Способ применения дигидрохлорида n,n’-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (mdl72.527) для подавления репродукции вируса гепатита с

Авторы патента:

Иванов Александр Владимирович (RU)

Кочетков Сергей Николаевич (RU)

Бартош Бирке (FR)

Смирнова Ольга Александровна (RU)

A61P31/14 - против вирусов РНК

A61P1/16 - для лечения печени или расстройств желчного пузыря, например противогепатитные средства, желчегонные средства, средства, способствующие растворению конкрементов

A61K31/13 - амины, например амантадин (A61K 31/04 имеет преимущество)

Владельцы патента RU 2667123:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук (ИМБ РАН) (RU)

Изобретение относится к медицине и касается способа подавления репликации вируса гепатита С при помощи ингибитора ферментов катаболизма биогенных полиаминов N,N'-бис(2,3-бутадиенил)-1,4-бутандиамин гидрохлорида (MDL72.527). Соединение подавляет репродукцию вируса гепатита С в микромолярных концентрациях в культурах инфицированных клеток и в культуре клеток, несущих субгеномный репликон вируса. Способ позволяет расширить арсенал противовирусных средств. 3 пр., 2 ил.

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области молекулярной биологии, вирусологии и медицины, а именно, к новому способу ингибирования репликации вируса гепатита С (ВГС) за счет ингибирования катаболизма биогенных полиаминов спермина и спермидина. Данное изобретение может быть использовано для создания противовирусных препаратов, том числе для терапии ВГС-инфекции.

Уровень техники

Известно, что вирус гепатита С является широко распространенным и опасным патогеном человека. По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) им инфицировано около 71 млн пациентов с хроническим гепатитом С [Hepatitis С. WHO fact sheet #164, октябрь 2017]. Эта же организация оценивает количество смертей от гепатита С как 399 тыс в год [Hepatitis С. WHO fact sheet #164, октябрь 2017]. Первичное заражение вирусом переходит к хроническому гепатиту в 60-80% случаев. Хронический гепатит С резко повышает риски развития у пациента цирроза и рака печени, которые и являются основными причинами его смерти. Так, риск развития цирроза за 20 лет у пациентов с хроническим гепатитом С оценивается как 15-30% [Hepatitis С. WHO fact sheet #164, октябрь 2017].

Терапия хронического гепатита С основана на использовании интерферона альфа и его производных или/и препаратов прямого действия, которые являются ингибиторами РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса (белок NS5B), протеазы (белок NS3) или ингибиторами функций регуляторного белка NS5A [European Association for the Study of the Liver. EASL Clinical Practice Guidelines: Management of hepatitis С virus infection. J. Hepatol., 2014., 60(2)392-420; L.M. Hagan et al., All-oral, interferon-free treatment for chronic hepatitis C: cost-effectiveness analyses. J Viral Hepat. 2013, 20(12), 847-857]. Их использование в различных сочетаниях позволяет излечивать более 95% пациентов с хроническим гепатитом С.Одним из факторов, резко ограничивающих использование таких препаратов, является их крайне высокая стоимость, делающая терапию недоступной для большинства пациентов [L.M. Hagan et al., All-oral, interferon-free treatment for chronic hepatitis C: cost-effectiveness analyses. J Viral Hepat. 2013, 20(12), 847-857]. В то же время отсутствуют лекарственные препараты, одобренные для лечения гепатита С, которые бы блокировали его репродукцию за счет воздействия на белки клетки-хозяина. Считается, что преимуществом таких препаратов может быть воздействие в отношении всех генотипов и изолятов вируса и неспособность последнего вырабатывать к ним резистентность [J.M. Baugh et al. Host-targeting agents in the treatment of hepatitis C: A beginning and an end? Antiviral Res., 100, 555-561].

Соединения такого класса как биогенные полиамины играют важную роль в разнообразных процессах прокариотических и эукариотических клеток [L. Miller-Fleming et al. Remaining Mysteries of Molecular Biology: The Role of Polyamines in the Cell. J. Mol. Biol, 2015., 427, 3389-3406; A.E. Pegg., Mammalian polyamine metabolism and function. IUBMB Life. 2009, 61(9), 880-894]. К этому классу соединений относятся спермин и спермидин, а также их метаболитический предшественник путресцин. Спермин и спермидин присутствуют в клетках и тканях в субмилимолярных и милимолярных концентрациях. Уровни полиаминов в клетках регулируются несколькими ферментами их метаболизма. Скорость-лимитирующая стадия биосинтеза полиаминов заключается в превращении орнитина в путресцин, катализируемая орнитиндекарбоксилазой (ODC). Катаболизм полиаминов происходит по двум путям. Первый заключается в ацетилировании спермина и сперминида спермидин/спермин-К'-ацетилтрансферазой (SSAT) с последующим превращением ацетилполиаминов в спермидин и путресцин, соответственно, при участии ацетилполиаминоксидазы (АРАО). Второй представляет собой прямое превращение спермина в спермидин, катализируемое сперминоксидазой (SMO). Реакции, катализируемые SSAT и SMO, являются скорость-лимитирующими стадиями катаболизма полиаминов.

