Композиция для предотвращения или лечения жировых болезней печени

Изобретения относится к фармацевтической промышленности и представляет собой применение (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольного стеатогепатита, где неалкогольный стеатогепатит вызван накоплением жира в печени и оксидативным стрессом или воспалительными цитокинами, полученными из жировой печени. Изобретение обеспечивает эффективное предупреждение или лечение неалкогольного стеатогепатита, где неалкогольный стеатогепатит вызван накоплением жира в печени и оксидативным стрессом или воспалительными цитокинами, полученными из жировой печени. 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к композиции для предотвращения или лечения жировой болезни печени, конкретно неалкогольного стеатогепатита, который содержит (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемую соль, как активный ингредиент.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Все жировые болезни печени, включая жировую дистрофию печени, которая подобна нарушению в печени, вызванному алкоголем, которая возникает у непьющих людей, известны под названием неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП). У пациентов с НАЖБП синтез жирных кислот в печени всегда активирован, и активация синтеза жирных кислот является важным фактором, играющим активную роль в развитии жировой дистрофии печени, вызванной метаболическим синдромом.

НАЖБП в общем разделяется на две группы: простая жировая дистрофия печени, которая в общем рассматривается как имеющая благоприятный прогноз, и неалкогольный стеатогепатит (НАСГ), который рассматривается как имеющий неблагоприятный прогноз, так как простая жировая дистрофия печени постоянно сопровождается воспалительным процессом или фиброзом, и НАСГ считается одной из тяжелых форм НАЖБП.

До настоящего времени двухударная гипотеза известна как представляющая основной патофизиологический механизм возникновения и развития НАСГ. Двухударная гипотеза заключается в том, что Первый удар, который обозначает такие факторы, как образ жизни или генетические факторы, вызывает простую жировую дистрофию печени, и затем множество факторов, таких как оксидативный стресс или воспалительные цитокины, главным образом индуцированные в состоянии жировой дистрофии печени, действуют как Второй удар, усугубляя простую жировую дистрофию печени до тяжелой стадии НАСГ.

Лечение метаболического синдрома, который известен как один из факторов, связанных с возникновением НАСГ, является очень важным, и в связи с данным аспектом клинически испытаны лекарственные средства, имеющие ингибирующий эффект на метаболический синдром, такие как средство, понижающее инсулинорезистентность, антиоксидант, средство для лечения гиперлипедимии, гепатопротекторное средство и антагонист рецептора ангиотензина II.

Однако в настоящее время для немногих лекарственных средств существует клиническое подтверждение эффективности лечения НАСГ. Например, пиоглитазон, понижающий инсулинорезистентность, являлся очень перспективным лекарственным средством для лечения НАСГ, но он не показал практических улучшений на 3 фазе клинических исследований, не смог безусловно соответствовать требованиям для терапевтического лекарственного средства из-за проблем, связанных с побочными действиями, такими как риск перелома, увеличение массы тела, ухудшение и кризис сердечной недостаточности.

Следовательно, возникает срочная необходимость исследований, направленных на предотвращение или лечение неалкогольного стеатогепатита.

В то же время, (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин является ингибитором клеточного некроза, который является специфичным для митохондрий и показывает воздействие на ингибирование гибели клеток от токсинов или внешнего воздействия, увеличение жизнеспособности клеток и антиоксидантные, а также противовоспалительные свойства одновременно.

Другими словами, несмотря на то что (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин считается эффективным при различных заболеваниях, относящихся к клеточному некрозу, информации о предотвращении и лечении жировой дистрофии печени и метаболического синдрома не существует, и по данному поводу исследования не проводились.

Авторы изобретения выполнили настоящее изобретение, сделав открытие, что лечение НАСГ у животных (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином эффективно облегчает жировую дистрофию печени, воспалительный процесс в печени и фиброз печени, которые являются главными патологическими формами НАСГ.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ТЕХНИЧЕСКАЯ ПРОБЛЕМА

Целью настоящего изобретения является предоставление фармацевтической композиции для предотвращения или лечения жировой болезни печени, которая содержит (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемую соль как активный ингредиент, применительно к НАЖБП, конкретно НАСГ.

