Способ лечения язв диабетической стопы, пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений

Группа изобретений относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использована для изготовления лекарственного средства для лечения язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений. Для этого применяют композицию, состоящую из пентамерного процианидина типа А в концентрации, варьирующей от 55 масс. % до 99 масс. %, тримерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %, и тетрамерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %. Также предложено применение композиции, состоящей из пентамерного процианидина типа А в концентрации, варьирующей от 55 масс. % до 99 масс. %, тримерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %, тетрамерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %, и фармацевтически приемлемого эксципиента в концентрации, варьирующей от 0,5% до 44%. Группа изобретений обеспечивает лечение язв диабетической стопы, пролежневых язв, варикозных язв и их осложнений. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 табл., 8 ил., 4 пр.

 

Область техники

Настоящее изобретение связано с лечением язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений, таких как бактериальная инфекция, гангрена, некроз тканей, ампутация, потеря ближайшей конечности и септицемия, за счет введения фармацевтической композиции, включающей пентамерный процианидин типа А, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин, возможно вместе с эксципиентом.

Предшествующий уровень техники

Катехины представляют собой полифенольные метаболиты растений, которые относятся к семейству флаваноидов. Катехины и эпикатехины представляют собой эпимеры с (-)-эпикатехином и (+)-катехином, являющимися наиболее распространенными в природе оптическими изомерами. Процианидины или конденсированные танины представляют собой олигомеры флавоноидов, строительными блоками которых являются (+)-катехин и (-)-эпикатехин. Они присутствуют в большом количестве в царстве растений в фруктах, коре, листьях и семенах, где они обеспечивают защиту от света, окисления и травоядных.

Процианидины обнаруживают во множестве растений, в основном яблоках, сосновой коре, коре коричного дерева, околоплодниках личи, арахисе, семечках винограда, какао, кожице винограда, чернике, клюкве, черной смородине, зеленом чае и черном чае. На основании связи между последующими мономерными звеньями процианидины классифицируют как полифенолы типов А, В или С.Обычно, связь между последующими мономерными звеньями процианидинов, присутствующая между четвертой позицией «верхнего» звена и восьмой позицией «нижнего» звена, дает тип В процианидин.

Альтернативно, связь может возникать между С₄ «верхнего» звена и С₆ нижнего звена, приводя к процианидину типа С. Полифенолы типов В и С в большом количестве присутствуют во множестве растительных источников. В случае, когда последующие мономерные звенья связаны за счет эфирной связи между С₂ и С₄ «верхнего» звена и кислородом в С₇-позиции и С₆/С₈-позициях (соответственно) нижнего звена, образуется процианидин типа А.

Сахарный диабет, или просто, диабет, представляет собой группу заболеваний, характеризующихся высокими уровнями глюкозы в крови, возникающими в результате нарушений способности организма человека образовывать и/или использовать инсулин. Диабет представляет собой заболевание, ассоциированное с осложнениями. Одним из значимых осложнений, ассоциированных с диабетом, является изъязвление диабетической стопы, которое может приводить к ампутации и септицемии. Journal of American Medical Association описывает язвы диабетической стопы (ЯДС) как нарывы и раны на ногах, возникающие у людей с диабетом, при условии ненормально высоких уровней сахара в крови. Язвы диабетической стопы обычно возникают на стопе с недостаточным прохождением нервных импульсов и недостаточным кровообращением, часто связанным с вредным давлением на части стопы.

Люди с диабетом имеют 12-25% пожизненный риск развития язв стопы. Хронические незаживающие язвы диабетической стопы (ЯДС) возникают приблизительно у 15% людей с диабетом. Язвы диабетической стопы представляют собой серьезное осложнение диабета и предшествуют 84% ампутаций нижних конечностей, связанных с диабетом (S. Guo and L. A. DiPietro 2010). Язвы стопы обуславливают значительную заболеваемость, ухудшение качества жизни, повышенную стоимость лечения и являются наиболее важным фактором риска для ампутации нижних конечностей. К сожалению, предложенное лечение язв стопы часто является несоответствующим, приводя к осложнениям и чрезмерно длительному времени заживления.

