Иммуногенная композиция против neisseria meningitidis (варианты)

Группа изобретений относится к иммунологии. Предложены иммуногенные композиции для индуцирования бактериального иммунного ответа у человека против штамма подсемейства А серологической группы В Neisseria meningitidis и против штамма подсемейства В серологической группы В Neisseria meningitidis. Композиция содержит эффективное количество первого N-терминально липидированного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, и второго N-терминально липидированного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2. В одном варианте композиция пригодна для одновременного введения вместе с иммуногенной композицией против вируса папилломы человека. В другом варианте композиция пригодна для одновременного введения вместе с иммуногенной композицией против дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита. Сильные иммунные ответы против вируса папилломы человека, дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита генерировались после совместного введения композиции без негативного влияния на бактерицидный ответ против N. meningitidis. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 9 табл., 10 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Данная заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США номер заявки 61/875,068, поданной 8 сентября 2013, предварительной заявки на патент США номер заявки 61/926,717, поданной 13 января 2014, и предварительной заявки на патент США номер заявки 61/989,432, поданной 6 мая 2014, которые, таким образом, включены в данный документ в виде ссылки в соответствующей им полноте.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Представленное изобретение касается композиций Neisseria meningitidis и их способов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Neisseria meningitidis представляет собой грамотрицательную инкапсулированную бактерию, которая вызывает сепсис, менингит и смерть. N. meningitidis может быть классифицированным, по меньшей мере, на 12 серологических групп (включая серологические группы А, В, С, 29Е, Н, I, K, L, W-135, X, Y и Z), основанных на химически и антигенно-отличительных полисахаридных капсулах. Штаммы с пятью из серологических групп (А, В, С, Y, и W135) являются ответственными за большинство заболеваний.

Менингококовый менингит представляет собой тяжелое заболевание, которое может привести к смерти ребенка и молодого взрослого человека в пределах нескольких часов, несмотря на доступность антибиотиков. Существует необходимость в улучшенных иммуногенных композициях против менингококовых серологических групп А, В, С, Y и W135 и/или X.

В настоящее время, еще не существует коммерчески доступной перекрестной вакцины или композиции, эффективной против широкого спектра MnB изолятов. Например, последние опубликованные результаты, относящиеся к лицензированной многокомпонентной композиции для защиты от заболеваний серологической группы В, не продемонстрировали прямой бактерицидный иммунный ответ против нескольких штаммов, экспрессирующих гетерологичные LP2086 (fHBP) варианты, по меньшей мере, у подростков. В большинстве случаев, возникает впечатление, что последние опубликованные результаты, относящиеся к многокомпонентной композиции для защиты от заболеваний серологической группы В показывают иммуногенность против LP2086 (fHBP) вариантов, которые являются гомологичными варианту LP2086 (fHBP) в многокомпонентной композиции. Соответственно, необходимой является перекрестная вакцина или композиция, эффективная против разнообразных MnB изолятов, поскольку определяется реальный спектр действия вакцины против панели разнообразных или гетерологичных менингококовых штаммов (например, представляющих различные географические регионы).

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для удовлетворения этих и других потребностей, представленное изобретение касается Neisseria meningitidis композиций и их способов.

В одном аспекте, изобретение касается композиции, которая включает приблизительно 120 мкг/мл первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 120 мкг/мл второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 к первому полипептиду - приблизительно 2,8, с молярным соотношением полисорбата-80 ко второму полипептиду - приблизительно 2,8, приблизительно 0,5 мг/мл алюминия, приблизительно 10 мМ гистидина, и приблизительно 150 мМ хлорида натрия. В одном варианте осуществления, первая доза составляет приблизительно 0,5 мл общего объема. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный иммунный ответ против N. meningitidis серологической группы В. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный иммунный ответ против N. meningitidis серологической группы А, С, 29Е, Н, I, K, L, W-135, X, Y или Z. В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше, чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 2. В одном варианте осуществления, первый полипептид имеет всего 258 аминокислот. В одном варианте осуществления, второй полипептид имеет всего 261 аминокислоту. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки, который является, по меньшей мере, в 2 раза выше у человека после получения первой дозы, чем бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки у человека до получения первой дозы, где увеличение бактерицидного титра измеряют при идентичных условиях в бактерицидном анализе сыворотки с использованием комплемента человека. В одном варианте осуществления, первый липидированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, второй липидированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности представленной SEQ ID NO: 2.

В другом аспекте, изобретение касается способа индуцирования иммунного ответа против Neisseria meningitidis у человека. Способ включает введение человеку первой дозы и второй дозы эффективного количества композиции, где указанная композиция включает 120 мкг/мл первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 120 мкг/мл второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 к первому полипептиду 2,8, с молярным соотношением полисорбата-80 ко второму полипептиду 2,8, 0,5 мг/мл алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия. В одном варианте осуществления, доза композиции имеет общий объем 0,5 мл. В одном варианте осуществления, человеку вводят не больше, чем две дозы композиции. В одном варианте осуществления, человеку дополнительно не вводят ревакцинирующую дозу композиции. В одном варианте осуществления, человеку вводят третью дозу композиции. В одном варианте осуществления, человеку дополнительно не вводят ревакцинирующую дозу композиции после третьей дозы. В одном варианте осуществления, человеку дополнительно не вводят четвертую дозу композиции. В одном варианте осуществления, третью дозу вводят человеку в пределах периода приблизительно 6 месяцев после первой дозы. В одном варианте осуществления, вторую дозу вводят, по меньшей мере, через 30 дней после первой дозы. В одном варианте осуществления, способ дополнительно включает введение третьей дозы композиции, в котором третью дозу вводят, по меньшей мере, через 90 дней после второй дозы. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки, который является, по меньшей мере, в 2 раза выше у человека после введения первой дозы, чем бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки у человека до получения первой дозы, который определяют при идентичных условиях в бактерицидном анализе сыворотки с использованием комплемента человека. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против подсемейства А штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему А05. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против подсемейства В штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему В01. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против подсемейства А штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму М98250771 N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидный против подсемейства В штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму CDC1127 N. meningitidis. В предпочтительном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против подсемейства В штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму CDC1573 N. meningitidis. В одном варианте осуществления, первый полипептид имеет всего 258 аминокислот. В одном варианте осуществления, второй полипептид имеет всего 261 аминокислоту. В одном варианте осуществления, первый липидированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, второй липидированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2.

В другом аспекте, изобретение касается композиции, которая включает 60 мкг первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, 60 мкг второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 к первому полипептиду 2,8, с молярным соотношением полисорбата-80 ко второму полипептиду 2,8, 0,5 мг/мл алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия, где композиция имеет общий объем приблизительно 0,5 мл. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный иммунный ответ против подсемейства А штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему А05. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный иммунный ответ против подсемейства В штамма N. meningitidis серологической группы В, которое является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему В01. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки, который является, по меньшей мере, в 2 раза выше у человека после введения первой дозы, чем бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки у человека до получения первой дозы, который определяют при идентичных условиях в бактерицидном анализе сыворотки с использованием комплемента человека. В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше, чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше, чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 2. В одном варианте осуществления, первый полипептид имеет всего 258 аминокислот. В одном варианте осуществления, второй полипептид имеет всего 261 аминокислоту. В одном варианте осуществления, первый липидированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, второй липидированный полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2.

КОРОТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

ФИГ. 1 - Доля субъектов, достигающих титров hSBA ≥ LLOQ. hSBA = бактерицидный анализ сыворотки с использованием комплемента человека; LLOQ = нижний предел количественного определения.

ФИГ. 2 - Процент субъектов, достигающих 4х повышение титров hSBA к штаммам вспышки инфекции Принстонского университета и UCSB штаммам вспышки инфекции индивидуальных субъектов-людей после иммунизации rLP2086 (исследование В1971012 - описанное в примере 5, примере 6). Образцы сыворотки от девяти субъектов-людей, иммунизированных бивалентным rLP2086 в клиническом исследовании В1971012, оценивали в экспериментальной разработке hSBA с использованием MnB штаммов вспышки инфекции из Принстонского университета и из UCSB. Смотри пример 9.

ИДЕНТИФИКАТОРЫ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

SEQ ID NO: 1 представляет аминокислотную последовательность полипептидного антигена А05 варианта 2086, серологической группы В, рекомбинантного N. meningitidis.

SEQ ID NO: 2 представляет аминокислотную последовательность полипептидного антигена В01 варианта 2086, серологической группы В, рекомбинантного N. meningitidis.

SEQ ID NO: 3 представляет аминокислотные остатки в положениях 1-4 из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.

SEQ ID NO: 4 представляет аминокислотную последовательность N-терминального полипептидного антигена (А05) LP2086 полипептида (rLP2086) подсемейства А рекомбинантного Neisserial.

SEQ ID NO: 5 представляет аминокислотную последовательность N-терминального полипептидного антигена (А05) полипептида LP2086 М98250771 подсемейства A Neisserial.

SEQ ID NO: 6 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В153, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 7 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А04, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 8 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А05, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 9 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А12, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 10 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А22, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 11 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В02, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 12 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В03, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 13 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В09, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 14 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В22, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 15 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В24, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 16 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В44, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 17 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В16, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 18 представляет аминокислотную последовательность для N. meningitidis, серологической группы В, 2086 варианта А07.

SEQ ID NO: 19 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А19, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 20 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А06, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 21 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А15, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 22 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта А29, серологической группы В, N. meningitidis.

SEQ ID NO: 23 представляет аминокислотную последовательность для 2086 варианта В15, серологической группы В, N. meningitidis.

ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что композиция включает первый липидированный полипептид, включающий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, и второй липидированный полипептид, включающую аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2. Композиция имеет приемлемый профиль безопастности у людей, и композиция неожиданно вызывает широко перекрестнореагирующий бактерицидный иммунный ответ у людей, по меньшей мере, против больше чем двух различных штаммов Neisseria meningitidis.

Авторы представленного изобретения, кроме того, обнаружили, что режим применения 2-мя дозами и режим применения 3-мя дозами неожиданно давали титры hSBA ≥ 8 против исследуемых штаммов из серологической группы В N. meningitidis, с вакциной гетерологичной LP2086 (фактор Н связывающий белок (fHBP)) подсемейства А и В у высокой доли субъектов- людей. Режим применения 3-мя дозами может обеспечивать самую широкую защиту у людей против различных MnB клинических штаммов, по сравнению с режимом применения 2-мя дозами.

Авторы представленного изобретения также неожиданно обнаружили, что сильные иммунные ответы против вируса папилломы человека и серологическая группа В N. meningitidis генерировались после совместного введения rLP2086 композиции и четырехвалентной иммуногенной композиции против вируса папилломы человека (HPV4). Например, совместное введение rLP2086 композиции и HPV4 композиции генерировало иммунный ответ, по меньшей мере, против исследуемых штаммов, экспрессирующих fHBP, серологической группы В N. meningitidis, которые являются гетерологичными к данным fHBP в rLP2086 композиции. Такие гетерологичные исследуемые штаммы включают немутантного типа штаммы серологической группы В N. meningitidis, которые экспрессируют А22 fHBP, А56 fHBP, В24 fHBP или В44 fHBP, каждый из которых является гетерологичным к fHBP в rLP2086 композиции. Смотри WO/2012/032489, WO/2013/132452, публикацию патента США номер US 20120093852 и публикацию патента США номер US 20130243807, которые описывают белки варианта fHBP, включающую А22 fHBP, А56 fHBP, В24 fHBP и В44 fHBP, среди других. Каждая из данных ссылок является включенной в виде ссылки во всей их полноте. Совместное введение также неожиданно генерировало иммунный ответ, по меньшей мере, против HPV типов 6, 11, 16 и/или 18. Иммунные ответы против HPV типов после совместного введения rLP2086 композиции и HPV4 композиции были не уступающими по сравнению с иммунным ответом, сгенерированным путем введения HPV4 композиции в отсутствие rLP2086 композиции.

Кроме того, авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что сильные иммунные ответы против дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита и серологической группы В N. meningitidis генерировались после совместного введения rLP2086 композиции и иммуногенной композиции против дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита. Например, совместное введение rLP2086 композиции и REPEVAX композиции генерировало иммунный ответ, по меньшей мере, против исследуемых штаммов серологической группы В N. meningitidis, экспрессирующих fHBP, которые являются гетерологичными к данным fHBP в rLP2086 композиции. Совместное введение также неожиданно генерировало иммунный ответ, по меньшей мере, против 9 антигенов в REPEVAX: дифтерии, столбняк, коклюшный анатоксин, коклюшный филаментный гемагглютинин, коклюшный пертактин, коклюшный фимбриальный гемагглютинин типа 2+3, вирус полиомиелита типа 1, вирус полиомиелита типа 2, вирус полиомиелита типа 3. Иммунные ответы против REPEVAX антигенов после совместного введения rLP2086 композиции и REPEVAX композиции были не уступающими по сравнению с иммунным ответом, сгенерированным путем введения REPEVAX композиции в отсутствие rLP2086 композиции.

Более того, авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что rLP2086 композиция индуцирует бактерицидный иммунный ответ против штамма ST409 N. meningitidis, который экспрессирует fHBP В153 вариант. Например, найдено, что штамм, экспрессирующий fHBP В153 вариант, был восприимчивым к уничтожению при контактировании с человеческой иммунной сывороткой с двухвалентной rLP2086 композицией, в бактерицидном анализе сыворотки с использованием комплемента человека (hSBA).

КОМПОЗИЦИЯ И ВАКЦИНА

В одном аспекте, изобретение касается композиции против Neisseria meningitidis. Композиция включает первый липидированный полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, и второй липидированный полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2.

Авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили один полипептидный компонент N. meningitidis, который индуцирует эффективный широко защитный иммунный ответ против многочисленных штаммов серологической группы В N. meningitidis. Соответственно, в одном варианте осуществления, композиция не включает слитый белок. В одном варианте осуществления, композиция не включает химерный белок. В одном варианте осуществления, композиция не включает гибридный белок. В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает пептидный фрагмент. В другом варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид Neisserial, который не является fHBP. Например, в одном варианте осуществления, композиция не включает PorA белок. В другом варианте осуществления, композиция не включает NadA белок. В другом варианте осуществления, композиция кроме того, не включает связывающий гепарин антиген Neisserial (NHBA). В другом варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает визикулу внешней мембраны Neisserial (OMV). В предпочтительном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает антигены, которые не являются первым полипептидом и вторым полипептидом.

В другом аспекте, авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что полипептидные антигены, полученные не больше, чем из двух штаммов серологической группы В N. meningitidis, индуцируют эффективный широко защитный иммунный ответ против многочисленных штаммов серологической группы В N. meningitidis. Соответственно, в одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, который не получают из штамма М98250771 подсемейства А серологической группы В N. meningitidis и/или штамма CDC1573 подсемейства В серологической группы В N. meningitidis.

В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 1. В другом варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 2. Например, композиция, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше чем 100% идентичность последовательности к полной длине SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2.

В одном варианте осуществления, композиция дополнительно включает полисорбат-80, алюминий, гистидин и хлорид натрия. В одном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 60 мкг первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, приблизительно 60 мкг второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 к каждому полипептиду - 2,8, 0,5 мг алюминия/мл в виде фосфата алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия, где композиция предпочтительно имеет общий объем приблизительно 0,5 мл.

В другом аспекте, композиция включает приблизительно 120 мкг/мл первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, приблизительно 120 мкг/мл второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 к каждому полипептиду - 2,8, 0,5 мг алюминия/мл в виде фосфата алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия.

В следующем аспекте, композиция включает а) 60 мкг первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1; b) 60 мкг второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2; с) 18 мкг полисорбата-80; d) 250 мкг алюминия; е) 780 мкг гистидина, и; f) 4380 мкг хлорида натрия.

В иллюстративном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 60 мкг первого липидированного полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1, приблизительно 60 мкг второго липидированного полипептида, состоящего из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 к первому липидированному полипептиду и ко второму липидированному полипептиду - 2,8, 0,5 мг/мл фосфата алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия, где композиция имеет общий объем приблизительно 0,5 мл. В иллюстративном варианте осуществления, композиция представляет собой стерильную изотоническую буферную жидкую суспензию. В иллюстративном варианте осуществления, композиция имеет рН 6,0. В иллюстративном варианте осуществления, первый полипептид и второй полипептид являются адсорбированными на алюминии.

В одном варианте осуществления, композиция имеет общий объем приблизительно 0,5 мл. В одном варианте осуществления, первая доза композиции имеет общий объем приблизительно 0,5 мл. "Первая доза" относится к дозе композиции, которую вводят в день 0. "Вторая доза" или "третья доза" относится к дозе композиции, которую вводят после первой дозы, которая может или не может составлять такое же количество, что и первая доза.

Композиция является иммуногенной после введения первой дозы человеку. В одном варианте осуществления, первая доза составляет приблизительно 0,5 мл в общем объеме.

Композиция индуцирует бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки, который является, по меньшей мере, больше чем в 1 раз выше, предпочтительно, по меньшей мере, в 2 раза выше, у человека после введения первой дозы, чем бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки у человека до получения первой дозы, при определении в идентичных условиях в бактерицидном анализе сыворотки с использованием комплемента человека (hSBA).

Бактерицидный титр или бактерицидный иммунный ответ является против серологической группы В N. meningitidis. В предпочтительном варианте осуществления, бактерицидный титр или бактерицидный иммунный ответ является против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis и против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis. Наиболее предпочтительно, бактерицидный титр или бактерицидный иммунный ответ является, по меньшей мере, против штамма В01, подсемейства В, серологической группы В, N. meningitidis.

В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки, который является, по меньшей мере, больше чем в 1 раз, такой как, например, по меньшей мере 1,01 раз, 1,1 раз, 1,5 раза, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз или 16 раз выше у человека после введения дозы композиции, чем бактерицидный титр иммуноглобулина сыворотки у человека до получения указанной дозы, при определении в идентичных условиях в бактерицидном анализе сыворотки с использованием комплемента человека.

