Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью



Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью
Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью

Владельцы патента RU 2665167:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью. Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью, в котором листья толокнянки обыкновенной экстрагируют 70% этиловым спиртом, осуществляя вначале две экстракции при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем при нагревании на кипящей водяной бане в течение 30 мин; объединенное извлечение упаривают под вакуумом, смешивают с силикагелем в соотношении исходной массы сырья и сорбента 3:1 и высушивают на воздухе; высушенный порошок наносят на слой силикагеля, сформированный в виде взвеси в хлороформе, и подвергают хроматографическому разделению с использованием смесей хлороформа и этилового спирта в градиентном режиме с последующим выделением из фракций, полученных при элюировании смесью растворителей хлороформ-спирт этиловый 95% (93:7), этилового эфира n-дигалловой кислоты - вещества с антибактериальной и противогрибковой активностью. Вышеописанный способ позволяет получить вещество с более высокой антибактериальной и противогрибковой активностью, исключить использование метилового спирта. 1 ил., 1 табл.

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу получения фармацевтической субстанции растительного происхождения, обладающей антибактериальной и противогрибковой активностью.

К источникам биологически активных соединений, обладающих антиабактериальной и противогрибковой активностью, можно отнести толокнянку обыкновенную [Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng., сем. Вересковые - Ericaceae], которая является фармакопейным растением на протяжении нескольких десятилетий во многих странах мира (Российская Федерация, США, Германия, Эстония, Франция и др.) (1, 2). Листья толокнянки обыкновенной используются в качестве антисептического, противовоспалительного, диуретического средства для лечения инфекционных заболеваний мочевыводящих путей (4). Антибактериальное действие препаратов из листьев толокнянки в отношении многих видов микроорганизмов (Staphylococcus aureus SG 511, Escherichia coli, Proteus vulgaris, Streptococcus faecalis, Enterobacter aerogenes и др.) подтверждено во многих исследованиях (2).

Несмотря на изученный химический состав, недостаточно данных о фармакологической активности доминирующих индивидуальных соединений толокнянки обыкновенной. Предполагается, что антибактериальным действием обладает входящий в состав листьев арбутин (2, 3). В связи с этим представляется актуальным выделение веществ, обусловливающих антибактериальную активность лекарственных средств растительного происхождения, для получения фармацевтических субстанций с более высокой активностью.

Известен способ получения стандартного образца арбутина из сухого экстракта толокнянки (4) путем двухкратной обработки водного раствора экстракта толокнянки н-бутанолом, сгущения экстракта, смешивания кубового остатка с оксидом алюминия и хроматографирования на оксиде алюминия в соотношении исходного экстракта и сорбента 1:4 при элюировании метанолом. Элюат собирают в десятикратном количестве по объему по сравнению с массой сорбента. Для кристаллизации арбутина используют смесь хлороформ-спирт 1,2:1. Для дополнительной очистки используют активированный уголь марки ОУ-А в количестве 0,1-0,15 от массы технического арбутина к его метанольному раствору, который после добавления угля подвергают кипячению и охлаждению.

Данный способ взят за прототип изобретения.

Недостатками данного способа являются:

1) выход технического арбутина составляет 65,4%;

2) использование опасных растворителей - метанола, обладающего выраженными токсическим свойствами и хранение которого осуществляется в специально оборудованных помещениях.

Целью изобретения является выделение из толокнянки обыкновенной вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью.

Заявляемый способ получения вещества с антибактериальной и противогрибковой активностью реализуется следующим образом: листья толокнянки обыкновенной экстрагируют 70% этиловым спиртом, осуществляя вначале две экстракции при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем при нагревании на кипящей водяной бане в течение 30 мин; объединенное извлечение упаривают под вакуумом, смешивают с силикагелем в соотношении исходной массы сырья и сорбента 3:1 и высушивают на воздухе; высушенный порошок наносят на слой силикагеля, сформированный в виде взвеси в хлороформе, и подвергают хроматографическому разделению с использованием смесей хлороформа и этилового спирта в градиентном режиме с последующим выделением из фракций, полученных при элюировании смесью растворителей хлороформ-спирт этиловый 95% (93:7), этилового эфира n-дигалловой кислоты - вещества с антибактериальной и противогрибковой активностью.

