Стабилизированная лекарственная форма конъюгата этидроната с цитарабином и её применение

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики и раскрывает противоопухолевый препарат в виде стабилизированной лекарственной формы, представляющей собой лиофилизат для приготовления раствора для парентерального введения и способ его получения, раствор для паретнтерального введения и его применение. Стабильная лекарственная форма представляет собой лиофилизат, включающий конъюгат этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемую соль, и стабилизатор, который представляет собой хлорид магния, в молярном соотношении стабилизатора и конъюгата от 1:1 до 20:1. Новая лекарственная форма противоопухолевого препарата обеспечивает гидролитическую и физическую стабильность конъюгата при длительном хранении, а также стабильность растворов конъюгата для парентерального введения при их клиническом применении. 4 н. и 14 з.п. ф-лы, 1 пр., 9 табл., 4 ил.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к области медицины и фармацевтики, а именно к новой лекарственной форме противоопухолевого препарата, обеспечивающей его гидролитическую и физическую стабильность, а также к способу создания такой лекарственной формы.

Уровень техники

Бисфосфонаты являются синтетическими аналогами пирофосфатов и характеризуются наличием в структуре остова молекулы фосфор-углерод-фосфорной связи (по сравнению с фосфор-кислород-фосфорной связью в составе пирофосфата), которая обеспечивает их устойчивость к гидролизу, а также пригодность для лечения дегенеративных заболеваний костей. Химические и биологические свойства бисфосфонатов варьируются в зависимости от различных заместителей при атоме углерода в фосфор-углерод-фосфорной связи.

Бисфосфонаты обладают высокой химической аффинностью к гидроксиапатиту, вследствие чего, связываясь на поверхности кости, ингибируют активность остеокластов -клеток, чьей функцией является резорбция костной ткани. Бисфосфонаты также могут воздействовать на остеобласты, которые играют важную роль в образовании кости. Таким образом, бисфосфонаты используются в клинической практике для ингибирования резорбции костной ткани при таких заболеваниях, как болезнь Педжета, остеопороз, метастатические поражения костной ткани, а также доброкачественная и злокачественная гиперкальциемия. Бисфосфонаты также используются для регулирования побочных эффектов противоопухолевой терапии, изменяя поверхность кости и ее микросреду, ингибируя специфические ферментативные цепочки и стимулируя апоптоз остеокластов и опухолевых клеток.

Бисфосфонаты, используемые на настоящий момент в терапии, включают алендронат, клодронат, этидронат, памидронат, тилудронат, ибандронат, золедронат, олпадронат, резидронат и неридронат. Кроме того, используются комплексы технеция-99m с соединениями бисфосфоновых кислот - для получения снимков высокого разрешения при сканировании костей (патент US 4810486). Производные бисфосфонатов использовались как терапевтические препараты при лечении таких заболеваний костей, как остеопороз, ревматоидный артрит и остеоартрит (патент US 5428181).

Ежемесячные внутривенные инъекции бисфосфонатов, помимо химио-, гормоно- и лучевой терапии, стали современным международным стандартом лечения больных с костными метастазами злокачественных опухолей, также как и лечения пациентов с множественной миеломой.

Одной из нерешенных проблем в лечении больных с костными метастазами является доставка химиотерапевтического агента в необходимой для разрушения опухоли концентрации в костную ткань. Поиск сочетания максимальной эффективности и приемлемой токсичности - сложная задача для исследователей при разработке противоопухолевых препаратов.

Для решения такой задачи был разработан и синтезирован химическим путем конъюгат двух молекул (МВС-11): этидроната - бисфосфоната со свойствами, направленными на предотвращение разрушения кости, и цитарабина - цитотоксического агента, разрушающего клетки опухоли (Monica М. Reinholz et. al., A promising approach for treatment of tumor-induced bone diseases: utilizing bisphosphonate derivatives of nucleoside antimetabolite //. Bone., 2010, 47(1), 12-22).

Механизм действия лекарственной субстанции, представленной конъюгатом этидроната с цитарабином, основан на способности бисфосфонатной части молекулы направлять конъюгат к местам костной деструкции. Устойчивость конъюгата в кровотоке после внутривенного введения такова, что обеспечивает время, необходимое для высвобождения противоопухолевого агента преимущественно в кости. Попав к месту костной деструкции, лекарственная субстанция гидролизуется с образованием цитарабина и этидроната, каждый из которых воздействует на пораженные ткани: цитарабин подавляет рост самой опухоли, а бисфосфонат останавливает резорбцию костной ткани, вызываемую воздействием опухолевых клеток, сосредоточенных на поверхности кости.