В одном варианте осуществления, композиция представляет собой иммуногенную композицию. В одном варианте осуществления, композиция представляет собой иммуногенную композицию для человека. В другом варианте осуществления, композиция представляет собой вакцину. "Вакцина" относится к композиции, которая включает антиген, который содержит, по меньшей мере, один эпитоп, который индуцирует иммунный ответ, который является специфическим для такого антигена. Вакцина может быть введена непосредственно субъекту за счет подкожного, перорального, ороназального или интраназального путей введения. Предпочтительно, вакцину вводят внутримышечно. В одном варианте осуществления, композиция представляет собой вакцину для человека. В одном варианте осуществления, композиция представляет собой иммуногенную композицию против N. meningitidis.

В одном варианте осуществления, композиция представляет собой жидкую композицию. В предпочтительном варианте осуществления, композиция представляет собой жидкую суспензионную композицию. В другом предпочтительном варианте осуществления, композиция не является лиофилизированной.

ПЕРВЫЙ ПОЛИПЕПТИД

В одном варианте осуществления, композиция включает первый полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1. В одном предпочтительном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 60 мкг первого полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, где композиция предпочтительно имеет общий объем 0,5 мл. В другом варианте осуществления, композиция включает приблизительно 120 мкг/мл первого полипептид, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1. Полипептид представляет собой модифицированный фактор Н связывающий белок (fHBP) из штамма М98250771 N. meningitidis. Описание fHBP раскрывается в WO 2012032489 и публикации патента США US 2012/0093852, каждая из которых является включенной в виде ссылки во всей своей полноте. Полипептид представляет собой N-терминально липидированный тремя предоминирующими жирными кислотами С16:0, С16:1, и С18:1, ковалентно связанными в трех положениях полипептида. Первый полипептид включает всего 258 аминокислот.

Первый полипептид включает две модификации, введенные в N-терминальную область полипептида, по сравнению с соответствующим немутантным типом последовательности из штамма М98250771 N. meningitidis. Глицин во втором положении добавляют как последствие введения сайта клонирования. Вторая модификация включает делецию четырех аминокислот. Соответственно, в одном варианте осуществления, первый полипептид включает C-G-S-S последовательность (SEQ ID NO: 3) на N-конце. Смотри SEQ ID NO: 1, первые четыре аминокислотные остатки.

N-терминальные различия между первой полипептидной последовательностью и немутантным типом последовательности Neisserial показаны ниже. Соответственно, в одном варианте осуществления, первый полипептид включает, по меньшей мере, первый 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, или больше аминокислотных остатков аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1. Предпочтительно, первый полипептид включает, по меньшей мере, первые 4, более предпочтительно, по меньшей мере, первые 6, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, первые 8 аминокислотных остатков SEQ ID NO: 1.

Сравнение прогнозированных N-терминальных последовательностей рекомбинантного полипептида и полипептида LP2086 подсемейства A Neisserial

>А05 (SEQ ID NO: 1)

В одном варианте осуществления, первый полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, первый полипептид имеет всего 258 аминокислот. В одном варианте осуществления, первый полипептид не включает аминокислотную последовательность, имеющую меньше чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 1. В другом варианте осуществления, первый полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1. В другом варианте осуществления, первый полипептид включает аминокислотную последовательность KDN. Смотри, например, аминокислотные остатки 73-75 из SEQ ID NO: 1. В другом варианте осуществления, первый полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 3 на N-конце полипептида. В другом варианте осуществления, первый полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 4 на N-конце полипептида.

В предпочтительном варианте осуществления, первый полипептид легко экспрессируется в рекомбинантной клетке-хозяине с использованием стандартных методик, известных в данной области с уровня техники. В другом предпочтительном варианте осуществления, первый полипептид включает бактерицидный эпитоп в N- и/или С-домене SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления, первый полипептид включает, по меньшей мере, первые 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1. Предпочтительно, первый полипептид включает, по меньшей мере, первые 2, более предпочтительно, по меньшей мере, первые 4, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, первые 8 аминокислотных остатков SEQ ID NO: 1.

В другом варианте осуществления, первый полипептид включает, по меньшей мере, последние 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 1.

ВТОРОЙ ПОЛИПЕПТИД

В одном варианте осуществления, композиция включает второй полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2. В одном предпочтительном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 60 мкг второго полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, где композиция предпочтительно имеет общий объем 0,5 мл. В другом варианте осуществления, композиция включает 120 мкг/мл второго полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2. Полипептид представляет собой фактор Н связывающий белок (fHBP) из штамма CDC1573 N. meningitidis. Описание fHBP раскрывается в WO 2012032489 и публикации патента США US 2012/0093852, каждая из которых включена в виде ссылки во всей своей полноте. Полипептид представляет собой N-терминально липидированный тремя предоминирующими жирными кислотами С16:0, С16:1, и С18:1, ковалентно связанными в трех положениях полипептида. Второй полипептид включает всего 261 аминокислоту. В одном варианте осуществления, второй полипептид включает C-G-S-S последовательность (SEQ ID NO: 3) на N-конце. Смотри первые четыре аминокислотные остатки SEQ ID NO: 2.

>В01 (SEQ ID NO: 2)

В одном варианте осуществления, второй полипептид включает аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2. В одном варианте осуществления, второй полипептид имеет всего 261 аминокислоту. В одном варианте осуществления, второй полипептид состоит из аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2. В другом варианте осуществления, второй полипептид, кроме того, не включает полипептид, имеющий меньше чем 100% идентичность последовательности к SEQ ID NO: 2. В предпочтительном варианте осуществления, первый полипептид и второй полипептид включает C-G-S-S (SEQ ID NO: 3) последовательность на N-конце соответствующего полипептида.

В предпочтительном варианте осуществления, второй полипептид легко экспрессируется в рекомбинантной клетке-хозяине с использованием стандартных методик, известных в данной области с уровня техники. В другом предпочтительном варианте осуществления, второй полипептид включает бактерицидный эпитоп в N- и/или С-домене SEQ ID NO: 2. В одном варианте осуществления, второй полипептид включает, по меньшей мере, первые 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2. Предпочтительно, второй полипептид включает, по меньшей мере, первые 2, более предпочтительно, по меньшей мере, первые 4, или наиболее предпочтительно, по меньшей мере, первые 8 аминокислотных остатков из SEQ ID NO: 2.

В другом варианте осуществления, первый полипептид включает, по меньшей мере, последние 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или 100 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности, представленной SEQ ID NO: 2.

ПОЛИСОРБАТ-80

Полисорбат-80 (PS-80) представляет собой неионное поверхностно-активное вещество. Исследование ускоренной стабильности с использованием анализа эффективности in vitro на основе моноклонального антитела продемонстрировало нестабильность белка подсемейства В при более высоких молярных соотношениях PS-80 к MnB rLP2086 белку в конечном препарате. Дополниельные эксперименты с различными соотношениями PS-80 продемонстрировали, что оптимальное молярное соотношение PS-80 к MnB rLP2086 белку составляет приблизительно 2,8±1,4, чтобы поддерживать эффективность.

Концентрация PS-80 в композиции зависит от молярного соотношения PS-80 к полипептиду. В одном варианте осуществления, композиция включает молярное соотношение 2,8±1,4 PS-80 к первому полипептиду и ко второму полипептиду. В одном варианте осуществления, композиция включает молярное соотношение 2,8±1,1 PS-80 к первому полипептиду та ко второму полипептиду. В одном варианте осуществления, композиция включает молярное соотношение, по меньшей мере, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2 или 3,3 PS-80 к полипептиду. Предпочтительно, композиция включает молярное соотношение 2,8 PS-80 к полипептиду.

Молярное соотношение PS-80 к полипептиду определяют с помощью расчетов измеренной концентрации PS-80 и измеренной общей концентрации полипептида, в которых оба значения выражаются в молях. Например, молярное соотношение PS-80 к белку определяют с помощью расчетов измеренной концентрации PS-80 (например, с использованием обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ-ВЭЖХ)) к измеренной общей концентрации белка (например, с использованием ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ИО-ВЭЖХ)) в конечной субстанции лекарственного средства, где оба значения выражаются в молях.

ОФ-ВЭЖХ используют, чтобы количественно определить концентрацию полисорбата 80 в вакцинных препаратах. Концентрацию детергента определяют с помощью омыления фрагмента жирной кислоты; полисорбат 80 превращают в свободную олеиновую кислоту путем щелочного гидролиза при 40°C. Образец разделяют с помощью ОФ-ВЭЖХ, используя колонку С18, и количественно определяют, используя УФ детектор на длине волны 200 нм.

Первый и второй полипептиды разделяют с использованием анионообменной ВЭЖХ. Белоки rLP2086(fHBP) подсемейства А и В элюируют при различных временах удерживания и количественно определяют с использованием стандартной кривой, полученной против соответствующего референтного материала белка rLP2086.

Термин "молярное соотношение" и описание иммуногенной композиции, которая включает fHBP и PS-80, кроме того, раскрывается в WO 2012025873 и публикации патента США US 2013/0171194, каждая из которых включена в виде ссылки во всей своей полноте.

Термин "молярное соотношение", как используется в данном документе, касается соотношения количества молей двух различных элементов в композиции. В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение представляет собой соотношение молей детергента к молям полипептида. В некоторых вариантах осуществления, молярное соотношение представляет собой соотношение молей PS-80 к молям белка. В одном варианте осуществления, основываясь на концентрациях белка и полисорбата-80, молярное соотношение может быть рассчитано с использованием следующего уравнения:

В одном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 0,0015, 0,0017, 0,0019, 0,0021, 0,0023, 0,0025, 0,0027, 0,0029, 0,0031, 0,0033, 0,0035, 0,0037, 0,0039, 0,0041, 0,0043, 0,0045, 0,0047, 0,0049, 0,0051 мг/мл PS-80. Предпочтительно, композиция включает приблизительно 0,0035 мг/мл PS-80.

В другом варианте осуществления, композиция включает приблизительно 10 мкг, 11 мкг, 12 мкг, 13 мкг, 14 мкг, 15 мкг, 16 мкг, 17 мкг, 18 мкг, 19 мкг, 20 мкг, 21 мкг, 22 мкг, 23 мкг, 24 мкг или 25 мкг PS-80. В предпочтительном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 18 мкг PS-80.

В другом варианте осуществления, композиция включает PS-80 в концентрации, которая находится в диапазоне от 0,0005% до 1%. Например, концентрация PS-80 в композиции может составлять, по меньшей мере, 0,0005%, 0,005%, 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09%, 0,10%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1% или 1,1% PS-80. В предпочтительном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 0,07% PS-80.

Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе для определения диапазона.

АЛЮМИНИЙ

Композиция предпочтительно включает приблизительно 0,5 мг/мл фосфата алюминия. В одном варианте осуществления, композиция включает приблизительно 0,5 мг алюминия/мл в виде фосфата алюминия. AlPO₄ 0,50 мг/мл добавляют в качестве стабилизатора, чтобы обеспечить повышенную технологичность и стабильность. Данная концентрация поддерживает связывание (90% связывание или лучшее) белков подсемейства А и В с алюминием.

Способ получения фосфата алюминия описывается в публикации патента США US 2009/0016946, которая включена в виде ссылки во всей своей полноте.

В одном варианте осуществления, композиция, кроме того, не включает многовалентный катион, который не является алюминием. В одном варианте осуществления, композиция кроме того, не включает Al(OH)₃ или Al(SO₄)₃.

НАПОЛНИТЕЛИ

В одном варианте осуществления, композиция включает гистидин. В одном варианте осуществления, композиция включает хлорид натрия. Композиция предпочтительно включает приблизительно 10 мМ гистидина, и приблизительно 150 мМ хлорида натрия. В одном варианте осуществления, композиция включает 10 мМ гистидина и 150 мМ хлорида натрия.

В другом варианте осуществления, композиция включает приблизительно 650 мкг, 660 мкг, 670 мкг, 680 мкг, 690 мкг, 700 мкг, 710 мкг, 720 мкг, 730 мкг, 740 мкг, 750 мкг, 760 мкг, 770 мкг, 780 мкг, 790 мкг, 800 мкг, 810 мкг, 820 мкг, 830 мкг, 840 мкг или 850 мкг гистидина. Предпочтительно, композиция включает приблизительно 780 мкг гистидина. Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе, для определения диапазона.

В одном варианте осуществления, композиция включает трис, фосфатный или сукцинатный буфер. В предпочтительном варианте осуществления, композиция не включает трис буфер. В предпочтительном варианте осуществления, композиция не включает фосфатный буфер. В одном предпочтительном варианте осуществления, композиция не включает сукцинатный буфер. В предпочтительном варианте осуществления, композиция включает гистидиновый буфер.

В предпочтительном варианте осуществления, рН композиции составляет от 6,0 до 7,0, наиболее предпочтительно рН 6,0. В одном варианте осуществления, рН композиции составляет не больше, чем 6,1.

БАКТЕРИЦИДНАЯ АКТИВНОСТЬ

Иммунный ответ, индуцированный за счет введения композиции человеку, определяют, используя сывороточный бактерицидный анализ с использованием комплемента человека (hSBA) против четырех штаммов серологической группы В (MnB) N. meningitidis. Штаммы 4 MnB, использованные в hSBA, были выбраны из пула штамма. Пул штамма представлял собой совокупность систематически собранных клинически значимых штаммов серологической группы В N. meningitidis из США и Европы. Два из 4 штаммов для SBA являются из подсемейства A LP2086 (fHBP) серологической группы В N. meningitidis, и два других из 4 штаммов являются из подсемейства В LP2086(fHBP) серологической группы В N. meningitidis.

Высокое количественное отношение ответа hSBA ко всем исследуемым штаммам, особенно штаммам, экспрессирующим варианты 2086 липопротеина с последовательностями, гетерологичными к первому полипептиду, свидетельствует о том, что композиция представляет собой широко защитную вакцину, и что две дозы достаточно, чтобы предоставить высокую серологическую защиту, по меньшей мере, против штаммов подсемейства А серологической группы В N. meningitidis.

Высокое количественное отношение ответа hSBA ко всем исследуемым штаммам, особенно штаммам, экспрессирующим варианты 2086 липопротеина с последовательностями, гетерологичными как к первому полипептиду, так и второму полипептиду, свидетельствует о том, что композиция представляет собой широко защитную вакцину, и что не больше, чем три дозы в пределах приблизительно 6-и месячного периода достаточно, чтобы предоставить высокую серологическую защиту против штаммов серологической группы В N. meningitidis, экспрессирующих rLP2086 (FHBP) подсемейства А и/или подсемейства В.

В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейства А. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейства А, который экспрессирует вариант 2086 липопротеина, который является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему А05. Например, в одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейства А, который экспрессирует вариант 2086 липопротеина, который является гетерологичным к штамму М98250771. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) А22. В другом варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) А56. В следующем варианте осуществления, hSBA штаммы представляют собой штаммы LP2086 (fHBP) А22 и LP2086 (fHBP) А56. В другом варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А04. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А05. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А12. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А22. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А12. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А04. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А19. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 А07. В следующем варианте осуществления, hSBA штаммы включают А22, А12, А19, А05 и А07, или какую либо их комбинацию. В одном варианте осуществления, hSBA штаммы включают А06, А15 и А29, или какую либо их комбинацию.

В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейство А серологической группы В N. meningitidis, которая является гетерологичной к штамму N. meningitidis, экспрессирующему А05. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма А22 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма А56 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма А06 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма А15 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма серологической группы В А29 N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма А62 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis, который является гетерологичным к штамму М98250771 N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к первому полипептиду. В другом варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейство А серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом М98250771 N. meningitidis. В предпочтительном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидный против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, который имеет, по меньшей мере, 80%, более предпочтительно, по меньшей мере, 84%, идентичность к фактору Н связывающему белку, экспрессированным штаммом М98250771 N. meningitidis.

В другом варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, который имеет не больше, чем 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к первому полипептиду. В другом варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет не больше, чем 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом М98250771 N. meningitidis. В предпочтительном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейство А серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, который имеет не больше, чем 85%, более предпочтительно не больше, чем 99%, идентичность к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом М98250771 N. meningitidis. Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе, для определения диапазона.

В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейства В. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейство В, которые экспрессирует варианта 2086 липопротеина, который является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему В01. Например, в одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейства В, который экспрессирует вариант 2086 липопротеина, который является гетерологичным к штамму CDC1127. В предпочтительном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой штамм LP2086 (fHBP) подсемейства В, который экспрессирует вариант 2086 липопротеина, который является гетерологичным к штамму CDC1573.

В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который является гетерологичным к штамму N. meningitidis, экспрессирующему В01. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В24 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В44 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В16 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В03 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В09 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В15 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является против штамма В153 серологической группы В N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который является гетерологичным к штамму CDC1573 N. meningitidis. В одном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность ко второму полипептиду. В другом варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет, по меньшей мере, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом CDC1573 N. meningitidis. В предпочтительном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, который имеет, по меньшей мере, 80% идентичность, более предпочтительно, по меньшей мере, 87% идентичность, к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом CDC1573 N. meningitidis. В другом предпочтительном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, который имеет 100% идентичность к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом CDC1573 N. meningitidis.

В другом варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, который имеет не больше, чем 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность ко второму полипептиду. В другом варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против Штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет не больше, чем 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичность к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом CDC1573 N. meningitidis. В предпочтительном варианте осуществления, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, который экспрессирует фактор Н связывающий белок, включающий аминокислотную последовательность, которая имеет не больше, чем 88% идентичность, более предпочтительно, по меньшей мере, 99% идентичность, к фактор Н связывающему белку, экспрессированному штаммом CDC1573 N. meningitidis. Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе, для определения диапазона.

В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой LP2086 (fHBP) В24 штамм. В другом варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой LP2086 (fHBP) В44 штамм. В следующем варианте осуществления, hSBA штаммы включают штаммы LP2086 (fHBP) В24 и LP2086 (fHBP) В44. В одном варианте осуществления, hSBA штаммы включают штаммы LP2086 (fHBP) А22, LP2086 (fHBP) А56, LP2086 (fHBP) В24 и LP2086 (fHBP) В44. В одном варианте осуществления, hSBA штамм включает В15. В одном варианте осуществления, hSBA штамм включает В153. В другом варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой LP2086 В16 штамм. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой LP2086 В03 штамм. В одном варианте осуществления, hSBA штамм представляет собой LP2086 В09 штамм. В следующем варианте осуществления, hSBA штаммы включают В24, В16, В44, В03 и В09, или какую-либо их комбинацию. В другом варианте осуществления, hSBA штаммы включают В24, В16, В44, А22, В03, В09, А12, А19, А05 и А07, или какую-либо их комбинацию. В другом варианте осуществления, hSBA штаммы включают А06, А07, А12, А15, А19, А29, В03, В09, В15 и В16, или какую-либо их комбинацию.