Контроль за разделением веществ осуществляли с помощью ТСХ-анализа на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-этанол (9:1), хлороформ-этанол-вода (26:16:3), а также н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2). Вещество, выделенное из фракций, полученных при элюировании смесью растворителей хлороформ-спирт этиловый 95% (93:7), было идентифицировано с помощью комплекса физико-химических методов (тонкослойная хроматография, УФ-спектроскопия, ЯМР-спектроскопия, масс-спектрометрия) как этиловый эфир n-дигалловой кислоты. Выход этого вещества составил 0,8% от массы воздушно-сухого сырья, или 80% от содержания этилового эфира n-дигалловой кислоты в сырье).

Было проведено исследование антибактериальной и противогрибковой активности in vitro этилового эфира n-дигалловой кислоты в сравнении с арбутином и отваром из листьев толокнянки (Приложение 1). В качестве объектов исследования использовали отвар толокнянки обыкновенной (1:10), водный раствор арбутина (1 мг/мл), спиртовой раствор этилового эфира n-дигалловой кислоты (1 мг/мл) и спирт этиловый 95%. Определение минимальной ингибирующей концентрации проводили методом двойных серийных разведений в бульоне Мюллера-Хинтона в соответствии с МУ 4.2.1890-04 (5). В качестве тестовых культур использовали грамположительные бактерии Bacillus cereus и Staphylococcus aureus, грамотрицательные бактерии Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa, дрожжеподобный гриб Candida albicans.

В ходе исследования выявлено, в условиях эксперимента арбутин был неактивным в отношении практически всех исследуемых штаммов, за исключением Bacillus cereus (рост наблюдался после разведения в 8 раз). Антибактериальная активность спиртового раствора этилового эфира n-дигалловой кислоты в отношении Bacillus cereus сохранялась при разведении в 32 раза (спирт этиловый 95% - в 8 раз), Staphylococcus aureus - в 16 раз (спирт этиловый 95% - в 4 раза), Pseudomonas aeruginosa - в 16 раз (спирт этиловый 95% - в 4 раза), Е. coli - 32 раза (спирт этиловый 95% - в 8 раз), Отвар из листьев толокнянки обыкновенной также показывал высокую активность в отношении грамположительных бактерий Bacillus cereus (максимальная кратность разведения, при которой сохранялось подавление роста, - 1:64) и Staphylococcus aureus (максимальная кратность разведения - 1:128), а также проявлял антибактериальную активность в отношении грамотрицательных микроорганизмов Pseudomonas aeruginosa (максимальная кратность разведения - 1:32). И этиловый эфир n-дигалловой кислоты Candida albicans, и отвар толокнянки проявляли активность в отношении дрожжеподобных грибов Candida albicans (максимальная кратность разведения раствора этилового эфира n-дигалловой кислоты 1:128 (спирт этиловый 95% сохранял активность при разведении в 8 раз); максимальная кратность разведения отвара толокнянки 1:128). Таким образом, этиловый эфир n-дигалловой кислоты, выделенный из листьев толокнянки обыкновенной, в условиях in vitro, показывал более высокую активность по сравнению с арбутином (Приложение 1) и, следовательно, более вероятно, что именно этиловый эфира n-дигалловой кислоты, а не арбутин, обусловливает антибактериальную и противогрибковую активность отвара листьев толокнянки обыкновенной.

Заявляемый способ иллюстрируется следующим примером.

100 г воздушно-сухих листьев толокнянки обыкновенной экстрагировали 70% этиловым спиртом, осуществляя вначале две экстракции при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем при нагревании на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Объединенное водно-спиртовое извлечение упаривали под вакуумом до объема 50 мл, смешивали с 30 г силикагеля L 40/100 и высушивали. Высушенный порошок (сухой экстракт + силикагель) наносили на слой силикагеля (диаметр - 8 см, высота - 5 см), сформированный в виде взвеси в хлороформе. Хроматографическую колонку элюировали хлороформом и смесью хлороформ-этанол в различных соотношениях (99:1; 98:2; 97:3; 95:5; 93:7; 90:10; 85:15; 80:20; 70:30, 60:40, 50:50, 40:60, 30:70). Контроль за разделением веществ осуществляли с помощью ТСХ-анализа на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-этанол (9:1), хлороформ-этанол-вода (26:16:3), а также н-бутанол-ледяная уксусная кислота-вода (4:1:2).