Однако применение конъюгата этидроната с цитарабином в клинической практике до настоящего времени невозможно из-за того, что конъюгат нестабилен как в кислой среде (что в совокупностью с низкой биодоступностью осложняет его пероральное применение), так и в водных растворах (что осложняет его парентеральное применение).

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является создание лекарственной формы конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли, пригодной для парентерального применения в клинической практике.

Техническим результатом данного изобретения является создание стабильной лекарственной формы конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли для парентерального введения, которая обладает высокой эффективностью при лечении костных поражений, вызванных злокачественными новообразованиями, а также обеспечивает гидролитическую и физическую стабильность растворов конъюгата для парентерального введения.

Указанный технический результат достигается путем создания стабилизированной лекарственной формы конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли, представляющей собой лиофилизат для приготовления раствора для парентерального введения, включающий конъюгат этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемую соль и стабилизатор, который представляет собой соль двухвалентного металла, причем молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли в лиофилизате составляет от 1:1 до 20:1.

В некоторых вариантах изобретения фармацевтически приемлемая соль конъюгата этидроната с цитарабином представляет собой тринатриевую соль конъюгата этидроната с цитарабином.

В некоторых вариантах изобретения в качестве соли двухвалентного металла используются соли магния или кальция.

В части вариантов изобретения в качестве соли двухвалентного металла используется хлорид кальция или хлорид магния.

В части вариантов изобретения молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 12:1.

В части вариантов изобретения молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 2:1.

В некоторых вариантах изобретения молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет 2:1.

Достижение указанного технического результата возможно также при осуществлении способа получения вышеуказанной стабилизированной лекарственной формы, включающего следующие этапы:

- готовят водный раствор, содержащий конъюгат этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемую соль и стабилизатор, представляющий собой соль двухвалентного металла, причем молярное соотношение стабилизатора и конъюгата выбирают от 1:1 до 20:1;

- проводят стерильную фильтрацию полученного раствора;

- разливают полученный раствор в емкости для лиофилизации;

- проводят лиофилизацию.

В части вариантов способа молярное соотношение стабилизатора и конъюгата составляет от 1:1 до 12:1.

В части вариантов способа молярное соотношение стабилизатора и конъюгата составляет от 1:1 до 2:1.

В некоторых вариантах изобретения молярное соотношение стабилизатора и конъюгата составляет 2:1.

В некоторых вариантах изобретения концентрация конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли в растворе для лиофилизации составляет ≤25 мг/мл.

В частных вариантах в качестве емкостей используют флаконы объемом 20 мл.

В части вариантов стерильную фильтрацию полученного раствора осуществляют через стерильный фильтр с диметром пор 0,2 мкм.

Настоящее изобретение относится также к восстановленному раствору для парентерального введения, полученному растворением вышеуказанной стабилизированной лекарственной формы в фармацевтически приемлемом растворителе, пригодном для парентерального введения.

В некоторых вариантах концентрация стабилизированной лекарственной формы в восстановленном растворе лиофилизата составляет ≤10 мг/мл.

Еще в одних вариантах изобретения фармацевтически приемлемый растворитель представляет собой стерильную воду для инъекций или 5% раствор декстрозы в воде (D5W).

Изобретение относится также к применению вышеуказанного препарата конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли для лечения первичного рака кости или костного поражения, вызванного злокачественным новообразованием.

В частных вариантах изобретения костное поражение представляет собой множественную миелому, метастатические поражения костной ткани, вызванные раком молочной, предстательной или щитовидной железы или других тканей и органов.

В некоторых вариантах первичным раком кости является остеосаркома, саркома Юнга, хондросаркома, фибросаркома.

Краткое описание рисунков

Рис. 1. Влияние хлорида магния на образование арабинозилцитозин монофосфата (Ara-СМР) в водном растворе тринатриевой соли конъюгата этидроната с цитарабином (МВС-11). «Избыток» относится к соотношению MgCl₂ : MBC-11 12:1

Рис. 2. Флаконы объемом 20 мл с лиофилизированной лекарственной формой; концентрация МВС-11 50 мг/мл, заполнение флакона 2 мл. Представленные фотографии иллюстрируют вид спекшегося материала: а) сжатие; б) свободное перемещение при переворачивании флакона; в) около 40% всех флаконов в этом эксперименте содержат растрескавшийся материал.

Рис. 3. Флаконы объемом 20 мл с лиофилизированной лекарственной формой: а) концентрация МВС-11 20 мг/мл, заполнение флакона 5 мл; б) концентрация МВС-11 20 мг/мл, заполнение флакона 5 мл (слева) в сравнении с концентрацией МВС-11 50 мг/мл, заполнением флакона 2 мл (справа).

