Фталазиновые производные

Изобретение относится к соединениям формулы I

в которой R¹ означает Н, Hal или СН₃, X означает Ar или Сус, Ar означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен Hal, NO₂, CN, А и/или [C(R²)₂]_pOR², R² означает Н или А, Сус означает циклоалкил, который содержит 3, 4, 5, 6 или 7 С-атомов, А означает неразветвленный или разветвленный алкил, который содержит 1-6 С-атомов, где 1-5 Н-атомов могут быть заменены на F, Hal означает F, Cl, Br или I, p означает 0, 1, 2, 3 или 4, n означает 1, 2 или 3, и их фармацевтически приемлемым cольватам, солям, включая их смеси во всех соотношениях. Также предложены способ получения соединений формулы I и лекарственные средства. Соединения формулы I являются ингибиторами танкиразы и могут применяться для лечения и/или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления. 4 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 18 пр.

 

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является обнаружение новых соединений, которые обладают ценными свойствами, в частности, таких, которые можно применять для получения лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к хиназолиноновым производным, которые ингибируют активность танкираз (TANK) и поли(ADP-рибоза)полимеразы PARP-1. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению пригодны для лечения заболеваний, таких как злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления. Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения этих соединений, фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, и способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, которые содержат эти соединения.

Ядерный фермент поли(ADP-рибоза) полимераза-1 (PARP-1) является представителем семейства ферментов PARP. Это семейство ферментов роста включает PARP, такие как, например: PARP-1, PARP-2, PARP-3 и Vault-PARP; и танкиразы (TANK), такие как, например: TANK-1 и TANK-2. PARP также обозначается как поли(аденозин5'-дифосфорибоза) полимераза или PARS (поли(ADP-рибоза ) синтетаза).

Полагают, что TANK-1 необходима для полимеризаций связанной с митотическим веретеном поли(ADP-рибозы). Поли(ADP-рибозил)ирующая активность TANK-1 должна быть решающей для точного образования и поддержания биполярности веретена. Кроме того, полагают, что PARP активность TANK-1 необходима для нормального разделения теломер перед анафазой. Интерференция с танкиразной PARP активностью приводит к аберрантному митозу, который вызывает временную остановку клеточного цикла, возможно, вследствие активации контрольной точки веретена, с последующей клеточной гибелью. Таким образом, полагают, что ингибирование танкираз имеет цитотоксическое действие на пролиферируещие опухолевые клетки (WO 2008/107478).

Ингибиторы PARP описаны М. Rouleau и др. в Nature Reviews, том 10, 293-301 в клинических исследованиях злокачественных новообразований (таблица 2, стр. 298).

В соответствии с обзором Horvath и Szabo (Drug News Perspect 20 (3), April 2007, 171-181) в самых последних исследованиях было показано, что PARP ингибиторы усиливают гибель раковых клеток главным образом в связи с их препятствованием репарации ДНК на различных уровнях. В самых последних исследованиях также было показано, что PARP ингибиторы ингибируют ангиогенез, либо путем ингибирования экспрессии фактора роста, либо путем ингибирования индуцированных фактором роста клеточных пролиферативных ответов. Эти данные также могут оказывать влияния на характер противораковых эффектов PARP ингибиторов в vivo.

Также в исследовании Tentori и др. (Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133) было показано, что PARP ингибиторы аннулируют индуцированную VEGF или плацентным фактором роста миграцию и предотвращают образование трубочкообразных сетей в клеточных системах, и повреждают ангиогенез в vivo. В исследовании также показано, что индуцированный фактором роста ангиогенез является дефектным у PARP-1 «knock-out» мышей. Результаты исследования обеспечивают подтверждение для нацеливания PARP на анти-ангиогенез, добавляя новые терапевтические показания в применение PARP ингибиторов при лечении злокачественного новообразования.

Хорошо известно, дефекты в консервативных путях передачи сигналов играют ключевую роль в происхождении и поведении по существу всех злокачественных новообразований (E.A. Fearon, Cancer Cell, том 16, изд. 5, 2009, 366-368). Wnt путь является мишенью для противораковой терапии. Ключевой особенностью Wnt пути является регулированный протеолиз (деградация) β-катенина с помощью комплекса, разрушающего β-катенин. Белки, такие как WTX, АРС или Axin, задействованы в процесс разложения. Правильное разложение β-катенина является важным для избегания несоответствующей активации Wnt пути, которая наблюдается при многих злокачественных новообразованиях. Танкиразы ингибируют активность Axin и, следовательно, ингибируют разложение β-катенина. В результате этого, ингибиторы танкиразы повышают разложение β-катенина. В издании журнала Nature были предложены не только важные новые сведения относительно белков, регулирующих Wnt передачу сигналов, а также дополнительно подтверждается подход антагонизации уровней β-катенина и локализации с помощью небольших молекул (Huang и др., 2009; Nature, том 461, 614-620). Соединение XAV939 ингибирует рост DLD-1 -раковых клеток. Они обнаружили, что XAV9393 блокирует Wnt-стимулированное накопление β-катенина путем повышения уровней белков AXIN1 и AXIN2. В последующей работе авторами было показано, что XAV939 регулирует уровни AXIN посредством ингибирования танкираз 1 и 2 (TNKS1 и TNKS2), которые обе являются членами семейства белков поли(ADP-рибоза) полимеразы (PARP) (S.J. Hsiao и др., Biochimie 90, 2008, 83-92).

Было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением и их соли обладают чрезвычайно ценными фармакологическими свойствами, а также хорошей переносимостью.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I, которые ингибируют танкиразу 1 и 2, к композициям, которые содержат эти соединения, и к способам их применения для лечения заболеваний и осложнений, индуцированных TANK.

Кроме того, соединения формулы I могут использоваться для выделения и исследования активности или экспрессии TANK. Дополнительно, они особенно пригодны для применения в диагностических методах для заболеваний в связи с нерегулированной или нарушенной активностью TANK.

Хозяин или пациент может принадлежать к любому из видов млекопитающих, например, к видам приматов, в частности, к людям; грызунам, включая мышей, крыс и хомяков; кроликам, лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для болезней человека.

Чувствительность определенной клетки к лечению с помощью соединений в соответствии с данным изобретением может определяться с помощью анализов в vitro. Типично, к культуре клеток прибавляют соединение в соответствии с данным изобретением при различных концентрациях в течение периода времени, который является достаточным для того, чтобы позволить активным агентам, таким, как анти IgM, индуцировать клеточный ответ, такой как экспрессия поверхностного маркера, обычно от одного часа до одной недели, в vitro анализ может осуществляться при использовании культивируемых клеток, полученных из крови или из образца биопсии. Количество экспрессированного поверхностного маркера оценивают с помощью проточной цитометрии при использовании специфических антител, которые узнают маркер.

Доза варьирует в зависимости от используемого специфического соединения, специфического заболевания, состояния пациента, и т.д. Терапевтическая доза типично является достаточной для того, чтобы значительно уменьшить численность нежелательной клеточной популяции в целевой ткани при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение в общем случае продолжается до возникновения значительного снижения, например, снижения, которое составляет, по крайней мере, 50% клеточной нагрузки, и может продолжаться до отсутствия существенного обнаружения нежелательных клеток в организме.

ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Е. Wahlberg и др., Nature Biotechnology (2012), 30 (3), 283.

М. Elagawany и др. описывают в Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 23 (2013) 2007-2013 соединение

.

Это соединение является неактивным в ингибировании танкиразы.

Другие ингибиторы танкиразы описаны в WO 2013/012723, WO 2013/010092 ив WO 2013/082217.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к соединениям формулы I

в которой

R¹ означает Н, Hal, CH₃, ОCH₃ или CH₂ОН,

X означает Ar или Cyc,

Ar означает фенил, бифенил или нафтил, каждый из которых незамещен или моно-, ди- или тризамещен Hal, NO₂, CN, A, [C(R²)₂]_pOR², S(O)_mR², [C(R²)₂]_pN(R²)₂, [C(R²)₂]_pCOOR², [C(R²)₂]_pCON(R²)₂, [C(R²)₂]_pSO₂N(R²)₂, NR²COR², NR²SO₂R², NR²CON(R²)₂, NHCOOA, O[C(R²)₂]_nN(R²)₂, CHO и/или COA,

R² означает H или A,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, который содержит 1-10 С-атомов, где два расположенных рядом атомов углерода могут образовывать двойную связь и/или одна или две нерасположенных рядом СН- и/или CH₂-группы могут быть заменены на N-, О- и/или S-атомы и где 1-7 Н-атомов могут быть заменены на F, Cl и/или ОН,

Cyc означает циклоалкил, который содержит 3, 4, 5, 6 или 7 С-атомов,

Hal означает F, Cl, Br или I,

m означает 0, 1 или 2,

n означает 1, 2 или 3,

р означает 0, 1, 2, 3 или 4,

и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.

Изобретение также относится к оптически активным формам (стереоизомерам), энантиомерам, рацематам, диастереомерам и гидратам и сольватам этих соединений.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтически приемлемым производным соединений формулы I.

Термин сольваты соединений обозначает аддукты молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря их силе взаимного притяжения. Сольваты представляют собой, например, моно- или дигидраты или алкоголяты.

Подразумевается, что изобретение также относится к сольватам солей.

Термин фармацевтически приемлемые производные обозначает, например, соли соединений в соответствии с изобретением и также так называемые пролекарства соединений.

Как используется в настоящей заявке и если специально не указано иначе, термин "пролекарство" обозначает производное соединения формулы I, которое может быть гидролизовано, окислено или по-другому реагировать в биологических условиях (in vitro или в vivo) с обеспечением активного соединения, в частности соединения формулы I. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваясь только ими, производные и метаболиты соединения формулы I, которые включают биогидролизируемые компоненты, такие как биогидролизируемые амиды, биогидролизируемые сложные эфиры, биогидролизируемые карбаматы, биогидролизируемые карбонаты, биогидролизируемые уреиды, и биогидролизируемые аналоги фосфата. В определенных вариантах осуществления, пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкиловые сложные эфиры карбоновой кислоты. Карбоксилатные сложные эфиры легко образуются путем эстерификации любых фрагментов карбоновой кислоты, присутствующих в молекуле. Пролекарства типично можно приготавливать, используя хорошо известные методы, такие как методы, описанные в Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6-ое изд. (Donald J. Abraham ред., 2001, Wiley) и Design and Application of Prodrugs (H. Bundgaard ред., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).