В одном варианте осуществления, способ индуцирует иммунный ответ против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis и против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis. Предпочтительно, иммунный ответ является бактерицидным против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis и против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis.

В одном варианте осуществления, иммунный ответ против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis больше, чем иммунный ответ против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis. Например, в одном варианте осуществления, иммуногенная композиция индуцирует более высокие бактерицидные титры против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitides, чем против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, при исследовании в идентичных условиях. В одном варианте осуществления, более высокие бактерицидные титры против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis имеют место в пределах 30 дней после второй дозы иммуногенной композиции против N. meningitidis. В одном варианте осуществления, более высокие бактерицидные титры против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis имеют место при отсутствии третьей дозы иммуногенной композиции против N. meningitidis.

В другом варианте осуществления, иммунный ответ против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis больше, чем иммунный ответ против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis. Например, в одном варианте осуществления, иммуногенная композиция индуцирует более высокие бактерицидные титры против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis, чем против штамма подсемейства А серологической группы В N. meningitidis, при исследовании в идентичных условиях. В одном варианте осуществления, более высокие бактерицидные титры против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis имеют место в пределах 30 дней после второй дозы иммуногенной композиции против N. meningitidis. В одном варианте осуществления, более высокие бактерицидные титры против штамма подсемейства В серологической группы В N. meningitidis имеют место при отсутствии третьей дозы иммуногенной композиции против N. meningitidis.

ТИТРЫ

В одном варианте осуществления, композиция индуцирует повышение бактерицидного титра у человека, по сравнению с бактерицидным титром у человека перед введением дозы композиции, при определении в идентичных условиях в hSBA. В одном варианте осуществления, повышение бактерицидного титра сравнивают с бактерицидным титром у человека перед введением первой дозы композиции, по сравнению с бактерицидным титром у человека перед введением первой дозы композиции, при определении в идентичных условиях в hSBA. В одном варианте осуществления, повышение титра наблюдается после второй дозы композиции, по сравнению с бактерицидным титром у человека перед введением второй дозы композиции, при определении в идентичных условиях в hSBA. В другом варианте осуществления, повышение бактерицидного титра наблюдается после третьей дозы композиция, по сравнению с бактерицидным титром у человека перед введением третьей дозы композиции, при определении в идентичных условиях в hSBA.

В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр у человека после введения дозы, где бактерицидный титр является, по меньшей мере, больше чем в 1 раз выше, чем бактерицидный титр у человека перед введением дозы, при определении в идентичных условиях в hSBA. Например, бактерицидный титр может быть, по меньшей мере, в 1,01 раз, 1,1 раз, 1,5 раза, 2 раза, 3 раза, 4 раза, 5 раз, 6 раз, 7 раз, 8 раз, 9 раз, 10 раз, 11 раз, 12 раз, 13 раз, 14 раз, 15 раз или 16 раз выше у человека после введения дозы композиции, по сравнению с бактерицидным титром у человека перед введением дозы, при определении в идентичных условиях в hSBA.

В одном варианте осуществления, "респондент" касается человека, у которого композиция индуцирует бактерицидный титр у человека после введения дозы, при которой бактерицидный титр является, по меньшей мере, больше чем в 1 раз выше, чем бактерицидный титр у человека перед введением дозы. В предпочтительном варианте осуществления, респондент достигает, по меньшей мере, в ≥4 раза возрастание hSBA титра, по сравнению с бактерицидным титром у человека перед введением дозы. Такой респондент может быть отнесен к тем, которые имеют защитный титр.

В одном варианте осуществления, hSBA титр является обратной величиной наиболее высокого разбавления образца сыворотки, которая вырабатывает поддающийся измерению эффект. Например, в одном варианте осуществления, hSBA титр является обратной величиной наиболее высокого 2-кратного разбавления исследуемой сыворотки, что в результате приводит к, по меньшей мере, 50% снижению MnB бактерий (50% бактериальная виживаемость) по сравнению с КОЕ значением Т30 (то есть, количество бактерий, выживших после инкубирования в анализируемых лунках, содержащих все анализируемые компоненты за исключением исследуемой сыворотки; 100% бактериальная виживаемость).

В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр у человека после введения первой дозы, который, по меньшей мере, в 2 раза более высокий, чем бактерицидный титр у человека до получения первой дозы (например, более высокий, чем бактерицидный титр у человека при отсутствии первой дозы), при определении в идентичных условиях в hSBA. В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр у человека, который, по меньшей мере, в 4 раза более высокий, чем бактерицидный титр у человека до получения первой дозы, при определении в идентичных условиях в человеческом сывороточном бактерицидном анализе, который применяет комплемент человека (hSBA). В одном варианте осуществления, композиция индуцирует бактерицидный титр у человека, который, по меньшей мере, в 8 раз более высокий, чем бактерицидный титр у человека до получения первой дозы, при определении в идентичных условиях в человеческом сывороточном бактерицидном анализе, который применяет комплемент человека (hSBA).

В предпочтительном варианте осуществления, человеческий сывороточный комплемент получают от человека, имеющего низкую наследственную бактерицидную активность для данного SBA исследуемого штамма. Низкая наследственная бактерицидная активность относится к, например, бактерицидному титру, который является, по меньшей мере, меньше чем 1:4 разбавлением против данного SBA исследуемого штамма. В одном варианте осуществления, комплемент человека получают от человека имеющего hSBA титр, который представляет собой, по меньшей мере, меньше чем 1:4, такое как 1:2 разбавление, против данного SBA исследуемого штамма, где композиция не вводилось человеку.

Человек может демонстрировать hSBA титр меньше чем 1:4 перед введением композиции, такой как двухвалентной rLP2086 композиции, или человек может демонстрировать hSBA титр ≥1:4 перед введением композиции. Соответственно, в предпочтительных вариантах осуществления и примерах, введение, по меньшей мере, одной дозы композиции человеку в результате приводит к hSBA титру, который, по меньшей мере, больше чем 1:4, такому как, например, hSBA титр ≥1:8, hSBA титр ≥1:16, и hSBA титр ≥1:32. Соответствующие примеры, описанные в данном документе, включают оценивание части субъектов-людей имеющих hSBA титр ≥1:8 и/или ≥1:16, в которых двухвалентную rLP2086 композицию вводили человеку. Такие предпочтительные оценивания hSBA титров, больших чем 1:4, показывают, что защита, то есть, бактерицидный иммунный ответ, индуцированный у человека, является связанным с композицией.

В одном варианте осуществления, человек имеет hSBA титр, равный или больше чем нижний предел количественного определения (LLOQ) hSBA после введения первой дозы композиции. В другом варианте осуществления, человек имеет hSBA титр, равный или больше чем LLOQ hSBA после введения второй дозы композиции. В другом варианте осуществления, человек имеет hSBA титр, равный или больше чем LLOQ hSBA после введения третьей дозы композиции.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ИММУНОГЕННЫЕ КОМПОЗИЦИИ

Авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что иммуногенная композиция против N. meningitidis может вводиться с иммуногенной композицией против вируса папилломы человека (HPV) без негативного влияния на бактерицидный ответ против N. meningitidis. Как объясняется в примере 7 и примере 8, значительные hSBA ответы к исследуемым штаммам N. meningitidis наблюдались среди людей, которым вводили с иммуногенной композицией против N. meningitidis и GARDASIL, и у людей, которым вводили с иммуногенной композицией против N. meningitidis и физиологический раствор. Дополнительные повышения в hSBA ответах наблюдались приблизительно через 1 месяц после третьей дозы иммуногенной композиции против N. meningitidis.

Более того, авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что сильные иммунные ответы, как против N. meningitidis, так и HPV генерировались у человека после введения как иммуногенной композиции против N. meningitidis, так и иммуногенной композиции против HPV, по сравнению с иммунным ответом у человека перед введением композиций. Как объясняется в примере 7 и примере 8, титры против HPV, увеличенных у человека после введения иммуногенной композиции против N. meningitidis и GARDASIL, по сравнению с титрами у человека перед введением иммуногенных композиций. Повышение титров против HPV было, по меньшей мере, больше чем в 1 раз, по меньшей мере, в 2 раза, по меньшей мере, в 3 раза, по меньшей мере, в 4 раза, или больше.

Соответственно, в одном варианте осуществления, способ включает индуцирование иммунного ответа против N. meningitidis у человека, где способ дополнительно включает введение человеку иммуногенной композиции против вируса папилломы человека. Предпочтительно, иммунный ответ является бактерицидным против N. meningitidis. В одном варианте осуществления, способ дополнительно включает индуцирование иммунного ответа против HPV. В предпочтительном варианте осуществления, способ дополнительно включает индуцирование иммунного ответа против какого-либо одного из типов вируса папилломы человека 6, 11, 16 и 18, или какой-либо их комбинации. В одном варианте осуществления, иммуногенную композицию против HPV вводят человеку в пределах 24 часов от введения указанной композиции против N. meningitidis.

В одном варианте осуществления, способ включает индуцирование иммунного ответа против N. meningitidis у человека, где способ дополнительно включает введение человеку иммуногенной композиции против HPV. Предпочтительно, иммунный ответ является бактерицидным против N. meningitidis. В одном варианте осуществления, способ дополнительно включает индуцирование иммунного ответа против HPV. В предпочтительном варианте осуществления, способ дополнительно включает индуцирование иммунного ответа против какого-либо одного из типов вируса папилломы человека 6, 11, 16 и 18, или какую-либо их комбинацию. В одном варианте осуществления, иммуногенную композицию против вируса папилломы человека вводят человеку в пределах 24 часов после введения указанной композиции против N. meningitidis.

В другом аспекте, авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что иммуногенная композиция против N. meningitidis может вводиться с иммуногенной композицией против дифтерии, столбняка, ацеллюлярного коклюша и инактивированного вируса полиомиелита (dTaP) без негативного влияния на бактерицидный ответ против N. meningitidis. Как объясняется в примере 4, значительные hSBA ответы к исследуемым штаммам N. meningitidis наблюдались среди людей, которым вводили с иммуногенной композицией против N. meningitidis и REPEVAX. Дополнительные повышения hSBA ответов наблюдались приблизительно через 1 месяц после третьей дозы иммуногенной композиции против N. meningitidis.

Более того, авторы представленного изобретения неожиданно обнаружили, что сильные иммунные ответы как против N. meningitidis, так и dTaP, генерировались у человека после введение как иммуногенной композиции против N. meningitidis, так и иммуногенной композиции против dTaP, по сравнению с иммунным ответом у человека перед введением композиций. Как объясняется в примере 4, титры против dTaP, повышенные у человека после введения иммуногенной композиции против N. meningitidis и REPEVAX, по сравнению с титрами у человека перед введением иммуногенных композиций. Повышение титров против dTaP было, по меньшей мере, больше чем в 1 раз, по меньшей мере, в 2 раза, по меньшей мере, в 3 раза, по меньшей мере, в 4 раза, или больше.

СПОСОБЫ И ВВЕДЕНИЕ

В одном аспекте, изобретение касается способа индуцирования иммунного ответа против N. meningitidis у человека. В другом аспекте, изобретение касается способа вакцинирования человека. В одном варианте осуществления, способ включает введение человеку, по меньшей мере, одной дозы композиции, описанной выше. В другом варианте осуществления, способ включает введение человеку, по меньшей мере, первой дозы и второй дозы композиции, описанной выше.

Неожиданно, авторы представленного изобретения обнаружили, что двухдозованный режим композиции индуцировал бактерицидный титр против различных гетерологичного штаммов подсемейства А и против различных гетерологичных штаммов подсемейства В у человека. Например, процент людей с hSBA титром ≥1:8 составлял 90% или больше для SBA исследуемых штаммов, экспрессирующих LP2086 (fHBP) А22 или LP2086 (fHBP) А56 после двухдозованного режима композиции, описанной выше. Смотри пример 1.

В одном варианте осуществления, вторую дозу вводят, по меньшей мере, через 20, 30, 50, 60, 100,120, 160, 170 или 180 дней после первой дозы, и не больше чем через 250, 210, 200 или 190 дней после первой дозы. Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе, для определения диапазона.

В другом варианте осуществления, вторую дозу вводят приблизительно через 30 дней после первой дозы. В другом варианте осуществления, вторую дозу вводят приблизительно через 60 дней после первой дозы, такой как, например, в 0, 2 месячном режиме иммунизации. В другом варианте осуществления, вторую дозу вводят приблизительно через 180 дней после первой дозы, такой как, например, в 0, 6 месячном режиме иммунизации. В еще другом варианте осуществления, вторую дозу вводят приблизительно через 120 дней после первой дозы, такой как, например, в 2, 6 месячном режиме иммунизации.

В одном варианте осуществления, способ включает введение человеку двух доз композиции и не больше чем двух доз. В одном варианте осуществления, две дозы вводят в пределах периода приблизительно 6 месяцев после первой дозы. В одном варианте осуществления, способ не включает дополнительного введения ревакцинации человеку. "Ревакцинация", как используется в данном документе, касается дополнительного введения композиции человеку. Предпочтительным может быть введение человеку не больше, чем двух доз композиции. Такие преимущества включают, например, облегчение человеку выполнять в полном объеме режим применения и обеспечение эффективности стоимости режима.

В одном варианте осуществления, первую дозу и вторую дозу вводят человеку в течение периода приблизительно 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190 или 200 дней, и максимум через 400, 390, 380, 370, 365, 350, 340, 330, 320, 310, 300, 290, 280, 270, 260, 250, 240, 230, 220, 210 или 200 дней после первой дозы. Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе, для определения диапазона.

В одном варианте осуществления, первую дозу и вторую дозу вводят человеку в течение периода приблизительно 30 дней. В другом варианте осуществления, первую дозу и вторую дозу вводят человеку в течение периода приблизительно 60 дней. В другом варианте осуществления, первую дозу и вторую дозу вводят человеку в течение периода приблизительно 180 дней.

ТРИ ДОЗЫ

Авторы представленного изобретения, кроме того, неожиданно обнаружили, что трехдозированный режим композиции индуцировал более широкий бактерицидный титр против штаммов, экспрессирующих гетерологичные LP2086 (fHBP) штаммы подсемейство В у большего процента людей, чем в двухдозованном режиме. Например, процент людей с hSBA титром ≥1:8 составлял 65% или больше для SBA исследуемых штаммов LP2086 (fHBP) В24 и LP2086 (fHBP) В44 после двухдозованного режима композиции, описанного выше. Процент людей с hSBA титром ≥1:8 составлял 86% или больше для SBA исследуемых штаммов В24 и В44 после трехдозированного режима композиции, описанного выше. Смотри пример 1.

Соответственно, в одном варианте осуществления, трехдозированный режим композиции индуцирует бактерицидный титр против многочисленных штаммов, экспрессирующих LP2086 (fHBP), гетерологичный к первому и/или второму полипептиду у большего процента людей, чем при двухдозованном режиме.

В одном варианте осуществления, способ включает введение человеку трех доз композиции. В другом варианте осуществления, способ включает введение не больше чем трех доз композиции. В одном варианте осуществления, три дозы вводят в пределах периода приблизительно 6 месяцев после первой дозы. В одном варианте осуществления, способ включает введение ревакцинирующей дозы человеку после третьей дозы. В другом варианте осуществления, способ не включает введение ревакцинирующей дозы человеку после третьей дозы. В другом варианте осуществления, способ, кроме того, не включает введение четвертой или ревакцинирующей дозы композиции человеку. В следующем варианте осуществления, человеку вводят не больше, чем три дозы в пределах периода приблизительно 6 месяцев.

В иллюстративном варианте осуществления, вторую дозу вводят приблизительно через 30 дней после первой дозы, и третью дозу вводят приблизительно через 150 дней после второй дозы, такой как, например, в 0, 1, 6 месячный режим иммунизации. В другом иллюстративном варианте осуществления, вторую дозу вводят приблизительно через 60 дней после первой дозы, и третью дозу вводят приблизительно через 120 дней после второй дозы, такой как, например, в 0, 2, 6 месячный режим иммунизации.

В одном варианте осуществления, первую дозу, вторую дозу и третью дозу вводят человеку в течение периода приблизительно 150, 160, 170 или 180 дней, и не больше чем 240, 210 200 или 190 дней. Какое-либо минимальное значение может быть скомбинировано с каким-либо максимальным значением, описанным в данном документе, для определения диапазона. Предпочтительно, первую дозу, вторую дозу и третью дозу вводят человеку в течение периода приблизительно 180 дней или 6 месяцев. Например, вторая доза может вводиться человеку приблизительно через 60 дней после первой дозы, и третья доза может вводиться человеку приблизительно через 120 дней после второй дозы. Соответственно, иллюстративный режим введения включает введение дозы человеку приблизительно через 0, 2 и 6 месяцев.

Как описано выше, человеку могут вводиться многочисленные дозы иммуногенной композиции, и количество дней между каждой дозой может варьировать. Предпочтительный способ включает, например, гибкость для человека выполнять режимы применения.

ПРИМЕРЫ

Следующие примеры иллюстрируют варианты осуществления изобретения. Если не указано другое в данном документе, ссылка делается на следующие примеры исследуемой двухвалентной рекомбинантной вакцины (rLP2086), которая представляет собой предпочтительный иллюстративный вариант осуществления композиции, включающей 60 мкг первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, на 0,5 мл дозы, 60 мкг второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, на 0,5 мл дозы, с молярным соотношением полисорбата-80 к первому полипептиду - 2,8, с молярным соотношением полисорбата-80 к второму полипептиду - 2,8, 0,5 мг Al³⁺/мл композиции, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия. Более конкретно, исследуемая двухвалентная рекомбинантная rLP2086 вакцина включает (а) 60 мкг первого липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1; (b) 60 мкг второго липидированного полипептида, включающего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2; (с) 18 мкг полисорбата-80; (d) 250 мкг алюминия; (е) 780 мкг гистидина, и (f) 4380 мкг хлорида натрия. Каждая доза составляла 0,5 мл.

