Способ лечения острой ожоговой токсемии организма и способ получения противоожоговой сыворотки реконвалесцентов для лечения ожоговой токсемии организма

Группа изобретений относится к ветеринарии и может быть использована для лечения острой ожоговой токсемии организма. Для этого вводят в организм специфический антитоксический препарат. В качестве специфического антитоксического препарата используют противоожоговую сыворотку реконвалесцентов, которую вводят трехкратно - через 24, 48 и 72 часа после ожога обожженным животным подкожно в дозе 20-25 мг/кг живой. Также раскрыт способ получения указанной сыворотки. Группа изобретений позволяет получить противоожоговую сыворотку, а также использовать ее в терапевтических целях. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр.

 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к лечению острой ожоговой токсемии и к способу получения противоожоговой сыворотки реконвалесцентов.

Известны способы лечения острой токсемии, септитоксемии, инфекции после термического поражения путем применения бензилпеницилина, ристомицина, депорина, растворов для трансфузионной терапии и гемосорбия угольных сорбентов различных марок (Вихриев Б.С., Бурмистров В.М. «Ожоги». - Медицина, 1988. - С. 79-91). Известен также способ лечения ожоговой токсемии путем применения порошка, содержащего доксициклин (Машковский М.Д. «Лекарственные средства». - М.: Медицина, 1943. - Т. 2. - С. 228-229).

Недостатком способов является одностороннее (однонаправленное) действие ингредиентов, уменьшающее только бактериальную токсемию. Антибиотики не устраняют тканевой и метаболической токсемии, а эффект гемосорбции на угольных сорбентах обладает кратковременным действием.

Известен способ профилактики острой ожоговой токсемии путем некроэктомии ожогового струпа (В.И. Петров, Ю.Б. Сладков «Хирургия лучевых поражений кожи». - Л., 1973; Н.Е. Повстяной «Восстановительная хирургия ожогов». - М., 1973).

Известен также способ предупреждения ожоговой токсемии с немедленной ауто- и ксенопластикой (Л.А. Лимберг «Планирование операций на поверхности тела». - Л., 1963).

Недостатком способов является их слабая дезинтоксикационная эффективность, поскольку оперативное вмешательство не обеспечивает нейтрализации ожоговых токсинов (термотоксинов), циркулирующих в крови, лимфе, органах и тканях пораженных животных, т.к. через 2-3 сут после получения ожога наступает значительная токсемия крови с последующим нарушением гомеостаза, тканевого метаболизма и развития токсикоинфекции.

Известен также способ дезинтоксикации ожоговой токсемии путем переливания крови, плазмы, альбумина, протеина, раствора Рингера (Д.Е. Пекарский «Концепция патогенеза и принципы терапии острой ожоговой токсемии». - Клиническая хирургия. - 1978. - №3. - С. 320).

Недостатком способа является ежедневное многократное в течение недели переливание крови или ее заменителей, что трудновыполнимо как для исполнителя, так и для пациента, а также малодоступность и дороговизна переливаемого субстрата.

Известен также способ дезинтоксикации ожоговой токсемии путем введения антистафилококкового гамма-глобулина, антистафилококковой и синегнойной плазмы («Ожоги». - БМЭ, 1981. - Т. 17. - С. 231).

Недостатком способа является слабая токсиннейтрализующая способность используемых препаратов, поскольку они, ингибируя развитие стафилококковой инфекции, не обладают свойством нейтрализовать ожоговые антигены и термотоксины.

Между тем из источников информации известно, что в учении о патогенезе ожоговой болезни одной из первых была выдвинута токсическая теория, объясняющая развитие функциональных нарушений при ожоге отравляющим организм продуктами тканевого происхождения - аутоантигенами (ожоговыми антигенами), термотоксинами, которая названа ожоговой аутоинтоксикацией (Федоров Н.А. «К патогенезу ожоговой интоксикации». - Вестник АМН СССР. -1979, - №3, с. 33). Значение аутоинтоксикации в патогенезе ожоговой болезни не подлежит сомнению, ибо повышенный распад белков приводит к накоплению токсических веществ и наводнению организма этими веществами (антигенемия, токсинемия). Наводнение обожженного организма токсическими продуктами тканевой дезинтеграции приводит, с одной стороны, к снижению количества нормальных тканевых антител (глобулинов) и, с другой - в отдаленный период (период реконвалесценции) - синтезу противоожоговых антител как результат аутоиммунизации организма аутоантигенами (Аутоантитела облученного организма / Под ред. Н.Н. Клемпарская. - М.: Медицина, 1972. - 267 с.).

