Модулирование экспрессии вируса гепатита b (hbv)

Изобретение может применяться в медицине и относится к одноцепочечному модифицированному олигонуклеотиду, состоящему из 16-30 связанных нуклеозидов и имеющему последовательность нуклеооснований, состоящую из последовательностей SEQ ID NO: 226, 17, 50, 224, 722, 807, 1327, 1340 и 1379, причем указанный олигонуклеотид содержит: сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов; сегмент крыла 5', состоящий из связанных нуклеозидов; и сегмент крыла 3', состоящий из связанных нуклеозидов; сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар или затрудненный этиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь или фосфодиэфирную связь; каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин. Предложены новые модифицированные олигонуклеотиды и композиции на их основе, эффективные для лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния. 6 н. и 10 з.п. ф-лы, 22 пр., 77 табл., перечень последовательностей.

 

Перечень последовательностей

Настоящая заявка подана вместе с перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей представлен в виде файла, озаглавленного BIOL0175WOSEQ.txt, который был создан 18 апреля 2012 года и имеет размер около 256 кБ. Информация о перечне последовательностей в электронном формате включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.

Область изобретения

В некоторых аспектах реализации данного изобретения представлены способы, соединения и композиции для ингибирования экспрессии мРНК и белка вируса гепатита В (HBV) у животного. Такие способы, соединения и композиции применимы для лечения, предупреждения или улучшения связанных с HBV заболеваний и расстройств.

Уровень техники

Гепатит В представляет собой вирусное заболевание, которое передается парентерально через зараженный материал, такой как кровь и продукты крови, зараженные иглы, половым путем, а также вертикально от инфицированных матерей к их потомству. По оценкам Всемирной организации здравоохранения, во всем мире инфицировано более 2 миллиардов людей, каждый год возникает около 4 миллионов острых случаев, происходит 1 миллион смертей в год и появляется 350-400 миллионов хронических носителей (Всемирная организация здравоохранения: Geographic Prevalence of Hepatitis B Prevalence, 2004. http://www.who.int/vaccines-surveillance/graphics/htmls/hepbprev.htm).

Вирус HBV представляет собой двухцепочечный гепатотропный вирус, который инфицирует только людей и приматов, не являющихся человеком. Репликация вируса происходит преимущественно в печени и, в меньшей степени, в почках, поджелудочной железе, костном мозге и селезенке (Hepatitis В virus biology. Microbiol Mol Biol Rev. 64: 2000; 51-68.). Вирусные и иммунные маркеры могут быть обнаружены в крови, и они характеризуют развивающиеся со временем структуры антигенов-антител. Первый обнаруживаемый вирусный маркер представляет собой HBsAg, за ним следует е-антиген гепатита В (HBeAg) и ДНК HBV. В инкубационный период титры могут быть высокими, однако уровни ДНК и HBeAg HBV падают при возникновении заболевания и могут быть не обнаруживаемыми во время пика клинической болезни (Hepatitis В virus infection-natural history and clinical consequences. N Engl J Med.. 350: 2004; 1118-1129). HBeAg представляет собой вирусный маркер, обнаруживаемый в крови, который коррелирует с активной вирусной репликацией и, следовательно, высокой вирусной нагрузкой и инфективностью (Hepatitis В е antigen-the dangerous end game of hepatitis B. N Engl J Med. 347: 2002; 208-210). Присутствие анти-HBsAb и анти-HBcAb (IgG) указывает на выздоровление и иммунитет у ранее инфицированного субъекта.

В настоящее время терапии для хронической инфекции HBV, которые рекомендованы Американской ассоциацией по изучению болезней печени (AASLD) и Европейской ассоциацией по изучению печени (EASL), включают интерферон альфа (INFα), пегилированный интерферон альфа-2а (Peg-IFN2a), энтекавир и тенофовир. Нуклеозидные и нуклеотидные терапии, энтекавир и тенофовир, являются успешными для снижения вирусной нагрузки, однако скорости снижения сероконверсии HBeAg и HBeAg даже ниже, чем эти показатели, полученные при терапии с IFNα. Также используют другие аналогичные терапии, включая ламивудин (ЗТС), телбивудин (LdT) и адефовир, однако для нуклеозидной/нуклеотидной терапии в целом, возникновение резистентности ограничивает терапевтическую эффективность.

Следовательно, в данной области техники существует необходимость открытия и разработки новых противовирусных терапий. Кроме того, существует необходимость в новых анти-HBV терапиях, способных увеличивать скорости сероконверсии HBeAg и HBsAg. В недавнем клиническом исследовании была обнаружена корреляция между, сероконверсией и снижением HBeAg (Fried et аl. (2008) Hepatology 47:428) и снижением HBsAg (Moucari et al. (2009) Hepatology 49:1151). Снижение уровней антигенов может обеспечивать возможность иммунологического контроля инфекции HBV, поскольку высокие уровни антигенов, предположительно, вызывают иммунологическую толерантность. Существующие нуклеозидные терапии для HBV способны существенно снижать уровни HBV, однако они слабо влияют на уровни HBeAg и HBsAg.

Антисмысловая технология развивается как эффективное средство снижения экспрессии специфических генных продуктов, и, следовательно, может быть подтверждена ее уникальная полезность в ряде терапевтических, диагностических и исследовательских применений для модулирования экспрессии HBV (смотри публикации патентов США №№2008/0039418 и 2007/0299027). Антисмысловая терапия отличается от нуклеозидной терапии тем, что она может напрямую влиять на транскрипты для антигенов HBV и, посредством этого, снижать уровни HBeAg и HBsAg в сыворотке. Из-за большого количества перекрывающихся транскриптов, вырабатываемых при инфекции HBV, существует также возможность снижения ДНК HBV, помимо HBeAg и HBsAg, одним антисмысловым олигомером. Следовательно, антисмысловая технология развивается как эффективное средство снижения экспрессии определенных генных продуктов, и, следовательно, может быть подтверждена ее уникальная полезность в ряде терапевтических, диагностических и исследовательских применений для модулирования HBV.

Краткое описание изобретения

В настоящем документе представлены способы, соединения и композиции для модулирования экспрессии мРНК и белка HBV. В некоторых аспектах реализации данного изобретения, соединения, применимые для модулирования экспрессии мРНК и белка HBV, представляют собой антисмысловые соединения. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды.

В некоторых вариантах реализации, модулирование может происходить в клетке или ткани. В некоторых вариантах реализации клетка или ткань находится в организме животного. В некоторых вариантах реализации животное представляет собой человека. В некоторых вариантах реализации снижаются уровни мРНК HBV. В некоторых вариантах реализации снижаются уровни ДНК HBV. В некоторых вариантах реализации снижаются уровни белка HBV. В некоторых вариантах реализации снижаются уровни антигена HBV. В некоторых вариантах реализации снижаются уровни s-антигена HBV (HBsAg). В некоторых вариантах реализации снижаются уровни е-антигена HBV (HBeAg). Такое снижение может происходить в зависимости от времени или в зависимости от дозы.

Также представлены способы, соединения и композиции, применимые для предупреждения, лечения и улучшения заболеваний, расстройств и состояний. В некоторых вариантах реализации, такие связанные с HBV заболевания, расстройства и состояния представляют собой болезни печени. В некоторых вариантах реализации, такие заболевания, расстройства и состояния печени включают желтуху, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, воспаление, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV и заболевание печени, связанное с трансплантацией. В некоторых вариантах реализации, такие связанные с HBV заболевания, расстройства и состояния представляют собой гиперпролиферативные заболевания, расстройства и состояния. В некоторых вариантах реализации такие гиперпролиферативные заболевания, расстройства и состояния включают рак, а также связанные злокачественные образования и метастазы. В некоторых вариантах реализации, такие виды рака включают рак печени и гепатоцеллюлярный рак (НСС).

Такие заболевания, расстройства и состояния могут в совокупности иметь один или несколько факторов риска, причин или последствий. Некоторые факторы риска и причины развития заболевания печени или гиперпролиферативного заболевания включают возраст; табакокурение; воздействие солнечного света и ионизирующей радиации; контакт с некоторыми химическими веществами; инфекцию некоторыми вирусами и бактериями; некоторые гормональные терапии; семейный анамнез рака; употребление алкоголя; и некоторые особенности образа жизни, включая плохое питание, недостаток физической активности и/или избыток веса. Некоторые симптомы и последствия, связанные с развитием заболевания печени или гиперпролиферативного заболевания, включают, но не ограничиваясь этим: болезнь, похожую на грипп, слабость, боли, головную боль, жар, потерю аппетита, диарею, желтуху, тошноту и рвоту, боль в области печени, стул земляного или серого цвета, зуд по всему телу и мочу темного цвета.

В некоторых вариантах реализации, способы лечения включают введение антисмыслового соединения HBV пациенту, нуждающемуся в этом. В некоторых вариантах реализации, способы лечения включают введение антисмыслового олигонуклеотида HBV пациенту, нуждающемуся в этом.

Подробное описание

Следует понимать, что изложенное выше общее описание и следующее подробное описание являются лишь примерными и пояснительными, и не являются ограничивающими заявленное изобретение. В настоящем документе применение единственного числа включает множественное число, если специально не оговорено иное. При использовании в настоящем документе, применение «или» означает «и/или», если не указано иное. Кроме того, использование термина «включая», а также других форм, таких как «включает» и «включен», не является ограничивающим. Также, такие термины как «элемент» или «компонент» охватывают элементы и компоненты, составляющие одно целое, а также элементы и компоненты, которые составляют более одной субъединицы, если специально не указано иное.

Заголовки разделов, используемые в настоящем документе, предназначены только для организационных целей, и их не следует толковать как ограничения описываемого предмета обсуждения. Все документы или части документов, которые упомянуты в настоящей заявке, включая, но не ограничиваясь этим, патенты, патентные заявки, статьи, книги и трактаты, в явной форме включены в настоящий документ путем ссылки в отношении фрагментов указанных документов, рассматриваемых в настоящем документе, а также в полном объеме.

Определения

Если не даны конкретные определения, то номенклатура, используемая в связи с методиками и приемами, а также сами методики и приемы аналитической химии, синтетической органической химии и медицинской и фармацевтической химии, описанные в настоящем документе, представляют собой те, которые хорошо известны и общеприняты в данной области техники. Для химического синтеза и химического анализа могут быть использованы стандартные методики. Где это допустимо, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, номера доступа GENBANK и связанная информация о последовательностях, которую можно получить из таких баз данных как Национальный центр биотехнологической информации (NCBI), а также другие данные, упомянутые в тексте настоящего описания, включены в настоящий документ путем ссылки в отношении фрагментов указанных документов, рассматриваемых в настоящем документе, а также в полном объеме.

Если не указано иное, то следующие термины имеют следующие значения:

«2'-O-метоксиэтил» (также 2'-МОЕ и 2'-O(СН2)2-ОСН3) относится к O-метокси-этиловой модификации в 2'-положении фуранозного кольца. Сахар с 2'-O-метоксиэтиловой модификацией представляет собой модифицированный сахар.

«2'-МОЕ нуклеозид» (также 2'-O-метоксиэтиловый нуклеозид) обозначает нуклеозид, содержащий 2'-МОЕ модифицированный сахарный фрагмент.

«2'-замещенный нуклеозид» обозначает нуклеозид, содержащий заместитель в 2'-положении фуранозильного кольца, отличный от Н или ОН. В некоторых вариантах реализации, 2'-замещенные нуклеозиды содержат нуклеозиды с бициклическими сахарными модификациями.

«3'-сайт-мишень» относится к нуклеотиду целевой нуклеиновой кислоты, который комплементарен к 3'-основному нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.

«5'-сайт-мишень» относится к нуклеотиду целевой нуклеиновой кислоты, который комплементарен к 5'-основному нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.

«5-метилцитозин» обозначает цитозин, модифицированный метильной группой, присоединенной в 5-положении. 5-метилцитозин представляет собой модифицированное нуклеооснование.

«Около» обозначает в пределах ±7% от значения. Например, если указано «соединения, по меньшей мере примерно на 70% ингибирующие HBV», подразумевается, что уровни HBV ингибированы в диапазоне от 63% до 77%.

«Приемлемый профиль безопасности» обозначает характеристику побочных эффектов, которая находится в пределах клинически допустимых пределов.

«Активное фармацевтическое средство» обозначает вещество или вещества в фармацевтической композиции, которые обеспечивают терапевтическое преимущество при введении пациенту. Например, в некоторых вариантах реализации, антисмысловый олигонуклеотид, направленный на HBV, представляет собой активное фармацевтическое средство.

«Активная область мишени» обозначает область мишени, на которую направлено одно или несколько активных антисмысловых соединений. «Активные антисмысловые соединения» обозначают антисмысловые соединения, которые снижают уровни целевой нуклеиновой кислоты или уровни белка.

«Острая инфекция гепатита В» возникает, если у пациента, на которого воздействовал вирус гепатита В, начали развиваться признаки и симптомы вирусного гепатита. Этот период времени, называемый инкубационным периодом, составляет около 90 дней, но может быть коротким, лишь 45 дней, или более продолжительным, до 6 месяцев. Для большинства людей эта инфекция вызывает слабый или умеренный дискомфорт, и проходит самостоятельно благодаря иммунной реакции организма, борющейся с вирусом. Однако у некоторых людей, особенно у людей с ослабленной иммунной системой, таких как пациенты, страдающие СПИДом, проходящие химиотерапию, принимающие иммуноподавляющие лекарства или принимающие стероиды, из-за острой инфекции HBV существуют серьезные проблемы, которые перерастают в более тяжелые состояния, такие как скоротечная печеночная недостаточность.

«Введенные одновременно» относится к совместному введению двух средств любым способом, при котором фармакологическое действие обоих средств проявляется у пациента одновременно. При одновременном введении не требуется, чтобы оба агенты были введены в одной фармацевтической композиции, в одной лекарственной форме или одним способом введения. Действие обоих средств не обязательно должно проявляться одновременно. Их действие должно лишь перекрываться в течение определенного периода времени, и оно не обязательно должно иметь одинаковую протяженность по времени.

«Введение» обозначает предоставление фармацевтического средства пациенту, и включает, но не ограничиваясь этим, введение медицинским специалистом или самостоятельное введение.

«Средство» обозначает активное вещество, которое может обеспечивать терапевтическое преимущество при введении животному. «Первое средство» обозначает терапевтическое соединение, описанное в настоящем документе. Например, первое средство может быть антисмысловым олигонуклеотид ом, направленным на HBV. «Второе средство» обозначает второе терапевтическое соединение, описанное в настоящем документе (например, второй антисмысловый олигонуклеотид, направленный на HBV) и/или не-HBV терапевтическое соединение.

«Улучшение» относится к уменьшению по меньшей мере одного показателя тяжести состояния или заболевания. Тяжесть показателей может быть определена субъективными или объективными оценками, известными специалистам в данной области.

«Животное» относится к человеку или животному, не являющемуся человеком, включая, но не ограничиваясь этим, мышей, крыс, кроликов, собак, котов, свиней и приматов, не являющихся человеком, включая, но не ограничиваясь этим, обезьян и шимпанзе.

«Антитело» относится к молекуле, которая характеризуется каким-либо специфическим взаимодействием с антителом, причем каждое антитело и антиген определены в отношении друг друга. Антитело может относиться к полной молекуле антигена или его фрагменту или области, такой как тяжелая цепь, легкая цепь, область Fab и область Fc.

«Антисмысловая активность» обозначает любую обнаруживаемую или измеримую активность, которая относится к гибридизации антисмыслового соединения с его целевой нуклеиновой кислотой. В некоторых вариантах реализации, антисмысловая активность представляет собой снижение количества или экспрессии целевой нуклеиновой кислоты или белка, кодируемого такой целевой нуклеиновой кислотой.

«Антисмысловое соединение» обозначает олигомерное соединение, способное подвергаться гибридизации с целевой нуклеиновой кислотой при помощи водородной связи. Примеры антисмысловых соединений включают одноцепочечные и двухцепочечные соединения, такие как антисмысловые олигонуклеотиды, миРНК, шкРНК, мноРНК, микроРНК и сателлитные повторы.

«Антисмысловое ингибирование» обозначает снижение уровней целевой нуклеиновой кислоты в присутствии антисмыслового соединения, комплементарного к целевой нуклеиновой кислоте по сравнению с уровнями целевой нуклеиновой кислоты в отсутствие антисмыслового соединения.

«Антисмысловые механизмы» представляют собой все механизмы, включающие гибридизацию соединения с целевой нуклеиновой кислотой, причем результат или эффект гибридизации заключается в целевом разрушении или целевой оккупации с сопутствующей остановкой клеточного механизма, включающего, например, транскрипцию или сплайсинг.

«Антисмысловый олигонуклеотид» обозначает одноцепочечный олигонуклеотид, имеющий последовательность нуклеооснований, которая допускает гибридизацию с соответствующей областью или сегментом целевой нуклеиновой кислоты.

«Основная комплементарность» относится к способности точного спаривания нуклеооснований антисмыслового олигонуклеотида с соответствующими нуклеооснованиями в целевой нуклеиновой кислоте (то есть гибридизации), и она опосредована водородным связыванием Уотсона-Крика, Хугстина или обратным водородным связыванием Хугстина между соответствующими нуклеооснованиями.

«Бициклический сахар» обозначает фуранозное кольцо, модифицированное мостиковым присоединением двух не геминальных атомов углерода. Бициклический сахар представляет собой модифицированный сахар.

«Вес тела» относится к полному весу тела животного, включая все ткани, в том числе жировую ткань.

«Кэп-структура» или «концевой кэп-фрагмент» обозначает химические модификации, которые были внедрены в любой конец антисмыслового соединения.

«cEt» или «затрудненный этил» обозначает бициклический сахарный фрагмент, включающий мостик, соединяющий 4'-углерод и 2'-углерод, причем указанный мостик имеет формулу: 4'-СН(СН3)-O-2'.

«Затрудненный этилнуклеозид» (также cEt нуклеозид) обозначает нуклеозид, включающий бициклический сахарный фрагмент, содержащий мостик 4'-СН(СН3)-O-2'.

«Химически отличная область» относится к области антисмыслового соединения, которая каким-либо образом химически отличается от другой области того же антисмыслового соединения. Например, область, имеющая 2'-O-метоксиэтил нуклеотиды является химически отличной от области, имеющей нуклеотиды с 2'-O-метоксиэтиловыми модификациями.

«Химерные антисмысловые соединения» обозначает антисмысловые соединения, которые имеют по меньшей мере 2 химически отличных области, каждое положение имеет множество субъединиц.

«Хроническая инфекция гепатита В» возникает, если субъект, который изначально страдал острой инфекцией, впоследствии не поборол эту инфекцию. Станет ли заболевание хроническим или будет полностью излечено, - зависит, в основном, от возраста инфицированного субъекта. Хроническое заболевание развивается примерно у 90% детей, инфицированных при рождении. Однако, по мере взросления субъекта, риск хронической инфекции снижается, и острая инфекция перерастает в хроническую у 20%-50% детей и менее 10% подростков и взрослых. Хронические инфекции HBV представляют собой основную лечебную цель для вариантов реализации настоящего изобретения, хотя композиции антисмысловых нуклеотидов (ASO) настоящего изобретения также могут лечить связанные с HBV состояния, такие как воспаление, фиброз, цирроз, рак печени, серозный гепатит и другие.

«Совместное введение» обозначает введение пациенту двух или более фармацевтических средств. Два или более фармацевтических средств могут быть в одной фармацевтической композиции или могут быть в отдельных фармацевтических композициях. Каждый из двух или более фармацевтических средств может вводиться таким же или другим способом введения. Совместное введение включает параллельное или последовательное введение.

«Комплементарность» обозначает способность спаривания между нуклеооснованиями первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты.

«Выполнение» обозначает соблюдение пациентом рекомендованного лечения.

«Включают», «включает» и «включающий» следует понимать как предполагающие включение указанной стадии или элемента, или группы стадий или элементов, но не как исключение какой-либо другой стадии или элемента, или группы стадий или элементов.

«Смежные нуклеооснования» обозначает нуклеооснования, расположенные непосредственно рядом друг с другом.

«Курс лечения» обозначает способ или курс, который восстанавливает здоровье или представляет собой предписанное лечение определенной болезни.

«Дезоксирибонуклеотид» обозначает нуклеотид, имеющий водород в 2' положении сахарной части нуклеотида. Дезоксирибонуклеотиды могут быть модифицированы любым из множества заместителей.

«Разработан» или «разработан для» относится к процессу разработки олигомерного соединения, которое специфически гибридизуется с определенной молекулой нуклеиновой кислоты.

«Разбавитель» обозначает ингредиент в композиции, которые не обладает фармакологической активностью, но является фармацевтически необходимым или желательным. Например, в лекарствах для инъекций разбавитель может быть жидкостью, например, солевым раствором.

«Лекарственная форма» обозначает форму, в которой представлено фармацевтическое средство, например, пилюля, таблетка или другая лекарственная форма, известная в данной облатти техники.

«Доза» обозначает определенное количество фармацевтического средства, которое обеспечивается при разовом введении или в течение определенного периода времени. В некоторых вариантах реализации, доза может быть введена двумя или более болюсами, таблетками или инъекциями. Например, в некоторых вариантах реализации, если необходимо подкожное введение, то для заданной дозы необходим объем, который не может быть обеспечен одной инъекцией. В таких вариантах реализации для достижения заданной дозы может быть использовано две или более инъекций. В некоторых вариантах реализации доза может быть введена двумя или более инъекциями для минимизации реакции пациента в точке инъекции. В других вариантах реализации, фармацевтическое средство вводят инфузией в течение продолжительного периода времени или непрерывно. Дозы могут быть определены как количество фармацевтического средства в час, день, неделю или месяц.

«Режим дозирования» представляет собой комбинацию доз, предназначенную для достижения одного или нескольких заданных эффектов.

«Продолжительность» обозначает период времени, в течение которого продолжается определенная активность или событие. В некоторых вариантах реализации продолжительность лечения представляет собой период времени, в течение которого вводят дозы фармацевтического средства.

«Эффективное количество» в контексте модулирования активности или лечения, или предупреждения состояния, обозначает введение такого количества активного ингредиента пациенту, нуждающемуся в таком модулировании, лечении или профилактике, как в однократной дозе, так и в составе серии доз, которое является эффективным для модулирования указанного эффекта, или для лечения, или для профилактики, или для улучшения указанного состояния. Эффективное количество может варьироваться в зависимости от состояния здоровья и физического состояния пациента, подлежащего лечению, таксономической группы пациентов, подлежащих лечению, состава композиции, оценки медико-санитарной обстановки и других релевантных факторов.

«Эффективность» обозначает способность вызывать заданный эффект.

«Экспрессия» включает все функции, при помощи которых кодированная геном информация превращается в структуры, существующие и функционирующие в клетке. Такие структуры включают, но не ограничиваясь этим, продукты транскрипции и трансляции.

«Полная комплементарность» или «100% комплементаность» обозначает, что каждое нуклеооснование первой нуклеиновой кислоты имеет комплементарное нуклеооснование во второй нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации, первая нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение, а целевая нуклеиновая кислота представляет собой вторую нуклеиновую кислоту.

«Полностью модифицированный мотив» относится к антисмысловому соединению, включающему смежную последовательность нуклеозидов, причем практически каждый нуклеозид представляет собой нуклеозид с модифицированным сахаром, имеющий однообразную модификацию.

«Химерный олигонуклеотид» обозначает химерное антисмысловое соединение, в котором внутренняя область, имеющая множество нуклеозидов, которые поддерживают Н расщепление РНазы, расположена между внешними областями, имеющими один или несколько нуклеозидов, причем нуклеозиды, включающие внутреннюю область, являются химически отличными от нуклеозида или нуклеозидов, составляющих внешние области. Внутренняя область может быть упомянута как «гэп», а внешние области могут быть упомянуты как «крылья».

«С увеличенным гэп» обозначает антисмысловое соединение, имеющее сегмент гэп из 12 или более смежных 2'-дезоксирибонуклеотидов, расположенных между 5' и 3' сегментами крыльев, имеющими от одного до шести нуклеотидов с фрагментами модифицированного сахара.

«HBV» обозначает вирус гепатита В млекопитающих, включая вирус гепатита В человека. Этот термин охватывает географические генотипы вируса гепатита В, в частности, вирус гепатита В человека, а также различные штаммы географических генотипов вируса гепатита В.

«Антиген HBV» обозначает любой антиген или белок вируса гепатита В, включая ядерный белок, такой как «ядерный антиген гепатита В» или «HBcAG» и «антиген Е гепатита В», или «HBeAG» и белки оболочки, такие как «поверхностный антиген HBV» или «HBsAg», или «HBsAG».

«Антиген Е гепатита В» или «HBeAg», или «HBeAG» представляет собой секретируемую, нечастичную форму ядерного белка HBV. Антигены HBV HBeAg и HBeAg имеют общие первичные аминокислотные последовательности, поэтому демонстрируют перекрестную активность на Т-клеточном уровне. HBeAg не является необходимым для вирусной сборки или репликации, хотя исследования позволяют предположить, что они могут быть необходимы для создания хронической инфекции. Неонатальное инфицирование HBeAg-негативным мутантом зачастую приводит к моментальному возникновению острой, а не хронической инфекции HBV (Terezawa et al. (1991) Pediatr. Res. 29:5), тогда как инфицирование молодых североамериканских лесных сурков WHeAg-негативным мутантом приводит к гораздо более низкому уровню хронической инфекции WHV (Cote et al. (2000) Hepatology 31:190). HBeAg может потенциально действовать как толераген путем инактивации сердцевинных специфических Т-клеток за счет удаления или клональной анэргии (Milich et al. (1998) J. Immunol. 160:8102). Существует положительная корреляция между снижением вирусной нагрузки и антигенов HBV и снижением экспрессии Т-клетками ингибирующего рецептора, программирующего гибель, 1 (PD-1, известного также как PDCD1), отрицательного регулятора активированных Т-клеток, при противовирусной терапии и сероконверсии HbeAg(Evans et al. (2008) Hepatology 48:759).

«мРНК HBV» обозначает любую матричную РНК, экспрессируемую вирусом гепатита В.

«Нуклеиновая кислота HBV» или «ДНК HBV» обозначает любую нуклеиновую кислоту, кодирующую HBV. Например, в некоторых вариантах реализации, нуклеиновая кислота HBV включает, без ограничения, любую последовательность ДНК вируса, кодирующую геном HBV или его часть, любую последовательность РНК, транскрибируемую из вирусной ДНК, включая любую последовательность мРНК, кодирующую белок HBV.

«Белок HBV» обозначает любой белок, секретируемый вирусом гепатита В. Этот термин охватыват различные антигены HBV, включая ядерные белки, такие как «антиген Е гепатита», «HBeAg», или «HBeAG» и оболочечные белки, такие как «поверхностный антиген HBV» или «HBsAg».

«Поверхностный антиген HBV» или «HBsAg», или «HBsAG» представляет собой оболочечный белок инфекционных вирусных частиц HBV, но он также секретируется как неинфекционная частица с содержанием в сыворотке в 1000 раз выше, чем вирусные частицы HBV. Уровни HBsAg в сыворотке инфицированного человека или животного могут достигать 1000 мкг/мл (Kann and Gehrlich (1998) Topley & Wilson’s Microbiology and Microbial Infections, 9th ed. 745). При острых инфекциях HBV, период полувыведения HBsAg из сыворотки, или t½, составляет 8,3 дня (Chulanov et al. (2003) J. Med. Virol. 69: 313). Интернализация HBsAg миелоидными дендритными клетками ингибирует повышующую регуляцию со-стимулирующих молекул (то есть В7) и ингибирует стимулирующую способность Т-клеток (den Brouw et al. (2008) Immunology 126:280), и дендритные клетки хронически инфицированных пациентов также демонстрируют недостаток экспрессии со-стимулирующих молекул, секреции IL-12 и стимуляции Т-клеток в присутствии HBsAg (Zheng et al. (2004) J. Viral Hepatitis 11:217). HBsAg-специфичные клетки CD8 пациентов с СНВ демонстрируют измененное тетрамерное связывание. Эти клетки CD8 не являются анэргическими, но они могут обладать топологией TCR, которая обусловливает частичную переносимость или невосприимчивость (Reignat et al. (2002) J. Exp. Med. 195:1089). Более того, снижение HBsAg в сыворотке >1 log на 24 неделе имеет высокое предиктивное значение (92%) для устойчивой вирологической реакции (SVR - определяется как не обнаруживаемая ДНК HBV по ПЦР через 1 год после лечения) в ходе Peg-IFNα2a терапии (Moucari et al. (2009) Hepatology 49:1151).

«Состояние, связанное с гепатитом В» или «HBV-связанное состояние» обозначает любое заболевание, биологическое состояние, медицинское состояние или событие, которое обострено, обусловлено, связано, имеет отношение или приписано к инфекции, воздействию или болезни гепатита В. Термин «состояние, связанное с гепатитом В» включает хроническую инфекцию HBV, воспаление, фиброз, цирроз, рак печени, серозный гепатит, желтуху, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюляное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV, заболевание печени, связанное с трансплантацией, и состояния, имеющие симптомы, которые могут включать любой или все из следующих: болезнь, похожую на грипп, слабость, боли, головную боль, жар, потерю аппетита, диарею, тошноту и рвоту, боль в области печени, стул земляного или серого цвета, зуд по всему телу и мочу темного цвета, в сочетании с положительным тестом на присутствие вируса гепатита В, вирусного антигена гепатита В или положительным тестом на присутствие антитела, специфичного к вирусному антигену гепатита В.

«Гибридизация» обозначает гибридизацию молекул комплементарных нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах реализации, молекулы комплементарных нуклеиновых кислот включают, но не ограничиваясь этим, антисмысловое соединение и целевую нуклеиновую кислоту. В некоторых вариантах реализации, молекулы комплементарных нуклеиновых кислот включают, но не ограничиваясь этим, антисмысловый олигонуклеотид и целевую нуклеиновую кислоту.

«Идентификация животного, имеющего инфекцию HBV» обозначает определение животного, у которого диагностирован HBV; или определение животного, имеющего любой симптом инфекции HBV, включая, но не ограничиваясь этим, хроническую инфекцию HBV, воспаление, фиброз, цирроз, рак печени, серозный гепатит, желтуху, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV, заболевание печени, связанное с трансплантацией, и состояния, имеющие симптомы, которые могут включать любой или все из следующих: болезнь, похожую на грипп, слабость, боли, головную боль, жар, потерю аппетита, диарею, тошноту и рвоту, боль в области печени, стул земляного или серого цвета, зуд по всему телу и мочу темного цвета, в сочетании с положительным тестом на присутствие вируса гепатита В, вирусного антигена гепатита В или положительным тестом на присутствие антитела, специфичного к вирусному антигену гепатита В, в сочетании с положительным тестом на присутствие вируса гепатита В, вирусного антигена гепатита В или положительным тестом на присутствие антитела, специфичного к вирусному антигену гепатита В.

«Непосредственно смежные» обозначает отсутствие промежуточных элементов между непосредственно смежными элементами.

«Пациент» обозначает человека или животного, не являющегося человеком, выбранного для лечения или терапии.

«Выполнение пациентом» обозначает соблюдение пациентом рекомендованного или предписанного лечения.