Выражение "эффективное количество" обозначает количество лекарственного средства или фармацевтического активного компонента, которое вызывает в ткани, системе, животном или человеке биологическую или медицинскую ответную реакцию, которую предполагает или желает получить, например, исследователь или лечащий врач.

Дополнительно, выражение "терапевтически эффективное количество" обозначает то количество, которое имеет следующие последствия по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества:

улучшение лечения, излечение, предотвращение или элиминация заболевания, синдрома, состояния, жалобы, расстройства или побочных действий, или также уменьшение прогрессирования заболевания, жалобы или расстройства.

Термин "терапевтически эффективное количество" также охватывает количества, которые эффективны для повышения нормальной физиологической функции.

Изобретение также относится к применению смесей соединений формулы I, например, смесей двух диастереомеров, например, в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000.

Особенно предпочтительными являются смеси стереоизомерных соединений.

"Таутомеры" относятся к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм будут зависеть от окружения, в котором находится соединение, и могут отличаться в зависимости от того, например, будет ли соединение представлять собой твердое вещество или находится в органическом или водном растворе.

Изобретение относится к соединениям формулы I и их солям и к способу получения соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, таутомеров и стереоизомеров, который отличается тем, что

соединение формулы II

в которых R¹ имеет значения, указанные в пункте 1 формулы,

вводят в реакцию

с соединением формулы III

в которых X и n имеют значения, указанные в пункте 1 формулы,

и L означает Cl, Br, I или свободную или реакционноспособную фунционально модифицированную ОН группу,

и/или

основание или кислоту формулы I превращают в одну из ее солей.

Приведенные выше и ниже радикалы R¹ и Ar имеют значения, указанные для формулы I, если определенно не обозначено иначе.

А означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 С атомов. Предпочтительно означает этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил, кроме того, также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил,

1-этил-2-метилпропил, 1,1,2- или 1,2,2-триметилпропил, кроме того предпочтительно, например, трифторметил.

В особенности предпочтительно означает алкил, который содержит 2, 3, 4, 5 или 6 С атомов, предпочтительно этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, трифторметил, пентафторэтил или 1,1,1-трифторэтил.

Кроме того, А означает предпочтительно CH₂ОCH₃, CH₂CH₂ОН или CH₂CH₂ОCH₃.

R¹ предпочтительно означает Н, Hal или CH₃.

R² предпочтительно означает Н, метил, этил, пропил, бутил или трифторметил.

Ar предпочтительно означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен Hal, NO₂, CN, А и/или [C(R²)₂]_pOR².

р предпочтительно означает 0, 1 или 2.

Hal предпочтительно означает F, Cl или Br, а также I, особенно предпочтительно F или Cl.

Сус предпочтительно означает циклопентил или циклогексил.

В рамках данного изобретения, все радикалы, которые встречаются более одного раза, могут быть одинаковыми или различными, то есть они независимы друг от друга.

Соединения формулы I могут иметь один или несколько хиральных центров и поэтому могут встречаться в различных стереоизомерных формах. Формула I охватывает все эти формы.

Соответственно, изобретение относится, в частности, к соединениям формулы I, в которых по меньшей мере один из указанных радикалов имеет одно из предпочтительных значений, указанных выше. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть изображены с помощью следующих подформул Iа-Id, которые соответствуют формуле I и в которых радикалы, не определенные более подробно, имеют значения, указанные для формулы I, но в которых

в Ia R¹ означает Н, Hal или CH₃;

в Ib Ar означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен Hal, NO₂, CN, А и/или [C(R²)₂]_pOR²;

в Ic А означает неразветвленный или разветвленный алкил, который содержит 1-6 С-атомов, где 1-5 Н-атомов могут быть заменены на F;

в Id R¹ означает Н, Hal или CH₃,

Ar означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен Hal, NO₂, CN, А и/или [C(R²)₂]_pOR²,

R² означает Н или A,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, который содержит 1-6 С-атомов, где 1-5 Н-атомов могут быть заменены на F,

Hal означает F, Cl, Br или I,

p означает 0, 1, 2, 3 или 4

и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.

Соединения формулы I, а также исходные вещества для их получения могут, кроме того, быть получены при помощи методов, известных per se, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Методы органической химии], Georg-Thieme-Verlag,Штутгарт) в условиях реакций, которые известны и являются подходящими для указанных реакций. Также при этом можно применять разнообразные модификации, которые известны per se, но о которых здесь подробно не упоминается.

Исходные соединения формулы II и III, как правило, являются известными. Тем не менее, если они являются новыми, то их можно получить с помощью методов, известных per se.

Соединения формулы I предпочтительно можно получить путем введения в реакцию соединения формулы II с соединением формулы III.

В соединениях формулы III, L предпочтительно означает Cl, Br, I или свободную или реакционноспособную модифицированную ОН группу, такую как, например, активированный сложный эфир, имидазолид или алкилсульфонилокси, которая содержит 1-6 С атомов (предпочтительно метилсульфонилокси или трифторметилсульфонилокси), или арилсульфонилокси, которая содержит 6-10 С атомов (предпочтительно фенил- или п-толилсульфонилокси).

Реакцию обычно осуществляют в присутствии вещества, связывающего кислоту, предпочтительно органического основания, такого как DIPEA, триэтиламин, диметиланилин, пиридин или хинолин.

Также может быть предпочтительным добавление гидроксида щелочных или щелочно-земельных металлов, карбоната или бикарбоната или другой соли слабой кислоты щелочных или щелочно-земельный металлов, предпочтительно, калия, натрия, кальция или цезия.

В зависимости от используемых условий, продолжительность реакции составляет от нескольких минут до 14 дней, температура реакции находится между приблизительно -30° и 140°, обычно между -10° и 90°, в частности между приблизительно 0° и приблизительно 70°.

Примерами подходящих инертных растворителей являются углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2-дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; гликолевые простые эфиры, такие как монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид (ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат, или смеси вышеупомянутых растворителей.

Особенно предпочтительными являются ацетонитрил, 1,2-дихлорэтан, дихлорметан и/или ДМФА.

Фармацевтические соли и другие формы

Соединения, раскрытые в изобретении, могут использоваться в своей заключительной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также относится к применению таких соединений в форме их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены с помощью разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые формы солей соединений формулы I готовят, главным образом, при использовании традиционных способов. В случае, если соединение формулы I содержит группу карбоновой кислоты, то его приемлемая соль может быть образована с помощью реакции соединения с приемлемым основанием для получения соответствующей соли присоединения основания. Примерами таких оснований являются гидроксиды щелочных металлов, включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития; гидроксиды щелочно-земельных металлов, такие, как гидроксид бария и гидроксид кальция; алкоксиды щелочных металлов, например, этанолят калия и пропанолят натрия; а также различные органические основания, такие, как пиперидин, диэтаноламин и N-метилглутамин. Сюда также включены соли алюминия соединений формулы I. Для некоторых соединений формулы I соли присоединения кислоты могут быть образованы путем обработки указанных соединений фармацевтически приемлемыми органическими и неорганическими кислотами, например, гидрогалогенидами, такими, как гидрохлорид, гидробромид или гидройодид; другими минеральными кислотами, и их соответствующими солями такими, как, сульфат, нитрат или фосфат, и др.; и алкил- и моноарилсульфонатами, такими, как этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат; и другими органическими кислотами и их соответствующими солями, такими, как ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, сукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбат и др. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений формулы I включают следующие соли, но не ограничиваясь только ими: ацетат, адипат, альгинат, аргинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бисульфит, бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорид, хлорбензоат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, формиат, галактерат (из слизевой кислоты), галактуронат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гемисукцинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, йодид, изетионат, изобутират, лактат, лактобионат, малат, малеат, малонат, манделат, метафосфат, метансульфонат, метилбензоат, моногидрофосфат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, олеат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилацетат, 3-фенилпропионат, фосфат, фосфонат, фталат.

Кроме того, основные соли соединений в соответствии с изобретением включают, но не ограничиваясь только ими, соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа (III), железа (II), лития, магния, марганца (III), марганца (II), калия, натрия и цинка. Предпочтительными среди перечисленных выше солей являются аммонийные; соли щелочных металлов натрия и калия; и соли щелочноземельных металлов кальция и магния. Соли соединений формулы I, которые имеют происхождение от фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают, но не ограничиваясь только ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, также включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аргинин, бетаин, кофеин, хлорпрокаин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин (бензатин), дициклогексиламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лидокаин, лизин, меглумин, N-метил-D-глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтаноламин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин и трис-(гидроксиметил)метиламин (трометамин).

Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые включают основные азотсодержащие группы, могут быть кватернизированы с помощью таких агентов, как C₁-C₄-алкилгалогениды, например, метил-, этил-, изопропил- и трет-бутилхлорид, бромид и йодид; ди-C₁-C₄-алкилсульфаты, например, диметил-, диэтил- и диамилсульфат; С₁₀-С₁₈-алкилгалогениды, например, децил-, додецил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлорид, бромид и йодид; и арил-C₁-C₄-алкилгалогениды, например, бензилхлорид и фенетилбромид. Указанные соли позволяют получать как растворимые в воде, так и растворимые в масле соединения в соответствии с изобретением.

Предпочтительные фармацевтические соли, указанные выше, включают, но не ограничиваясь только ими, ацетат, трифторацетат, безилат, цитрат, фумарат, глюконат, гемисукцинат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, изетионат, манделат, меглумин, нитрат, олеат, фосфонат, пивалат, фосфат натрия, стеарат, сульфат, сульфосалицилат, тартрат, тиомалат, тозилат и трометамин.

Особенно предпочтительными являются гидрохлорид, дигидрохлорид, гидробромид, малеат, мезилат, фосфат, сульфат и сукцинат.

Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы I получают путем приведения в контакт формы свободных оснований с достаточным количеством желаемой кислоты для получения соли традиционным способом. Свободное основание можно регенерировать путем приведения в контакт формы соли с основанием и выделения свободного основания традиционным способом. Формы свободного основания в некоторой степени отличаются от своих соответствующих форм солей своими определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных оснований для целей настоящего изобретения.

Как было указано, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений формулы I образуются с металлами или аминами, такими, как щелочные металлы и щелочноземельные металлы или органические амины. Предпочтительные металлы представляют собой натрий, калий, магний и кальций. Предпочтительные органические амины представляют собой N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, N-метил-D-глюкамин и прокаин.