Установлено, что период реконвалесценции при ожоговой болезни сопровождается усиленным синтезом аутоантител, которые обуславливают положительную реакцию связывания комплемента (РСК) с антигенами из обожженных тканей (ожоговые антигены) человека и животных, независимо от видовой и органной специфичности («Ожоги». Большая медицинская энциклопедия // М.: Советская энциклопедия, 1981, Т. 2. С. 224).

При этом наибольший титр антител отмечается у реконвалесцентов - выздоровевших после тяжелых ожогов (III и IV степени); появляются они в крови на 30-40-й день после ожога и в последующем обнаруживаются в течение многих месяцев. В дальнейшем выяснилось, что сыворотка выздоравливающих животных и людей в период накопления комплементсвязывающих антител приобретает антитоксические свойства в отношении токсической сыворотки, взятой в период ожоговой токсемии (через 24 ч после ожога). Так была выдвинута и подтверждена гипотеза об образовании в организме обожженных в период реконвалесценции антител, обладающих защитным, т.е. нейтрализующим, действием в отношении токсических продуктов, наводняющих организм после тяжелой токсической травмы (Косяков П.Н. «Изоантигены и изоантитела человека в норме и патологии». – М.: Медицина, 1974. - 256 с.).

Признавая решающую роль противотканевых антител (аутоантител) в радиозащитном и лечебном эффекте сывороток и сывороточных глобулинов, в радиационной биологии успешно применяются сыворотки реконвалесцентов для лечения острой лучевой болезни (Гариб Ф.Ю. Антитоксические свойства сыворотки лучевых реконвалесцентов и серотерапия лучевой болезни / Автореф. дис. канд. мед. наук. - Самарканд, 1972; Гариб Ф.Ю. и др. Антитоксические свойства сывороток лучевых реконвалесцентов // Радиобиология, 1972. - Т. 12. - В. 6. - С. 912-916; Чавытко А.А. Применение крови реконвалесцентов при острой лучевой болезни в эксперименте // Мед. Радиол. 1968. - Т. 13. - №5. - С. 21-24).

Учитывая идентичность механизма развития (патогенеза) ожоговой и лучевой патологии, считаем логичным и целесообразным использование сыворотки переболевших и выживших после ожоговой болезни реконвалесцентов для лечения ожоговой токсемии. Известно, что ожоговая травма сопровождается дисфункцией иммунитета с развитием кишечной инфекции и трансформацией системной воспалительной реакции, заканчивающиеся ожоговым сепсисом. Из крови животных после тяжелого термического ожога выделяют кишечную палочку (Е. coli) и энтеробактерии (Enterobacter), являющиеся основными продуцентами эндо- и экзотоксинов, ведущих к развитию ожоговой аутоинтоксикации. Поэтому в период ожоговой токсемии эффективным средством борьбы с последствиями термического поражения является применение пробиотиков, оказывающих антимикробное действие благодаря выработке ими биологически активных субстанций: органических кислот, антибактериальных веществ (бактериоцинов, антибиотиков, ингибиторных протеинов), предотвращающих синтез энтеротоксина Е. coli и его нейтрализации. При этом установлено, что наибольшей антагонистической активностью к патогенной микрофлоре обладают бифидобактерии благодаря выработке ими бифидогенных факторов, включающих уксусную, молочную, муравьиную кислоты, этиловый спирт, лизоцим, ферменты (каталаза) и цитокины (интерферон), которые и обуславливают сильнейшие антибактериальные свойства пробиотика. Выбор бифидобактерий в качестве индуктора антитоксических термозащитных аутоантител обусловлен тем, что наиболее активными индукторами защитных противотканевых аутоантител являются вещества микробного происхождения экзо-, эндотоксины, полисахариды микробов, вакцины, пробиотики (Противолучевые эффекты иммуноглобулинов. А.А. Иванов, Н.Н. Клемпарская, Г.А. Шальнова и др. - М.: Энергоатомиздат, 1990. - 176 с.).