«Вызывает», «ингибирует», «потенцирует», «повышает», «увеличивает», «снижает» и тому подобные, обычно обозначают количественные различия между двумя состояниями. Такие термины могут относиться к статистически значимому различию между двумя состояниями. Например, «количество, эффективное для ингибирования активности или экспрессии HBV», обозначает, что уровень активности или экспрессии HBV в обработанном образце количественно отличается, и может быть статистически значимым, от уровня активности или экспрессии HBV в необработанных клетках. Такие термины применяют, например, к уровням экспрессии и уровням активности.

«Ингибирование HBV» обозначает снижение уровня экспрессии мРНК, ДНК и/или белка HBV. В некоторых вариантах реализации, HBV ингибируют в присутствии антисмыслового соединения, направленного на HBV, включая антисмысловый олигонуклеотид, направленный на HBV, по сравнению с уровнями экспрессии мРНК, ДНК и/или белка HBV в отсутствие HBV антисмыслового соединения, такого как антисмысловый олигонуклеотид.

«Ингибирование экспрессии или активности» относится к снижению, блокированию экспрессии или активности и не обязательно обозначает полное исключение экспрессии или активности.

«Реакция в точке инъекции» обозначает воспаление или аномальное покраснение кожи пациента в месте инъекции.

«Межнуклеозидная связь» относится к химической связи между нуклеозидами.

«Внутрибрюшинное введение» обозначает введение в брюшину инфузией или инъекцией.

«Внутривенное введение» обозначает введение в вену.

«Удлиненные» антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой те, которые имеют один или несколько дополнительных нуклеозидов по сравнению с антисмысловым олигонуклеотидом, описанным в настоящем документе.

«Связанный дезоксинуклеозид» обозначает основание нуклеиновой кислоты (A, G, С, Т, U), замещенное дезоксирибозой, связанной фосфатным эфиром с образованием нуклеотида.

«Связанные нуклеозиды» обозначает соседние нуклеозиды, связанные вместе межнуклеозидной связью.

«Блокированная нуклеиновая кислота» или «БНК», или «БЫК нуклеозиды» обозначает мономеры нуклеиновых кислот, имеющие мостиковое соединение двух атомов углеродов между положением 4' и 2' нуклеозидного сахарного звена, с образованием посредством этого бициклического сахара. Примеры такого бициклического сахара включают, но не ограничиваясь этим, А) α-L-метиленокси (4'-СН2-O-2') БНК, (В) β-D-метиленокси (4'-СН2-O-2') БНК, (С) этиленокси (4'-(СН2)2-O-2') БНК, (D) аминоокси (4'-CH2-O-N(R)-2') БНК и (Е) оксиамино (4'-CH2-N(R)-O-2') БНК, как показано ниже.

При использовании в настоящем документе, БНК соединения включают, но не ограничиваясь этим, соединения, имеющие по меньшей мере один мостик между положением 4' и 2' сахара, причем каждый из мостиков независимо включает 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, -C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R1)2-, -S(=O)x- и -N(R1)-; причем: х равен 0, 1 или 2; n равен 1, 2, 3 или 4; каждый R1 и R2 независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, C1-C12 алкил, замещенный C112 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный C2-C12 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, C5-C20 арил, замещенный C5-C20 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, Cs-C-j алициклический радикал, замещенный C5-C7 алициклический радикал, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)2-J1), или сульфоксил (S(=O)-J1); и каждый Ji и J2 независимо представляет собой Н, C1-C12 алкил, замещенный C1-C12 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный C2-C12 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, С520 арил, замещенный C5-C20 арил, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C1-C12 аминоалкил, замещенный C112 аминоалкил или защитную группу.

Примеры 4'-2' мостиковых групп, входящих в определение БНК, включают, но не ограничиваясь этим, группы формул: -[C(R1)(R2)]n-, -[C(R1)(R2)]n-O-, -C(R1R2)-N(R1)-O- или -C(R1R2)-O-N(R1)-. Более того, другие группы, входящие в определение БНК, представляют собой 4'-СН2-2', 4'-(СН2)2-2', 4'-(СН2)3-2', 4'-СН2-O-2', 4'-(СН2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R1)-2' и 4'-CH2-N(R1)-O-2'- мостики, причем каждый R1 и R2 независимо представляет собой Н, защитную группу или С112 алкил.

Также в определение БНК по настоящему изобретению включены БНК, в которых 2'-гидроксильная группа рибозильного сахарного кольца связана с 4' углеродным атомом сахарного кольца с образованием посредством этого метиленокси (4'-СН2-O-2') мостика для получения бициклического сахарного фрагмента. Мостик также может быть метиленовой (-СН2-) группой, соединяющей 2' кислородный атом и 4' углеродный атом, для которой используют термин метиленокси (4'-СН2-O-2') БНК. Более того, в случае бициклического сахарного фрагмента, имеющего этиленовую мостиковую группу в этом положении, используют термин этиленокси (4'-СН2СН2-O-2') БНК. a-L-метиленокси (4'-СН2-O-2'), изомер метиленокси (4'-СН2-O-2') БНК, также входит в определение БНК, используемое в настоящем документе.

«Не совпадающий» или «не комплементарный нуклеозид» относится к случаю, когда нуклеооснование первой нуклеиновой кислоты не может спариваться с соответствующим нуклеооснованием второй или целевой нуклеиновой кислоты.

«Модифицированная межнуклеозидная связь» относится к замещению или любому изменению природной межнуклеозидной связи (то есть фосфодиэфирной межнуклеозидной связи).

«Модифицированное нуклеооснование» обозначает нуклеооснование, отличное от аденина, цитозина, гуанина, тимидина или урацила. «Не модифицированное нуклеооснование» обозначает пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G), а также пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U).

«Модифицированный нуклеозид» обозначает нуклеозид, имеющий, независимо, модифицированный сахарный фрагмент и/или модифицированное нуклеооснование.

«Модифицированный нуклеотид» обозначает нуклеотид, имеющий, независимо, модифицированный сахарный фрагмент, модифицированную межнуклеозидную связь или модифицированное нуклеооснование.

«Модифицированный олигонуклеотид» обозначает олигонуклеотид, включающий по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь, модифицированный сахар и/или модифицированное нуклеооснование.

«Модифицированный сахар» обозначает замещение и/или любое изменение природного сахарного фрагмента.

«Мономер» относится к одному звену олигомера. Мономеры включают, но не ограничиваясь этим, нуклеозиды и нуклеотиды, будь то природные или модифицированные.

«Мотив» обозначает схему не модифицированных и модифицированных нуклеозидов в антисмысловом соединении.

«Природный сахарный фрагмент» обозначает сахарный фрагмент, который находится в ДНК (2'-Н) или РНК (2'-ОН).

«Природная межнуклеозидная связь» обозначает 3'-5' фосфодиэфирную связь.

«Некомплементарное нуклеооснование» относится к паре нуклеооснований, которые не образуют водородные связи друг с другом или иным образом не поддерживают гибридизацию.

«Нуклеиновая кислота» относится к молекулам, состоящим из мономерных нуклеотидов. Нуклеиновая кислота включает, но не ограничиваясь этим, рибонуклеиновые кислоты (РНК), дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК), одноцепочечные нуклеиновые кислоты, двухцепочечные нуклеиновые кислоты, малые интерферирующие рибонуклеиновые кислоты (миРНК) и микроРНК (микроРНК).

«Нуклеооснование» обозначает гетероциклический фрагмент, способный спариваться с основанием другой нуклеиновой кислоты.

«Комплементарность нуклеооснования» относится к нуклеооснованию, которое способно к спариванию с другим нуклеооснованием. Например, аденин (А) в ДНК комплементарен тимину (Т). Например, аденин (А) в РНК комплементарен урацилу (U). В некоторых вариантах реализации комплементарное нуклеооснование относится к нуклеооснованию антисмыслового соединения, которое способно к спариванию с нуклеооснованием его целевой нуклеиновой кислоты. Например, если нуклеооснование в определенном положении антисмыслового соединения способно к водородному связыванию с нуклеооснованием в определенном положении целевой нуклеиновой кислоты, то это положение водородного связывания между указанным олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислоты считают комплементарным по этой паре нуклеооснований.

«Последовательность нуклеооснований» обозначает порядок смежных нуклеооснований, независимый от какого-либо сахара, связи и/или модификации нуклеооснования.

«Нуклеозид» обозначает нуклеооснование, связанное с сахаром.

«Нуклеозид-миметик» включает такие структуры, используемые для замены сахара или сахара и основания, и необязательно связи в одном или нескольких положениях олигомерного соединения, как, например, нуклеозид-миметики, имеющие морфолино, циклогексенил, циклогексил, тетрагидропиранил, бицикло или трицикло-сахарные заменители, например, не фуранозные сахарные звенья. Нуклеотид-миметик включает такие структуры, используемые для замены нуклеозида и связи в одном или нескольких положениях олигомерного соединения, как, например, пептидные нуклеиновые кислоты или морфолиновые соединения (морфолиновые соединения, связанные при помощи -N(H)-C(=O)-O- или другой не фосфодиэфирной связи). Заменитель сахара пересекается с несколько более широким термином нуклеозид-миметика, но он предназначен для указания замены только сахарного звена (фуранозного кольца). Тетрагидропираниловые кольца, представленные в настоящем документе, являются иллюстративными для примера заменителя сахара, в котором группа фуранозного сахара заменена тетрагидропираниловой кольцевой системой. «Миметик» относится к группам, которые являются заменой для сахара, нуклеооснования и/или межнуклеозидной связи. Как правило, миметик используют вместо сахара или комбинации сахара и межнуклеозидной связи, а нуклеооснование сохраняется для гибридизации с выбранной мишенью.

«Нуклеотид» обозначает нуклеозид, имеющий фосфатную группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида.

«Нецелевое действие» относится к нежелательному или пагубному биологическому действию, связанному с модулированием экспрессии РНК или белка гена, отличного от целевой нуклеиновой кислоты.

«Олигомерное соединение» обозначает полимер связанных мономерных субъединиц, который способен гибридизоваться по меньшей мере с какой-либо областью молекулы нуклеиновой кислоты.

«Олигонуклеозид» обозначает олигонуклеотид, в котором межнуклеозидные связи не содержат атом фосфора.

«Олигонуклеотид» обозначает полимер связанных нуклеозидов, каждый из которых может быть модифицированным или не модифицированным, не зависимо друг от друга.

«Парентеральное введение» обозначает введение инъекцией (например, болюсной инъекцией) или инфузией. Парентеральное введение включает подкожное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, внутриартериальное введение, внутрибрюшинное введение или внутричерепное введение, например, интратекальное или интрацеребровентрикулярное введение.

«Пептид» обозначает молекулу, образованную связыванием по меньшей мере двух аминокислот амидными связями. Без ограничения, при использовании в настоящем документе, «пептид» относится к полипептидам и белкам.

«Фармацевтически приемлемый носитель» обозначает среду или разбавитель, который не взаимодействует со структурой олигонуклеотида. Некоторые такие носители обеспечивают возможность составления фармацевтических композиций, таких как, например, таблетки, пилюли, драже, капсулы, жидкости, гели, сиропы, взвеси, суспензии и пастилки для перорального приема пациентом.

«Фармацевтически приемлемое производное» охватывает фармацевтически приемлемые соли, конъюгаты, пролекарства или изомеры соединений, описанных в настоящем документе.

«Фармацевтически приемлемые соли» обозначает физиологически и фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, то есть соли, которые сохраняют заданную биологическую активность исходного олигонуклеотида и не наделяют его нежелательным токсикологическим действием.

«Фармацевтическое средство» обозначает вещество, которое обеспечивает терапевтическое преимущество при введении пациенту. Например, в некоторых вариантах реализации, антисмысловый олигонуклеотид, направленный на HBV, представляет собой фармацевтическое средство.

«Фармацевтическая композиция» обозначает смесь веществ, пригодную для введения субъекту. Например, фармацевтическая композиция может включать антисмысловый олигонуклеотид и стерильный водный раствор. В некоторых вариантах реализации фармацевтическая композиция демонстрирует активность в анализе свободного поглощения в некоторых клеточных линиях.

«Фосфотиоатная связь» обозначает связь между нуклеозидами, где фосфодиэфирная связь модифицирована заменой одного из не мостиковых атомов кислорода атомом серы. Фосфотиоатная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

«Часть» обозначает определенное количество смежных (то есть связанных) нуклеооснований нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации, часть является определенным количеством смежных нуклеооснований целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации, часть является определенным количеством смежных нуклеооснований антисмыслового соединения.

«Предупреждение» или «профилактика» относится к отсрочке или предотвращению возникновения или развития состояния или заболевания в течение периода времени от часов до дней, предпочтительно от недель до месяцев.

«Пролекарство» обозначает терапевтическое средство, которое готовят в неактивной форме, которая превращается в активную форму (то есть лекарство) внутри организма или его клеток под действием эндогенных ферментов или других химических веществ и/или условий.

«Профилактически эффективное количество» относится к количеству фармацевтического средства, которое обеспечивает профилактическое или превентивное преимущество для животного.

«Рекомендованная терапия» обозначает лечебную схему, рекомендованную медицинским специалистом для лечения, улучшения или предупреждения заболевания.

«Область» определяют как часть целевой нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере одну идентифицируемую структуру, функцию или характеристику.

«Рибонуклеотид» обозначает нуклеотид, имеющий гидрокси-группу в 2' положении сахарной части нуклеотида. Рибонуклеотиды могут быть модифицированы любым из множества заместителей.

«Соли» обозначают физиологически и фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, то есть соли, которые сохраняют заданную биологическую активность исходного олигонуклеотида и не наделяют его нежелательным токсикологическим действием.

«Сегменты» определяют как более мелкие или субфрагменты областей целевой нуклеиновой кислоты.

«Сероконверсию» определяют как отсутствие HBeAg в сыворотке плюс присутствие HBeAb в сыворотке, в случае мониторинга HBeAg как определителя сероконверсии, или определяют как отсутствие HBsAg в сыворотке, в случае мониторинга HBsAg как определителя сероконверсии, по результатам определения доступных в настоящее время пределов обнаружения коммерческих систем иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA).

«Укороченные» или «усеченные» версии антисмысловых олигонуклеотидов, представленных в настоящем документе, имеют один, два или более удаленных нуклеозидов.

«Побочные эффекты» обозначает физиологические реакции, приписываемые лечению, которые отличны от заданного действия. В некоторых вариантах реализации, побочные эффекты включают, без ограничения, реакции в точке инъекции, аномалии при испытании функции печени, аномалии функции почек, печеночную токсичность, почечную токсичность, аномалии центральной нервной системы и миопатии. Например, повышенные уровни аминотрансферазы в сыворотке могут указывать на печеночную токсичность или аномалию функции печени. Например, повышенный билирубин может указывать на печеночную токсичность или аномалию функции печени.

«Существенный», при использовании в настоящем документе, обозначает измеримый или наблюдаемый, например, существенный результат, такой как существенное улучшение или существенное снижение, как правило, относится к измеримому или наблюдаемому результату, такому как измеримое или наблюдаемое улучшение или снижение.

«Сайты», при использовании в настоящем документе, определяют как уникальные положения нуклеооснований в целевой нуклеиновой кислоте.

«Замедляет прогрессирование» обозначает уменьшение развития указанного заболевания.

«Может специфически гибридизоваться» относится к антисмысловому соединению, имеющему достаточную степень комплементарности между антисмысловым олигонуклеотидом и целевой нуклеиновой кислотой для инициации заданного эффекта, одновременно демонстрирующему минимальное влияние или отсутствие влияния на нецелевые нуклеиновые кислоты в условиях, в которых необходимо специфическое связывание, то есть при физиологических условиях в случае анализов in vivo и при терапевтическом лечении. «Строгие условия гибридизации» или «строгие условия» относятся к условиям, в которых олигомерное соединение гибридизуется с его целевой последовательностью, но с минимальным количеством других последовательностей.

«Статистически значимый», при использовании в настоящем документе, обозначает измеримый или наблюдаемый параметр, который маловероятно является случайным результатом.

«Подкожное введение» обозначает введение непосредственно под кожу.

«Субъект» обозначает человека или животного, не являющегося человеком, выбранного для лечения или терапии.

«Мишень» относится к белку, модулирование которого задано. «Целевой ген» относится к гену, кодирующему мишень.

«Таргетинг» обозначает процесс разработки и выбора антисмыслового соединения, которое будет специфически гибридизоваться с целевой нуклеиновой кислотой и вызывать заданный эффект.

«Целевая нуклеиновая кислота», «целевая РНК», «целевой РНК транскрипт» и «мишень нуклеиновой кислоты», все эти термины обозначают нуклеиновую кислоту, на которую могут быть нацелены антисмысловые соединения.

«Целевая область» обозначает часть целевой нуклеиновой кислоты, на которую направлено одно или несколько антисмысловых соединений.

«Целевой сегмент» обозначает последовательность нуклеотидов целевой нуклеиновой кислоты, на которую направлено антисмысловое соединение. «Сайт-мишень 5'» относится к 5'-основному нуклеотиду целевого сегмента. «Сайт-мишень 3'» относится к 3'-основному нуклеотиду целевого сегмента.

«Терапевтически эффективное количество» обозначает количество фармацевтического средства, которое обеспечивает пациенту терапевтическое преимущество.

«Лечение» относится к введению композиции для изменения или улучшения заболевания или состояния.

«Не модифицированные» нуклеооснования обозначают пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G), а также пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U).

«Не модифицированный нуклеотид» обозначает нуклеотид, состоящий из природных нуклеооснований, сахарных фрагментов и межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации не модифицированный нуклеотид представляет собой нуклеотид РНК (то есть β-D-рибонуклеозиды) или нуклеотид ДНК (то есть β-D-дезоксирибонуклеозид).

«Валидированный целевой сегмент» определяют как часть целевой области, состоящую по меньшей мере из 8 нуклеооснований (то есть 8 смежных нуклеооснований), на которую направлено активное олигомерное соединение.

«Сегмент крыла» обозначает множество нуклеозидов, модифицированных для влияния на свойства олигонуклеотида, такие как усиленная ингибирующая активность, повышенная связывающая аффиность к целевой нуклеиновой кислоте или устойчивость к разложению нуклеазами in vivo.

Некоторые варианты реализации

В некоторых вариантах реализации представлены способы, соединения и композиции для ингибирования экспрессии мРНК HBV.

В некоторых вариантах реализации представлены антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновую кислоту HBV. В некоторых вариантах реализации нуклеиновая кислота HBV является последовательностями, представленными далее под номером доступа GENBANK U95551.1 (включена в настоящий документ как SEQ ID NO:1).

В некоторых вариантах реализации, соединения, представленные в настоящем документе, представляют собой или включают модифицированный олигонуклеотид. В некоторых вариантах реализации эти соединения включают модифицированный олигонуклеотид и конъюгат, описанный в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид представляет собой фармацевтически приемлемое производное.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеооснований, нацеленный на HBV. Мишень HBV может иметь последовательность, указанную в SEQ ID NO:1, или ее часть, или ее вариант.

В некоторых вариантах реализации, соединения или модифицированные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, имеют длину от 10 до 30 связанных нуклеооснований, и нацелены на HBV. В некоторых вариантах реализации, мишень HBV имеет последовательность, указанную в SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды нацелены на одну из следующих нуклеотидных областей HBV: CCTGCTGGTGGCTCCAGTTC (SEQ ID NO:1273); AGAGTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTCA (SEQ ID NO:1354); CATCCTGCTGCTATGCCTCATCTTCTT (SEQ ID NO:1276); CAAGGTATGTTGCCCGT (SEQ ID NO:1277); CCTATGGGAGTGGGCCTCAG (SEQ ID NO:1279; TGGCTCAGTTTACTAGTGCCATTTGTTCAGTGGTTCG (SEQ ID NO:1287); TATATGGATGATGTGGT (SEQ ID NO:1359); TGCCAAGTGTTTGCTGA (SEQ ID NO:1360); TGCCGATCCATACTGCGGAACTCCT (SEQ ID NO:1361); CCGTGTGCACTTCGCTTCACCTCTGCACGT (SEQ ID NO:1352); GGAGGCTGTAGGCATAAATTGGT (SEQ ID NO:1353); CTTTTTCACCTCTGCCTA (SEQ ID NO:1362); TTCAAGCCTCCAAGCTGTGCCTTGG (SEQ ID NO:1363); AGAGTCTAGACTCGTGGTGGACTTCTCTCAATTTTCTAGGGG (SEQ ID NO:1274); TGGATGTGTCTGCGGCGTTTTATCAT (SEQ ID NO:1275); TGTATTCCCATCCCATC (SEQ ID NO:1278); TGGCTCAGTTTACTAGTGC (SEQ ID NO:1280); GGGCTTTCCCCCACTGT (SEQ ID NO:1281); TCCTCTGCCGATCCATACTGCGGAACTCCT (SEQ ID NO:1282); CGCACCTCTCTTTACGCGG (SEQ ID NO:1283); GGAGTGTGGATTCGCAC (SEQ ID NO:1284); или GAAGAAGAACTCCCTCGCCT (SEQ ID NO:1285). В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 9, 10 или более связанных дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 связанных модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, один или несколько модифицированных нуклеозидов в сегменте крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид БНК. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, 2'-замещенные нуклеозиды включают нуклеозид ы с бициклическими сахарными модификациями. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой затрудненный этилнуклеозид (cEt).

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированные олигонуклеотиды, состоящие из 10-30 связанных нуклеозидов, и имеющие последовательность нуклеооснований, содержащую часть, содержащую по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах реализации, такие олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 9, 10 или более связанных дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 связанных модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, один или несколько модифицированных нуклеозидов в сегменте крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид БНК. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, 2'-замещенные нуклеозиды содержат нуклеозиды с бициклическими сахарными модификациями. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой затрудненный этилнуклеозид (cEt). В некоторых вариантах реализации, каждый модифицированный нуклеозид в каждом сегменте крыла независимо представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид или нуклеозид с бициклической сахарной модификацией, такой как затрудненный этилнуклеозид (cEt) или нуклеозид БЫК.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов, и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:5-310, 321-802, 804-1272, 1288-1350, 1364-1372, 1375, 1376 или 1379. В некоторых вариантах реализации, такие олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 9, 10 или более связанных дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1-5, 1-4, 1-3, 2-5, 2-4 или 2-3 связанных модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 связанных модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, один или несколько модифицированных нуклеозидов в сегменте крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид БЫК. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, 2'-замещенные нуклеозиды включают нуклеозиды с бициклическими сахарными модификациями. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой затрудненный этилнуклеозид (cEt).

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, каждый нуклеозид с модифицированным сахаром независимо представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид или нуклеозид с бициклическим сахарным фрагментом, такой как затрудненный этилнуклеозид (cEt) или нуклеозид БНК. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, каждый нуклеозид с модифицированным сахаром независимо представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид или бициклический нуклеозид, такой как затрудненный этилнуклеозид (cEt) или нуклеозид БНК.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов, и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:5-310, 321-802, 804-1272, 1288-1350, 1364-1372, 1375, 1376 или 1379. В некоторых вариантах реализации, такие олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 10 или более связанных дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1-5, 1-4, 1-3, 2-5, 2-4 или 2-3 связанных модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 связанных модифицированных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, один или несколько модифицированных нуклеозидов в сегменте крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид БНК. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, 2'-замещенные нуклеозиды включают нуклеозиды с бициклическими сахарными модификациями. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов, и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:5, 15, 16, 33, 39-95, 123-135, 163-175, 180-310, 321-406, 413-455, 461-802 или 804-1272. В некоторых вариантах реализации, такие олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 10 или более связанных дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1-5, 1-4, 1-3, 2-5, 2-4 или 2-3 связанных модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации, один или несколько модифицированных нуклеозидов в сегменте крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой нуклеозид БЫК. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, 2'-замещенные нуклеозиды включают нуклеозиды с бициклическими сахарными модификациями. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов, и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:6-14, 17-32, 34-38, 96-122, 136-162, 176-179, 407-412, 456-462, 523-538. В некоторых вариантах реализации, такие олигонуклеотиды имеют сегмент гэп из 10 или более связанных дезоксинуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, такой сегмент гэп находится между двумя сегментами крыльев, которые независимо имеют 1-5, 1-4, 1-3, 2-5, 2-4 или 2-3 связанных модифицированных нуклеозида. В некоторых вариантах реализации, один или несколько модифицированных нуклеозидов в сегменте крыла содержит модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-замещенный нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, модифицированный нуклеозид представляет собой 2'-МОЕ нуклеозид. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 14 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-3 или 2 нуклеозида с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром, как нуклеозиды 2'-МОЕ.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3-4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5 или 6 нуклеозидов с модифицированным сахаром, как нуклеозиды 2'-МОЕ.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 18 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 3-5 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 22, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов с модифицированным сахаром, как нуклеозиды 2'-МОЕ.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат соль модифицированного олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции дополнительно содержат фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

В некоторых вариантах реализации, последовательность нуклеооснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% комплементарна последовательности SEQ ID NO:1, по результатам измерения целостности модифицированного олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации, последовательность нуклеооснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% комплементарна любой из последовательностей SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, по результатам измерения целостности модифицированного олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации, соединение или модифицированный олигонуклеотид является одноцепочечным.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 14 связанных нуклеозидов.

В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере одна межнуклеозидная связь модифицированного олигонуклеотида представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь. В некоторых вариантах реализации, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную межнуклеозидную связь.

В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида включает модифицированный сахар. В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один модифицированный сахар содержит 2'-O-метоксиэтиловую группу (2'-O(СН2)2-ОСН3). В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахар содержит группу 2'-O-СН3.

В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один модифицированный сахар представляет собой бициклический сахар. В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один модифицированный сахар, бициклический сахар содержит мостик 4'-(СН2)nO-2', причем n равен 1 или 2. В некоторых вариантах реализации, бициклический сахар содержит мостик 4'-CH2-O-2'. В некоторых вариантах реализации, бициклический сахар содержит мостик 4'-СН(СН3)-O-2'.

В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один нуклеозид указанного модифицированного олигонуклеотида содержит модифицированное нуклеооснование. В некоторых вариантах реализации, модифицированнле нуклеооснование представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из связанных нуклеозидов. Сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', и каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 10 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из трех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар и/или затрудненный этиловый (cEt) сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин. В некоторых аспектах, каждый из трех связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, и каждый из трех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой затрудненный этиловый (cEt) сахар. В других аспектах, три связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', а три связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'. В других аспектах, три связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', а три связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 10 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из двух связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин. В некоторых аспектах, два связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', а четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 9 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из двух связанных нуклеозидов; пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; два связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 8 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов; три связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из пяти связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 8 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов, каждый из трех связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляет собой затрудненный этиловый (cEt) сахар; каждый из пяти связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 9 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин. В некоторых аспектах, четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', а четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 9 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов; четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 9 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов; четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 8 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов; пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 8 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов; пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 7 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов; пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 7 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из шести связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов; шесть связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 7 связанных дезоксинуклеозидов, и сегмент крыла 5' состоит из шести связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов; шесть связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 10 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит затрудненный этиловый (cEt) сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из 10 связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин, причем пять связанных нуклеозидов крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', и каждый из пяти связанных нуклеозидов крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из трех связанных нуклеозидов. В некоторых аспектах, сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; каждый из трех связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, и каждый из трех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой затрудненный этиловый (cEt) сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин. В других аспектах, сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; три связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; три связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин. В других аспектах, три связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', а три связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из двух связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов. В некоторых аспектах, сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; два связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 9 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоязий из двух связанных нуклеозидов, причем пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; два связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 8 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов, причем три связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из пяти связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 8 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов, причем каждый из трех связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляет собой затрудненный этиловый (cEt) сахар; каждый из пяти связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 9 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин. В некоторых аспектах, четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', а четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 9 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, причем четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 9 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, причем четыре связанных нуклеозида сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ Ю NO: 1, и причем модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 8 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, причем пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 8 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, причем пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 7 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов, причем пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; пять связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь преставляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 7 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из шести связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, причем шесть связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 7 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из шести связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов, причем шесть связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' представляют собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из четырех связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает затрудненный этиловый (cEt) сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1, 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин, причем пять связанных нуклеозидов крыла 5' представляют собой затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид, затрудненный этиловый (cEt) сахар, 2'-дезоксинуклеозид и затрудненный этиловый (cEt) сахар в направлении от 5' к 3', и каждый из пяти связанных нуклеозидов крыла 3' представляет собой 2'-O-метоксиэтиловый сахар.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из двух связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из восьми связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из восьми связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из двух связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из семи связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из семи связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из трех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из шести связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из шести связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нулеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из двух связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из шести связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из шести связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из двух связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из трех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из трех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из пяти связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из двух связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из двух связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из пяти связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из четырех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из трех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из девяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из трех связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из четырех связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид состоит из 14 связанных нуклеозидов, сегмент гэп состоит из десяти связанных дезоксинуклеозидов, сегмент крыла 5' состоит из двух связанных нуклеозидов, сегмент крыла 3' состоит из двух связанных нуклеозидов, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из двух связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из восьми связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из восьми связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из двух связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из семи связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из семи связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из трех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из шести связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из шести связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 18 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из двух связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из шести связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из шести связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из двух связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из трех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из трех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO: 1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из пяти связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из двух связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из двух связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из пяти связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из четырех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из трех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из девяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из трех связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из четырех связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции содержат модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 14 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований, содержащую часть, состоящую по меньшей мере из 8 смежных нуклеооснований, комплементарную равной по длине части любого из нуклеооснований, представленных далее в последовательностях SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, причем указанная последовательность нуклеооснований комплементарна к SEQ ID NO:1, и при этом модифицированный олигонуклеотид содержит: а) сегмент гэп, состоящий из десяти связанных дезоксинуклеозидов; b) сегмент крыла 5', состоящий из двух связанных нуклеозидов; и с) сегмент крыла 3', состоящий из двух связанных нуклеозидов. Сегмент гэп располагается между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла включает 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозиновый остаток представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации, представленные способы, соединения и композиции ингибируют уровни экспрессии мРНК и/или ДНК HBV и/или уровни белка, и/или уровни антигена.

В другом варианте реализации представлен способ лечения HBV-связанных заболеваний, расстройств и состояний у млекопитающих, включающий введение терапевтически эффективного количества любой фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для лечения HBV-связанных заболеваний, расстройств и состояний. В родственных вариантах реализации млекопитающим является человек, а HBV-состояние заболевание, расстройство и состояние представляет собой инфекцию вируса гепатита В от вируса гепатита В человека. Более конкретно, вирус гепатита В человека может быть любым из человеческих географических генотипов: А (Северо-Западная Европа, Северная Америка, Центральная Америка); В (Индонезия, Китай, Вьетнам); С (Восточная Азия, Корея, Китай, Япония, Полинезия, Вьетнам); D (Средиземноморский регион, Ближний восток, Индия); Е (Африка); F (коренные американцы, Полинезия); G (Соединенные Штаты, Франция); или Н (Центральная Америка).