РЕШЕНИЕ ПРОБЛЕМЫ

Для решения задачи настоящее изобретение раскрывает фармацевтическую композицию для предотвращения или лечения жировой болезни печени, которая содержит (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемую соль как активный ингредиент.

В данном документе жировые болезни печени могут являться неалкогольными жировыми болезнями печени, конкретно неалкогольным стеатогепатитом или простой жировой дистрофией печени, и состав согласно настоящему изобретению ингибирует накопление жира в печени и воздействует на ингибирование воспалительного процесса и фиброза печени ингибированием оксидативного стресса или воспалительных цитокинов, обусловленных жировой дистрофией печени.

Ниже в данном документе настоящее изобретения описано более подробно.

Средство для предотвращения или лечения жировых болезней печени согласно настоящему изобретению содержит (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемую соль как активный ингредиент.

В настоящем изобретении «жировая болезнь печени» в основном относится к болезни, в которой повреждение печени вызвано накоплением нейтрального жира в клетках печени, и включает алкогольную жировую болезнь печени и неалкогольную жировую болезнь печени (НАЖБП).

В настоящем изобретении неалкогольная жировая болезнь печени имеет такое же значение, как неалкогольная жировая дистрофия печени и синдром неалкогольной жировой дистрофии печени. Неалкогольная жировая болезнь печени включает неалкогольный стеатогепатит (НАСГ) и простую жировую дистрофию печени.

Неалкогольной жировой болезнью печени является, например, расстройство печени, которое отличается макровезикулярным отложением жира в печени подобно алкогольной жировой дистрофии печени на биопсии печени, несмотря на отсутствие случаев употребления алкоголя в прошлом, и включает простую жировую дистрофию печени с благоприятным прогнозом и нарастающим НАСГ. К тому же, неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) имеет представленные ниже характеристики:

1. Отсутствие случаев употребления алкоголя в прошлом (количество алкоголя: 20 г или меньше в день).

2. Хроническая печеночная недостаточность, при которой причины заболеваний, такие как вирусные (HCV, HBV), аутоиммунные очевидны, не учитывается.

3. Метаболический синдром, ожирение, диабет, гиперлипидемия, гипертензия, гиперурикемия, синдром апноэ во сне и подобные являются факторами риска. В примерах с многочисленными факторами риска вероятность простой жировой дистрофии печени и НАСГ возрастает.

4. Также включены различные болезни или лекарственные средства, которые вызывают нарушение липидного обмена или функции митохондрий.

Неалкогольные стеатогепатиты (НАСГ), например, определяются, как показано ниже:

1. Согласно Matteoni (Matteoni, C.A. et al., 1999, Gastroenterology, 116:1413-1419) НАЖБП подразделяются на 4 класса: класс 1 является простой жировой дистрофией печени, класс 2 является стеатогепатитом, класс 3 является жировым некрозом печени (сопутствующая баллонирующая дегенерация), класс 4 является некрозом клеток печени, который сопутствует тельцам Мэллори или фиброзу (сопутствующая баллонирующая дегенерация). Исходя из долгосрочного прогноза, типы 3 и 4, имеющие значительно высокую частоту развития цирроза печени или смерти, связанной с печенью, рассматриваются как неалкогольный стеатогепатит (НАСГ).

2. В Single Topic Conference 2002 of the American Association for the Study of Liver Diseases (Single Topic Conference 2002, Neuschwander-Tetri, B.A. et al., 2003, Hepatology,37:1202-1219), классы 3 и 4 НАЖБП (Matteoni classification) рассматриваются как НАСГ вследствие стеатоза (макровезикулярный>микровезикулярный, выделенный в центральной части долек), воспаления долек (умеренное, инфильтрация нейтрофилов или моноцитов) и гепатоцеллюлярного вздутия (выраженное, около клеток печени, относящихся к стеатозу и в центральной части долек) как ключевых гистопатологических признаков НАСГ.