Соли присоединения основания кислых соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт формы свободной кислоты с достаточным количеством желаемого основания для получения соли традиционным способом. Форма свободной кислоты может быть регенерирована путем приведения в контакт формы соли с кислотой и выделения формы свободной кислоты известным способом. Формы свободной кислоты в некоторой степени отличаются от своих соответствующих форм солей определенными физическими свойствами, такими, как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных кислот для целей настоящего изобретения.

Если соединение в соответствии с изобретением включает более, чем одну группу, которая способна к образованию фармацевтически приемлемых солей этого типа, то изобретение также охватывает составные соли. Примеры типичных составных форм солей включают, но не ограничиваясь только ими, битартрат, диацетат, дифумарат, димеглумин, дифосфат, динатрий и тригидрохлорид.

В свете описанного выше можно увидеть, что выражение «фармацевтически приемлемая соль» в контексте данной заявки предназначено для обозначения активного компонента, который включает соединение формулы I в форме одной из его солей, особенно в том случае, если указанная форма соли обеспечивает указанному активному компоненту улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению со свободной формой указанного активного компонента или любой другой солью указанного активного компонента, которые использовались ранее. Фармацевтически приемлемая форма соли активного компонента может также изначально обеспечивать желаемое фармакокинетическое свойство указанному активному компоненту, которым он ранее не обладал, а также может даже положительно влиять на фармакодинамику указанного активного компонента в отношении его терапевтической активности в организме.

Изотопы

Далее также предполагается, что соединение формулы I включает его изотопно-меченные формы. Изотопно-меченная форма соединения формулы I является идентичной указанному соединению, за исключением того факта, что один или более атомов указанного соединения были замещены атомом или атомами, которые имеют атомную массу или атомное число, отличное от атомной массы или атомного числа упомянутого атома, которое обычно существует в природе. Примеры изотопов, которые являются легко доступными коммерчески и которые могут быть введены в соединение формулы I в соответствии с хорошо известными способами, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹Р, ³²Р, ³⁵S, ¹⁸F и ³⁶Cl, соответственно. Соединение формулы I, его пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль, которые содержат один или более указанных выше изотопов и/или другие изотопы других атомов также составляют объем настоящего изобретения. Изотопно-меченное соединение формулы I может использоваться в ряде способов. Например, меченное изотопами соединение формулы I, например, в которое введен радиоактивный изотоп, такой, как ³Н или ¹⁴С, будет полезным в анализах исследования распределения лекарственного средства и/или субстрата в ткани. Такие радиоактивные изотопы, например, тритий, (³Н) и углерод-14, (¹⁴С), являются особенно предпочтительными вследствие простоты получения и высокой способности к выявлению. Введение более тяжелых изотопов, например, дейтерия (²Н), в соединение формулы I, будет обеспечивать терапевтические преимущества, основывающиеся на большей метаболической стабильности указанного соединения, меченного изотопами. Большая метаболическая стабильность проявляется непосредственно в повышении времени полураспада в vivo или снижении требуемой дозы, что при большинстве условий будет составлять предпочтительное воплощение указанного изобретения. Меченное изотопом соединение формулы I обычно получают путем осуществления процедур, раскрытых в схемах синтеза и в описании, относящемся к ним, в разделах, касающихся примеров и способов получения, описанных в данной заявке, путем замены немеченого изотопами реагента его соответствующим легко доступным реагентом, меченным изотопом.

Дейтерий (²Н) также может быть введен в соединение формулы I с целью изменения окислительного метаболизма соединения путем первичного кинетического изотопного эффекта. Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции, которое происходит по причине замещения изотопного ядра, что, в свою очередь, вызывается изменением энергий основного состояния, что необходимо для образования ковалентной связи после указанного изотопного замещения. Замещение тяжелым изотопом будет обычно приводить к снижению энергии основного состояния для химической связи, вызывая, таким образом, уменьшение скорости скорость-лимитирующего этапа разрушения связи. Когда происходит разрушение связи в или поблизости участка седлообразной конфигурации вдоль координаты реакции образования нескольких продуктов, коэффициент распределения продуктов может существенно изменяться. Например, в случае, если дейтерий связывается с атомом углерода в положении, в котором не происходит обмен, различия скорости k_M/k_D=2-7 являются типичными. Такое отличие в скорости, которое успешно применяется к соединению формулы I, чувствительному к окислению, может в значительной степени влиять на профиль указанного соединения в vivo и приводит к улучшению фармакокинетических свойств.

В процессе обнаружения и совершенствования терапевтических агентов средний специалист в данной области ищет пути оптимизации фармакокинетических параметров до тех пор, пока не получит желательные в vitro свойства. Является рациональным предположить, что многие соединения со слабыми фармакокинетическими профилями страдают неустойчивостью к окислительному метаболизму. Анализы в vitro микросом печени, которые сейчас являются доступными, обеспечивают ценную информацию о процессе окислительного метаболизма, что, в свою очередь, позволяет получить рациональную модель меченных дейтерием соединений формулы I с улучшенной стабильностью вплоть до резистентности к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительное улучшение фармакокинетических профилей соединений формулы I, что может быть количественно выражено в величинах увеличения периода полураспада в vivo (t/2), в концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (C_max), площадью под кривой ответа на определенную дозу (AUC) и F; в величинах уменьшения клиренса, дозе и материальных затрат.

Приведенное далее предназначено для иллюстрации сказанного выше: соединение формулы I, которое имеет многочисленные потенциальные сайты для окислительного метаболизма, например, атомы водорода бензила и атомы водорода, соединенные с атомом азота, получают как серии аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода заменяются атомами дейтерия так, что некоторые, большинство или все указанные атомы водорода заменяются на атомы дейтерия. Определение периода полураспада обеспечивает подходящее и точное определение степени улучшения резистентности к окислительному метаболизму. Таким образом определяют, что период полураспада исходного соединения может быть продлен вплоть до 100% как результат такого замещения водорода дейтерием.

Замещение водорода дейтерием в соединении формулы I может также использоваться для достижения благоприятного изменения в профиле метаболита исходного соединения как пути уменьшения или устранения нежелательных токсических метаболитов. Например, когда токсический метаболит возникает при окислительном расщеплении углерод-водородной связи С-Н, то с достаточной вероятностью предполагается, что меченый дейтерием аналог значительно уменьшит или устранит выработку нежелательного метаболита, даже в случае, когда отдельное окисление не является скорость-лимитирующим этапом. Кроме того, информация, относящаяся к уровню техники в отношении замещения водорода дейтерием, может быть найдена у Hanzlik и др., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990; Reider и др., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987; Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985; Gillette и др., Biochemistry 33 (10) 2927-2937, 1994; и Jarman и др. Carcinogenesis 16 (4), 683-688, 1993.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или их фармацевтически приемлемые производные, сольваты и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества.

Фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Такая единица может включать, например, от 0.5 мг до 1 г, предпочтительно от 1 мг до 700 мг, более предпочтительно от 5 мг до 100 мг, соединения в соответствии с изобретением, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, способа введения, а также возраста, веса тела и состояния пациента, или фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Предпочтительными дозированными единицами лекарственных препаратов являются те, которые содержат суточную дозу или часть суточной дозы, как указано выше, или соответствующую порцию их активного компонента. Фармацевтические составы этого типа также могут быть получены способом, который хорошо известен в области фармацевтики.

Фармацевтические составы могут адаптироваться для введения при помощи любого подходящего способа, например, путем перорального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) введения. Такие препараты могут быть приготовлены с помощью любого способа, известного в области фармацевтики, например, путем объединения активного компонента с наполнителем(ями) или вспомогательным(ыми) веществом(ами).

Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут вводиться в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевых пен или пенистых пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле.

Так, например, в случае перорального введения в виде таблетки или капсулы, активный компонент может быть объединен с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки получают путем измельчения соединения до подходящего небольшого размера и смешивания его с фармацевтическим наполнителем, измельченным аналогичным способом, таким как, например, пищевой углеводород, такой как, например, крахмал или маннит. Также можно добавлять ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель.

Капсулы получают путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполняют ею желатиновые капсулы определенной формы. Перед заполнением капсул к порошковой смеси можно добавлять скользящие и смазывающие вещества, такие как, например, высокодисперсная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме. Для улучшения доступности лекарственного средства, заключенного в капсулу, также можно добавлять дезинтегрирующее вещество или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия.

Дополнительно, если это является желательным или необходимым, в смесь также можно добавлять подходящие связующие, смазывающие вещества, дезинтеграторы, а также красители. Подходящими связующими являются крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или бета-лактоза, подсластители, приготовленные из кукурузы, природных и синтетических смол, такие как, например, аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазывающие вещества, которые могут применяться в таких дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Дезинтеграторы включают, но не ограничиваясь только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Лекарственные средства в виде таблеток получают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и дезинтегратора и прессования полученной смеси в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения, измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как, например, парафин, усилителем поглощения, таким как, например, четвертичная соль, и/или абсорбентом, таким как, например, бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем смачивания со связующим, таким как, например, сироп, крахмальная паста, слизь акации или растворы целлюлозы или полимерных веществ и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции, порошковую смесь можно пропускать через таблетировочную машину, получая куски неправильной формы, которые распадаются, образуя гранулы. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеарата, талька или минерального масла для предотвращения слипания в таблетировочной литейной форме. После этого смазанную смесь спрессовывают, получая таблетки. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять с сыпучим инертным наполнителем и затем подвергать прямому прессованию, получая таблетки без осуществления стадий грануляции или сухого прессования. Таблетки также можно покрывать прозрачным или светонепроницаемым защитным слоем, состоящим из шеллакового запечатывающего слоя, слоя сахара или полимерного вещества и глянцевого слоя воска. К этим покрытиям также можно добавлять красители для возможности различения между разными дозируемыми единицами.

Жидкости для перорального введения, такие как, например, раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в виде дозируемых единиц таким образом, чтобы они содержали заранее установленное количество соединения. Сиропы могут быть получены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры готовят с применением нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, ароматические добавки, такие как, например, масло мяты перечной, или натуральные заменители сахара или сахарин, или другие искусственные заменители сахара и т.п.