В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, комплементарен в пределах следующих нуклеотидных областей последовательности SEQ ID NO:1: 1-20, 10-29, 10-56, 13-38, 13-35, 19-38, 25-47, 25-50, 25-56, 43-68, 43-63, 55-74, 58-73, 58-74, 58-77, 58-79, 58-80, 58-84, 59-74, 59-75, 59-80, 60-75, 60-76, 60-79, 61-76, 61-77, 61-80, 62-77, 63-84, 68-114, 101-123, 98-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 158-177, 167-186, 191-215, 196-224, 196-215, 196-218, 199-228, 199-218, 199-224, 200-224, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-264, 242-263, 243-262, 244-263, 245-274; 245-260, 245-264, 246-266, 247-266, 247-269, 247-270, 245-267, 251-267, 245-266, 250-269, 251-266, 251-268, 251-269, 245-269, 245-266, 245-261, 250-265, 250-266, 250-267, 250-268, 250-269, 251-270, 252-267, 253-268, 253-269, 253-272, 253-274, 254-269, 254-270, 254-274, 255-270, 255-271, 255-274, 255-401, 255-400, 255-274, 255-273, 255-272, 255-271, 256-271, 256-275, 255-276, 256-272, 256-276, 253-275, 256-279, 257-276, 258-273, 259-274, 260-279, 262-281, 262-321, 262-315, 262-312, 265-312, 266-288, 266-291, 266-285, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 292-311, 290-312, 293-312, 293-315, 293-321, 296-321, 302-321, 324-343, 339-361, 339-367, 348-367, 342-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-383, 360-388, 360-385, 362-381, 366-388, 369-388, 366-385, 366-392, 370-389, 370-392, 380-399, 382-401, 384-433, 384-400, 384-401, 385-401, 405-424, 409-428, 405-428, 411-426, 411-427, 411-430, 411-431, 411-437, 412-431, 411-426, 411-427, 412-428, 412-431, 412-427, 413-433, 413-432, 413-428, 413-429, 413-432, 413-433, 414-427, 415-427, 414-429, 414-430, 414-433, 415-428, 415-429, 415-430, 415-431, 415-434, 416-431, 416-432, 416-429, 416-435, 417-432, 417-433, 417-436, 418-433, 418-435, 418-434, 418-437, 419-435, 419-434, 420-435, 419-432, 419-434, 421-436, 422-437, 422-441, 423-436, 425-465, 454-473, 454-472, 457-476, 457-472, 457-473, 454-476, 455-472, 457-485, 458-485, 458-483, 458-477, 458-473, 459-485, 460-485, 463-498, 463-485, 466-485, 463-482, 457-491, 458-491, 459-491, 460-491, 463-491, 466-491, 472-491, 472-493, 473-492, 475-491, 459-494, 460-494, 463-494, 466-494, 467-498, 472-494, 475-494, 457-473, 457-472, 458-494, 454-494, 457-494, 457-473, 485-513, 470-493, 476-519, 485-519, 500-519, 512-534, 512-550, 524-546, 536-559, 548-567, 548-570, 550-570, 548-594, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 611-645, 617-363, 623-642, 617-645, 639-754, 639-658, 639-654, 641-656, 642-657, 643-658, 642-754, 653-672, 662-685, 665-685,665-689, 668-687, 670-754, 670-706, 670-685, 670-686, 670-689, 671-690, 671-691, 671-686, 671-687, 672-693, 672-697, 672-707, 672-687, 672-688, 673-688, 674-693, 678-693, 679-694, 679-707, 679-698, 679-701, 679-702, 679-707, 680-695, 680-699, 679-699, 681-706, 681-696, 682-697, 682-706, 682-707, 682-702, 682-701, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-754, 688-704, 689-709, 689-710, 690-705, 679-705, 679-710, 679-706, 690-710, 691-710, 690-754, 690-706, 684-703, 687-705, 687-702, 687-703, 687-706, 688-703, 688-704, 688-705, 689-704, 689-705, 689-708, 690-705, 690-706, 690-709, 691-706, 692-711, 693-716, 693-712, 695-715, 697-716, 697-716, 690-716, 724-746, 724-752, 724-754, 724-758, 733-752, 738-754, 738-753, 739-758, 739-754, 739-775, 739-754, 740-754, 742-785, 742-773, 757-776, 757-785, 790-815, 793-812, 811-833, 811-844, 814-833, 811-906, 820-839, 822-844, 822-867, 823-842, 845-864, 845-867, 854-906, 845-909, 845-906, 854-876, 863-882, 863-885, 878-900, 887-906, 899-918, 899-933, 899-958, 905-927, 905-933, 914-933, 936-958, 936-955, 945-964, 951-970, 951-985, 951-1044, 951-1024, 951-1056, 951-997, 960-985, 963-1044, 963-1024, 963-997, 972-1015, 1025-1044, 1031-1056, 1037-1056, 1046-1083, 1049-1068, 1070-1089, 1070-1095, 1082-1101, 1081-1134, 1081-1143, 1082-1101, 1088-1107, 1088-1134, 1094-1119, 1097-1119, 1112-1134, 1118-1143, 1118-1146, 1088-1146, 1121-1140, 1127-1146, 1127-1193, 1150-1193, 1156-1187, 1165-1187, 1170-1192, 1171-1191, 1172-1191, 1176-1192, 1176-1285, 1177-1192, 1176-1191, 1203-1297, 1206-1228, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1255, 1245-1265, 1251-1280, 1262-1285, 1251-1285, 1259-1296, 1259-1290, 1259-1287, 1261-1296, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1296, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1264-1297, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1296, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1271-1290, 1271-1296, 1277-1296, 1261-1290, 1262-1290, 1268-1290, 1263-1305, 1259-1305, 1259-1305, 1266-1305, 1259-1302, 1275-1294, 1281-1306, 1281-1324, 1281-1336, 1282-1301, 1286-1306, 1290-1324, 1293-1318, 1290-1324, 1293-1315, 1296-1315, 1311-1336, 1311-1333, 1326-1345, 1353-1381, 1359-1378, 1395-1414, 1498-1532, 1498-1523, 1498-1535, 1510-1529, 1515-1535, 1515-1563, 1515-1596, 1515-1605, 1515-1602, 1515-1540, 1515-1535, 1518-1605, 1518-1602, 1518-1537, 1521-1563, 1521-1540, 1550-1655, 1550-1563, 1550-1569, 1553-1578, 1553-1599, 1553-1590, 1565-1584, 1571-1595, 1577-1605, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1578-1598, 1571-1598, 1579-1594, 1579-1594, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1580-1605, 1580-1602, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1582-1602, 1553-1655, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1586-1652, 1642-1664, 1651-1720, 1651-1673, 1655-1679, 1695-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1743-1768, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1796, 1777-1800, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1798, 1779-1797, 1779-1796, 1779-1795, 1779-1794, 1780-1799, 1780-1796, 1780-1795, 1781-1797, 1781-1796, 1781-1796, 1781-1800, 1781-1797, 1782-1799, 1782-1797, 1782-1798, 1783-1798, 1783-1799, 1784-1800, 1784-1799, 1779-1799, 1778-1889, 1778-1794, 1779-1795, 1780-1799, 1785-1800, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1828, 1806-1825, 1809-1828, 1812-1843, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1843, 1815-1844, 1815-1840, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1840, 1821-1844, 1821-1837, 1822-1843, 1822-1839, 1822-1837, 1823-1843, 1823-1838, 1824-1839, 1827-1846, 1861-1884, 1861-1880, 1865-1885, 1866-1881, 1867-1882, 1867-1886, 1868-1883, 1869-1885, 1869-1884, 1870-1885, 1871-1886, 1872-1887, 1874-1889, 1876-1895, 1888-1914, 1888-1908, 1891-1910, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1913-1935, 1898-1920, 1907-1929, 1913-1935, 1918-1934, 1919-1938, 1919-1934, 1921-1934, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2368-2393, 2381-2397, 2368-2394, 2379-2394, 2381-2396, 2368-2397, 2368-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2459-2478, 2819-2838, 2818-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, направлен на следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1: 1-20, 10-29, 10-56, 13-38, 13-35, 19-38, 25-47, 25-50, 25-56, 43-68, 43-63, 55-74, 58-73, 58-74, 58-77, 58-79, 58-80, 58-84, 59-74, 59-75, 59-80, 60-75, 60-76, 60-79, 61-76, 61-77, 61-80, 62-77, 63-84, 68-114, 101-123, 98-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 158-177, 167-186, 191-215, 196-224, 196-215, 196-218, 199-228, 199-218, 199-224, 200-224, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-264, 242-263, 243-262, 244-263, 245-274; 245-260, 245-264, 246-266, 247-266, 247-269, 247-270, 245-267, 251-267, 245-266, 250-269, 251-266, 251-268, 251-269, 245-269, 245-266, 245-261, 250-265, 250-266, 250-267, 250-268, 250-269, 251-270, 252-267, 253-268, 253-269, 253-272, 253-274, 254-269, 254-270, 254-274, 255-270, 255-271, 255-274, 255-401, 255-400, 255-274, 255-273, 255-272, 255-271, 256-271, 256-275, 255-276, 256-272, 256-276, 253-275, 256-279, 257-276, 258-273, 259-274, 260-279, 262-281, 262-321, 262-315, 262-312, 265-312, 266-288, 266-291, 266-285, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 292-311, 290-312, 293-312, 293-315, 293-321, 296-321, 302-321, 324-343, 339-361, 339-367, 348-367, 342-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-383, 360-388, 360-385, 362-381, 366-388, 369-388, 366-385, 366-392, 370-389, 370-392, 380-399, 382-401, 384-433, 384-400, 384-401, 385-401, 405-424, 409-428, 405-428, 411-426, 411-427, 411-430, 411-431, 411-437, 412-431, 411-426, 411-427, 412-428, 412-431, 412-427, 413-433, 413-432, 413-428, 413-429, 413-432, 413-433, 414-427, 415-427, 414-429, 414-430, 414-433, 415-428, 415-429, 415-430, 415-431, 415-434, 416-431, 416-432, 416-429, 416-435, 417-432, 417-433, 417-436, 418-433, 418-435, 418-434, 418-437, 419-435, 419-434, 420-435, 419-432, 419-434, 421-436, 422-437, 422-441, 423-436, 425-465, 454-473, 454-472, 457-476, 457-472, 457-473, 454-476, 455-472, 457-485, 458-485, 458-483, 458-477, 458-473, 459-485, 460-485, 463-498, 463-485, 466-485, 463-482, 457-491, 458-491, 459-491, 460-491, 463-491, 466-491, 472-491, 472-493, 473-492, 475-491, 459-494, 460-494, 463-494, 466-494, 467-498, 472-494, 475-494, 457-473, 457-472, 458-494, 454-494, 457-494, 457-473, 485-513, 470-493, 476-519, 485-519, 500-519, 512-534, 512-550, 524-546, 536-559, 548-567, 548-570, 550-570, 548-594, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 611-645, 617-363, 623-642, 617-645, 639-754, 639-658, 639-654, 641-656, 642-657, 643-658, 642-754, 653-672, 662-685, 665-685,665-689, 668-687, 670-754, 670-706, 670-685, 670-686, 670-689, 671-690, 671-691, 671-686, 671-687, 672-693, 672-697, 672-707, 672-687, 672-688, 673-688, 674-693, 678-693, 679-694, 679-707, 679-698, 679-701, 679-702, 679-707, 680-695, 680-699, 679-699, 681-706, 681-696, 682-697, 682-706, 682-707, 682-702, 682-701, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-754, 688-704, 689-709, 689-710, 690-705, 679-705, 679-710, 679-706, 690-710, 691-710, 690-754, 690-706, 684-703, 687-705, 687-702, 687-703, 687-706, 688-703, 688-704, 688-705, 689-704, 689-705, 689-708, 690-705, 690-706, 690-709, 691-706, 692-711, 693-716, 693-712, 695-715, 697-716, 697-716, 690-716, 724-746, 724-752, 724-754, 724-758, 733-752, 738-754, 738-753, 739-758, 739-754, 739-775, 739-754, 740-754, 742-785, 742-773, 757-776, 757-785, 790-815, 793-812, 811-833, 811-844, 814-833, 811-906, 820-839, 822-844, 822-867, 823-842, 845-864, 845-867, 854-906, 845-909, 845-906, 854-876, 863-882, 863-885, 878-900, 887-906, 899-918, 899-933, 899-958, 905-927, 905-933, 914-933, 936-958, 936-955, 945-964, 951-970, 951-985, 951-1044, 951-1024, 951-1056, 951-997, 960-985, 963-1044, 963-1024, 963-997, 972-1015, 1025-1044, 1031-1056, 1037-1056, 1046-1083, 1049-1068, 1070-1089, 1070-1095, 1082-1101, 1081-1134, 1081-1143, 1082-1101, 1088-1107, 1088-1134, 1094-1119, 1097-1119, 1112-1134,1118-1143, 1118-1146, 1088-1146, 1121-1140, 1127-1146, 1127-1193, 1150-1193, 1156-1187, 1165-1187, 1170-1192, 1171-1191, 1172-1191, 1176-1192, 1176-1285, 1177-1192, 1176-1191, 1203-1297, 1206-1228, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1255, 1245-1265, 1251-1280, 1262-1285, 1251-1285, 1259-1296, 1259-1290, 1259-1287, 1261-1296, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1296, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1264-1297, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1296, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1271-1290, 1271-1296, 1277-1296, 1261-1290, 1262-1290, 1268-1290, 1263-1305, 1259-1305, 1259-1305, 1266-1305, 1259-1302, 1275-1294, 1281-1306, 1281-1324, 1281-1336, 1282-1301, 1286-1306, 1290-1324, 1293-1318, 1290-1324, 1293-1315, 1296-1315, 1311-1336, 1311-1333, 1326-1345, 1353-1381, 1359-1378, 1395-1414, 1498-1532, 1498-1523, 1498-1535, 1510-1529, 1515-1535, 1515-1563, 1515-1596, 1515-1605, 1515-1602, 1515-1540, 1515-1535, 1518-1605, 1518-1602,1518-1537, 1521-1563, 1521-1540, 1550-1655, 1550-1563, 1550-1569, 1553-1578, 1553-1599, 1553-1590, 1565-1584, 1571-1595, 1577-1605, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1578-1598, 1571-1598, 1579-1594, 1579-1594, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1580-1605, 1580-1602, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1582-1602, 1553-1655, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1586-1652, 1642-1664, 1651-1720, 1651-1673, 1655-1679, 1695-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1743-1768, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1796, 1777-1800, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1798, 1779-1797, 1779-1796, 1779-1795, 1779-1794, 1780-1799, 1780-1796, 1780-1795, 1781-1797, 1781-1796, 1781-1796, 1781-1800, 1781-1797, 1782-1799, 1782-1797, 1782-1798, 1783-1798, 1783-1799, 1784-1800, 1784-1799, 1779-1799, 1778-1889, 1778-1794, 1779-1795, 1780-1799, 1785-1800, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1828, 1806-1825, 1809-1828, 1812-1843, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1843, 1815-1844, 1815-1840, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1840, 1821-1844, 1821-1837, 1822-1843, 1822-1839, 1822-1837, 1823-1843, 1823-1838, 1824-1839, 1827-1846, 1861-1884, 1861-1880, 1865-1885, 1866-1881, 1867-1882, 1867-1886, 1868-1883, 1869-1885, 1869-1884, 1870-1885, 1871-1886, 1872-1887, 1874-1889, 1876-1895, 1888-1914, 1888-1908, 1891-1910, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1913-1935, 1898-1920, 1907-1929, 1913-1935, 1918-1934, 1919-1938, 1919-1934, 1921-1934, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2368-2393, 2381-2397, 2368-2394, 2379-2394, 2381-2396, 2368-2397, 2368-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2459-2478, 2819-2838, 2818-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, комплементарен в пределах генной области второй части pre-Sl HBV, соответствующей нуклеотидной области 1-1932 последовательности SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, комплементарен в пределах генной области первой части pre-Sl HBV, соответствующей нуклеотидной области 2831-3182 последовательности SEQ ID NO:1.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, нацелен на генную область второй части pre-S I HBV, соответствующую нуклеотидной области 1-1932 последовательности SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, нацелен на генную область первой части pre-Sl HBV, соответствующую нуклеотидной области 2831-3182 последовательности SEQ ID NO:1.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV, имеющую часть смежных нуклеооснований, которая комплементарна равной по длине части нуклеооснований указанной области. Например, эта часть может быть частью, содержащей по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований, комплементарной равной по длине части области, упомянутой в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации такие соединения или олигонуклеотиды направлены на следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1: 1-20, 10-29, 10-56, 13-38, 13-35, 19-38, 25-47, 25-50, 25-56, 43-68, 43-63, 55-74, 58-73, 58-74, 58-77, 58-79, 58-80, 58-84, 59-74, 59-75, 59-80, 60-75, 60-76, 60-79, 61-76, 61-77, 61-80, 62-77, 63-84, 68-114, 101-123, 98-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 158-177, 167-186, 191-215, 196-224, 196-215, 196-218, 199-228, 199-218, 199-224, 200-224, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-264, 242-263, 243-262, 244-263, 245-274; 245-260, 245-264, 246-266, 247-266, 247-269, 247-270, 245-267, 251-267, 245-266, 250-269, 251-266, 251-268, 251-269, 245-269, 245-266, 245-261, 250-265, 250-266, 250-267, 250-268, 250-269, 251-270, 252-267, 253-268, 253-269, 253-272, 253-274, 254-269, 254-270, 254-274, 255-270, 255-271, 255-274, 255-401, 255-400, 255-274, 255-273, 255-272, 255-271, 256-271, 256-275, 255-276, 256-272, 256-276, 253-275, 256-279, 257-276, 258-273, 259-274, 260-279, 262-281, 262-321, 262-315, 262-312, 265-312, 266-288, 266-291, 266-285, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 292-311, 290-312, 293-312, 293-315, 293-321, 296-321, 302-321, 324-343, 339-361, 339-367, 348-367, 342-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-383, 360-388, 360-385, 362-381, 366-388, 369-388, 366-385, 366-392, 370-389, 370-392, 380-399, 382-401, 384-433, 384-400, 384-401, 385-401, 405-424, 409-428, 405-428, 411-426, 411-427, 411-430, 411-431, 411-437, 412-431, 411-426, 411-427, 412-428, 412-431, 412-427, 413-433, 413-432, 413-428, 413-429, 413-432, 413-433, 414-427, 415-427, 414-429, 414-430, 414-433, 415-428, 415-429, 415-430, 415-431, 415-434, 416-431, 416-432, 416-429, 416-435, 417-432, 417-433, 417-436, 418-433, 418-435, 418-434, 418-437, 419-435, 419-434, 420-435, 419-432, 419-434, 421-436, 422-437, 422-441, 423-436, 425-465, 454-473, 454-472, 457-476, 457-472, 457-473, 454-476, 455-472, 457-485, 458-485, 458-483, 458-477, 458-473, 459-485, 460-485, 463-498, 463-485, 466-485, 463-482, 457-491, 458-491, 459-491, 460-491, 463-491, 466-491, 472-491, 472-493, 473-492, 475-491, 459-494, 460-494, 463-494, 466-494, 467-498, 472-494, 475-494, 457-473, 457-472, 458-494, 454-494, 457-494, 457-473, 485-513, 470-493, 476-519, 485-519, 500-519, 512-534, 512-550, 524-546, 536-559, 548-567, 548-570, 550-570, 548-594, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 611-645, 617-363, 623-642, 617-645, 639-754, 639-658, 639-654, 641-656, 642-657, 643-658, 642-754, 653-672, 662-685, 665-685,665-689, 668-687, 670-754, 670-706, 670-685, 670-686, 670-689, 671-690, 671-691, 671-686, 671-687, 672-693, 672-697, 672-707, 672-687, 672-688, 673-688, 674-693, 678-693, 679-694, 679-707, 679-698, 679-701, 679-702, 679-707, 680-695, 680-699, 679-699, 681-706, 681-696, 682-697, 682-706, 682-707, 682-702, 682-701, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-754, 688-704, 689-709, 689-710, 690-705, 679-705, 679-710, 679-706, 690-710, 691-710, 690-754, 690-706, 684-703, 687-705, 687-702, 687-703, 687-706, 688-703, 688-704, 688-705, 689-704, 689-705, 689-708, 690-705, 690-706, 690-709, 691-706, 692-711, 693-716, 693-712, 695-715, 697-716, 697-716, 690-716, 724-746, 724-752, 724-754, 724-758, 733-752, 738-754, 738-753, 739-758, 739-754, 739-775, 739-754, 740-754, 742-785, 742-773, 757-776, 757-785, 790-815, 793-812, 811-833, 811-844, 814-833, 811-906, 820-839, 822-844, 822-867, 823-842, 845-864, 845-867, 854-906, 845-909, 845-906, 854-876, 863-882, 863-885, 878-900, 887-906, 899-918, 899-933, 899-958, 905-927, 905-933, 914-933, 936-958, 936-955, 945-964, 951-970, 951-985, 951-1044, 951-1024, 951-1056, 951-997, 960-985, 963-1044, 963-1024, 963-997, 972-1015, 1025-1044, 1031-1056, 1037-1056, 1046-1083, 1049-1068, 1070-1089, 1070-1095, 1082-1101, 1081-1134, 1081-1143, 1082-1101, 1088-1107, 1088-1134, 1094-1119, 1097-1119, 1112-1134, 1118-1143, 1118-1146, 1088-1146, 1121-1140, 1127-1146, 1127-1193, 1150-1193, 1156-1187, 1165-1187, 1170-1192, 1171-1191, 1172-1191, 1176-1192, 1176-1285, 1177-1192, 1176-1191, 1203-1297, 1206-1228, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1255, 1245-1265, 1251-1280, 1262-1285, 1251-1285, 1259-1296, 1259-1290, 1259-1287, 1261-1296, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1296, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1264-1297, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1296, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1271-1290, 1271-1296, 1277-1296, 1261-1290, 1262-1290, 1268-1290, 1263-1305, 1259-1305, 1259-1305, 1266-1305, 1259-1302, 1275-1294, 1281-1306, 1281-1324, 1281-1336, 1282-1301, 1286-1306, 1290-1324, 1293-1318, 1290-1324, 1293-1315, 1296-1315, 1311-1336, 1311-1333, 1326-1345, 1353-1381, 1359-1378, 1395-1414, 1498-1532, 1498-1523, 1498-1535, 1510-1529, 1515-1535, 1515-1563, 1515-1596, 1515-1605, 1515-1602, 1515-1540, 1515-1535, 1518-1605, 1518-1602, 1518-1537, 1521-1563, 1521-1540, 1550-1655, 1550-1563, 1550-1569, 1553-1578, 1553-1599, 1553-1590, 1565-1584, 1571-1595, 1577-1605, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1578-1598, 1571-1598, 1579-1594, 1579-1594, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1580-1605, 1580-1602, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1582-1602, 1553-1655, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1586-1652, 1642-1664, 1651-1720, 1651-1673, 1655-1679, 1695-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1743-1768, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1796, 1777-1800, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1798, 1779-1797, 1779-1796, 1779-1795, 1779-1794, 1780-1799, 1780-1796, 1780-1795, 1781-1797, 1781-1796, 1781-1796, 1781-1800, 1781-1797, 1782-1799, 1782-1797, 1782-1798, 1783-1798, 1783-1799, 1784-1800, 1784-1799, 1779-1799, 1778-1889, 1778-1794, 1779-1795, 1780-1799, 1785-1800, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1828, 1806-1825, 1809-1828, 1812-1843, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1843, 1815-1844, 1815-1840, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1840, 1821-1844, 1821-1837, 1822-1843, 1822-1839, 1822-1837, 1823-1843, 1823-1838, 1824-1839, 1827-1846, 1861-1884, 1861-1880, 1865-1885, 1866-1881, 1867-1882, 1867-1886, 1868-1883, 1869-1885, 1869-1884, 1870-1885, 1871-1886, 1872-1887, 1874-1889, 1876-1895, 1888-1914, 1888-1908, 1891-1910, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1913-1935, 1898-1920, 1907-1929, 1913-1935, 1918-1934, 1919-1938, 1919-1934, 1921-1934, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2368-2393, 2381-2397, 2368-2394, 2379-2394, 2381-2396, 2368-2397, 2368-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2459-2478, 2819-2838, 2818-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV, имеющую часть смежных нуклеооснований, которая комплементарна равной по длине части нуклеооснований указанной области. Например, эта часть может быть частью, содержащей по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований, комплементарной равной по длине части области, упомянутой в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации такие соединения или олигонуклеотиды направлены на следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1: 58-73, 58-74, 58-77, 59-74, 60-75, 61-76, 62-77, 245-274; 245-260, 250-265, 251-266, 252-267, 253-268, 254-269, 255-270, 256-271, 256-272, 258-273, 259-274, 380-399, 382-401, 411-437, 411-427, 411-426, 412-427, 413-428, 413-432, 414-429, 415-430, 416-431, 417-432, 418-433, 419-434, 420-435, 421-436, 422-437, 457-472, 458-473, 639-754, 639-658, 639-654, 641-656, 642-657, 643-658, 670-754, 670-706, 670-685, 671-686, 672-687, 673-688, 678-693, 679-694, 680-695, 681-706, 681-696, 682-697, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-702, 688-703, 689-704, 690-705, 691-706, 738-754, 738-753, 739-754, 1176-1285, 1176-1191, 1177-1192, 1261-1285, 1261-1276, 1262-1277, 1263-1278, 1264-1279, 1265-1280, 1266-1281, 1267-1282, 1268-1283, 1269-1284, 1270-1285, 1577-1606, 1577-1592, 1578-1593, 1579-1594, 1580-1595, 1581-1596, 1582-1597, 1583-1598, 1584-1599, 1585-1600, 1586-1601, 1587-1602, 1588-1603, 1589-1604, 1590-1605, 1591-1606, 1778-1889, 1778-1800, 1778-1793, 1779-1794, 1780-1799, 1780-1796, 1780-1795, 1781-1796, 1782-1797, 1783-1798, 1784-1799, 1785-1800, 1822-1839, 1822-1837, 1823-1838, 1824-1839, 1866-1881, 1867-1882, 1868-1883, 1869-1884, 1870-1885, 1871-1886, 1872-1887 или 1874-1889, и причем по меньшей мере один нуклеозид соединения или модифицированного олигонуклеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый или затрудненный этиловый (cEt) сахар.

В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, комплементарен в пределах следующих нуклеотидных областей последовательности SEQ ID NO:1: 58-73, 58-74, 58-77, 59-74, 59-75, 60-75, 60-76, 61-76, 61-77, 62-77, 253-272, 253-269, 254-270, 255-271, 256-272, 411-437, 411-426, 411-427, 411-430, 412-427, 412-428, 412-431, 413-428, 413-429, 413-432, 414-429, 414-430, 414-433, 415-430, 415-431, 415-434, 416-431, 416-432, 416-435, 417-432, 417-433, 417-436, 418-433, 418-434, 418-437, 457-472, 457-473, 458-473, 670-706, 670-685, 670-686, 671-686, 671-687, 672-687, 672-688, 673-688, 687-702, 687-703, 687-706, 688-703, 688-704, 689-704, 689-705, 690-705, 690-706, 691-706, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1269-1284, 1269-1285, 1270-1285, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1594, 1579-1594, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1794, 1779-1795, 1779-1798, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1781-1796, 1781-1797, 1781-1800, 1782-1797, 1782-1798, 1783-1798, 1783-1799, 1784-1799 и 1784-1800.