3. Brunt (Brunt E.M. et al., 1999, Am. J. Gastroenterol., 94: 2467-2474) подразделяет развитие НАСГ на 4 стадии согласно выраженности фиброза. Стадия 1: центральная часть долек (зона 3), стадия 2: 1+портальная зона, стадия 3: образование мостика, стадия 4: цирроз печени.

В настоящем изобретении «простая жировая дистрофия печени» относится к случаю, в котором показано только накопление жира в клетках печени без сопутствующего некроза, воспалительного процесса или фиброза клеток печени в числе жировых болезней печени.

Видом жировой болезни печени, к которой применяется средство для предотвращения или лечения согласно настоящему изобретению, является предпочтительно неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП), и более предпочтительно простая жировая дистрофия печени или неалкогольный стеатогепатит (НАСГ).

Как указано выше, двухударная гипотеза в значительной степени поддерживается как механизм возникновения и развития НАСГ. Двухударная гипотеза является гипотезой, в которой НАСГ развивается до другого уровня в результате возникновения и развития описанного ниже механизма. Во-первых, как Первый удар, происходит накопление жира в печени (жировая дистрофия печени), и как Второй удар, происходит воспалительный процесс и фиброз печени из-за оксидативного стресса или воспалительных цитокинов, обусловленных жировой дистрофией печени.

Что касается Первого удара, (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин и его фармацевтически приемлемая соль, согласно настоящему изобретению, ингибирует накопление жира в печени ингибированием активации синтеза жира в печени и содержания печеночного триглицерида, тем самым предпочтительно контролируя жировую дистрофию печени. Кроме того, что касается Второго удара, соединение или его фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению, ингибирует воспалительный процесс и фиброз печени ингибированием инфильтрации липидных капель и воспалительных клеток в печени, ингибированием оксидативного стресса и воспалительных цитокинов и ингибированием экспрессии генов, относящихся к воспалительному процессу в печени и генов, относящихся к фиброзу печени одновременно. Благодаря данным механизмам действия, (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин и его фармацевтически приемлемая соль представляются имеющими высокую вероятность эффективной блокировки механизма возникновения и развития НАСГ.

Средство для предотвращения или лечения жировой болезни печени согласно настоящему изобретению содержит (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемые добавки, известные в данной сфере, могут смешиваться при необходимости. Так как добавки в опциях можно комбинировать, их можно заменить с учетом лекарственной формы или способа введения, и включить, например, вспомогательное вещество, вяжущее вещество, разрыхлитель, модификатор скольжения, усилитель вкуса и запаха, ароматическую добавку, краситель или подсластитель.

Кроме того, средство для предотвращения или лечения жировой болезни печени согласно настоящему изобретению может применяться в различных видах фармацевтически приемлемых лекарственных форм. Данные формы, такие как капсула, порошок, таблетка, мелкая гранула, гранула, инъекции, жидкость, мазь или паста, могут быть перечислены в качестве предпочтительных примеров. Таким образом, средство для предотвращения или лечения жировой болезни печени согласно настоящему изобретению может вводиться пациентам перорально или парентерально. Среди них предпочтителен лекарственный препарат для перорального введения, ввиду удобства для пациентов.

В средстве для предотвращения или лечения жировой болезни печени, согласно настоящему изобретению, доза (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина или его фармацевтически приемлемой соли может быть надлежащим образом изменена, рассматривая особенности пациента, такие как возраст, вес, симптомы и способ введения. Например, суточная доза при пероральном введении взрослому (60 кг) составляет от около 1 мг до 1000 мг, предпочтительно от около 10 мг до 750 мг, суточная доза при введении в виде инъекций составляет от около 0,3 мг до 200 мг, и доза может вводиться 1 раз или быть разделена на несколько приемов в день.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно настоящему изобретению, (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемая соль может эффективно ингибировать жировую дистрофию печени, воспалительный процесс и фиброз печени и может применяться соответствующим образом для предотвращения или лечения НАЖБП, конкретно НАСГ.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Изображение и график на фиг. 1 показывают эффект уменьшения содержания TG и холестерина у ob/ob мыши при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения (n=10, p< 0,001 против инертного вещества).