Лекарственные препараты для перорального введения в виде дозированных единиц могут быть инкапсулированы в микрокапсулы, если это является желательным. Также лекарственный препарат может быть приготовлен таким образом, чтобы пролонгировать или замедлить высвобождение, например, путем применения покрытий или заделывания требуемого вещества в полимеры, воск и т.п.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры также могут вводиться в виде липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы с помощью различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Соединения формулы I и их соли, таутомеры и стереоизомеры также могут доставляться с помощью моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым присоединены молекулы соединения. Соединения также могут быть соединены с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такими полимерами могут являться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтиленоксид полилизина, замещенный пальмитоиловыми радикалами. Кроме того, соединения можно связывать с биоразлагаемыми полимерами, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочной кислотой, поли-эпсилонкапролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Фармацевтические составы, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для удлиненного, тесного контакта с эпидермисом реципиента. Таким образом, например, активный компонент может доставляться из пластыря путем ионофореза, как в общем описано в Pharmaceutical Research, 3 (6), 318 (1986).

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, предпочтительно применяются лекарственные препараты в виде местной мази или крема. Для приготовления лекарственного препарата в виде мази активный компонент может применяться с парафиновым или смешивающимся с водой мазевым основанием. Альтернативно, для получения крема активный компонент может быть приготовлен с основой для крема типа масло-в-воде или основой вода-в-масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, предпочтительно в водном растворителе.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в полость рта, включают лепешки, пастилки и жидкости для полоскания рта.

Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в виде суппозиториев или клизм.

Фармацевтические составы, адаптированные для интраназального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают крупный порошок, имеющий размер частичек, например, в интервале 20-500 микрон, который вводится путем вдыхания, то есть путем быстрого вдоха через нос из контейнера, содержащего порошок, который придерживают возле носа. Подходящие лекарственные препараты для введения в виде интраназального аэрозоля или носовых капель с жидкостью в качестве носителя включают растворы активного вещества в воде или в масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают тонкоизмельченные частички в виде пыли или тумана, которые могут быть получены с помощью различных диспергирующих устройств под давлением с аэрозолями, распылителями или инсуффляторами.

Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут вводиться в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей.

Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные или неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические вещества и растворенные вещества, с помощью которых лекарственное средство поддерживается изотоническим по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные или неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Лекарственные препараты могут вводиться с помощью емкостей для однократного или многократного введения, например, запечатанных ампул и флаконов, и храниться в лиофилизированном состоянии, при этом непосредственно перед введением необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например, воду для инъекций. Растворы и суспензии для инъекций, приготовленные согласно рецептуре, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Также является очевидным, что дополнительно к предпочтительным вышеописанным составляющим, лекарственные препараты также могут содержать другие вещества, которые используются в данной области для конкретных типов лекарственных средств; например, лекарственные препараты, пригодные для перорального введения, могут содержать ароматизаторы.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы I зависит от многих факторов, включая, например, возраст и вес животного, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу лекарственного средства и способ введения, и в конечном счете оно может быть определено лечащим врачом или ветеринаром. Тем не менее, эффективное количество соединения в соответствии с изобретением, как правило, находится в интервале от 0.1 до 100 мг/кг веса тела реципиента (млекопитающего) в сутки и предпочтительно обычно находится в интервале от 1 до 10 мг/кг веса тела в сутки. Следовательно, действующее суточное количество для взрослого млекопитающего весом 70 кг обычно может составлять от 70 до 700 мг, причем это количество может вводиться в виде отдельной дозы один раз в день или обычно в виде циклов частичных доз (таких как, например, два, три, четыре, пять или шесть раз) в день, таким образом, что общая суточная доза является аналогичной. Эффективное количество его соли, сольвата или физиологически функционального производного может быть определено в виде доли эффективного количества соединения в соответствии с изобретением per se. Также можно предположить, что аналогичные дозы пригодны для лечения других состояний, описанных выше.

Комбинированное лечение этого типа можно осуществлять с помощью одновременного, последовательного или раздельного дозирования индивидуальных компонентов лечения. В комбинированных продуктах такого типа применяются соединения в соответствии с изобретением.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и по меньшей мере один дополнительный активный компонент лекарственного средства.

Изобретение также относится к комплекту (набору), состоящему из отдельных упаковок

(а) эффективного количества соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,

и

(б) эффективного количества дополнительного активного компонента лекарственного средства.

Комплект включает подходящие емкости, такие как коробки, индивидуальные бутылки, пакеты или ампулы. Комплект может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,

и эффективное количество дополнительного активного компонента лекарственного средства в растворенной или лиофиллизированной форме.

"Лечение", как используется в настоящей заявке, обозначает облегчение, полностью или частично, симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или замедление, или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или предотвращение или профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего риск развития такого заболевания или нарушения.

Термин "эффективное количество" применительно к соединению формулы (I) может обозначать количество, способное облегчать, полностью или частично, симптомы, связанные с нарушением или заболеванием, или замедление или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или предотвращать или обеспечивать профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего или с риском развития заболевания, описанного в настоящей заявке, такого как воспалительные состояния, иммунологические состояния, злокачественные новообразования или метаболические состояния.

В одном варианте осуществления эффективное количество соединения формулы (I) представляет собой количество, которое ингибирует танкиразу в клетке, такое как, например, в vitro или в vivo. В некоторых вариантах осуществления, эффективное количество соединения формулы (I) ингибирует танкиразу в клетке на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 99%, по сравнению с активностью танкиразы в необработанной клетке. Эффективное количество соединения формулы (I), например, в фармацевтической композиции, может находиться на уровне, который превышает желательный эффект; например, от приблизительно 0,005 мг/кг веса тела субъекта до приблизительно 10 мг/кг веса тела субъекта в единичной лекарственной форме как для перорального, так и для парентерального введения.

ПРИМЕНЕНИЕ

Соединения согласно настоящему изобретению пригодны в качестве фармацевтически активных компонентов для млекопитающих, в особенности для людей, для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение охватывает применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Примеры воспалительных заболеваний включают ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, аллергическая реакция замедленного типа и другие.

Также охватывается применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания, индуцированного танкиразой, или состояния, индуцированного танкиразой у млекопитающего, при котором в этом способе терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением вводят больному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Терапевтическое количество изменяется в зависимости от конкретного заболевания и легко может быть определено специалистом в данной области.

Выражение "заболевания или состояния, индуцированные танкиразой" относится к патологическим состояниям, которые зависят от активности одной или нескольких танкираз. Заболевания, связанные с активностью танкиразы, включают злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения заболеваний, при которых ингибирование, регуляция и/или модуляция ингибирования танкиразы играет роль.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для ингибирования танкиразы.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к способам лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, которые включают введение субъекту, который в этом нуждается, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или сольвата.

Характерные злокачественные новообразования, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рак головы,шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки,шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.

Характерные сердечно-сосудистые заболевания, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рестеноз, атеросклероз и его последствия, такие как инсульт, инфаркт миокарда, ишемические повреждения сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки или мозга.

Настоящее изобретение относится к способу лечения пролиферативного, аутоиммунного, противовоспалительного или инфекционного заболевания нарушения, который включает введение субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование.

Особенно предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование, где введение является одновременным, последовательным или чередующимся с введением по меньшей мере одного другого активного лекарственного средства.

Описанные соединения формулы I могут вводиться в комбинации с другими известными лекарственными средствами, включая противораковые средства. Как используется в настоящем изобретении, термин "противораковое средство" относится к любому средству, которое вводят пациенту со злокачественным новообразованием для лечения рака.

Противоопухолевое лечение, описанное в изобретении, может применяться в виде монотерапии, или, дополнительно к соединению по изобретению, можно также применять обычные хирургические методы или радиотерапию или химиотерапию. Такая химиотерапия может включать один или несколько следующих классов противоопухолевых средств:

(i) антипролиферативные/противоопухолевые/повреждающие ДНК лекарственные средства и их комбинации, которые применяются в медицинской онкологии, такие как алкилирующие средства (например, цисплатин, карбоплатин, циклофосфамид, азотный иприт, мельфалан, хлорамбуцил, бусульфан и нитрозомочевины); антиметаболиты (например, антифолаты, такие как фторпиримидины, такие как 5-фторурацил и тегафур, ралтитрексед, метотрексат, арабинозид цитозина, гидроксимочевина и гемцитабин); противоопухолевые антибиотики (например, антрациклины, такие как адриамицин, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин); антимитотические средства (например, алкалоиды барвинка, такие как винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин и таксоиды, такие как таксол и таксотер); ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотоксины, такие этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан, иринотекан и камптотецин); и средства, влияющие на дифференциацию клеток (например, ретиноевая кислота, полностью находящаяся в транс-конфигурации, 13-цис-ретиноевая кислота и фенретинид);

(ii) цитостатические средства, такие как антиэстрогены (например, тамоксифен, торемифен, ралоксифен, дролоксифен и йодоксифен), ингибиторы рецептора эстрогена (например, фульвестрант); антиандрогены (например, бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерон ацетат), антагонисты LHRH или агонисты LHRH (например, гозерелин, лейпрорелин и бузерелин), прогестогены (например, мегестрол ацетат), ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан) и ингибиторы 5α-редуктазы, такие как финастерид;

(iii) средства, которые ингибируют инвазию злокачественных клеток (например, ингибиторы металлопротеиназы, такие как маримастат, и ингибиторы функции рецептора урокиназного активатора плазминогена);

(iv) ингибиторы действия фактора роста, например, такие ингибиторы включают антитела к фактору роста, антитела к рецептору фактора роста (например, анти-erbb2 антитело трастузумаб [Herceptin™] и анти-erbb1 антитело цетуксимаб [С225]), ингибиторы фарнезилтрансферазы, ингибиторы тирозинкиназы и ингибиторы серин/треонин киназы, например, ингибиторы семейства фактора роста эпидермиса (например, ингибиторы EGFR семейства тирозинкиназ, такие как N-(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (гефитиниб, AZD1839), N-(3-этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб, OSI-774) и 6-акриламидо-N-(3-хлор-4-фторфенил)-7-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (CI 1033)), например, ингибиторы семейства фактора роста производных тромбоцитов и, например, ингибиторы семейства фактора роста гепатоцитов;

(v) антиангиогенные вещества, такие как те, которые ингибируют действие фактора роста эндотелия сосудов, (например, антитело к фактору роста клеток эндотелия сосудов бевацизумаб [Avastin™], соединения, которые описаны в опубликованных международных заявках на патент WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 и WO 98/13354) и соединения, которые действуют по другому механизму (например, линомид, ингибиторы действия интегрина avβ3 и ангиостатин);

(vi) вещества, повреждающие сосуды, такие как комбретастатин А4 и соединения, описанные в международных заявках на патент WO 99/02166, WO 00/40529, WO 00/41669, WO 01/92224, WO 02/04434 и WO 02/08213;

(vii) антисмысловая терапия, например, такая, которая направлена на вышеперечисленные мишени, такая как ISIS 2503, антисмысловая терапия на основе гена Ras;

(viii) способы генной терапии, включая, например, способы замены аберрантных генов, такие как способы аберрации р53 или аберрации BRCA1 или BRCA2, GDEPT (пролекарственная терапия, направленная на ген фермента), способы с использованием деаминазы цитозина, тимидинкиназы или бактериальной нитроредуктазы и способы повышения устойчивости пациента к химиотерапии или радиотерапии, такие как генная терапия резистентности ко многим лекарственным средствам; и

(ix) способы иммунотерапии, включая, например, способы повышения иммуногенности опухолевых клеток пациента в условиях ex vivo и в vivo, такие как трансфекция цитокинами, такими как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или фактор стимуляции колоний гранулоцитов-макрофагов, способы снижения активности Т-клеток, способы с использованием трансфектированных иммунных клеток, таких как цитокин-трансфектированные дендритные клетки, способы с использованием цитокин-трансфектированных линий опухолевых клеток и способы с использованием анти-идиотипичных антител.