Известен способ лечения радиационно-термического поражения организма, включающий однократное подкожное введение облученного гамма-лучами в дозе 14,0 Гр бифидумбактерина в дозе 1,43⋅10⁶ КОЕ/кг с последующим нанесением на обожженный участок 10%-ного зверобойного масла, а затем через 3-4 сут - 10%-ной мази из зверобоя (патент RU №2549451, МПК А61К 35/66, А61К 36/38, А61Р 43/00, опубл. 27.04.2015 г., БИ №12).

Однако данный способ недостаточно эффективен для лечения острой ожоговой токсемии.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа лечения острой ожоговой токсемии за счет снижения бактериальной, тканевой и метаболической токсемии путем введения обожженным животным сыворотки крови реконвалесцентов, выживших после введения им индуктора синтеза антитоксических антител - радиобифидумбактерина.

Поставленная задача решается тем, что в способе лечения острой ожоговой токсемии, предусматривающем введение в организм специфического антитоксичного препарата, в качестве которого используют противоожоговую сыворотку реконвалесцентов, полученную от выживших после нанесения ожоговой травмы III степени животных и введения им индуктора синтеза антитоксичных антител - облученного в дозе 14,0 Гр бифидумбактерина, введенного однократно подкожно в дозе 1,43⋅10⁶ КОЕ/кг с последующим нанесением на обожженный участок 10%-ного зверобойного масла, а через 3-4 суток 10%-ной мази из зверобоя, у которых на 25-30-й день после ожога и применения индукторов берут кровь, получают сыворотку крови от реконвалесцентов каждого животного, собирают и выдерживают 30 мин при t 37°С, затем сгусток крови отделяют от стенок сосуда и помещают на 18 часов в холодильник при t 4°С, через 18 часов отделяют сыворотку, стерилизуют гамма-лучами в дозе 20-25 кГр и трехкратно через 24, 48 и 72 часа после ожога полученную противоожоговую сыворотку реконвалесцентов вводят обожженным животным подкожно в дозе 20-25 мг/кг живой массы, хранят сыворотку в холодильнике при t 4-6°С.

Применение полученной противоожоговой сыворотки реконвалесцентов позволяет снизить концентрацию ожоговых токсинов в крови путем их нейтрализации и обуславливает более благоприятное течение ожоговой болезни за счет противоожоговых антител сыворотки реконвалесцентов, ускоряет реконвалесценцию (выздоровление) и увеличивает выживаемость животных.

Способ лечения острой ожоговой токсемии предусматривает трехкратное подкожное введение сыворотки крови реконвалесцентов в дозе 20-25 мг/кг живой массы в период ожоговой токсемии через 24, 48 и 72 ч после получения ожоговой травмы. В качестве индуктора антитоксических противоожоговых антител у животных-доноров реконвалесцентных сывороток используют облученные гамма-лучами в дозе 14 Гр бифидобактерии, которые вводят однократно подкожно в дозе 1,43⋅10⁶ КОЕ/кг с последующим нанесением на обожженный подкожно в дозе 1,43⋅10⁶ КОЕ/кг с последующим нанесением на обожженный участок 10%-ного зверобойного масла, а затем через 3-4 сут - 10%-ной мази из зверобоя. Параллельно используют обожженных животных, которых не подвергают лечебным процедурам (контроль ожога).

Через 10, 20, 30 и 40 дней после ожога и применения лечебных средств у обожженных и леченых животных-доноров в динамике берут пробы крови и исследуют их в реакции связывания комплемента (РСК) с антигенами обожженных тканей (печеночный, почечный, кожный антиген) животных независимо от их органной и видовой специфичности на наличие и титр противоожоговых аутоантител. При этом определяют период максимального накопления комплементсвязывающих антител. Антитоксические свойства полученных в динамике сывороток определяют путем постановки реакции флокуляции (РФ) по G. Ramon (см. кн. М.В. Далин, Н.Г. Фиш «Белковые токсины микробов». - М.: Медицина, 1980. - С. 34). В качестве стандартного ожогового токсина при проведении тест-системы используют токсическую сыворотку, взятую у обожженных животных через 24 часа после нанесения ожога III степени, а в качестве антитоксина - испытуемые сыворотки обожженных и леченых противоожоговыми средствами, взятые в период реконвалесценции (10, 20, 30 и 40 сутки после нанесения ожога и применения лечебных средств-индукторов синтеза противоожоговых антител).