Диабетическая невропатия приводит к пониженному болевому восприятию на поздних стадиях диабета. Утрата боли и чувствительности возникает в присутствии сенсорной невропатии и пациент продолжает использовать ногу, несмотря на присутствие язв стопы. Заболевание периферических сосудов может приводить к ишемии стопы и непосредственно взывать ишемическое изъязвление стопы из-за индуцированного гипергликемией атеросклероза. Это в дальнейшем приводит к сужению и закупорке артерий, что вызывает деформацию красных кровяных телец (RBC) и приводит к ухудшенному снабжению ног кровью и кислородом.

На данном этапе, повышенный уровень глюкозы в крови, пониженное поступление крови и кислорода к месту поражения и повышенная инфекция ухудшают этапы нормального заживления ран за счет гипоксии раны. Данная гипоксия становится длительной и усиливает фазу воспаления, приводя к повышенному формированию конечных продуктов усиленного гликозилирования (AGEs), которые нарушают образование грануляционной ткани и эпителизацию.

В то же время, нарушения клеточных функций, индуцированные гипергликимией, такие как нарушения хемотаксиса и фагоцитоза лейкоцитов ослабляют способность хозяйских лейкоцитов к борьбе с бактериальной инфекцией. Бактериальная инфекция склонна к продукции эндотоксинов, что приводит к местному отеку и тромбозу, которые могут в дальнейшем обуславливать ишемический некроз, приводя к образованию гангренозной ткани, при этом гангрена может быть сухой или влажной. Влажная гангрена является наиболее распространенной формой, поскольку возникает в конечностях в результате закупорки артерий и тяжелой бактериальной инфекции области некроза.

Незаживающая язва диабетической стопы с повышенными уровнями бактериемии в результате некроза может приводить к сепсису. Врачи-клиницисты часто принимают решение об удалении области язвы диабетической стопы, чтобы избежать смертельно опасного сепсиса. Однако, рана после удаления также может приводить к незаживающей ране диабетической стопы.

Пролежневая язва представляет собой область кожи, которая поражается при постоянном давлении на кожу. Постоянное давление является первичным фактором риска для патогенеза очаговых поражений. Пролежневые язвы развиваются при компрессии капилляров, снабжающих кожу и подкожные ткани, достаточной для препятствования кровоснабжению, что в конечном итоге приводит к некрозу тканей. Общеизвестные как пролежни, пролежневые язвы не заживают из-за закупорки кровеносных сосудов в пораженной зоне. Пролежневые язвы трудно заживают из-за нарушения кровоснабжения в поврежденной зоне. При отсутствии соответствующего лечения открытые пролежневые язвы могут становиться источником боли, инвалидизации, инфекции и септицемии.

Современные способы лечения ЯДС и сопутствующих осложнений являются системными или местными применениями. Системные применения включают применение антибиотиков для лечения ЯДС. Как объяснено выше из-за естественных свойств ЯДС и пролежневых язв, циркуляция лекарственного средства в дистальных частях тела ухудшена, и введение антибиотиков орально или парентерально может быть неэффективным. Так схема лечения антибиотиком может быть неэффективна в случае ЯДС и пролежневых язв, поскольку лекарственное средство не достигает пораженных зон, что приводит к некрозу и дальнейшим осложнениям. Аналогично местные применения антибиотиков также не дают положительного результата.

В случае местных применений, для лечения ЯДС применяют гель 0,01% REGRANEX (бекаплермин). REGRANEX представляет собой рекомбинантный фактор роста, продуцируемый тромбоцитами, производимый Healthpoint Biotherapeutics. Информация о продукте REGRANEX содержит предупреждение о повышенном уровне смертности на фоне злокачественных новообразований у пациентов, применяющих 3 или более тюбиков геля Regranex в постмаркетинговом ретроспективном когортном исследовании.

Advanced Tissue Sciences разработали DERMAGRAFT, заместитель кожи, применяемый для закрытия раны ЯДС. Гель плермин представляет собой рекомбинантный продуцируемый тромбоцитами фактор роста, недавно выпущенный Dr. Reddy's Laboratories для лечения ЯДС. Данные местные применения неэффективны из-за отсутствия системного кровотока, поставляющего кислород и питательные вещества к ЯДС. Таким образом, отсутствие кислорода и питательных веществ всегда приводит к некротической гибели клеток, вызывающей септицемию. Местные агенты и повязки могут снижать, но не предотвращать, неизбежный прогресс повреждения более глубоких слоев. Регенерация не может иметь место до достижения равновесия, а следовательно заживление замедленно.