Противоопухолевое лечение, описанное выше, может применяться в виде монотерапии, или, дополнительно к описанным соединениям формулы I, можно также применять обычные хирургические методы или радиотерапию или лекарственную терапию. Такая лекарственная терапия, например, химиотерапия или таргетная терапия, может включать одно или несколько, предпочтительно одно, из следующих противоопухолевых средств:

Алкилирующие агенты

Такие как алтретамин, бендамустин, бусульфан, кармустин, хлорамбуцил, хлорметин, циклофосфамид, дакарбазин, ифосфамид, импросульфан тозилат, ломустин, мелфалан, митобронитол, митолактол, нимустин, ранимустин, темозоломид, тиотепа, треосульфан, мехлорэтамин, карбохон, апазихон, фотемустин, глюфосфамид, палифосфамид, пипоброман, трофосфамид, урамустин;

Платиновые соединения

Такие как карбоплатин, цисплатин, эптаплатин, мириплатин гидрат, оксалиплатин, лобаплатин, недаплатин, пикоплатин, сатраплатин;

Агенты, изменяющие ДНК

Такие как амрубицин, бисантрен, децитабин, митоксантрон, прокарбазин, трабектедин, клофарабин, амсакрин, бросталлицин, пиксантрон, ларомустин;

Ингибиторы топоизомеразы

Такие как этопозид, иринотекан, разоксан, собузоксан, тенипозид, топотекан, амонафид, белотекан, ацетат эллиптиния, ворелоксин;

Модификаторы микротрубочек

Такие как кабазитаксел, доцетаксел, эрибулин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин, винорелбин, виндезин, винфлунин, фосбретабулин, тесетаксел;

Антиметаболиты

Такие как аспарагиназа, азацитидин, левофолинат кальция, капецитабин, кладрибин, цитарабин, эноцитабин, флоксуридин, флударабин, фторурацил, гемцитабин, меркаптопурин, метотрексат, неларабин, пеметрексед, пралатрексат, азатиоприн, тиогуанин, кармофур, доксифлуридин, элацитарабин, ралтитрексед, сапацитабин, тегафур, триметрексат;

Противоопухолевые антибиотики

Такие как блеомицин, дактиномицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, левамизол, милтефосин, митомицин С, ромидепсин, стрептозоцин, валрубицин, зиностатин, зорубицин, даунуробицин, пликамицин, акларубицин, пепломицин, пирарубицин;

Гормоны/Антагонисты

Такие как абареликс, абиратерон, бикалутамид, бусерелин, калустерон, хлортрианисен, дегареликс, дексаметазон, эстрадиол, флуокортолон, флуоксиместерон, флутамид, фулвестрант, госерелин, хистрелин, лейпрорелин, мегестрол, митотан, нафарелин, нандролон, нилутамид, октреотид, преднизолон, ралоксифен, тамоксифен, тиротропин альфа, торемифен, трилостан, трипторелин, диэтилстилбестрол, аколбифен, даназол, деслорелин, эпитиостанол, ортеронел, энзалутамид;

Ингибиторы ароматазы

Такие как аминоглютэтимид, анастрозол, эксеместан, фадрозол, летрозол, тестолактон, форместан;

Низкомолекулярные ингибиторы киназы

Такие как кризотиниб, дасатиниб, эрлотиниб, иматиниб, лапатиниб, нилотиниб, пазопаниб, регорафениб, руксолитиниб, сорафениб, сунитиниб, вандетаниб, вемурафениб, босутиниб, гефитиниб, акситиниб, афатиниб, алисертиб, дабрафениб, дакомитиниб, динациклиб, довитиниб, энзастаурин, нинтеданиб, ленватиниб, линифаниб, линситиниб, маситиниб, мидостаурин, мотесаниб, нератиниб, орантиниб, перифосин, понатиниб, радотиниб, ригосертиб, типифарниб, тивантиниб, тивозаниб, траметиниб, пимасертиб, бриваниб аланинат, цедираниб, апатиниб, кабозантиниб S-малат, карфилзомиб, ибрутиниб, икотиниб;

Фотосенсибилизаторы

Такие как метокссален, порфимер натрий, талапорфин, темопорфин;

Антитела

Такие как алемтузумаб, бесилесомаб, брентуксимаб ведотин, цетуксимаб, деносумаб, ипилимумаб, офатумумаб, панитумумаб, ритуксимаб, тоситумомаб, трастузумаб, бевацизумаб, катумаксомаб, элотузумаб, эпратузумаб, фарлетузумаб, могамулизумаб, нецитумумаб, нимотузумаб, обинутузумаб, окаратузумаб, ореговомаб, рамуцирумаб, рилотумумаб, силтуксимаб, тоцилизумаб, залутумумаб, занолимумаб, матузумаб, далотузумаб, онартузумаб, пертузумаб, ракотумомаб, табалумаб;

Цитокины

Такие как алдеслейкин, интерферон альфа, интерферон альфа2а, интерферон альфа2b, тазонермин, тецелейкин, опрелвекин;

Конъюгаты лекарственных средств

Такие как денилейкин дифтитокс, ибритумомаб тиуксетан, иобенгуан 1123, преднимустин, трастузумаб эмтансин, эстрамустин, гемтузумаб озогамицин, афлиберцепт, цинтредекин бесудотокс, этотреотид, инотузумаб озогамицин, наптумомаб эстафенатокс, опортузумаб монатокс, технеций (99 mТс) арцитумомаб, винтафолид;

Вакцины

Такие как сипулейкель, витеспен, эмепепимут-S, OncoVAX, риндопепимут, TroVax, стимувакс;

Разные агенты

алитретиноин, бексаротен, бортезомиб, эверолимус, ибандроновая кислота, имихимод, леналидомид, лентинан, метирозин, мифамуртид, памидроновая кислота, пегаспаргас, пентостатин, сипулейкель3, сизофиран, тамибаротен, темсиролимус, талидомид, третиноин, висмодегиб, золедроновая кислота, талидомид, вориностат, целекоксиб, циленгитид, энтиностат, этанидазол, ганетеспиб, идроноксил, инипариб, иксазомиб, ионидамин, ниморазол, панобиностат, перетиноин, плитидепсин, помалидомид, прокодазол, ридафоролимус, тасквинимод, телотристат, типалфазин, тирапазамин, тоседостат, трабедерсен, убенимекс, вальсподар, гендицин, пицибанил, реолизин, ретаспимицин гидрохлорид, требананиб, вирулизин.

Следующие сокращения относятся соответственно к определениям, приведенным ниже:

водн. (водн), ч (час), г (грам), л (литр), мг (миллиграм), МГц (мегагерц), мин. (минута), мм (милиметр), ммоль (милимоль), мМ (милимолярный), tпл. (температура плавления), экв. (эквивалент), мл (милилитр), мкл (микролитр), ACN (ацетонитрил), АсОН (уксусная кислота), CDCl₃ (дейтерированный хлороформ), CD₃OD (дейтерированный метанол), CH₃CN (ацетонитрил), c-hex (циклогексан), DCC (дициклогексил карбодиимид), ДХМ (дихлорметан), DIC (диизопропил карбодиимид), DIEA (диизопропилэтил-амин), ДМФА (диметилформамид), ДМСО (диметилсульфоксид), ДМСО-d₆ (дейтерированный диметилсульфоксид), EDC (1-(3-диметил-амино-пропил)-3-этилкарбодиимид), ЭРИ (электрораспылительная ионизация), EtOAc (этилацетат), Et₂O (простой диэтиловый эфир), EtOH (этанол), HATU гексафторфосфат (диметиламино-([1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-илокси)-метилен]-диметил-аммония), ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), i-PrOH (2-пропанол), K₂CO₃ (карбонат калия), ЖХ (жидкостная хроматография), МеОН (метанол), MgSO₄ (сульфат магния), МС (масс-спектрометрия), МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир), NaHCO₃ (бикарбонат натрия), NaBH₄ (борогидрид натрия), NMM (N-метилморфолин), ЯМР (ядерный магнитный резонанс), РуВОР (гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окси-трис-пирролидино-фосфония), КТ (комнатная температура), В.у. (время удержания), SPE (твердофазная экстракция), TBTU (тетрафторборат 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония), TEA (триэтиламин), ТФУ (трифторуксусная кислота), ТГФ (тетрагидрофуран), ТСХ (тонкослойная хроматография), УФ (ультрафиолет).

Описание исследований в vitro

Сокращения:

GST = глутатион-S-трансфераза

FRET = резонансный перенос энергии флуоресценции

HTRF® = (гомогенная флуоресценция с временным разрешением)

HEPES = буфер 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин - этансульфоновая кислота

DTT = дитиотреитол

BSA = бычий сывороточный альбумин

CHAPS = детергент;

CHAPS = 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат

Стрептавидин-XLent® представляет собой конъюгат стрептавидин-ХL665, для которого были оптимизированы условия сочетания для получения конъюгата с улучшенными характеристиками для некоторых исследований, в частности тех, для которых требуется высокая чувствительность.