Рис. 4. Схема получения партии готового лекарственного препарата по изобретению в размере 15 литров (~3000 флаконов с объемом заполнения 5,0±0,1 мл).

Определения (термины)

Используемый в документе термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к таким солям, которые, в рамках проведенного медицинского заключения, пригодны для использования в контакте с тканями человека и животных без излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.д. и отвечают разумному соотношению пользы и риска. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых солей по изобретению включают тринатриевую, динатриевую, мононатриевую, трилитиевую, дилитиевую, монолитиевую и другие.

Термин «соли двухвалентных металлов» в настоящем документе относится к неорганическим и органическим солям кальция и магния. Примером приемлемых и нетоксичных солей кислот могут служить соли, образованные неорганическими кислотами, такими как соляная, бромоводородная, или хлорная кислоты, или органическими кислотами, такими как уксусная, лимонная или малеиновая.

Термин «фармацевтически приемлемый растворитель», применяемый в данном документе, относится к растворителям, которые не являются токсичными или вредными для пациента при применении в композициях по данному изобретению, включая парентеральное применение способами, представленными в данном документе. Подразумевается, что растворитель должен быть способен растворить соответствующие количества лекарственной формы по изобретению, предпочтительно, при умеренном перемешивании при комнатной температуре. Примерами фармацевтически приемлемых растворителей в рамках настоящего изобретения могут быть стерильная вода для инъекций, 5% раствор декстрозы в воде (D5W), физиологический раствор, в частности, изотонический физиологический раствор, и другие.

Под «парентеральным введением» в настоящем документе подразумевается внутривенное, внутриартериальное, внутримышечное, внутрикостное, внутрисуставное, подкожное или интратекальное введение. Введение может осуществляться путем инъекций малого объема (до 100 мл) или инфузией.

Под «терапевтически эффективным количеством (терапевтической дозой)» подразумевается количество лекарственной субстанции (или лекарственного препарата), вводимой или доставляемой пациенту, при котором у пациента с наибольшей вероятностью проявится ожидаемый терапевтический эффект. Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от возраста, массы тела и общего состояния пациента, тяжести заболевания, методики введения препарата, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п.В частности, для конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли терапевтически эффективными являются дозы от 0,001 до 50 мг/кг, более предпочтительно, от 0,001 до 25 мг/кг, еще более предпочтительно от 1 до 25 мг/кг. При этом под «пациентом» подразумевают человека или животное, которому необходимо проведение лечения или профилактики заболевания с помощью конъюгата. Ведение конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в лечении, осуществляется в дозе, достаточной для достижения терапевтического эффекта. При проведении лечения введение может осуществляться как разово, так и несколько раз в день, неделю (или любой другой временной интервал). Кроме того, соединение может вводиться в организм пациента ежедневно в течение определенного периода дней (например, 2-10 дней), после которого следует период без приема вещества (например, 1-30 дней).

Подробное раскрытие изобретения

Для создания фармацевтических композиций, пригодных для парентерального введения, водный раствор готовой лекарственной формы препарата должен обладать стабильностью, обеспечивающей время, достаточное для его клинического приготовления, краткосрочного хранения и применения. Кроме этого, сама готовая форма должна обладать достаточной стабильностью при длительном хранении.

Известно, что обеспечение стабильности фармацевтических композиций при длительном хранении может быть достигнуто лиофилизацией. Проведенными исследованиями было выявлено, что введение солей двухвалентных металлов несколько повышает гидролитическую стабильность водных растворов конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемых солей. Однако ни один из вышеуказанных подходов не обеспечивает получения стабильной лекарственной формы конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли для парентерального введения. Комбинированное же использование этих двух подходов осложняется тем, что двухвалентные катионы обычно снижают температуру стеклования, что осложняет процесс лиофилизации. Кроме того, двухвалентные катионы являются причиной физической нестабильности (способствуют образованию осадка) восстановленных растворов лиофилизатов.

В результате проведенных исследований неожиданно было выявлено, что в случае применения солей двухвалентных металлов в растворах конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли, эффект влияния двухвалентных катионов на получение стабильной лекарственной формы зависит от соотношения солей двухвалентных металлов и конъюгата в растворе для лиофилизации так, что оптимальным является соотношение стабилизатора и конъюгата, по меньшей мере, 1:1, более оптимальным - соотношение от 1:1 до 20:1, еще более оптимальным -от 1:1 до 12:1, и еще более оптимальным - от 1:1 до 2:1. При таком соотношении компонентов обеспечивается не только гидролитическая стабильность конъюгата, но и эффективное прохождение всех этапов процесса его лиофилизации. Образуемые в результате лиофилизаты сохраняют стабильность на протяжении длительного времени (до нескольких лет) и обладают оптимальной растворимостью, а получаемые из них растворы физически и гидролитически стабильны на протяжении нескольких часов, что обеспечивает возможность их применения для парентерального введения в клинической практике.

