоматериалов на основе ГК подтверждена клиническими показателями, например, при лечении дефектов покровных тканей, вызванных повреждениями (механические травмы, ожоги) и заболеваниями сосудов (трофические язвы нижних конечностей) (Зиновьев Е.В., 2013; 2014).

К одному из перспективных направлений использования биопластических материалов многими исследователями относится разработка двух- и трехмерных матриксов для тканеинженерных конструкций и биоискусственных органов (Рахматуллин Р.Р., 2014).

Одним из перспективных направлений применения биопластических материалов в последнее время является их использование в качестве структурной основы для тканеинженерных конструкций (ТИК). Последние по сравнению с суспензионными клеточными трансплантатами повышают выживаемость клеток, обеспечивают их более активную пролиферацию за счет адгезии на матриксе. Материал ТИК выступает в роли объемообразующего агента, способствует активной индукции ангиогенеза и репаративной регенерации. Благодаря ряду специфических физико-химических свойств (гидрофильность, мультиполярность, иммунологическая толерантность) молекула ГК, используемая как основа для ТИК, способна формировать оптимальный внеклеточный матрикс (Хабаров В.Н., 2012).

Уровень техники

Известна технология регенеративной биопластики дефектов покровных тканей (Патент РФ №2547386, опубл. 10.04.2015), включающая подготовку раны и наложение пластины биопластического материала, в качестве биопластического материала используют гистоэквивалент-биопластический материал, в состав которого входит гидроколлоид нативной формы гиалуроновой кислоты и пептидный комплекс, при этом в перфорации гистоэквивалент-биопластического материала наносят жизнеспособные округлые лоскуты аутотканей и накрывают второй пластиной биоматериала.

Недостатком этого способа является низкая клиническая эффективность, так как для регенерации раны используются ткани самого пациента в качестве источника регенерации, помещаемые в лунки пластического материала. Взятые фрагменты тканей пациента («кусочки» кожи) вокруг хронически протекающего воспаления обладают низкой регенеративной способностью, часто лизируются, провоцируя развитие зон вторичного некроза, микробного воспаления.

Раскрытие сущности изобретения

Задачей настоящего изобретения является преодоление недостатков уровня техники и, в частности, повышение эффективности регенерации покровных тканей в условиях бесперевязочного ведения раны. Задача решается тем, что в способе восстановления дефектов покровных тканей, включающем подготовку раны и наложение гистоэквивалент-биопластического материала, в перфорации которого наносят жизнеспособные округлые лоскуты аутотканей, жизнеспособные округлые лоскуты аутотканей предварительно помещают в культуральную среду на 72 часа с температурой 36-37°С, содержащую суммарно 0,01% массовой доли фермента коллагеназы и гиалуронидазы.

Техническим результатом способа восстановления дефектов покровных тканей согласно настоящему изобретению является сокращение сроков регенерации покровных тканей в условиях ведения раневого процесса для заживления раны без перевязок (восстановления покровных тканей).

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1 изображена схема способа восстановления дефектов покровных тканей по изобретению, где 1 - раневой дефект, 2 - аутоклеточная суспензия, 3 - жизнеспособные округлые лоскуты аутотканей, 4 - гистоэквивалент-биопластический материал, 5 биоклеточная матрица.

На фиг. 2 изображены клетки кожи спустя 7 суток культивирования; окраска Н&Е (гематоксилином и эозином), об. ×20; где 6 - стратифицированный пласт кератиноцитов, 7 фибробласты, 8 - фибриновый гель, 9 - агрегаты кератиноцитов, 10 - CMComplex.

На фиг. 3 изображен гистологический срез биоматериала гиалуроновой кислоты с культурой клеток фибробластов и кератиноцитов, иммуногистохимия с антителами к виментину и панцитокератину, увеличение в 20 раз; где 11 - окраска кератиноцитов на панцитокератин, 12 - окраска фибробластов на виментин.

