Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с helicobacter pylori

Авторы патента:

Синяков Александр Александрович (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2651033:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук" (ФИЦ КНЦ СО РАН) (RU)

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori. Проводят иммунологическое исследование гепаринизированной венозной крови больных. Методом непрямой иммунофлюоресценции в крови определяют абсолютное количество естественных киллеров (NK-клеток), а в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни цитокинов - интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФН-γ). При абсолютном количестве NK-клеток ниже 0,17×10⁹/л, уровне ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка. Способ позволяет своевременно диагностировать хронический атрофический гастрит, корректировать план и тактику лечения данной категории больных. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии и иммунологии, и может быть использовано для диагностики хронического атрофического гастрита.

На сегодняшний день хронический гастрит (ХГ) - наиболее распространенное заболевание желудочно-кишечного тракта. По данным Всемирной организации здравоохранения хроническим гастритом болеют 80% населения Земли. Считается, что инфекция Helicobacter pylori (Н. pylori) является одной из распространенных причин возникновения хронического гастрита, и степень выраженности хронического гастрита зависит от вирулентности штаммов Н. pylori, а развитие атрофии - от генетической предрасположенности и индивидуального ответа на инфицирование Н. pylori [1]. Возникающие при хроническом гастрите структурные изменения слизистой оболочки желудка приводят к нарушению основных функций желудка, в первую очередь кислото- и пепсинообразующей. При этом одной из важных эпидемиологических особенностей хронических гастритов является их предраковый потенциал. Так, при нормальной структуре слизистой оболочки желудка 10-летний риск возникновения рака желудка составляет менее 1%, при хроническом аутоиммунном гастрите с выраженной атрофией он равен 1-9%, а при Н. pylori - ассоциированном хроническом гастрите с выраженной атрофией - 4-30%. [1]. В связи с этим функционально-морфологическое изучение желудка при различных типах ХГ дает возможность предусмотреть возможные варианты дальнейшего развития патологии, провести патогенетическое лечение и предупредить прогрессирование болезни. Таким образом, ранняя диагностика хронического атрофического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, является актуальной для предупреждения трансформации его в рак желудка.

Известен способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, включающий взятие биоматериала в виде слизистого секрета желудка со всей поверхности антрального и пилорического отделов, смешивание биоматериала с реактивом Несслера для определения в нем наличия аммиака и последующую оценку характера окраски смеси [2]. При окрашивании смеси в желтый цвет и/или выпадении из нее осадка диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori. Недостатки известного способа: трудоемкость из-за необходимости забора слизистого секрета со всей поверхности как антрального, так и пилорического отделов желудка, малая информативность, так как оценивается только показатель цвета смеси, при этом не учитываются возможные оттенки полученной окраски смеси и другие характеристики и параметры.

Задачей изобретения является создание информативного способа для ранней диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori с атрофическими изменениями слизистой оболочки.

Задача достигается тем, что проводят иммунологическое исследование гепаринизированной венозной крови больных. Для этого методом непрямой иммунофлюоресценции в крови определяют абсолютное количество естественных киллеров (NK-клеток), а в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни цитокинов - интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФН-γ). При абсолютном количестве NK-клеток ниже 0,17×10⁹/л, уровне ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка.

Развитие хронического гастрита - сложный патогенетический процесс, характеризующийся последовательными изменениями в слизистой оболочке желудка. Согласно каскаду Корреа, рак желудка развивается через гастрит-атрофию-метаплазию-рак, следовательно, пациенты с хроническим атрофическим гастритом подвергаются повышенному риску развития рака желудка. Это положение было подтверждено 4-м Маастрихтским консенсусом в 2010 г. и европейскими рекомендациями по ведению пациентов с предраковыми изменениями в желудке.

NK-клетки, естественные киллеры, - гетерогенная популяция лимфоцитов системы врожденного иммунитета. Они осуществляют противоопухолевый и противовирусный контроль организма. Кроме естественной цитолитической активности, натуральные киллеры оказывают регулирующее влияние на иммунные реакции посредством секреции цитокинов, хемокинов и ростовых факторов.