Возможности лечения пролежневых язв включают местные применения, устройства, снижающие давление, и применение антибиотиков. Применения, такие как прозрачные пленки, гидрогели и гидроколлоидные повязки, действуют местно, но они не могут обеспечить рану кислородом и необходимыми питательными веществами. Устройства, снижающие давление, применяют для перераспределения локального давления, но они эффективны только в качестве меры профилактики образования пролежневых язв. Они не являются эффективным решением для уже существующих пролежневых язв. Лечение антибиотиками неэффективно при пролежневых язвах, поскольку лекарственное средство не достигает дистальных частей раны, что приводит к некрозу и дальнейшим осложнениям.

Компрессионная терапия является стандартным лечением венозных язв. Способы включают неэластичную, эластичную и прерывистую пневматическую компрессию. Противопоказания для компрессионной терапии включают клинически значимые заболевания артерий и декомпенсированную сердечную недостаточность. Показано, что местное отрицательное давление, также называемое вакуум-терапия, помогает уменьшить глубину раны и объем по сравнению с терапией гидроколлоидным гелем и марлевой повязкой для ран любой этиологии. Данную терапию обычно не используют в клинической практике, из-за трудностей применения, как местного отрицательного давления, так и сдавливающей повязки на поврежденную ногу.

Трансплантация кожи представляет собой тип хирургической операции, которая может быть применена для восстановления повреждения кожи, вызванного гангреной. Хирургическая операция обладает некоторыми недостатками, такими как различия в структуре и толщине, невозможностью поместить поддерживающий хрящевой трансплантат под кожу на время восстановления и дополнительным неудобством в области донорского участка.

Другие возможности включают хирургическое удаление отмерших тканей, применение антибиотиков с ограничениями хирургического дискомфорта и ограниченным поступлением кислорода и питательных веществ в рану с продолжающей распространение инфекцией. Гипербарическая оксигенотерапия представляет собой другую возможность для преодоления влияния гипоксии тканей, но данное лечение имеет ограничения по доступности и требует проведения прикладных исследований механизма действия, для оценки соотношения риск: польза системной оксигенной терапии в лечении.

Bhaskaran et al. (US 2011/0039923 A1) раскрывают композицию, включающую пентамерный флаваноид в концентрации варьирующей от приблизительно 55 масс. % до приблизительно 99 масс. %, тримеры и тетрамеры, каждый в концентрации, варьирующей от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 35 масс. %. Данный документ также раскрывает способ получения упомянутой композиции. В дальнейшем, данный документ описывает применение упомянутой композиции для лечения и терапии ВИЧ-инфекции, СПИДа и гриппа. Однако данный документ не подтверждает и не описывает применение упомянутой композиции при заживлении язв диабетической стопы посредством перорального введения композиции, для предотвращения бактериальной инфекции, приводящей к гангрене при язвах диабетической стопы и снижения вероятности ампутации и потери конечности.

Bhaskaran et al. (WO 2012/014165 А1) раскрывает способ терапии бронхо-констриктивных состояний, упомянутый способ, предусматривающий введение композиции, включающей пентамерный процианидин типа А, варьирующий от приблизительно 55 масс. % до приблизительно 99 масс. %, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин каждый в концентрации, варьирующей от 0,5 масс, до приблизительно 35 масс. %, возможно вместе с одним или более эксципиентами. Также раскрывает, что бронхо-констриктивное состояние выбрано из группы, включающей аллергические риниты, астму и хроническое обструктивное легочное заболевание или любые их комбинации. Однако данный документ не подтверждает и не описывает применение упомянутой композиции при заживлении язв диабетической стопы.

Краткое описание изобретения

Таким образом, настоящее раскрытие относится к способу терапии язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений, упомянутому способу, предусматривающему введение композиции, включающей петамерный процианидин типа А, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин, возможно вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом, субъекту, нуждающемуся в этом.

Краткое описание графических материалов

Для легкого понимания и применения на практике данного раскрытия будут сделаны ссылки на воплощения-примеры, проиллюстрированные при помощи ссылки на сопутствующие фигуры. Фигуры вместе с детальным описанием, приведенным ниже, включены в и формируют часть описания и служат для дальнейшей иллюстрации воплощений и объяснения различных принципов и преимуществ в соответствии с настоящим раскрытием, где:

На фигуре 1 представлена язва диабетической стопы, которая привела к гангрене пальца стопы и ампутации двух пальцев.