Изменение их концентраций часто имеет место при развитии разнообразных заболеваний, включая онкологические, аутоиммунные и бактериальные инфекции [L. Miller-Fleming et al. Remaining Mysteries of Molecular Biology: The Role of Polyamines in the Cell. J. Mol. Biol, 2015, 427, 3389-3406; R.A. Casero and A.E. Pegg. Polyamine catabolism and disease. Biohem J. 2009. 421, 323-338; V. Broshtilova et al, Polyamine metabolism changes in psoriasis. Indian J Dermatol. 2013, 58(4), 306-309] В связи с этим, одним из перспективных подходов к лечению онкологических и аутоиммунных заболеваний считается воздействие на уровни полиаминов при помощи химических ингибиторов или индукторов ферментов их метаболизма. К таким соединениям относят DFMO и DENSpm [L. Miller-Fleming et al. Remaining Mysteries of Molecular Biology: The Role of Polyamines in the Cell. J. Mol. Biol, 2015, 427, 3389-3406; R.A. Casero and A.E. Pegg. Polyamine catabolism and disease. Biohem J. 2009. 421, 323-338; R.A. Casero Jr and L.J. Maton. Targeting polyamine metabolism and function in cancer and other hyperproliferative diseases. Nat Rev Drug Discovery. 2007, 6, 373-390]. DFMO является необратимым ингибитором ODC и вследствие этого блокирует биосинтез полиаминов, a DENSpm представляет собой индуктор SSAT, способный вызывать ускорение катаболизма полиаминов. Оба вещества вызывают снижение уровней полиаминов и поэтому рассматриваются как потенциальные противораковые препараты.

Данные о связи полиаминов с вирусными инфекциями немногочисленны. С 1990х годов опубликовано всего несколько работ, описывающих взаимосвязь полиаминов с вирусами Эбола и Марбурга [М.Е. Olsen et al, mBio. 2016, 7(4), e00882-16], Зика и Чикунгунья [B.C. Mounce et al, Interferon-Induced Spermidine-Spermine Acetyltransferase and Polyamine Depletion Restrict Zika and Chikungunya Viruses. Cell Host & Microbe, 2016, 20, 167-177] и вируса гепатита С [О.А. Smirnova et al. Biochemical and Biophysical Research Communicationsio 2017, 483, 904-909]. Кроме того, показано, что дифторметилорнитин (DFMO, eflornithine), ингибитор биосинтеза полиаминов обладает противовирусной активностью против широкого спектра вирусов, не включающего впрочем вируса гепатита С [B.C. Mounce et al. Inhibition of polyamine biosynthesis is a broad-spectrum strategy against RNA viruses. J.Virol, 90 (21), 9683-9692]. Описана также противовирусная активность DENSpm (индуктора катаболизма полиаминов) против вирусов коксаки и везикулярного стоматита [B.C. Mounce et al. Inhibition of polyamine biosynthesis is a broad-spectrum strategy against RNA viruses. J.Virol, 90 (21), 9683-9692].

Раскрытие изобретения

Сущность изобретения заключается в использовании дигидрохлорида N,N'-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527), известного ингибитора сперминсинтазы и ацетилполиаминоксидазы и представляющего собой производное путресцина, для подавления репликации вируса гепатита С.

Задачей предлагаемого изобретения является создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения вируса гепатита С.

Результатом является новый способ блокирования репродукции вируса гепатита С при помощи дигидрохлорида N,N'-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527). Найдено, что при использовании данного вещества возможно ингибировать репликацию вируса в неинфекционной системе репликона вируса и в инфекционной системе репродукции вируса (HCVcc). Следует отметить, что до настоящего момента ингибиторы ферментов катаболизма полиаминов не рассматривались как противовирусные агенты. Более того, это является первым примеров использования веществ - регуляторов метаболизма полиаминов для подавления репродукции вируса гепатита С.