Тестирование биохимической активности танкираз 1 и 2: Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой GST-меченая танкираза-1, соотв. танкираза-2 переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя из биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченными криптатом анти-GST, которые связаны с GST меткой фермента и Xlent® меченным - стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно путем повышения HTRF сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате анализа на 384 лунок HTRF® (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb и используют для экрана с высокой пропускной способностью. 250 нМ GST-меченную танкиразу-1 (1023-1327 а/к), соответственно приблизительно 250 нМ GST-меченную танкиразу-2 (873-1166 а/к) и 5 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 5 мкл (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, pH 7.7) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 90 мин при 30°С. Реакцию останавливают путем добавления 1 мкл 50 мМ EDTA раствора. Добавляют 2 мкл раствора для обнаружения (1.6 мкМ SA-Xlent® (Cisbio, Codolet, France), 7.4 нМ Анти-GST-K® (Eu-меченные анти-GST, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 800 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, 0.1% CHAPS, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляло реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляло собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Ингибирующие значения (IC50) определяют, используя либо программу Symyx Assay Explorer® или Condosseo® от GeneData.

Измерение клеточного ингибирования танкиразы

Поскольку было описано, что танкиразы модулируют клеточный уровень Axin2 (Huang и др., 2009; Nature), то повышение уровня Axin2 используют в качестве анализируемых данных для определения клеточного ингибирования танкираз в анализе на основе Luminex.

Клетки клеточной линии карциномы ободочной кишки DLD1 высевают в планшеты на 96 лунок при плотности 1.5×10⁴ клеток на лунку. На следующий день, клетки обрабатывают серийными разведениями тестируемого соединения за семь стадий в виде трех повторов с конечной концентрацией ДМСО 0.3%. Через 24 часа, клетки лизируют в лизирующем буфере (20 мМ Tris/HCl pH 8.0, 150 мМ NaCl, 1% NP40, 10% глицерин) и лизаты очищают путем центрифугирования через фильтровальный планшет на 96 лунок (0.65 мкм). Белок Axin2 выделяют из клеточных лизатов путем инкубирования с моноклональным анти-Ахт2 антителом (R&D Systems #МАВ6078), которое связывается с флуоресцентными карбоксишариками. После этого, связанный Axin2 специфически обнаруживают с помощью поликлонального анти-Axin2 антитела (Cell Signaling #2151) и подходящего РЕ-флуоресцентного вторичного антитела. Количество выделенного Axin2 белка определяют с помощью прибора Luminex²⁰⁰ (Luminex Corporation) в соответствии с инструкциями производителя путем подсчитывания 100 событий на лунку. Ингибирование танкиразы тестируемыми соединениями приводит к более высоким уровням Axin2, которые прямо коррелируют с повышением обнаруживаемой флуоресценции. В качестве контролей клетки обрабатывают только растворителем (нейтральный контроль) и сравнительным ингибитором танкиразы IWR-2 (3Е-06 М), который служит в качестве контроля для максимального повышения Axin2. Для анализа, полученные данные нормализуют по отношению к необработанному контролю с растворителем и подгоняют для определения значений ЕС₅₀, используя программное обеспечение Assay Explorer (Accelrys).

Описание исследования PARP1

Тестирование биохимической активности PARP-1: Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой His-меченная Parp-1 переносит биотинилированную ADP-рибозу / ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD/NAD в качестве ко-субстрата и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченным криптатом анти-His антителом, связанным с His меткой фермента и Xlent® меченным-стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно путем повышения HTRF сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате анализа на 384 лунок HTRF® (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb. 35 нМ His-меченную Parp-1 (человеческая, рекомбинантная, Enzo Life Sciences GmbH, , Germany) и смесь 125 нМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) и 800 нМ NAD в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 6 мкл (100 мМ Tris/HCl, 4 мМ Mg-хлорид, 0,01% IGEPAL® СА630, 1 мМ DTT, 0,5% ДМСО, pH 8, 13 нг/мкл активированной ДНК (BPS Bioscience, San Diego, US)) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 150 мин при 23°С. Реакцию останавливают путем добавления 4 мкл раствора стоп/обнаружение (70 нМ SA-Xlent® (Cisbio, Codolet, France), 2.5 нМ анти-His-K® (Eu-меченные анти-His, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 400 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляло реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляло собой Olaparib (LClabs, Woburn, US) в конечной концентрации 1 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Описание ELISA исследования TNKS1 и TNKS2

Тестирование биохимической активности TNK 1 и 2: активности ELISA (исследование аутопарсилирования)

Для анализа аутопарсилирующей активности TNKS 1 и 2 осуществляют ELISA: На первой стадии GST меченную TNKS захватывают на покрытом глутатионом планшете. После этого осуществляют анализ активности с биотинилированным NAD при отсутствии /в присутствии соединений. В процессе ферментативной реакции GST меченная TNKS переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата. Для обнаружения добавляют конъюгат стрептавидин-HRP, который связывается с биотинилированной TNKS и таким образом захватывается на планшеты. Определяют количество биотинилированной соотв. аутопарсилированной TNKS с люминесцентным субстратом для HRP. Уровень сигнала люминесценции прямо коррелируется с количеством аутопарсилированной TNKS и, следовательно, с активностью TNKS.

Активность ELISA осуществляют в микротитровальных планшетах на 384 лунки, покрытых глутатионом (планшеты для захвата Express, покрытые глутатионом, Biocat, Heidelberg, Germany). Планшеты предварительно уравновешивают с помощью PBS. Затем планшеты инкубуют с 50 мкл 20 нг/лунку GST-меченной Tnks-1 (1023-1327 а/к, собственного производства), соответственно GST-меченной Tnks-2 (873-1166 а/к, собственного производства) в буфере для анализа (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 2 мМ DTT, pH 7.7) в течение ночи при 4°С. Планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Лунки блокируют путем инкубирования при комнатной температуре в течение 20 минут с 50 мкл блокирующего буфера (PBS, 0.05% Tween-20, 0.5% BSA). После этого планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Ферментативную реакцию осуществляют в 50 мкл реакционного раствора (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, pH 7.7) с 10 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата при отсутствии или присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 1 часа при 30°С. Реакцию останавливают путем промывания 3 раза с PBS-Tween-20. Для обнаружения добавляют 50 мкл 20 нг/мкл стрептавидин, HRP конъюгата (MoBiTec, , Germany) в PBS/0.05%Tween-20/0.01%BSA и планшеты инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре. После трехразового промывания PBS-Tween-20 добавляют 50 мкл SuperSignal ELISA Femto Maximum чувствительного субстратного раствора (ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany). После инкубирования в течение 1 минуты при комнатной температуре, измеряют люминесцентные сигналы с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при 700 нм. Полное используемое значение представляло реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляло собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Выше и ниже, все температуры указаны в градусах Цельсия °С. В последующих примерах "обычная обработка" обозначает: при необходимости добавляют воду, pH устанавливают, при необходимости, на значение от 2 до 10, в зависимости от состава конечного продукта, смесь экстрагируют этилацетатом или дихлорметаном, фазы разделяют, органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают, и остаток очищают при помощи хроматографии на силикагеле и/или кристаллизации. Rf значения на силикагеле; элюент: этилацетат/метанол 9:1.

P: ВЭЖХ-метод:

градиент: 5.5 мин; поток: 2.75 мл/мин от 99:1 до 0:100 H₂O/ацетонитрил;

вода + ТФУ (0.01 об. %); ацетонитрил + ТФУ (0.01 об. %)

колонка: Chromolith SpeedROD RP 18е 50-4.6

длина волны: 220 нм

Merck HitachiLa Chrome

N: ВЭЖХ-метод:

градиент: 5.5 мин; поток: 2.75 мл/мин от 90:10 до 0:100 H₂O/ацетонитрил;

вода + ТФУ (0.01 об. %); ацетонитрил + ТФУ (0.01 об. %)

колонка: Chromolith SpeedROD RP 18е 50-4.6

длина волны: 220 нм

Merck HitachiLa Chrome

Х: ВЭЖХ/МС условия

колонка: Chromolith Performance ROD RP-18e, 100×3 мм²

градиент: A:B=99:1-0:100 за 1.8 мин

поток rate: 2.0 мл/мин

элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты

элюент В: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты

длина волны: 220 нм

X: ВЭЖХ/МС условия

колонка: Chromolith Performance ROD RP-18e, 100×3 мм²

градиент: A:B=99:1-0:100 за 1.8 мин

скорость потока: 2.0 мл/мин

элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты

элюент В: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты

длина волны: 220 нм

¹Н ЯМР записывали на спектрометре Bruker DPX-300, DRX-400 или АVII-400, используя остаточный сигнал дейтерированного растворителя в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) представлены в виде м.д. относительного остаточного сигнала растворителя (δ=2.49 м.д. для ЯМР в ДМСО-d₆). ¹Н ЯМР данные представлены следующим образом: химический сдвиг (мультиплетность, константы взаимодействия, и количество водородов). Мультиплетность сокращали следующим образом: s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), m (мультиплет), br (широкий).

Микроволновую химию осуществляют в микроволновом реакторе СЕМ.

Фталазины: Синтез

Пример 1

Синтез 2-фенил-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("А1")

1.1 4-Хлор-фталазин-1-иламин

Пентагидрат сульфата меди (II) (632.4 мг; 2.53 ммоль) растворяли в водном растворе аммиака (32%, 25 мл). Добавляли суспензию 1,4-дихлор-фталазина (2 г; 10.05 ммоль) в ТГФ (25 мл) и 2-х фазную смесь нагревали в течение 1.5 ч при 65-80°C (макс. 13 бар) и 1.5 ч при 100°C в микроволновой печи (СЕМ Discover). В органической фазе образовывался осадок. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, осадок отфильтровывали путем отсасывания, промывали водой, небольшим количеством этилацетата и диэтилового эфира и сушили в вакууме при 50°C в течение 14 ч; выход: 1.6 г (89%), кристаллы розового цвета (чистота: 100%, В.у.: 2.49 мин).