На фигуре 2 представлена эффективность настоящей композиции при лечении язвы диабетической стопы на основе данных фотографии, полученных в течение интервалов базовой линии.

На фигуре 3 представлена эффективность настоящей композиции при лечении язвы диабетической стопы на основе данных фотографии, полученных в течение интервала приблизительно 2 месяца.

На фигуре 4 представлена эффективность настоящей композиции при лечении язвы диабетической стопы на основе данных фотографии, полученных в течение интервала приблизительно 3 месяца.

На фигуре 5 представлена эффективность настоящей композиции при лечении язвы диабетической стопы на основе данных фотографии, полученных в течение интервала приблизительно 7 месяцев.

На фигуре 6 представлена эффективность настоящей композиции при лечении язвы диабетической стопы на основе данных фотографии, полученных в течение интервала приблизительно 11 месяцев.

На фигуре 7 представлен график % закрытия раны в отношении времени на 13 день после образования раны.

На фигуре 8 представлен график линейно-регрессионного анализа для (а) нормальной группы, (b) группы контроля ДВ и (с) группы настоящей композиции 100 мг/кг.

Подробное описание изобретения

Настоящее раскрытие относится к способу лечения язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений, включающему введение композиции, содержащей пентамерный процианидин типа А, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин, возможно вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом, субъекту, нуждающемуся в этом.

В воплощении настоящего раскрытия пентамерный процианидин типа А присутствует в концентрации, варьирующей от приблизительно 55 масс. % до приблизительно 99 масс. %, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин, каждый присутствуют в концентрации варьирующей от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 35 масс. %; и фармацевтически приемлемый эксципиент присутствует в концентрации от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 99 масс. %.

В предпочтительном воплощении фармацевтически приемлемый эксципиент присутствует в концентрации, варьирующей от приблизительно 0,5% до приблизительно 44%.

В другом воплощении настоящего раскрытия пентамерный процианидин типа А присутствует в концентрации, варьирующей от приблизительно 80 масс. % до приблизительно 90 масс. %, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин каждый присутствуют в концентрации от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 20 масс. %.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия, сопутствующее осложнение выбрано из группы, включающей бактериальную инфекцию, гангрену, некроз тканей, ампутацию, потерю ближайшей конечности и септицемию или любые их комбинации.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия фармацевтически приемлемый эксципиент выбран из группы, включающей камедь, гранулирующий агент, связующее вещество, лубрикант, разрыхлитель, подсластитель, добавку, растворитель, вещество, способствующее скольжению, антиадгезионный агент, антистатический агент, антиокислитель, поверхностно-активное вещество, усилитель вязкости, растительный целлюлозный материал, краситель, ароматизатор, покрывающий агент, пластификатор, консервант, суспендирующий агент, эмульгирующий агент и сферообразующий агент или любые их комбинации.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия композицию получают в дозированных формах, выбранных из группы, включающей твердые пероральные лекарственные препараты, жидкие пероральные лекарственные препараты, парентеральные препараты, фитоцевтическое, нутрицевтическое и медицинское питание или любые их комбинации.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия твердый оральный препарат выбран из группы, включающей таблетки, капсулы, пастилки, таблетки для рассасывания, диспергируемый порошок, диспергируемые гранулы или любые их комбинации.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия жидкий пероральный препарат выбран из группы, включающей водную или масляную суспензию, эмульсию, капли, эмульсию в твердой или мягкой гелевой капсуле, сироп, эликсир или любые их комбинации.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия, парентеральный препарат выбран из группы, включающей внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутримышечное депо, подкожную инъекцию, чрескожную инъекцию или любые их комбинации.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия композицию вводят в ежедневной дозе, варьирующей от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг, предпочтительно варьирующей от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела упомянутого субъекта.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия субъект представляет собой млекопитающее, включая человека.

В другом воплощении настоящего раскрытия введение пероральной фармацевтической композиции, включающей пентамерный процианидин типа А, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин, возможно выполняют вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом(ми).

В другом воплощении настоящего раскрытия другие пероральные препараты, такие как таблетки, жидкие пероральные препараты и порошки или гранулы также получают посредством применения других эксципиентов, выбранных из списка, включающего эксципиенты.