Возможность объективного проявления технического результата при использовании изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, содержащих сведения экспериментального характера, полученные в процессе проведения исследований по методикам, принятым в данной области. Сущность изобретения поясняется рисунками.

Следует понимать, что эти и все приведенные в материалах заявки примеры не являются ограничивающими и приведены только для иллюстрации настоящего изобретения.

Исследование влияния двухвалентных катионов магния и кальция на гидролитическую стабильность конъюгата этидроната с цитарабином

Исследовалась способность солей двухвалентных металлов (MgCl₂ и CaCl₂) замедлять гидролиз конъюгата этидроната с цитарабином.

В настоящем изобретении представлены специфические концентрации конъюгата и соотношения солей двухвалентных металлов и конъюгата, позволившие одновременно стабилизировать лекарственное средство в водном растворе и добиться оптимальных условий лиофилизации.

Были проведены исследования, в которых в качестве стабилизатора против гидролитического разложения был исследован хлорид магния. MgCl₂ был добавлен к растворам конъюгата МВС-11 в воде, тартратном буфере (50 ммоль/л, рН 5) и сукцинатном буфере (50 ммоль/л, рН 5). Были использованы следующие молярные соотношения MgCl₂ к субстанции МВС-11: (1:2), (1:1), (2:1) и выше (~12:1). Для оценки степени гидролиза регистрировали образование арабинозилцитозин монофосфата (Ara-СМР) (в %) через 24 часа при 25°С.

Добавление MgCl₂ к растворам конъюгата привело к заметному улучшению стабильности последнего. Через 8 часов при 25°С несколько образцов, преимущественно в воде, показали увеличение содержания Ara-СМР всего лишь на 0,2% по сравнению с предыдущими наблюдениями в ~2% (Таблица 1). В целом, образцы, приготовленные в воде, были более стабильными по сравнению с образцами, приготовленными с использованием буферных растворов. Исключение составляли образцы с большим избытком MgCl₂, для которых стабильность конъюгата в буферных растворах и воде была относительно сопоставима.

Согласно данным результатов эксперимента, при молярном соотношении MgCl₂ и конъюгата от 1:1 обеспечивается высокая гидролитическая стабильность конъюгата. Как следует из таблицы, использование воды в качестве растворителя и молярное соотношение MgCl₂ к МВС-11 2:1 обеспечивает наиболее высокую стабильность конъюгата в водных растворах. При более высоких концентрациях MgCl₂ отмечалось некоторое снижение эффекта, однако стабильность оставалась на высоком уровне (Рис. 1).

Также было исследовано использование хлорида кальция в качестве стабилизатора от гидролитического разложения в обоих буферных растворах и воде, константа скорости гидролиза сравнивалась с константой для MgCl₂. В воде при молярном соотношении MgCl₂ или CaCl₂ к МВС-11 2:1 константы скорости гидролиза оказались сходными (K=0,0005) и значительно превышали значения для водного раствора тринатриевой соли конъюгата этидроната с цитарабином, не содержащим вышеназванных солей (K=0,0044). При молярных соотношениях менее 2:1 скорость гидролиза была ниже для растворов, содержащих MgCl₂.

Добавление солей двухвалентных металлов к водному раствору МВС-11 в молярном соотношении 2:1 приводит к замедлению реакции гидролиза на 90%. Таким образом, предпочтительным соотношением соли двухвалентного металла и конъюгата этидроната и цитарабина является соотношение 2:1, однако положительный эффект влияния солей на гидролитическую стабильность проявляется уже при соотношении 1:1 и сохраняется при соотношении более 2:1 (при соотношении 12:1 и выше).

Термическая характеристика растворов для лиофилизации

Были исследованы термические свойства растворов, предлагаемых для лиофилизации.

Дифференциальная сканирующая калориметрия (ДСК) использовалась для идентификации наиболее низкой возможной переходной температуры внутри раствора на протяжении всего процесса лиофилизации, включая замораживание и обезвоживание. Для растворов большинства фармацевтических продуктов этим параметром является температура стеклования или «Т_ст». Все компоненты и их количества в растворе вносят вклад в итоговое значение Т_ст. Эта температура обычно на несколько градусов ниже температуры, при которой спекшийся материал может разрушиться в процессе лиофилизации (температура коллапса, Т_к). Без определения температуры коллапса при помощи таких методов, как криомикроскопия, температура стеклования может использоваться для выбора первичной температуры для сушки. До того момента, как первичная сушка завершится, исходная температура сушки должна быть установлена таким образом, чтобы не было флаконов, для которых была бы превышена температура стеклования (либо Т_к, если она известна). В противном случае структура спекшегося материала может нарушиться. С одной стороны, температура лиофилизации должна быть близкой к Т_ст, чтобы процесс протекал эффективно, а с другой - она не может превышать Т_ст из-за требований к процессу и качественным параметрам продукта. Таким образом, показатели температуры коллапса и стеклования являются важными параметрами расчета безопасных верхних температурных пределов, которые могут быть использованы для лиофилизации.