Из фракций (24-26), полученных при элюировании смесью растворителей хлороформ-спирт этиловый 95% (93:7), получали технический целевой продукт: кристаллы белого цвета с сероватым оттенком состава C16H14O9. УФ-спектр (λmax EtOH, нм): 220, 276 нм. Масс-спектр (ESI-MS, 180°C, m/z): М+ 221 [М+ этилгаллата + Na]+, 199 [М+ этилгаллата + Н]+, 171 [М+ галловой кислоты + Н]+. 1Н-ЯМР-спектр (300 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д., J/Гц): 9.23 (уш. с, 3Н трех фенольных групп галловой кислоты), 8.90 (уш. с, 1Н фенольной группы галловой кислоты), 8.61 (уш. с, 1Н фенольной группы галловой кислоты), 6.94 (с, 2Н, Н-21 и Н-61), 6.54 (с, 2Н, Н-2 и Н-6), 4.19 (кв., 2Н, 7 Гц, СН2), 1.25 (т, 3Н, 7 Гц СН3).

Для изучения строения выделенного вещества были использованы метод тонкослойной хроматографии и спектральные методы, позволяющие установить его структуру как этиловый эфир n-дигалловой кислоты. Структурная формула этилового эфира n-дигалловой кислоты представлена в Приложении 2.

Выход целевого продукта - этилового эфира n-дигалловой кислоты - составил 7,5 г или 7,50% от массы воздушно-сухого сырья.

Таким образом, заявляемый способ позволяет получить из листьев толокнянки вещество с антибактериальной и противогрибковой активностью - этиловый эфир n-дигалловой кислоты, который обладает более выраженной антибактериальной и противогрибковой активностью по сравнению с арбутином. К преимуществам способа можно отнести отсутствие необходимости в применении метанола, требующего особых правил обращения.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Государственный реестр лекарственных средств [Электронный ресурс]. Электрон. дан. 2017. Режим доступа: http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx.

2. ЕМА/НМРС/573462/2009 Rev. 1 Committee on Herbal Medicinal Products (HMPC), Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng., folium s, 2012.

3. Государственная фармакопея СССР. – 11-е изд. (Вып. 1). - М.: Медицина, 1989. - Т. 2. - 399 с.

4. Нагаслаева Л.А. Разработка технологии производства экстракта толокнянки сухого и создание лекарственной формы на его основе, методы их стандартизации: автореф. дис… канд. фарм. наук: 15.00.01; 15.00.02 / Л.А. Нагаслаева; Научно-исследовательский институт фармации. - М.: Полиграфпредприятие Россельхозакадемии, 1994. - 21 с.

5. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04.

Приложение 1

Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью

Приложение 2

Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью

Способ получения вещества, обладающего антибактериальной и противогрибковой активностью, отличающийся тем, что листья толокнянки обыкновенной экстрагируют 70% этиловым спиртом, осуществляя вначале две экстракции при комнатной температуре в течение 24 ч, а затем при нагревании на кипящей водяной бане в течение 30 мин; объединенное извлечение упаривают под вакуумом, смешивают с силикагелем в соотношении исходной массы сырья и сорбента 3:1 и высушивают на воздухе; высушенный порошок наносят на слой силикагеля, сформированный в виде взвеси в хлороформе, и подвергают хроматографическому разделению с использованием смесей хлороформа и этилового спирта в градиентном режиме с последующим выделением из фракций, полученных при элюировании смесью растворителей хлороформ-спирт этиловый 95% (93:7), этилового эфира n-дигалловой кислоты - вещества с антибактериальной и противогрибковой активностью.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения меланиновых веществ, получаемых из отходов маслоэкстракционного производства - лузги подсолнечника.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ выделения биологически активных проантоцианидинов, характеризующийся тем, что измельченные листья голубики (Vaccinium uliginosum) экстрагируют метанолом в течение 3-х часов при температуре 30-35°С, упаривают спиртовой раствор до 1/10 первоначального объема, разбавляют 4-кратным количеством воды и экстрагируют последовательно хлороформом, эфиром и этилацетатом, после чего полученный водный раствор упаривают и хроматографируют на колонке с силикагелем с размером частиц 0,040-0,063 мм, используя в качестве элюента смесь хлористого метилена с метанолом, взятых в соотношении 1:1, и выделяют биологически активную фракцию с Rf 0,29.
Изобретение относится к производству сухих экстрактов из растительного сырья, обладающих высокой пищевой ценностью и высокой биологической активностью, предназначенных для использования в пищевой, фармацевтической, косметической и других отраслях промышленности.
Изобретение относится к производству сухих экстрактов из растительного сырья, обладающих высокой пищевой ценностью и высокой биологической активностью, предназначенных для использования в пищевой, фармацевтической, косметической и других отраслях промышленности.

