Способ определения витамина в2 в кондитерских изделиях

Авторы патента:

Белова Ирина Александровна (RU)

Руденко Оксана Сергеевна (RU)

Осипов Максим Владимирович (RU)

Петрова Наталья Александровна (RU)

Савенкова Татьяна Валентиновна (RU)

Кондратьев Николай Борисович (RU)

G01N33/02 - пищевых продуктов

G01N33/00 - Исследование или анализ материалов особыми способами, не отнесенными к предыдущим группам

Владельцы патента RU 2665174:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр пищевых систем им. В.М. Горбатова" РАН (RU)

Изобретение относится к области пищевой промышленности, в частности к кондитерской отрасли, и может быть использовано для контроля качества кондитерских изделий. Способ определения витамина B₂ в кондитерских изделиях включает последовательное проведение кислотного и ферментного гидролиза пробы с последующей фильтрацией, фотолиз, флюориметрическое определение и обработку результатов, при этом перед фотолизом проводят концентрирование водной фазы, полученной после фильтрации, путем твердофазной экстракции. Изобретение повышает точность и снижает минимальный порог определения массовой доли витамина В₂ в кондитерских изделиях. 1 пр.

Изобретение относится к области пищевой промышленности, в частности к кондитерской отрасли, и может быть использовано для контроля качества кондитерских изделий.

Известен способ определения витамина В₂ в молочных продуктах детского питания, предусматривающий проведение кислотного гидролиза навески пробы, отделение белков фильтрованием, отбор из раствора фильтрата аликвотных частей, введение в три из них стандартного раствора витамина В₂, измерение интенсивности флюоресценции и определение количества содержащегося в продукте витамина В₂ путем построения графика зависимости интенсивности флюоресценции от количества введенного в аликвотную часть пробы витамина В₂. (см. патент РФ 2109279 G01N 33/04 1995 г.) Способ сокращает длительность проведения анализа, обеспечивает уменьшение загрязнения окружающей среды, но не позволяет проводить определение витамина В₂ в кондитерских изделиях.

Известны государственные стандарты: ГОСТ 31483-2012 «Премиксы. Определение содержания витаминов: B₁ (тиаминхлорида), В₂ (рибофлавина), В₃ (пантотеновой кислоты), В₅ (никотиновой кислоты и никотинамида), В₆ (пиридоксина), В₉ (фолиевой кислоты), С (аскорбиновой кислоты) методом капиллярного электрофореза», ГОСТ 55482-2013 «Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания водорастворимых витаминов», ГОСТ 32903-2014 «Продукция соковая. Определение водорастворимых витаминов: тиамина (B₁), рибофлавина (В₂), пиридоксина (В₆) и никотинамида (РР) методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии», существуют колориметрический и флюориметрический методы определения витамина В₂ [Методы определения витаминов.; ВНИВИ. - М.: Пищепромиздат, 1951. - 96 с.].

Указанные государственные стандарты также не предусматривают определение витаминов в кондитерских изделиях. Их основным недостатком является высокий минимальный порог определения массовой доли витамина В₂.

Наиболее близким является ГОСТ 29139-91 «Мука, хлеб и хлебобулочные изделия пшеничные витаминизированные. Метод определения витамина В₂ (рибофлавина)», согласно которому освобождаются связанные формы рибофлавина кислотным и ферментативным гидролизом, экстракционно очищается полученный гидролизат от соединений, мешающих флюориметрическому определению, переводится при облучении в щелочной среде рибофлавин в люмифлавин, извлекается люмифлавин хлороформом и измеряется интенсивность флюоресценции люмифлавина в сравнении со стандартным раствором с помощью флюориметра, который обеспечивает длины волн возбуждения в области 350-480 нм и флюоресценции 400-650 нм.

Однако данный способ не позволяет определять массовую долю витамина В₂ ниже 0,1 мг на 100 г продукта.

Технической задачей предлагаемого изобретения является повышение точности и снижение минимального порога определения массовой доли витамина В₂ в кондитерских изделиях.

Для достижения поставленной задачи предложен способ определения витамина В₂ в кондитерских изделиях, включающий последовательное проведение кислотного, ферментного гидролиза пробы, с последующей фильтрацией, фотолиз, флюориметрическое определение и обработку результатов, при этом перед фотолизом проводят концентрирование водной фазы, полученной после фильтрации, путем твердофазной экстракции.

Концентрирование водной фазы, полученной после фильтрации, путем твердофазной экстракции обеспечивает снижение минимального порога определения массовой доли витамина В₂ в кондитерских изделиях и повышает точность измерений.