Осуществление изобретения

Предлагаемый способ восстановления дефектов покровных тканей реализуется следующим образом. Предварительно осуществляется тщательный туалет раны с использованием раствора мирамистина и 3% пероксида водорода, удаляются нежизнеспособные участки тканей, дно раны скальпелем освежается до появления т.н. «кровяной росы». Края раны иссекают, осуществляют забор округлых кусочков жизнеспособной ткани кожи размером 0,5 на 1 мм, которые затем помещают в культуральную среду для клеточного культивирования (100 мл) с температурой 36-37°С, содержащую суммарно 0,01% массовой доли ферментов коллагеназы и гиалуронидазы, сочетание которых позволяет достичь своеобразное «разрыхление» матрикса, что значительно облегчает затем проникновение в рану жизнеспособных клеток. Данную емкость затем размещают в боксе для клеточного культивирования на 72 часа.

Через 72 часа полученную аутоклеточную взвесь распределяют по лункам гистоэквивалент-биопластического материала, который предварительно был перфорирован (50 лунок диаметром 1 мм на площади 100 см²) и размещен в культуральных чашках Петри, затем данные чашки Петри помещают на 24 часа в бокс для клеточного культивирования для распределения жизнеспособных клеток по всему объему гистоэквивалент-биопластического материала.

Через 24 часа гистоэквивалент-биопластический материал извлекают из чашек Петри и укладывают на раневую поверхность.

Дальнейшее ведение раны осуществляют посредством этапных перевязок, в ходе которых проводят контроль процесса заживления (эпителизации) язвы. В участках биодеградации материала выполняют дополнительную аппликацию биоматериала до полного замещения раневого дефекта.

Гистоэквивалент-биопластический материал, используемый в настоящем изобретении, известен из уровня техники, например из патентов РФ №2513838, опубл. 20.04.2014, и №2547386, опубл. 10.04.2015.

Предлагаемый способ восстановления дефектов покровных тканей был исследован в условиях клеточного культивирования in vitro. Исследования по совместному культивированию 1 л vitro фибробластов и кератиноцитов показали, что в структуре материала формируются клеточные ассоциации. Первичная культура кератиноцитов, полученная из кожи ферментативным способом, представляла собой гетерогенную суспензию клеток на разных стадиях дифференцировки. Кератиноциты слипались в отдельные агрегаты, которые формировали колонии; отдельные колонии разрастались и образовывали единый пласт. Одновременно с пролиферацией шли процессы дифференцировки и морфогенеза, которые приводили к стратификации - образованию многослойных пластов клеток (фиг. 2).

Констатировано, что фибробласты активно мигрируют в глубину матрикса, при этом наблюдается эффект трехмерного распределение клеток по всей его структуре, плотность клеток максимальна в ближайших слоях к поверхности и постепенно падала.

При совместном культивировании фибробластов и кератиноцитов последние формируют эпителиальный слой на поверхности матрикса (фиг. 3).

Таким образом, культуральные исследования предлагаемого способа восстановления дефектов покровных тканей демонстрируют его высокую эффективность.

Использование данного способа восстановления дефектов покровных тканей в условиях хронических ран при трофических язвах нижних конечностей осуществлялось в 14 клинических наблюдениях гранулирующих ран голеней, осложнивших течение варикозной болезни (стадия С6 согласно классификации СЕАР, хроническая венозная недостаточность 3-й степени). Трансплантация осуществлялась на чистую гранулирующую рану с отпечатком марли, без гнойного отделяемого, без фибрина, без воспалительных изменений окружающих тканей. При анализе полученных данных отмечено, что у всех пациентов после выполнения трансплантации обогащенной аутоклеточной суспензии на биопластический материал гиалуроновой кислоты, размещенный на ране, во всех клинических наблюдениях отмечена эпителизация 90-95% раневой поверхности, восстановление целостности кожного покрова в течение 15-25 суток после трансплантации.

Таким образом, по сравнению с прототипом, заявляемый способ восстановления дефектов покровных тканей позволяет вести заживление раны без перевязок (восстановления покровных тканей) и сокращает сроки регенерации покровных тканей.

Способ восстановления дефектов покровных тканей, включающий подготовку раны и наложение на нее гистоэквивалент-биопластического материала, в лунки которого помещают жизнеспособные аутоткани, отличающийся тем, что жизнеспособные кусочки ткани кожи предварительно помещают в культуральную среду, которая содержит суммарно 0,01% массовой доли ферментов коллагеназы и гиалуронидазы, на 72 часа с температурой 36-37°С, полученную аутоклеточную взвесь распределяют по лункам гистоэквивалент-биопластического материала, который затем помещают на 24 часа в бокс для клеточного культивирования, после чего гистоэквивалент-биопластический материал укладывают на раневую поверхность.