Изобретение относится к фармацевтической, косметической и пищевой промышленности и касается способа переработки морских водорослей. Способ переработки морских бурых водорослей, включающий дробление сырья, гомогенизацию смеси сырья в растворе с последующим извлечением водорастворимых биологически активных веществ за счет фильтрации и сушки, при этом сырье предварительно промывают водой, насыщенной озоном, гомогенизацию сырья проводят в растворе, представляющем собой воду с хлористым кальцием в концентрации его в растворе от 0,25 до 1%, дополнительное измельчение дробленых водорослей проводят в смеси сырья в растворе при оборотах роторно-пульсационного гомогенизатора, составляющих от 10 до 50% максимальных оборотов двигателя, при этом в ходе предварительной гомогенизации осуществляют порционную загрузку в гомогенизатор в пределах от 10 до 30% от общего количества смеси, после завершения загрузки и предварительной гомогенизации увеличивают частоту вращения роторно-пульсационного гомогенизатора и гомогенизируют смесь до 5 часов при температуре смеси не выше 75°С, при этом после стадии гомогенизации проводят криодеструкцию гомогената при температуре от минус 18 до минус 20 градусов в течение 20-48 часов, для чего гомогенат размещают в емкости от 0,5 до 10 л, после криодеструкции замороженный гомогенат оттаивают, после расслоения гомогената отделяют жидкость от осадка, осадок фильтруют под давлением и полученную жидкость смешивают с жидкостью, полученной на предыдущей стадии, жидкую фазу концентрируют на мембранной ячейке, удаляют хлористый кальций, осадок и жидкость сушат.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу разделения каротиноидов и хлорофиллов. Способ разделения каротиноидов и хлорофиллов из экстракта растительного сырья путем последовательного использования двух экстрагентов, при этом липофильную вытяжку листьев крапивы двудомной, упаренную до 1-2 мл, растворяют в 25 мл петролейного эфира и встряхивают до полного растворения пигментов, далее к раствору пигментов в петролейном эфире прибавляют 25 мл спирта этилового 95%, встряхивают 30 минут, после этого разделяют спиртовую фазу, содержащую ксантофиллы и хлорофиллы, и фазу петролейного эфира, содержащую каротины и следы хлорофиллов; для отделения хлорофиллов к спиртовой фазе, содержащей хлорофиллы и ксантофиллы, приливают 25 мл петролейного эфира, раствор встряхивают в течение 30 минут, менее полярные хлорофиллы экстрагируются в петролейный эфир, фазы разделяют; для удаления следов хлорофиллов из фазы петролейного эфира их отделяют омылением путем добавления к фазе петролейного эфира, содержащей каротины и следы хлорофиллов, 10 мл раствора натрия гидрохлорида 20% и 25 мл спирта этилового 95%, встряхивания в течение 30 минут, отделения спиртовой фазы, содержащей омыленные хлорофиллы.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к антиметастатическому средству. Применение жидкого экстракта рябины обыкновенной (Sorbus aucuparia L.), полученного экстрагированием листьев рябины, измельченных до размера частиц диаметром 0,3-0,5 см, 40% этиловым спиртом при температуре 75°С в течение 60 минут, в качестве антиметастатического и повышающего противометастатическое действие циклофосфана средства.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему противогрибковым действием. Средство, обладающее противогрибковым действием в отношении грибов рода Candida, представляющее собой сухой экстракт, полученный путем измельчения кроющих листьев початков антоциановой диплоидной формы кукурузы, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению средства, обладающего антиметастатической активностью и повышающего противометастатическое действие циклофосфана.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения фармакопейного экстракта из тканей рыб. Способ получения фармакопейного экстракта из тканей рыб, включающий группировку рыб по механизмам старения, полу и возрасту, причем выбирают рыб с отсутствием паразитов из среды обитания, в которой проводят экологический мониторинг, сбор от рыб образцов мышечной ткани или икры, далее образцы замораживают, измельчают мышечную ткань, пропуская через мясорубку, а икру раздавливают в ступке и заливают полученное сырье охлажденным экстрагентом - дистиллированной водой или 90%-ным водным раствором этанола, гомогенизируют в блендере, экстрагируют, экстракционную смесь переливают в центрифужные пробирки, которые уравновешивают и центрифугируют, надосадочную жидкость фильтруют от жира, для экстрактов, экстрагируемых водой, фильтрат собирают в сосуд для лиофильной сушки с последними фармакопейными требованиями - методом волюмометрического титрования при определенных условиях.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для лечения инфекционных заболеваний посредством применения комбинированных антимикробных препаратов (АМП).
Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и касается лечения отомикоза. Для этого промывают наружное ухо 60-70 мл раствора фурацилина с добавлением 8-10 капель АСД-2.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для ингибирования роста или образования биопленок бактерий, ассоциированных с раневыми инфекциями, содержащую этилендиаминтетрауксусную кислоту в концентрации от 100 до 500 мг/л композиции, и цитрат натрия в концентрации от 1000 до 5000 мг/л композиции.