ПРИМЕР 1: Безопасность, переносимость и иммуногенность исследуемой менингококовой серологической группы В двухвалентной (MnB) rLP2086 вакцины у здоровых подростков при введении в режимах из 2 или 3 доз у здоровых субъектов в возрасте от 11 до 18 лет

Общие сведения: Безопасность, переносимость и иммуногенность исследуемой двухвалентной, рекомбинантной вакцины (rLP2086) исследовали на здоровых подростках в возрасте 11-18 лет с использованием 5-дозованых режимов, включающих 2 или 3 вакцинации (Таблица 1).

Вакцина представляет собой 0,5-мл дозу, сформулированную так, что содержит 60 мкг каждого rLP2086 белка из очищенного подсемейства А и очищенного подсемейства В, с молярным соотношением к полисорбату-80 - 2,8, и 0,25 мг Al³⁺ в виде AlPO₄, 10 мМ гистидинового буферного физиологического раствора с рН 6,0.

Физиологический раствор используют в качестве плацебо, потому что не существует известных доказанных безопасных, иммуногенных и эффективных вакцин против MnB, которые могли бы служить в качестве активного контроля.

Нормальный физиологический раствор включает 0,9% хлорида натрия в 0,5 мл дозе.

Способы: Все субъекты в данном 2-х фазном, рандомизированном, плацебо-контролируемом, простом слепом исследовании, сопровождаемом вакцинацией, посещают в 0, 1, 2 и 6 месяцев. Для «слепого», контроль - физиологический раствор давали, когда вакцина не планировалась. Сывороточные бактерицидные анализы с использованием комплемента человека (hSBA) проводили с 4 MnB исследуемыми штаммами, экспрессирующеми LP2086 (fHBP) fHBP варианты А22, А56, В24 и В44 (то есть 4 "первичными hSBA исследуемыми штаммами" в первичном анализе с конечными критериями оценки), все из которых отличаются от вариантов в вакцине. Оценивались добровольно сообщенные нежелательные явления (АЕ), ожидаемые местные и системные реакции, и применение жаропонижающих средств.

Средние геометрические титры hSBA количественно оценивались для каждого первичного штамма в каждой точке времени взятия проб крови вместе с 2-сторонними 95% доверительными интервалами (Д.Ин.). Средние геометрические кратные возрастания количественно оценивались вместе с 95% Д.Ин.

Респондента определяли как субъекта с титром hSBA равным или выше нижнего предела количественного определения (LLOQ) согласно анализам hSBA. LLOQ для каждого из 4 hSBA исследуемых штаммов в первичном анализе с конечными критериями оценки представлял собой титр hSBA, равный 1:8. Предел обнаружения (LOD) для каждого первичного исследуемого штамма представлял собой титр, равный 1:4 (широко рассматриваемое, как соотношение защиты против менингококового заболевания).

Результаты: через 1 месяц после последней дозы вакцины, 86-99% субъектов (после 3 доз; Р<0,001) и 69-100% субъектов (после 2 доз) имели титры hSBA ≥8 к каждому исследуемому штамму MnB. После исследования дозы 1, 19-27% (1,1-4,3% тяжелой) и 23-27% (0,0-1,0% тяжелой) получивших rLP2086 испытывали покраснение и припухлость, соответственно, по группе. Боль в месте инъекции была наиболее распространенной местной реакцией после исследуемой дозы 1 (7,6-13,1% тяжелой). Лихорадку ≥38°C после первый исследуемой дозы двухвалентной rLP2086 вакцины испытывали 3,3-6,5% в группе по сравнению с 2,1% в группе получавшей физиологический раствор. Местные и системные реакции, как правило, более часто были после дозы 1, чем после следующей дозы. 43 из 1712 субъектов (2,5%) сообщили о 51 серьезных АЕ; 2 случая рассматривались как связанные (1 случай головокружения, озноба и головной боли и 1 случай лихорадки и рвоты). О смертельных случаях не сообщалось.

Выводы: Двухвалентный rLP2086 имел приемлемый профиль безопасности. Все 5 режимов дозирования давали титры hSBA ≥8 против всех 4 исследуемых штаммов с высоким соотношением субъектов. Более высокие соотношения против некоторых исследуемых штаммов после 3-х доз по сравнению с 2-мя дозами показывают, что 3 дозы могут обеспечить самую широкую защиту против различных MnB клинических штаммов. Глобальные 3-х фазовые клинические испытания находятся в процессе выполнения с двухвалентной rLP2086 вакциной.

Одной из задач данного исследования было оценить иммунный ответ, если измерять с помощью hSBA, выполненного с MnB штаммами, экспрессирующими белки LP2086 подсемейства А и В, через 1 месяц после третьей вакцинации двухвалентной rLP2086, среди субъектов группы 1 (0-, 1- и 6-месячный режим как рандомизированный) и среди субъектов группы 2 (0-, 2- и 6-месячный режим как рандомизированный). Конечные критерии оценки для анализа иммуногенности представляли собой соотношение субъектов в группах 1 и 2, у которых достигался титр hSBA ≥ LLOQ на месяц 7 (или через 1 месяц после третьей дозы двухвалентной rLP2086) для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов (А22, А56, В24, и В44). LLOQ составляло 1:8 для 4 первичных MnB исследуемых штаммов.

Для оцениваемой на иммуногенность популяции, соотношение субъектов в группе 1, у которых достигался титр hSBA ≥ 1:8 после 3 дозы двухвалентной rLP2086, составляло 91,7% для А22, 99,4% для А56, 89% для В24, и 88,5% для В44 (Смотри таблицу 1 выше). Поскольку нижний предел 97,5% Д.Ин. составлял >50% для всех штаммов (87,8%, р<0,001; 97,8%, р<0,001; 84,7%, р<0,001; и 84,1%, р<0,001 для штаммов А22, А56, В24 и В44, соответственно, объективное исследование было выполнено для субъектов в группе 1.

Для группы 2, соотношение субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:8 после 3 дозы двухвалентной rLP2086, составляло 95,0% для А22, 98,9% для А56, 88,4% для В24, и 86,1% для В44 (Смотри таблицу 1 выше). Подобно тому, что было замечено для группы 1, нижний предел 97,5% Д.Ин. составлял >50% для всех штаммов (91,7%, р<0,001; 96,9%, р<0,001; 84,1%, р<0,001; и 81,4%, р<0,001 для штаммов А22, А56, В24, и В44, соответственно, демонстрировавший, что объективное исследование было выполнено для субъектов в группе 2.

Вторичной задачей было оценить иммунный ответ, если измерять с помощью hSBA, выполненного с MnB штаммами, экспрессирующими белки LP2086 подсемейства А и В, через 1 месяц после второй дозы двухвалентной rLP2086, среди группы 3 субъектов (0- и 6-месячного режима как рандомизированный). Данная вторичная задача представляла собой соотношение субъектов в группе 3, у которых достигался титр hSBA ≥ LLOQ (1:8) на месяц 7 (или через 1 месяц после второй дозы двухвалентной rLP2086) для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов.

Данная вторичная задача также соответствовала, поскольку соотношение субъектов в группе 3, у которых достигался титр hSBA ≥1:8 после 2 дозы двухвалентной rLP2086 составляло 93,5%, 98,4%, 81,1%, и 77,5% для первичных MnB исследуемых штаммов с низшим пределом 97,5% Д.Ин. >50% для всех штаммов (90,0%, р<0,001; 96,2%, р<0,001; 76,0%, р<0,001; и 72,2%, р<0,001 для штаммов А22, А56, В24, и В44, соответственно. Смотри таблицу 1 выше).

Другой вторичной задачей было соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов в каждой точке времени взятия проб крови для субъектов в группах 1-5. LLOQ для каждого из 4 первичных hSBA исследуемых штаммов составлял титр 1:8. Соотношения субъектов с титром hSBA ≥1:8 за время исследования для оцениваемой на иммуногенность популяции показаны в таблице 1 выше.

Соотношение субъектов, которые имели титр hSBA ≥1:8 после 1 дозы двухвалентной rLP2086 (группа 5 [2- и 6-месячный режим] через 1 месяц после инъекции 3) составляло 55,9% для А22, 67,6% для А56, 56,9% для В24, и 23,8% для В44.

Соотношение субъектов, которые имели титр hSBA ≥1:8 через один месяц после 2 дозы двухвалентной rLP2086, находилось в диапазоне от 74,6% до 100% для штаммов подсемейства А, и от 54,0% до 81,1% для штаммов подсемейства В. После 3 дозы, соотношение возрастало и находилось в диапазоне от 91,7% до 99,4% и от 86,1% до 89,0% для штаммов подсемейства А и В, соответственно.

ПРИМЕР 2: СЫВОРОТОЧНЫЙ БАКТЕРИЦИДНЫЙ АНАЛИЗ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА (HSBA)

Выведение MnB из кровотока человека в первую очередь достигается за счет комплемент-опосредованного бактериолизиса, и интактная комплементная система является важной для разистентности против инфекций, вызванных MnB. In vivo комплемент-опосредованный бактериолизис MnB имитируется in vitro с помощью сывороточного бактерицидного анализа с использованием комплемента человека (hSBA), функциональный серологический анализ, как показано, является суррогатом защиты для менингококкового заболевания. То есть демонстрация бактериального уничтожения в сывороточном бактерицидном анализе с использованием комплемента человека (hSBA) коррелирует с защитой против менингококкового заболевания. Иммунитет, вызванный вакциной, определяют с использованием hSBA против 4 MnB штаммов (fHBP варианты А22, А56, В24, и В44).

Четыре первичные MnB исследуемые штаммы использовали в hSBA, описанных в примерах для определения конечных критериев оценки. То есть данные штаммы использовали, чтобы оценить эффективность вакцины с использованием hSBA конечных критериев оценки иммуногенности. Данные исследуемые штаммы представляют 4 из 6 fHBP филогенетических подгрупп, которые принимают во внимание для >90% изолятов заболеваний, циркулирующих в США и Европе.

При выборе 4 первичных MnB исследуемых штаммов из инвазивных изолятов заболевания, использовали подход, который принимал во внимание распределение в популяции in vitro LP2086 экспрессии поверхности. Более того, hSBA исследуемые штаммы должны показывать низкий исходный уровень hSBA положительного результата исследования, поскольку популяции при риске для менингококового заболевания характеризуются отсутствием или низким исходным уровнем бактерицидной активности большинства штаммов. Кроме того, каждый из 4 первичных MnB исследуемых штаммов экспрессирует LP2086 вариант, который отличается от LP2086 варианта в вакцине, таким образом, позволяя объективную оценку функциональной иммуногенности и эффективности к инвазивным штаммам менингококкового заболевания (IMD), циркулирующим в популяции.

hSBA измеряет количество анти-менингококового антитела серологической группы В (MnB) в сыворотке, способной к инициированию комплемент-опосредованной бактерицидной активности. Коротко говоря, исследуемую сыворотку серийно разбавляют в 2 раза постадийно и добавляют в 96-лунковые планшеты для анализа. Добавляют MnB SBA исследуемые штаммы и человеческий сывороточный комплемент, инициируя бактерицидную реакцию. После инкубирования планшетов для анализа при 37°С в течение 30-60 минут (в зависимости от SBA исследуемого штамма; названного Т30), реакционную смесь, содержащую бактерии, выжившие после данного инкубирования, разбавляют и переносят в планшеты с микрофильтрами. После инкубирования в течение ночи, выжившие бактерии, выраженные в колониеобразующих единицах (КОЕ) подсчитывают с использованием анализатора Immunospot. Необработанные данные КОЕ регистрируются в электронном виде и передаются в приложение для анализа данных, которое рассчитывает титр hSBA. Титр hSBA является обратной величиной наиболее высокого 2-кратного разбавления исследуемой сыворотки, которые в результате приводят к, по меньшей мере, 50% уменьшению MnB бактерий (50% бактериальная выживаемость) по сравнению со значением Т30 КОЕ (то есть, количество бактерий, выживших после инкубирования в анализе лунок, содержащих все компоненты анализа, за исключением исследуемой сыворотки; 100% бактериальная выживаемость). Титры могут быть представлены как ступенчатые титры, то есть, 1:4, 1:8, 1:16, и т.д. Образцы сыворотки исследуют два человека, определения повторяют в таком же самом анализе. Окончательный титр, сообщаемый для образцов, в которых повторяемые измерения не являются идентичными, является более низким в двух повторяемых измерений, когда критерии пригодности системы и пригодности образца (например, повторяющиеся титры должны согласовываться в пределах одного 2-кратного разбавления) выполняются.

hSBA анализы выполняли после серийного разбавления исследуемых сывороток Дульбекко фосфатным буферным солевым раствором. Бактерии (приблизительно 2000 колониеобразующих единиц) и человеческий сывороточный комплемент (20% по массе конечной концентрации) добавляли к серийно разбавленным сывороткам в 96-лунковых планшетах и инкубировали при 37°С в течение 30-40 мин. (в зависимости от hSBA исследуемого штамма) в малого радиуса орбитальном шейкере при 700 оборотах в минуту. После инкубирования часть реакционной смеси переносили в планшеты с микрофильтрами. После инкубирования в течение ночи выжившие бактерии были подсчитаны с использованием анализатора Immunospot (Cellular Technology Limited; Shaker Heights, OH, USA) и hSBA титры анализировали с использованием SAS (версия 9.2). Титр hSBA рассчитывали как обратную величину интерполированного разбавления исследуемой сыворотки, что в результате привело к 50% уменьшению бактерий по сравнению с контролем, который не подвергался действию исследуемой сыворотки (то есть, выжившие бактерии в конце реакции hSBA). hSBA были выполнены по протоколу на основе титра hSBA, который находился на уровне или выше нижнего предела количественного определения анализов hSBA, как установлено во время квалификационной оценки анализов со штаммами, перечисленными в таблице 1 примера 1.

Сыворотка человека представляет собой источник комплемента для SBA. Однако, титры hSBA могут варьировать в зависимости от партии комплемента человека, который использовали. Соответственно, комплемент человека предпочтительно контролируют путем строгого отбора и квалификационной оценки, чтобы обеспечить стабильную работу в hSBA. Для hSBA, человеческий сывороточный комплемент может быть объединен от многочисленных нормальных здоровых взрослых людей или использован от индивидуальных доноров (то есть, не объедененный).

ПРИМЕР 3 - ПОЛИСОРБАТ-80

Три параметра оптимизировали для формуляции продукта лекарственного средства: рН, концентрация алюминия и молярное соотношение полисорбата 80 (PS-80) к белку. В дозе композиции, имеющей общий объем 0,5 мл, оптимальное связывание белка с алюминием достигается при рН приблизительно 6,0 и при концентрации алюминия в виде фосфата алюминия (AlPO₄) приблизительно 0,5 мг/мл (которая является эквивалентной 0,25 мг алюминия на дозу). Молярное соотношение PS-80 к белку поддерживается на 2,8±1,4 для того, чтобы стабилизировать препарат по отношению к эффективности in vitro. Полисорбат-80 (PS-80) добавляют к субстанции лекарственного средства, чтобы получить целевое молярное соотношение PS-80 к белку - 2,8. Таким образом, PS-80 предпочтительно не добавляют во время формуляции продукта лекарственного средства.

ПРИМЕР 4

Рандомизированное, плацебо-контролируемое, 2-фазное исследование на иммуногенность и безопасность REPEVAX®, которую вводят совместно с двухвалентной rLP2086 вакциной у здоровых подростков

Общие сведения/Цели: Исследуемую двухвалентную rLP2086 вакцину, которую разрабатывали для того, чтобы предупредить заболевание Neisseria meningitidis серологической группы В (MnB) у подростков, оценивали с помощью совместного введения REPEVAX®, dTaP-инактивированной полиовакцины (которая может быть описана в патенте США №7479283, WO 1990/013313, и ЕР 1666057 В1, и UK регистрационное удостоверение PL06745/0121) в настоящее время использовали в данной популяции.

Способы: Подростки, рандомизированные 1:1 к REPEVAX + rLP2086 или REPEVAX + физиологический раствор, были вакцинированы в 0, 2, и 6 месяцев. Определяли соотношение субъектов, у которых достигались предварительно заданные уровни антитела к 9 REPEVAX антигенам через 30 дней после начальной вакцинации. Иммунные ответы (hSBA) к 4 MnB исследуемым штаммам измеряли через 30 дней после вакцинации 2 и 3. Оценивали нежелательные эффекты (АЕ) и местные/системные реакции.

REPEVAX (Sanofi Pasteur MSD ограничено) представляет собой комбинированную низкодозированную дифтерийную, столбнячную, ацеллюлярно-коклюшную вакцину и вакцину с инактивированным вирусом полиомиелита, содержащую дифтерийный анатоксин (не менее 2 ME), столбнячный анатоксин (не менее 20 ME), коклюшные антигены (коклюшный анатоксин (2,5 микрограмма), филаментный гемагглютинин (5 микрограмм), пертактин (3 микрограмма), и фимбрии типов 2 и 3 (5 микрограмм)), вирус полиомиелита (инактивированный) типа 1 (40 D антигенных единиц), вирус полиомиелита (инактивированный типа 2 (8 D антигенных единиц), вирус полиомиелита (инактивированный) типа 3 (32 D антигенных единиц), адсорбированный на фосфате алюминия (1,5 мг (0,33 мг алюминия)) на 0,5 мл дозы.

Иммунные ответы на дифтерийный, столбнячный, и коклюшный компоненты REPEVAX (дифтерийный анатоксин, столбнячный анатоксин, коклюшный анатоксин, пертактин, фимбрии типов 2 и 3 и филаментный гемагглютинин) оценивали с использованием мультиплексного LUMINEX анализа. Иммунные ответы на вирус полиомиелита типов 1, 2 и 3 определяли в анализах нейтрализации вируса. Сыворотки, полученные от всех субъектов в обеих группах, использовали в данных анализах.

Для оценки иммунного ответа к двухвалентной rLP2086, функциональным антителам анализировали в hSBA с описанными 4 первичными MnB исследуемыми штаммами. Выбранными были варианты четырех первичных MnB hSBA исследуемых штаммов (А22, А56, В44, и В24), 2 экспрессирующих LP2086 подсемейства А и других 2 экспрессирующих LP2086 подсемейство В. Данные 4 первичные hSBA исследуемые штаммы (4 из 6 fHBP филогенетических подгрупп и представляющих >90% изолятов заболеваний, циркулирующих в США и Европе) использовали для определения конечных критериев оценки первичной иммуногенности в данном исследовании. Кроме того, варианты А22, В24 и В44 являются эпидемиологически соответствующими вариантами в Европе, тогда как в США А22 и В24 являются наиболее соответствующими вариантами, найденными, как такие, что экспрессируются при заболевании, вызванном MnB штаммами. MnB hSBA были валидированы перед исследованием образцов, использованных для первичных и вторичных анализов.