Краткое описание фигур

Фиг 1. Показывает относительные уровни РНК вируса гепатита С в клетках Huh7, несущих полноразмерный репликон вируса в контроле (H2O) и в присутствии 25 мкМ MDL72.527. Уровни РНК вируса нормализованы на уровни мРНК (3-актина. За "1" принят относительный уровень РНК ВГС в отсутствии MDL72.527.

Фиг 2. Показывает относительные уровни РНК вируса гепатита С в клетках Huh7.5, обработанных 1-100 мкМ MDL72.527, инфицированных вирусом гепатита С через 24 ч после внесения веществ и выдержанных в течение дополнительных 6 суток. Уровни РНК вируса нормализованы на уровни мРНК р-глюкоронидазы. За "1" принят относительный уровень РНК ВГС в клетках в отсутствии MDL72.527.

Осуществление изобретения

Далее изобретение будет проиллюстрировано примерами, предназначенными для обеспечения лучшего понимания сущности заявленного изобретения, но которые при этом не должны рассматриваться как ограничивающие данное изобретение.

Пример 1 Оценка цитотоксичности MDL72.527

Цитотоксичность препарата оценивали путем добавления его разведений в воде к клеткам печени/гепатомы Huh7 или Huh7.5 в среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки телят и 2 мМ глутамин, помещенной в лунки 96-луночного планшета ("ТРР", Швецария), до конечных концентраций 5-100 мкМ (по три лунки на каждую дозу) с последующим культивированием при 37°С в течение 3 суток. Посевная концентрация составляла 4×10⁴ клеток на лунку. Контролем служили клетки без добавления препарата. Жизнеспособность клеток подсчитывали через 72 ч после внесения веществ при помощи окраски живых клеток красителем МТТ с последующим количественным измерением образующегося формазана. Токсичность различных доз препарата определяли по жизнеспособности клеток относительно контроля, по полученным результатам строили дозозависимую кривую и определяли концентрацию, на 50% снижающую жизнеспособность клеток (ЦТД₅₀). Даже при 100 мкМ концентрации количество жизнеспособных клеток не достигало 50% от контроля.

Пример 2

Оценка способности MDL72.527 подавлять репродукцию вируса гепатита С в неинфекционной системе репликона вируса in vitro

Влияние исследуемых соединений на репродукцию вируса гепатита С в системе репликона в культуре клеток Huh7 исследовали путем добавления его разведений в воде к клеткам печени/гепатомы Huh7, несущим репликон I389/NS3-3'/LucUbiNeo/ET [Frese et al, J. Gen Virol, 2003, 74, 1253-1259] в среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки телят и 2 мМ глутамин, помещенной в лунки 6-луночного планшета ("ТРР", Швецария), до конечной концентрации 25 мкМ (по три лунки) с последующим культивированием при 37°С в течение 3 суток. Посевная концентрация составляла 5×10⁵ клеток на лунку. Контролем служили клетки без добавления препарата. Титр репликона определяли лизированием клеток, выделением тотальной РНК, получением соответствующей кДНК при помощи гексамерного олигонуклеотида случайной последовательности и обратной транскриптазы Mint (Евроген, Москва) и измерением уровня РНК вируса полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени, нормируя уровни мРНК вируса на урвони мРНК Р-актина.

Из Фиг. 1 видно, что MDL72.527 эффективно подавлял репликацию вируса гепатита С, снижая титр его РНК на два порядка.

Пример 3

Оценка способности MDL72.527 подавлять репродукцию вируса гепатита С в инфекционной клеточной системе вируса in vitro

Влияние исследуемых соединений на репродукцию вируса гепатита С в инфекционной системе репликации вируса в культуре клеток Huh7.5 исследовали путем добавления его разведений в воде к клеткам Huh7.5 в среде DMEM, содержащей 10% фетальной сыворотки телят и 2 мМ глутамин, помещенной за 24 ч в лунки 6-луночного планшета ("ТРР", Швецария), до конечных концентраций 1-100 мкМ (по три лунки на каждую дозу) с внесением вируса гепатита С (множественность инфекции составляла 0,1 вирион/клетка) через 24 ч после добавления вещества и инкубированием в течение дополнительных шести дней. Посевная концентрация составляла 3×10⁵ клеток на лунку. Контролем служили клетки без добавления препарата. Титр РНК вируса определяли лизированием клеток, выделением тотальной РНК, получением соответствующей кДНК при помощи гексамерного олигонуклеотида случайной последовательности и обратной транскриптазы Mint (Евроген, Москва) и измерением уровня РНК вируса полимеразной цепной реакцией в режиме реального времени, нормируя уровни мРНК вируса на урвони мРНК Р-глюкоронидазы. Противовирусную активность различных доз препарата определяли по титру РНК вируса относительно контроля.