Изобретение относится к соединениям, общей формулы (I) или (II), или его стереоизомеру или энантиомеру, фармацевтически приемлемой соли, где X выбирается независимо и представляет собой СН или N; Q выбирается независимо и представляет собой Н, -C1-6-алкил, фенил, галогенированный фенил, нафтил или галогенированный нафтил; R1, R2, R3, R4 выбираются независимо и представляют собой Н, -C1-6-алкил, -ОН, галоген, -O-бензил, фенил, причем фенил или бензил может быть необязательно замещен, по меньшей мере, одним заместителем, выбранным из галогена, -CN, -ОН, -O-C1-6-алкила, -СООН, -COOC1-6-алкил, причем R1 и R2 совместно с циклом, к которому они присоединены, могут образовывать бициклический фрагмент нафтил; R5, R6 выбираются независимо и представляют собой галоген.

Группа изобретений относится к выделенному штамму Lactobacillus crispatus и его применению. Предложен штамм Lactobacillus crispatus, идентифицированный как IP174178 и депонированный в CNCM под регистрационным номером I-4646.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой способ лечения коров с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, включающий введение бактерицидного препарата на основе активированной щелочной воды, обогащенной частицами коллоидного серебра, отличающийся тем, что насыщение ионами серебра ведут до концентрации ионов серебра 8-10 мг на 100 мл католита, который затем озонируют в течение 25-30 минут до концентрации озона 8-10 мг на 100 мл католита и вводят внутриматочно с помощью прибора для осеменения свиней - ПОС-5, по 100 мл через день до закрытия шейки матки, предварительно, перед введением, наружные половые органы животного промывают теплым водным раствором фурацилина в соотношении 5000:1 соответственно.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к кохлеату для доставки биологически активного агента. Кохлеат для доставки биологически активного агента, содержит фосфолипид на основе сои, который содержит 45% - 55% по массе фосфатидилсерина сои, мультивалентный катион и биологически активный агент.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему противогрибковым действием. Средство, обладающее противогрибковым действием в отношении грибов рода Candida, представляющее собой сухой экстракт, полученный путем измельчения кроющих листьев початков антоциановой диплоидной формы кукурузы, экстракции спиртом 96% на водяной бане до кипения и кипячения в течение 14-15 минут, выпаривания при температуре 55-60°С, разведения выпаренного остатка сначала дистиллированной водой при температуре 40-50°С, затем добавления хлороформа в пропорции 4/5 части воды и 1/5 части хлороформа, охлаждения до комнатной температуры и центрифугирования со скоростью 1500 оборотов в минуту в течение 15 минут, с последующим отделением водной фракции и высушиванием ее.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой препарат для лечения пальцевого дерматита и язвы подошвы крупного рогатого скота в виде мази, состоящий из мазевой основы и действующего вещества - медного купороса, цинка оксида, отличающийся тем, что действующее вещество дополнительно содержит салициловую кислоту, морскую соль и микрочастицы серебра при следующем соотношении компонентов, мас.%: медный купорос 35-45; цинка оксид 7-9; салициловая кислота 2-2,5; морская соль 1-1,5; микрочастицы серебра 0,0001; мазевая основа - остальное.

Изобретение относится к области медицины, в частности, к технологии получения углеродных сорбентов и раскрывает способ получения углеродного сорбента, обладающего антибактериальной и антимикотической активностью.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для лечения инфекционных заболеваний посредством применения комбинированных антимикробных препаратов (АМП).
Наверх