На основании предлагаемого наполнения флаконов лекарственным средством (100 мг действующего вещества на флакон) были приготовлены потенциальные растворы для наполнения. Вспомогательные вещества включали стерильную воду для инъекций (СВДИ), 50 мМ сукцинатный и тартратный буферы при рН 5, MgCl₂, сульфобутиловый эфир β-циклодекстрина (SBEβCD), маннитол и декстран 40. Кроме того, для растворов, содержащих маннитол, было проведено исследование влияния этапа отжиг (стадия процесса лиофилизации, при которой образцы выдерживаются при определенной температуре ниже точки замерзания в течение определенного промежутка времени) на улучшение кристалличности готового продукта. Результаты ДСК представлены в таблице 2.

Появление эндотермичности, позднее определенной как релаксация энтальпии, было характерно для большинства образцов, содержащих MgCl₂.

Исследование химической стабильности растворов для лиофилизации

Несколько вариантов растворов для лиофилизации были изучены в краткосрочном исследовании химической стабильности при 25°С, при этом буферные растворы не использовались. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Как отмечалось ранее, наиболее стабильные растворы содержат MgCl₂ в молярном соотношении к лекарственному веществу 2:1. Образцы с соотношением 1:1 несколько менее стабильны, но все же демонстрируют низкие значения константы гидролиза. Выявлено, что присутствие маннитола или декстрана, вопреки ожиданиям, не приводит к улучшению химической стабильности. В растворах с концентрацией 100 мг/мл на следующий день были обнаружены признаки образования осадка, что могло отразиться на приведенных в таблице значениях чистоты. Образцы, выделенные жирным шрифтом, показали достаточную стабильность для того, чтобы быть перспективными растворами для наполнения флаконов для проведения лиофилизации. За сутки при 25°С содержание конъюгата этидроната с цитарабином в этих образцах снизилось всего на 1-1,5%.

Варианты лиофилизированной лекарственной формы

Несколько растворов для заполнения флаконов были выбраны в качестве вариантов для приготовления лиофилизированной лекарственной формы. Выбранные лекарственные формы представлены ниже (Таблица 4).

Данные растворы были лиофилизированы с использованием обычного цикла с установленной первичной температурой сушильного стеллажа -26°С и температурой вторичного высушивания 32°С. Этап отжига не применялся (Таблица 5).

Лекарственные формы А, С, D и Е были выбраны для краткосрочного ускоренного исследования стабильности при 40 и 60°С. Для оценки степени гидролиза оценивалось образование Ara-СМР (в %). Через 21 день при 40°С все лекарственные формы, содержащие MgCl₂, показали сходные увеличения содержания Ara-СМР приблизительно на 0,4-0,5%. Для образцов с молярным соотношением 2:1 образование Ara-СМР происходило в несколько меньшей степени по сравнению с образцами с молярным соотношением 1:1. Через 8 дней при 60°С было показано увеличение содержания Ara-СМР приблизительно на 0,8%. Образец SBEBCD через 8 дней показал большее увеличение Ara-СМР (0,6% при 40°С и 1,6% при 60°С). Приблизительные оценки срока годности с использованием уравнения Аррениуса показывают, что длительное хранение при температуре 2-8°С должно обеспечить срок годности не менее двух лет, принимая во внимание тот факт, что уровень Ara-СМР, указанный в спецификации, должен быть менее 5,0%.

Исследование влияния использования этапа отжига

Для оценки использования этапа отжига в качестве части цикла была выбрана лекарственная форма с молярным соотношением MgCl₂ к МВС-11 (2:1). Отжиг является этапом процесса, во время которого образцы выдерживаются при специфической температуре ниже точки замерзания в течение определенного периода времени. Он используется, чтобы способствовать кристаллизации активных ингредиентов и наполнителей, а также для изменения формы и размера кристаллов льда при помощи Освальдовского созревания. Отжиг может влиять как на длительность цикла, так и на стабильность готового продукта.