В еще одном воплощении настоящего раскрытия настоящая композиция относится к пентамерному процианидину типа А в концентрации, варьирующей от приблизительно 55 масс. % до приблизительно 99 масс. %, тримерному процианидину и тетрамерному процианидину, каждому в концентрации, варьирующей от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 35 масс. %; и фармацевтически приемлемый эксципиент присутствует в концентрации, варьирующей от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 99,9 масс. %.

В воплощении настоящего раскрытия термин «терапия» или «лечение» включает предотвращение, лечение и заживление состояния заболевания или расстройства или патологических воздействий или побочных эффектов. Термин также охватывает поддержание оптимального состояния и предупреждение дальнейшего прогресса состояния заболевания или расстройства или патологических воздействий или побочных эффектов.

В другом воплощении настоящего раскрытия настоящую композицию получают в виде дозированного препарата приемлемого для лечения язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений, применяя ежедневную дозу, варьирующую от приблизительно 1 мг/кг до приблизительно 100 мг/кг массы тела субъекта, предпочтительно варьирующую от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела субъекта.

В другом воплощении настоящего раскрытия дозу настоящей композиции для субъектов вычисляют согласно руководству для промышленности.

В воплощении настоящего раскрытия, исследования на животных проводят с дозами настоящей композиции 10 мг/кг, 30 мг/кг и 100 мг/кг дважды в день.

Настоящее раскрытие в дальнейшем дополнено приведенными ниже примерами. Однако данные примеры не должны трактоваться с целью ограничения объема настоящего раскрытия.

Примеры

Пример 1

Получение настоящей композиции

Настоящую композицию, включающую флаваноид пентамерный процианидин типа А в концентрации, варьирующей от приблизительно 55 масс. % до приблизительно 99 масс. %, тримеры и тетрамеры флавоноида процианидина, каждый в концентрации, варьирующей от приблизительно 0,5 масс. % до приблизительно 35 масс. % получают в капсулах посредством смешивания с приблизительно 2 масс. % микрокристаллической целлюлозы, приблизительно 0,5 масс. % кросповидона и приблизительно 0,2 масс. % стеарата магния. Данной смесью заполняют капсулы.

Аналогичный препарат настоящей композиции получают посредством добавления соответствующего эксципиента(ов), выбранного из списка, включающего: гранулирующий агент, связующий агент, смазывающее вещество, разрыхлитель, подсластитель, вещество, способствующее скольжению, антиадгезивное вещество, антистатический агент, поверхностно-активное вещество, антиокислитель, камедь, покрывающий агент, краситель, ароматизатор, пластификатор, консервант, суспендирующий агент, эмульгатор, растительный целлюлозный материал и сферообразующий агент или любую их комбинацию.

В воплощении настоящего раскрытия сахариды и их производные, целлюлозу или стеариновую кислоту применяют в качестве фармацевтически приемлемого эксципиента.

Тип препарата выбирают из группы, включающей твердый пероральный препарат, жидкий пероральный препарат, парентеральный препарат, фитоцевтическое, нутрицевтическое и медицинское питание или любые их комбинации.

В воплощении настоящего раскрытия твердый пероральный препарат выбран из группы, включающей таблетки, капсулы, пастилки, таблетки для рассасывания, диспергируемый порошок, диспергируемые гранулы или любые их комбинации.

В воплощении настоящего раскрытия жидкий пероральный препарат выбран из группы, включающей водную или масляную суспензию, эмульсию, капли, эмульсию в твердых и мягких гелевых капсулах, сироп, эликсир или любые их комбинации.

В воплощении настоящего раскрытия парентеральный препарат выбран из группы, включающей внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутримышечное депо, подкожное депо, чрескожную инъекцию или любые их комбинации.

В воплощении настоящего раскрытия специалисты в области техники смогут достичь аналогичной эффективности настоящей композиции за счет применения других препаратов, указанных выше. В зависимости от пути введения применяют различные эксципиенты/носители.

Специалисты в области техники смогут выбрать приемлемый препарат настоящей композиции для лечения язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующего осложнения, при помощи ежедневной дозы, варьирующей от приблизительно 1 мг/кг массы тела субъекта, или предпочтительно ежедневной дозы, варьирующей от приблизительно 10 мг/кг до приблизительно 25 мг/кг массы тела субъекта.