Цитокины, как регуляторы межклеточных взаимодействий в иммунной системе, также способствуют активации противоопухолевого иммунного ответа, являясь связующим звеном между иммунной и другими системами организма. ИЛ-2 индуцирует пролиферацию и усиление цитотоксической функции NK-клеток. NK-клетки служат одним из основных источников ИФН-γ. Таким образом, использование в качестве достоверных маркеров диагностики атрофических изменений в слизистой оболочке желудка при хроническом гастрите абсолютное количество NK-клеток и содержание цитокинов в крови является целесообразным. Было доказано, что наиболее значимыми для диагностики атрофических изменений слизистой оболочки желудка, у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori, является понижение количества NK-клеток ниже 0,17×10⁹/л, уровни ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл. При данных уровнях исследуемых цитокинов и абсолютном количестве NK-клеток наличие атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом следует признавать высоким.

Пороговые значения цитокинов ИЛ-2, ИФН-γ и количества NK-клеток получены опытным путем на основании сопоставления уровней исследуемых цитокинов и количества естественных киллеров с данными по наличию атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori, полученных при последующем наблюдении за клиническим состоянием больных.

ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл ОШ=2,73 (95% ДИ=2,07-6,51, p_1,2=0,02)

ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл ОШ=4,23 (95%ДИ=2,63-9,61, p_1,2=0,0008)

NK-клетки менее 0,17×10⁹/л ОШ=7,21 (95%ДИ=2,45-16,28, p_1,2=0,0007)

Проведенные исследования показали, что при развитии атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом уровни цитокинов варьировали в пределах: ИЛ-2 - от 2,8 до 9,5 пг/мл, ИФН-γ - от 2,03 до 4,8 пг/мл, количество NK-клеток - от 0,1×10⁹ до 1,0×10⁹/л. При этом в 100% случаев при заявленных уровнях исследуемых цитокинов (ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл) и количестве NK-клеток (менее 0,17×10⁹/л) у больных хроническим гастритом независимо от стадии заболевания развивались атрофические изменения слизистой оболочки желудка.

NK-клетки - CD16⁺CD56⁺-лимфоциты, участвуют в выработке как противовоспалительных, так и иммуносупрессирующих цитокинов, таких как фактор некроза опухоли-альфа и ИЛ-10, секретируют гранулоцитарно-макрофагальный и гранулоцитарный колониестимулирующий факторы, ИЛ-3 и служат одним из основных источников интерферона-гамма в организме. Биологическая роль NK-клеток в противоопухолевой активности, контроле инфекционного процесса, регуляции пролиферативной активности и дифференцировки гемопоэтических клеток, участие в реакции отторжения трансплантата.

Интерлейкин-2 (ИЛ-2) является плейотропным цитокином, стимулирует пролиферацию и активацию натуральных киллеров и цитотоксических лимфоцитов, способен индуцировать активность практически всех клонов цитотоксических клеток, стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов и секрецию иммуноглобулинов.

Интерферон-гамма (ИФН-γ) обладает противоопухолевой активностью, активирует макрофаги, стимулирует иммунную цитотоксичность, усиливает макрофагальный киллинг, обладает антивирусной активностью.

Заявленный способ апробирован на 110 больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori (у 85 больных - хронический поверхностный гастрит, у 25 - хронический атрофический гастрит), проходивших лечение в гастроэнтерологическом отделение НИИ медицинских проблем Севера ФИЦ КНЦ СО РАН. У 24 больных были диагностированы атрофические изменения слизистой оболочки желудка, которые в дальнейшем подтвердились лабораторно-инструментальными исследованиями (эзофагогастродуоденоскопия с биопсией). У одного больного хроническим гастритом диагноз не совпал. Таким образом, совпадение результатов диагностики предложенным способом и общепринятым лабораторно-инструментальным методом составило 98,0%.

Способ осуществляется следующим образом.

У больных с диагнозом хронический гастрит, независимо от стадии заболевания, при поступлении в гастроэнтерологическое отделение забирают венозную кровь из локтевой вены свободным током в пробирку. Из образца выделяют лимфоциты и сыворотку. Методом непрямой иммунофлюоресценции иммунофенотипируют CD16⁺CD56⁺-лимфоциты (NK-клетки) и определяют их количество в 1 литре. Метод определения цитокинов основан на «сэндвич» варианте твердофазного иммуноферментного анализа с применением моно- и поликлональных антител к цитокинам ИЛ-2 и ИФН-γ с использованием коммерческих тест-систем «Вектор-Бест». При сочетании содержания цитокинов: ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл и количества NK-клеток ниже 0,17×10⁹/л, у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori, независимо от стадии заболевания, диагностируют наличие атрофических изменений слизистой оболочки желудка.