Изображение и график на фиг. 2 показывают воздействие на ингибирование оксидативного стресса и окисление липидов у ob/ob мыши при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Изображение и график на фиг. 3 показывают воздействие на усиление активации ослабленной дыхательной цепи митохондрий у ob/ob мыши при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Изображение и график на фиг. 4 показывают воздействие на уменьшение повышенной экспрессии воспалительных цитокинов и активации макрофагоцитов у ob/ob мыши при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Изображение и график на фиг. 5 показывают воздействие на ингибирование фиброза печени у ob/ob мыши с MCD (метионин-холин дефицитной) диетой при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ниже в данном документе, настоящее изобретение описано подробнее с приведенными примерами. Вместе с тем, приведенные ниже примеры предназначены только для облегчения понимания настоящего изобретения, что не ограничивает объем защиты настоящего изобретения.

Пример 1: Ингибирующее действие (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на жировую дистрофию печени (оценка с применением модели жировой дистрофии печени, связанной с ожирением)

В качестве подопытных животных в Харлане (Индианаполис, штат Индиана) были приобретены самец ob/+ мыши 6-недельного возраста в качестве контрольного и C57BL/6J Lep(-/-) самцы (ob/ob) мыши 6-недельного возраста. Купленных мышей содержали в стандартных условиях (25°C, 55% влажность и 12-часовой период освещения) с нормальным режимом питания. 30 мышей разделили на 3 группы, 10 мышей в каждой группе. Группа 1 включала мышей 10 C57BL/6J(ob/+ контрольная группа), группу 2 из 10 ob/ob мышей лечили инертным веществом - раствором хлорида натрия, и мышей группы 3 лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином (LG Life Sciences Ltd., Daejeon, Republic of Korea) один раз в день в дозе 20 мг/кг. Раствор хлорида натрия и раствор (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина вводили перорально в течение 4 недель. После лечения животные были умерщвлены под наркозом и печени незамедлительно взяты и сохранены для следующего анализа.

Пример 1-1: Воздействие (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на накопление TG в клетках печени, накопление холестерина и повреждение печени в модели жировой дистрофии печени страдающего ожирением

На фиг. 1 представлены изображение и график, показывающие воздействие на уменьшение содержания TG и холестерина у ob/ob мыши при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения (n=10, p < 0,001 против инертного вещества).

Как показано на фиг. 1, при сравнении с печенью у мышей (ob/+) контрольной группы подтвердилось, что ob/ob мыши, страдающие ожирением, имели приблизительно 60% накопление жировой ткани и липидных капель различных размеров от маленьких до больших в клетках печени. В отличие от этого, обнаружили, что в случае перорального введения мышам, страдающим ожирением (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина (Соединение) в дозе 20 мг/кг один раз в день, при проверке методом гематоксилин-эозинового (H&E) окрашивания, жировая ткань заметно уменьшилась. Кроме того, по сравнению с группой, которую лечили инертным веществом, область окрашивания масляным красным О заметно уменьшилась в случае лечения мышей (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином.

Уровень TG в сыворотке крови не показал большого различия между уровнем каждой группы (данные не показаны), но количество TG и холестерина в печени значительно уменьшилось в группе, которую лечили соединением настоящего изобретения. Было подтверждено, что группа, которую лечили соединением настоящего изобретения, показала уменьшенные значения АЛТ и АСТ в сыворотке крови по сравнению с группой, которую лечили инертным веществом.

