Способ определения концентрации пептидов в суппозиториях

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно анализу фармацевтических препаратов, и может быть использовано для количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ). Для этого суппозитории измельчают и растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°С. Затем из полученного водного раствора экстрагируют ПЭГ органическим растворителем, в качестве которого могут быть использованы бензол, хлороформ, метиленхлорид, ацетонитрил, четыреххлористый углерод или диметилформамид. Содержание пептидов в водной фазе определяют спектрофотометрически при длине волны 750 нм относительно стандартного раствора альбумина. Изобретение обеспечивает повышение точности количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях. 1 з.п. ф-лы, 1 табл., 1 пр.

 

Заявляемое изобретение относится к измерениям и испытаниям, в частности к получению и подготовке образцов пептидов для количественного определения их содержания в суппозиториях.

Комплекс биорегуляторных пептидов, выделяемых из семенников крупного рогатого скота (молодых бычков), применяется как средство для лечения заболеваний предстательной железы как в виде раствора для инъекций и таблеток, так и (чаще всего) в форме суппозиториев. Суппозитории могут быть изготовлены на жировой основе или на водорастворимой полимерной, например на основе полиэтиленгликоля (ПЭГ). Производитель подвергает изготовленные суппозитории анализу на содержание лекарственного вещества, в данном случае - комплекса биорегуляторных пептидов, выделенных из семенников крупного рогатого скота.

Известен способ определения концентрации пептидов в суппозиториях, изготовленных с использованием носителя - полиэтиленгликоля, основанный на том, что пептиды нерастворимы в органических растворителях. Способ включает измельчение определенного количества суппозиториев, расплавление измельченной массы нагревом на водяной бане, экстракцию из расплава полиэтиленгликоля с помощью органического растворителя, например хлороформа, отделение пептидов фильтрованием, растворение осажденных на фильтре пептидов в воде и УФ-спектрофотометрическое определение их содержания [Фармакопейная статья предприятия ЛС-000925-04041].

Однако указанный способ дает существенный разброс результатов в параллельных пробах, что можно объяснить только тем, что пептиды и ПЭГ образуют связь (ПЭГелирование пептидов), в результате чего пептиды частично экстрагируются в органическую фазу из расплава вместе с ПЭГ, а это искажает результаты количественного определения (не выполняются критерии правильности и сходимости).

Результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в повышении точности количественного определения содержания биорегуляторных пептидов в суппозиториях на основе ПЭГ.

Указанная цель достигается тем, что в способе определения концентрации биорегуляторных пептидов в суппозиториях, в которых носителем является полиэтиленгликоль (ПЭГ), включающем измельчение суппозиториев, экстракцию ПЭГ органическим растворителем и количественное определение пептидов в водной фазе методом УФ-спектрофотометрии, измельченные суппозитории предварительно растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°С и экстрагируют ПЭГ органическим растворителем из полученного водного раствора.

В качестве органического растворителя, экстрагирующего ПЭГ из водного раствора, можно использовать бензол, метиленхлорид, хлороформ, ацетонитрил, четыреххлористый углерод и диметилформамид, преимущественно хлороформ и метиленхлорид.

Способ осуществляется следующим образом.

Тщательно измельчают 20 суппозиториев.

Около 3,8 г (точная навеска) измельченных суппозиториев помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 20 мл физиологического раствора (0,9%-ный раствор NaCl в воде), нагревают на водяной бане при температуре 70°С до расплавления основы, перемешивают и дают остыть до комнатной температуры. Доводят объем раствора до метки и плавно перемешивают, не допуская образования пены. В делительную воронку помещают 25 мл растворителя, например метиленхлорида, прибавляют испытуемый раствор и экстрагируют ПЭГ, используя шейкер, в течение 5 минут со скоростью 100 об/мин. После разделения слоев нижний органический слой отбрасывают. Далее в воронку прибавляют новую порцию метиленхлорида и повторяют экстракцию при тех же условиях еще 5 раз, каждый раз добавляя 25 мл метиленхлорида. Водный раствор сливают в мерную колбу вместимостью 50 мл, через фильтр «желтая лента», предварительно смоченный водой, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

Содержание пептидов определяют спектрофотометрически при длине волны 750 нм относительно стандартного раствора альбумина.

В таблице приведены данные определения биорегуляторных пептидов в девяти пробах одной партии суппозиториев заявляемым способом; для сравнения в таблице приведены также данные испытаний девяти проб той же партии суппозиториев, выполненные в соответствии с Фармакопейной статьей предприятия ЛС-000925-04041.

Из представленных в таблице результатов анализа видно, что заявляемый способ определения биорегуляторных пептидов отличается большей точностью, поскольку при растворении суппозиториев в физиологическом растворе, по-видимому, происходит разрыв связей между пептидами и ПЭГ, и полное высвобождение пептидов позволяет определять их содержание с меньшим искажением и разбросом результатов.

1. Способ определения концентрации пептидов в суппозиториях, в которых носителем является полиэтиленгликоль (ПЭГ), включающий измельчение суппозиториев, экстракцию ПЭГ органическим растворителем и количественное определение пептидов в водной фазе методом УФ-спектрофотометрии, отличающийся тем, что измельченные суппозитории предварительно растворяют в физиологическом растворе при нагревании на водяной бане до температуры не выше 70°C и экстрагируют ПЭГ органическим растворителем из полученного водного раствора.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве органического растворителя берут растворитель, выбранный из группы, включающей бензол, хлороформ, метиленхлорид, ацетонитрил, четыреххлористый углерод и диметилформамид.