Изобретение относится к фармацевтической и пищевой промышленности, в частности к средству, подавляющему аппетит. .

Способ получения бактериальных амилаз // 1239146

Способ стимулирования образования амилазы глубинной культурой плесневого гриба // 123126

Способ получения искусственного зачатка зуба in vitro и полученный им искусственный зачаток зуба // 2638783

Группа изобретений относится к области медицины, а именно стоматологии. Предлагаемый способ получения искусственного зачатка зуба in vitro включает этапы: a) получения выделенных мезенхимальных клеток пульпы зуба; b) культивирования мезенхимальных клеток пульпы зуба в монослое на поверхностях для адгезивных клеток; и c) культивирования мезенхимальных клеток пульпы зуба в неадгезивных условиях в культуральных сосудах с культуральной поверхностью, обладающей ультранизким прикреплением клеток, для формирования клеточного агрегата, представляющего собой искусственный зачаток зуба.

Гидрогель для получения композиционных материалов с антибактериальной активностью для замещения костно-хрящевых дефектов методом 3d печати // 2632431

Изобретение относится к области медицины. Описан гидрогель, содержащий масс.

Способ получения клеточного пласта из клеток пигментного эпителия сетчатки // 2628697

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу получения клеточного пласта из клеток пигментного эпителия сетчатки, что может быть использовано в медицине.

Способ формирования биорезорбируемой полимерной клеточной матрицы для регенерации ткани // 2622009

Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ формирования биорезорбируемой полимерной клеточной матрицы для регенерации ткани, заключающийся в том, что изготавливают литографией комплект двумерных матриц в виде пленки полимера с поверхностными массивами микро- и нанообъектов, которые для каждой двумерной матрицы выполняют с индивидуальной архитектурой, системностью и взаимосвязанностью расположения в архитектуре микро- и нанообъектов, с возможностью задания структуры костной ткани, подлежащей формированию, с учетом ее биологических функций, с возможностью обеспечения механической поддержки, управления процессами дифференцировки и пролиферации клеток, затем двумерные матрицы собирают в каркас-носитель для клеточных культур и биологических агентов, ориентируя их друг относительно друга с возможностью задания структуры костной ткани и фиксируя в стопку, отличающийся тем, что сборку осуществляют в жидкой среде, отверждаемой при фотоэкспонировании в биорезорбируемый полимер, двумерные матрицы последовательно устанавливают друг относительно друга с зазором, в котором в процессе последовательной установки посредством проекционной трехмерной печати с использованием цифрового проектора получают слои биорезорбируемого полимера, содержащие массивы микрообъектов с индивидуальной архитектурой, системностью и взаимосвязанностью расположения их в архитектуре возможностью задания внешней формы и внутренней трехмерной структуры матрицы, согласно трехмерной компьютерной модели кости, с возможностью обеспечения механической поддержки, управления процессами дифференцировки и пролиферации клеток в ортогональном направлении относительно поверхности двумерных матриц.

Способы рецеллюляризации ткани или органа для улучшения приживления трансплантата // 2611361

Изобретение относится к медицине. Описан способ рецеллюляризации ex vivo матрикса ткани или органа, включающий: a) предоставление децеллюляризованного матрикса органа млекопитающего или васкуляризованной ткани, где матрикс включает интактную капсулу органа, содержит сосудистую систему и где, когда жидкость вводят в одной точке входа указанной сосудистой системы указанного децеллюляризованного матрикса, указанная жидкость выходит другим путем; и b) реэндотелизацию матрикса указанных ткани или органа путем перфузирования, в антеградном и ретроградном направлениях, указанной децеллюляризованной сосудистой системы указанного матрикса ткани или органа композицией, включающей чистую популяцию эндотелиальных клеток или эндотелиальных клеток-предшественников.

Применение стромальных стволовых клеток жировой ткани для лечения свищей // 2608641

Изобретение относится к клеточной технологии. Описано применение полученных из жировой ткани стромальных стволовых клеток в производстве фармацевтической композиции для лечения свища у субъекта, где указанные полученные из жировой ткани стромальные стволовые клетки являются аллогенными по отношению к субъекту, которого предстоит лечить.