Пример 2

Оценка заживляющей активности настоящей композиции в отношении заживления язв диабетической стопы на модели индуцированных стрептозотоцином (СТЗ) язв диабетической стопы крыс

Диабет индуцировали у крыс Спраг-Доули (возраст приблизительно 6-7 недель, масса - приблизительно 180-200 г) при помощи стандартного способа интраперитонеальной (ип) инъекции стрептозотоцина (СТЗ) (приблизительно 50 мг/кг, ин). После приблизительно 48 часов, крыс с уровнем глюкозы выше 300 мг/дл (показатель диабета) отбирали для исследования.

После приблизительно 14 дней введения СТЗ формировали рану, и этот день определяли как день ноль. Рану формировали на правой задней лапе (стопа) каждой крысы. Каждой крысе давали анестезию посредством интраперитонеальной инъекции приблизительно 80 мг/кг кетамина. Прямоугольный рисунок наносили на дорсальную поверхность правой задней лапы (стопа) при помощи гибкой матрицы из прозрачного пластика и затем удаляли всю толщину слоя кожи со стандартной областью приблизительно 2 мм × 5 мм.

Крысам вводили или растворитель-дистиллированную воду, приблизительно 10 мг/кг массы тела (диабетическая рана, контроль ДВ) или настоящую композицию (приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг или приблизительно 100 мг/кг, орально) в течение приблизительно 13 дней после индуцирования диабетической раны. Отдельную группу крыс без индуцирования диабета также поддерживали с формированием раны (определены как нормальный контроль раны).

Следующие параметры измеряли в различные дни после формирования раны:

- Масса тела (г),

- Уровень глюкозы в сыворотке (мг/дл), и

- Площадь раны (мм²).

На 13-ый день лечения проводили гистологическое исследование ткани раны и седалищного нерва нескольких крыс после вывода их из эксперимента.

На день 0, 3, 6, 9 и 13, раны фотографировали цифровой камерой Nikon S9100. Площадь раны (ОП) вычисляли при помощи программного обеспечения для анализа изображения (ImageJ, NIH, США). Процент (%) закрытия раны вычисляли при помощи следующей формулы:

где, ПР1 = площадь раны на день 0 (максимальный размер раны); и ПР2 = площадь раны на день 3, 6, 9 или 13.

График % закрытия раны в зависимости от времени (в днях) формирования раны строили при помощи программного обеспечения (Graphpad Prism v 5), и проводили линейный регрессионный анализ (Фигура 7). Значение X при Y=50% брали за СТ50 (время полузакрытия, время, необходимое для закрытия раны на 50%).

Результаты:

Лечение проводили при помощи введения настоящей композиции дважды в день в течение приблизительно 13 дней, начиная от формирования раны у крыс с диабетом. Данные анализировали попарно при помощи дисперсионного анализа с последующим тестом Бонферрони.

*Р<0,05, **Р<0,01, ***Р<0,001 по сравнению с контрольной группой (ДВ) и ^#Р<0,05, ^##P<0,01, ^###Р<0,001 по сравнению с нормальной группой.

- плюс (+ положительная величина) означает уменьшенный размер раны (закрытие раны),

- минус (-отрицательная величина) означает увеличенный размер раны.

Заключение:

Закрытие раны было отрицательным в контроле диабетической раны, что свидетельствовало об ухудшении состояния раны. Закрытие раны было положительным в нормальной группе и в группе, получавшей лечение настоящей композицией, что свидетельствовало о заживлении раны. Нормальное закрытие раны составляло приблизительно 91,08% за приблизительно 13 дней. Состояние диабетической раны в отсутствии лечения (контрольная группа) ухудшилось, о чем свидетельствовал увеличение размера раны до приблизительно 129%.

Диабетические раны в группе, получавшей лечение настоящей композицией, демонстрировали % закрытия раны приблизительно 47%, приблизительно 31% и приблизительно 77% при приблизительно 10 мг/кг, приблизительно 30 мг/кг и приблизительно 100 мг/кг соответственно, перорально, дважды в день в один и тот же период. Лечение настоящей композицией продемонстрировало существенное закрытие диабетической раны (заживление ран) после лечения в течение приблизительно 9 дней и далее.