В некоторых вариантах реализации антисмысловое соединение или олигонуклеотид, направленный на нуклеиновую кислоту HBV, направлен на следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1: 58-73, 58-74, 58-77, 59-74, 59-75, 60-75, 60-76, 61-76, 61-77, 62-77, 253-272, 253-269, 254-270, 255-271, 256-272, 411-437, 411-426, 411-427, 411-430, 412-427, 412-428, 412-431, 413-428, 413-429, 413-432, 414-429, 414-430, 414-433, 415-430, 415-431, 415-434, 416-431, 416-432, 416-435, 417-432, 417-433, 417-436, 418-433, 418-434, 418-437, 457-472, 457-473, 458-473, 670-706, 670-685, 670-686, 671-686, 671-687, 672-687, 672-688, 673-688, 687-702, 687-703, 687-706, 688-703, 688-704, 689-704, 689-705, 690-705, 690-706, 691-706, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1269-1284, 1269-1285, 1270-1285, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1594, 1579-1594, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1794, 1779-1795, 1779-1798, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1781-1796, 1781-1797, 1781-1800, 1782-1797, 1782-1798, 1783-1798, 1783-1799, 1784-1799 и 1784-1800.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV, имеющую часть смежных нуклеооснований, которая комплементарна равной по длине части нуклеооснований указанной области. Например, эта часть может быть частью, содержащей по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований, комплементарной равной по длине части области, упомянутой в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации такие соединения или олигонуклеотиды направлены на следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1: 1-20, 10-29, 10-56, 13-38, 13-35, 19-38, 25-47, 25-50, 25-56, 43-68, 43-63, 55-74, 58-73, 58-74, 58-77, 58-79, 58-80, 58-84, 59-74, 59-75, 59-80, 60-75, 60-76, 60-79, 61-76, 61-77, 61-80, 62-77, 63-84, 68-114, 101-123, 98-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 158-177, 167-186, 191-215, 196-224, 196-215, 196-218, 199-228, 199-218, 199-224, 200-224, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-264, 242-263, 243-262, 244-263, 245-264, 246-266, 247-266, 247-269, 247-270, 245-267, 251-267, 245-266, 250-269, 251-268, 251-269, 245-269, 245-266, 245-261, 250-266, 250-267, 250-268, 250-269, 251-270, 253-269, 253-272, 253-274, 254-270, 254-274, 255-271, 255-274, 255-401, 255-400, 255-274, 255-273, 255-272, 255-271, 256-275, 255-276, 256-272, 256-276, 253-275, 256-279, 257-276, 260-279, 262-281, 262-321, 262-315, 262-312, 265-312, 266-288, 266-291, 266-285, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 292-311, 290-312, 293-312, 293-315, 293-321, 296-321, 302-321, 324-343, 339-361, 339-367, 348-367, 342-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-383, 360-388, 360-385, 362-381, 366-388, 369-388, 366-385, 366-392, 370-389, 370-392, 384-433, 384-400, 384-401, 385-401, 405-424, 409-428, 405-428, 411-426, 411-427, 411-430, 411-431, 411-437, 412-431, 411-426, 411-427, 412-428, 412-431, 412-427, 413-433, 413-432, 413-428, 413-429, 413-432, 413-433, 414-427, 415-427, 414-429, 414-430, 414-433, 415-428, 415-429, 415-430, 415-431, 415-434, 416-431, 416-432, 416-429, 416-435, 417-432, 417-433, 417-436, 418-433, 418-435, 418-434, 418-437, 419-435, 419-434, 420-435, 419-432, 419-434, 422-441, 423-436, 425-465, 454-473, 454-472, 457-476, 457-472, 457-473, 454-476, 455-472, 457-485, 458-485, 458-483, 458-477, 458-473, 459-485, 460-485, 463-498, 463-485, 466-485, 463-482, 457-491, 458-491, 459-491, 460-491, 463-491, 466-491, 472-491, 472-493, 473-492, 475-491, 459-494, 460-494, 463-494, 466-494, 467-498, 472-494, 475-494, 457-473, 457-472, 458-494, 454-494, 457-494, 457-473, 485-513, 470-493, 476-519, 485-519, 500-519, 512-534, 512-550, 524-546, 536-559, 548-567, 548-570, 550-570, 548-594, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 611-645, 617-363, 623-642, 617-645, 642-754, 653-672, 662-685, 665-685, 665-689, 668-687, 670-706, 670-685, 670-686, 670-689, 671-690, 671-691, 671-686, 671-687, 672-693, 672-697, 672-707, 672-687, 672-688, 673-688, 674-693, 679-707, 679-698, 679-701, 679-702, 679-707, 680-699, 679-699, 682-706, 682-707, 682-702, 682-701, 687-754, 688-704, 689-709, 689-710, 690-705, 679-705, 679-710, 679-706, 690-710, 691-710, 690-754, 690-706, 684-703, 687-705, 687-702, 687-703, 687-706, 688-703, 688-704, 688-705, 689-704, 689-705, 689-708, 690-705, 690-706, 690-709, 691-706, 692-711, 693-716, 693-712, 695-715, 697-716, 697-716, 690-716, 724-746, 724-752, 724-754, 724-758, 733-752, 738-754, 739-758, 739-754, 739-775, 739-754, 740-754, 742-785, 742-773, 757-776, 757-785, 790-815, 793-812, 811-833, 811-844, 814-833, 811-906, 820-839, 822-844, 822-867, 823-842, 845-864, 845-867, 854-906, 845-909, 845-906, 854-876, 863-882, 863-885, 878-900, 887-906, 899-918, 899-933, 899-958, 905-927, 905-933, 914-933, 936-958, 936-955, 945-964, 951-970, 951-985, 951-1044, 951-1024, 951-1056, 951-997, 960-985, 963-1044, 963-1024, 963-997, 972-1015, 1025-1044, 1031-1056, 1037-1056, 1046-1083, 1049-1068, 1070-1089, 1070-1095, 1082-1101, 1081-1134, 1081-1143, 1082-1101, 1088-1107, 1088-1134, 1094-1119, 1097-1119, 1112-1134, 1118-1143, 1118-1146, 1088-1146, 1121-1140, 1127-1146, 1127-1193,1150-1193, 1156-1187, 1165-1187, 1170-1192, 1171-1191, 1172-1191, 1176-1192, 1177-1192, 1176-1191, 1203-1297, 1206-1228, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1255, 1245-1265, 1251-1280, 1262-1285, 1251-1285, 1259-1296, 1259-1290, 1259-1287, 1261-1296, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1296, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1264-1297, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1296, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1271-1290, 1271-1296, 1277-1296, 1261-1290, 1262-1290, 1268-1290, 1263-1305, 1259-1305, 1259-1305, 1266-1305, 1259-1302, 1275-1294, 1281-1306, 1281-1324, 1281-1336, 1282-1301, 1286-1306, 1290-1324, 1293-1318, 1290-1324, 1293-1315, 1296-1315, 1311-1336, 1311-1333, 1326-1345, 1353-1381, 1359-1378, 1395-1414, 1498-1532, 1498-1523, 1498-1535, 1510-1529, 1515-1535, 1515-1563, 1515-1596, 1515-1605, 1515-1602, 1515-1540, 1515-1535, 1518-1605, 1518-1602, 1518-1537, 1521-1563, 1521-1540, 1550-1655, 1550-1563, 1550-1569, 1553-1578, 1553-1599, 1553-1590, 1565-1584, 1571-1595, 1577-1605, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1578-1598, 1571-1598, 1579-1594, 1579-1594, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1580-1605, 1580-1602, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1582-1602, 1553-1655, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1586-1652, 1642-1664, 1651-1720, 1651-1673, 1655-1679, 1695-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1743-1768, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1796, 1777-1800, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1798, 1779-1797, 1779-1796, 1779-1795, 1779-1794, 1780-1799, 1780-1796, 1780-1795, 1781-1797, 1781-1796, 1781-1796, 1781-1800, 1781-1797, 1782-1799, 1782-1797, 1782-1798, 1783-1798, 1783-1799, 1784-1800, 1784-1799, 1779-1799, 1778-1794, 1779-1795, 1780-1799, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1828, 1806-1825, 1809-1828, 1812-1843, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1843, 1815-1844, 1815-1840, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1840, 1821-1844, 1821-1837, 1822-1843, 1822-1839, 1823-1843, 1827-1846, 1861-1884, 1861-1880, 1865-1885, 1867-1886, 1869-1885, 1876-1895, 1888-1914, 1888-1908, 1891-1910, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1913-1935, 1898-1920, 1907-1929, 1913-1935, 1918-1934, 1919-1938, 1919-1934, 1921-1934, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2368-2393, 2381-2397, 2368-2394, 2379-2394, 2381-2396, 2368-2397, 2368-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2459-2478, 2819-2838, 2818-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или олигонуклеотиды направлены на область нуклеиновой кислоты HBV, имеющую часть смежных нуклеооснований, которая комплементарна равной по длине части нуклеооснований указанной области. Например, эта часть может быть частью, содержащей по меньшей мере 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 смежных нуклеооснований, комплементарной равной по длине части области, упомянутой в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации такие соединения или олигонуклеотиды направлены на следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1: 233-264, 242-263, 243-262, 244-263, 245-264, 246-266, 247-266, 247-269, 247-270, 245-267, 251-267, 245-266, 250-269, 251-268, 251-269, 245-269, 245-266, 245-261, 250-266, 250-267, 250-268, 250-269, 251-270, 253-272, 253-274, 254-274, 255-274, 255-401, 255-400, 255-274, 255-273, 255-272, 255-271, 256-275, 255-276, 256-276, 253-275, 256-279, 257-276, 260-279, 262-281, 262-321, 262-315, 262-312, 265-312, 266-288, 266-291, 266-285, 281-321, 281-303, 405-424, 409-428, 405-428, 411-430, 411-431, 411-431, 412-431, 411-426, 411-427, 412-428, 412-431, 412-427, 413-433, 413-432, 413-428, 413-433, 411-427, 414-427, 415-427, 415-428, 415-429, 416-432, 416-429, 418-435, 418-434, 419-435, 419-434, 420-435, 419-432, 419-434, 422-441, 423-436, 425-465, 584-606, 611-645, 617-363, 623-642, 617-645, 642-754, 653-672, и причем по меньшей мере один нуклеозид соединения или модифицированного олигонуклеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 50% ингибирование: 1-20, 10-29, 10-56, 13-38, 13-35, 19-38, 25-47, 25-50, 25-56, 43-68, 43-63, 55-74, 58-77, 58-74, 58-73, 58-79, 58-80, 58-84, 59-74, 59-75, 59-80, 60-79, 60-75, 60-76, 61-80, 61-76, 61-77, 62-77, 63-84, 68-114, 101-123, 98-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 158-177, 167-186, 191-215, 196-224, 196-215, 196-218, 199-228, 199-218, 199-224,200-224, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-264, 242-263, 243-262, 244-263, 245-264, 246-266, 247-266, 247-269, 247-270, 245-267, 251-267, 245-266, 250-269, 251-268, 251-269, 245-269, 245-266, 245-261, 250-265, 250-266, 250-267, 250-268, 250-269, 251-266, 251-270, 252-267, 253-268, 253-269, 253-272, 253-274, 254-269, 254-270, 254-274, 255-274, 255-401, 255-400, 255-274, 255-273, 255-272, 255-271, 255-270, 256-271, 256-272, 256-275, 255-276, 256-276, 253-275, 256-279, 257-276, 258-273, 259-274, 260-279, 262-281, 262-321, 262-315, 262-312, 265-312, 266-288, 266-291, 266-285, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 292-311, 290-312, 293-312, 293-315, 293-321, 296-321, 302-321, 324-343, 339-361, 339-367, 348-367, 342-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-383, 360-388, 360-385, 362-381, 366-388, 369-388, 366-385, 366-392, 370-389, 370-392, 380-399, 382-401, 384-433, 384-400, 384-401, 385-401, 405-424, 409-428, 405-428, 411-430, 411-431, 411-431, 412-431, 411-426, 411-427, 411-430, 411-437, 412-428, 412-431, 412-427, 413-432, 413-428, 413-429, 413-433, 411-427, 414-427, 414-429, 414-430, 414-433, 415-427, 415-428, 415-429, 415-430, 415-431, 415-434, 416-435, 416-432, 416-431, 416-429, 417-432, 417-433, 417-436, 418-437, 418-435, 418-434, 418-433, 419-435, 419-434, 420-435, 419-432, 419-434, 421-436, 422-441, 422-437, 423-436, 425-465, 454-473, 454-472, 457-476, 454-476, 455-472, 457-485, 457-473, 457-472, 458-485, 458-483, 458-477, 458-473, 459-485, 460-485, 463-498, 463-485, 466-485, 463-482, 457-491, 458-491, 459-491, 460-491, 463-491, 466-491, 472-491, 472-493, 473-492, 475-491, 459-494, 460-494, 463-494, 466-494, 467-498, 472-494, 475-494, 457-473, 457-472, 458-494, 454-494, 457-494, 457-473, 485-513, 470-493, 476-519, 485-519, 500-519, 512-534, 512-550, 524-546, 536-559, 548-567, 548-570, 550-570, 548-594, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 611-645, 617-363, 623-642, 617-645, 639-654, 641-656, 642-657, 642-754, 643-658, 653-672, 662-685, 665-685,665-689, 668-687, 670-689, 670-706, 670-685, 670-686, 671-686, 671-687, 671-690, 671-691, 672-687, 672-688, 672-693, 672-697, 672-707, 673-688, 674-693, 678-693, 679-707, 679-694, 679-698, 679-701, 679-702, 679-707, 680-699, 679-699, 680-695, 681-696, 682-706, 682-707, 682-702, 682-701, 682-697, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-702, 687-703, 687-706, 687-754, 688-703, 688-704, 689-704, 689-705, 689-709, 689-710, 690-705, 690-706, 691-706, 679-705, 679-710, 679-706, 690-710, 691-710, 690-754, 690-706, 684-703, 687-705, 687-703, 687-706, 688-705, 689-708, 690-709, 692-711, 693-716, 693-712, 695-715, 697-716, 697-716, 690-716, 724-746, 724-752, 724-754, 724-758, 733-752, 738-753, 738-754, 739-758, 739-754, 739-775, 739-754, 740-754, 742-785, 742-773, 757-776, 757-785, 790-815, 793-812, 811-833, 811-844, 814-833, 811-906, 820-839, 822-844, 822-867, 823-842, 845-864, 845-867, 854-906, 845-909, 845-906, 854-876, 854-873, 863-882, 863-885, 878-900, 878-897, 887-906, 899-918, 899-933, 899-958, 905-927, 905-933, 914-933, 936-958, 936-955, 945-964, 951-970, 951-985, 951-1044, 951-1024, 951-1056, 951-997, 960-985, 963-1044, 963-1024, 963-997, 966-985, 972-1015, 978-997, 1025-1044, 1031-1056, 1037-1056, 1046-1083, 1049-1068, 1070-1089, 1070-1095, 1082-1101, 1081-1134, 1081-1143, 1082-1101, 1088-1107, 1088-1134, 1094-1119, 1097-1119, 1112-1134, 1118-1143, 1118-1146, 1088-1146, 1121-1140, 1127-1146, 1127-1193, 1150-1193, 1156-1187, 1165-1187, 1170-1192, 1171-1191, 1172-1191, 1176-1192, 1177-1192, 1176-1191, 1203-1297, 1206-1228, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1255, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1245-1265, 1251-1280, 1251-1285, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1296, 1259-1290, 1259-1287, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1261-1296, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1262-1285, 1262-1296, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1264-1297, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1296, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1271-1290, 1271-1296, 1277-1296, 1261-1290, 1262-1290, 1268-1290, 1263-1305, 1259-1305, 1259-1305, 1266-1305, 1259-1302, 1275-1294, 1281-1306, 1281-1324, 1281-1336, 1782-1797, 1282-1301, 1286-1306, 1290-1324, 1293-1318, 1290-1324, 1293-1315, 1296-1315, 1311-1336, 1311-1333, 1326-1345, 1353-1381, 1359-1378, 1395-1414, 1498-1532, 1498-1523, 1498-1535, 1510-1529, 1515-1535, 1515-1563, 1515-1596, 1515-1605, 1515-1602, 1515-1540, 1515-1535, 1518-1605, 1518-1602, 1518-1537, 1521-1563, 1521-1540, 1550-1655, 1550-1563, 1550-1569, 1553-1578, 1553-1599, 1553-1590, 1565-1584, 1571-1595, 1577-1606, 1577-1605, 1577-1596, 1577-1592, 1577-1593, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1578-1598, 1579-1594, 1579-1595, 1579-1598, 1571-1598, 1580-1605, 1580-1602, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1582-1602, 1553-1655, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1586-1652, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1642-1664, 1651-1720, 1651-1673, 1655-1679, 1695-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1743-1768, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1796, 1777-1800, 1778-1800, 1778-1793, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1798, 1779-1797, 1779-1796, 1779-1795, 1779-1794, 1780-1796, 1781-1797, 1781-1796, 1781-1800, 1781-1797, 1782-1799, 1784-1800, 1779-1799, 1778-1794, 1779-1795, 1780-1799, 1794-1813, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1781-1796, 1781-1797, 1781-1800, 1782-1798, 1783-1799, 1784-1799, 1784-1800, 1785-1800, 1806-1837, 1806-1828, 1806-1825, 1809-1828, 1812-1843, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1843, 1815-1844, 1815-1840, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1840, 1821-1844, 1821-1837, 1822-1843, 1822-1839, 1823-1843, 1827-1846, 1861-1884, 1861-1880, 1865-1885, 1867-1886, 1869-1885, 1876-1895, 1888-1914, 1888-1908, 1891-1910, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1913-1935, 1898-1920, 1907-1929, 1913-1935, 1918-1934, 1919-1938, 1919-1934, 1921-1934, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2278-2297, 2281-2300, 2284-2303, 2368-2393, 2381-2397, 2368-2394, 2379-2394, 2381-2396, 2368-2397, 2368-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2459-2478, 2819-2838, 2818-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 60% ингибирование: 1-20, 10-29, 10-53, 13-38, 25-50, 43-68, 55-74, 58-84, 58-77, 58-74, 58-73, 58-79, 59-80, 59-74, 59-75, 60-75, 60-76, 61-77, 61-76, 61-80, 62-77, 68-114, 98-123, 101-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 191-215, 196-224, 196-215, 199-228, 199-218, 200-223, 199-218, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-263, 244-263, 245-264, 247-266, 250-265, 251-266, 252-267, 253-272, 253-269, 251-267, 253-274, 254-270, 255-276, 256-279, 256-276, 256-274, 256-272, 256-271, 258-273, 259-274, 265-388, 265-284, 266-291, 266-288, 260-279, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 293-312, 296-315, 302-321, 324-343, 339-367, 339-361, 342-367, 348-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-379, 366-392, 366-385, 369-388, 370-392, 382-401, 405-428, 405-424, 409-428, 411-436, 411-433, 411-431, 411-426, 411-430, 411-427, 412-431, 412-428, 412-427, 413-428, 413-429, 413-433, 414-433, 414-430, 414-429, 414-433, 415-430, 415-431, 415-434, 415-435, 415-436, 416-429, 416-434, 416-431, 416-432, 416-436, 416-435, 417-436, 417-433, 417-432, 418-434, 418-433, 418-437, 419-434, 420-435, 421-436, 422-437, 423-436, 425-465, 454-472, 455-472, 457-476, 457-472, 457-473, 458-485, 458-473, 458-483, 463-498, 467-498, 463-482, 470-493, 472-491, 485-519, 485-513, 500-519, 512-534, 524-546, 536-558, 548-567, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 608-648, 639-654, 640-656, 641-656, 642-657, 642-658, 643-658, 653-672, 662-685, 665-685, 670-706, 670-689, 670-685, 670-686, 671-690, 671-686, 671-687, 672-707, 672-697, 672-693, 672-687, 672-688, 673-688, 679-707, 679-698, 679-694, 680-695, 681-696, 682-697, 682-701, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-754, 687-702, 687-705, 687-703, 687-706, 688-704, 688-703, 688-704, 688-705, 688-707, 689-710, 689-709, 689-705, 689-704, 690-754, 690-705, 690-706, 691-706, 691-710, 692-711, 697-716, 724-758, 724-754, 724-752, 724-746, 738-754, 738-753, 739-754, 742-785, 757-785, 790-815, 811-906, 811-844, 811-833, 822-867, 822-844, 823-842, 845-867, 854-906, 854-873, 878-897, 899-958, 899-933, 936-958, 945-964, 951-1044, 951-1024, 951-985, 951-997, 963-1044, 963-1024, 963-997, 966-985, 978-997, 1031-1056, 1046-1083, 1070-1095, 1081-1143, 1081-1134, 1082-1101, 1088-1146, 1088-1134, 1118-1146, 1118-1143, 1127-1193, 1170-1189, 1176-1192, 1176-1191, 1177-1192, 1203-1297, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1251-1270, 1251-1285, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1276, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1281, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1297, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1287, 1269-1284, 1269-1285, 1270-1285, 1281-1336, 1281-1324, 1281-1306, 1286-1305, 1290-1324, 1311-1336, 1326-1345, 1353-1381, 1395-1414, 1498-1535, 1498-1532, 1515-1535, 1515-1534, 1521-1540, 1550-1655, 1553-1599, 1553-1590, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1594, 1579-1595, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1642-1664, 1651-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1800, 1777-1797, 1655-1674, 1778-1794, 1778-1800, 1781-1800, 1781-1797, 1784-1800, 1779-1799, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1795, 1779-1798, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1781-1796, 1781-1797, 1781-1800, 1782-1797, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1825, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1844, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1837, 1822-1838, 1827-1846, 1861-1884, 1821-1840, 1866-1885, 1867-1886, 1888-1914, 1888-1907, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1919-1938, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2278-2297, 2281-2300, 2284-2303, 2368-2397, 2368-2396, 2368-2394, 2368-2393, 2379-2394, 2381-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2819-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 65% ингибирование: 1-20, 10-29, 10-53, 13-38, 25-50, 43-68, 55-74, 58-84, 58-79, 58-74, 58-73, 58-77, 59-75, 59-80, 58-77, 60-75, 60-76, 61-77, 61-76, 61-80, 62-77, 68-114, 98-123, 101-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 191-215, 196-215, 199-228, 199-218, 200-223,199-218, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-263, 244-263, 245-264, 250-265, 251-266, 253-269, 253-274, 255-276, 256-279, 256-276, 256-274, 256-272, 256-271, 247-266, 253-272, 258-273, 266-291, 266-288, 260-279, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 296-315, 293-312, 302-321, 324-343, 339-367, 339-361, 342-367, 348-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-379, 366-392, 366-385, 369-388, 370-392, 382-401, 405-428, 405-424, 409-428, 411-433, 411-431, 411-430, 411-427, 411-426, 412-431, 412-428, 412-427, 413-433, 413-428, 413-429, 413-432, 414-433, 414-430, 414-429, 415-430, 415-431, 415-434, 415-435, 415-436, 416-434, 416-436, 416-435, 416-432, 416-431, 417-436, 417-433, 417-432, 418-433, 418-434, 418-437, 420-435, 422-437, 423-436, 425-465, 454-472, 455-472, 457-472, 458-485, 458-483, 458-473, 463-498, 467-498, 457-476, 470-493, 472-491, 485-519, 485-513, 500-519, 512-534, 524-546, 536-558, 548-567, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 608-648, 639-654, 640-656, 641-656, 642-657, 642-658, 643-658, 653-672, 662-685, 665-685, 670-685, 670-706, 670-689, 670-686, 670-685, 671-686, 671-687, 671-690, 672-688, 672-687, 672-707, 672-697, 672-693, 673-688, 679-698, 680-695, 681-696, 682-697, 682-701, 683-698, 684-699, 685-700, 686-701, 687-702, 688-703, 688-707, 687-754, 690-754, 690-706, 690-705, 687-705, 687-703, 687-706, 687-702, 688-705, 688-703, 688-704, 689-705, 691-706, 692-711, 697-716, 724-758, 724-754, 724-752, 724-746, 738-754, 739-754, 742-785, 757-785, 790-815, 811-906, 811-844, 811-833, 822-867, 822-844, 823-842, 845-867, 854-906, 854-873, 878-897, 899-958, 899-933, 936-958, 945-964, 951-1044, 951-1024, 951-985, 951-997, 963-1044, 963-1024, 963-997, 966-985, 978-997, 1031-1056, 1046-1083, 1070-1095, 1081-1143, 1081-1134, 1082-1101, 1088-1146, 1088-1134, 1118-1146, 1118-1143, 1127-1193, 1170-1189, 1176-1192, 1177-1192, 1203-1297, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1251-1270, 1251-1285, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1281, 1262-1277, 1262-1278, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1297, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1265-1280, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1287, 1269-1284, 1269-1285, 1270-1285, 1281-1336, 1281-1324, 1281-1306, 1290-1324, 1311-1336, 1326-1345, 1353-1381, 1395-1414, 1498-1535, 1498-1532, 1515-1535, 1515-1534, 1550-1655, 1553-1599, 1553-1590, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1594, 1579-1595, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1642-1664, 1651-1720, 1655-1674, 1716-1738, 1743-1763, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1800, 1777-1797, 1778-1800, 1778-1797, 1779-1799, 1778-1794, 1779-1794, 1779-1795, 1779-1798, 1780-1796, 1780-1799, 1780-1795, 1781-1796, 1781-1797, 1781-1800, 1782-1797, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1825, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1844, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1837, 1822-1838, 1827-1846, 1861-1884, 1866-1885, 1867-1886, 1888-1914, 1888-1907, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1919-1938, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2278-2297, 2281-2300, 2284-2303, 2368-2397, 2368-2396, 2368-2394, 2368-2393, 2379-2394, 2381-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2819-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 70% ингибирование: 1-20, 10-29, 10-53, 13-38, 25-50, 43-68, 55-74, 58-84, 58-79, 58-74, 59-75, 59-80, 58-77, 60-75, 60-76, 61-77, 68-114, 98-123, 101-123, 113-138, 116-138, 131-150, 137-162, 152-186, 191-215, 199-228, 199-218, 200-223, 205-224, 206-228, 218-237, 224-243, 233-263, 244-263, 245-264, 253-269, 253-274, 255-276, 256-279, 256-276, 256-274, 256-272, 247-266, 250-265, 251-266, 253-272, 256-271, 266-291, 266-288, 260-279, 281-321, 281-303, 290-321, 290-312, 293-312, 302-321, 324-343, 339-367, 339-361, 342-367, 348-367, 358-392, 358-378, 360-392, 360-379, 366-392, 366-385, 370-392, 382-401, 405-428, 405-424, 409-428, 411-433, 411-431, 411-430, 411-427, 411-426, 412-431, 412-428, 412-427, 413-428, 413-429, 413-432, 414-433, 414-430, 414-429, 415-430, 414-433, 415-434, 415-435, 415-436, 416-431, 416-434, 416-436, 416-435, 416-432, 417-436, 417-433, 418-433, 418-437, 423-436, 425-465, 454-472, 455-472, 457-472, 457-476, 458-473, 458-485, 458-483, 463-498, 467-498, 457-476, 470-493, 470-493, 472-491, 485-519, 485-513, 485-519, 485-513, 500-519, 512-534, 524-546, 536-558, 548-567, 554-573, 548-576, 560-594, 584-606, 608-648, 639-654, 640-656, 641-656, 642-657, 642-658, 643-658, 653-672, 662-685, 665-685, 670-706, 670-689, 670-685, 670-686, 671-690, 671-686, 671-687, 672-687, 672-688, 672-707, 672-697, 672-693, 673-688, 679-698, 681-696, 682-697, 682-701, 683-698, 684-699, 686-701, 687-702, 687-754, 687-702, 688-703, 690-754, 690-706, 687-705, 687-703, 687-706, 692-711, 697-716, 724-758, 724-754, 724-752, 724-746, 738-754, 739-754, 738-754, 742-785, 757-785, 790-815, 811-906, 811-844, 811-833, 822-867, 822-844, 845-867, 854-906, 854-873, 878-897, 899-958, 899-933, 936-958, 945-964, 951-1044, 951-1024, 951-985, 951-997, 963-1044, 963-1024, 963-997, 966-985, 978-997, 1031-1056, 1046-1083, 1070-1095, 1081-1143, 1081-1134, 1082-1101, 1088-1146, 1088-1134, 1118-1146, 1118-1143, 1127-1193, 1170-1189, 1176-1192, 1177-1192, 1203-1297, 1206-1255, 1209-1228, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1251-1285, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1281, 1262-1277, 1262-1278, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1297, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1287, 1269-1284, 1269-1285, 1270-1285, 1281-1336, 1281-1324, 1281-1306, 1290-1324, 1311-1336, 1326-1345, 1353-1381, 1395-1414, 1498-1535, 1498-1532, 1515-1535, 1550-1655, 1553-1599, 1553-1590, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1594, 1579-1595, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1602, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1642-1664, 1651-1720, 1716-1738, 1743-1763, 1764-1783, 1773-1792, 1777-1800, 1777-1797, 1778-1800, 1778-1797, 1779-1799, 1778-1794, 1779-1795, 1779-1798, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1781-1800, 1782-1797, 1794-1813, 1806-1837, 1806-1825, 1812-1837, 1812-1831, 1815-1844, 1815-1834, 1818-1837, 1821-1837, 1822-1838, 1827-1846, 1861-1884, 1866-1885, 1867-1886, 1888-1914, 1888-1907, 1891-1914, 1895-1938, 1895-1935, 1919-1938, 1928-1956, 1957-1976, 2035-2057, 2083-2141, 2230-2261, 2278-2297, 2281-2300, 2284-2303, 2368-2397, 2368-2396, 2368-2394, 2368-2393, 2379-2394, 2381-2396, 2420-2439, 2458-2476, 2819-2838, 2873-2892 и 3161-3182.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 75% ингибирование: 13-32, 16-35, 19-38, 25-44, 28-47, 31-50, 43-62, 46-65, 49-68, 55-74, 58-82, 58-74, 58-77, 59-75, 60-75, 60-76, 61-77, 65-84, 98-117, 101-120, 104-123, 116-135, 119-138, 131-150, 137-156, 140-159, 143-162, 158-177, 161-180, 164-183, 167-186,200-219,203-226, 209-228, 218-237, 233-252, 236-255, 239-258, 242-264, 247-266, 251-266, 253-272, 255-276, 266-285, 269-288, 281-300, 284-303, 290-313, 298-317, 302-321, 324-343, 339-358, 342-361, 348-367, 358-381, 364-383, 366-386, 370-389, 373-392, 382-401, 405-424, 409-428, 411-430, 411-426, 411-427, 412-427, 412-431, 413-428, 413-429, 413-432, 414-436, 414-430, 414-429, 415-430, 416-431, 416-432, 417-433, 418-437, 422-441, 425-444, 428-447, 434-453, 440-459, 443-462, 446-465, 456-477, 458-473, 464-483, 470-493, 476-495, 479-498, 488-507, 491-510, 494-513, 500-519, 512-531, 515-534, 524-543, 527-546, 536-555, 539-558, 560-579, 566-585, 569-588, 572-591, 575-594, 584-603, 587-606, 608-627, 614-633, 617-636, 620-639, 623-642, 626-645, 629-648, 639-654, 641-656, 642-657, 643-658, 653-672, 665-684, 668-688, 670-706, 670-686, 670-685, 671-691, 671-687, 671-686, 672-688, 673-688, 679-703, 681-696, 682-697, 686-701, 686-706, 687-702, 687-703, 688-703, 689-708, 693-712, 695-714, 696-715, 697-716, 727-746, 739-754, 742-761, 748-767, 751-770, 754-773, 757-776, 760-779, 763-782, 766-785, 790-809, 793-812, 796-815, 811-830, 814-833, 817-836, 820-839, 822-844, 845-864, 854-873, 857-876, 863-882, 866-885, 872-891, 875-894, 878-897, 881-900, 884-903, 887-906, 899-918, 902-921, 905-924, 908-927, 911-930, 914-933, 936-955, 939-958, 951-970, 954-973, 957-976, 960-979, 963-982, 966-985, 969-988, 972-991, 975-994, 978-997, 996-1015, 1002-1021, 1025-1044, 1031-1050, 1034-1053, 1037-1056, 1046-1065, 1049-1068, 1052-1071, 1055-1074, 1058-1077, 1061-1080, 1064-1083, 1070-1089, 1073-1092, 1076-1095, 1082-1101, 1088-1107, 1094-1113, 1097-1116, 1100-1119, 1103-1122, 1106-1125, 1109-1128, 1112-1131, 1115-1134, 1121-1140, 1127-1146, 1153-1172, 1156-1175, 1159-1178, 1162-1181, 1165-1184, 1168-1191, 1174-1193, 1206-1225, 1209-1228, 1212-1231, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1239-1258, 1242-1261, 1245-1264, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1283, 1257-1276, 1258-1277, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1277, 1262-1278, 1263-1278, 1263-1279, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1280, 1264-1283, 1265-1281, 1265-1284, 1266-1281, 1266-1282, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1268-1287, 1269-1284, 1269-1285, 1270-1285, 1272-1291, 1275-1294, 1282-1303, 1286-1306, 1290-1309, 1293-1312, 1296-1315, 1299-1318, 1305-1324, 1311-1330, 1314-1333, 1317-1336, 1353-1381, 1356-1375, 1359-1378, 1498-1517, 1501-1520, 1504-1523, 1510-1529, 1553-1572, 1556-1575, 1559-1578, 1562-1581, 1565-1584, 1571-1590, 1574-1599, 1577-1606, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1594, 1579-1595, 1579-1598, 1580-1595, 1580-1596, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1598, 1582-1601, 1582-1602, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1600, 1584-1603, 1585-1600, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1601, 1586-1605, 1586-1602, 1587-1602, 1587-1603, 1587-1606, 1588-1603, 1588-1604, 1589-1604, 1589-1605, 1590-1605, 1590-1606, 1591-1606, 1604-1623, 1607-1626, 1630-1649, 1633-1652, 1645-1664, 1651-1670, 1654-1674, 1657-1676, 1660-1679, 1663-1682, 1666-1685, 1689-1708, 1695-1714, 1698-1717, 1701-1720, 1716-1735, 1778-1797, 1778-1794, 1778-1797, 1779-1795, 1779-1798, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1781-1800, 1794-1813, 1895-1914, 1898-1917, 1901-1920, 1907-1926, 1910-1929, 1913-1932, 1916-1935, 1919-1938, 2278-2297, 2281-2300 и 2284-2303.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 80% ингибирование: 13-32, 16-35, 19-38, 25-44, 28-47, 46-65, 49-68, 58-77, 59-80, 63-82, 98-120, 116-135, 137-159, 158-177, 167-186, 203-224, 205-224, 209-228, 218-237, 233-252, 236-263, 245-264, 253-272, 256-275, 257-276, 266-288, 281-300, 290-312, 293-312, 324-343, 339-358, 348-367, 358-378, 360-379, 361-383, 366-385, 373-392, 382-401, 405-424, 411-431, 411-426, 411-427, 411-430, 413-428, 414-433, 414-434, 415-430, 415-434, 416-431, 416-435, 417-436, 418-437, 422-441, 425-444, 434-453, 456-476, 458-473, 458-477, 464-483, 471-493, 488-507, 494-513, 512-531, 524-543, 527-546, 536-558, 560-579, 566-585, 572-591, 575-594, 584-603, 587-606, 608-627, 614-633, 617-636, 620-639, 623-642, 626-645, 629-648, 639-654, 641-656, 642-657, 643-658, 665-688, 670-687, 670-686, 671-686, 671-687, 671-691, 673-688, 679-699, 682-697, 682-706, 686-701, 687-702, 687-706, 687-703, 693-715, 727-746, 742-761, 748-767, 757-776, 766-785, 790-815, 814-833, 820-839, 822-844, 845-864, 854-873, 854-876, 863-885, 872-906, 878-897, 899-918, 905-933, 936-955, 951-979, 963-985, 966-985, 972-1015, 978-997, 1002-1021, 1025-1044, 1031-1056, 1049-1074, 1061-1083, 1070-1089, 1082-1101, 1088-11107, 1094-1119, 1109-1134, 1121-1140, 1127-1146, 1159-1187, 1171-1191, 1206-1228, 1209-1228, 1215-1255, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1245-1264, 1251-1279, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1283, 1265-1284, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1283, 1268-1284, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1275-1294, 1282-1301, 1286-1306, 1293-1318, 1311-1333, 1326-1345, 1359-1378, 1553-1578, 1565-1584, 1571-1590, 1574-1599, 1577-1592, 1577-1596, 1577-1593, 1577-1596, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1595, 1579-1598, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1596, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1597, 1582-1601, 1582-1602, 1583-1598, 1583-1599, 1583-1602, 1584-1599, 1584-1603, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1605, 1587-1602, 1587-1606, 1588-1603, 1589-1604, 1589-1605, 1657-1679, 1780-1795, 1780-1796, 1780-1799, 1913-1935, 2278-2297, 2281-2300 и 2284-2303.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 85% ингибирование: 13-32, 16-35, 19-38, 25-44, 46-65, 59-80, 101-120, 140-159, 158-177, 167-186, 200-219, 205-224, 209-228, 233-252, 242-263, 253-272, 266-285, 281-300, 290-311, 293-312, 359-379, 361-381, 370-389, 382-401, 411-426, 411-430, 411-427, 413-428, 414-433, 415-430, 416-435, 417-436, 422-441, 456-476, 458-473, 470-493, 512-531, 524-543, 536-558, 566-585, 575-594, 587-606, 608-627, 614-636, 623-645, 639-654, 665-687, 671-686, 671-687, 680-699, 682-703, 687-706, 687-703, 727-746, 742-761, 757-776, 793-812, 822-843, 854-876, 854-873, 863-885, 878-900, 878-897, 887-906, 899-918, 905-927, 914-933, 936-955, 951-985, 966-985, 972-1015, 978-997, 1002-1021, 1025-1044, 1037-1056, 1049-1074, 1064-1083, 1070-1089, 1088-1107, 1094-1119, 1109-1128, 1121-1140, 1156-1175, 1162-1187, 1172-1191, 1206-1228, 1209-1228, 1215-1255, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1245-1264, 1251-1279, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1276, 1261-1277, 1261-1280, 1262-1277, 1262-1278, 1262-1281, 1263-1278, 1263-1282, 1264-1279, 1264-1283, 1265-1284, 1266-1285, 1267-1282, 1267-1283, 1268-1284, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1270-1285, 1275-1294, 1282-1301, 1293-1315, 1311-1330, 1359-1378, 1574-1593, 1577-1592, 1577-1593, 1577-1596, 1577-1606, 1578-1593, 1578-1594, 1578-1597, 1579-1598, 1580-1596, 1580-1599, 1581-1597, 1581-1600, 1582-1601, 1583-1598, 1583-1602, 1584-1603, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1605, 1587-1602, 1588-1603, 1780-1799, 1780-1796 и 2278-2297,2281-2300 и 2284-2303.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 90% ингибирование: 13-32, 16-35, 60-80, 140-159, 158-177, 167-186, 242-261, 292-311, 362-381, 370-389, 382-401, 411-427, 411-426, 413-428, 415-430, 416-435, 422-441, 473-492, 617-636, 623-642, 639-654, 668-687, 680-699, 682-701, 684-703, 687-706, 727-746, 757-776, 824-843, 854-873, 854-876, 863-882, 878-897, 878-900, 887-906, 899-918, 905-927, 914-933, 936-955, 951-970, 960-985, 966-985, 972-1015, 978-997, 1025-1044, 1037-1056, 1070-1089, 1097-1119, 1109-1128, 1121-1140, 1165-1187, 1172-1191, 1206-1228, 1209-1228, 1215-1234, 1215-1234, 1215-1255, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1245-1264, 1251-1279, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1280, 1262-1278, 1261-1276, 1262-1281, 1262-1277, 1263-1282, 1263-1278, 1264-1283, 1265-1284, 1266-1285, 1268-1284, 1269-1284, 1269-1285, 1269-1288, 1296-1315, 1577-1605, 1577-1596, 1577-1593, 1577-1592, 1578-1597, 1581-1600, 1582-1601, 1583-1602, 1583-1598, 1585-1601, 1585-1604, 1586-1605, 1588-1603, 1780-1799, 1780-1796, 2278-2297, 2281-2300 и 2284-2303.