Использование модулированной ДСК для характеристики лекарственной формы с действующим веществом в концентрации 50 мг/мл показало явную кристаллизацию при -37°С, которая не была ранее выделена из энтальпической составляющей (-27°С) во время быстрого вывода на заданный температурный режим. Наблюдение также подтвердило, почему в спекшемся материале в течение первого цикла лиофилизации при основной температуре сушки в -26°С имело место расплавление. Этап отжига при -35°С, что на два градуса выше температуры стеклования, был включен в лиофилизационный цикл. Для лиофилизции использовали флаконы объемом 5 мл, которые заполняли раствором по 2 мл в каждый. В результате цикла лиофилизации образовывался спекшийся материал без трещин.

Лиофилизированный материал выдерживался при 40°С для определения стабильности. Гидролиз оценивали по образованию Ara-СМР. Через 21 день (3 недели) содержание Ara-СМР повысилось на 0,4%, что было сходно с образцом, полученным с использованием лиофилизационного цикла без этапа отжига.

Не смотря на то, что с точки зрения химической стабильности этап отжига не имеет четких преимуществ или недостатков, рекомендуется использовать его для получения более крупных и однородных кристаллов, повышая таким образом эффективность цикла.

Стабильность предлагаемых растворов для наполнения флаконов для лиофилизации

Было проведено несколько исследований стабильности растворов, предлагаемых для наполнения флаконов для лиофилизации. Во время первого исследования оценивались следующие растворы при 2-8°С, 25°С и температуре окружающей среды в течение 30 часов (Таблица 6). Количество субстанции МВС-11 составляло 100 мг на флакон.

В целом, все растворы с молярным соотношением MgCl₂ : MBC-11 2:1 показали одинаковые уровни деградации МВС-11 (увеличение содержания Ara-СМР на 0,75% в течение 30 часов при температуре окружающей среды). За это же время содержание Ara-СМР в растворе с соотношением 1:1 в большинстве случаев было приблизительно на 0.1-0,3% выше. Этот результат находится в соответствии с другими наблюдениями, свидетельствующими в пользу того, что при увеличении соотношения стабилизатора и конъюгата от 1:1 и более, гидролитическая стабильность растворов увеличивается. Количество МВС-11 или количество присутствующего декстрана не оказывало существенного влияния на химическую стабильность.

Исследование физической стабильности растворов для наполнения

Как отмечалась ранее, использование двухвалентных катионов приводит к физической нестабильности, а именно, в результате применения двухвалентных катионов может образовываться нерастворимый осадок. Поэтому были проведены исследования с целью оценки физической стабильности растворов, содержащих различные концентрации конъюгата этидроната с цитарабином (от 10 мг/мл до 50 мг/мл) с соотношениями MgCl₂ к лекарственному веществу от 1:1 до 10:1. Приготовленные растворы хранили в стеклянных флаконах, часть из них профильтровали через 0,2 мкм поливинилиденфторидный (PVDF) фильтр. Исследование проводили при 2-8°С и комнатной температуре.

В целом, снижение общей концентрации МВС-11 в растворе для наполнения флаконов для лиофилизации улучшило физическую стабильность растворов, полученных растворением лиофилизата. Все растворы с концентрацией 10 мг/мл при обоих вариантах условий (то есть при 2-8°С и при комнатной температуре) были физически стабильны на протяжении 27 часов. Через 27 часов стал появляться некоторый осадок в одном из образцов, хранившихся при 2-8°С. Растворы с концентрацией 25 мг/мл были стабильны в течение 24 часов. После 24 часов несколько лекарственных форм показали признаки появления осадка. В растворах с концентрацией 25 мг/мл через 8 часов при 2-8°С наблюдали появление осадка. Также в процессе исследования отслеживалась химическая стабильность, и полученные данные соответствовали результатам предыдущих исследований. Сводные таблицы физических наблюдений представлены ниже.

Код результатов визуальных наблюдений:

* - прозрачный раствор (твердые частицы отсутствуют),

** - небольшие хлопьевидные частицы,

*** - большие белые хлопьевидные частицы.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлено, что при увеличении соотношения стабилизатора к конъюгату от 1:1 физическая стабильность растворов увеличивается. Кроме того, установлено, что увеличение концентрации конъюгата этидроната с цитарабином в растворе более 25 мг/мл отрицательно влияет на его физическую стабильность.

Исследование совместимости со средой для внутривенного введения

Был приготовлен раствор с концентрацией МВС-11 25 мг/мл и молярным соотношением MgCl₂ к МВС-11 2:1 с 5% декстраном, который затем разводили до концентрации 1 мг/мл в различных средах для внутривенного введения: фосфатно-солевой буфер, физиологический раствор, фосфатно-солевой буфер Дульбекко, изотонический раствор хлорида натрия, раствор Рингера с лактатом и 5% раствор декстрозы в воде (D5W). Раствор декстрозы D5W показал наименьшую деградацию МВС-11, содержание Ara-СМР в течение одного дня увеличилось на 1%. Данное увеличение было сходно с водным контрольным образцом, что указывает на то, что декстроза не оказывает отрицательного влияния на активный фармацевтический ингредиент МВС-11.