Для проведения РФ в преципитационные пробирки вносят разные соотношения токсина (токсическая сыворотка) и антитоксина (исследуемая сыворотка реконвалесцентов (0,1:0,9; 0,2:0,8; 0,3:0,7; 0,4:0,6; 0,5:0,5; 0,6:0,4; 0,7:0,3; 0,8:0,2; 0,9:0,1), взятых в различные сроки после применения лечебных средств - индукторов синтеза антитоксических антител). Пробирки с разными соотношениями компонентов инкубируют при температуре 56°С и отмечают среди них ту, в которой ранее всех визуально образуются флокулянты (преципитаты) специфического комплекса токсин - антитоксин.

Путем динамических серологических исследований проб сыворотки крови обожженных и леченых животных в РСК определяют, что максимальное накопление антитоксических аутоантител (7,0±0,3 log₂) наступает на 25-30 сут после ожога и применения индуктора синтеза защитных антител при значении оценочного антитоксического критерия - Lf=9,0 АЕ (0,1 мл антитоксической реконвалесцентной сыворотки нейтрализует (флокулирует) 0,9 мл токсинсодержащей сыворотки).

Параллельными серологическими исследованиями сывороток контрольных (обожженных, нелеченых) животных устанавливают, что максимальное накопление антиожоговых аутоантител в РСК-тесте наступает не ранее 35-40 дня после нанесения ожога при значениях титров, не превышающих 5,3±0,5 log₂, с значениями оценочного антитоксического критерия Lf=1,5 АЕ (0,4 мл антитоксической реконвалесцентной сыворотки контрольных животных ингибирует 0,6 мл токсической стандартной сыворотки).

У животных-доноров реконвалесцентных сывороток на 25-30 сут после ожога и применения индукторов антителогенеза (противоожоговых средств), и имеющих максимальный титр аутоантител (6-7 log₂ в РСК тест-системе и максимальные значения антитоксического критерия Lf=7-9, получают сыворотки крови от реконвалесцентов каждого животного, показавшего максимальный титр антител и антитоксический показатель, собирают в отдельный стеклянный цилиндр ГОСТ18770-74 и выдерживают 30 мин при температуре 37°С, затем сгусток крови отделяют от стенок сосуда и помещают на 18 часов в холодильник при температуре 4°С, затем фасуют.

Через 18 часов отделяют сыворотку общепринятым методом («Руководство по вакцинному и сывороточному делу» / Под ред. П.П. Бургасовна. - М.: Медицина, 1978. 439 с.).

Полученную по вышеописанному способу сыворотку реконвалесцентов вводят обожженным животных трехкратно подкожно через 24, 48 и 72 часа после ожога в дозах 20-25 мг/кг (0,4 мл/кг).

Способ лечения острой ожоговой токсемии организма и средств для его реализации иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Определение оптимального срока получения активных реконвалесцентных сывороток. Для этой цели опыты проводят на белых крысах, разделенных на 3 группы по 10 животных в каждой. Животных всех групп подвергают термической травме III степени путем прикладывания раскаленной металлической пластинки с охватом 10%-ной поверхности тела. Животных 1-й группы подвергают обработке средствами борьбы с острой токсемией, используя бензилпеницилины, ристомицин, целорин (Вихриев Б.С., Бурмистров В.М. «Ожоги». - Л.: Медицина, 1986. - с. 79-91). Животным 2-й группы однократно подкожно вводят облученный в дозе 14 Гр бифидумбактерин в дозе 1,4⋅10⁶ КОЕ/кг с последующим нанесениям на обожженный участок 10%-ного зверобойного масла, а затем через 3-4 сут - 10%-ной мази из зверобоя. Обожженных животных 3-й группы лечебным процедурам не подвергают и они служат контролем естественной реконвалесценции.

У всех животных в динамике (через 10, 20, 25, 30, 40, 50 дней) берут пробы крови и исследуют их на содержание комплементсвязывающих противоожоговых аутоантител в РСК.

Устанавливают, что максимальное накопление специфических антител (средний титр 6,5±0,5 log₂) на 20-25 сут регистрируют в сыворотке животных 2-й группы, получавших в качестве лечебного средства радиобифидумбактерин с противоожоговой мазью из зверобоя. При этом выживаемость составляла 100%.