Способ осуществляют следующим образом.

Для определения витамина В₂ берут навеску 10,0-12,0 г, и добавляют 150 см³ раствора соляной кислоты 0,1 моль/дм³. Все помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³, для проведения кислотного гидролиза на кипящей водяной бане в течение 35-45 мин. Охлаждают раствор до комнатной температуры, доводят до значения рН до 4,4-4,6 насыщенным раствором уксуснокислого натрия, затем добавляют 0,005-0,010 г фермента α-амилазы и 2-3 капли бензола. Колбу с раствором помещают в термостат на 14-16 часов при температуре 34-39°C. Затем охлаждают гидролизат до комнатной температуры. Количественно переносят гидролизат в мерную колбу вместимостью 250 см³, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой и фильтруют. Контрольный раствор готовят по указанной процедуре, но без использования навески исследуемой пробы.

К 100 см³ полученного фильтрата добавляют 2 см³ раствора серной кислоты с концентрацией 0,3 г/см³ и 0,5-10 см³ раствора марганцовокислого калия с концентрацией 0,03 г/см³ до получения малинового окрашивания, которое не исчезает в течение 30 сек.

Затем по каплям добавляют раствор перекиси водорода с концентрацией 3% до обесцвечивания фильтрата. Полученный раствор переносят в делительную воронку, добавляют 30-50 см³ хлороформа и встряхивание в течение 1 мин.

После разделения слоев водную фазу используют для концентрирования витамина методом твердофазной экстракции.

Для этого картридж с 200-1000 мг сорбента С18-Е обрабатывают 2-10 см³ этилового спирта и 4-20 см³ дистиллированной воды, пропускают через сорбент 20-100 см³ водной фазы, содержащей рибофлавин. Десорбцию витамина В₂ проводят 2-10 см³ смеси этилового спирта и воды, приготовленной в соотношении 9:1. Промывку картриджа проводят 2-10 см³ этилового спирта, затем 4-20 см³ дистиллированной воды. Концентрирование проводят до получения требуемого объема элюата.

Аналогичным образом концентрируют контрольный раствор.

В две колбы добавляют по 4 см³ элюата, в одну из которых добавлены 2 см³ стандартного раствора рибофлавина с концентрацией 0,001 г/см³.

В третью колбу добавляют 4 см³ сконцентрированного контрольного раствора. Во все три колбы добавляют по 4 см³ раствора гидроокиси натрия с концентрацией 7 моль/дм³, перемешивают содержимое и облучают их светодиодной лампой мощностью 30 Вт с расстояния 15 см в течение 10 мин.

Во все колбы добавляют по 4 см³ ледяной уксусной кислоты и затем по 3-5 см³ хлороформа, закрывают пробками и встряхивают в течение 2 мин.

После расслоения отбирают пипеткой 2-3 см³ хлороформного (нижнего) слоя, который фильтруют через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в стеклянную склянку. Проводят измерение интенсивности флюоресценции растворов люмифлавина. Массовую долю рибофлавина X (мг/100 г) рассчитывают по формуле:

А - интенсивность флюоресценции испытуемого раствора без добавления стандартного раствора витамина В₂, ед. пр.;

A₁ - интенсивность флюоресценции контрольного раствора, ед. пр.;

А₂ - интенсивность флюоресценции испытуемого раствора с добавлением стандартного раствора витамина В₂, ед. пр.;

X₁ - массовая доля добавленного витамина В₂, мг;

m - масса анализируемой пробы, г;

V - общий объем гидролизата, см³ (V=250 см³);

V₁ - объем гидролизата после окисления, см³;

V₂ - объем гидролизата, используемый для очистки от примесей, см³;

V₃ - объем гидролизата, используемый для облучения, см³;

10 - коэффициент пересчета.

Технический результат заключается в концентрировании раствора витамина В₂ с помощью твердофазной экстракции и снижении минимального порога определения в кондитерских изделиях.

Пример 1.

Навеску измельченного сахарного печенья массой 10,05 г помещают в коническую колбу вместимостью 250 см³ и добавляют 150 см³ раствора соляной кислоты 0,1 моль/дм³. Кислотный гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин. По окончании гидролиза колбу охлаждают до комнатной температуры и с помощью насыщенного раствора уксуснокислого натрия доводят рН до 4,5±0,1. К гидролизату добавляют навеску α-амилазы массой 0,007 г, 2-3 капели бензола, затем колбу помещают в термостат при температуре 37°C на 14-16 часов. По окончании ферментного гидролиза гидролизат охлаждают до комнатной температуры, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см³, доводят объем до метки дистиллированной водой и фильтруют. Общий объем гидролизата V=250 см³.