Из Фиг. 2 очевидно, что MDL72.527 эффективно подавлял репликацию вируса гепатита С, снижая титр его РНК в клетках.

Способ применения дигидрохлорида N,N'-бис-(2,3-бутадиенил)-1,4-диаминобутана (MDL72.527) для подавления репродукции вируса гепатита С путем добавления к клеткам печени/гепатомы, несущим репликон вируса гепатита С или инфицированных данным вирусом.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложена иммуногенная композиция, обеспечивающая защиту от HMPV подтипа А и/или ослабляющая патогенность, вызванную HMPV подтипа А, и содержащая один или более рекомбинантных ослабленных штаммов микобактерии, полученных из штамма Бациллы Кальметта-Герена (BCG), в количестве от 104 до 109 бактерий (КОЕ/доза) на штамм, и в которой каждый штамм экспрессирует Р-белок, который является Р-белком HMPV, в фармакологически соответствующем солевом буфере.

Способ лечения кроликов при миксоматозе // 2663324

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к способу лечения кроликов, больных миксоматозом. Способ предусматривает комплексное использование 1 раз в сутки в течение 10 дней анандина 10% в дозе 0,2 мл/кг, лозеваля в дозе 0,2 мл/кг и пихтоина.

Дейтерированные соединения хиназолинона и содержащие их фармацевтические композиции // 2656485

Настоящее изобретение относится к новому дейтерированному соединению хиназолинона формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающим свойствами ингибитора PI3К.

Слабозакристаллизованная β-модификация (s)-изопропил 2-((s)-(((2r,3r,4r,5r)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата, способ её получения и фармацевтическая композиция на её основе // 2656228

Изобретение относится к новой безводной модификации (S)-изопропил 2-((S)-(((2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-(2Н)-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)-(фенокси)фосфориламино)пропаноата для лечения хронического вирусного гепатита С, способу ее получения и фармацевтической композиции на ее основе, которые могут быть использованы в фармацевтической промышленности.

Получение вирусоподобной частицы вируса бешенства в растениях // 2655433

Предложенная группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены способы получения вирусоподобной частицы вируса бешенства (VLP) в растении или части растения, вирусоподобные частицы (VLP), полученные с их помощью, композиция, содержащая указанные вирусоподобные частицы (VLP), и способ индукции иммунитета к инфекции, вызванной вирусом бешенства.

Композиции и способы ингибирования вирусной полимеразы // 2654482

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), которые обладают свойствами ингибитора активности РНК полимеразы вируса и репликации вирусов РНК-содержащих вирусов, таких как ортомиксовируса, парамиксовируса, аренавируса, буньявируса, флавивируса, филовируса, тогавируса, пикорнавируса и коронавируса, аденовируса, риновируса, вируса гепатита А, вируса гепатита С, вируса полиомиелита, вируса кори, вируса Эбола, вируса Коксаки, вируса лихорадки Западного Нила, вируса оспы, вируса желтой лихорадки, вируса лихорадки Денге, вируса гриппа А, вируса гриппа В, вируса Ласса, вируса лимфоцитарного хориоменингита, вируса Хунин и др.

Нуклеозидфосфорамидаты в качестве противовирусных агентов // 2651892

Настоящее изобретение относится к изопропиловому эфиру (S)-2-{[(2R,3R,4R,5R)-5-(2,4-диоксо-3,4-дигидро-2Н-пиримидин-1-ил)-4-фтор-3-гидрокси-4-метил-тетрагидрофуран-2-илметокси]-фенокси-фосфориламино}-пропионовой кислоты и его стереоизомеру, которые могут использоваться для лечения вирусных инфекций у млекопитающих, способу его получения, композициям на его основе и его использованию для лечения вирусных заболеваний.

Однодоменные антитела к белку gp вируса эбола для иммунотерапии лихорадки эбола // 2644202

Изобретения относятся к области иммунологии и вирусологии. Представленные однодоменые и олигомерные антитела содержат антигенсвязывающую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из последовательностей SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, на основе которых созданы композиции, предназначенные для профилактики и лечения инфекции млекопитающих, вызванной вирусом Эбола.

Новые соединения // 2643371

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) и его фармацевтически приемлемой соли, обладающим свойствами индуктора интерферона α (IFN-α) и фактора некроза опухолей α (TNF-α).