В некоторых вариантах реализации, следующие нуклеотидные области последовательности SEQ ID NO:1, при направленном действии антисмысловых соединений или олигонуклеотидов, демонстрируют по меньшей мере 95% ингибирование: 411-426, 411-427, 413-428, 617-636, 623-642, 668-687, 680-699, 682-701, 854-873, 878-897, 887-906, 914-933, 966-985, 978-997, 1209-1228, 1215-1234, 1218-1237, 1221-1240, 1224-1243, 1227-1246, 1230-1249, 1233-1252, 1236-1255, 1245-1264, 1251-1270, 1254-1273, 1254-1279, 1257-1276, 1258-1277, 1259-1278, 1260-1279, 1261-1285, 1261-1280, 1262-1281, 1263-1282, 1263-1278, 1264-1283, 1265-1284, 1266-1285, 1268-1284, 1269-1288, 1577-1592, 1577-1596, 1577-1601, 1583-1598, 1585-1601, 1588-1603, 1780-1799, 2278-2297, 2281-2300 и 2284-2303.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 50% ингибирование мРНК HBV, ISIS ID: 510088, 510089, 510090, 510092, 510096, 510097, 510098, 510099, 510100, 510101, 510102, 505330, 509928, 510104, 509929, 510105, 509930, 510106, 510107, 510108, 510111, 510115, 509931, 510116, 510117, 510118, 510119, 510120, 510121, 509932, 510122, 509933, 510123, 509934, 510124, 509935, 510125, 510126, 510127, 510128, 510140, 146779, 505314, 505315, 505316, 505317, 146821, 505318, 509922, 505319, 509925, 505320, 509952, 505321, 505322, 505323, 505324, 505325, 505326, 505327, 505328, 505329, 509956, 509957, 509927, 509958, 510038, 505330, 509959, 510039, 509960, 510040, 509961, 510041, 509962, 509963, 505331, 505332, 509968, 509969, 510050, 510052, 505333, 505334, 505335, 505336, 509972, 146823, 509974, 505338, 505339, 509975, 505340, 509978, 505341, 509979, 510058, 505342, 509981, 510061, 505344, 505345, 509983, 505346, 509984, 505347, 505348, 505350, 505352, 505353, 505354, 505355, 505356, 146786, 505357, 505358, 505359, 505360, 509985, 509986, 509987, 509988, 505363, 505364, 505365, 505366, 146787, 510079, 524410, 524411, 524413, 524414, 524415, 524416, 524417, 524418, 524419, 524420, 524421, 524422, 524424, 524425, 524426, 524427, 524428, 524429, 524431, 524432, 524433, 524434, 524435, 524436, 524439, 524440, 524442, 524444, 524446, 524447, 524448, 524450, 524451, 524452, 524453, 524454, 524455, 524456, 524457, 524458, 524459, 524460, 524461, 524462, 524464, 524466, 524467, 524468, 524469, 524470, 524471, 524472, 524473, 524474, 524475, 524477, 524478, 524479, 524480, 524481, 524482, 524483, 524484, 524485, 524486, 524487, 524489, 524490, 524491, 524492, 524493, 524494, 524495, 524496, 524498, 524499, 524500, 524501, 524502, 524503, 524504, 524506, 524507, 524508, 524509, 524510, 524511, 524512, 524513, 524514, 524515, 524516, 524517, 524518, 524519, 524520, 524521, 524522, 524523, 524524, 524525, 524526, 524527, 524528, 524529, 524530, 524531, 524532, 524533, 524534, 524535, 524536, 524537, 524538, 524539, 524540, 524541, 524543, 524544, 524546, 524547, 524548, 524549, 524550, 524551, 524552, 524553, 524554, 524555, 524556, 524557, 524558, 524559, 524560, 524561, 524562, 524563, 524564, 524565, 524568, 524569, 524570, 524571, 524572, 524573, 524574, 524575, 524576, 524577, 524578, 524579, 524580, 524581, 524582, 524584, 524585, 524586, 524587, 524588, 524589, 524590, 524591, 524592, 524593, 524594, 524595, 524598, 524599, 524600, 524601, 524602, 524603, 524604, 524605, 524606, 524607, 524608, 524609, 524610, 524611, 524614, 524615, 524616, 524617, 524618, 524619, 524620, 524621, 524622, 524623, 524624, 524625, 524626, 524627, 524629, 524632, 524633, 524634, 524635, 524636, 524637, 524638, 524639, 524640, 524641, 524642, 524643, 524644, 524646, 524647, 524648, 524649, 524650, 524651, 524652, 524654, 524656, 524657, 524658, 524659, 524660, 524661, 524662, 524663, 524664, 524665, 524666, 524667, 524668, 524669, 524670, 524672, 524673, 524675, 524676, 524678, 524679, 524680, 524682, 524683, 524684, 524685, 524686, 524687, 524688, 524689, 524690, 524691, 524692, 524693, 524694, 524695, 524696, 524697, 524698, 524699, 524700, 524701, 524702, 524703, 524704, 524705, 524706, 524707, 524708, 524709, 524710, 524712, 524713, 524714, 524715, 524716, 524717, 524718, 524719, 524721, 524722, 524723, 524724, 524726, 524727, 524728, 524729, 524730, 524731, 524732, 524733, 524734, 524735, 524736, 524737, 524738, 524739, 524740, 524741, 524742, 524743, 524744, 524745, 524746, 524747, 524748, 524749, 524750, 524751, 524752, 524753, 524754, 524755, 524756, 524757, 524758, 524759, 524760, 524761, 524762, 524763, 524764, 524765, 524766, 524767, 524768, 524769, 524770, 524771, 524772, 524773, 524774, 524775, 524776, 524777, 524778, 524779, 524780, 524781, 524782, 524783, 524784, 524785, 524786, 524787, 524788, 524789, 524790, 524791, 524792, 524793, 524794, 524795, 524796, 524797, 524798, 524799, 524800, 524801, 524802, 524803, 524804, 524805, 524806, 524807, 524808, 524809, 524810, 524811, 524812, 524813, 524814, 524815, 524816, 524817, 524818, 524819, 524820, 524821, 524822, 524823, 524824, 524825, 524826, 524827, 524828, 524829, 524830, 524831, 524632, 524833, 524834, 524835, 524842, 524843, 524844, 524845, 524847, 524848, 524856, 524857, 524861, 524866, 524867, 524868, 524869, 524870, 524871, 524872, 524873, 524875, 524876, 524877, 524878, 524879, 524880, 524881, 524882, 524883, 524884, 524885, 524886, 524887, 524888, 524889, 524890, 524891, 524892, 524893, 524894, 524895, 524896, 524897, 524898, 524899, 524900, 524901, 524902, 524903, 524904, 524905, 524906, 524907, 524908, 524909, 524910, 524911, 524912, 524913, 524914, 524915, 524916, 524917, 524918, 524919, 524921, 524922, 524923, 524924, 524925, 524926, 524927, 524928, 524929, 524930, 524931, 524932, 524933, 524934, 524935, 524936, 524937, 524938, 524939, 524940, 524941, 524942, 524943, 524944, 524945, 524946, 524947, 524948, 524949, 524950, 524951, 524952, 524953, 524954, 524955, 524956, 524957, 524958, 524959, 524960, 524961, 524962, 524964, 524965, 524976, 524977, 524978, 524979, 524980, 524981, 524982, 524983, 524984, 524985, 524986, 524987, 524988, 524989, 524991, 524992, 524993, 524994, 524997, 524998, 525021, 525022, 525037, 525039, 525043, 525050, 525052, 525086, 525090, 525100, 551909, 551910, 551911, 551912, 551913, 551916, 551917, 551918, 551919, 551920, 551921, 551922, 551923, 551924, 551925, 551926, 551927, 551928, 551929, 551930, 551932, 551933, 551934, 551935, 551936, 551937, 551939, 551940, 551941, 551942, 551943, 551944, 551945, 551946, 551947, 551948, 551949, 551950, 551951, 551952, 551953, 551954, 551955, 551956, 551957, 551958, 551959, 551960, 551962, 551963, 551964, 551965, 551966, 551967, 551968, 551971, 551972, 551973, 551974, 551975, 551976, 551977, 551978, 551979, 551980, 551981, 551982, 551983, 551984, 551985, 551986, 551987, 551988, 551989, 551990, 551992, 551993, 551994, 551995, 551996, 551997, 551998, 551999, 552000, 552001, 552002, 552003, 552004, 552005, 552006, 552007, 552009, 552010, 552011, 552012, 552013, 552014, 552015, 552016, 552017, 552018, 552019, 552020, 552021, 552022, 552023, 552024, 552025, 552026, 552027, 552028, 552029, 552030, 552031, 552032, 552033, 552034, 552035, 552036, 552037, 552038, 552039, 552040, 552041, 552042, 552043, 552044, 552045, 552046, 552047, 552048, 552049, 552050, 552051, 552052, 552053, 552054, 552055, 552056, 552057, 552058, 552059, 552060, 552061, 552062, 552063, 552064, 552065, 552067, 552068, 552069, 552070, 552071, 552072, 552073, 552074, 552075, 552076, 552077, 552078, 552079, 552080, 552081, 552082, 552083, 552084, 552085, 552086, 552087, 552088, 552089, 552090, 552091, 552092, 552093, 552094, 552095, 552096, 552097, 552098, 552099, 552100, 552101, 552102, 552114, 552115, 552116, 552117, 552118, 552119, 552122, 552123, 552124, 552125, 552126, 552127, 552128, 552129, 552131, 552132, 552133, 552134, 552135, 552136, 552137, 552138, 552139, 552140, 552141, 552142, 552143, 552144, 552145, 552146, 552147, 552148, 552149, 552150, 552151, 552152, 552153, 552154, 552155, 552158, 552159, 552160, 552161, 552162, 552163, 552164, 552165, 552167, 552168, 552169, 552170, 552171, 552175, 552176, 552177, 552178, 552179, 552180, 552181, 552182, 552183, 552185, 552186, 552187, 552188, 552189, 552191, 552192, 552193, 552194, 552195, 552196, 552197, 552198, 552199, 552200, 552201, 552202, 552203, 552204, 552205, 552206, 552207, 552208, 552209, 552210, 552211, 552212, 552213, 552214, 552215, 552216, 552217, 552218, 552220, 552222, 552224, 552225, 552230, 552239, 552240, 552241, 552242, 552243, 552246, 552247, 552248, 552249, 552250, 552251, 552252, 552253, 552254, 552255, 552256, 552257, 552258, 552259, 552260, 552261, 552262, 552263, 552264, 552265, 552266, 552267, 552268, 552269, 552270, 552271, 552279, 552285, 552288, 552293, 552294, 552295, 552296, 552297, 552300, 552301, 552302, 552303, 552304, 552305, 552306, 552307, 552308, 552309, 552310, 552312, 552313, 552314, 552315, 552316, 552317, 552318, 552319, 552320, 552321, 552322, 552323, 552325, 552326, 552330, 552331, 552332, 552333, 552337, 552338, 552339, 552340, 552341, 552342, 552343, 552344, 552345, 552347, 552348, 552349, 552350, 552351, 552352, 552354, 552355, 552356, 552357, 552358, 552359, 552360, 552361, 552362, 552363, 552364, 552365, 552366, 552367, 552368, 552369, 552370, 552371, 552372, 552373, 552374, 552375, 552376, 552377, 552378, 552379, 552380, 552385, 552386, 552390, 552391, 552393, 552394, 552395, 552396, 552397, 552398, 552399, 552400, 552401, 552402, 552403, 552408, 552409, 552410, 552411, 552412, 552413, 552414, 552415, 552416, 552417, 552418, 552419, 552420, 552421, 552422, 552423, 552424, 552425, 552428, 552430, 552431, 552432, 552433, 552440, 552442, 552443, 552444, 552445, 552446, 552447, 552448, 552449, 552450, 552452, 552453, 552455, 552456, 552458, 552459, 552464, 552465, 552466, 552467, 552468, 552469, 552470, 552471, 552472, 552473, 552474, 552475, 552476, 552477, 552478, 552479, 552480, 552481, 552482, 552484, 552485, 552486, 552487, 552488, 552490, 552491, 552493, 552497, 552499, 552500, 552501, 552502, 552503, 552504, 552505, 552506, 552508, 552509, 552510, 552511, 552512, 552513, 552514, 552515, 552516, 552517, 552520, 552521, 552522, 552523, 552525, 552526, 552527, 552528, 552529, 552530, 552531, 552532, 552533, 552534, 552535, 552538, 552539, 552540, 552541, 552542, 552544, 552547, 552548, 552553, 552554, 552555, 552557, 552558, 552559, 552561, 552562, 552565, 552566, 552567, 552568, 552569, 552570, 552571, 552572, 552576, 552577, 552578, 552579, 552580, 552581, 552582, 552583, 552584, 552585, 552586, 552587, 552588, 552589, 552590, 552591, 552592, 552594, 552595, 552596, 552597, 552598, 552600, 552606, 552608, 552787, 552788, 552789, 552790, 552791, 552794, 552795, 552796, 552797, 552798, 552799, 552800, 552801, 552802, 552803, 552804, 552805, 552806, 552807, 552808, 552809, 552810, 552811, 552812, 552813, 552814, 552815, 552816, 552817, 552818, 552819, 552820, 552821, 552822, 552823, 552824, 552825, 552826, 552827, 552828, 552829, 552830, 552831, 552832, 552833, 552834, 552835, 552836, 552837, 552838, 552839, 552840, 552841, 552842, 552843, 552844, 552845, 552846, 552847, 552848, 552849, 552850, 552851, 552852, 552853, 552854, 552855, 552856, 552857, 552858, 552859, 552860, 552861, 552862, 552863, 552864, 552865, 552866, 552868, 552870, 552871, 552872, 552876, 552889, 552890, 552891, 552892, 552893, 552894, 552895, 552896, 552898, 552899, 552901, 552902, 552903, 552904, 552905, 552907, 552908, 552909, 552910, 552911, 552912, 552913, 552914, 552915, 552916, 552917, 552918, 552919, 552922, 552923, 552925, 552926, 552927, 552928, 552929, 552930, 552931, 552932, 552933, 552934, 552935, 552936, 552937, 552938, 552939, 552940, 552941, 552942, 552943, 552944, 552945, 552946, 552947, 552948, 552950, 552951, 552953, 552954, 552955, 552956, 552957, 552958, 552959, 552960, 552961, 552965, 552966, 552969, 552970, 552971, 552972, 552973, 552974, 552975, 552976, 552977, 552979, 552980, 552981, 552982, 552983, 552984, 552987, 552988, 552989, 552990, 552991, 552992, 552993, 552994, 552995, 552996, 552997, 552998, 552999, 553000, 553001, 553002, 553003, 553004, 553005, 553006, 553007, 553008, 553009, 553010, 553011, 553012, 553014, 553015, 553016, 566828, 566829, 566830, 566831, 566832, 577120, 577121, 577122, 577123, 577124, 577125, 577126, 577127, 577128, 577129, 577130, 577131, 577132, 577133, 577134, 577135, 577136, 582665 и 582666.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 50% ингибирование мРНК HBV, SEQ ID NO:5, 6, 7, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 33, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 74, 83, 85, 86, 87, 88, 89, 92, 96, 98, 99, 100, 102, 103, 104, 106, 108, 109, 111, 112, 115, 117,121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 165, 166, 167, 168, 169, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 197, 198, 199, 201, 203, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 215, 217, 218, 220, 221, 222, 224, 225, 226, 227, 228, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 240, 241, 242, 243, 244, 250, 283, 321, 322, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 350, 351, 353, 355, 357, 358, 359, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 416, 417, 418, 419, 420 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 428, 429, 430, 431, 432, 433, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 453, 454, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 473, 474, 475, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 494, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 502, 503, 504, 505, 508, 509, 510, 511, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 518, 519, 520, 521, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 534, 535, 536, 537, 539, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 562, 564, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 582, 583, 585, 586, 588, 589, 590, 592, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 603, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 620, 622, 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 631, 632, 633, 634, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 697, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 739, 740, 741, 742, 743, 744, 745, 746, 747, 754, 755, 756, 757, 759, 760, 768, 769, 773, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812, 813, 814, 815, 816, 817, 818, 819, 820, 821, 822, 823, 824, 825, 826, 827, 828, 829, 830, 831, 833, 834, 835, 836, 837, 838, 839, 840, 841, 842, 843, 844, 845, 846, 847, 848, 849, 850, 851, 852, 853, 854, 855, 856, 857, 858, 859, 860, 861, 862, 863, 864, 865, 866, 867, 868, 869, 870, 871, 872, 873, 874, 876, 877, 888, 889, 890, 891, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 901, 903, 904, 905, 906, 909, 910, 933, 934, 949, 951, 955, 962, 964, 998, 1002, 1013, 1052, 1267, 1271, 1272, 1288, 1289, 1290, 1291, 1292, 1293, 1294, 1295, 1296, 1297, 1298, 1299, 1300, 1301, 1302, 1303, 1304, 1305, 1306, 1307, 1308, 1309, 1310, 1311, 1312, 1313, 1314, 1315, 1316, 1317, 1318, 1319, 1320, 1321, 1322, 1323, 1324, 1325, 1326, 1327, 1328, 1329, 1330, 1331, 1332, 1333, 1334, 1335, 1336, 1337, 1338, 1339, 1340, 1341, 1342, 1343, 1344, 1345, 1346, 1347, 1348, 1349, 1350, 1364, 1365, 1366, 1367, 1368, 1369, 1370, 1371, 1372, 1375 и 1376.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 60% ингибирование мРНК HBV, ISIS ID: 510090, 510100, 510102, 505330, 509928, 510104, 509929, 510105, 509930, 510106, 510107, 510111, 509931, 510116, 510117, 510118, 510119, 510120, 510121, 509932, 510122, 509933, 510123, 509934, 510124, 509935, 510125, 510128, 146779, 505314, 505315, 505316, 505317, 146821, 505318, 505319, 505322, 505323, 505324, 505325, 505326, 505327, 505328, 505329, 509956, 509957, 509958, 505330, 509959, 510041, 505332, 509968, 505333, 505335, 146823, 509974, 505338, 505339, 509975, 505340, 505341, 509979, 505342, 509981, 505344, 505345, 509983, 505346, 509984, 505347, 505348, 505353, 505354, 505356, 146786, 505357, 505358, 505359, 505360, 509985, 509986, 505363, 505366, 524410, 524413, 524414, 524415, 524416, 524417, 524418, 524419, 524420, 524421, 524422, 524424, 524425, 524426, 524428, 524431, 524432, 524433, 524434, 524435, 524439, 524440, 524446, 524447, 524448, 524451, 524452, 524453, 524454, 524455, 524456, 524457, 524459, 524460, 524461, 524464, 524466, 524467, 524468, 524469, 524471, 524472, 524473, 524474, 524475, 524477, 524478, 524479, 524480, 524481, 524482, 524485, 524486, 524487, 524489, 524490, 524491, 524492, 524493, 524494, 524495, 524496, 524499, 524500, 524501, 524502, 524503, 524504, 524506, 524507, 524508, 524509, 524510, 524511, 524512, 524513, 524514, 524515, 524516, 524517, 524519, 524520, 524521, 524523, 524525, 524526, 524527, 524528, 524529, 524532, 524533, 524534, 524535, 524536, 524537, 524538, 524539, 524540, 524541, 524543, 524546, 524547, 524549, 524550, 524552, 524553, 524554, 524555, 524556, 524557, 524558, 524559, 524560, 524561, 524562, 524563, 524564, 524565, 524568, 524569, 524570, 524571, 524572, 524573, 524574, 524575, 524576, 524577, 524578, 524579, 524580, 524581, 524582, 524585, 524586, 524587, 524588, 524589, 524590, 524591, 524593, 524594, 524595, 524598, 524599, 524600, 524602, 524603, 524604, 524605, 524606, 524607, 524610, 524611, 524614, 524615, 524616, 524617, 524618, 524619, 524620, 524621, 524622, 524623, 524625, 524627, 524629, 524632, 524633, 524634, 524635, 524636, 524637, 524638, 524639, 524640, 524641, 524642, 524643, 524644, 524646, 524647, 524648, 524649, 524650, 524651, 524654, 524656, 524657, 524658, 524659, 524661, 524662, 524663, 524664, 524665, 524666, 524667, 524668, 524669, 524670, 524673, 524675, 524676, 524678, 524679, 524680, 524683, 524684, 524685, 524686, 524687, 524688, 524689, 524690, 524691, 524692, 524694, 524695, 524696, 524697, 524698, 524699, 524700, 524701, 524702, 524703, 524704, 524705, 524706, 524707, 524708, 524709, 524710, 524713, 524714, 524715, 524716, 524717, 524718, 524719, 524721, 524722, 524724, 524726, 524727, 524728, 524729, 524730, 524731, 524732, 524733, 524734, 524735, 524736, 524737, 524738, 524739, 524741, 524742, 524743, 524744, 524746, 524747, 524748, 524749, 524750, 524751, 524752, 524753, 524754, 524755, 524756, 524757, 524758, 524759, 524760, 524761, 524762, 524763, 524764, 524765, 524766, 524767, 524768, 524769, 524770, 524771, 524772, 524773, 524774, 524775, 524776, 524777, 524778, 524779, 524780, 524781, 524782, 524783, 524784, 524785, 524787, 524788, 524789, 524790, 524791, 524792, 524793, 524794, 524795, 524796, 524797, 524798, 524799, 524800, 524801, 524802, 524803, 524804, 524805, 524806, 524807, 524808, 524809, 524810, 524811, 524812, 524813, 524814, 524815, 524816, 524817, 524818, 524819, 524820, 524821, 524822, 524823, 524824, 524825, 524826, 524827, 524828, 524829, 524830, 524632, 524833, 524842, 524843, 524844, 524845, 524847, 524856, 524866, 524867, 524868, 524869, 524870, 524871, 524872, 524873, 524876, 524878, 524879, 524880, 524881, 524882, 524883, 524884, 524885, 524886, 524887, 524888, 524889, 524890, 524891, 524892, 524893, 524894, 524895, 524896, 524897, 524898, 524899, 524900, 524901, 524902, 524903, 524904, 524905, 524906, 524907, 524908, 524909, 524910, 524911, 524912, 524913, 524914, 524915, 524916, 524921, 524922, 524923, 524924, 524925, 524926, 524928, 524929, 524930, 524931, 524932, 524933, 524936, 524937, 524938, 524939, 524940, 524941, 524942, 524944, 524946, 524947, 524948, 524949, 524950, 524952, 524953, 524954, 524955, 524961, 524977, 524978, 524979, 524980, 524981, 524982, 524983, 524984, 524985, 524986, 524987, 524988, 524991, 524992, 524993, 524994, 525037, 525052, 551909, 551911, 551919, 551920, 551921, 551922, 551924, 551925, 551926, 551927, 551928, 551932, 551933, 551934, 551935, 551936, 551941, 551943, 551944, 551948, 551949, 551950, 551951, 551952, 551953, 551954, 551955, 551956, 551957, 551958, 551959, 551960, 551962, 551963, 551965, 551966, 551967, 551968, 551973, 551975, 551979, 551981, 551982, 551983, 551984, 551985, 551986, 551987, 551989, 551990, 551992, 551993, 551994, 551995, 551996, 551997, 551998, 551999, 552000, 552001, 552002, 552003, 552005, 552006, 552007, 552009, 552010, 552012, 552013, 552014, 552015, 552016, 552017, 552018, 552019, 552020, 552021, 552022, 552023, 552024, 552025, 552026, 552027, 552028, 552029, 552030, 552031, 552032, 552033, 552034, 552035, 552036, 552038, 552039, 552041, 552042, 552044, 552045, 552046, 552047, 552048, 552049, 552050, 552051, 552052, 552053, 552054, 552055, 552056, 552057, 552058, 552059, 552060, 552061, 552062, 552063, 552064, 552065, 552068, 552069, 552070, 552071, 552073, 552074, 552075, 552076, 552077, 552078, 552079, 552080, 552081, 552082, 552083, 552084, 552085, 552086, 552087, 552088, 552089, 552090, 552091, 552092, 552093, 552094, 552095, 552096, 552097, 552098, 552099, 552100, 552101, 552102, 552114, 552115, 552116, 552117, 552118, 552119, 552123, 552124, 552125, 552126, 552127, 552128, 552129, 552131, 552132, 552133, 552134, 552135, 552136, 552138, 552139, 552140, 552141, 552143, 552144, 552145, 552146, 552147, 552148, 552149, 552150, 552151, 552152, 552153, 552155, 552158, 552159, 552160, 552162, 552163, 552168, 552169, 552170, 552171, 552176, 552178, 552179, 552180, 552182, 552183, 552185, 552187, 552188, 552191, 552192, 552193, 552194, 552195, 552196, 552197, 552198, 552199, 552200, 552201, 552202, 552203, 552204, 552205, 552206, 552207, 552208, 552209, 552210, 552211, 552212, 552213, 552214, 552215, 552216, 552222, 552224, 552225, 552239, 552240, 552242, 552246, 552247, 552248, 552252, 552253, 552254, 552255, 552256, 552257, 552258, 552259, 552261, 552263, 552265, 552266, 552268, 552285, 552293, 552294, 552295, 552296, 552301, 552302, 552303, 552306, 552307, 552308, 552309, 552310, 552312, 552313, 552314, 552315, 552316, 552317, 552318, 552320, 552321, 552322, 552323, 552325, 552326, 552331, 552332, 552337, 552338, 552339, 552340, 552343, 552345, 552347, 552348, 552349, 552351, 552354, 552355, 552356, 552358, 552359, 552360, 552361, 552362, 552363, 552364, 552365, 552366, 552367, 552368, 552369, 552370, 552371, 552372, 552373, 552374, 552375, 552376, 552377, 552378, 552379, 552396, 552397, 552398, 552403, 552408, 552409, 552410, 552411, 552412, 552414, 552416, 552418, 552419, 552420, 552421, 552422, 552423, 552424, 552431, 552442, 552445, 552449, 552455, 552456, 552459, 552464, 552465, 552466, 552467, 552469, 552472, 552473, 552474, 552475, 552477, 552478, 552479, 552480, 552484, 552487, 552497, 552508, 552509, 552511, 552512, 552515, 552516, 552520, 552521, 552522, 552523, 552526, 552527, 552528, 552529, 552530, 552531, 552534, 552540, 552541, 552542, 552559, 552567, 552568, 552569, 552570, 552572, 552576, 552577, 552578, 552579, 552582, 552583, 552584, 552585, 552586, 552587, 552588, 552590, 552595, 552596, 552597, 552788, 552789, 552790, 552791, 552796, 552800, 552801, 552803, 552804, 552805, 552806, 552807, 552808, 552809, 552811, 552812, 552813, 552814, 552815, 552816, 552817, 552818, 552819, 552820, 552821, 552822, 552823, 552824, 552826, 552827, 552828, 552829, 552830, 552831, 552832, 552833, 552834, 552835, 552836, 552837, 552838, 552839, 552841, 552842, 552843, 552844, 552845, 552846, 552847, 552848, 552849, 552850, 552851, 552852, 552853, 552854, 552855, 552856, 552857, 552858, 552859, 552860, 552861, 552862, 552863, 552864, 552865, 552866, 552872, 552891, 552892, 552893, 552894, 552902, 552903, 552904, 552905, 552907, 552908, 552909, 552910, 552911, 552912, 552913, 552914, 552915, 552916, 552917, 552918, 552922, 552923, 552925, 552927, 552928, 552929, 552930, 552931, 552932, 552933, 552934, 552935, 552936, 552937, 552938, 552939, 552940, 552941, 552942, 552943, 552944, 552945, 552946, 552951, 552955, 552956, 552957, 552958, 552960, 552961, 552966, 552969, 552971, 552972, 552973, 552974, 552975, 552976, 552977, 552979, 552980, 552981, 552982, 552983, 552984, 552988, 552989, 552990, 552991, 552992, 552993, 552994, 552995, 552996, 552998, 552999, 553000, 553001, 553002, 553003, 553004, 553005, 553006, 553007, 553008, 553009, 553010, 553011, 553012, 553016, 566828, 566829, 566830, 566831, 566832, 577120, 577121, 577122, 577123, 577124, 577125, 577126, 577127, 577128, 577129, 577130, 577131, 577132, 577133, 577134, 577135, 577136 и 582666.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 60% ингибирование мРНК HBV, SEQ ID NO:7, 9, 10, 12, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 33, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 56, 83, 85, 86, 87, 88, 89, 92, 96, 98, 100, 102, 103, 112, 115, 117, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 145, 147, 149, 150, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 166, 167, 168, 172, 174, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 198, 199, 201, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 218, 220, 222, 224, 225, 226, 227, 228, 230, 231, 232, 233, 234, 240, 243, 321, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 335, 336, 337, 339, 342, 343, 344, 345, 346, 350, 351, 357, 358, 359, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 370, 371, 372, 375, 376, 377, 378, 379, 381, 382, 383, 384, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 395, 396, 397, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 416, 417, 418, 419, 420 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 429, 430, 431, 433, 435, 436, 437, 438, 439, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 453, 456, 457, 459, 460, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 473, 474, 475, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 486, 487, 488, 489, 490, 491, 492, 495, 496, 497, 498, 499, 500, 501, 503, 504, 505, 508, 509, 510, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 520, 521, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 532, 533, 535, 537, 539, 542, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 549, 550, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 564, 566, 567, 568, 569, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 583, 585, 586, 588, 589, 590, 593, 594, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 604, 605, 606, 607, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 620, 623, 624, 625, 626, 627, 628, 629, 631, 632, 634, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 652, 653, 654, 655, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 664, 665, 666, 667, 668, 669, 670, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 681, 682, 683, 684, 685, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 732, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 740, 741, 742, 744, 745, 754, 755, 756, 757, 759, 768, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 783, 784, 787, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812, 813, 814, 815, 816, 817, 818, 819, 820, 821, 822, 823, 824, 825, 826, 827, 828, 833, 834, 835, 836, 837, 838, 840, 841, 842, 843, 844, 845, 848, 849, 850, 851, 852, 853, 854, 856, 858, 859, 860, 861, 862, 864, 865, 866, 867, 873, 889, 890, 891, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 903, 904, 905, 906, 949, 964, 1271, 1288, 1289, 1290, 1291, 1292, 1293, 1294, 1295, 1296, 1297, 1298, 1299, 1300, 1301, 1302, 1303, 1304, 1305, 1306, 1307, 1308, 1309, 1310, 1311, 1312, 1313, 1314, 1315, 1316, 1317, 1318, 1319, 1320, 1321, 1322, 1323, 1324, 1325, 1326, 1327, 1328, 1329, 1330, 1331, 1332, 1333, 1334, 1335, 1336, 1337, 1338, 1339, 1340, 1341, 1342, 1343, 1344, 1345, 1346, 1347, 1348, 1349, 1350, 1365, 1366, 1367, 1368, 1369, 1370, 1371, 1372 и 1376.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 70% ингибирование мРНК HBV, ISIS ID: 510100, 505330, 509928, 509929, 509930, 510106, 509931, 510116, 510119, 510120, 510121, 509932, 510122, 509933, 510123, 509934, 510124, 509935, 146779, 505317, 146821, 505318, 505319, 505323, 505325, 505326, 505327, 509957, 505330, 505332, 505335, 509974, 505338, 505339, 509975, 505342, 509981, 505345, 505346, 505347, 505348, 146786, 505357, 505358, 505359, 505363, 524410, 524413, 524414, 524415, 524416, 524418, 524419, 524420, 524421, 524424, 524425, 524426, 524428, 524431, 524432, 524433, 524434, 524435, 524446, 524447, 524448, 524452, 524453, 524457, 524459, 524460, 524461, 524464, 524466, 524467, 524468, 524469, 524472, 524473, 524474, 524475, 524477, 524478, 524479, 524480, 524481, 524482, 524485, 524487, 524490, 524491, 524492, 524493, 524494, 524495, 524499, 524500, 524502, 524503, 524507, 524508, 524510, 524511, 524512, 524513, 524514, 524515, 524516, 524517, 524520, 524525, 524526, 524528, 524532, 524533, 524534, 524535, 524536, 524537, 524538, 524539, 524540, 524541, 524547, 524549, 524552, 524553, 524554, 524555, 524556, 524557, 524558, 524559, 524560, 524561, 524563, 524564, 524565, 524568, 524569, 524570, 524571, 524572, 524573, 524574, 524575, 524577, 524578, 524579, 524580, 524582, 524586, 524587, 524590, 524591, 524594, 524595, 524598, 524600, 524602, 524603, 524604, 524605, 524606, 524607, 524610, 524611, 524614, 524615, 524616, 524617, 524618, 524619, 524620, 524621, 524629, 524633, 524634, 524635, 524636, 524637, 524638, 524641, 524642, 524643, 524644, 524646, 524647, 524648, 524649, 524650, 524651, 524656, 524657, 524659, 524661, 524662, 524663, 524664, 524665, 524666, 524667, 524668, 524669, 524670, 524678, 524679, 524680, 524685, 524686, 524687, 524688, 524689, 524690, 524691, 524692, 524695, 524696, 524698, 524699, 524700, 524701, 524702, 524703, 524704, 524705, 524706, 524707, 524708, 524709, 524713, 524714, 524715, 524716, 524717, 524718, 524721, 524722, 524724, 524726, 524727, 524728, 524729, 524730, 524731, 524732, 524733, 524734, 524735, 524736, 524737, 524738, 524739, 524741, 524742, 524743, 524746, 524747, 524748, 524749, 524750, 524751, 524752, 524754, 524755, 524756, 524758, 524760, 524761, 524762, 524763, 524764, 524765, 524766, 524767, 524768, 524769, 524771, 524773, 524775, 524776, 524777, 524778, 524779, 524780, 524781, 524782, 524783, 524784, 524785, 524787, 524788, 524789, 524790, 524791, 524792, 524793, 524794, 524795, 524796, 524797, 524798, 524799, 524800, 524801, 524802, 524803, 524804, 524805, 524806, 524807, 524808, 524809, 524810, 524811, 524812, 524813, 524814, 524815, 524816, 524817, 524818, 524819, 524821, 524822, 524823, 524824, 524825, 524826, 524827, 524828, 524829, 524830, 524833, 524842, 524843, 524844, 524845, 524856, 524866, 524867, 524868, 524869, 524870, 524871, 524873, 524879, 524880, 524881, 524882, 524883, 524884, 524885, 524886, 524887, 524888, 524889, 524890, 524891, 524892, 524893, 524894, 524895, 524896, 524897, 524898, 524899, 524900, 524902, 524903, 524905, 524906, 524907, 524908, 524909, 524910, 524911, 524912, 524913, 524914, 524915, 524916, 524921, 524922, 524930, 524931, 524932, 524937, 524940, 524942, 524948, 524980, 524981, 524982, 524983, 524984, 524985, 524986, 524987, 524988, 551919, 551921, 551922, 551924, 551925, 551926, 551933, 551941, 551950, 551951, 551952, 551953, 551955, 551956, 551957, 551958, 551966, 551983, 551984, 551985, 551986, 551987, 551989, 551990, 551992, 551993, 551994, 551995, 551996, 551997, 551998, 551999, 552000, 552005, 552006, 552009, 552012, 552013, 552014, 552015, 552017, 552018, 552019, 552020, 552021, 552022, 552023, 552024, 552025, 552026, 552027, 552028, 552029, 552030, 552031, 552032, 552033, 552034, 552038, 552039, 552041, 552044, 552046, 552047, 552049, 552050, 552051, 552052, 552053, 552054, 552055, 552056, 552057, 552058, 552059, 552060, 552061, 552062, 552063, 552064, 552065, 552068, 552069, 552070, 552071, 552073, 552074, 552075, 552076, 552077, 552078, 552079, 552080, 552081, 552082, 552083, 552084, 552085, 552086, 552087, 552088, 552089, 552090, 552091, 552092, 552093, 552094, 552095, 552096, 552097, 552098, 552099, 552100, 552101, 552115, 552117, 552123, 552125, 552127, 552128, 552129, 552132, 552133, 552138, 552139, 552140, 552141, 552143, 552144, 552145, 552146, 552147, 552148, 552149, 552150, 552151, 552152, 552158, 552159, 552160, 552163, 552168, 552179, 552187, 552188, 552192, 552193, 552195, 552199, 552200, 552201, 552202, 552203, 552204, 552205, 552206, 552207, 552208, 552210, 552211, 552213, 552214, 552222, 552246, 552247, 552248, 552253, 552254, 552255, 552258, 552294, 552301, 552302, 552306, 552307, 552308, 552309, 552310, 552312, 552314, 552315, 552317, 552318, 552321, 552322, 552323, 552325, 552332, 552337, 552339, 552347, 552348, 552349, 552354, 552355, 552358, 552359, 552360, 552361, 552362, 552363, 552364, 552365, 552366, 552367, 552368, 552369, 552371, 552373, 552374, 552375, 552376, 552377, 552378, 552379, 552403, 552408, 552409, 552411, 552418, 552419, 552420, 552424, 552442, 552464, 552465, 552466, 552467, 552472, 552474, 552475, 552477, 552478, 552521, 552522, 552523, 552527, 552528, 552529, 552530, 552534, 552567, 552578, 552579, 552584, 552586, 552587, 552588, 552590, 552789, 552803, 552804, 552805, 552808, 552816, 552817, 552818, 552819, 552820, 552821, 552822, 552823, 552824, 552828, 552829, 552830, 552833, 552834, 552835, 552842, 552843, 552844, 552846, 552848, 552849, 552850, 552851, 552852, 552853, 552854, 552855, 552856, 552857, 552858, 552859, 552860, 552861, 552863, 552864, 552865, 552872, 552894, 552903, 552904, 552907, 552909, 552910, 552911, 552913, 552914, 552915, 552916, 552917, 552918, 552922, 552923, 552925, 552927, 552928, 552929, 552930, 552931, 552932, 552933, 552934, 552935, 552936, 552937, 552938, 552939, 552940, 552941, 552942, 552943, 552944, 552945, 552946, 552957, 552961, 552966, 552969, 552971, 552972, 552974, 552976, 552979, 552980, 552981, 552983, 552984, 552988, 552989, 552990, 552991, 552995, 552996, 552998, 552999, 553001, 553002, 553003, 553004, 553006, 553008, 553009, 553010, 553011, 553012, 566828, 566829, 566830, 566831, 566832, 577120, 577121, 577122, 577123, 577124, 577125, 577126, 577127, 577128, 577129, 577130, 577131, 577132, 577133, 577134, 577135, 577136 и 582666.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 70% ингибирование мРНК HBV, SEQ ID NO:12, 17, 18, 20, 21, 22, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 39, 40, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 83, 89, 92, 96, 98, 100, 103, 112, 123, 125, 126, 127, 136, 137, 139, 140, 142, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 166, 167, 168, 174, 176, 177, 178, 179, 181, 186, 187, 188, 190, 198, 201, 207, 209, 210, 211, 212, 213, 224, 225, 226, 227, 232, 234, 240, 321, 324, 325, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 335, 336, 337, 339, 342, 343, 344, 345, 346, 357, 358, 359, 363, 364, 368, 370, 371, 372, 375, 376, 377, 378, 379, 382, 383, 384, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 395, 397, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 409, 410, 412, 413, 417, 418, 420 421, 422, 423, 424, 425, 426, 427, 430, 435, 436, 438, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 457, 459, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 473, 474, 475, 478, 479, 480, 481, 482, 483, 484, 485, 487, 488, 489, 490, 492, 496, 497, 500, 501, 504, 505, 508, 510, 512, 513, 514, 515, 516, 517, 520, 521, 524, 525, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 539, 543, 544, 545, 546, 547, 548, 551, 552, 553, 554, 555, 556, 557, 558, 559, 560, 561, 566, 567, 569, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 588, 589, 590, 595, 596, 597, 598, 599, 600, 601, 602, 605, 606, 608, 609, 610, 611, 612, 613, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 623, 624, 625, 626, 627, 628, 631, 632, 634, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 642, 643, 644, 645, 646, 647, 648, 649, 650, 652, 653, 654, 657, 658, 659, 660, 661, 662, 663, 665, 666, 667, 669, 671, 672, 673, 674, 675, 676, 677, 678, 679, 680, 682, 684, 686, 687, 688, 689, 690, 691, 692, 693, 694, 695, 696, 698, 699, 700, 701, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 710, 711, 712, 713, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 726, 727, 728, 729, 730, 731, 733, 734, 735, 736, 737, 738, 740, 741, 742, 745, 754, 755, 756, 757, 768, 777, 778, 779, 780, 781, 782, 784, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812, 814, 815, 817, 818, 819, 820, 821, 822, 823, 824, 825, 826, 827, 828, 833, 834, 842, 843, 844, 849, 852, 854, 860, 892, 893, 894, 895, 896, 897, 898, 899, 900, 1288, 1289, 1290, 1291, 1292, 1293, 1294, 1295, 1296, 1297, 1298, 1299, 1300, 1301, 1302, 1303, 1304, 1305, 1306, 1307, 1308, 1309, 1310, 1311, 1312, 1313, 1314, 1315, 1316, 1317, 1320, 1322, 1323, 1324, 1325, 1326, 1327, 1329, 1330, 1331, 1332, 1333, 1334, 1335, 1336, 1337, 1338, 1340, 1341, 1342, 1343, 1344, 1345, 1346, 1347, 1348, 1349 и 1350, 1367, 1368, 1369, 1370, 1372 и 1376.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 80% ингибирование мРНК HBV, ISIS ID: 510100, 509931, 510116, 505317, 505319, 505323, 505326, 505327, 505330, 505339, 505346, 505347, 505358, 509934, 146786, 524414, 524415, 524416, 524418, 524419, 524425, 524426, 524431, 524432, 524434, 524446, 524447, 524452, 524459, 524460, 524466, 524469, 524475, 524477, 524478, 524479, 524482, 524485, 524490, 524491, 524492, 524493, 524494, 524495, 524499, 524502, 524503, 524507, 524510, 524511, 524512, 524520, 524525, 524528, 524532, 524533, 524534, 524535, 524536, 524540, 524541, 524547, 524552, 524553, 524556, 524561, 524564, 524565, 524568, 524570, 524571, 524572, 524573, 524578, 524580, 524586, 524590, 524591, 524594, 524595, 524602, 524604, 524606, 524607, 524610, 524611, 524614, 524616, 524617, 524618, 524619, 524620, 524621, 524633, 524634, 524635, 524636, 524637, 524641, 524643, 524644, 524646, 524649, 524650, 524651, 524657, 524662, 524664, 524667, 524670, 524678, 524679, 524680, 524686, 524688, 524690, 524691, 524692, 524695, 524698, 524699, 524701, 524702, 524704, 524705, 524706, 524707, 524708, 524709, 524713, 524715, 524716, 524717, 524718, 524721, 524726, 524727, 524728, 524729, 524730, 524731, 524733, 524734, 524735, 524737, 524739, 524741, 524742, 524743, 524747, 524748, 524749, 524751, 524752, 524754, 524758, 524760, 524762, 524763, 524764, 524767, 524768, 524769, 524771, 524773, 524777, 524778, 524779, 524780, 524781, 524783, 524784, 524788, 524789, 524791, 524792, 524793, 524794, 524795, 524796, 524797, 524798, 524801, 524803, 524804, 524805, 524806, 524807, 524808, 524809, 524810, 524811, 524813, 524816, 524819, 524822, 524823, 524824, 524827, 524828, 524829, 524833, 524842, 524844, 524880, 524881, 524882, 524884, 524886, 524887, 524888, 524889, 524890, 524891, 524893, 524907, 524908, 524980, 524986, 524987, 551921, 551924, 551925, 551953, 551956, 551957, 551984, 551986, 551987, 551989, 551990, 551993, 551994, 551995, 551996, 551997, 551998, 551999, 552000, 552005, 552006, 552018, 552019, 552020, 552021, 552022, 552023, 552024, 552025, 552026, 552027, 552028, 552029, 552030, 552031, 552032, 552033, 552034, 552039, 552044, 552046, 552050, 552051, 552052, 552053, 552054, 552055, 552056, 552057, 552058, 552059, 552060, 552061, 552062, 552063, 552064, 552065, 552073, 552077, 552078, 552079, 552080, 552082, 552083, 552084, 552085, 552086, 552087, 552088, 552089, 552090, 552091, 552092, 552093, 552094, 552095, 552096, 552097, 552098, 552138, 552139, 552145, 552146, 552147, 552149, 552192, 552193, 552199, 552200, 552201, 552207, 552246, 552247, 552253, 552301, 552307, 552308, 552310, 552317, 552347, 552348, 552354, 552355, 552360, 552361, 552362, 552363, 552364, 552365, 552366, 552367, 552371, 552375, 552464, 552465, 552521, 552808, 552816, 552817, 552818, 552819, 552820, 552822, 552824, 552834, 552844, 552849, 552850, 552851, 552852, 552853, 552854, 552916, 552922, 552923, 552925, 552930, 552931, 552932, 552933, 552936, 552937, 552938, 552939, 552942, 552943, 552944, 552980, 552988, 552989, 552996, 552998, 553002, 553003, 566828, 566829, 566830, 566831, 566832, 577120, 577121, 577122, 577123, 577124, 577125, 577126, 577127, 577128, 577130, 577131, 577132, 577133, 577134, 577135, 577136 и 582666.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 80% ингибирование мРНК HBV, SEQ ID NO:17, 20, 22, 24, 26, 28, 39, 40, 50, 51, 83, 89, 103, 123, 126, 127, 136, 137, 143, 147, 149, 168, 176, 177, 178, 179, 187, 188, 210, 211, 212, 224, 225, 226, 227, 232, 325, 326, 327, 329, 330, 336, 337, 342, 343, 345, 357, 358, 363, 370, 371, 376, 379, 387, 388, 389, 392, 395, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 409, 412, 413, 417, 420 421, 422, 430, 435, 438, 442, 443, 444, 445, 446, 450, 451, 457, 462, 463, 466, 474, 475, 478, 480, 481, 482, 483, 488, 490, 496, 500, 501, 504, 505, 512, 514, 516, 517, 520, 521, 524, 526, 527, 528, 529, 530, 531, 543, 544, 545, 546, 547, 551, 553, 554, 555, 559, 560, 561, 567, 572, 574, 577, 580, 588, 589, 590, 596, 598, 600, 601, 602, 605, 608, 609, 611, 612, 614, 615, 616, 617, 618, 619, 623, 625, 626, 627, 628, 631, 636, 637, 638, 639, 640, 641, 643, 644, 645, 646, 648, 650, 652, 653, 654, 658, 659, 660, 662, 663, 665, 669, 671, 673, 674, 675, 678, 679, 680, 682, 684, 688, 689, 690, 691, 692, 694, 695, 699, 700, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 712, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 725, 728, 731, 734, 735, 736, 740, 741, 745, 756, 791, 792, 793, 795, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 804, 805, 806, 807, 819, 820, 892, 898, 899, 1292, 1293, 1295, 1296, 1301, 1302, 1303, 1304, 1305, 1306, 1307, 1308, 1310, 1312, 1316, 1322, 1324, 1325, 1326, 1327, 1330, 1331, 1332, 1333, 1334, 1335, 1338, 1339, 1340, 1341, 1344, 1345, 1349, 1350, 1368, 1372 и 1376.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 90% ингибирование мРНК HBV, ISIS ID: 524414, 524415, 524432, 524460, 524466, 524469, 524475, 524477, 524493, 524512, 524535, 524540, 524552, 524561, 524572, 524617, 524619, 524634, 524641, 524644, 524657, 524667, 524691, 524698, 524699, 524701, 524706, 524707, 524709, 524713, 524715, 524716, 524718, 524721, 524726, 524729, 524730, 524731, 524733, 524734, 524735, 524739, 524743, 524754, 524763, 524764, 524767, 524771, 524780, 524781, 524784, 524788, 524789, 524791, 524792, 524793, 524794, 524795, 524796, 524797, 524798, 524801, 524803, 524804, 524805, 524806, 524807, 524808, 524809, 524810, 524811, 524822, 524827, 524842, 551986, 551987, 551989, 552005, 552018, 552019, 552020, 552021, 552022, 552023, 552025, 552046, 552050, 552051, 552052, 552053, 552054, 552055, 552057, 552082, 552083, 552084, 552085, 552086, 552087, 552088, 552089, 552092, 552093, 552096, 552097, 552307, 552317, 552355, 552361, 552362, 552363, 552817, 552851, 552922, 552923, 566828, 566829, 566830, 566831, 566832, 577120, 577121, 577122, 577123, 577124, 577125, 577126, 577127, 577128, 577130, 577131, 577132, 577134, 577135, 577136 и 582666.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 90% ингибирование мРНК HBV, SEQ ID NO:17, 24, 50, 51, 137, 143, 147, 176, 211, 212, 224, 226, 227, 325, 326, 343, 371, 376, 379, 403, 422, 445, 450, 462, 482, 527, 529, 544, 551, 554, 567, 577, 601, 608, 609, 611, 616, 617, 619, 623, 625, 626, 628, 631, 636, 639, 640, 641, 643, 644, 645, 646, 650, 654, 665, 674, 675, 678, 682, 691, 692, 695, 699, 700, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 712, 714, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 735, 801, 804, 805, 807, 1296, 1302, 1303, 1304, 1312, 1325, 1326, 1332, 1334, 1340, 1345, 1349 и 1376.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 95% ингибирование мРНК HBV, ISIS ID: 524619, 524634, 524641, 505339, 524698, 524709, 524718, 524731, 524734, 524789, 524791, 524792, 524793, 524794, 524795, 524796, 524797, 524798, 524801, 524803, 524804, 524805, 524806, 505346, 146785, 524807, 505347, 524808, 524809, 524810, 524811, 146786, 525101, 525102, 525103, 525107, 525108, 525109, 525110, 525111, 525112, 525113, 525114, 525115, 525116, 525117, 525118, 525119, 525120, 552018, 552050, 552019, 552051, 552020, 552052, 551987, 552021, 552053, 552005, 552022, 552054, 551989, 552023, 552055, 552084, 552085, 552086, 552087, 552088, 552361, 552317, 566831, 577123, 577124, 566830, 566828, 566829, 577127, 577135, 577132, 577136, 566832 и 577122.