Аналогично готовят контрольный раствор, используя тоже количество ферментного препарата и реактивов, но без навески исследуемой пробы. К 100 см³ (V₂) фильтрата с помощью пипетки при перемешивании добавляют 2 см³ раствора серной кислоты 0,3 г/см³ и раствор марганцовокислого калия с концентрацией 0,03 г/см³ до получения малинового окрашивания, которое не исчезает в течение 30 сек. Затем добавляют 3%-й раствор перекиси водорода до обесцвечивания фильтрата.

Объем израсходованного раствора марганцовокислого калия составил 0,65 см³, объем раствора перекиси водорода составил 0,2 см³. Таким образом, объем гидролизата после окисления составляет V₁=100,0+2,0+0,65+0,2=102,85 см³.

Полученный раствор переносят в делительную воронку, добавляют 40 см³ хлороформа и встряхивают в течение 1 мин. После разделения водную фазу используют для концентрирования витамина В₂ с помощью твердофазной экстракции.

Картридж с 1000 мг сорбента С18-Е обрабатывают 10 см³ этилового спирта и 20 см³ дистиллированной воды. Пропускают через сорбент 100 см³ водного раствора витамина В₂, выделенного из образца печенья. Десорбируют витамина В₂ 10 см³ смеси этилового спирта и воды, приготовленной в соотношении 9:1. Промывают картридж 10 см³ этилового спирта, затем 20 см³ дистиллированной воды.

Аналогичным образом концентрируют контрольный раствор.

В две колбы наливают по 4 см³ (V₃) элюата, в одну из которых добавляют 2 см³ рабочего стандартного раствора рибофлавина 0,001 г/см³. X₁=0,002 мг. В третью колбу наливают 4 см³ сконцентрированного контрольного раствора.

Во все три колбы добавляют по 4 см³ раствора гидроокиси натрия с концентрацией 7 моль/дм³, закрывают колбы пробками, перемешивают содержимое и облучают их светодиодной лампой с мощностью 30 Вт с расстояния 15 см в течение 10 мин. По окончании облучения растворы во всех колбах подкисляют 4 см³ ледяной уксусной кислоты, добавляют к ним по 4 см³ хлороформа, закрывают пробками и встряхивают в течение 2 мин. После расслоения отбирают пипеткой 2,5 см³ хлороформного (нижнего) слоя, фильтруют через бумажный фильтр с безводным сернокислым натрием в стеклянную склянку.

Интенсивность флюоресценции испытуемого раствора печенья без добавления стандартного раствора витамина В₂ (А) составила 0,013 ед. пр. Интенсивность флюоресценции контрольного раствора (A₁) составила 0,001 ед. пр. Интенсивность флюоресценции испытуемого раствора, полученного из образца печенья с добавлением стандартного раствора витамина В₂ (А₂), составила 0,046 ед. пр.

Массовую долю витамина В₂ в печенье определяют по формуле (1):

Способ определения витамина В₂ в кондитерских изделиях, включающий последовательное проведение кислотного и ферментного гидролиза пробы с последующей фильтрацией, фотолиз, флюориметрическое определение и обработку результатов, отличающийся тем, что перед фотолизом проводят концентрирование водной фазы, полученной после фильтрации, путем твердофазной экстракции.

Похожие патенты:

Фотометр // 2659977

Изобретение относится к устройствам для измерения яркости поверхностей пищевых продуктов, материалов, изделий, источников света, экранов мониторов. Фотометр содержит корпус, блок питания, осветительно-приемный блок и измерительную головку, программируемый микроконтроллер последовательно включает-выключает светодиоды, закрепленные в осветительно-приемном блоке, белого, красного, синего и зеленого цвета, которые освещают исследуемую поверхность, а отраженный свет улавливается светочувствительным датчиком, преобразуется пропорционально величине силы света в электрический ток, передается на анализ в программируемый микроконтроллер, который по алгоритму загруженной через USB-кабель от ЭВМ программы, передает данные на монитор в буквенно-цифровом формате как результат измерения яркости поверхностей, при этом корпус изготовлен из ударопрочной пластмассы, а блок питания состоит из четырех щелочных батарей АА по 1,5 В.