Клинический пример 1. Больной С., 45 лет, поступил на обследование и стационарное лечение в гастроэнтерологическое отделение НИИ медицинских проблем Севера ФИЦ КНЦ СО РАН с диагнозом: хронический гастрит, обострение. При поступлении состояние больного средней степени тяжести, беспокоят явления диспепсии и боль в эпигастральной области.

Проведено обследование по заявленному способу. Определены уровни цитокинов в сыворотке крови и количество NK-клеток:

Согласно изобретению, у больного диагностирован хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка. Установленный диагноз подтвержден данными ЭФГДС и биопсии. Больному назначена патогенетическая терапия.

Клинический пример 2. Больная Р., 59 лет, поступила на обследование и стационарное лечение в гастроэнтерологическое отделение НИИ медицинских проблем Севера ФИЦ КНЦ СО РАН с диагнозом: хронический гастрит, обострение. При поступлении состояние больной средней степени тяжести, беспокоит выраженная диспепсия. Проведено обследование по заявленному способу. Определены уровни цитокинов в сыворотке крови и количество NK-клеток:

Согласно изобретению, у больной не диагностирован хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка. По данным ЭФГДС с биопсией: у больной хронический поверхностный гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori. Больной назначена патогенетическая терапия.

Технический результат от реализации предлагаемого способа:

- повышение точности диагностики развития атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом, ассоциированным с Helicobacter pylori за счет анализа регуляторного звена иммунной системы;

- возможность ранней диагностики атрофических изменений слизистой оболочки желудка при хроническом гастрите, ассоциированном с Helicobacter pylori;

- расширение арсенала средств для диагностики атрофических изменений слизистой оболочки желудка у больных хроническим гастритом, ассоциированном с Helicobacter pylori.

Таким образом, предложенный высокочувствительный информативный способ позволяет своевременно диагностировать хронический Helicobacter pylori-ассоциированный гастрит с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка, корректировать план и тактику лечения данной категории больных.

Источники информации

1. Ивашкин В.Т., Шептулин А.А., Лапина Т.Л. Хронический гастрит, вызванный инфекцией Helicobacter pylori: диагностика, клиническое значение, прогноз. Пособие для врачей. М., 2009. 24 с.

2. Патент №2069699 РФ. Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori. Опубл. 27.11.1996.

Способ диагностики хронического гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что проводят иммунологическое исследование гепаринизированной венозной крови больных, для этого методом непрямой иммунофлюоресценции в крови определяют абсолютное количество естественных киллеров (NK-клеток), а в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа определяют уровни цитокинов - интерлейкина-2 (ИЛ-2) и интерферона-гамма (ИФН-γ), и при абсолютном количестве NK-клеток ниже 0,17×10⁹/л, уровне ИЛ-2 ниже 3,35 пг/мл, ИФН-γ ниже 2,25 пг/мл диагностируют хронический гастрит, ассоциированный с Helicobacter pylori, с атрофическими изменениями слизистой оболочки желудка.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу выделения антител, обладающих различными степенями фукозилирования. Способ основан на аффинности связывания антител с Fc-рецептором, иммобилизованными на подложке.

Антитела к родственной раково-эмбриональному антигену молекуле клеточной адгезии (сеасам) // 2650869

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности к моноклональному антителу, которое специфично связывается с CEACAM1 человека. Настоящее изобретение также раскрывает полинуклеотид, кодирующий указанное антитело, плазмиду для его продукции, фармацевтическую и диагностическую композиции для лечения злокачественного новообразования, характеризующегося сверхэкспрессией CEACAM1, и для детекции CEACAM1 человека у индивидуума соответственно.

Композиция и способ для обнаружения биопленок на жизнеспособных тканях // 2650803

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены композиция, набор и способ для обнаружения присутствия биопленки в жизнеспособных тканях.