Пример 1-2: Определение воздействия (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на оксидативный стресс и окисление липидов в модели жировой дистрофии печени страдающего ожирением

На фиг. 2 представлены изображение и график, показывающие воздействие на оксидативный стресс и ингибирование окисления липидов у ob/ob мышей при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Как показано на фиг. 2, количество 8-OHdG, который представляет повреждение ДНК от оксидативного стресса, показало значительную корреляцию с количеством АЛТ, и в случае лечения ob/ob мышей соединением настоящего изобретения, число 8-OHdG положительных клеток печени было существенно ниже по сравнению с группой, которую лечили инертным веществом. Кроме того, уровень 3-NT (нитротирозин), который играет важную роль в нарушении функции митохондрий, достаточно увеличился у ob/ob мышей, но в значительной мере уменьшился в группе, которую лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином. Кроме того, для определения воздействия оксидативного стресса, который известен как важный фактор возникновения НАСГ, определили количество TBARS (побочных продуктов перекисного окисления липидов) и наблюдалось значительное уменьшение при лечении (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином.

Другими словами, результаты, показанные на фиг. 2, выявляют, что (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин согласно настоящему изобретению осуществляет эффективное ингибирование оксидативного стресса и нитрования белков.

Пример 1-3: Определение воздействия (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на комплекс дыхательной цепи митохондрий

На основе предыдущих результатов, в которых (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин ингибировал АФК образование митохондрий и окислительное повреждение от АФК, и воздействия (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на экспрессию комплекса дыхательной цепи митохондрий и комплекс OXPHOS (окислительного фосфорилирования), оценивали в печени у ob/ob мышей, которых лечили инертным веществом и (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином

На фиг. 3 представлены изображение и график, показывающие эффект усиления активации ослабленной дыхательной цепи митохондрий у ob/ob мышей при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Как показано на фиг. 3A, экспрессия митохондриального комплекса печени I, III, IV и V у ob/ob мышей существенно уменьшилась по сравнению с ob/+ контрольной группой. Вместе с тем, в случае с ob/ob мышами, которых лечили соединением настоящего изобретения, экспрессия указанных митохондриальных комплексов оставалась на уровне контрольной группы. Кроме того, результаты проверки комплекса OXPHOS с BN-PAGE показали, что комплексы OXPHOS I, III, IV и V существенно уменьшились по сравнению с ob/+ контрольной группой. Вместе с тем, в случае с ob/ob мышами, которых лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином в течение 4 недель, увеличилось связывание комплексов. Характерным образом, в случае лечения (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином, активация комплексов дыхательной цепи митохондрий I, III, IV и V значительно увеличилась, тогда как активация комплекса II была незначительной.

Другими словами, результаты, показанные на фиг. 3, позволяют предположить, что (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин согласно настоящему изобретению, улучшает активацию дыхательной цепи митохондрий и активацию митохондрий.

Пример 1-4: Определение воздействия (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на воспалительные цитокины и макрофаги (клетка Купфера) в печени ob/ob мышей

Воспалительный процесс и оксидативный стресс известны как главные факторы возникновения и развития НАЖБП и НАСГ. Авторы настоящего изобретения изучили фосфорилирование NF-κB, p38 и JNK 1/2, относящееся к сигналу воспаления, с применением иммуноблоттинга.

На фиг. 4 представлены изображение и график, показывающие воздействие на уменьшение увеличенной экспрессии воспалительных цитокинов и активации макрофагов у ob/ob мыши при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Как показано на фиг. 4A, в печени ob/ob мышей, которых лечили инертным веществом, экспрессия фосфорилированного NF-κB, p65 и p105 была повышена и уровень фосфорилирования p38 и JNK 1/2, которые являются маркерами воспалительного процесса, был увеличен. В отличие от этого, в случае ob/ob мышей, которых лечили соединением настоящего изобретения, фосфорилирование NF-κB p65, NF-κB p105, p38 и JNK 1/2 было значительно уменьшено. Данные результаты показывают, что (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин эффективно ингибирует каскад сигналов, относящихся к воспалительному процессу, который является важным механизмом в возникновении НАЖБП.

Кроме того, при том, что ob/ob мыши, которых лечили инертным веществом, показали значительное увеличение экспрессии иРНК TNF-α в печени, экспрессия TNF-α была ингибирована у мышей, которых лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином. Исходя из данных анализа ELISA с образцами, собранными от измельченной печени, в случае мышей, которых лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином, обнаружено очень малое количество TNF-alpha (фиг. 4B).