Образцы сыворотки от 50% случайно выбранных субъектов в обеих группах had hSBA были выполнены с А22 и В24, и остальные 50% были исследованы с А56 и В44. Данные исследования были выполнены на образцах крови, собранных перед вакцинацией 1, после вакцинации 2 и после вакцинации 3.

Иммуногенность REPEVAX оценивается с использованием предварительно заданных критериев для каждого антигена, определенного в ключевых 3-фазных клинических исследованиях на подростках, которые легли в основу для выдачи разрешений на REPEVAX. REPEVAX совместные антигены включают дифтерийный, столбнячный, коклюшный анатоксин, коклюшный филаментный гемагглютинин, коклюшный пертактин, коклюшный фимбриальный гемагглютинин type 2+3, вирус полиомиелита типа 1, вирус полиомиелита типа 2, вирус полиомиелита типа 3. Исключение составляет коклюшный фимбриальный гемагглютинин (FIM) типов 2+3, для которого определен титр ≥5 ЕЭ/мл в анализе использовали для выдачи разрешений на REPEVAX. В данном исследовании нижний предел количественного определения (LLOQ) коклюшного FIM типов 2+3 анализ составлял ≥10,6 ЕЭ/мл, который является выше и, следовательно, более жесткие, чем критерии для выдачи разрешений на REPEVAX.

LLOQ для совместных антигенов составляли 0,037 МЕ/мл для дифтерийного анатоксина; 0,05 МЕ/мл для столбнячного анатоксина; 0,9 ЕЭ/мл для коклюшного анатоксина; 2,9 ЕЭ/мл для коклюшного филаментного гемагглютинина, 3,0 ЕЭ/мл коклюшного пертактина; 10,6 ЕЭ/мл коклюшного фимбриального гемагглютинина типа 2+3; 1:8 для вируса полиомиелита типа 1, вируса полиомиелита типа 2, вируса полиомиелита типа 3.

Дополнительные описательные конечные критерии оценки для первичной задачи представляли собой антитела к антигенам совместной вакцины, измеренные как средний геометрический титр (GMT) или средние геометрические концентрации (GMC) при пост-вакцинации 1 (посещение 2).

Другой конечный критерий оценки представлял собой соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ при пост-вакцинации 3 (посещение 6) для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов.

Антигены совместной вакцины. Соотношение субъектов, достигавших предварительно заданных критериев для антигенов совместной вакцины через 1 месяц после вакцинации от дифтерии, столбняка, и ацеллюлярного коклюша (dTaP)-IPV (REPEVAX) рассчитывали с 2-сторонней 95% точностью (или доверительный интервал по методу Клоппера-Пирсона) для группы 1 и группы 2. Различие (двухвалентной rLP2086/dTaP-IPV - dTaP-IPV, или группы 1 - группы 2) соотношений также рассчитывали вместе с 2-сторонней 95% точностью Д.Ин. для различия. Не уступающая эффективность объявлялся, если нижний предел 2-стороннего 95% Д.Ин. для разницы был больше чем - 0,10 (-10%) для всех 9 антигенов в dTaP-IPV вакцине.

hSBA с первичными исследуемыми штаммами. Для каждого первичного MnB hSBA исследуемого штамма, количество и соотношение субъектов, у которых достигались титры hSBA ≥ LLOQ, ≥1:4, ≥1:8, ≥1:16, и ≥1:128 в каждой точке времени взятия проб крови были описательно просуммированы вместе с точным 2-сторонним 95% Д.Ин. (или доверительным интервалом по методу Клоппера-Пирсона) для соотношения.

Результаты: Из 749 рандомизированных субъектов, 685 (91,5%) включали оцениваемую на иммуногенность популяция. Иммунные ответы после REPEVAX + rLP2086 или REPEVAX + физиологический раствор были не уступающими для всех 9 REPEVAX антигенов. Иммунные ответы на двухвалентную rLP2086 вакцину были значительными после 2 дозы и дополнительно увеличивались после 3 дозы (Таблица 2). От легкой до умеренной боль в месте инъекции была наиболее распространенной местной реакцией; головная боль и утомляемость были наиболее общими системными осложнениями. Соотношение субъектов, у которых сообщались АЕ в пределах 30 дней после вакцинации, было аналогичным (8,8% и 11,4%, для REPEVAX + rLP2086 и REPEVAX + физиологический раствор, соответственно).

Для популяции, для которой оценивалась иммуногенность совместной вакцины, процентное соотношение субъектов, у которых достигался предварительно заданный уровень антител к антигенам совместной вакцины (пороговая величина ответа) через 1 месяц после REPEVAX дозы было аналогичным между группой с двухвалентной rLP2086 + REPEVAX группой и группой с REPEVAX только для антигенов совместной вакцины: дифтерийный анатоксин (99,4% в каждой группе), столбнячный анатоксин (100% в каждой группе), коклюшный анатоксин (94,7% и 96.0%, соответственно), коклюшный филаментный гемагглютинин (100% в каждой группе), коклюшный пертактин (100% в каждой группе), коклюшный фимбриальный гемагглютинин типа 2+3 (97,6% и 98,9%, соответственно), вирус полиомиелита типа 1 (100% в каждой группе), вирус полиомиелита типа 2 (100% в каждой группе), вирус полиомиелита типа 3 (100% в каждой группе).

Не меньшая эффективность достигалась, потому что нижняя граница 2-стороннего 95% Д.Ин. для разницы в соотношении респондентов между группой с двухвалентной rLP2086 + REPEVAX (Группа 1) и группой с REPEVAX только (группа 2), через 1 месяц после REPEVAX дозы составляла больше чем -0,10 (-10%) для 9 антигенов в REPEVAX (то есть самая низкая нижняя граница 95% Д.Ин. при разнице соотношения составляла -4,7% (коклюшный анатоксин). Следовательно, иммунный ответ, индуцированный REPEVAX, данной с двухвалентной rLP2086, был не уступающим иммунному ответу, индуцированному только REPEVAX.

Оценивалось соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов для оцениваемой на иммуногенность популяции после вакцинации 3. LLOQ для А22 был титром hSBA, равным 1:16, тогда как LLOQ для всех других MnB исследуемых штаммов был титр hSBA, равный 1:8.

Для группы 1, соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ при исходном уровне (перед вакцинацией 1) составляло 14,4% для первичного MnB штамма А22, 18,2% для А56, 12,7% для В24, и 6,2% для В44. Для группы 2, соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ при исходном уровне (перед вакцинацией 1) составляло 23,0% для первичного MnB штамма А22, 21,8% для А56, 12,9% для В24, и 6,3% для В44.

Значительные hSBA ответы наблюдались среди группы 1 субъектов после дозы 2 двухвалентной rLP2086, с дополнительными повышениями, наблюдаемыми после 3 дозы через 1 месяц после вакцинации 3. Для группы 1 (двухвалентной rLP2086 + REPEVAX), соотношение субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥ LLOQ через 1 месяц после вакцинации 2 и через 1 месяц после вакцинации 3 составляло 81,1% и 95,6% для А22, 97,3% и 100% для А56, 81,0% и 96,8% для В24, и 55,5% и 81,5% для В44. Тогда как значительные ответы hSBA достигались после только двух доз двухвалентной rLP2086, увеличение соотношения субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ после 2 дозы (через 1 месяц после вакцинации 2) по сравнению с 3 дозы (через 1 месяц после вакцинации 3) служит примером усиления иммунного ответа после 3 дозы. В контрольной группе (группа 2), соотношения субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов через 1 месяц после вакцинации 2 и через 1 месяц после вакцинации 3 были аналогичными к результатам hSBA исходного уровня для каждого MnB исследуемого штамма (перед вакцинацией 1).

Для 4 первичных MnB исследуемых штаммов, соотношение субъектов в группе 1, демострирующих определенный титр hSBA был больше после 3 дозы, чем после 2 дозы. Описываются субъекты, у которых достигался титр hSBA ≥1:16, поскольку данный титр повышается в 4 раза от 1:4 титра (титр ≥1:4 широко идентифицуется как такой, который коррелирует с защитой против IMD). Для группы 1, соотношение субъектов с титром hSBA 1:16 через 1 месяц после вакцинации 2 составляло 81,8% для А22, 97,3% для А56, 68,0% для В24, и 53,4% для В44. Через один месяц после вакцинации 3, соотношение субъектов с титром hSBA 1:16 составляло 95,6% для А22, 100% для А56, 87,3% для В24, и 79,5% для В44.

В контрольной группе (группа 2), соотношения субъектов, демонстрирующих определенные титры hSBA для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов через 1 месяц после вакцинации 2 и через 1 месяц после вакцинации 3, были аналогичными к соотношению субъектов с определенным титром hSBA при исходном уровне (перед вакцинацией 1).

Для группы 1, соотношение субъектов с титром hSBA 1:16 после 3 дозы двухвалентной rLP2086 демонстрировало, что вакцина вызывает сильный иммунный ответ, когда вводили 3 дозы двухвалентной rLP2086.

Средние геометрические титры (GMT) hSBA. Как правило, GMT на исходном уровне были ниже LLOQ hSBA для обеих групп. Для группы 1, GMT hSBA через 1 месяц после вакцинации 2 составляли 35,5 для А22, 91,1 для А56, 15,9 для В24, и 14,6 для В44. GMT hSBA через 1 месяц после вакцинации 3 составляли 63,4 для А22, 151,5 для А56, 28,3 для В24, и 36,5 для В44.

Для группы 1, наблюдаемые GMT после 2 дозы для штаммов подсемейства А, а также после 3 дозы для штаммов подсемейства В, служили признаком сильного иммунного ответа.

Оценивались обратные интегральные кривые распределения (RCDC), показывающие распределение титров hSBA для А22, А56, В24, и В44. Результаты по RCDC в группе 1 показали, что значительные иммунные ответы наблюдались среди группы 1 субъектов после вакцинации 2 двухвалентной rLP2086; однако, фигуры также показали эффективность третьей дозы двухвалентной rLP2086, так как у большего соотношения субъектов достигались более высокие титры против 4 MnB исследуемых штаммов. Эффект был наиболее выражен для штамма В44.

Выводы: При совместном введении с двухвалентной rLP2086, REPEVAX индуцировала иммунные ответы, которые были не уступающими тем, которые вызывались только REPEVAX. Двухвалентная rLP2086 вакцина индуцировала сильные бактерицидные ответы к четырем различным MnB исследуемым штаммам, особенно к тем, которые представляют подсемейство В, которые были больше после 3 дозы, чем после 2 дозы. Совместное введение было, как правило, безопасным и хорошо переносимым.

ПРИМЕР 5

Иммуногенность исследуемой менингококковой серологической группы В двухвалентной вакцины rLP2086 у здоровых подростков

Общие сведения и цели: Neisseria meningitidis серологической группы В (MnB) вызывает инвазивное заболевание у детей, подростков, и взрослых. Сохраненный, поверхностно-обработанный липопротеин, LP2086 (фактор Н связывающий белок [fHBP]), является перспективной мишенью MnB вакцины. Безопасность и иммуногенность исследуемой двухвалентной, рекомбинантной вакцины (rLP2086) исследовали на здоровых подростках (в возрасте 11-18 лет).

Способы: Субъекты в данном плацебо-контролируемом, простом слепом исследовании были рандомизированы на два 3-дозованного режима и три 2-дозованного режима. Каждая 120-мкг доза содержала 2 rLP2086 антигена, по 1 из каждого LP2086 подсемейства (А и В). Физиологический раствор давали, когда вакцина была не запланирована. Сывороточные бактерицидные анализы с использованием комплемента человека (hSBA) выполняли с 4 MnB исследуемыми штаммами (гетерологичные к вакцине fHBP).

Результаты: 1713 субъектов (средний возраст, 14,4 года) были рандомизированы. Через один месяц после 3 дозы вакцины, титры hSBA ≥8 к штаммам подсемейства А и В наблюдались у 95-99% и 86-89% субъектов, соответственно; после 2 дозы, данные количества находились в диапазонах 91-100% и 69-77% субъектов, соответственно. 2-дозованные режимы, в 0 и 6 месяцев индуцировали наиболее высокие ответы антител (таблица 1 из примера 5). GMT hSBA после 2 дозы находились в диапазонах 6,2-125,6 и после 3 дозы находились в диапазонах 25,6-155,6 по всем 4 MnB гетерологичным исследуемым штаммам. Боль в месте инъекции от легкой до умеренной была наиболее распространенной местной реакцией. Лихорадку ≥38°С испытывали 3,3-6,5% и 2,1% получателей rLP2086 и физиологического раствора, соответственно, после дозы 1.

Выводы: rLP2086 хорошо переносилась. Все режимы дозирования давали сильные бактерицидные ответы, которые были наиболее четко выраженными после 3 дозы.

Таблица 1 примера 5 является такой же, как таблица 1 примера 1, описанного выше. Таблица 2 суммирует GMT hSBA и соответствующий Д.Ин. в момент исследования для оцениваемой на иммуногенность популяции. GMT увеличивались от исходного уровня (перед инъекцией 1) и продолжали увеличиваться с каждой последующей дозой двухвалентной rLP2086.

Для 4 первичных MnB штаммов, GMT были большими после 3 дозы двухвалентной rLP2086 (группы 1 и 2), чем после 2 дозы (группы 3, 4 и 5). GMT были аналогичными между двумя 3-дозованными группами, и они были аналогичными среди трех 2-дозованных групп.

Перед инъекцией 1 (исходный уровень), GMT hSBA для групп 1, 2, 3, 4 и 5 были следующими: 7,1, 6,3, 6,4, 6,4, и 6,8 для А22, соответственно; 6,8, 6,1, 6,7, 6,3, и 6,2 для А56, соответственно; 5,3, 5,1, 5,0, 4,9, и 5,1 для В24, соответственно; и 4,4, 4,5, 4,5, 4,6, и 4,4 для В44, соответственно.

Для группы 1 (0-, 1- и 6-месяц), происходило значительные увеличение GMT, отмеченных через 1 месяц после дозы 2 для всех 4 первичных MnB штаммов (24,4, 77,3, 13,8, и 13,1 для А22, А56, В24, и В44, соответственно). GMT далее увеличивались после 3 дозы двухвалентной rLP2086 для группы 1 субъектов для 4 первичных MnB исследуемых штаммов; 55,1 (А22); 152,96 (А56); 29,1 (В24); и 40,3 (В44).

Для группы 2, аналогичные увеличения GMT были отмечены после 2 и 3 дозы двухвалентной rLP2086. GMT для группы 2 субъектов после 2 дозы двухвалентной rLP2086 составляли 32,9 для А22; 94,6 для А56; 14,9 для В24; и 15,5 для В44. После 3 дозы, GMT увеличивались до 56,3 для А22; 155,6 для А56; 25,6 для В24; и 35,0 для В44.

Для групп 1 и 2, наблюдаемые GMT после 2 дозы для штаммов подсемейства А, а также после 3 дозы для штаммов подсемейства В, служат признаком сильного иммунного ответа.

Для группы 3, небольшие увеличения GMT были отмечены после 1 доза двухвалентной rLP2086, как следующие: 12,0 для А22; 18,5 для А56; 9,2 для В24; и 5,7 для В44. После 2 дозы GMT увеличивались до 48,4 для А22; 125,6 для А56; 20,6 для В24; и 22,5 для В44.

Для группы 4, GMT составляли 13,3 для А22; 17,7 для А56; 9,8 для В24; и 5,9 для В44 после 1 дозы двухвалентной rLP2086. После 2 дозы двухвалентной rLP2086, GMT составляли 37,1 для А22; 104,9 для А56; 17,7 для В24; и 19,1 для В44.

Для группы 5, GMT после 1 дозы двухвалентной rLP2086 составляли 16,0 для А22; 26,8 для А56; 12,6 для В24; и 6,8 для В44. После 2 дозы двухвалентной rLP2086, GMT увеличивались до 39,6 для А22; 111,8 для А56; 14,7 для В24; и 17,8 для В44.

Взятые вместе, для групп 3, 4, и 5, наблюдаемые GMT служат признаком иммунного ответа для штаммов подсемейства А и В после 2 дозы двухвалентной rLP2086.

В заключение, 3 дозы двухвалентной rLP2086 обеспечивали сильный и самый широкий иммунный ответ, основанный на титрах hSBA для 4 первичных MnB исследуемых штаммов. По сравнению с 2 дозы, более высокое соотношение субъектов, получавших 3 дозы двухвалентной rLP2086, достигали титр hSBA ≥1:8 к 4 первичным MnB исследуемым штаммам.

Результаты после 0-, 1-, и 6-месяца режима дозирования (группа 1) были аналогичными результатам после 0-, 2-, и 6-месяца режима дозирования (группа 2). Для групп 1 и 2, GMT значения, которые достигались после дозы 3, были более высокими, чем GMT значения после дозы 2. Для групп 1 и 2, GMT значения после дозы 2 находились в диапазоне от 24,4 до 94,6 для штаммов подсемейства А и от 13,1 до 15,5 для штаммов подсемейства В. GMT значения после дозы 3 находились в диапазоне от 55,1 до 155,6 для штаммов подсемейства А и от 25,6 до 40,3 для штаммов подсемейства В. Для групп 1 и 2, достигалось более высокое соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:8 к 4 первичным MnB исследуемым штаммам после 3 дозы двухвалентной rLP2086, по сравнению с соотношением субъектов у которых достигался титр hSBA ≥1:8 к 4 первичным MnB исследуемым штаммам после 2 дозы двухвалентной rLP2086.

Кроме того, оценивались субъекты, у которых достигался титр hSBA ≥1:16. Для группы 1, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 через один месяц после 2 дозы двухвалентной rLP2086, составлял 73,5% для А22; 96,3 для А56; 57,6 для В24; и 47,2% для В44. После 3 дозы двухвалентной rLP2086, процент субъектов в группе 1, у которых достигался титр hSBA ≥1:16, составлял 91,4% для А22; 99,2% для А56; 82,8% для В24; и 84,8% для В44.

Для группы 2, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 через один месяц после 2 дозы двухвалентной rLP2086, составлял 88,1% для А22; 97,9% для А56; 63,5% для В24; и 58,6% для В44. После 3 дозы двухвалентной rLP2086, процент субъектов в группе 2, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 составлял 95,0% для А22; 98,9% для А56; 83,6% для В24; и 83,8% для В44.