Антитела к h7cr // 2650756

Настоящая группа объектов изобретения относится к области иммунологии. Предложено антитело, которое специфически связывает B7-H7CR человека, и его антигенсвязывающий фрагмент.

Способ прогнозирования развития бронхолегочной дисплазии тяжелой степени у недоношенных детей с экстремально низкой массой тела в неонатальном периоде // 2649830

Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии и неонатологии, и может быть использовано для раннего прогнозирования бронхолегочной дисплазии (БЛД) тяжелой степени у недоношенных детей, родившихся с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ).

Способ выбора тактики ведения родов у женщин при сахарном диабете // 2649778

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и может быть использовано для выбора акушерской тактики у беременных с сахарным диабетом. Для этого в сыворотке крови беременной в 37-38 недель гестации определяют уровень ИЛ-1β и окситоцина.

Способ прогнозирования исхода острой ишемии миокарда // 2649774

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии, и касается способа прогнозирования исхода острой ишемии миокарда. Способ включает определение в плазме крови уровня свободно циркулирующей митохондриальной ДНК (мтДНК) крови методом полимеразной цепной реакции в реальном времени с амплифицированием фрагмента гена 16S рРНК прямым и обратным праймерами.

Способ прогнозирования нарушений вегетативной регуляции у женщин в послеродовом периоде // 2649508

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и найдет применение для прогнозирования у беременных женщин нарушений вегетативной регуляции в послеродовом периоде.

Способ прогнозирования нарушений вегетативной регуляции у женщин в послеродовом периоде // 2649508

Способ оценки риска формирования хронической сердечной недостаточности у молодых мужчин, страдающих артериальной гипертензией // 2649497

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и может быть использовано для оценки риска формирования хронической сердечной недостаточности у молодых мужчин при артериальной гипертензии.

Способ оценки рецептивности эндометрия в период "имплантационного окна" // 2651762

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для оценки рецептивности эндометрия в период «имплантационного окна». Для этого на 20-23 день менструального цикла производят пайпель-биопсию эндометрия. Исследуют его методом иммуногистохимии с использованием двухэтапного стрептавидин-биотин-пероксидазного метода с демаскировкой антигена и с применением стандартных наборов моноклональных и поликлональных антител к следующим маркерам: ERα в строме, PR в строме, р53 в железах, bcl 2 в строме, CD95 в строме, Ki67 в строме, LIFR в железах, LIF в железах эндометрия. Используя полученные результаты, рассчитывают прогноз рецептивности эндометрия по формуле: d=-1,389х1 + 0,022х2 - 0,044х3 - 0,019х4 + 0,041х5 + 0,006х6 + 0,015х7 - 3,248, где х1 - индекс ER/PR в строме эндометрия (баллы H-score для определения ядерной экспрессии ER и PR), х2 - р53 в железах эндометрия (% окрашенных ядер в поле зрения), х3 - bcl 2 в строме эндометрия (% окрашенных ядер в поле зрения), х4 - CD95+ в строме эндометрия (% окрашенных клеток), х5 - Ki67 в строме эндометрия (% окрашенных ядер в поле зрения), х6 - LIF-R в железах эндометрия (баллы H-score), х7 - LIF в железах эндометрия (баллы H-score). При значениях d>0 эндометрий характеризуется как рецептивный, при d≤0 эндометрий характеризуется как нерецептивный. Способ позволяет определять восприимчивость эндометрия в период «имплантационного окна», повышая успешность имплантации. 2 пр., 2 табл.

Способ определения окислительной модификации тиоредоксина // 2651765

Изобретение относится к области медицины, к биохимической лабораторной диагностике, а именно к способу определения карбонилированного тиоредоксина. Способ включает инкубацию 0,25 мл лизированных 1% раствором тритона Х-100 клеток с 0,5 мл 10 мМ раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2 М НСl, связывающегося с карбонильными группами белков, инкубацию пробы при комнатной температуре в течение 1 ч, добавление 0,5 мл 20% ТХУ и центрифугирование при 11000 g 10 минут, промывание осадка 3 раза 1 мл раствора этанол: этилацетат (1:1) для экстракции избытка 2,4-динитрофенилгидразина, не прореагировавшего с карбонильными группами окисленных белков, высушивание осадка и ресуспендирование, дальнейшее инкубирование клеточного лизата с 0,5 мл магнитных частиц, нагруженных антителами к 2,4-динитрофенолу, в течение 3 ч при 25°С и непрерывном перемешивании. Магнитные частицы со связавшимся комплексом антиген-антитело собирают с помощью магнитного штатива и трижды отмывают 0,5 мл 0,01 М натрий-фосфатным буфером, инкубируют в термостате 10 мин при 95°С, после чего перемешивают, далее магнитные частицы собирают в магнитном штативе, а надосадок используют для проведения вестерн-блоттинга с антителами к тиоредоксину.