Интересно, что не обнаружено разницы в количестве IL-6 иРНК между группой, которую лечили инертным веществом и группой, которую лечили соединением настоящего изобретения. Кроме того, в результате иммунного окрашивания F4/80 (фиг. 4C) и Cd68 (фиг. 4D), наблюдалась инфильтрация многих активированных макрофагов в печени ob/ob мышей, которых лечили инертным веществом, но в случае лечения (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином, обнаружено уменьшение реакции воспалительного процесса.

Пример 2: Ингибирующее воздействие (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина на воспалительный процесс и фиброз печени (определение с использованием модели стеатогепатита, который сопутствует ожирению)

С целью определения уровня фиброза печени измерили и изучили трехкрасочное окрашивание и экспрессию коллагена I.

На фиг. 5 представлены изображение и график, показывающие эффект ингибирования фиброза печени у ob/ob мыши с MCD (метионин-холин дефицитной) диетой при введении соединения (20 мг/кг/день) настоящего изобретения.

Как показано на фиг. 5A и 5B, было подтверждено, что в случае MCD метионин- и холиндефицитной диеты, обнаружено большое влияние на развитие фиброза печени у ob/ob мышей. С другой стороны, группа, которую лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином, показала ингибирование интенсивности трехкрасочного окрашивания и экспрессии коллагена I по сравнению с группой, которую лечили инертным веществом.

Как показано на фиг. 5C, ob/ob мыши с MCD диетой содержат намного больше TG печени по сравнению с ob/ob мышами с нормальной диетой. Вместе с тем, количество TG печени у группы, которую лечили (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амином, уменьшилось на 50% (ob/ob MCD-инертное вещество 400+/-80 мг/г печени, ob/ob MCD-соединение 210+/-20). Кроме того, количество АЛТ и АСТ в сыворотке крови существенно уменьшилось у группы, которую лечили соединением настоящего изобретения.

Кроме того, фиг. 5D показала, что фосфорилирование NF-κB p65, NF-κB p105, p38 и JNK 1/2 значительно увеличилось у ob/ob мышей с MCD диетой по сравнению с ob/ob мышами с нормальной диетой. С другой стороны, было показано, что фосфорилирование маркеров фиброза было ингибировано лечением соединением настоящего изобретения.

Такие результаты испытаний означают, что сигнал воспалительного процесса и фиброза печени значительно увеличился у ob/ob мышей с MCD диетой, но соединение настоящего изобретения может применяться как потенциальное лекарственное средство для лечения, эффективно блокирующее развитие фиброза печени, тем самым улучшая состояние печени.

Как объяснено выше, подтвердилось, что (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин согласно настоящему изобретению ингибирует накопление TG, накопление холестерина и повреждение печени в модели жировой дистрофии печени страдающего ожирением, блокирует оксидативный стресс и окисление липидов, усиливает активацию дыхательной цепи митохондрий и активацию митохондрий, ингибирует активацию воспалительных цитокинов и макрофагов (клетка Купфера) и имеет эффективность в ингибировании воспалительного процесса и фиброза печени в модели стеатогепатита, сопутствующего ожирению. Следовательно, (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемая соль согласно настоящему изобретению может эффективно ингибировать жировую дистрофию печени, воспалительный процесс и фиброз печени и планируется применяться соответствующим образом для предупреждения или лечения НАЖБП, конкретно НАСГ.

1. Применение (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольного стеатогепатита, где неалкогольный стеатогепатит вызван накоплением жира в печени и оксидативным стрессом или воспалительными цитокинами, полученными из жировой печени.

2. Применение по п. 1, где (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амин или его фармацевтически приемлемая соль ингибирует накопление жира в печени и воспаление и фиброз печени посредством ингибирования оксидативного стресса или воспалительных цитокинов, полученных из жировой печени.