У животных 1-й группы, подвергнутых лечению антибиотиками, максимальное накопление противоожоговых аутоантител (средний титр 3,7±0,3 log₂) устанавливают на 35-40 день после ожога и применения лечебных средств. Выживаемость при этом составляет 40%. Максимальный титр противоожоговых аутоантител (средний титр 2,5±0,7 log₂) у выживших животных 3-й группы (20%) (естественные реконвалесценты) отмечают на 40-45 день после ожога.

Таким образом, применение радиобифидумбактерина в сочетании с зверобойной мазью обеспечивает 100%-ную выживаемость обожженных животных, ускоряя период реконвалесценции в 2 раза с одновременным повышением титра антитоксических сывороток в 2,6 раза по сравнению с нелеченым контролем (естественная реконвалесценция). Применение общепринятых противоожоговых средств (антибиотики), хотя несколько (в 1,55 раза) ускоряет период реконвалесценции и усиливает синтез противоожоговых аутоантитела (в 1,44 раза по сравнению с естественной реконвалесценцией), однако эти показатели значительно уступают таковым реконвалесцентной сыворотки, полученной от животных 2-й группы, получавших в качестве индуктора противоожоговых антитоксических антител - радиобифидумбактерин и противоожоговую мазь на основе зверобойного масла.

Пример 2. Определение безвредности реконвалесцентных сывороток. Для определения безвредности полученной сыворотки ожоговых реконвалесцентов препарат вводили белым крысам одно-, двух- и трехкратно с интервалом 24, 48 и 72 часа в дозах 15, 20, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 200, 250, 300 мг/кг живой массы. Степень безвредности сыворотки оценивали по появлению или отсутствию побочных реакций на введение препарата. Установлено, что все животные, которым вводили сыворотки в вышеуказанных дозах, оставались здоровыми в течение 10 сут без проявления побочных реакций, что свидетельствует о безвредности реконвалесцентных сывороток.

Пример 3. Оценка анафилактогенности гомологичных и гетерологичных сывороток.

Для оценки анафилактогенности гомогенных и гетерологичных сывороток, опыты проводили на двух видах животных: кролики (гомологичные животные, от которых получены реконвалесцентные сыворотки) и овцы (гетерологичные животные по отношению к используемой сыворотке). Кроликам и овцам после ожоговой травмы III степени подкожно вводили сыворотку реконвалесцентов в дозах 50 мг/кг одно-, двух-, трехкратно через 24, 48 и 72 часа после нанесения ожога. Установлено, что, хотя испытуемый препарат оказывал на животных антитоксический противоожоговый эффект, однако овцы, которым 3-кратно вводили гетерологичную (кроличью), сыворотку, переносили такую операцию тяжело (появление одышки, беспокойства, повышение температуры тела). Полученные данные свидетельствуют о необходимости снижения анафилактогенности гетерологичных сывороток.

Пример 4. Нейтрализация видовой специфичности (анафилактогенности) сывороток. Для нейтрализации видовой специфичности (анафилактогенности) сывороток, полученную от кроликов, сыворотки подвергали радиационной обработке в стерилизующих дозах: 5, 10, 20 и 25 кГр. Степень нейтрализации видовой специфичности сывороток после радиационного воздействия проверяли на гетерологичных животных (овцы, свиньи, крупный рогаты скот, лошади) путем одно-, двух- и трехкратного подкожного введения кроличьих сывороток в терапевтических дозах 20-50 мг/кг. Установлено, что все животные, которым вводили облученные кроличьи сыворотки, оставались здоровыми в течение 10 сут без проявления побочных реакций, что свидетельствует об отсутствии анафилактогенности гетерологичных сывороток, т.е. о нейтрализации видоспецифичных антигенов в препарате.

Пример 5. Проверка стерильности облученных сывороток. Для оценки радиостерилизующей эффективности гамма-лучей облученные по примеру 4 сыворотки высевали на жидкие (МПБ) и твердые (МПА) питательные среды по 1 мл пробы из каждой серии сывороток. Посевы термостатировали в течение 7 сут, ведя наблюдение за ними и регистрируя появление колоний микроорганизмов (на МПА) и помутнения среды (на МПБ).

Установлено, что в посевах с пробами из облученных в дозах 20 и 25 кГр роста микроорганизмов не отмечено, что свидетельствует о стерильности облученных сывороток.