В некоторых вариантах реализации, следующие антисмысловые соединения или олигонуклеотиды направлены на определенную область нуклеиновой кислоты HBV и вызывают по меньшей мере 95% ингибирование мРНК HBV, SEQ ID NO:17, 50, 137, 143, 187, 210, 212, 224, 529, 544, 551, 608, 619, 628, 641, 645, 700, 702, 703, 704, 705, 706, 707, 708, 709, 712, 715, 716, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 1014, 1015, 1016, 1020, 1021, 1022, 1023, 1024, 1025, 1026, 1027, 1028, 1029, 1030, 1031, 1032, 1033, 1236, 1302, 1312, 1334, 1340, 1345, 1349.

В некоторых вариантах реализации представлены способы лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного, включающие введение животному, нуждающемуся в этом, соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5-310, 321-802, 804-1272, 1288-1350, 1364-1372, 1375, 1376 и 1379.

В некоторых вариантах реализации представлены способы лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного, включающие введение животному, нуждающемуся в этом, соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:17, 51, 86, 93, 95, 98, 100, 102, 104, 106, 109, 112, 115, 117, 137, 140, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 167, 168, 176, 177-179, 181, 188, 190-192, 194, 199, 201, 208, 209, 211, 226, 230-237, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 271, 1318-1347, 1364-1372, 1375, 1376 и 1379, при чем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонукеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар и/или затрудненный этиловый (cEt) сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения экспрессии HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5-310, 321-802, 804-1272, 1288-1350, 1364-1372, 1375, 1376 и 1379.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения экспрессии HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:17, 51, 86, 93, 95, 98, 100, 102, 104, 106, 109, 112, 115, 117, 137, 140, 143, 145, 147, 149,151, 153, 155, 157, 159, 161, 167, 168, 176, 177-179, 181, 188, 190-192, 194, 199, 201, 208, 209, 211, 226, 230-237, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 271, 1318-1347, 1364-1372, 1375 и 1376, причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар и/или затрудненный этиловый (cEt) сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации представлен способ предотвращения, улучшения или лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:17, 51, 86, 93, 95, 98, 100, 102, 104, 106, 109, 112, 115, 117, 137, 140, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 167, 168, 176, 177-179,181, 188, 190-192, 194, 199, 201, 208, 209, 211, 226, 230-237, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 271, 1318-1347, 1364-1372, 1375 и 1376, причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар и/или затрудненный этиловый (cEt) сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации представлены способы лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного, включающие введение животному, нуждающемуся в этом, соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5, 15, 16, 33, 39-95, 123-135, 163-175, 180-310, 321-406, 413-455, 461-802 или 804-1272.

В некоторых вариантах реализации представлены способы лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного, включающие введение животному, нуждающемуся в этом, соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 10-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:6-14, 17-32, 34-38, 96-122, 136-162, 176-179, 407-412, 456-462, 523-538, причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 14 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-3 или 2 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3-4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5 или 6 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 18 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 3-5 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения экспрессии HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5-310, 321-802, 804-1272 или 1288-1350.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения экспрессии HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5, 15, 16, 33, 39-95, 123-135, 163-175, 180-310, 321-406, 413-455, 461-802 или 804-1272.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения экспрессии HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:6-14, 17-32, 34-38, 96-122, 136-162, 176-179, 407-412, 456-462, 523-538, причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида включает по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар.

В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 14 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-3 или 2 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5 или 6 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3-4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 18 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 3-5 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации представлен способ предотвращения, улучшения или лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной 10-30 связанных нуклеозидов, направленный на HBV и имеющий последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5-310, 321-802, 804-1272 или 1288-1350, причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:5-310, 321-802 или 804-1272. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеооснований, включающую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ Ю NO: 5, 15, 16, 33, 39-95, 123-135, 163-175, 180-310, 321-406, 413-455, 461-802 или 804-1272. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеооснований, содержащую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:6-14, 17-32, 34-38, 96-122, 136-162, 176-179, 407-412, 456-462, 523-538, причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 14 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-3 или 2 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 9 или 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5 или 6 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3-4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 18 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 3-5 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеозидов с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром.

Примеры HBV-связанных заболеваний, расстройств или состояний включают, но не ограничиваясь этим, хроническую инфекцию HBV, желтуху, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV и состояния, имеющие симптомы, которые могут включать любой или все из следующих: болезнь, похожую на грипп, слабость, боли, головную боль, жар, потерю аппетита, диарею, тошноту и рвоту, боль в области печени, стул земляного или серого цвета, зуд по всему телу и мочу темного цвета, в сочетании с положительным тестом на присутствие вируса гепатита В, вирусного антигена гепатита В или положительным тестом на присутствие антитела, специфичного к вирусному антигену гепатита В.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения экспрессии мРНК HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации снижение экспрессии мРНК HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние. В некоторых вариантах реализации снижение экспрессии мРНК HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит заболевание печени. В некоторых вариантах реализации экспрессия мРНК HBV снижается по меньшей мере на 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения уровня белка HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации снижение уровня белка HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние. В некоторых вариантах реализации снижение уровня белка HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит заболевание печени. В некоторых вариантах реализации уровень белка HBV снижается по меньшей мере на 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения уровня ДНК HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации снижение уровня ДНК HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние. В некоторых вариантах реализации млекопитающим может быть человек, а вирусом гепатита В может быть вирус гепатита В человека. Более конкретно, вирус гепатита В человека может быть любым из человеческих географических генотипов: А (Северо-Западная Европа, Северная Америка, Центральная Америка); В (Индонезия, Китай, Вьетнам); С (Восточная Азия, Корея, Китай, Япония, Полинезия, Вьетнам); D (Средиземноморский регион, Ближний восток, Индия); Е (Африка); F (коренные американцы, Полинезия); G (Соединенные Штаты, Франция); или Н (Центральная Америка). В некоторых вариантах реализации снижение уровня ДНК HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит заболевание печени. В некоторых вариантах реализации уровень ДНК HBV снижается по меньшей мере на 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения уровня антигена HBV у животного, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации антиген представляет собой HBsAG или HBeAG. В некоторых вариантах реализации снижение уровня антигена HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние. В некоторых вариантах реализации снижение уровня антигена HBV у животного предупреждает, улучшает или лечит заболевание печени. В некоторых вариантах реализации уровень антигена HBV снижается по меньшей мере на 5%, 10%, 20%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100%.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения уровня ДНК HBV и антигена HBV у животного, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение этому животному соединения или композиции, описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации антиген представляет собой HBsAG или HBeAG. В некоторых вариантах реализации количество антигена HBV может быть снижено достаточно для сероконверсии, которую определяют как отсутствие HBeAg в сыворотке плюс присутствие HBeAb в сыворотке, в случае мониторинга HBeAg как определителя сероконверсии, или которую определяют как отсутствие HBsAg в сыворотке, в случае мониторинга HBsAg как определителя сероконверсии, по результатам определения доступных в настоящее время пределов обнаружения коммерческих систем иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA).