1.2: Фталазин-1-иламин

4-Хлор-фталазин-1-иламин (750 мг; 4.18 ммоль) гидрировали в метаноле (20 мл) и 2н. растворе гидроксида натрия (3.7 мл) с Pd/C (5%) при комнатной температуре в течение 14 ч. Реакционный раствор фильтровали и концентрировали. Водный остаток разбавляли водой (5 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x). Органические слои объединяли, промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали досуха. Остаток растирали в порошок с диэтиловым эфиром, отфильтровывали путем отсасывания и сушили.

Водный фазу из экстракции упаривали досуха. Остаток растворяли в смеси воды и ацетонитрила и лиофилизировали. Твердое вещество суспендировали в смеси дихлорметан/метанол (10%), перемешивали в течение 30 мин и отфильтровывали путем отсасывания. Фильтрат упаривали досуха. Остаток растирали в порошок с дихлорметаном, отфильтровывали путем отсасывания, промывали диэтиловым эфиром и сушили. Оба твердых вещества объединяли; выход: 545 мг (90%), твердое вещество светло-коричневого цвета (чистота: 100%, В.у.: 2.25 мин).

1.3 2-Фенил-N-фталазин-1-ил-ацетамид

Фталазин-1-иламин (50 мг; 0.34 ммоль) суспендировали в ТГФ (2 мл) и обрабатывали в атмосфере аргона N-этилдиизопропиламином (76.2 мкл; 0.45 ммоль). По каплям добавляли фенилацетилхлорид (54.6 мкл; 0.41 ммоль) при комнатной температуре и смесь нагревали до 70°С. В течение короткого промежутка времени образовывался прозрачный желтый раствор, перед тем как осаждалось твердое вещество. После перемешивания при 70°C в течение 1 ч добавляли ТГФ (2 мл), N-этилдиизопропиламин (76.2 мкл; 0.45 ммоль) и фенилацетилхлорид (54.6 мкл; 0.41 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 14 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, обрабатывали метанолом (0.5 мл) и упаривали досуха. Остаток светло-коричневого цвета обрабатывали ацетонитрилом (1 мл) и метанолом (1 мл) и разрушали ультразвуком. Образовавшийся осадок фильтровали путем отсасывания, промывали метанолом и диэтиловым эфиром и сушили в вакууме при 50°С. Дальнейший продукт выделяли из фильтрата с помощью колоночной хроматографии; выход: 25 мг (28%), бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 2.89 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.97 (s, 1H), 9.57 (s, 1Н), 8.17 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 8.08-7.82 (m, 3Н), 7.47-7.20 (m, 5Н), 3.89 (s, 2Н).

Пример 2

Синтез 2-(3-метоксифенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("A2")

Фталазин-1-иламин (57 мг; 0.39 ммоль) суспендировали в 1,2-дихлорэтане (4 мл) в атмосфере аргона. Добавляли N-этилдиизопропиламин (0.141 мл; 0.83 ммоль) с последующим добавлением по каплям (3-метоксифенил)-ацетилхлорида (0.123 мл; 0.79 ммоль) с помощью пипетки. Во время добавления температуру повышали от 20°C до 35°С. Через одну минуту получали прозрачный раствор светло-коричневого цвета. Реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии (колонка: 40 г? Силикагель, RP18; Combiflash Companion); выход: 6 мг (5%), бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 2.94 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.96 (s,1H), 9.59 (s, 1Н), 8.19 (d, J=8.0 Гц,1H), 8.08-7.79 (m, 3Н), 7.29 (t, J=7.9 Гц,1H), 7.10-6.74 (m, 3Н), 3.86 (s, 2Н), 3.77 (s, 3Н).

Пример 3

Синтез 2-(4-метоксифенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("A3")

"A3" получали из фталазин-1-иламина (60 мг; 0.41 ммоль), N-этилдиизопропиламина (0.148 мл; 0.87 ммоль) и (4-метоксифенил)-ацетилхлорида (0.126 мл; 0.83 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (3 мл) в соответствии с методикой получения Примера 2; выход: 16 мг (13%), бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 2.91 мин); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ [м.д.] 10.92 (s, 1Н), 9.58 (s, 1Н), 8.19 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 8.07-7.83 (m, 1Н), 7.34 (d, J=8.5 Гц, 1Н), 6.94 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 3.81 (s,1H), 3.76 (s, 2Н).

Пример 4

Синтез 2-(4-этоксифенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("А4")

(4-Этоксифенил)-уксусную кислоту (74.5 мг; 0.41 ммоль), гидрат бензотриазол-1-ола (65.3 мг; 0.41 ммоль) и гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (103 мг; 0.54 ммоль) растворяли в ДМФА (2 мл) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 15 мин добавляли фталазин-1-иламин (60 мг; 0.41 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч. Твердое вещество, осадившееся во время реакции, отфильтровывали, промывали небольшой порцией ДМФА, ацетонитрила и диэтилового эфира и сушили при 50°C в вакууме.

Фильтрат разбавляли водой (40 мл) и экстрагировали 3 раза этилацетатом. Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили сульфатом натрия, фильтровали и упаривали досуха. Остаток (твердое вещество светло-желтого цвета) растирали в порошок с этанолом, отфильтровывали, промывали этанолом и диэтиловым эфиром и сушили при 50°C в вакууме. Оба твердых вещества объединяли; выход: 81 мг (63%), аморфное бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 3.03 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.91 (s, 1Н), 9.58 (s, 1Н), 8.18 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 8.07-7.84 (m, 3Н), 7.33 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 6.92 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 4.03 (q, J=6.9 Гц, 2Н), 3.81 (s, 2Н), 1.33 (t, J=6.9 Гц, 3Н).

Пример 5

Синтез N-фталазин-1-ил-2-(3-трифторметоксифенил)-ацетамида ("А5")

"А5" получали из (3-трифторметоксифенил)-уксусной кислоты (93.8 мг; 0.41 ммоль), гидрата бензотриазол-1-ола (65.3 мг; 0.41 ммоль), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (103 мг; 0.54 ммоль) и фталазин-1-иламина (60 мг; 0.41 ммоль) в ДМФА (2 мл) в соответствии с методикой получения Примера 4. Через 3 ч перемешивания при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли водой (40 мл) и экстрагировали 3 раза этилацетатом. Объединенные органические слои промывали соляным раствором, сушили сульфатом натрия и упаривали досуха. Остаток растирали в порошок с этанолом, отфильтровывали, промывали диэтиловым эфиром и сушили при 50°C в вакууме. Дальнейший продукт получали из фильтрата с помощью хроматографии (колонка: 40 г, силикагель, RP18; Combiflash Companion); выход: 58 мг (39%), твердое вещество светло-желтого цвета (чистота: 98%, В.у.: 3.29 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 11.02 (s, 1Н), 9.58 (s, 1Н), 8.26-8.15 (m, 1Н), 8.09-7.84 (m, 3Н), 7.58-7.38 (m, 3Н), 7.34-7.22 (m, 1Н), 3.98 (s, 2Н).

Пример 6

Синтез 2-(3-цианофенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("А6")

"А6" получали из (3-цианофенил)-уксусной кислоты (66.6 мг; 0.41 ммоль), гидрата бензотриазол-1-ола (65.3 мг; 0.41), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (103 мг; 0.54 ммоль) и фталазин-1-иламина (60 мг; 0.41 ммоль) в ДМФА (2 мл) в соответствии с методикой получения Примера 5; выход: 89 мг (75%), бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 2.91 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 11.03 (s, 1Н), 9.60 (s,1H), 8.26-8.15 (m, 1Н), 8.12-7.94 (m, 3Н), 7.92-7.52 (m, 4Н), 4.03 (s, 2Н).

Пример 7

Синтез 2-(3-нитрофенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("А7")

"А7" получали из (3-нитрофенил)-уксусной кислоты (62.4 мг; 0.34 ммоль), гидрата бензотриазол-1-ола (54.4 мг; 0.34 ммоль), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (85.8 мг; 0.45 ммоль) и фталазин-1-иламина (50 мг; 0.34 ммоль) в ДМФА (2.5 мл) в соответствии с методикой получения Примера 4;

выход: 84 мг (79%), твердое вещество светло-желтого цвета (чистота: 100%, В.у.: 3.01 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 11.07 (s, 1Н), 9.60 (s, 1Н), 8.32 (t, J=2.0 Гц, 1Н), 8.25-8.11 (m, 2Н), 8.10-7.96 (m, 3Н), 7.88 (d, J=1.1 Гц, 1Н), 7.68 (t, J=7.9 Гц, 1H),4.12 (s, 2Н).

Пример 8

Синтез N-фталазин-1-ил-2-(4-трифторметоксифенил)-ацетамида ("А8")

"А8" получали из (4-трифторметоксифенил)-уксусной кислоты (92.9 мг; 0.41 ммоль), гидрата бензотриазол-1-ола (65.3 мг; 0.41 ммоль), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламино-пропил)карбодиимида (103 мг; 0.54 ммоль) и фталазин-1-иламина (60 мг; 0.41) в ДМФА (2 мл) в соответствии с методикой получения Примера 4; выход: 105 мг (72%), бесцветное твердое вещество (чистота: 99%, В.у.: 3.29 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.99 (s, 1Н), 9.57 (s, 1Н), 8.23-8.14 (m, 1Н), 8.09-7.86 (m, 3Н), 7.53 (d, J=8.7 Гц, 2Н), 7.41-7.30 (m, 2Н), 3.95 (s, 2Н).

Пример 9

Синтез 2-(4-трет-бутилфенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("А9")

"А9" получали из (4-трет-бутилфенил)-уксусной кислоты (66.2 мг; 0.34 ммоль), гидрата бензотриазол-1-ола (54.4 мг; 0.34 ммоль), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (85.8 мг; 0.45 ммоль) и фталазин-1-иламина (50 мг; 0.34) в ДМФА (2 мл) в соответствии с методикой получения Примера 5; выход: 67 мг (61%), бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 3.38 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.93 (s, 1Н), 9.57 (s, 1Н), 8.23-8.14 (m, 1Н), 8.08-7.83 (m, 3Н), 7.43-7.28 (m, 4Н), 3.84 (s, 2Н), 1.28 (s, 9Н).