Следовательно, облучение сывороток реконвалесцентов гамма-лучами в дозах 20-25 кГр приводит не только к нейтрализации антигенной специфичности сывороток (ингибирование анафилактогенности), но и одновременно оказывает стерилизующий эффект, что позволяет избежать сложную и длительную стерилизующую фильтрацию сывороток через асбестовые миллипоровые пластины - фильтры, на которых сорбируются антитела, белки, что, во-первых, ведет к потере активности фильтруемых препаратов и, во-вторых, к быстрому выходу из эксплуатации стерилизующих фильтров из-за закупорки миллипор фильтруемым материалом.

Пример 6. Определение оптимальной лечебной дозы противоожоговых реконвалесцентных сывороток.

Для этой цели животным, подвергнутым ожогу III степени по примеру 1, однократно, двух- и трехкратно подкожно вводят сыворотки ожоговых реконвалесцентов в дозах 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100 мг/кг через 24, 48 и 72 часа после нанесения термического ожога и определяют оптимальную лечебную дозу по критерию выживаемости и течению ожоговой токсемии. Устанавливают, что максимальная выживаемость и снижение признаков ожоговой токсемии наблюдается при 3-кратном применении сывороток реконвалесцентов в дозах 20-25 мг/кг. При снижении дозы (10, 15 мг/кг) препарата наблюдается ослабление лечебного эффекта, а большие дозы (30 мг/кг и выше) не приводят к улучшению лечебного эффекта, увеличивая перерасход сыворотки.

Пример 7. Определение оптимальных сроков и кратности введения сыворотки ожоговых реконвалесцентов. Для этой цели животных, подвергнутых термическому ожогу III степени по примеру 1, подвергают лечению сывороткой ожоговых реконвалесцентов в оптимальных лечебных дозах (20-25 мг/кг) путем одно-, двух-, трех-, четырех-, пяти-, и шестикратного введения препарата через 24, 48, 72 часа; 48, 72, 96 часов; 24, 48, 72, 96 часов; 24, 72, 96, 126 часов; 24, 72, 96, 126, 180 часов; 12, 24, 48, 72, 86, 126 часов после нанесения термического ожога.

Опыты показали, что оптимальным является трехкратное введение сыворотки реконвалесцентов в дозе 20-25 мг/кг через 24, 48 и 72 часа после нанесения ожога. Ни снижение кратности введения (1-, 2-кратное), ни повышение ее (4-, 5-, 6-кратное) и изменение интервала между введениями сыворотки не обеспечивали достаточно высокую эффективность лечения ожоговой токсемии.

Пример 8. Оценка дезинтоксикационной эффективности сыворотки ожоговых реконвалесцентов. Для оценки дезинтоксикационной эффективности сывороток ожоговых реконвалесцентов опыты проводили на 20 половозрелых овцах породы «Прекос» со средней живой массой 37±2 кг. Животных подвергали термической ожоговой травме III степени. Овцам первой группы 3-кратно с интервалом 24, 48 и 72 часа подкожно вводили нативную (необлученную, простерилизованную общепринятым методом) сыворотку реконвалесцентов в дозе 20-25 мг/кг живой массы; овцам 2-й группы в аналогичных условиях вводили облученную (простерилизованную γ-лучами) в дозе 20 кГр сыворотку реконвалесцентов в дозе 20-25 мг/кг; овцам 3-й группы вводили плазму крови по 20 мл по 2 раза в день в течение недели после нанесения ожоговой травмы (известный способ); облученных животных 4-й группы не подвергали никаким лечебным процедурам и они служили контролем ожоговой токсемии.

На 9-е сутки после лечения термического ожога (период максимальной ожоговой токсемии) у всех животных брали пробы крови и в сыворотках крови определяли содержание токсина (термотоксина) в реакции флокуляции (РФ) по J.Ramon с использованием в качестве индикаторного компонента в тест-системе антитоксической гипериммунной сыворотки.

Результаты иммунохимических исследований в РФ-тест-системе по индикации ожогового токсина (термотоксина) в сыворотке крови овец представлены в таблице.