Способ прогнозирования раннего развития язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // 2652275

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и касается раннего прогнозирования язвенной болезни двенадцатиперстной кишки (ЯБДПК) у татар Республики Башкортостан в возрасте до 45 лет. Сущность способа: выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, проводят генотипирование полиморфизма rs1800872 гена IL10 методом полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом. При выявлении протективного генотипа А/А прогнозируют низкий риск развития ЯБДПК у лиц татарской этнической принадлежности в возрасте до 45 лет. Использование изобретения повышает точность прогноза за счет определения патогенетического механизма воспаления, упрощает исследование. 2 табл., 1 пр.

Способ прогнозирования риска развития сердечно-сосудистой патологии у особи женского пола // 2652304

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития сердечно-сосудистой патологии у особи женского пола, который включает: определение уровня про-нейротензина 1-117 в сыворотке крови, плазме крови или цельной крови, корреляцию уровня про-нейротензина 1-117 с риском развития сердечно-сосудистой патологии, где повышенный уровень является прогностическим для повышенного риска и где указанная сердечно-сосудистая патология представляет собой инфаркт миокарда, инсульт, острую сердечную недостаточность и смерть, связанную с инфарктом миокарда, инсультом или острой сердечной недостаточностью, и где уровень про-нейротензина 1-117 определен натощак. Изобретение обеспечивает эффективное прогнозирование риска развития сердечно-сосудистой патологии у особи женского пола. 9 з.п. ф-лы, 2 ил., 21 табл., 3 пр.

Кассета для тестирования со встроенным передаточным модулем // 2652441

Изобретение относится к области клинических диагностических приспособлений. Система кассеты для тестирования содержит кожух кассеты, включающий по меньшей мере одно впускное отверстие для образца, множество камер для хранения, множество камер для реакций и сеть для текучей среды, соединяющую по меньшей мере одно впускное отверстие для образца, по меньшей мере часть множества камер для хранения и по меньшей мере часть множества камер для реакций с первым множеством проходов, расположенных на внутренней поверхности кожуха кассеты. Система также содержит полый передаточный модуль, расположенный в кожухе кассеты, содержащий второе множество проходов вдоль внешней поверхности передаточного модуля, которые ведут в передаточную камеру передаточного модуля, при этом передаточный модуль выполнен с возможностью перемещения в боковом направлении вдоль длины кожуха кассеты. При этом при перемещении в боковом направлении передаточный модуль выполнен с возможностью выравнивания по меньшей мере части первого множества проходов по меньшей мере с частью второго множества проходов. Изобретение позволяет устранить перекрестное загрязнение образцов в диагностическом оборудовании. 39 з.п. ф-лы, 26 ил.

Способ диагностики присоединения преэклампсии у беременных с хронической артериальной гипертензией // 2652447

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для диагностики присоединения преэклампсии у беременных женщин с хронической артериальной гипертензией в сроки гестации 24-37 недель. Сущность изобретения состоит в том, что у женщин с хронической артериальной гипертензией в 24-37 недель гестации в периферической венозной крови определяют показатель относительного содержания CD11b+ клеток в популяции лимфоцитов и при его значении более 19,8% диагностируют присоединение преэклампсии. Предлагаемый способ позволяет с высокой точностью, чувствительностью и специфичностью диагностировать преэклампсию у беременных женщин с хронической артериальной гипертензией, расширяет арсенал диагностических средств при данной патологии, что способствует снижению тяжелых осложнений при беременности, в родах, связанных с развитием преэклампсии, у данной категории пациенток, уменьшению частоты перинатальной патологии. Точность способа – 91,7%, чувствительность – 88,2%, специфичность – 96,2%. 3 пр., 1 табл.