Исходя из эксперимента, важно отметить, что естественный механизм заживления нормальной раны продемонстрирован в контрольной группе. Но естественный процесс заживления был ухудшен или осложнен при отсутствии лечения диабетической раны (контрольная группа), и состояние диабетической раны было существенно хуже. Но в группах, получавших лечение настоящей композицией, ухудшения состояния диабетической раны не было отмечено, и начался процесс заживления. Группы, получавшие лечение настоящей композицией, демонстрировали очень хороший процесс заживления по сравнению с контрольной группой диабетической раны.

График % закрытия раны против времени в днях получен при помощи программного обеспечения (Graphpad Prism v 5), и выполнен линейный регрессионный анализ. Значение X при Y=50% взято в качестве СТ50 (время половинного закрытия, время, необходимое для закрытия раны на 50%). Положительное (+величина) значение наклона и СТ50 означают закрытие раны, отрицательное значение (-величина) наклона и СТ50 означают не закрытие и, таким образом ухудшение раны. График представлен на фигуре 8.

Заключение: положительный наклон линии регрессии отображает степень закрытия раны (заживление). Наклон нормальной группы (фигура 8а) является положительным (показывающим закрытие раны), при этом наклон в группе контроля ДВ (фигура 8b) является отрицательным (показывая отсутствие заживления, ухудшение состояния раны). Лечение настоящей композицией демонстрировало положительный наклон линии, что означает заживление раны.

СТ50 (время необходимое для закрытия раны на 50%) приблизительно 8,4 дней отображает заживление раны в нормальной группе. Однако СТ50 приблизительно 5,92 дней отображает отсутствие закрытия и ухудшение состояния раны в группе ДВ. Это дает нам возможность заключить, что существует необходимость специфичного лечения ран у пациентов с диабетом. Группы настоящей композиции приблизительно 10 мг/кг (фигура 8 с), приблизительно 30 мг/кг (фигура 8d) и приблизительно 100 мг/кг (фигура 8е) демонстрировали СТ 50 приблизительно 12,13 дней, приблизительно 14,48 дней и приблизительно 9,82 дня соответственно. Что отражает эффективность настоящей композиции при заживлении диабетических ран (язва диабетической стопы).

Пример 3

Эффект настоящей композиции у субъекта, страдающего от язвы диабетической стопы

Исследование проводили для оценки эффективности настоящей композиции у людей, страдающих язвой диабетической стопы. Выбранный субъект (мужчина, возраст 85 лет) представляет собой пациента с хроническим диабетом, с сахарным диабетом второго типа, диагностируемым в течение более 25 лет. Субъект получал инсулин вместе с множеством пероральных лекарственных препаратов. У субъекта развилась язва диабетической стопы, которая привела к гангрене пальца стопы и ампутации двух пальцев (фигура 1).

Рана после ампутации в дальнейшем стала незаживающей язвой с некрозом в области раны. В начале исследования субъект подвергался повышенному риску дальнейшей ампутации с целью уменьшения прогресса септического состояния.

Дозу вычисляли согласно руководству USFDA для индустрии соответственно массе субъекта, и субъект получал капсулы настоящей композиции в дозе приблизительно 300 мг дважды в день в течение периода приблизительно 11 месяцев. Эффективность настоящей композиции анализировали на основе данных фотографии, сделанной в течение интервалов, таких как базовая линия (фигура 2), приблизительно 2 месяца (фигура 3), приблизительно 3 месяца (фигура 4), приблизительно 7 месяцев (фигура 5) и приблизительно 11 месяцев (фигура 6).

В результате инициации введения настоящей композиции, у субъекта происходила кератинизация язвы диабетической стопы и постепенное уменьшение некроза. Также данное лечение позволило избежать дополнительной необходимости ампутации и любых осложнений, приводящих к септицемии. Данные фотографии (на фигурах 1-6) показывают, что в язве диабетической стопы начался процесс заживления, и через приблизительно 11 месяцев язва полностью затянулась. Было отмечено, что язва полностью заживает и после выполнения лечения не требует дальнейшей ампутации, таким образом, лечение позволило избежать дальнейшей потери конечности.

Пример 4

Эффект настоящей композиции у субъекта страдающего от пролежневой язвы.

Исследование выполняли для оценки эффективности настоящей композиции у субъекта-человека, страдающего от пролежневой язвы. Выбранный субъект (женщина, возраст 80 лет) претерпел операцию по замене бедренного сустава и был госпитализирован. У субъекта развились пролежни на нижней части тела, и размер язвы составлял приблизительно 2 дюйма в диаметре и приблизительно 1,5 дюйма в глубину. В начале исследования пролежневые язвы почти достигали позвоночника субъекта.