В некоторых вариантах реализации представлен способ лечения животного с HBV-связанным заболеванием, расстройством или состоянием, включающий: а) идентификацию указанного животного с HBV-связанным заболеванием, расстройством или состоянием, и b) введение указанному животному терапевтически эффективного количества соединения или композиции, содержащей модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 14-20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований по меньшей мере на 90% комплементарную любой из последовательностей SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363, по результатам измерения целостности указанного модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество соединения или композиции, введенной животному, лечит или уменьшает HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние, или его симптом, у животного. В некоторых вариантах реализации HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние представляет собой заболевание печени. В некоторых вариантах реализации, связанное заболевание, расстройство или состояние представляет собой хроническую инфекцию HBV, желтуху, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV или заболевание печени, связанное с трансплантацией.

В некоторых вариантах реализации представлен способ лечения животного с HBV-связанным заболеванием, расстройством или состоянием, включающий: а) идентификацию указанного животного с HBV-связанным заболеванием, расстройством или состоянием, и b) введение указанному животному терапевтически эффективного количества соединения или композиции, содержащей модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 14-20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований по меньшей мере на 90% комплементарную последовательности SEQ Ю NO:1, по результатам измерения целостности указанного модифицированного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации терапевтически эффективное количество соединения или композиции, введенной животному, лечит или уменьшает HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние, или его симптом, у животного. В некоторых вариантах реализации HBV-связанное заболевание, расстройство или состояние представляет собой заболевание печени. В некоторых вариантах реализации, связанное заболевание, расстройство или состояние представляет собой хроническую инфекцию HBV, желтуху, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночную недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV или заболевание печени, связанное с трансплантацией.

В некоторых вариантах реализации HBV имеет последовательность, представленную далее под номером доступа GenBank U95551.1 (включена в настоящий документ как SEQ ID NO:1) или любой ее вариант или фрагмент. В некоторых вариантах реализации HBV имеет усеченные части человеческой последовательности, как представлено далее в SEQ ID NO:1273, 1274, 1275, 1276, 1277, 1278, 1279, 1280, 1281, 1282, 1283, 1284, 1285, 1287, 1352, 1353, 1354, 1359, 1360, 1361, 1362 и 1363.

В некоторых вариантах реализации животное представляет собой человека.

В некоторых вариантах реализации соединения или композиции разработаны в качестве первого средства. В некоторых вариантах реализации способы включают введение первого средства и одного или нескольких вторых средств. В некоторых вариантах реализации способы включают введение первого средства и одного или нескольких вторых средств. В некоторых вариантах реализации первое средство и одно или несколько вторых средство вводят совместно. В некоторых вариантах реализации первое средство и одно или несколько вторых средств вводят совместно последовательно или параллельно.

В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых средств также представляют собой соединение или композицию, описанную в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых средств являются отличными от соединения или композиции, описанной в настоящем документе. Примеры одного или нескольких вторых средств включают, но не ограничиваясь этим, противовоспалительное средство, химиотерапевтическое средство или противоинфекционное средство.

В других родственных вариантах реализации, дополнительное терапевтическое средство может быть агентом HBV, агентом HCV, химиотерапевтическим средством, антибиотиком, анальгетиком, нестероидным противовоспалительным средством (NSAID), противогрибковым средством, антипаразитарным средством, средством против тошноты, средством против диареи или иммуноподавляющим средством.

В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых агентов представляют собой агент HBV. В некоторых вариантах реализации агент HBV может включать, но не ограничиваясь этим, интерферон альфа-2b, интерферон альфа-2а и интерферон альфакон-1 (пегилированный и не пегилированный), рибавирин; ингибитор репликации РНК HBV; второй антисмысловый олигомер; терапевтическую вакцину HBV; профилактическую вакцину HBV; ламивудин (3ТС); энтекавир (ETV); тенофовир диизопроксил-фумарат (TDF); телбивудин (LdT); адефовир; или любую терапию HBV антителами (моноклональными или поликлональными).

В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых агентов представляют собой агент HCV. В некоторых вариантах реализации агент HBV может включать, но не ограничиваясь этим, интерферон альфа-2b, интерферон альфа-2а и интерферон альфакон-1 (пегилированный и не пегилированный); рибавирин; ингибитор репликации РНК HCV (например, серии VP50406 производства ViroPharma); антисмысловый агент HCV; терапевтическую вакцину HCV; ингибитор протеазы HCV; ингибитор геликазы HCV; или терапию HCV моноклональными или поликлональными антителами.

В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых средств представляют собой противовоспалительное средство (то есть терапию, снижающую воспаление). В некоторых вариантах реализации терапия, снижающая воспаление, может включать, но не ограничиваясь этим, терапевтическое изменение образа жизни, стероид, NSAID или DMARD. Стероид может быть кортикостероидом. NSAID может быть аспирином, ацетаминофеном, ибупрофеном, напроксеном, ингибиторами СОХ, индометацином и тому подобными. DMARD может быть ингибитором TNF, ингибитором синтеза пурина, ингибитором кальциневрина, ингибитором синтеза пиримидина, сульфасалазином, метотрексатом и тому подобными.

В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых средств представляют собой химиотерапевтическое средство (то есть средство лечения рака). Химиотерапевтические средства могут включать, но не ограничиваясь этим, даунорубицин, дауномицин, дактиномицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, эзорубицин, блеомицин, мафосфамид, ифосфамид, цитозин арабинозид, бис-хлорэтилнитрозомочевину, бусульфан, митомицин С, актиномицин D, митрамицин, преднизон, гидроксипрогестерон, тестостерон, тамоксифен, дакарбазин, прокарбазин, гексаметилмеламин, пентаметилмеламин, митоксантрон, амсакрин, хлорамбуцил, метилциклогексилнитрозомочевину, азотные иприты, мелфалан, циклофосфамид, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин (СА), 5-азацитидин, гидроксимочевину, дезоксикоформицин, 4-гидроксипероксициклофосфорамид, 5-фторурацил (5-FU), 5-фтордезоксиуридин (5-FUdR), метотрексат (МТХ), колхицин, таксол, винкристин, винбластин, этопозид, триметрексат, тенипозид, цисплатин, гемцитабин и диэтилстильбэстрол (DES).

В некоторых вариантах реализации одно или несколько вторых агентов представляют собой противоинфекционное средство. Примеры противомикробных средств включают, но не ограничиваясь этим, антибиотики, противогрибковые лекарства и противовирусные лекарства.

В некоторых вариантах реализации, введение включает парентеральное введение.

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения. В некоторых вариантах реализации млекопитающим может быть человек, а вирусом гепатита В может быть вирус гепатита В человека. Более конкретно, вирус гепатита В человека может быть любым из человеческих географических генотипов: А (Северо-Западная Европа, Северная Америка, Центральная Америка); В (Индонезия, Китай, Вьетнам); С (Восточная Азия, Корея, Китай, Япония, Полинезия, Вьетнам); D (Средиземноморский регион, Ближний восток, Индия); Е (Африка); F (коренные американцы, Полинезия); G (Соединенные Штаты, Франция); или Н (Центральная Америка).

В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения, причем количество мРНК снижается по меньшей мере на 70% по сравнению с количеством до введения модифицированного анисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения, причем количество мРНК снижается по меньшей мере на 75% по сравнению с количеством до введения модифицированного анисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения, причем количество мРНК снижается по меньшей мере на 80% по сравнению с количеством до введения модифицированного анисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения, причем количество мРНК снижается по меньшей мере на 85% по сравнению с количеством до введения модифицированного анисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения, причем количество мРНК снижается по меньшей мере на 90% по сравнению с количеством до введения модифицированного анисмыслового олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации представлен способ снижения количества мРНК, ДНК, белка HBV и/или антигена HBV у млекопитающего, инфицированного вирусом гепатита В, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, нуждающемуся в этом, для снижения инфекции вируса гепатита В и антигена гепатита В, по сравнению с количеством мРНК, белка HBV и количеством антигена HBV у млекопитающего до лечения, причем количество мРНК снижается по меньшей мере на 95% по сравнению с количеством до введения модифицированного анисмыслового олигонуклеотида. В родственных способах антигеном HBV может быть HBsAg или может быть HBeAg, и более конкретно, количество антигена HBV может быть существенно снижено для сероконверсии, которую определяют как отсутствие HBeAg в сыворотке плюс присутствие HBeAb в сыворотке, в случае мониторинга HBeAg как определителя сероконверсии, или которую определяют как отсутствие HBsAg в сыворотке, в случае мониторинга HBsAg как определителя сероконверсии, по результатам определения доступных в настоящее время пределов обнаружения коммерческих систем иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA).

В некоторых вариантах реализации представлен способ ускорения сероконверсии вируса гепатита В у млекопитающего, инфицированного HBV, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции, описанной выше, млекопитающему, инфицированному гепатитом В; мониторинг присутствия HBeAg плюс HBeAb в образце сыворотки млекопитающего, или мониторинг присутствия HBsAg в образце сыворотки млекопитающего, как отсутствие HBeAg в сыворотке плюс присутствие HBeAb в образце сыворотки, в случае мониторинга HBeAg как определителя сероконверсии, или отсутствие HBsAg в образце сыворотки, в случае мониторинга HBsAg как определителя сероконверсии, по результатам определения доступных в настоящее время пределов обнаружения коммерческих систем иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA), представляет собой показатель сероконверсии у млекопитающего.

В некоторых вариантах реализации представлено применение соединения или композиции, описанной в настоящем документе, для предупреждения, улучшения или лечения заболевания печени или его симптома у млекопитающего. В некоторых вариантах реализации, соединение или композиция содержит модифицированный олигонуклеотид длиной от 10 до 30 связанных нуклеозидов, нацеленный на HBV. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет последовательность нуклеооснований, включающую по меньшей мере 10 смежных нуклеооснований любой из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO:17, 51, 86, 93, 95, 98, 100, 102, 104, 106, 109, 112, 115, 117, 137, 140, 143, 145, 147, 149, 151, 153,155, 157, 159, 161, 167, 168, 176, 177-179, 181, 188, 190-192, 194, 199, 201, 208, 209, 211, 226, 230-237, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 271, 1318-1347, 1364- 1372, 1375, 1376 и 1379.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются эффективными на основании того, что они имеют значение in vitro IC50 менее 250 нМ, менее 200 нМ, менее 150 нМ, менее 100 нМ, менее 90 нМ, менее 80 нМ, менее 70 нМ, менее 65 нМ, менее 60 нМ, менее 55 нМ, менее 50 нМ, менее 49 нМ, менее 47 нМ, менее 46 нМ, при доставке в клетки HepG2.2.1. В некоторых вариантах реализации, ингибирование измеряют при помощи набора затравочных зондов RTS3370, описанного в настоящем документе.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются эффективными на основании того, что они имеют значение in vitro IC50 менее 250 нМ, менее 200 нМ, менее 100 нМ, менее 90 нМ, менее 80 нМ, менее 70 нМ, менее 60 нМ, менее 50 нМ, менее 40 нМ, менее 35 нМ, менее 34 нМ, менее 33 нМ, менее 32 нМ, менее 31 нМ, при доставке в клетки HepG2.2.1. В некоторых вариантах реализации, ингибирование измеряют при помощи набора затравочных зондов RTS3371, описанного в настоящем документе.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются эффективными на основании того, что они имеют значение in vitro IC50 менее 20 мкМ, менее 10 мкМ, менее 9, 5 мкМ, менее 9,0 мкМ, менее 8, 5 мкМ, менее 8,0 мкМ, менее 7, 5 мкМ, менее 7,0 мкМ, менее 6, 5 мкМ, менее 6,0 мкМ, менее 5, 5 мкМ, менее 5,0 мкМ, менее 4, 5 мкМ, менее 4,0 мкМ, менее 3, 5 мкМ мегее 3,0 мкМ, менее 2, 5 мкМ, при доставке в клетки HepG2.2.1, как описано в настоящем документе.

В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются высоко переносимыми, что демонстрируется тем, что они увеличивают по меньшей мере одно из значений ALT или AST не более чем в 4 раза, 3 раза или 2 раза по сравнению с животными, обработанными солевым раствором, или увеличивают вес печени, селезенки или почек не более чем на 30%, 20%, 15%, 12%, 10%, 5% или 2%. В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются высоко переносимыми, что демонстрируется тем, что они не увеличивают ALT или AST по сравнению с животными, обработанными солевым раствором. В некоторых вариантах реализации, соединения или композиции, описанные в настоящем документе, являются высоко переносимыми, что демонстрируется тем, что они не увеличивают вес печени, селезенки или почек по сравнению с животными, обработанными солевым раствором. В некоторых вариантах реализации, эти соединения или композиции содержат ISIS 146779, ISIS 146786, ISIS 505317, ISIS 505329, ISIS 505332, ISIS 505346, ISIS 505347, ISIS 505358, ISIS 509926, ISIS 509927, ISIS 509932, ISIS 509934, ISIS 509960, ISIS 509974, ISIS 510038, ISIS 510039, ISIS 510040, ISIS 510041, ISIS 510050 ISIS 509975, ISIS 510100, ISIS 510106 и ISIS 510116. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или композиции содержат соединения, содержащие последовательность нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:5-310, 321-802 или 804-1272. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или композиции содержат соединения, содержащие последовательность нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:5, 15, 16, 33, 39-95, 123-135, 163-175, 180-310, 321-406, 413-455, 461-802 или 804-1272. В некоторых вариантах реализации, такие соединения или композици содержат последовательность нуклеооснований любой из последовательностей SEQ ID NO:6-14, 17-32, 34-38, 96-122, 136-162, 176-179, 407-412, 456-462, 523-538 (обновленные SEQ ID NO), причем по меньшей мере один нуклеозид модифицированного олигонуклеотида содержит по меньшей мере один 2'-O-метоксиэтиловый сахар. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 14 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-3 или 2 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 16 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 17 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 2-4 или 3-4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 18 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5, 3-5 или 4 нуклеозида с модифицированным сахаром. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет 20 нуклеозидов в длину и имеет сегмент гэп из 10 связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, модифицированный олигонуклеотид имеет сегмент крыла на конце 5' и конце 3' сегмента гэп, каждый независимо имеет 1-5 или 5 нуклеозидов с модифицированным сахаром.

В некоторых вариантах реализации представлено применение соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в производстве лекарственного средства для лечения, улучшения, отсрочки или предупреждения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у животного.

В некоторых вариантах реализации представлено применение соединения или композиции, описанной в настоящем документе, в производстве лекарственного средства для лечения, улучшения, отсрочки или предупреждения заболевания печени у животного.

В некоторых вариантах реализации представлен набор для лечения, предупреждения или улучшения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния, или его симптома, как описано в настоящем документе, причем указанный набор включает: а) соединение или композиции, описанные в настоящем документе; и необязательно b) дополнительное средство или терапию, описанную в настоящем документе. Набор может дополнительно включать инструкции или этикетку по применнию набора для лечения, предупреждения или улучшения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния.

Антисмысловые соединения

Олигомерные соединения включают, но не ограничиваясь этим, олигонуклеотиды, олигонуклеозиды, олигонуклеотидные аналоги, олигонуклеотид-миметики, антисмысловые соединения, антисмысловые олигонуклеотиды и миРНК. Олигомерное соединение может быть «антисмысловым» для целевой нуклеиновой кислоты, что означает, что оно способно подвергаться гибридизации с целевой нуклеиновой кислотой посредством водородного связывания.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение имеет последовательность нуклеооснований, которая, при прочтении в направлении от 5' к 3', содержит обратный комплемент целевого сегмента целевой нуклеиновой кислоты, на который он направлен. В некоторых таких вариантах реализации, антисмысловый олигонуклеотид имеет последовательность нуклеооснований, которая, при прочтении в направлении от 5' к 3', содержит обратный комплемент целевого сегмента целевой нуклеиновой кислоты, на который он направлен.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 10-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 12-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 12-22 субъединицы. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 14-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 14-20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 15-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 15-20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 16-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 16-20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 17-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 17-20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 18-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 18-21 субъединицы. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 18-20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 20-30 субъединиц. Другими словами, такие антисмысловые соединения имеют от 12 до 30 связанных субъединиц, от 14 до 30 связанных субъединиц, от 14 до 20 связанных субъединиц, от 15 до 30 связанных субъединиц, от 15 до 20 связанных субъединиц, от 16 до 30 связанных субъединиц, от 16 до 20 связанных субъединиц, от 17 до 30 связанных субъединиц, от 17 до 20 связанных субъединиц, от 18 до 30 связанных субъединиц, от 18 до 20 связанных субъединиц, от 18 до 21 связанных субъединиц, от 20 до 30 связанных субъединиц или от 12 до 22 связанных субъединиц, соответственно. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 14 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 16 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 17 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 18 субъединиц. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет длину 20 субъединиц. В других вариантах реализации, антисмысловое соединение имеет 8-80, 12-50, 13-30, 13-50, 14-30, 14-50, 15-30, 15-50, 16-30, 16-50, 17-30, 17-50, 18-22, 18-24, 18-30, 18-50, 19-22, 19-30, 19-50 или 20-30 связанных субъединиц. В некоторых таких вариантах реализации, антисмысловые соединения имеют длину 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 или 80 связанных субъединиц, или диапазон, определяемый любыми двумя из представленных выше значений. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение представляет собой антисмысловый олигонуклеотид, а связанные субъединицы являются нуклеотидами.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на нуклеиновую кислоту HBV, могут быть укорочены или усечены. Например, одна субъединица может быть удалена с конца 5' (усечение 5'), или, альтернативно, с конца 3' (усечение 3'). Укороченное или усеченное антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, может иметь две субъединицы, удаленные с конца 5', или, альтернативно, может иметь две субъединицы, удаленные с конца 3' антисмыслового соединения. Альтернативно, удаленные нуклеозиды могут быть рассредоточены в антисмысловом соединении, например, в антисмысловом соединении, имеющем один нуклеозид, удаленный с конца 5', и один нуклеозид, удаленный с конца 3'.

При наличии одной дополнительной субъединицы в удлиненном антисмысловом соединении, эта дополнительная субъединица может быть расположена на конце 5' или 3' антисмыслового соединения. При наличии двух или более дополнительных субъединиц, добавленные субъединицы могут быть соседними относительно друг друга, например, в антисмысловом соединении, имеющем две субъединицы, добавленные в конце 5' (присоединение 5'), или, альтернативно, в конце 3' (присоединение 3') антисмыслового соединения. Альтернативно,добавленные субъединицы могут быть рассредоточены в антисмысловом соединении, например, в антисмысловом соединении, имеющем одну субъединицу, присоединенную к концу 5', и одну субъединицу, присоединенную к концу 3'.

Можно увеличивать или уменьшать длину антисмыслового соединения, такого как антисмысловый олигонуклеотид, и/или внедрять несовпадающие основания без аннулирования активности. Например, в публикации Woolf et al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), были испытаны серии антисмысловых олигонуклеотидов из 13-25 нуклеооснований на их способность вызывать расщепление целевой РНК в модели инъекции ооцита. Антисмысловые олигонуклеотиды длиной 25 нуклеооснований с 8 или 11 не совпадающими основаниями вблизи концов антисмысловых олигонуклеотидов были способны направлять специфическое расщепление целевой мРНК, хотя и в меньшей степени, чем антисмысловые олигонуклеотиды, не содержащие несовпадений. Точно так же, целевое специфическое расщепление было достигнуто с использованием антисмысловых олигонуклеотидов из 13 нуклеооснований, включая олигонуклеотиды с 1 или 3 несовпадениями.

Gautschi et al. (J. Natl. Cancer Inst. 93:463-471, March 2001) продемонстрировали способность олигонуклеотида, имеющего 100% комплементарность с мРНК bcl-2 и имеющего 3 несовпадения с мРНК bcl-xL, снижать экспрессию bcl-2 и bcl-xL in vitro и in vivo. Более того, этот олигонуклеотид показал потенциальную противоопухолевую активность т vivo.

Maher and Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358, 1988) исследовали серию последовательных антисмысловых олигонуклеотидов из 14 нуклеооснований, а также антисмысловые олигонуклеотиды из 28 и 42 нуклеооснований, включающих последовательность из двух или трех последовательных антисмысловых олигонуклеотидов, соответственно, на их способность блокировать трансляцию DHFR человека в анализе ретикулоцитов кроликов. Каждый из трех антисмысловых олигонуклеотидов из 14 нуклеооснований по отдельности был способен ингибировать трансляцию, хотя и на более слабом уровне, чем антисмысловые олигонуклеотиды из 28 или 42 нуклеооснований.

Мотивы антисмысловых соединений

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту HBV, содержали химически модифицированные субъединицы, расположенные в таких последовательностях, или мотивах, чтобы придавать антисмысловым соединениям такие свойства, как усиленная ингибирующая активность, повышенная связывающая аффиность к целевой нуклеиновой кислоте или устойчивость к разрушению под действием нуклеаз in vivo.

Химерные антисмысловые соединения обычно содержат по меньшей мере одну область, модифицированную так, чтобы придавать повышенную устойчивость к нуклеазному расщеплению, повышенное клеточное поглощение, повышенную связывающую аффинность к целевой нуклеиновой кислоте и/или повышенную ингибирующую активность. Вторая область химерного антисмыслового соединения может необязательно служить в качестве субстрата для клеточной эндонкулеазы РНазы Н, которая расщепляет цепь РНК дуплекса РНК: ДНК.

Антисмысловые соединения, имеющие мотив химерного олигонуклеотида, считают химерными антисмысловыми соединениями. В химерном олигонуклеотиде, внутренняя область, содержащая множество нуклеотидов, которые поддерживают расщепление РНазы Н, расположена между внешними областями, содержащими множество нуклеотидов, которые являются химически отличными от нуклеозидов внутренней области. В случае если антисмысловый олигонуклеотид имеет мотив химерного олигонуклеотида, то сегмент гэп обычно служит в качестве субстрата для эндонуклеазного расщепления, тогда как сегменты крыльев включают модифицированные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации, области химерного олигонуклеотида дифференцируются по типу сахарных фрагментов, составляющих кажду отдельную область. Типы сахарных фрагментов, которые используют для дифференциации областей химерного олигонуклеотида, могут, в некоторых вариантах реализации, включать β-D-рибонуклеозиды, β-D-дезоксирибонуклеозиды, 2'-модифицированные нуклеозиды (такие 2'-модифицированные нуклеозиды могут включать 2'-МОЕ и 2'-O-СН3, среди прочих) и модифицированные нуклеозиды с бициклическим сахаром (такие модифицированные нуклеозиды с бициклическим сахаром могут включать нуклеозиды, содержащие затрудненный этил). В некоторых вариантах реализации, нуклеозиды в крыльях могут включать несколько модифицированных сахарных фрагментов, включая, например, 2'-МОЕ и бициклические сахарные фрагменты, такие как затрудненный этил или БНК. В некоторых вариантах реализации, крылья могут включать несколько модифицированных и не модифицированных сахарных фрагментов. В некоторых вариантах реализации, крылья могут включать различные комбинации нуклеозидов 2'-МОЕ, бициклических сахарных фрагментов, таких как затрудненные этилнуклеозиды или БНК-нуклеозиды, и 2'-дезоксинуклеозидов.

Каждая отдельная область может включать одинаковые сахарные фрагменты, вариантные или измененные сахарные фрагменты. Мотив крыло-гэп-крыло зачастую описывают как «X-Y-Z», где «X» представляет собой длину 5'-крыла, «Y» представляет собой длину гэп, и «Z» представляет собой длину 3'-крыла. «X» и «Z» могут содержать одинаковые, вариантные или измененные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации, «X» и «Y» могут включать один или несколько 2'-дезоксинуклеозидов. «Y» может включать 2'-дезоксинуклеозиды. При использовании в настоящем документе, химерный олигонуклеотид, описанный как «X-Y-Z», имеет такую конфигурацию, что гэп расположен сразу возле каждого из 5'-крыла и 3'-крыла. Следовательно, между 5'-крылом и гэп, или между гэп и 3'-крылом нет промежуточных нуклеотидов. Любые антисмысловые соединения, описанные в настоящем документе, могут иметь мотив химерного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации, «X» и «Z» являются одинаковыми; в других вариантах реализации они различные. В некоторых вариантах реализации, «Y» содержит от 8 до 15 нуклеозидов. X, Y или Z могут иметь 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 или более нуклеозидов.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 11-меры, имеющие мотив 1-9-1.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 12-меры, имеющие мотив 1-9-2, 2-9-1 или 1-10-1.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 13-меры, имеющие мотив 1-9-3, 2-9-2, 3-9-1, 1-10-2 или 2-10-1.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 14-меры, имеющие мотив 1-9-4, 2-9-3, 3-9-2, 4-9-1, 1-10-3, 2-10-2 или 3-10-1.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 15-меры, имеющие мотив 1-9-5, 2-9-4, 3-9-3, 4-9-2, 5-9-1, 1-10-4, 2-10-3, 3-10-2 или 4-10-1.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 16-меры, имеющие мотив 4-8-4, 2-9-5, 3-9-4, 4-9-3, 5-9-2, 1-10-5, 2-10-4, 3-10-3, 4-10-2, 3-8-5 или 5-10-1.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 17-меры, имеющие мотив 3-9-5, 3-10-4, 4-9-4, 5-9-3, 2-10-5, 3-10-4, 4-10-3, 5-10-2, 2-9-6, 5-8-4, 5-7-5, 6-7-4 или 6-9-2.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 18-меры, имеющие мотив 4-9-5, 5-9-4, 3-10-5, 4-10-4 или 5-10-3.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 19-меры, имеющие мотив 5-9-5, 4-10-5 или 5-10-4.

В некоторых вариантах реализации, химерные олигонуклеотиды, представленные в настоящем документе, содержат, например, 20-меры, имеющие мотив 5-10-5, 2-10-8, 8-10-2, 3-10-7, 7-10-3, 4-10-6 или 6-10-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение содержит мотив «олигомера крыла», имеющий конфигурацию крыло-гэп или гэп-крыло, то есть конфигурацию X-Y или Y-Z, как описано выше для конфигурации химерного олигонуклеотида. Следовательно, конфигурации олигомера крыла, представленные в настоящем документе, включают, но не ограничиваясь этим, например, 5-10, 8-4, 4-12, 12-4, 3-14, 16-2, 18-1, 10-3, 2-10, 1-10, 8-2, 2-13, 5-13, 5-8 или 6-8.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 2-10-2.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 3-10-3.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 4-10-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 5-10-5.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 3-10-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 2-10-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 2-10-8.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 8-10-2.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 3-10-7.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 7-10-3.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 4-10-6.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 6-10-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 2-9-6.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 6-9-2.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 4-9-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 5-9-3.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 3-9-5.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 5-9-2.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 2-9-5.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 4-9-3.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида 3-9-4.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет гэп-расширенный мотив.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, имеет мотив химерного олигонуклеотида, в котором гэп состоит из 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 связанных нуклеозидов.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту HBV, содержат любой из следующих сахарных мотивов:

k-d(10)-k

e-d(10)-k

k-d(10)-e

k-k-d(10)-k-k

k-k-d(10)-e-e

e-e-d(10)-k-k

k-k-k-d(10)-k-k-k

e-e-e-d(10)-k-k-k

k-k-k-d(10)-e-e-e

k-k-k-d(10)-k-k-k

e-k-k-d(10)-k-k-e

e-e-k-d(10)-k-k-e

e-d-k-d(10)-k-k-e

e-k-d(10)-k-e-k-e

k-d(10)-k-e-k-e-e

e-e-k-d(10)-k-e-k-e

e-d-d-k-d(9)-k-k-e

e-e-e-e-d(9)-k-k-e

e-e-e-e-e-d(10)-e-e-e-e-e

k-d-k-d-k-d(9)-e-e

e-e-k-k-d(9)-e-k-e-e

k-d-k-d-k-d(10)-e-e-e-e-e

k-e-k-d(10)-k-e-k

e-e-e-k-k-d(8)-e-e-e-e

e-e-e-k-k-d(7)-k-k-e-e-e

e-e-e-k-d(9)-k-e-e-e

e-e-e-k-k-d(7)-k-k-e-e-e

e-e-e-e-k-k-d(7)-e-e-e-e

e-k-e-k-d(9)-e-e-e-e

e-k-e-k-d-k-d(7)-e-e-e-e

e-e-e-k-k-d(7)-k-k-e-e-e

k-d-k-d-k-d(8)-e-e-e-e-e

причем k представляет собой затруденный этилнуклеозид, е представляет собой 2'-МОЕ замещенный нуклеозид, и d представляет собой 2'-дезоксинуклеозид.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловый олигонуклеотид имеет сахарный мотив, описанный Формулой А, представленной ниже: (J)m-(B)n-(J)p-(B)r-(A)t-(D)g-(A)v-(B)w-(J)x-(B)y-(J)z

причем:

каждый А независимо представляет собой 2'-замещенный нуклеозид;

каждый В независимо представляет собой бициклический нуклеозид;

каждый J независимо представляет собой 2'-замещенный нуклеозид или 2'-дезоксинуклеозид;

каждый D представляет собой 2'-дезоксинуклеозид;

m равен O-4; n равен O-2; р равен O-2; r равен O-2; t равен O-2; v равен O-2; w равен O-4; х равен O-2; y равен O-2; z равен O-4; g равен 6-14;

при условии, что:

по меньшей мере, один из m, n и r является отличным от 0;

по меньшей мере, один из w и y является отличным от 0;

сумма m, n, р, r и t составляет от 2 до 5; и сумма v, w, х, y и z составляет от 2 до 5.

Целевые нуклеиновые кислоты, целевые области и нуклеотидные последовательности

Нуклеотидная последовательность, кодирующая HBV, включает, без ограничения, следующую: номер доступа GENBANK U95551.1 (в настоящий документ включена как SEQ ID NO:1).

Следует понимать, что последовательность, представленная далее в каждом SEQ ID NO в Примерах, содержащихся в настоящем документе, является не зависимой от любых модификаций сахарного фрагмента, межнуклеозидной связи или нуклеооснования. Поэтому антисмысловые соединения, определенные номером SEQ ID NO, могут включать, независимо, одну или несколько модификаций сахарного фрагмента, межнуклеозидной связи или нуклеооснования. Антисмысловые соединения, описанные этим номером Isis (Isis №), указывают комбинацию последовательности нуклеооснования и мотива.

В некоторых вариантах реализации, целевая область является структурно определенной областью целевой нуклеиновой кислоты. Например, целевая область может охватывать 3' не транслируемую область (UTR), 5' не транслируемую область, экзон, интрон, экзон-интронное сочленение, кодирующую область, область инициации трансляции, область обрыва трансляции или другую определенную область нуклеиновой кислоты. Структурно определенные области для HBV могут быть получены по номеру доступа из базы данных последовательностей, такой как NCBI, и такая информация включена в настоящий документ путем ссылки. В некоторых вариантах реализации, целевая область может охватывать последовательность от 5' целевого сайта любого целевого сегмента в пределах целевой области от 3' целевого сайта другого целевого сегмента в пределах той же целевой области.

Таргетинг включает определение по меньшей мере одного целевого сегмента, с которым гибридизуется антисмысловое соединение с возникновением заданного эффекта. В некоторых вариантах реализации заданный эффект представляет собой снижение уровней целевой нуклеиновой кислоты мРНК. В некоторых вариантах реализации, заданный эффект представляет собой снижение уровней белка, кодирующего целевую нуклеиновую кислоту или фенотипическое изменение, связанное с целевой нуклеиновой кислотой.