п/к - подкожное введение препарата

*-Р<0,05; **-Р<0,01; ***-Р<0,001; РФ - реакция флокуляции

Из данных таблицы видно, что использование облученной в дозе 20 кГр сыворотки реконвалесцентов оказывало максимальное детоксицирующее действие на течение ожоговой токсемии, достоверно снижая содержание термотоксина в крови больных ожоговой болезнью животных в 2,57 раза (Р<0,001) по сравнению с обожженными нелеченым животными (2 группа овец). Применение на этом фоне необлученной сыворотки реконвалесцентов оказывало менее выраженное антитоксическое действие, снижая уровень термотоксинов в сыворотке крови овец 1-й группы в 1,49 раза (Р<0.01) по сравнению с нелечеными обожженным контролем. Хотя этот показатель превышает таковой контрольных (обожженных нелеченых) животных, однако он значительно ниже (в 1,73 раза, Р<0,01), чем таковой леченых облученной сывороткой реконвалесцентов. Семикратное внутривенное введение плазмы крови по 20 мл 2 раза в день в течение 7 дней оказывало менее выраженное антитоксическое действие (известный способ), снижая содержание термотоксина в крови обожженных овец только на 19%, что не обеспечивало достаточно выраженного антитоксического эффекта.

Таким образом, использование сыворотки реконвалесцентов оказывает на обожженный организм детоксицирующий эффект, существенно снижая содержание в крови термотоксинов - основных агентов ожоговой токсикемии, благоприятно влияет на течение и исход ожоговой болезни. При этом использование индуктора синтеза защитных антитоксических аутоантител - противоожоговых средств (радиобифидумбактерина и противоожоговой мази из зверобоя) существенно усиливает синтез антитоксических аутоантител в крови доноров реконвалесцентной сыворотки, ускоряя период реконвалесценции ожоговых больных, обеспечивая тем самым получение лечебного препарата - сыворотки реконвалесцентов. Использование метода радиационной биотехнологии и стерилизации сыворотки реконвалесцентов гамма-лучами в дозе 20-25 кГр оказывает на препарат тройное действие: надежная стерилизация лечебного препарата, повышение его фармакологического эффекта путем радиомодификации активных центров молекул антител и самое главное - снижение анафилактогенности, создающей серьезную проблему при использовании с лечебной целью гетерологичных сывороток, т.е. нейтрализация гетерологичных антигенов и антивидовых антител, являющихся индукторами анафилактического эффекта при использовании гетерологичных лечебных сывороток.

Приведенные примеры свидетельствуют о том, что предложенный способ лечения ожоговой токсемии сывороткой реконвалесцентов обеспечивает снижение концентрации ожоговых токсинов в крови путем их нейтрализации, обуславливая более благоприятное течение ожоговой болезни и ускоряя период реконвалесценции (выздоровления) и увеличивая выживаемость животных.

Разработанный способ может быть использован для масштабированного получения противоожоговой антитоксической сыворотки с использованием крупных животных - доноров (волов, лошадей), от которых получают значительное количество сывороток крови с лечебно-диагностической целью.

1. Способ лечения острой ожоговой токсемии организма, предусматривающий введение в организм специфического антитоксичного препарата, отличающийся тем, что в качестве специфического антитоксичного препарата используют противоожоговую сыворотку реконвалесцентов, полученную согласно способу по п. 2, которую вводят трехкратно - через 24, 48 и 72 часа после ожога обожженным животным подкожно в дозе 20-25 мг/кг живой.

2. Способ получения противоожоговой сыворотки реконвалесцентов для лечения ожоговой токсемии организма, характеризующийся тем, что противоожоговую сыворотку реконвалесцентов получают от выживших после нанесения ожоговой травмы III степени животных и введения им индуктора синтеза антитоксических антител - облученного в дозе 14,0 Гр бифидумбактерина, введенного однократно подкожно в дозе 1,43⋅10⁶ КОЕ/кг, с последующим нанесением на обожженный участок 10%-ного зверобойного масла, а через 3-4 суток - 10%-ной мази из зверобоя, у которых на 25-30-й день после ожога и применения индукторов берут кровь, получают сыворотку крови реконвалесцентов от каждого животного, собирают и выдерживают 30 мин при температуре 37°С, затем сгусток крови отделяют от стенок сосуда и помещают на 18 часов в холодильник при температуре 4°С, через 18 часов отделяют сыворотку, стерилизуют гамма-лучами в дозе 20-25 кГр и трехкратно через 24, 48 и 72 часа после ожога полученную противоожоговую сыворотку реконвалесцентов вводят обожженным животным подкожно в дозе 20-25 мг/кг живой массы, хранят сыворотку в холодильнике при температуре 4-6°С.