Исследование физической и гидролитической стабильности восстановленных лиофилизатов

В следующем исследовании использовался один из двух выбранных вариантов лекарственной формы. Выбранный вариант имеет состав, представленный в таблице 9.

Лиофилизированную лекарственную форму оценивали на совместимость с тремя различными средами для внутривенного введения в течение 24 часов - стерильную воду для инъекций (СВДИ), D5W и 0,9% раствор хлорида натрия. Исследовали низкие и высокие инфузионные дозы для клинического использования, которые составили 0,25 мг/мл и 10 мг/мл МВС-11 в растворе, соответственно. Лиофилизированную лекарственную форму сначала растворили в 5 мл СВДИ до получения концентрации 20 мг/мл МВС-11 тринатриевой соли, а затем помещали в стеклянные флаконы и разбавляли каждой средой для внутривенного введения до получения исследуемых инфузионных доз. Полученные таким образом растворы выдерживали при температурах 2-8°С и 25°С в течение 24 часов, оценивая образцы по внешнему виду, содержанию и чистоте в точках t=0, 2, 4, 6 и 24 часа.

В каждой контрольной точке растворы для внутривенного введения с высокой дозировкой оценивали по внешнему виду, после чего их разбавляли до номинальной аналитической концентрации 1 мг/мл растворителем, используемым в аналитическом методе оценки чистоты субстанции. Полученные таким образом образцы использовали для определения чистоты и содержания активной фармацевтической субстанции.

Результаты показали, что образцы с низкой концентрацией физически стабильны в течение 24 часов. Образцы, содержащие высокую дозу, физически стабильны до 6 часов. На основании данных, полученных через 6 часов, наилучшая химическая стабильность была достигнута при использовании D5W или воды. Для всех приготовленных растворов лекарственной формы максимальное увеличение содержания Ara-СМР составляло 1,4% в образцах с внутривенной средой на основе хлорида натрия с низкой дозой, хранившихся при 25°С в течение 6 часов. Для сравнения, образец с низкой дозой МВС-11 в среде D5W показал только 0,5% повышение содержания Ara-СМР при тех же условиях.

Пример приготовления стабилизированной лекарственной формы

Взвешивают 14,1±0,1 г хлорида магния гексагидрата в чистом сосуде емкостью 1 л. В эту же емкость добавляют 985,9±1,0 г стерильной воды для инъекций. Полученную смесь перемешивают на магнитной мешалке до полного растворения при комнатной температуре.

Взвешивают 15,69±0,05 г тринатриевой соли МВС-11 (поправка только на содержание воды) в сосуде емкостью 1 л. Далее в эту же емкость добавляют 744,1±3,0 г раствора хлорида магния, приготовленного выше. Полученную смесь перемешивают до полного растворения при комнатной температуре. Отбирают 3 мл аликвоту для контроля рН. Полученный раствор подвергают стерильному фильтрованию через 0,2 мкм поливинилиденфторидный (PVDF) фильтр в стерильную емкость, используя фильтрационный прибор Millipore SCGVU11RE. Полученный фильтрат разливают в стеклянные флаконы емкостью 20 мл по 5,4 мл в каждый и лиофилизируют.

Частично укупоренные резиновой пробкой флаконы с готовым продуктом полностью укупоривают с помощью прижимных плит лиофильной камеры и обжимают алюмо-пластовыми колпачками и затем помещают в холодную камеру для хранения при температуре 2-8°С.

Для внутривенного введения готовят восстановленный раствор лиофилизата путем растворения содержимого флакона предпочтительно в воде или 5DW таким образом, чтобы концентрация препарата составляла не более 10 мг/мл. Как было установлено, при больших концентрациях восстановленный раствор препарата не обладает физической стабильностью. Полученный таким образом восстановленный раствор переносится в инфузионный пакет стандартного объема, содержащий физиологический раствор или 5DW. Количество флаконов с восстановленным раствором лиофилизата на один инфузионный пакет определяется дозировкой по предписанию врача.

Различные варианты изобретения относятся к применению стабилизированной лекарственной формы конъюгата этидроната с цитарабином по изобретению для лечения первичного рака кости или костного поражения, вызванного злокачественным новообразованием.