Для групп 1 и 2, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 после 3 дозы двухвалентной rLP2086, демонстрировал, что вакцина вызывает сильный иммунный ответ.

Для группы 3, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 после 2 дозы двухвалентной rLP2086 составлял 93,2% для А22; 98,4% для А56; 73,8% для В24; и 70,8% для В44.

Для группы 4, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 через один месяц после 2 дозы двухвалентной rLP2086 составлял 90,8% для А22; 99,2% для А56; 67,1% для В24; и 64,5% для В44.

Для группы 5, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 после 2 дозы двухвалентной rLP2086 составлял 91,0% для А22; 99,1% для А56; 64,5% для В24; и 66,7% для В44.

Для групп 3, 4, и 5, процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16, демонстрировал, что вакцина вызывает сильный иммунный ответ к штаммам подсемейства А только после 2 дозы. Однако 3 доза повышает силу ответа к штаммам подсемейства В.

Процент субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16 после 3 дозы двухвалентной rLP2086, показывает, что вакцина вызывает сильный и широкий иммунный ответ к штаммам MnB, экспрессирующим LP2086 варианты, которые отличаются от компонентов вакцины.

Обратные интегральные кривые распределения (RCDC), показывающие распределение титров hSBA во времени исследования, кроме того, оценивались для оцениваемых на иммуногенность популяций для каждого штамма по группе. RCDC показывают сильные иммунные ответы после 2 дозы двухвалентной rLP2086 к штаммам подсемейства А. После третьей дозы двухвалентной rLP2086, площадь под кривыми ответов увеличивалась для всех 4 первичных MnB исследуемых штаммов, таким образом, демонстрируя усиление иммунного ответа после 3 дозы двухвалентной rLP2086.

Результаты анализов первичных и вторичных конечных критериев оценки на иммуногенность показывают, что вакцина может генерировать антитела со значительной hSBA активностью против гетерологичных вариантов подсемейства А и подсемейства В MnB. В то время как соотношение субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:8, было более высоким после 2 или 3 дозы двухвалентной rLP2086, достигалось большое соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:8 через один месяц после 1 дозы двухвалентной rLP2086. Смотри, например, группу 5.

Для 4 первичных MnB исследуемых штаммов, GMT были больше после 3 дозы двухвалентной rLP2086 (группы 1 и 2), чем после 2 дозы (группы 3, 4 и 5). GMT были аналогичными в двух 3-дозованных группах. GMT также были аналогичными среди трех 2-дозованных групп. Эти данные также демонстрируют сильные hSBA ответы после 3 дозы двухвалентной rLP2086, основанные на процентах субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥1:16.

Эти данные демонстрируют, что конечный препарат двухвалентной rLP2086 генерирует сильный иммунный ответ и является безопасным и хорошо переносимым, когда вводится 2-мя или 3-мя дозами. Даже 1 доза двухвалентной rLP2086 обеспечивает значительный иммунный ответ по сравнению с исходным уровнем и также является безопасной и хорошо переносимой. В целом, не существовали никаких клинически значительных различий в профиле безопастности после 2 или 3 дозы двухвалентной rLP2086.

ПРИМЕР 6

Безопасность, переносимость, и иммуногенность менингококковой серологической группы В двухвалентной rLP2086 вакцины у здоровых подростков в возрасте от 11 до 18 лет в трех 2-фазных, рандомизированных, контролируемых исследованиях

Общие сведения: Neisseria meningitidis серологической группы В (MnB) является главной причиной инвазивного менингококкового заболевания у подростков. Сохраненный, поверхностно-обработанный липопротеин, LP2086 (фактор Н связывающий белок [fHBP]), является перспективной мишенью вакцины, чтобы защитить от инвазивного заболевания, вызванного MnB. Безопасность, переносимость и иммуногенность исследуемой двухвалентной, рекомбинантной MnB вакцины (которая включает SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 -2,8, 0,5 мг/мл алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия, в данном документе называется во всех примерах как "двухвалентная rLP2086") была проверена в трех 2-фазных, рандомизированных, контролируемых исследованиях у здоровых подростков в возрасте 11-18 лет.

Способы: Исследование 1012 проверило 5 вакцинных режимов двухвалентной rLP2086, в то время как исследования 1010 и 1011 оценивали 3-дозованный режим двухвалентной rLP2086 вакцины, вводимой совместно с TdaP-IPV и HPV- вакцинами, соответственно. Каждая доза двухвалентной rLP2086 содержала 60 мкг rLP2086 варианта А05 подсемейства А и 60 мкг rLP2086 варианта В01 подсемейства В. Для того, чтобы проверить двухвалентную rLP2086 на иммуногенность в каждом из трех исследований, сывороточные бактерицидные анализы с использованием комплемента человека (hSBA) выполняли с 4 MnB исследуемыми штаммами, экспрессирующими гетерологичные fHBP варианты А22, А56, В24 и В44, которые были выбраны, чтобы представлять соответствующее разнообразие вариабельности fHBP, а также обеспечить перспективность широты вызванного вакциной иммунного ответа против штамма, экспрессирующего эпидемиологически превалирующие fHBP варианты. Побочные эффекты и навязываемые местные и системные реакции были оценены. Результаты: 82-100% субъектов во всех 3 исследованиях достигались титры hSBA выше нижнего предела количественного определения (LLOQ) для каждого из 4 MnB исследуемых штаммов через 1 месяц после дозы 3 (Таблица). По всем трем исследованиям, преобладающее большинство системных осложнений и мастных реакций были от легких до умеренных по тяжести; побочные эффекты были, как правило, не серьезными или связанными с вакциной исследования.

Выводы: Титры бактерицидных антител сыворотки выше 1:4 защищают против инвазивного менингококкового заболевания. Демонстрирование титров hSBA ≥ LLOQ к 4 MnB исследуемым штаммам, каждый гетерологичный по отношению к антигену вакцины, в каждой из фаз 2 исследования на этих подростках, свидетельствуют о том, что двухвалентная rLP2086 вакцина обеспечивала функциональный антительный ответ, который может быть широко активен в отношении различных MnB заболеваний, связанных со штаммами. Вакцинации двухвалентной rLР2086, как правило, хорошо переносились.

ПРИМЕР 7

Иммуногенность менингококковой серологической группы В двухвалентной rLP2086 вакцины у здоровых подростков в возрасте от 11 до 18 при введении совместно с вакциной против вируса папилломы человека

Данное 2 фазное, рандомизированное, контролированное исследование с маскированием данных для наблюдателя оценивало иммуногенность двухвалентной rLP2086 с или без совместного введения с GARDASIL®, которая представляет собой четырехвалентную вакцину против вируса папилломы человека (HPV4) (которая также описана в патенте США No 5,820,870), у здоровых подростков в возрасте ≥11 до <18 лет. GARDASIL содержит рекомбинантные антигены HPV типа 6, 11, 16, и 18 (то есть, HPV-6, HPV-11, HPV-16, и HPV-18) L1 белок. Конечные критерии оценки представляли собой GMT hSBA для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов в каждом применимом в точку времени отбора образца крови.

Способы: Субъекты получали двухвалентную rLP2086 (включающую SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2, с молярным соотношением полисорбата-80 - 2,8, 0,5 мг/мл алюминия, 10 мМ гистидина, и 150 мМ хлорида натрия) + HPV4 (Группа 1), двухвалентную rLP2086 + физиологический раствор (Группа 2), или HPV4 + физиологический раствор (Группа 3) в месяцы 0, 2, и 6. Сыворотки от субъектов в группах 1 и 2 перед вакцинацией 1, и через 1 месяц после вакцинации 2 и 3, исследовали с помощью сывороточного бактерицидного анализа с использованием комплемента человека (hSBA), используя 4 MnB исследуемые штаммы, каждый экспрессирующий fHBP (А22, А56, В44, и В24), который является гетерологичным к компонентам вакцины и представляет широту разнообразия fHBP, а также эпидемиологическую распространенность. Конечные критерии оценки, которые оценивались, включали соотношение субъектов с титром hSBA ≥ нижнего предела количественного определения (LLOQ; 1:16 [А22] или 1:8 [А56, В44, В24]) и средние геометрические титры (GMT) hSBA.

Для того, чтобы продемонстрировать не меньшую эффективность от введения GARDASIL плюс двухвалентная rLP2086 по сравнению с только GARDASIL, выполняли оценку иммуногенности с 2 hSBA, с использованием 1 первичного исследуемого штамма, представляющего варианты (А22) подсемейства А и 1 первичного исследуемого штамма, представляющего варианты (В24) подсемейства В. Однако все 4 первичных MnB исследуемых штамма использовали для определения экспериментальных конечных критериев оценок дополнительной иммуногенности/эффективности двухвалентной rLP2086.

Для оценки иммунного ответа к двухвалентной rLP2086, функциональные антитела анализировали в hSBA с менингококковыми серологической группы В штаммами, выбранными произвольно из пула фирмы Pfizer типичного MnB SBA штамма, как описано в примере 2. hSBA измерял функциональные антитела в сыворотках человека, которые в комплемент-зависимом способе уничтожает целевой менингококковый штамм.

Результаты: 814 и 812 субъектов включали в оцениваемые иммуногенность популяции для групп 1 и 2, соответственно. По сравнению с состоянием перед вакцинацией 1, соотношение субъектов с титром hSBAs ≥ LLOQ против всех 4 исследуемых штаммов было более высоким после вакцинации 2 (55%-99%) и 3 (83%-99%; фигура 1). Таблица А примера 7 представляет GMT hSBA для каждого из 4 первичных MnB штаммов и соответствующий Д.Ин. в точку времени отбора образца для оцениваемой на иммуногенность популяции. GMT на исходном уровне были ниже hSBA LLOQ для обеих групп. GMT находились в диапазоне 11,1-70,6 и 11,9-76,3 после вакцинации 1, и 25,8-117,2 и 28,0-128,2 после вакцинации 2 в группах 1 и 2, соответственно (таблица А ниже).

Для оцениваемой на иммуногенность популяции, GMT hSBA к 2 первичным MnB штаммам через 1 месяц после дозы вакцинации 3 двухвалентной rLP2086 для группы 1 и группы 2 были следующими: 53,3 и 57,8, соответственно, для А22 и 25,8 и 28,0, соответственно, для В24.

Для группы 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), GMT hSBA через 1 месяц после вакцинации 2 составляли 33,7 для А22, 76,3 для А56, 16,3 для В24, и 11,9 для В44. GMT hSBA через 1 месяц после вакцинации 3 составляли 57,8 для А22, 128,2 для А56, 28,0 для В24, и 31,9 для В44.

Для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), GMT hSBA через 1 месяц после вакцинации 2 составляли 31,9 для А22, 70,6 для А56, 15,0 для В24, и 11,1 для В44. GMT hSBA через 1 месяц после вакцинации 3 составляли 53,3 для А22, 117,2 для А56, 25,8 для В24, и 27,2 для В44.

Обратные интегральные кривые распределения (RCDC), показывающие распределение титров hSBA для А22, А56, В24, и В44 оценивались для группы 1 и группы 2 во все точки времени отбора образцов для оцениваемой на иммуногенность популяции. RCDC показали, что преобладающее большинство субъектов показали ответ после вакцинации 2 и имели дополнительное увеличение титра для 4 первичных MnB исследуемых штаммов после вакцинации 3. Иммунные ответы к антигенам были аналогичными для групп 1 и 2.

Выводы: Двухвалентную rLP2086 могут вводить с HPV4 без влияния на бактерицидный ответ, который оценивается с помощью hSBA серологического ответа или GMT. Поскольку титры hSBA ≥1:4 коррелируют с защитой против менингококкового заболевания, эти данные показывают, что эффективность защиты подростков против широкого диапазона MnB штаммов после введения двухвалентной rLP2086 на фоне совместного введения HPV вакцины.

ПРИМЕР 8

Иммуногенность вакцины против папилломы человека совместно вводимой с двухвалентной rLP2086 вакциной против менингококковой серологической группы В у здоровых подростков

Общие сведения: Данное 2 фазное, рандомизированное исследование оценивало совместное введение четырехвалентной вакцины против вируса папилломы человека (HPV4), с двухвалентной rLP2086, исследуемая вакцина против инвазивного заболевания, которое вызывалось Neisseria meningitidis серологической группой В (MnB), у здоровых подростков от ≥11 до <18 летнего возраста.

Способы: Субъекты получали HPV4 + двухвалентную rLP2086 (Группа 1), двухвалентную rLP2086 + физиологический раствор (Группа 2), или физиологический раствор + HPV4 (Группа 3) в месяцы 0, 2, и 6. Сыворотки собирали на исходном уровне и после дозы 2 и 3 во всех группах. Иммунные ответы к HPV4 антигенам (HPV-6, 11, 16, и 18) определяли с помощью конкурентных LUMINEX иммуноанализов (cLIA). Иммуногенность двухвалентной rLP2086 измеряли с помощью сывороточного бактерицидного анализа с использованием комплемента человека (hSBA) с 2 MnB исследуемыми штаммами, экспрессирующими вакцина-гетерологичные fHBP варианты (А22 и В24). Конечные критерии оценки иммуногенности, все после доза 3, включали: средние геометрические титры (GMT) против HPV антигенов в группах 1 и 3; GMT hSBA для штаммов, экспрессирующих варианты А22 и В24 в группах 1 и 2; и индекс сероконверсии для HPV антигенов на исходном уровне серонегативных субъектов в группах 1 и 3. Безопасность двухвалентной rLP2086 также оценивались после совместного введения с HPV4 или физиологическим раствором.

Оценки иммунного ответа к GARDASIL (HPV типа 6, 11, 16, и 18 L1 белка) выполняли с использованием cLIA, основанный на флуоресцентно-меченных микросферах на основе платформы (LUMINEX). Сыворотки, полученные от всех субъектов в группах 1 и 3 перед первой вакцинацией с GARDASIL (Посещение 1) и через 1 месяц после третьей вакцинации GARDASIL (Посещение 5) использовали в данных анализах.

Сравнение GMT с 4 HPV антигенами для группы 1 и группы 3, с их соответствующими GMT соотношениями (GMR) Группы 1 к Группе 3 и 2-сторонними 95% Д.Ин. соотношений представлено в таблице А ниже представленного примера. Критерий для границы не меньшей эффективности составлял 1,5 раза, который соответствует значению 0,67 для нижнего предела 2-стороннего 95% Д.Ин. GMR. 1,5 разовый критерий 0,67 был определен для всех MnB исследуемых штаммов и HPV антигенов за исключением HPV-18, который имел более низкую границу 95% доверительного интервала (Д.Ин.) 0,62. В отдельном анализе, ≥99% субъектов, сероконвертированных ко всем 4 HPV антигенам как в группе физиологический раствор + HPV4, так и rLP2086 + HPV4 группе.

Другой задачей данного исследования было описать иммунный ответ, индуцированный двухвалентной rLP2086 + GARDASIL (Группа 1) и физиологическим раствором + GARDASIL (Группа 3), если измерять с помощью серологической конверсии в анализах HPV иммуногенности после вакцинации 3 дозой GARDASIL (Посещение 5) в обеих группах.

Индекс сероконверсии для каждого из 4 HPV антигенов, через 1 месяц после последней дозы GARDASIL для субъектов, которые были HPV-серонегативными на исходном уровне в группе 1 и группе 3, рассчитывали как соотношение субъектов с cLIA уровнями анти-HPV сыворотки ≥20 ммасс.ед./мл для HPV-6, ≥16 ммасс.ед./мл для HPV-11, ≥20 ммасс.ед./мл для HPV-16, и ≥24 ммасс.ед./мл для HPV-18.

Количество и соотношение исходного уровня HPV-серонегативных субъектов, у которых достигались предварительно заданные критерии для серологической конверсии для 4 HPV антигенов с соответствующим 95% Д.Ин. в каждой группе, процентные разницы (Группа 1 - Группа 3) в соотношении, и 95% Д.Ин. разниц представлены в таблице В примера 8 для исходного уровня HPV-серонегативной оцениваемое на иммуногенность популяции.

Результаты: Предварительно заданные не меньшей эффективности критерии, установленные на 1,5 раза (0,67 нижний предел 95% Д.Ин. для GMR) были определены для 3 из 4 HPV антигенов (не HPV-18) и обоих MnB исследуемых штаммов (Таблица А). Индексы сероконверсии в группах 1 и 3 составляли ≥99% для всех HPV антигенов (Таблица В). Большая местная реактогенность происходила после rLP2086 по сравнению с физиологическим раствором, но не повышалась с последней дозой; боль в месте инъекции была наиболее распространенной местной реакцией. Системные осложнения во всех 3 группах, как правило, были легкими и умеренными по тяжести.

Для оцениваемой на иммуногенность популяции, GMT антител к 4 HPV антигенам через 1 месяц после GARDASIL дозы при вакцинации 3 для группы 1 и группы 3 были следующими: 451,8 и 550,3, соответственно (HPV-6); 892,9 и 1084,3, соответственно (HPV-11); 3695,4 и 4763,4, соответственно (HPV-16); и 744,0 и 1047,4, соответственно (HPV-18). GMR группы 1 - группы 3 через 1 месяц после GARDASIL дозы при вакцинации 3 составляли 0,82 для HPV-6 (95% Д.Ин.: 0,72, 0,94), 0,82 для HPV-11 (95% Д.Ин.: 0,74, 0,91), 0,78 для HPV-16 (95% Д.Ин.: 0,68, 0,88), и 0,71 для HPV-18 (95% Д.Ин.: 0,62, 0,81). Таким образом, нижние пределы 2-стороннего 95% Д.Ин. для анти-HPV GMR для группы 1 по сравнению с группой 3 составляли 0,72 для HPV-6, 0,74 для HPV-11, 0,68 для HPV-16, и 0,62 для HPV-18. 1,5 разовый критерий 0,67 (нижний предел 2-стороннего 95% Д.Ин. GMR) обеспечивался для всех HPV антигенов, кроме HPV-18, который имел более низкую границу 95% Д.Ин. 0,62.