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям. Способ количественного определения N-нитрозоаминов включает проведение пробоподготовки, твердофазную экстракцию (ТФЭ) и выполнение определения конкретных нитрозоаминов по градуировочному графику, при пробоподготовке к 20 г пробы измельченных копченых мясопродуктов добавляют 200 мл предварительно нагретой до +55°С дистиллированной воды, производят настаивание в течение 30 минут и последующее фильтрование, к фильтрату добавляют 1,5 г калия гидрооксида, полученную смесь фильтрата и калия гидрооксида подвергают отгонке перегретым до tпарообразователя=100±5°С водяным паром с получением 70 см3 дистиллята, указанный дистиллят подвергают ТФЭ, полученные элюаты анализируют методом хромато-масс-спектрометрии с селективным выделением девяти N-нитрозоаминов.

Способ идентификации корицы цейлонской, китайской, индонезийской и вьетнамской // 2655526

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам идентификации корицы цейлонской, китайской, индонезийской и вьетнамской. Для этого образцы корицы анализируют методом изотопной масс-спектрометрии, при этом определяют изотопный состав углерода (δ13С), азота (δ15N) и кислорода (δ18О).

Способ количественного определения органических кислот (уксусной, яблочной, молочной) и углеводов (мальтозы, глюкозы, фруктозы) в полупродуктах спиртового производства методом высокоэффективной жидкостной хроматографии // 2653570

Изобретение относится к области пищевой промышленности, а именно спиртовому производству, и может быть использовано для количественного определения органических кислот (уксусной, яблочной, молочной) и углеводов (мальтозы, глюкозы, фруктозы) в полупродуктах спиртового производства (сусле, бражке).

Способ испытания и определения механических характеристик экзокарпия плодов и устройство для его осуществления // 2653473

Группа изобретений относится к пищевой промышленности и может быть использована для определения сроков хранения плодов и ягод, способов их транспортирования и хранения.

Способ определения общего содержания золы в чае // 2652274

Изобретение относится к чайной промышленности и направлено на разработку новых ускоренных методов оценки качества сырья и готовой продукции. Способ определения общего содержания золы в чае заключается в том, что измельченную пробу чая массой 1,0-1,5 г помещают в фарфоровый тигель объемом 10 см3, добавляют к пробе 2 см3 спиртового раствора ацетата магния, приготовленного путем растворения 1,61 г (CH3COO)2Mg⋅2Н2О в 100 мл 96%-ного водного раствора этанола, спустя 1-2 минуты находящийся в тигле раствор поджигают и после его прогорания тигель с обуглившейся пробой помещают в муфельную печь, в которой проводят прокаливание пробы при температуре 525±25°С в течение 1,5 ч до образования золы, затем тигель с золой охлаждают и взвешивают, общее содержание золы в измельченной пробе чая, выраженное в процентах по массе в перерасчете на сухое вещество пробы, вычисляют по формуле.

Термолюминесцентная композиционная частица и маркировка, содержащая ее // 2647025

Изобретение относится к композиционной частице для применения в маркировке, пригодной для идентификации/установления подлинности изделия. Частица содержит по меньшей мере одну суперпарамагнитную часть и по меньшей мере одну термолюминесцентную часть.

Способ определения подлинности пчелиного мёда // 2646824

Изобретение относится к способам анализа пищевых продуктов, а именно к способам оценки качества пчелиного меда. Изобретение может быть использовано в пищевой промышленности для распознавания подлинного и фальсифицированного продукта.

Способ определения "картофельной болезни хлеба" в зернопродуктах без пробной лабораторной выпечки // 2641011

Изобретение относится к мукомольной и хлебопекарной промышленности. Способ включает приготовление водного смыва бактерий с пробы, фильтрацию и пастеризацию смыва для уничтожения вегетативных форм микроорганизмов, инокуляцию хлебного субстрата пастеризованными смывами с продукта и подготовка контрольного хлебного субстрата с помощью стерильной воды, инкубирование их при 40°С в течение 16 ч, приготовление водных экстрактов бактериальной α-амилазы из хлебного субстрата и определение разжижающей активности (РА) расчетным путем.

Способ диагностики нарушений сперматогенеза путем определения его цитологического профиля // 2665162

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии, и может быть использовано в диагностике нарушений сперматогенеза различной этиологии, включая идиопатическое бесплодие.

Способ определения хрома (iii) и железа (iii) // 2665160

Изобретение относится к аналитической химии и касается способов определения ионов хрома (III) и железа (III) в растворе при совместном присутствии. Способ определения концентрации ионов хрома (III) и железа (III) при совместном присутствии в растворе включает добавление к анализируемому раствору, содержащему ионы хрома (III) и железа (III), 4 мл раствора трилона Б (концентрацией 80 г/л), нагревание полученной смеси на кипящей водяной бане в течение 10 мин, охлаждение смеси до комнатной температуры, добавление к охлажденной смеси 0,5 мл водного раствора аммиака, доведение дистиллированной водой до 25 мл, определение оптической плотности раствора и вычисление концентрации ионов по калибровочным зависимостям, при этом измерение оптической плотности производят при 660 нм для ионов хрома (III) и при 315 нм для ионов железа (III).