Варианты изобретения также представлены способами лечения костных поражений, вызванных злокачественными новообразованиями. Способ включает введение данной стабилизированной лекарственной формы конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли, приготовленной описанным способом, пациенту в эффективной дозе. В различных вариантах лекарственная форма может вводиться парентерально, например, путем внутривенной инфузии. В различных вариантах онкологические заболевания могут включать множественную миелому, остеосаркому, метастатические поражения костной ткани, вызванные раком молочной или предстательной или щитовидной железы. В различных вариантах данного изобретения стабилизированная лекарственная форма конъюгата этидроната с цитарабином может вводиться пациентам в сочетании с другими препаратами в различных режимах терапии.

Данное изобретение также относится к набору, включающему лиофилизированную лекарственную форму конъюгата этидроната с цитарабином, содержащуюся в контейнере, водный раствор или 5% раствор декстрозы, встроенные фильтры. Лекарственная форма пригодна для парентерального введения эффективных доз конъюгата, а также является пригодной для инфузионного введения, т.е. для асептического соединения с внутривенными клапанами, трубками, деталями, линиями и т.п., или для транспортировки препарата между устройствами для инфузии.

Набор также может включать одну или больше лекарственных форм, упакованных вместе с инструкционными материалами, касающимися введения лекарственной формы, или с инструкционными материалами, включающими средства маркировки, например, этикетки, ярлыки, CD, DVD, кассеты с записью и тому подобное, описывающие применение лекарственной формы способом, одобренным правительственным регулирующим органом.

Таким образом, лекарственная форма в данном изобретении предоставляет одну или более единичных лекарственных доз, адаптированных к практике способа применения, включающих конъюгат этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли в подходящей концентрации в биологически совместимом носителе, упакованном для сохранения стерильности и для защиты активного ингредиента от распада.

Несмотря на то, что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения, и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.

1. Стабилизированная лекарственная форма конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли, представляющая собой лиофилизат для приготовления раствора для парентерального введения, включающий конъюгат этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемую соль и стабилизатор, который представляет собой соль хлорид магния, причем молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 20:1.

2. Стабилизированная лекарственная форма по п. 1, в которой фармацевтически приемлемая соль конъюгата этидроната с цитарабином представляет собой тринатриевую соль конъюгата этидроната с цитарабином.

3. Стабилизированная лекарственная форма по п. 1, в которой молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 12:1.

4. Стабилизированная лекарственная форма по п. 1, в которой молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет от 1:1 до 2:1.

5. Стабилизированная лекарственная форма по п. 1, в которой молярное соотношение стабилизатора и конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли составляет 2:1.

6. Способ получения стабилизированной лекарственной формы по п. 1, включающий следующие этапы:

- готовят водный раствор, содержащий конъюгат этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемую соль и стабилизатор, представляющий собой соль хлорид магния, причем молярное соотношение стабилизатора и конъюгата выбирают от 1:1 до 20:1;

- проводят стерильную фильтрацию полученного раствора;

- разливают полученный раствор в емкости для лиофилизации;

- проводят лиофилизацию.

7. Способ по п. 6, в котором молярное соотношение стабилизатора и конъюгата составляет от 1:1 до 12:1.

8. Способ по п. 6, в котором молярное соотношение стабилизатора и конъюгата составляет от 1:1 до 2:1.

9. Способ по п. 6, в котором молярное соотношение стабилизатора и конъюгата составляет 2:1.

10. Способ по п. 6, в котором концентрация конъюгата этидроната с цитарабином или его фармацевтически приемлемой соли в водном растворе составляет ≤25 мг/мл.

11. Способ по п. 6, характеризующийся тем, что в качестве емкостей используют флаконы объемом 20 мл.

12. Способ по п. 6, характеризующийся тем, что стерильную фильтрацию полученного раствора осуществляют через стерильный фильтр с диметром пор 0,2 мкм.

13. Раствор для парентерального введения, полученный растворением стабилизированной лекарственной формы по п. 1 в фармацевтически приемлемом растворителе, пригодном для парентерального введения.

14. Раствор по п. 13, в котором концентрация стабилизированной лекарственной формы в фармацевтически приемлемом растворителе составляет ≤10 мг/мл.

15. Раствор по п. 13, в котором фармацевтически приемлемый растворитель представляет собой стерильную воду для инъекций или 5% раствор декстрозы в воде.

16. Применение раствора по п. 13 для лечения первичного рака кости или костного поражения, вызванного злокачественным новообразованием.

17. Применение по п. 16, в котором костное поражение представляет собой множественную миелому, метастатические поражения костной ткани, вызванные раком молочной, предстательной или щитовидной железы или других тканей и органов.

18. Применение по п. 16, характеризующееся тем, что первичным раком кости является остеосаркома, саркома Юнга, хондросаркома, фибросаркома.