Способ получения трехмерного остеотрансплантата // 2574942

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, и предназначено для замещения дефектов костной ткани и коррекции травматических повреждений костей.

Способ трансплантации клеток человека с использованием микротрансплантатов (мкт), состоящих из нитчатого полигликолевого микроносителя и прикрепившихся к нему фибробластоподобных клеток // 2567303

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в том числе к медицинской и косметической трансплантологии, и представляет собой микротрансплантат (MKT), состоящий из клеток человека, прикрепившихся на поверхности микроносителя, состоящего из полигликолидных волокон, или их группы, диаметром до 20 мкм и длиной от 100 до 1000 мкм.

Технология регенеративной биопластики дефектов покровных тканей // 2547386

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано при лечении дефектов покровных тканей. Проводят подготовку раны.

Многомерный биоматериал и способ его приготовления // 2542430

Группа изобретений относится к медицине. Описан биоматериал, имеющий многомерную структуру и содержащий дифференцированную MSCs ткань и деминерализованный костный матрикс, который диспергирован в дифференцированной MSCs ткани, способ его приготовления и применение.

Способ профилактики образования келоидных и гипертрофических рубцов при закрытии лапаротомных ран // 2643332

Изобретение относится к области медицины, а именно к общей хирургии, эстетической хирургии, травматологии, и может быть использовано для обеспечения благоприятного заживления обширных ран передней брюшной стенки с образованием оптимального в функциональном и эстетическом отношении рубца.

Устройство для паховой герниопластики // 2639854

Изобретение относится к области медицины и медицинской техники, а именно к хирургическим устройствам, и в частности к устройствам для паховой герниопластики, и предназначено для повышения удобства выполнения и надежности аллопластики при паховых грыжах.

Аппарат внешней фиксации брюшной стенки для лечения компартмент-синдрома при третичном перитоните // 2638764

Изобретение относится к медицине. Аппарат внешней фиксации брюшной стенки для лечения компартмент-синдрома при третичном перитоните состоит из спиц Киршнера, двух опор, расположенных в параллельных плоскостях, соединенных тремя резьбовыми штангами, компрессирующего устройства в виде резьбового стержня, на одном конце которого установлена посредством гаек планка, плоскость широкой стороны которой перпендикулярна резьбовому стержню.

Компенсатор толщины ткани, содержащий контролируемое высвобождение и расширение // 2637167

Группа изобретений относится к области медицины, а именно - хирургии. Компенсатор толщины ткани содержит первый слой, включающий первый биосовместимый материал, герметично охваченный водонепроницаемым материалом, и второй слой, включающий второй биосовместимый материал, содержащий по меньшей мере одну капсулу.

Способ деформационно-термической обработки для формирования функциональных характеристик медицинского клипирующего устройства из сплава ti-ni с памятью формы // 2635676

Изобретение относится к металлургии, а именно к термомеханической обработке изделий из сплавов с памятью формы (СПФ) и наведению в них эффекта памяти формы (ЭПФ), в частности клипирующего устройства для создания гемостаза с возможностью восстановления кровотока в трубчатых эластичных структурах организма при проведении операций.

Способ профилактики пневмоцистной пневмонииии у реципиентов сердца в раннем послеоперационном периоде после трансплантации сердца // 2620016

Изобретение относится к медицине, а именно кардиохирургии и трансплантологии, может быть использовано для профилактики пневмоцистной пневмонии у реципиентов сердца в раннем послеоперационном периоде после трансплантации сердца.

Способ хирургического лечения опухоли околоушной слюнной железы // 2618165

Изобретение относится к медицине, а именно к челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано для хирургического лечения опухоли околоушной слюнной железы. Для этого осуществляют доступ к слюнной железе одним из стандартных разрезов кожи в предушной области, исходя из локализации опухоли.

Устройство закрытия раны с созданием отрицательного давления // 2612529

Изобретение относится к медицине. Устройство закрытия раны с созданием отрицательного давления содержит наполнитель раны, который характеризуется такими размерами и формой, чтобы помещаться в отверстии раны, и который предпочтительно обладает возможностью сокращения по меньшей мере вдоль первого направления относительно второго направления при приложении отрицательного давления к наполнителю.