Пример 10

Синтез 2-(2,6-дихлорфенил)-N-фталазин-1-ил-ацетамида ("А10")

"А9" получали из (2,6-дихлорфенил)-уксусной кислоты (70.6 мг; 0.34 ммоль), гидрата бензотриазол-1-ола (54.4 мг; 0.34 ммоль), гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимида (85.8 мг; 0.45 ммоль) и фталазин-1-иламина (50 мг; 0.34) в ДМФА (2 мл) в соответствии с методикой получения Примера 5; выход: 74 мг (65%), бесцветное твердое вещество (чистота: 100%, В.у.: 3.27 мин);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 11.12 (s, 1Н), 9.59 (s, 1H), 8.27-8.15 (m, 1Н), 7.98-8.07 (m, 3Н), 7.51 (d, J=8.1 Гц, 2Н), 7.35 (t, J=8.0 Гц,1H), 4.31 (s, 2Н).

Следующие соединения получали аналогичным образом:

2-(4-этокси-фенил)-N-(5-фтор-фталазин-1-ил)-ацетамид ("А11")

М+Н 326; ВЭЖХ 1.73 (X); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ [м.д.] 10.96 (s, 1Н), 9.61 (d, J=2.6 Гц, 1Н), 8.07-7.99 (m, 2Н), 7.80-7.69 (m, 1H), 7.31-7.23 (m, 2Н), 6.94-6.84 (m, 2Н), 4.00 (q, J=7.0 Гц, 2Н), 3.72 (s, 2Н), 1.32 (t, J=7.0 Гц, 3Н);

N-(5-фтор-фталазин-1-ил)-2-(4-метокси-фенил)-ацетамид ("А12")

М+Н 312; ВЭЖХ 1.61 (X);

3-циклогексил-N-фталазин-1-ил-пропионамид ("А13")

М+Н 284; ВЭЖХ 2.37 (N); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.68 (s, 1Н), 9.57 (s, 1Н), 8.22-8.14 (m, 1Н), 8.06-7.93 (m, 3Н), 2.55 (t, J=7.8 Гц, 2Н), 1.79-1.54 (m, 7Н), 1.36-1.11 (m, 4Н), 0.99-0.87 (m, 2Н);

3-фенил-N-фталазин-1-ил-пропионамид ("А14")

М+Н 278; ВЭЖХ 1.99 (N); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.74 (s, 1Н), 9.56 (s, 1H), 8.16 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 8.04-7.97 (m, 1H), 7.96-7.88 (m, 1Н), 7.75 (d, J=8.3 Гц, 1H), 7.37-7.28 (m, 4Н), 7.27-7.19 (m, 1Н), 3.00 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.88 (t, J=7.9 Гц, 2Н);

3-циклопентил-N-фталазин-1-ил-пропионамид ("А15")

М+Н 270; ВЭЖХ 2.19 (N); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.68 (s, 1H), 9.57 (s, 1H), 8.21-8.15 (m, 1Н), 8.05-7.93 (m, 3Н), 2.59-2.53 (m, 2H), 1.90-1.74 (m, 3Н), 1.74-1.65 (m, 2H), 1.65-1.46 (m, 4H), 1.22-1.09 (m, 2H);

3-(2-хлор-фенил)-N-фталазин-1-ил-пропионамид ("A16")

ВЭЖХ 2.21 (N); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.79 (s, 1Н), 9.57 (s, 1Н), 8.18 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 8.08-7.99 (m, 1H), 7.99-7.91 (m, 1Н), 7.85 (d, J=8.2 Гц, 1Н), 7.49-7.41 (m, 2Н), 7.36-7.24 (m, 2Н), 3.10 (t, J=7.6 Гц, 2Н), 2.91 (t, J=7.7 Гц, 2Н);

3-(2,3-дихлор-фенил)-N-фталазин-1-ил-пропионамид ("А17")

ВЭЖХ 2.44 (N); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.81 (s, 1H), 9.56 (s, 1Н), 8.17 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 8.05-7.99 (m, 1Н), 7.99-7.93 (m, 1Н), 7.85 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 7.55-7.50 (m, 1H), 7.44-7.40 (m, 1H), 7.38-7.29 (m, 1H), 3.15 (t, J=7.6 Гц, 2Н), 2.93 (t, J=7.6 Гц, 2Н);

N-(8-метил-фталазин-1-ил)-2-фенил-ацетамид ("А18")

М+Н 278; ВЭЖХ 1.61 (X); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСO-d₆) δ [м.д.] 10.92 (s, 1Н), 9.68 (s, 1Н), 7.87-7.77 (m, 2Н), 7.77-7.68 (m, 1Н), 7.45-7.39 (m, 2Н), 7.36 (m, 2Н), 7.32-7.24 (m, 1H), 3.87 (s, 2Н), 2.77 (s, 3Н);

N-(5-метил-фталазин-1-ил)-2-фенил-ацетамид ("А19")

М+Н 278; ВЭЖХ 1.71 (X); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ [м.д.] 10.74 (s, 1Н), 9.54 (s, 1H), 8.02 (d, J=6.8 Гц, 1H), 7.87 (t, J=7.6 Гц, 1H), 7.74 (dd, J=7.2, 1.4 Гц, 1Н), 7.42-7.30 (m, 4Н), 7.30-7.22 (m, 1Н), 3.80 (s, 2Н), 2.59 (s, 3Н);

2-(4-метокси-фенил)-N-(8-метил-фталазин-1-ил)-ацетамид ("А20")

М+Н 308; ВЭЖХ 1.61 (X); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ [м.д.] 10.85 (s, 1Н), 9.68 (s, 1Н), 7.88-7.76 (m, 2Н), 7.71 (d, J=7.7 Гц, 1H), 7.38-7.27 (m, 2Н), 6.98-6.88 (m, 2Н), 3.79 (s, 2Н), 3.75 (s, 3Н), 2.77 (s, 3Н);

2-(4-метокси-фенил)-N-(5-метил-фталазин-1-ил)-ацетамид ("А21")

М+Н 308; ВЭЖХ 1.69 (X); ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆, ТФУ-d₁) δ [м.д.] 10.11 (s, 1Н), 8.44 (d, J=7.6 Гц, 1Н), 8.23 (t, J=7.6 Гц, 1H), 8.15 (d, J=7.5 Гц, 1Н), 7.34 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 6.94 (d, J=8.6 Гц, 2Н), 3.89 (s, 2Н), 3.78 (s, 3Н), 2.80 (s, 3Н);

3-циклогексил-N-(8-метил-фталазин-1-ил)-пропионамид ("А22")

;

3-фенил-N-(8-метил-фталазин-1-ил)-пропионамид ("А23")

;

3-циклопентил-N-(8-метил-фталазин-1-ил)-пропионамид ("А24")

;

3-(2-хлорфенил)-N-(8-метил-фталазин-1-ил)-пропионамид ("А25")

;

3-(2,3-дихлорфенил)-N-(8-метил-фталазин-1-ил)-пропионамид ("А26")

.

Фармакологические данные

IC₅₀: <0.3 мкМ = A 0.3-3 мкМ = В 3-50 мкМ = С

Соединения, показанные в Таблице 1, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

IC₅₀: <0.3 мкМ = A 0.3-3 мкМ = В 3-50 мкМ = С

Соединения, показанные в Таблице 2, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Следующие примеры относятся к лекарственным средствам:

Пример A: Флаконы для инъекций

pH раствора 100 г активного компонента формулы I и 5 г Na₂HPO₄ в 3 л бидистиллированной воды устанавливают на 6.5, используя 2 н. соляную кислоту, стерилизуют фильтрацией, переносят во флаконы для инъекций, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждый флакон для инъекций содержит 5 мг активного компонента.

Пример Б: Суппозитории

Смесь 20 г активного компонента формулы I расплавляют с 100 г соевого лецитина и 1400 г какаового масла, разливают в пресс-формы и позволяют охладиться. Каждый суппозиторий содержит 20 мг активного компонента.

Пример В: Раствор

Раствор приготавливают из 1 г активного компонента формулы I, 9.38 г NaH₂PO₄•2 Н₂O, 28.48 г Na₂HPO₄•12 Н₂O и 0.1 г бензалконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. pH раствора устанавливают на 6.8 и объем раствора доводят до 1 л и стерилизуют путем облучения. Этот раствор может использоваться в форме глазных капель.

Пример Г: Мазь

500 мг активного компонента формулы I смешивают с 99.5 г вазелина в асептических условиях.

Пример Д: Таблетки

Смесь 1 кг активного компонента формулы I, 4 кг лактозы, 1.2 кг картофельного крахмала, 0.2 кг талька и 0.1 кг стеарата магния спрессовывают для получения таблеток обычным способом таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного компонента.

Пример Е: Драже

Таблетки спрессовывают аналогично примеру Д и затем покрывают обычным способом покрытием из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.

Пример Ж: Капсулы

2 кг активного компонента формулы I помещают в твердые желатиновые капсулы обычным способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного компонента.

Пример 3: Ампулы

Раствор 1 кг активного компонента формулы I в 60 л бидистиллированной воды стерилизуют фильтрацией, переносят в ампулы, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждая ампула содержит 10 мг активного компонента.

1. Соединения формулы I

в которой

R¹ означает Н, Hal или СН₃,

X означает Ar или Сус,

Ar означает фенил, который незамещен или моно-, ди- или тризамещен Hal, NO₂, CN, А и/или [C(R²)₂]_pOR²,

R² означает Н или А,

Сус означает циклоалкил, который содержит 3, 4, 5, 6 или 7 С-атомов,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, который содержит 1-6 С-атомов, где 1-5 Н-атомов могут быть заменены на F,

Hal означает F, Cl, Br или I,

p означает 0, 1, 2, 3 или 4,

n означает 1, 2 или 3,

и их фармацевтически приемлемые соли, cольваты, включая их смеси во всех соотношениях.

2. Соединения по п. 1, выбранные из группы

и их фармацевтически приемлемые сольваты, соли, включая их смеси во всех соотношениях.

3. Способ получения соединений формулы I по пп. 1 и 2 и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, который отличается тем, что

соединение формулы II

в которой R¹ имеет значение, указанное в п. 1,

вводят в реакцию

с соединением формулы III

в которой X и n имеют значения, указанные в п. 1,

и L означает Cl, Br, I или свободную или реакционно-способную фунционально модифицированную ОН группу, и/или

основание или кислоту формулы I превращают в одну из ее солей.

4. Лекарственные средства ингибирующие активность танкираз (TANK), содержащие по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, сольваты, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель или среду для лекарственного средства.

5. Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения и/или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечно-сосудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

6. Соединения по п. 5 для применения для лечения и/или предотвращения заболеваний, выбранных из группы рака головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.