Форзициазида сульфат и его производные, способ его получения и его применение // 2642784

Изобретение относится к форзициазида сульфату и его производным, представленным следующей формулой, где R представляет собой Na+, K+ или NH+, и способу их получения, а также к противовирусному лекарственному средству на их основе и его применению.

Композиции, содержащие сульфорафан или предшественник сульфорафана и экстракт или порошок молочного чертополоха // 2666953

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для перорального введения, предназначенную для увеличения содержания глутатиона, содержащую синергетическую комбинацию: глюкорафанина в качестве предшественника сульфорафана; миразиназы в качестве фермента, способного превращать предшественник сульфорафана в сульфорафан; аскорбиновой кислоты в качестве потенциатора фермента; и экстракта молочного чертополоха, стандартизованного до содержания от 20 до около 35 вес.% силибинина.

Кристаллическая модификация // 2666368

Изобретение относится к кристаллическому моногидрату элобиксибата, который может найти применение в препаратах для лечения или профилактики заболеваний, связанных с ингибированием подвздошного транспортера желчной кислоты (IBAT).

Способ получения средства, обладающего желчегонной, противовоспалительной и антиоксидантной активностью // 2665968

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего желчегонной, противовоспалительной и антиоксидантной активностью.

Производные бисамидов дикарбоновых кислот, их применение, фармацевтическая композиция на их основе, способы их получения // 2665688

Настоящее изобретение относится к новым биологически активным соединениям, производным бисамидов дикарбоновых кислот общей формулы I или их фармацевтически приемлемым солям, где R1 представляет собой 5-членную ненасыщенную гетероциклическую группу, содержащую 2 гетероатома, выбранных из N и/или S, необязательно конденсированную с 6-членной ненасыщенной циклической группой; R2 представляет собой группу -С(О)-R3-C(O)-, где R3 представляет собой группу -(CH2)n-, необязательно замещенную одним или двумя С1-С6 алкилами, или фенил, n представляет собой целое число от 0 до 4.

Композиция для предотвращения или лечения жировых болезней печени // 2664696

Изобретения относится к фармацевтической промышленности и представляет собой применение (тетрагидропиран-4-ил)-[2-фенил-5-(1,1-диоксо-тиоморфолин-4-ил)метил-1H-индол-7-ил]амина или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольного стеатогепатита, где неалкогольный стеатогепатит вызван накоплением жира в печени и оксидативным стрессом или воспалительными цитокинами, полученными из жировой печени.

Новые пиридазоны и триазиноны для лечения и профилактики заражения вирусом гепатита b // 2664329

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемым солям. В формуле (I) R1 представляет собой фенил, замещенный один или два раза C1-6алкилом, галогеном, трифторметилом или циано; R2 представляет собой C1-6алкил; R3 представляет собой фенил, замещенный один или два раза C1-6алкилом, галогеном, трифторметилом, циано, С1-6алкокси, трифторметокси, -С(О)-C1-6алкокси, или -C(O)-NR4R5, где один из R4 и R5 представляет собой водород или C1-6алкил, а другой представляет собой C1-6алкил или С3-7циклоалкил; а является одинарной связью, X представляет собой СН2 или NH.

Средство с панкрео- и гепатопротекторной активностью для парентерального введения // 2662324

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию лекарственного средства, обладающего панкрео- и гепатопротекторной активностью, в частности для лечения острого панкреатита и острого гепатита.

Способ профилактики неалкогольной жировой болезни печени у пациентов с желчнокаменной болезнью после лапароскопической холецистэктомии // 2657838

Изобретение относится к медицине и предназначено для профилактики неалкогольной жировой болезни печени у пациентов с желчнокаменной болезнью (ЖКБ) после лапароскопической холецистэктомии.

Применение суммарной рибонуклеиновой кислоты (рнк) из мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга млекопитающего в качестве средства для коррекции печеночной недостаточности // 2655761

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, трансплантологии, и может быть использовано для коррекции печеночной недостаточности у субъекта. Для этого применяют суммарную РНК, выделенную из мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток костного мозга млекопитающего.

Способ лечения печеночной недостаточности // 2655528

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, трансплантологии и может быть использовано для лечения печеночной недостаточности. Для этого выделяют из костного мозга донора мононуклеарную фракцию клеток.

Агрегированные частицы // 2666963

Изобретение относится к агрегированным частицам для ингаляции, содержащим нанодисперсные частицы лекарственного средства умеклидиния бромида, вилантерола трифенатата и флутиказона фуроата.