GMR группы с двухвалентной rLP2086 + GARDASIL к группе с двухвалентной rLP2086 + физиологическим раствором через 1 месяц после вакцинации 3 дозой двухвалентной rLP2086 составляли 0,92 для А22 (95% Д.Ин.: 0,85, 1,00), и 0,92 для В24 (95% Д.Ин.: 0,84, 1,01). Нижние пределы 2-стороннего 95% Д.Ин. для GMR hSBA для группы 1 по сравнению с группой 2 составляли 0,85 для А22 и 0,84 для В24, оба из которых являются большими, чем 0,67 и тем самым обеспечивали не меньшую границу эффективности 1,5 раза.

Данные от введения двухвалентной rLP2086 + GARDASIL (Группа 1) сравнивали с данными от введения двухвалентной rLP2086 + физиологического раствора (Группа 2) за счет анализирования титра hSBA 4 кратных показателей ответа для 2 первичных MnB штаммов (А22 и В24) через 1 месяц после вакцинации 3. Соотношения субъектов, у которых достигался ≥4-кратное повышение титра hSBA от исходного уровня через 1 месяц после вакцинации 3 для 2 первичных MnB штаммов, были определены как для субъектов группы 1, которые получали двухвалентную rLP2086 + GARDASIL, так и для группы 2 субъектов, которые получали двухвалентную rLP2086 + физиологический раствор. Касательно субъектов в группе 1, 85,3% продемонстрировали ≥4 кратное повышение титров hSBA против В24. Касательно субъектов в группе 2, 86,4% продемонстрировали ≥4 кратное повышение титров hSBA против А22, и 84,8% продемонстрировали ≥4 кратное повышение титров hSBA против В24.

Отличия в соотношении респондентов между группой 1 и группой 2 через 1 месяц после вакцинации 3 составляли - 1,1% для А22 (95% Д.Ин.: -4,6, 2,3) и -1,4% для В24 (95% Д.Ин.: -5,1, 2,3). Отличия в 4 раза по показателям ответа были очень близкими значению 1%, с более низкиими границами 95% Д.Ин., где разница соотношения составляла -4,6% А22 и -5,1% В24.

Не меньшая эффективность критериев двухвалентной rLP2086 + GARDASIL по сравнению с физиологическим раствором + GARDASIL или по сравнению с двухвалентной rLP2086 + физиологический раствор требовала, чтобы нижний предел 2-стороннего 95% Д.Ин. для GMR для антител к HPV для всех 4 HPV антигенов (HPV-6, HPV-11, HPV-16, и HPV-18) и для титров hSBA с использованием 2 первичных MnB исследуемых штаммов (А22 и В24) через 1 месяц после вакцинации 3 был больше чем 0,67. Этот предварительно заданный критерий был установлен для обоих MnB исследуемых штаммов и, по меньшей мере, 3 из 4 HPV антигенов. Для HPV-18, нижний предел 2-стороннего Д.Ин. для GMR был несколько ниже предварительно заданного порога 0,67, при 0,62.

В 4 раза возросшие ответы к 2 первичным MnB исследуемым штаммам (А22 и В24) были аналогичными (находились в диапазоне от 83,4% до 86,4%) между группой, которая получала двухвалентную rLP2086 + GARDASIL и группой, которая получала двухвалентную rLP2086 + физиологический раствор.

Соотношения субъектов в группах 1 и 2 перед вакцинацией (то есть, перед вакцинацией 1) с титрами hSBA ≥1:4 составляли 15,2% и 18,8%, соответственно, для штамма А22; 10,4% и 10,5%, соответственно, для штамма А56; 6,1% и 8,4%, соответственно, для штамма В24; и 1,7% и 3,2%, соответственно для штамма В44. Кроме того, соотношения субъектов в группах 2 и 1 перед вакцинацией с титрами hSBA ≥1:16 составляли 13,7% и 16,4%, соответственно для штамма А22; 9,0% и 9,1%, соответственно, для штамма А56; 4,1% и 5,4%, соответственно, для штамма В24; и 1,2% и 2,1%, соответственно, для штамма В44.

В группе 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:4 через 1 месяц после вакцинации 2 составляло 86,3% для А22, 98,7% для А56, 77,1% для В24, и 60,1% для В44. Через один месяц после вакцинации 3, соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:4 составляло 96,4% для А22, 99,4% для А56, 92,8% для В24, и 86,5% для В44. В группе 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:4 через 1 месяц после вакцинации 2 составляло 83,8% для А22, 97,8% для А56, 71,9% для В24, и 57,7% для В44. Через один месяц после вакцинации 3, соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:4 составляло 94,3% для А22, 99,1% для А56, 91,1% для В24, и 84,4% для В44.

В группе 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:16 через 1 месяц после вакцинации 2 составляло 85,8% для А22, 98,4% для А56, 68,8% для В24, и 49,9% для В44. Через один месяц после вакцинации 3, соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:16 составляло 96,3% для А22, 99,4% для А56, 89,2% для В24, и 82,4% для В44. В группе 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:16 через 1 месяц после вакцинации 2 составляло 83,0% для А22, 97,2% для А56, 65,2% для В24, и 46,4% для В44. Через один месяц после вакцинации 3, соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:16 составляло 94,0% для А22, 98,9% для А56, 86,3% для В24, и 78,0% для В44.

Как для группы 1, так и группы 2, достигалось высокое соотношение субъектов с титром hSBA ≥1:16 или больше после 2 или 3 дозы двухвалентной rLP2086, в тоже время большинство субъектов не имели никакого измеряемого титра hSBA к какому-либо из первичных MnB исследуемых штаммов перед вакцинацией при посещении 1.

Для исходного уровня HPV-серонегативной оцениваемой на иммуногенность популяции, соотношение субъектов, у которых достигались предварительно заданные критерии для HPV серологической конверсии для HPV антигенов через 1 месяц после GARDASIL дозы при вакцинации 3 для группы - двухвалентная rLP2086 + GARDASIL (Группа 1) и группы - физиологический раствор + GARDASIL (Группа 3) были следующими: HPV-6 (99,4% и 99,3%, соответственно), HPV-11 (99,6% и 99,5%, соответственно), HPV-16 (99,6% и 99,5%, соответственно), и HPV-18 (99,5% и 99,0%, соответственно).

Отличие в соотношении респондентов между группой с двухвалентной rLP2086 + GARDASIL (Группа 1) и группой с физиологическим раствором + GARDASIL (Группа 3) через 1 месяц после GARDASIL дозы составляло 0,1% для HPV-6 (95% Д.Ин.; -0,9, 1,5), 0,1% для HPV-11 (95% Д.Ин.: -0,7, 1,3), 0,1% для HPV-16 (95% Д.Ин.; -0,7, 1,3), и 0,5% для HPV-18 (95% Д.Ин.; -0,6, 1,9).

Для группы с двухвалентной rLP2086 + GARDASIL (Группа 1) и группы с физиологическим раствором + GARDASIL (Группа 3), отличия индекса сероконверсии находились в пределах 0,1% и 0,5% по всем 4 HPV антигенам и индексы сероконверсии были очень похожими по всех группах, с больше, чем 99% сероконвертированием субъектов для всех 4 HPV антигенов.

В качестве дополнительной оценки, двухвалентную rLP2086 + GARDASIL (Группа 1) сравнивали с двухвалентной rLP2086 + физиологический раствор (Группа 2), используя анализ показателей 4 кратного ответа титра hSBA для 2 первичных MnB штаммов (А22 и В24) через 1 месяц после вакцинации 3. Соотношения субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA больше чем в ≥4 раза от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 3 для 2 первичных MnB штаммов являются следующими: Для субъектов в группе 1, 85,3% продемонстрировали возрастание в ≥4 раза титров hSBA против исследуемого штамма А22, и 83,4% продемонстрировали возрастание в ≥4 раза титров hSBA против исследуемого штамма В24. Для субъектов в группе 2, 86,4% продемонстрировали возрастание в ≥4 раза титров hSBA против исследуемого штамма А22 и 84,8% продемонстрировали возрастание в ≥4 раза титров hSBA против исследуемого штамма В24.

Отличие в соотношении респондентов между группой 1 и группой 2 через 1 месяц после вакцинации 3 составляло -1,1% для А22 (95% Д.Ин.: -4,6, 2,3) и -1,4% для В24 (95% Д.Ин.: -5,1, 2,3). Отличия 4 кратного показателя ответа все были близки значению 1%, с более низкими границами 95% Д.Ин., где отличие в соотношении составляло -4,6% (А22) и -5,1% (В24).

Иммунные ответы к двухвалентной rLP2086. Другой задачей данного исследования было описать иммунный ответ, если измерять с помощью hSBA, выполненного с 4 первичными MnB исследуемыми штаммами, 2 экспрессирующими белки LP2086 подсемейства А (А22 и А56) и 2 экспрессирующими белки LP2086 подсемейства В (В24 и В44), которые измеряли через 1 месяц после второго посещения (посещение 3) и третьей (посещение 5) вакцинации двухвалентной rLP2086.

Один из конечных критериев оценки для данной задачи представлял собой соотношение субъектов с титром hSBAs ≥ LLOQ через 1 месяц после вакцинации 2 (Посещение 3) и через 1 месяц после вакцинации 3 (Посещение 5) для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов. Оценивалось соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов для оцениваемой на иммуногенность популяции. LLOQ для А22 представлял собой титр hSBA равный 1:16, тогда как LLOQ для всех других MnB исследуемых штаммов представлял собой титр hSBA равный 1:8.

Для группы 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ при исходном уровне (перед вакцинацией 1) составляло 16,4% для А22, 9,3% для А56, 6,9% для В24, и 2,5% для В44. Для группы 2, соотношения субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥ LLOQ через 1 месяц после вакцинации 2 и через 1 месяц после вакцинации 3 составляли 85,8% и 96,3%, соответственно, для А22; 98,5% и 99,4%, соответственно, для А56; 74,2% и 92,6%, соответственно для В24; и 57,1% и 85,7%, соответственно, для В44.

Для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), соотношение субъектов с титром hSBA ≥ LLOQ при исходном уровне (перед вакцинацией 1) составляло 13,7% для А22, 9,2% для А56, 5,1% для В24, и 1,4% для В44. Для группы 1, соотношения субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥ LLOQ через 1 месяц после вакцинации 2 и через 1 месяц после вакцинации 3, составляли 83,0% и 94,0%, соответственно, для А22; 97,5% и 98,9%, соответственно, для А56; 70,6% и 90,5%, соответственно для В24; и 54,5% и 82,7%, соответственно, для В44.

Значительные ответы hSBA к 4 первичным MnB исследуемым штаммам наблюдались среди как группы 1, так и группы 2, субъектов через 1 месяц после вакцинации 2, с наблюдаемыми дополнительными увеличениями через 1 месяц после вакцинации 3.

Оценивалось соотношение субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥4 для каждого из 4 первичных MnB исследуемых штаммов, и соотношения субъектов, у которых достигался комбинированный ответ для оцениваемой на иммуногенность популяции. Соотношения субъектов с наблюдаемым титром hSBA ≥ LLOQ для всех 4 MnB штаммов, комбинированных на исходном уровне (перед вакцинацией 1), были аналогичными между группой 1 (0,3%) и группой 2 (0,7%).

Для группы 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), соотношение субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥4 от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 3, составляло 86,4% для А22, 95,3% для А56, 84,8% для В24, и 80,7% для В44, и 83,9% субъектов достигали комбинированный ответ hSBA (hSBA ≥ LLOQ для всех 4 скомбинированных первичных штаммов). Через 1 месяц после вакцинации 2, соотношение субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥4, от исходного уровня составляло 74,2% для А22, 92,6% для А56, 63,4% для В24, и 47,4% для В44, и 51,9% субъектов достигали комбинированный ответ hSBA.

Для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), соотношение субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥4 от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 3, составляло 86,4% для А22, 95,3% для А56, 84,8% для В24, и 80,7% для В44, и 83,9% субъектов достигали комбинированный ответ hSBA (hSBA ≥ LLOQ для всех 4 скомбинированных первичных штаммов). Через 1 месяц после вакцинации 2, соотношение субъектов у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥4 от исходного уровня, составляло 74,2% для А22, 92,6% для А56, 63,4% для В24, и 47,4% для В44, и 51,9% субъектов достигали комбинированный ответ hSBA.

Дополнительный кратный ответ hSBA. Другие конечные критерии оценки представляли собой соотношение субъектов, у которых достигался, по меньшей мере, 2 кратное и 3 кратное возрастания титра hSBA от исходного уровня при каждом отборе образца крови перед вакцинацией при посещении для каждого из 4 первичных MnB штаммом. Отмечалось, что LLOQ для А22 был титр hSBA равный 1:16, тогда как LLOQ для всех других MnB исследуемых штаммов представлял собой титр hSBA, равный 1:8.

Соотношение субъектов, у которых достигалось возрастание кратностью ≥2 титра hSBA от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 2 для группы 1 и группы 2 для MnB штаммов, составляло 77,3% и 81,1%, соответственно, для А22; 94,4% и 95,3%, соответственно, для А56; 63,0% и 66,0%, соответственно, для В24; и 46,1% и 48,6%, соответственно, для В44. Соотношения субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥2 от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 3 для группы 1 и группы 2 для MnB штаммов, составляли 90,2% и 92,8%, соответственно, для А22; 97,2% и 97,9%, соответственно, для А56; 84,6% и 87,2%, соответственно, для В24; и 77,7% и 81,7%, соответственно, для В44.

Соотношения субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥3 от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 2 для группы 1 и группы 2 для MnB штаммов, составляли 73,1% и 74,2%, соответственно, для А22; 92,5% и 92,6%, соответственно, для А56; 61,3% и 63,4%, соответственно, для В24; и 45,7% и 47,4%, соответственно, для В44. Соотношения субъектов, у которых достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥3 от исходного уровня за 1 месяц после вакцинации 3 для группы 1 и группы 2 для MnB штаммов, составляли 85,3% и 86,4%, соответственно, для А22; 95,0% и 95,3%, соответственно, для А56; 83,4% и 84,8%, соответственно, для В24; и 77,0% и 80,7%, соответственно, для В44.

Подводя итог, следует отметить, что описательные конечные критерии оценки при задачах, преобладающее большинство субъектов достигали титр hSBA ≥ LLOQ как для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), так и группы 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор) для всех 4 первичных MnB исследуемых штаммов, тогда как только очень небольшее соотношение субъектов имело измеряемые титры hSBA ≥ LLOQ при исходном уровне (перед вакцинацией, посещение 1). Значительные иммунные ответы с 4 MnB штаммами наблюдались через 1 месяц после вакцинации 2, с дополнительными возрастаниями, наблюдаемыми через 1 месяц после вакцинации 3 как для группы 1 и группы 2 субъектов. Данный вывод подтверждался путем соотношения субъектов с титром hSBA ≥1:16 после 3 дозы, наблюдаемые GMT достигались после 2 дозы и после 3 дозы в обеих группах, и RCDC для 4 первичных MnB исследуемых штаммов.

Как для группы 1, так и группы 2, высокое соотношение субъектов достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥4 для каждого из первичных MnB исследуемых штаммов и комбинированный ответ hSBA ≥ LLOQ для всех 4 первичных MnB штаммов после третьей вакцинации исследования.

Кроме того, преобладающее большинство субъектов достигалось возрастание титра hSBA кратностью ≥3 и возрастание титра hSBA кратностью ≥2 для 4 первичных MnB штаммов во всей точках времени отбора образцов как для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), так и группы 2 (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор). Соотношение субъектов с результатами, устанавливающими данные критерии, было выше после 3 вакцинации по сравнению с 2 вакцинациями.

Данные результаты подтверждают доказательства того, что иммунный ответ к двухвалентной rLP2086, когда совместные введенные с HPV вакциной, GARDASIL, дает сильный иммунный ответ, который является сопоставимым с иммунным ответом к двухвалентной rLP2086 + физиологический раствор.

GMT HPV. Таблица В примера 8 представляет GMT и соответствующей Д.Ин. для каждого из 4 HPV антигенов через 1 месяц после вакцинации 3 для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL) и группы 3 (физиологический раствор + GARDASIL) в оцениваемой на иммуногенность популяции.

Для группы 3, GMT HPV при исходном уровне (перед вакцинацией 1) и через 1 месяц после вакцинации 3 составляли 6,0 и 550,3, соответственно, для HPV-6; 4,3 и 1084,3, соответственно, для HPV-11; 6,1 и 4763,4, соответственно, для HPV-16; и 5,3 и 1047,4, соответственно, для HPV-18. Для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), GMT HPV при исходном уровне (перед вакцинацией 1) и через 1 месяц после вакцинации 3 составляли 5,8 и 451,8, соответственно для HPV-6; 4,2 и 892,9, соответственно, для HPV-11; 5,8 и 3695,4, соответственно, для HPV-16; и 5,2 и 744,0, соответственно, для HPV-18. В общем, GMT были количественно выше для группы 3 по сравнению с группой 1. Обратные интегральные кривые распределения (RCDC), показывающие распределение титров для HPV-6, HPV-11, HPV-16, и HPV-18 оценивались для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL) и группы 3 (физиологический раствор + GARDASIL) во все точки времени отбора проб для оцениваемой на иммуногенность популяции. RCDC показали сильные иммунные ответы среди субъектов после вакцинации 3 как для группы 1, так и группы 3.

Краткое описание иммунного ответа к GARDASIL. GMT к HPV антигенам были количественно выше для группы 3 (физиологический раствор + GARDASIL) по сравнению с группой 1 (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL), и наблюдаемые GMT HPV после вакцинации 3 служили признаком сильного иммунного ответа для обеих групп. RCDC также подтверждали сильные иммунные ответы после вакцинации 3 как для группы 1, так и группы 3. Это также подтверждалось соотношением субъектов с сероположительным статусом для 4 HPV антигенов, которое составляло >99% через 1 месяц после вакцинации 3 для обеих групп. Подгруппа более юного возраста имела более высокие GMT HPV в группе 3 (физиологический раствор + GARDASIL), чем подгруппа более старшего возраста. Данное отличие сохранялось, когда GARDASIL вводили совместно с двухвалентной rLP2086.

Выводы об иммуногенности. Не меньшая эффективность критериев двухвалентной rLP2086 + GARDASIL по сравнению с физиологический раствор + GARDASIL или по сравнению с двухвалентной rLP2086 + физиологический раствор требовала, чтобы нижний предел 2-стороннего 95% Д.Ин. для средних геометрических соотношений титра (GMR) для антител к HPV для всех 4 HPV антигенов (HPV-6, HPV-11, HPV-16, и HPV-18) и для титров hSBA с использованием 2 первичных MnB исследуемых штаммов (А22 и В24) через 1 месяц после вакцинации 3, был больше чем 0,67. Данный предварительно заданный порог был установлен для обоих MnB штаммов и 3 из 4 HPV антигенов. Для HPV-18, нижний предел 2-стороннего 95% Д.Ин. для GMR был несколько ниже предварительно заданного порога 0,67, при 0,62.