Дозу для субъекта вычисляли согласно руководство USFDA для индустрии, в расчете на массу тела субъекта, и субъект получал капсулы настоящей композиции в дозе приблизительно 300 мг дважды в день в течение периода приблизительно 9 месяцев. Эффективность настоящей композиции анализировали на основе измерения пролежневых язв в течение интервалов, таких как базовая линия, приблизительно 2 месяца, приблизительно 4 месяца, приблизительно 6 месяцев и приблизительно 8 месяцев.

В результате инициации введения настоящей композиции у субъекта отмечалась кератинизация язвы и постепенное снижение некроза. В таблице ниже показано, что начался процесс заживления пролежневой язвы и приблизительно через 6 месяцев произошло полное затягивание язвы. После 8 месяцев у субъекта отмечалось полное закрытие пролежневой язвы.

Таким образом, из результатов, приведенных в упомянутой таблице можно заключить, что введение настоящей композиции субъекту позволило избежать любых осложнений, приводящих к септицемии.

1. Применение композиции, состоящей из пентамерного процианидина типа А в концентрации, варьирующей от 55 масс. % до 99 масс. %, тримерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %, и тетрамерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %, для изготовления лекарственного средства для лечения язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений, выбранных из группы, включающей инфекцию, гангрену, некроз тканей, ампутацию и септицемию или любую их комбинацию.

2. Применение композиции, состоящей из пентамерного процианидина типа А в концентрации, варьирующей от 55 масс. % до 99 масс. %, тримерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. %, тетрамерного процианидина в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 35 масс. % и фармацевтически приемлемого эксципиента в концентрации, варьирующей от 0,5% до 44%, для изготовления лекарственного средства для лечения язв диабетической стопы (ЯДС), пролежневых язв, варикозных язв и сопутствующих осложнений, выбранных из группы, включающей инфекцию, гангрену, некроз тканей, ампутацию и септицемию или любую их комбинацию.

3. Применение по п. 1, где пентамерный процианидин типа А присутствует в концентрации, варьирующей от 80 масс. % до 90 масс. %, тримерный процианидин и тетрамерный процианидин, каждый в концентрации, варьирующей от 0,5 масс. % до 20 масс. %.

4. Применение по п. 2, где фармацевтически приемлемый эксципиент выбран из группы, включающей камедь, гранулирующий агент, связующее вещество, смазывающее вещество, разрыхлитель, подсластитель, добавку, растворитель, вещество, способствующее скольжению, антиадгезивное вещество, антистатический агент, антиокислитель, поверхностно-активное вещество, усилитель вязкости, растительно-целлюлозный материал, краситель, ароматизатор, покрывающий агент, пластификатор, консервант, суспендирующий агент, эмульгатор и сферообразующий агент или любые их комбинации.

5. Применение по п. 1 или 2, где композицию получают в виде дозированных форм, выбранных из группы, включающей твердый пероральный препарат, жидкий пероральный препарат, парентеральный препарат и фитоцевтический препарат, или любую их комбинацию.

6. Применение по п. 5, где твердый пероральный препарат выбран из группы, включающей таблетки, капсулы, пастилки, таблетки для рассасывания, диспергируемый порошок, диспергируемые гранулы или любые их комбинации.

7. Применение по п. 5, где жидкий пероральный препарат выбран из группы, включающей водную или масляную суспензию, эмульсию, капли, эмульсию в твердой или мягкой гелевой капсуле, сироп, эликсир или любую их комбинацию.

8. Применение по п. 5, где парентеральный препарат выбран из группы, включающей внутривенную инъекцию, внутримышечную инъекцию, внутримышечное депо, подкожную инъекцию, чрескожную инъекцию или любые их комбинации.

9. Применение по п. 1 или 2, где композицию вводят субъекту, нуждающемуся в этом, в ежедневной дозе, варьирующей от 1 мг/кг до 100 мг/кг массы тела упомянутого субъекта, предпочтительно варьирующей от 10 мг/кг до 25 мг/кг массы тела упомянутого субъекта.

10. Применение по п. 9, где субъект представляет собой млекопитающее, включая человека.