Способ определения генезиса морских осадочных отложений // 2665152

Изобретение относится к геологии и может быть использовано при определении генезиса морских осадочных отложений, а именно мелкозернистых песчаников, алевролитов, алевроаргиллитов и аргиллитов.

Способ определения уровня стрессоустойчивости человека // 2665144

Изобретение относится к медицине, в частности, возможно использование в здравоохранении, медицинской и спортивной диагностике. Способ определения уровня стрессоустойчивости человека включает определение величины максимальной интенсивности свечения проб со слюной I0 и величины максимальной интенсивности свечения контрольных проб без слюны Ik, вычисление люциферазного индекас LI0 пробы со слюной и люциферазного индекса LIk контрольной пробы без слюны, вычисление люциферазного индекса стресса по формуле LIstress=LI0-LIk, при этом LIstress 18-30% соответствует среднему уровню стрессоустойчивости; LIstress более 30% - высокому; LIstress менее 18% - низкому уровню стрессоустойчивости.

Способ анализа и/или обработки оплодотворенного яйца // 2665136

Изобретение относится к способу анализа и/или обработки оплодотворенного яйца. Способ обработки и/или анализа оплодотворенного яйца, включающий размещение яйца горизонтально зародышем вверх, выполнение отверстия в скорлупе сбоку со стороны зародыша, проведение анализа и/или обработки зародыша и закрытие отверстия в скорлупе, отличается тем, что по изобразительной информации с использованием методов компьютерной графики формируют трехмерную модель фрагмента скорлупы на 8-15% больше размера будущего отверстия, по трехмерной модели изготавливают форму, в которой из двухкомпонентного силикона для литьевых форм отливают крышку для закрытия будущего отверстия, после выполнения отверстия в скорлупе и проведения анализа и/или обработки зародыша закрывают отверстие в скорлупе путем наложения на отверстие силиконовой крышки и ее разглаживания от отверстия к краям.

Способ обнаружения внутриклеточных возбудителей инфекции в клетках спермы // 2664734

Группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для исследования на присутствие цитомегаловируса (CMV), вируса простого герпеса I (HSV I), вируса простого герпеса II (HSV II), вируса Эпштейна-Барра (EBV), HHV6, HHV7, HHV8, парвовируса 19, вируса гепатита В (HBV), вируса гепатита С (HCV), коксаки-вируса, вирусов иммунодефицита человека (HIV-1, HIV-2), аденоассоциированного вируса (AAV), вируса краснухи, HPV, хламидий, токсоплазмы и норовируса внутри сперматозоидов.

Способ прогноза рака молочной железы // 2664671

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогноза рака молочной железы с использованием цифрового изображения гистологического препарата, приготовленного из образца опухолевой ткани.

Способ генодиагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота, и тест-система для его осуществления // 2664454

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики мутантного аллеля, вызывающего короткий позвоночник или брахиспину у крупного рогатого скота.

Способ дифференциальной диагностики шизофрении и злокачественных новообразований головного мозга // 2664444

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике путем исследования биологической жидкости с помощью физических и химических методов исследования.

Способ оценки фармакологических и токсических свойств веществ - потенциальных лигандов ahr человека // 2664433

Изобретение относится к области биологии и экспериментальной медицины. Предложен способ оценки фармакологических и токсических свойств веществ - потенциальных лигандов AHR человека - с использованием линии мух Drosophila melanogaster.

Способ определения температуры стеклования // 2665500

Изобретение относится к области измерений и может быть использовано для исследования теплофизических характеристик электроизоляционных материалов. Согласно предложенному способу определения температуры стеклования проводят серии испытаний вдавливанием индентора в поверхность испытуемого материала при плавно изменяющейся температуре. Вдавливание проводят шаровым индентором с регистрацией в процессе испытания диаграммы вдавливания в координатах «нагрузка - глубина отпечатка», с использованием которой рассчитывают значения твердости по Бринеллю НВt, для каждой из температур испытания. Строят график зависимости твердости по Бринеллю НВt, от температуры испытания. Аппроксимируют полученный график двумя прямыми линиями, соответствующими температурным интервалам до и после стеклования. Температуру стеклования определяют по точке пересечения полученных прямых линий на графике зависимости твердости НВt, от температуры. Технический результат – повышение производительности и точности определения температуры стеклования. 2 ил.