Серологическая конверсия для всех 4 HPV антигенов достигалась 99% или больше субъектов для групп, которые получали GARDASIL совместно с двухвалентной rLP2086 или с физиологическим раствором. RCDC для всех 4 HPV антигенов показывает, что преобладающее большинство субъектов достигали ответ выше порога серологической конверсии через 1 месяц после вакцинации 3. Сильные GMT по сравнению с исходным уровнем наблюдались для обеих групп, которые получали GARDASIL.

Ответы с 4 кратным увеличением к 2 первичным MnB исследуемым штаммом (А22 и В24) были аналогичными (находились в диапазоне от 83,4% до 86,4%) между группой, которая получала двухвалентную rLP2086 + GARDASIL (85,3% и 83,4%, соответственно) и группой, которая получала двухвалентную rLP2086 + физиологический раствор (86,4% и 84,8%, соответственно).

Дополнительные описательные анализы ответа к двухвалентной rLP2086 выполняли с использованием 4 первичных MnB исследуемых штаммов (А22, А56, В24, и В44). Достигалось высокое соотношение субъектов с возрастанием титра hSBA кратностью ≥4 и комбинированный ответ (все 4 первичные MnB исследуемые штаммы и такое же определение конечных критериев оценки иммуногенности/эффективности, как использовали в фазе 3 клинической программы) для оцениваемой на иммуногенность популяции для обеих групп, которые получали двухвалентную rLP2086, или совместно с GARDASIL (двухвалентная rLP2086 + GARDASIL) или с физиологическим раствором (двухвалентная rLP2086 + физиологический раствор), через 1 месяц после вакцинации 2 или 3. Данные ответы являются значительно более высокими, чем титр hSBA ≥1:4, который продемонстрировал, что коррелирует с защитой против менингококкового заболевания, включающего заболевание серологической группы В. Данные результаты также показывают и подтверждают доказательство сильного иммунного ответа к двухвалентной rLP2086, которую вводили или с физиологическим раствором, или совместно с GARDASIL.

Выводы: Данные показывают, что сильные иммунные ответы к обеим вакцинам генерировались после совместного введения rLP2086 + HPV4. Предварительно заданные критерии не меньшей эффективности были установлены для 5 из 6 антигенов. Хотя GMR к HPV-18 близко пропускали критерии не меньшей эффективности, высокое количественное отношение респондентов (≥99%) показывает клиническую эффективность, которая, как ожидается, сохраняется после совместного введения. Двухвалентная rLP2086 хорошо переносилась и вызывала сильный иммунный ответ к исследуемым штаммам, экспрессирующим fHBP гетерологичный к данным в вакцине.

ПРИМЕР 9: ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДВУХВАЛЕНТНОЙ RLP2086 ВАКЦИНЫ

Эффективность двухвалентной rLP2086 предполагалась с использованием hSBA ответов, как суррогат эффективности и демонстрации, бактерицидных антительных ответов сыворотки на инвазивные штаммы N. meningitidis серологической группы В (MnB).

Четыре MnB штамма, типичные представители штаммов, вызывающих инвазивное менингококковое заболевание (IMD) использовали в оценивании. Каждый исследуемый штамм MnB экспрессирует вариант fHBP белка (А22, А56, В24 или В44), который является гетерологичным (отличным) от компонентов вакцины (А05 и В01).

Эффективность двухвалентной rLP2086 оценивали в 3 рандомизированном контролируемом фазы II исследовании, которое проводилось на 4459 подростках в возрасте от 11 до 18 лет в США и Европе. Смотри также пример 6. Всего 2293 получали, по меньшей мере, 1 дозу 120 мкг двухвалентной rLP2086 согласно режиму вакцинации в 0-, 2-, и 6-месяц. Эффективность оценивали путем оценивания иммунных ответов hSBA у субъектов, вакцинированных двухвалентной rLP2086.

Эффективность предполагали с использованием 5 совместных первичных конечных критериев оценки иммуногенности. Для 4 из 5 совместных первичных конечных критериев оценки, предварительно указанные соотношения субъектов должны достигать 4 кратных повышений титра hSBA к каждому из 4 MnB исследуемых штаммов после 3 дозы двухвалентной rLP2086. Пятый совместный первичный конечный критерий оценки представлял собой комбинированный конечный критерий оценки, требующий, чтобы каждый ответ предварительно заданного высокого соотношения субъектов по всем 4 hSBA с первичными MnB исследуемыми штаммами после 3 дозы двухвалентной rLP2086. Иммунный ответ также оценивался на основе соотношения субъектов, у которых достигался титр hSBA ≥ нижнего предела количественного определения (LLOQ) через 1 месяц после третьей дозы вакцины. LLOQ определяется как самое низкое количество антитела в образце, которое может измеряться.

Исследование 1 (описанное в примере 7 и примере 8) представляло собой фазу II, рандомизированного, контролируемое по активному препарату, с маскированием данных для наблюдателя, многоцентровое исследование, в котором 2499 субъектов из США, в возрасте от 11 до 17 лет, были рандомизированно разделены (в соотношении 2:2:1) в 1 из 3 групп: Группа 1 получала двухвалентную rLP2086 + HPV4, Группа 2 получала двухвалентную rLP2086 + физиологический раствор, и Группа 3 получала физиологический раствор + HPV4. Все вакцинации проводили с режимом в 0-, 2-, и 6-месяц.

Исследование 2 (описанное в примере 4) представляло собой фазу II, рандомизированное, плацебо-контролируемое, простое слепое исследование, в котором 753 европейских субъектов, в возрасте от 11 до 18 лет, были рандомизированно разделены в соотношении 1:1 на 2 группы: Группа 1 получала двухвалентную rLP2086 в 0-, 2-, и 6-месяц и dTaP-IPV (дифтерии, столбняк, ацеллюлярный коклюш, инактивированный вирус полиомиелита) в месяц 0. Группа 2 получала физиологический раствор в 0-, 2-, и 6-месяц и dTaP-IPV в месяц 0.

Исследование 3 (описанное в примере 5) представляло собой фазу II, рандомизированное, плацебо-контролируемое, простое слепое, многоцентровое исследование, в котором 1713 европейских субъектов, в возрасте от 11 до 18 лет, были рандомизированно разделены в соотношении 3:3:3:2:1 на 5 групп. Субъекты получали 2 или 3 дозы двухвалентной rLP2086, которую вводили в 0-, 1-, и 6- месяц режима (Группа 1); в 0-, 2-, и 6-месяц режима (Группа 2); в 0- и 6-месяц режима (Группа 3); в 0- и 2-месяц режима (Группа 4); или в 0- и 4-месяц режима (Группа 5). Инъекции физиологического раствора (1 или 2 дозы в зависимости от группы) вводили в каждой группе для поддержания слепого исследования.

Результаты исследований 1, 2, и 3 среди субъектов, которые получали серии из 3-доз двухвалентной rLP2086 в 0-, 2-, и 6-месяц описываются выше в соответствующих примерах 4-8. Оценка показателей 4 кратного и комбинированного ответа были экспериментальными конечными критериями оценки для всех исследований. Показатели 4 кратного ответа показали, что более низкие границы 95% доверительного интервала (Д.Ин.) для всех 4 конечных критериев оценки были аналогичными среди 3 исследований и последовательно устанавливали пороговые пределы для конечных критериев оценки фазы III. Соотношение субъектов, у которых достигался hSBA титр ≥ LLOQ, был аналогичным по 3 исследованиям.

На основе данных hSBA, полученных после 2 введений вакцины, которые давали 1 или 2 месяцами отдельно, 2 дозы вакцины, введенные в течение данных интервалов, могут обеспечить защиту индивидуумам при повышении риска, благодаря эффективному воздействию в случае менингококкового заболевания серологической группы В. Ответы, наблюдаемые после введений 2 вакцины, которую давали 1 или 2 месяца по частям показали, что соотношение субъектов, у которых экспрессировались уровни hSBA равные или выше значений LLOQ для каждого из 4 первичных исследуемых штаммов (смотри исследование 1 - результаты для группы 1 и группы 2; смотри исследование 2 - результаты для группы 1; смотри исследование 3 - результаты для группы 2). Третья доза вакцины, которую вводили в 6 месяц, может давать вакцина-опосредованную защиту.

Совместное введение вакцины. Исследование 1 (описанное в примере 7 и примере 8) оценивало совместное использование двухвалентной rLP2086 и HPV4 у подростков США. Конечные критерии оценки исследования включали оценку не меньшей эффективности иммунного ответа для четырех HPV4 антигенов (на основе среднего геометрического титра [GMT]) и для двухвалентной rLP2086 (на основе hSBA с использованием двух MnB исследуемых штаммов [вариантов А22 и В24]) через 1 месяц после третьей вакцинация. HPV4 иммунный ответ также оценивали с помощью серологической конверсии для каждого из 4 HPV антигенов.

Исследование 1 показывает сравнение средних геометрических титров (GMT) антител к HPV антигенам для группы 1 (двухвалентная rLP2086 + HPV4) и группа 3 (Физиологический раствор + HPV4), с их соответствующим GMT соотношением (GMR) между группой 1 и группой 3 и 2-сторонним 95% Д.Ин. соотношений. Исследование 1 также предусматривает сравнение GMT hSBA к 2 первичным MnB исследуемым штаммам для группы 1 и группы 2 с их соответствующими GMR между группой 1 и группой 2 и 2-сторонним 95% Д.Ин. соотношений. Критерий для границы не меньшей эффективности был 1,5 кратным, что соответствует значению 0,67 для нижнего предела 2-стороннего 95% Д.Ин. GMR. 1,5 кратный критерий 0,67 был установлен для всех MnB исследуемых штаммов и HPV антигенов, за исключением для HPV-18, который имел более низкую границу 95% доверительного интервала (Д.Ин.) 0,62. Хотя, ответ к HPV-18 не соответствовал заранее заданному критерию не меньшей эффективности, разница была незначительной. В отдельном анализе, ≥99% субъектов, сероконвертированных ко всем 4 HPV антигенам в обеих группах - физиологический раствор + HPV4 и двухвалентная rLP2086 + HPV4.

ПРИМЕР 10:

Двухвалентная rLP2086 вырабатывает антитела у индивидуумов, которые обеспечивают широкий охват против MnB штаммов, экспрессирующих превалирующие и связанные со вспышками fHBP варианты

Бактерицидные антитела, измеренные в сывороточных бактерицидных анализах с использованием комплемента человека (hSBA), коррелировали с защитой от менингококового заболевания и ответами hSBA использовали обычно, как суррогаты эффективности вакцины. Общие эпидемиологические исследования fHBP разнообразия показали, что ~80% менингококкового заболевания вызывается штаммами, которые экспрессируют один из 10 превалирующих fHBP вариантов.

Способы: Оценивали hSBA ответы к штаммам серологической группы В Neisseria meningitidis (MnB), экспрессирующим 10 наиболее превалирующих fHBP вариантов в США и Европе (В24, В16, В44, А22, В03, В09, А12, А19, А05 и А07) у отдельных субъектов-людей, иммунизированных двухвалентной rLP2086. MnB штаммы, экспрессирующие данные десять наиболее превалирующих вариантов представляют широту разнообразия fHBP, в том числе 5 из 6 основных подгрупп fHBP, которые являются типичными представителями >98% и 97% штаммов (по подгруппе) в пуле штамма MnB SBA, и подмножество пула штамма MnB SBA США, соответственно. Двадцать три MnB исследуемых штамма получали из пула штамма MnB SBA компании Pfizer (N=1263), который представляет штаммы, систематически собранные из США и Европы между годами 2000 и 2006. Кроме того, изоляты от недавних вспышек MnB заболеваний были включены в анализ. Соответствующие сыворотки перед вакцинацией и после вакцинации (после дозы 2 и после дозы 3) были получены случайным образом от подростков и молодых взрослых пациентов, включенных в клинические исследования В1971005, В1971012 или В1971003.

Для того, чтобы обеспечить дополнительную информацию, поддерживающую потенциальное покрытие, обеспечиваемой с помощью вакцинации двухвалентной rLP2086, hSBA выполняли с вспыхнувшими штаммами и образцами сыворотки от девяти субъектов, иммунизированных двухвалентной rLP2086 (клиническое исследование В1971012, описанное в примере 5 и примере 6. Субъекты (в возрасте от 11 до <19 лет) получили 3 дозы двухвалентной rLP2086 в 0, 2 и 6 месяц. Для того, чтобы обеспечить консервативную оценку hSBA девять субъектов были выбраны по способу без самовозврата из набора субъектов без какого-либо исходного уровня hSBA активности против первичных MnB исследуемых штаммов. Исследовали два из клональных штаммов вспышки Принстонского университета (РМВ5021 и РМВ5025) и двух штаммов вспышки UCSB (по одному от каждого из двух генетических кластеров, РМВ4478 и РМВ4479.

Генетическая характеристика клональных штаммов вспышки Принстонского университета является следующей: данные свидетельствуют о том, что штаммы вспышки Принстонского университета являются клональными. Каждый из штаммов был типичным как СС41/44 (ST 409) и экспрессированным вариантом fHBP В153 (SEQ ID NO: 6). Штаммы имели одинаковые назначения аллелей для NHBA (2), porA (подтип Р1,5-1,2-2) и porB (3-82), все были нулевые по nadA, и все имели один и тот же профиль импульсного поля гель-электрофореза (PFGE) (429).

Генетическая характеристика штаммов вспышки 2013 Калифорнийского университета в Санта-Барбаре является следующей: UCSB штаммы были типичным как СС32(ЕТ5; ST32), экспрессированным fHBP вариантом В24, и являются связанными с клоном Орегон, который был связан с гиперэндемической серологической группой В заболевания с 1993. В отличие от Принстонской группы вспышки штаммов, UCSB штаммы генетически сегрегированные в два различные кластеры, дифференцированные по их профилю PFGE (468 или 467) и porB типу (3-461 или 3-24). Штаммы имели одинаковые назначения аллелей для NadА (1), NHBA (5), porA (подтип Р1.7, 16-20).

hSBA титры при исходном уровне для всех субъектов и всех штаммов вспышки были <4, показывая, что субъекты не имели никаких защитных антител к какому-либо из штаммов вспышки перед иммунизацией двухвалентной rLP2086.

Результаты: Все 23 MnB штаммы были чувствительны к hSBA с сыворотками от отдельных субъектов, иммунизированных двухвалентной rLP2086. Штаммы, представляющие все 10 превалирующих fHBP вариантов, а также дополнительные штаммы были все убиты hSBA. Исходный уровень hSBA показатели серологической защиты (соотношения субъектов, у которых достигались титры hSBA ≥1:4), как правило, были низкими. Более низкие показатели серологической защиты, наблюдаемые у субъектов перед иммунизацией двухвалентной rLP2086, иллюстрируют уязвимость невакцинированных подростков или молодого взрослого населения к заболеванию MnB. Однако показатели сильной серологической защиты наблюдались у подростков и молодых взрослых в сыворотке после вакцинации: показатели серологической защиты >70% наблюдались для 83% данных штаммов в зависимости от исследуемых MnB штаммов и популяции. Показатели серологической защиты после вакцинации для штаммов, экспрессирующих большинство fHBP вариантов В24 и А22, превалирующего подсемейства А и В, находились в диапазоне от 81,0% до 100%, и от 77,8% до 100% для штаммов недавних вспышек, экспрессирующих fHBP варианты В24 и В153. Кроме того, сильные ответы после дозы 2 (по сравнению с исходным уровнем) ко всем штаммам вспышки наблюдались у данных субъектов, которые находились в диапазоне от 56 до 89% в зависимости от штамма вспышки, которые использовали в hSBA. В противоположность этому, серозащитные показатели перед вакцинацией были низкими, или не обнаруживались, для недавних штаммов вспышки США. hSBA ответы к штаммам вспышки Принстонского университета и UCSB показаны на фиг. 2.

Выводы: Двухвалентная rLP2086 вызывает сильный серозащитные hSBA ответы у индивидуумов к различным инвазивным MnB штаммам, экспрессирующим превалирующий fHBP в США и Европе, а также вновь возникающим вариантам (B153)(SEQ ID NO: 6). Соотношение субъектов, которые показали серозащитный ответ после иммунизации двухвалентной rLP2086, значительно превышало количество субъектов, которые имели серологическую защиту на исходном уровне. Эти данные подтверждают, что двухвалентная rLP2086 имеет потенциал, чтобы обеспечить широкую защиту подростков и молодых взрослых от инвазивного менингококкового заболевания серологической группы В, включая заболевание от недавних вспышек.

> B153(SEQ ID NO: 6)

1. Иммуногенная композиция для индуцирования бактериального иммунного ответа у человека против штамма подсемейства А серологической группы В Neisseria meningitidis и против штамма подсемейства В серологической группы В Neisseria meningitidis, содержащая эффективное количество

a) первого липидированного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, где первый липидированный полипептид является N-терминально липидированным; и

b) второго липидированного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, где второй липидированный полипептид является N-терминально липидированным,

для одновременного введения вместе с иммуногенной композицией против вируса папилломы человека.

2. Иммуногенная композиция по п. 1 для индуцирования бактериального иммунного ответа против какого-либо одного из типов вируса папилломы человека 6, 11, 16, 18, или какой-либо их комбинации.

3. Иммуногенная композиция для индуцирования бактериального иммунного ответа у человека против штамма подсемейства А серологической группы В Neisseria meningitidis и против штамма подсемейства В серологической группы В Neisseria meningitidis, содержащая эффективное количество

a) первого липидированного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 1, где первый липидированный полипептид является N-терминально липидированным; и

b) второго липидированного полипептида, содержащего аминокислотную последовательность, представленную SEQ ID NO: 2, где второй липидированный полипептид является N-терминально липидированным,

для одновременного введения вместе с иммуногенной композицией против дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита.

4. Иммуногенная композиция по п. 3 для индуцирования бактериального иммунного ответа у человека против какого-либо одного из дифтерии, столбняка, коклюша и полиомиелита или какой-либо их комбинации.