Целевая область може содержать один или несколько целевых сегментов. Несколько целевых сегментов в пределах целевой области могут перекрываться. Альтернативно, они могут не перекрываться. В некоторых вариантах реализации, целевые сегменты в пределах целевой области разделены не более чем около 300 нуклеотидами. В некоторых вариантах реализации, целевые сегменты в пределах целевой области разделены количеством нуклеотидов, которое составляет, или примерно равно, или не превышает, или примерно не превышает 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нуклеотидов целевой нуклеиновой кислоты, или находится в диапазоне, определенном любыми из двух предшествующих значений. В некоторых вариантах реализации, целевые сегменты в пределах целевой области разделены не более чем или примерно не более чем 5 нуклеотидами целевой нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации, целевые сегменты являются смежными. Подразумевается целевые области, определенные диапазоном, имеющим исходную нуклеиновую кислоту, то есть любой из 5' целевых сайтов или 3' целевых сайтов, перечисленных в настоящем документе.

Соответствующие целевые сегменты могут находиться в 5' не транслируемой области, кодирующей области, 3' не транслируемой области, интроне, экзоне или экзон-интронном сочленении. Целевые сегменты, содержащие инициирующий кодон или стоп-кодон, также являются пригодными целевыми сегментами. Соответствующий целевой сегмент может специально исключать некоторую структурно определенную область, такую как инициирующий кодон или стоп-кодон.

Определение соответствующих целевых сегментов может включать сравнение последовательности целевой нуклеиновой кислоты с другими последовательностями генома. Например, для определения областей сходства среди различных нуклеиновых кислот может быть использован алгоритм BLAST. Это сравнение может предотвращать выбор последовательностей антисмысловых соединений, которые могут гибридизоваться неспецифическим образом с последовательностями, отличными от выбранной целевой нуклеиновой кислоты (то есть нецелевыми последовательностями).

В пределах активной целевой области может наблюдаться изменение активности (например, по результатам определения процентного снижения уровней целевой нуклеиновой кислоты) антисмысловых соединений. В некоторых вариантах реализации, снижение уровней мРНК HBV является показателем ингибирования экспрессии HBV. Снижение уровней белка HBV также является показателем ингибирования экспрессии целевой мРНК. Кроме того, показателем ингибирования экспрессии HBV являются фенотипические изменения. В некоторых вариантах реализации, показателем ингибирования экспрессии HBV может быть уменьшение усталости, уменьшение симптомов, похожих на грипп, улучшение аппетита, снижение тошноты, уменьшение боли в суставах, уменьшение желтухи, уменьшение боли в животе, снижение слабости, снижение потери веса, уменьшение роста молочной железы у мужчин, уменьшение сыпи на пальцах, уменьшение проблем свертываемости крови, уменьшение цирроза, уменьшение пауковидных кровеносных сосудов на коже, повышение абсорбции витаминов А и D, снижение роста опухоли, снижение объема опухоли, уменьшение головной боли, уменьшение жара, уменьшение диареии, уменьшение боли в области печени организма, уменьшение стула земляного или серого цвета, уменьшение зуда, уменьшение мочи темного цвета и уменьшение тошноты и рвоты. В некоторых вариантах реализации, показателем ингибирования экспрессии HBV может быть улучшение симптомов, обусловленных HBV-связанными состояниями, заболеваниями и расстройствами. В некоторых вариантах реализации, показателем ингибирования экспрессии HBV является уменьшение цирроза. В некоторых вариантах реализации, показателем ингибирования экспрессии HBV является уменьшение маркеров рака печени.

Гибридизация

В некоторых вариантах реализации, гибридизация происходит между антисмысловым соединением, описанным в настоящем документе, и нуклеиновой кислотой HBV. Наиболее общий механизм гибридизации включает водородное связывание (например, Уотсона-Крика, Хугстина или обратное водородное связывание Хугстина) между комплементарными нуклеооснованиями молекул нуклеиновых кислот.

Гибридизация может происходить при различных условиях. Обязательным условием является зависимость от последовательностей, и она определяется природой и составом молекул нуклеиновых кислот, подлежащих гибридизации.

Способы определения того, может ли определенная последовательность специфически гибридизоваться с целевой нуклеиновой кислотой, хорошо известны в данной области техники. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, представленные в настоящем документе, могут специфически гибридизоваться с нуклеиновой кислотой HBV.

Комплементарностъ

Антисмысловое соединение и целевая нуклеиновая кислоты комплементарны друг другу, если достаточное количество нуклеооснований антисмыслового соединения может быть связано водородной связью с соответствующими нуклеооснованиями целевой нуклеиновой кислоты, так что возникает заданный эффект (например, антисмысловое ингибирование целевой нуклеиновой кислоты, такой как нуклеиновая кислота HBV).

Не комплементарные нуклеооснования между антисмысловым соединением и нуклеиновой кислотой HBV могут быть допустимы при условии, что антисмысловое соединение остается способным специфически гибридизоваться с целевой нуклеиновой кислотой. Более того, антисмысловое соединение может гибридизоваться в одном или нескольких сегментах нуклеиновой кислоты HBV, так что промежуточные или соседние сегменты не участвуют в гибридизации (например, петлевая структура, не совпадающая или шпилечная структура).

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, представленное в настоящем документе, или его определенная часть комплементарны или по меньшей мере на 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% комплементарны нуклеиновой кислоте HBV, целевой области, целевому сегменту или определенной их части. Процент комплементарности антисмыслового соединения с целевой нуклеиновой кислотой может быть определен стандартными способами.

Например, антисмысловое соединение, в котором 18 из 20 нуклеооснований указанного антисмыслового соединения комплементарны целевой области и, следовательно, будут специфически гибридизоваться, представляет 90 процентнов комплементарности. В этом примере оставшиеся не комплементарные нуклеооснования могут быть сгруппированы или перемежаться с комплементарными нуклеооснованиями, и не обязательно должны быть смежными друг с другом или с комплементарными нуклеооснованиями. Поэтому антисмысловое соединение длиной 18 нуклеооснований, имеющее четыре не комплементарных нуклеооснования, к которым примыкают две области полной комплементарности с целевой нуклеиновой кислотой, имеет общую комплементарность с целевой нуклеиновой кислотой 77,8%, и, следовательно, входит в рамки настоящего изобретения. Процент комплементарности антисмыслового соединения с областью целевой нуклеиновой кислоты может быть определен обычным способом с использованием программ BLAST (программ для обнаружения сходства последовательностей белков путем их локального выравнивания) и программ Power BLAST, известных в данной области техники (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). Процент гомологичности, идентичности или комплементарности последовательности может быть определен, например, программой Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, версия 8 для Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Мэдисон, штат Висконсин), с использованием настроек по умолчанию, в которых используется алогритм Smith and Waterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489).

В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение, представленное в настоящем документе, или определенная его часть полностью комплементарны (то есть на 100% комплементарны) целевой нуклеиновой кислоте или определенной ее части. Например, антисмысловое соединение может быть полностью комплементерно к нуклеиновой кислоте HBV, или ее целевой области, или целевому сегменту, или целевой последовательности. При использовании в настоящем документе, «полностью комплементарен» обозначает, что каждое нуклеооснование антисмыслового соединения может участвовать в точном спаривании оснований с соответствующими нуклеооснованиями целевой нуклеиновой кислоты. Например, антисмысловое соединение из 20 нуклеооснований полностью комплементарно целевой последовательности длиной 400 нуклеооснований, если существует соответствующая часть из 20 нуклеооснований целевой нуклеиновой кислоты, которая полностью комплементарна указанному антисмысловому соединению. Термин «полностью комплементарен» может быть использован также в отношении определенной части первой и/или второй нуклеиновой кислоты. Например, часть из 20 нуклеооснований антисмыслового соединения, состоящего из 30 нуклеооснований, может быть «полностью комплементарна» целевой последовательности длиной 400 нуклеооснований. Часть из 20 нулеооснований олигонуклеотида, состоящего из 30 нуклеооснований, полностью комплементерна целевой последовательности, если целевая последовательность имеет соответствующую часть из 20 нуклеооснований, в которой каждое нуклеооснование комплементарно части из 20 нуклеооснований указанного антисмыслового соединения. В то же время целое антисмысловое соединение из 30 нуклеооснований может быть или может не быть полностью комплементарным к целевой последовательности, в зависимости от того, являются ли оставшиеся 10 нуклеооснований антисмыслового соединения также комплементарными целевой последовательности.

Не комплементарное нуклеооснование может быть расположено у конца 5' или конца 3' антисмыслового соединения Альтернативно, не комплементарное нуклеооснование или нуклеооснования могут быть во внутреннем положении антисмыслового соединения. В случае наличия двух или более не комплементарных нуклеооснований, они могут быть смежными (то есть связанными) или не смежными. В одном варианте реализации, не комплементарное нуклеооснование расположено в сегменте крыла химерного антисмыслового олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, которые имеют длину или которые содержат до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеооснований, содержат не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 не комплементарного нуклеооснования(ий) относительно целевой нуклеиновой кислоты, такой как нуклеиновая кислота HBV, или ее определенная часть.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, которые имеют длину или которые содержат до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеооснований, содержат не более 6, не более 5, не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 не комплементарного нуклеооснования(ий) относительно целевой нуклеиновой кислоты, такой как нуклеиновая кислота HBV, или ее определенная часть.

Представленные антисмысловые соединения включают также те, которые комплементарны части целевой нуклеиновой кислоты. При использовании в настоящем документе, «часть» относится к определенному количеству смежных (то есть связанных) нуклеооснований в пределах области или сегмента целевой нуклеиновой кислоты. «Часть» может также относиться к определенному количеству смежных нуклеооснований антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 8 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 9 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 10 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 11 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 12 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 13 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 14 нуклеооснований. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 15 нуклеооснований. Также подразумеваются антисмысловые соединения, которые комплементарны части целевого сегмента по меньшей мере из 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеооснований, или в диапазоне между любыми из двух этих значений.

Идентичность

Антисмыловые соединения, представленные в настоящем документе, также могут иметь определенный процент идентичности с определенной нуклеотидной последовательностью, SEQ ID NO или соединением, представленным номером Isis, или их частью. При использовании в настоящем документе, антисмысловое соединение является идентичным к последовательности, описанной в настоящем документе, если оно имеет такую же способность к спариванию нуклеооснований. Например, РНК, которая содержит урацил вместо тимидина в описанной последовательности ДНК, считается идентичной к этой последовательности ДНК, поскольку и урацил, и тимидин спариваются с аденином. Подразумеваются также укороченные и удлиненные версии антисмысловых соединений, описанных в настоящем документе, а также соединения, имеющие не идентичные основания по сравнению с антисмысловыми соединениями, представленными в настоящем документе. Не идентичные основания могут быть соседними друг к другу или рассредоточены в антисмысловом соединении. Процент идентичности антисмыслового соединения рассчитывают по количеству оснований, имеющих идентичное спаривание оснований, по сравнению с последовательностью, с которой его сравнивают.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения или их части являются по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичными к одному или нескольким антисмысловым соединениями или последовательностям SEQ ID NO, или их частям, описанным в настоящем документе.

В некоторых вариантах реализации, часть антисмыслового соединения сравнивают с частью целевой нуклеиновой кислоты такой же длины. В некоторых вариантах реализации сравнивают часть из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеооснований с равной по длине частью целевой нуклеиновой кислоты.

В некоторых вариантах реализации, часть антисмыслового олигонуклеотида сравнивают с частью целевой нуклеиновой кислоты такой же длины. В некоторых вариантах реализации сравнивают часть из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеооснований с равной по длине частью целевой нуклеиновой кислоты.

Модификации

Нуклеозид представляет собой комбинацию основания и сахара. Часть нуклеооснования (известная также как основание) нуклеозида, как правило, представляет собой фрагмент гетероциклического основания. Нуклеотиды представляют собой нуклеозиды, которые дополнительно включают фосфатную группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида. Для тех нуклеозидов, которые включают пентафуранозный сахар, фосфатная группа может быть связана с 2', 3' или 5' гидроксильным фрагментом сахара. Олигонуклеотиды образуются посредством ковалентного связывания соседних нуклеозидов друг с другом с образованием линейного полимерного олигонуклеотида. В пределах олигонуклеотидной структуры, фосфатные группы обычно упоминают как образующие межнуклеозидные связи олигонуклеотида.

Модификации антисмысловых соединений включают замещения или изменения межнуклеозидных связей, сахарных фрагментов или нуклеооснований. Модифицированные антисмысловые соединения зачастую являются предпочтительными по сравнению с нативными формами за счет желательных свойств, таких как, например, усиленное клеточное поглощение, усиленная аффинность к целевой нуклеиновой кислоте, увеличенная устойчивость в присутствии нуклеаз или увеличенная ингибирующая активность.

Химически модифицированные нуклеозиды также могут быть использованы для увеличения связывающей аффинности укороченного или усеченного антисмыслового соединения к его целевой нуклеиновой кислоте. Следовательно, зачастую могут быть получены сравнимые результаты с укороченными антисмысловыми соединениями, которые имеют такие химически модифицированные нуклеозиды.

Модифицированные межнуклеозидные связи

Природная межнуклеозидная связь РНК и ДНК представляет собой фосфодиэфирную связь 3' с 5'. Антисмысловые соединения, имеющие одну или несколько модифицированных, то есть неприродных, межнуклеозидных связей, зачастую выбирают вместо антисмысловых соединений, имеющих природные межнуклеозидные связи из-за желательных свойств, таких как, например, усиленное клеточное полощение, усиленная аффиность к целевым нуклеиновым кислотам и увеличенная устойчивость в присутствии нуклеаз.

Олигонуклеотиды, имеющие модифицированные межнуклеозидные связи, включают межнуклеозидные связи, которые сохраняют атом фосфора, а также межнуклеозидные связи, которые не имеют атома фосфора. Иллюстративные межнуклеозидные связи, содержащие фосфор, включают, но не ограничиваясь этим, фосфодиэфиры, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, фосфорамидаты и фосфотиоаты. Хорошо известны способы получения фосфоросодержащих и не фосфоросодержащих связей.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, направленные на нуклеиновую кислоту HBV, содержат одну или несколько модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации, модифицированные межнуклеозидные связи представляют собой фосфотиоатные связи. В некоторых вариантах реализации, каждая межнуклеозидная связь антисмыслового соединения представляет собой фосфотиоатную межнуклеозидную связь.

Модифицированные сахарные фрагменты

Антисмысловые соединения, представленные в настоящем документе, могут необязательно содержать один или несколько нуклеозидов, в которых модифицирована сахарная группа. Такие нуклеозиды с модифицированным сахаром могут придавать улучшенную устойчивость к действию нуклеаз, увеличенную связывающую аффинность или какое-либо другое преимущественное биологическое свойство антисмысловым соединениям. В некоторых вариантах реализации, нуклеозиды включают химически модифицированный рибофуранозный кольцевой фрагмент.Примеры химически модифицированных рибофуранозных колец включают, без ограничения, добавление групп заместителей (включая 5' и 2' группы заместителей); связывание мостиком не геминальных кольцевых атомов с образованием бициклических нуклеиновых кислот (БцНК); замену рибозильного кольцевого кислородного атома на S, N(R) или C(R1)(R)2 (R=Н, С112 алкил или защитная группа); и их комбинации. Примеры химически модифицированных сахаров включают 2'-F-5'-метил-замещенный нуклеозид (смотри Международную заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 8/21/08, где описаны другие 5', 2'-бис-замещенные нуклеозиды), замену рибозильного кольцевого кислородного атома на S с дополнительным замещением в 2'-положении (смотри опубликованную заявку на патент США US2005/0130923, опубликованную 16 июня 2005 года), или, альтернативно, 5'-замещение БцНК (смотри Международную заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 11/22/07, в которой БНК замещена, например, 5'-метиловой или 5'-виниловой группой).

Примеры нуклеозидов, имеющих модифицированные сахарные фрагменты включают, без ограничения, нуклеозиды, включающие 5'-винил, 5'-метил (R или S), 4'-S, 2'-F, 2'-ОСН3 и 2'-O(СН2)2OCH3 группы заместителей. Заместитель в 2' положении также может быть выбран из аллила, амино, азидо, тио, O-аллила, O-C110 алкила, OCF3, O(СН2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) и O-CH2-C(=0)-N(Rm)(Rn), причем каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный C110 алкил.

При использовании в настоящем документе, «бициклические нуклеозиды» относятся к модифицированным нуклеозидам, содержащим бициклический сахарный фрагмент. Примеры бициклических нуклеозидов включают, без ограничения, нуклеозиды, содержащие мостик между 4' и 2' рибозильными кольцевыми атомами. В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения, представленные в настоящем документе, содержат один или несколько бициклических нуклеозидов, причем мостик содержит бициклический нуклеозид 4'-2'. Примеры таких бициклических нуклеозидов 4'-2' включают, но не ограничиваясь этим, нуклеозиды формул: 4'-(CH2)-O-2' (БНК); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(CH2)2-O-2' (ENA); 4'-СН(СН3)-O-2' (cEt) и 4'-СН(СН20СНз)-O-2', и их аналоги (смотри патент США 7399845, опубликованный 15 июля 2008 года; 4'-С(СН3)(СН3)-O-2', и его аналоги (смотри опубликованную Международную заявку РСТ W02009/006478, опубликованную 8 января 2009 года); 4'-СН2-N(ОСН3)-2', и его аналоги (смотри опубликованную Международную заявку РСТ WO 2008/150729, опубликованную 11 декабря 2008 года); 4'-СН2-O-N(СН3)-2' (смотри опубликованную заявку на патент США US 2004/0171570, опубликованную 2 сентября 2004 года); 4'-CH2-N(R)-O-2', причем R представляет собой Н, С112 алкил или защитную группу (смотри патент США 7427672, опубликованный 23 сентября 2008 года); 4'-СН2-С(Н)(СН3)-2' (смотри публикацию Chattopadhyaya, et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); и 4'-СН2-С(=СН2)-2', и его аналоги (смотри опубликованную Международную заявку РСТ WO 2008/154401, опубликованную 8 декабря 2008 года). Также смотри, например: Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc., 129(26) 8362-8379 (Jul. 4, 2007); Elayadi et al., Curr. Opinion Invens. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США №№ U.S. 6670461, 7053207, 6268490, 6770748, 6794499, 7034133, 6525191, 7399845; опубликованный Международные заявки РСТ WO 2004/106356, WO 94/14226, WO 2005/021570 и WO 2007/134181; публикации патентов США №№US 2004/0171570, US 2007/0287831 и US 2008/0039618; и патенты США серийных №№12/129154, 60/989574, 61/026995, 61/026998, 61/056564, 61/086231, 61/097787 и 61/099844; а также Международный заявки РСТ №№PCT/US2008/064591, PCT/US2008/066154 и PCT/US2008/068922. Каждый из представленных выше бициклических нуклеозидов может быть получен с одним или несколькими стереохимическими конфигурациями сахара, включая, например, α-L-рибофуранозу и β-D-рибофуранозу (смотри Международную заявку РСТ PCT/DK98/00393, опубликованную 25 марта 1999 года как WO 99/14226).

В некоторых вариантах реализации, бициклические сахарные фрагменты БцНК нуклеозидов включают, но не ограничиваясь этим, соединения, имеющие по меньшей мере один мостик между положением 4' и 2' пентафуранозного сахарного фрагмента, причем такие мостики независимо содержат 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[С(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- и -N(Ra)-;

причем:

x равен 0, 1 или 2;

n равен 1, 2, 3 или 4;

каждый Ra и Rb независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, C2-C12 алкил, замещенный C112 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный C112 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, С520 арил, замещенный С520 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, C5-C7 алициклический радикал, замещенный C5-C7 алициклический радикал, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)2-J1) или сульфоксил (S(=O)2-J1); и

каждый J1 и J2 независимо представляет собой, Н, С112 алкил, замещенный C212 алкил, С2-C12 алкенил, замещенный С212 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, C5-C20 арил, замещенный С520 арил, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C112 аминоалкил, замещенный C1-C12 аминоалкил или защитную группу.

В некоторых вариантах реализации, мостик бициклического сахарного фрагмента представляет собой -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- или -C(RaRb)-O-N(R)-. В некоторых вариантах реализации, мостик представляет собой 4'-СН2-2', 4'-(СН2)2-2', 4'-(СН2)3-2', 4'-СН2-O-2', 4'-(СН2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' и 4'-CH2-N(R)-O-2'-, причем каждый R независимо представляет собой Н, защитную группу или C1-C12 алкил.

В некоторых вариантах реализации, бициклические нуклеозиды дополнительно определены по изомерной конфигурации. Например, нуклеозид, содержащий 4'-2' метиленокси-мостик, может быть в α-L конфигурации или β-D конфигурации. Ранее в антисмысловые олигонуклеотиды, демонстрирующие антисмысловую активность, были внедрены a-L-метиленокси (4'-СН2-O-2') БцНК (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).

В некоторых вариантах реализации, бициклические нуклеозиды включают, но не ограничиваясь этим, (А) α-L-метиленокси (4'-СН2-O-2') БцНК, (В) β-D-метиленокси (4'-СН2-O-2') БцНК, (С) этиленокси (4'-(СН2)2-O-2') БцНК, (D) аминоокси (4'-CH2-O-N(R)-2') БцНК, (Е) оксиамино (4'-CH2-N(R)-O-2') БцНК, (F) метил(метиленокси) (4'-СН(СН3)-O-2') БцНК, (G) метилен-тио (4'-СН2-S-2') БцНК, (Н) метилен-амино (4'-CH2-N(R)-2') БцНК, (I) метил-карбоциклические (4'-СН2-СН(СН3)-2') БцНК и (J) пропилен-карбоциклические (4'-(СН2)3-2') БцНК, изображенные ниже.

причем Вх представляет собой фрагмент основания, a R независимо представляет собой Н, защитную группу или C1-C12 алкил.

В некоторых вариантах реализации, бициклический нуклеозид имеет Формулу I:

причем:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

-Qa-Qb-Qc- представляет собой -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -СН2-N(Rc)-O- или -N(Rc)-O-CH2;

Rc представляет собой C1-C12 алкил или амино-защитную группу; и

Та и Tb, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, сопряженную группу, химически активную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное связывание со стабилизирующей средой.

В некоторых вариантах реализации, бициклический нуклеозид имеет Формулу II:

причем:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

Та и Tb, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, сопряженную группу, химически активную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;

Za представляет собой C16 алкил, С26 алкенил, C26 алкинил, замещенный C16 алкил, замещенный С36 алкенил, замещенный С26 алкинил, ацил, замещенный ацил, замещенный амид, тиол или замещенный тио.

В одном варианте реализации, каждая из замещенных групп независимо представляет собой моно- или полизамещенную группу с группами заместителей, независимо выбранными из галогена, оксо, гидроксила, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc и NJcC(=X)NJcJd, причем каждый Jc, Jd и Jc независимо представляют собой Н, C16 алкил ил изамещенный C16 алкил, и Х представляет собой О или NJc.

В некоторых вариантах реализации, бициклический нуклеозид имеет Формулу III:

причем:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

Та и Tb, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, сопряженную группу, химически активную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;

Zb представляет собой C16 алкил, С26 алкенил, С26 алкинил, замещенный C16 алкил, 5 замещенный C16 алкенил, замещенный С26 алкинил или замещенный ацил (С(=O)-). В некоторых вариантах реализации, бициклический нуклеозид имеет Формулу IV:

причем:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

Ta и Tb, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, сопряженную группу, химически активную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;

Rd представляет собой C16 алкил, замещенный C16 алкил, С26 алкенил, замещенный C16 алкенил, С26 алкинил или замещенный С26 алкинил;

каждый qa, qb, qc и qd независимо представляет собой Н, галоген, C16 алкил, замещенный С16 алкил, С26 алкенил, замещенный С26 алкенил, С26 алкинил или замещенный С26 алкинил, C16 алкоксил, замещенный C16 алкоксил, ацил, замещенный ацил, C16 аминоалкил или замещенный C16 аминоалкил;

В некоторых вариантах реализации, бициклический нуклеозид имеет Формулу V:

причем:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

Та и Tb, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, сопряженную группу, химически активную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;

qa, qb, qe и qf, каждый независимо, представляют собой водород, галоген, С112 алкил, замещенный C112 алкил, С212 алкенил, замещенный C2-C12 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, C1-C12 алкокси, замещенный C1-C12 алкокси, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk или N(H)C(=S)NJjJk;

или qe и qf вместе представляют собой =C(qg)(qh);

qg и qh, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, C112 алкил или замещенный C1-C12 алкил.

Были описаны синтез и получение метиленокси (4'-СН2-O-2') БцНК мономеров аденина, цитозина, гуанина, 5-метил-цитозина, тимина и урацила, а также их олигомеризация и свойства распознавания нуклеиновых кислот (смотри, например, Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). БцНК и их получение описаны также в WO 98/39352 и WO 99/14226.

Также были получены аналоги метиленокси (4'-СН2-O-2') БцНК, метиленокси (4'-СН2-O-2') БцНК и 2'-тио-БцНК (смотри, например, Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). Было описано также получение блокированных нуклеозидных аналогов, включающих олигодезоксирибонуклеотидные дуплексы в качестве субстратов для полимераз нуклеиновых кислот (смотри, например, Wengel et al., WO 99/14226). Кроме того, в данной области техники описан синтез 2'-амино-БцНК, нового конформационно ограниченного олигонуклеотидного аналога с высокой аффинностью (смотри, например, Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Кроме того, ранее были описаны 2'-амино- и 2'-метиламино-БцНк, а также термическая устойчивость их дуплексов с комплементарными цепями РНК и ДНК.

В некоторых вариантах реализации, бициклический нуклеозид имеет Формулу VI:

причем:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

Та и Tb, каждый независимо, представляют собой Н, гидрокси-защитную группу, сопряженную группу, химически активную фосфорную группу, фосфорный фрагмент или ковалентное присоединение к среде подложки;

каждый qi, qj, qk и qj независимо, представляет собой Н, галоген, C1-C12 алкил, замещенный C1-C12 алкил, С212 алкенил, замещенный С212 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, C1-C12 алкоксил, замещенный C1-C12 алкоксил, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=0)NJjJk или N(Н)С(=S)NJjJk; и

qi и qj иди qi и qk вместе представляют собой =C(qg)(qh), причем qg и qh, каждый независимо, представляют собой Н, галоген, C1-C12 алкил или замещенный C1-C12 алкил.

Описан один карбоциклический бициклический нуклеозид, имеющий мостик 4'-(СН2)3-2', и алкениловый аналог, мостик 4'-СН=СН-СН2-2' (смотри, например, Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 и Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). Также был описан синтез и получение карбоциклических бициклических нуклеозидов, их олигомеризация и биохимические исследования (смотри, например, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).

При использовании в настоящем документе, «бициклический нуклеозид» относится к нуклеозиду, содержащему мостиковое соединение двух атомов углерода сахарного кольца, с образованием посредством этого бициклического сахарного фрагмента. В некоторых вариантах реализации, мостик соединяет 2' углерод и другой углерод сахарного кольца.

При использовании в настоящем документе, «4'-2' бициклический нуклеозид» или «4'-2' бициклический нуклеозид» относится к бициклическому нуклеозиду, содержащему фуранозное кольцо, содержащее мостиковое соединение 2' углеродного атома и 4' углеродного атома.

При использовании в настоящем документе, «моноциклические нуклеозиды» относятся к нуклеозидам, содержащим модифицированные сахарные фрагменты, которые не являются бициклическими сахарными фрагментами. В некоторых вариантах реализации, сахарный фрагмент или аналог сахарного фрагмента нуклеозида может быть модифицированным или замещенным в любом положении.

При использовании в настоящем документе, «2'-модифицированный сахар» обозначает фуранозный сахар, модифицированный в 2'-положении. В некоторых вариантах реализации, такие модификации включают заместители, выбранные из: галогенида, включая, но не ограничиваясь этим, замещенный и незамещенный алкокси, замещенный и незамещенный тиоалкил, замещенный и незамещенный аминоалкил, замещенный и незамещенный алкил, замещенный и незамещенный аллил, и замещенный и незамещенный алкинил. В некоторых вариантах реализации, 2'-модификации выбраны из заместителей, включающих, но не ограничиваясь этим: O[(СН2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(СН2)nCH3, O(CH2)nONH2, ОСН2С(=O)n(Н)СН3 и O(СН2)nO|N[(СН2)nCH3]2, причем пит равны от 1 до около 10. Другие группы 2'-заместителей также могут быть выбраны из: C1-C12 алкила; замещенного алкила; алкенила; алкинила; алкарила; аралкила; O-алкарила или O-аралкила; SH; SCH3; OCN; Cl; Br; CN; CF3; OCF3; SOCH3; SO2CH3; ONO2; NO2; N3; NH2; гетероциклоалкила; гетероциклоалкарила; аминоалкиламино; полиалкиламино; замещенного силила; РНК-расщепляющей группы; репортерной группы; интеркалятора; групп для улучшения фармакокинетических свойств; и групп для улучшения фармакодинамических свойств антисмыслового соединения, а также других заместителей, имеющих аналогичные свойства. В некоторых вариантах реализации, модифицированные нуклеозиды включают боковую цепь 2'-МОЕ (смотри, например. Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Такое 2'-МОЕ замещение может быть описано как обладающее улучшенной связывающей аффинностью по сравнению с не модифицированными нуклеозидами и с другими модифицированными нуклеозидами, такими как 2'-O-метил, O-пропил и O-аминопропил. Было также показано, что олигонуклеотиды, имеющие заместитель 2'-МОЕ, являются антисмысловыми ингибиторами генной экспрессии с многообещающими характеристиками для применения in vivo (смотри, например, Martin, P., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; и Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).

При использовании в настоящем документе, «модифицированный тетрагидропирановый нуклеозид» или «модифицированный ТГП нуклеозид» обозначает нуклеозид, имеющий шестичленный тетрагидропирановый «сахар», замещающий пентафуранозный остаток в нормальных нуклеозидах (заменитель сахара). Модифицированные ТГП нуклеозиды включают, но не ограничиваясь этим, так называемые гекситоловые нуклеиновые кислоты (ГНК), анитоловые нуклеиновые кислоты (АНК), маннитоловые нуклеиновые кислоты (МНК) (смотри Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10:841-854), фтор-ГНК (F-ГНК) или соединения, имеющие Формулу X:

Формула X:

причем независимо для каждого из упомянутого по меньшей мере одного тетрагидропиранового нуклеозидного аналога Формулы X:

Вх представляет собой фрагмент гетероциклического основания;

Т3 и Т4, каждый независимо, межнуклеозидная связывающая группа, связывающая тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением или одним из Т3 и Т4, представляет собой межнуклеозидную связывающую группу, связывающую тетрагидропирановый нуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, а другой из Т3 и Т4 представляет собой Н, гидрокси-защитную группу, связанную сопряженную группу или 5' или 3'-концевую группу;

q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7, каждый независимо, представляет собой, Н, C16 алкил, замещенный C16 алкил, С26 алкенил, замещенный С26 алкенил, С26 алкинил или замещенный С26 алкинил; и

один из R1 и R2 представляет собой водород, а другой выбран из галогена, замещенного или незамещенного алкокси, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, ОС(=Х)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 и CN, причем X представляет собой О, S или NJ1, и каждый J1, J2 и J3 независимо представляет собой Н или C16 алкил.

В некоторых вариантах реализации, представлены модифицированные ТГП нуклеозиды Формулы X, в которых каждый qm, qn, qp, qr, qs, qt и qu представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере один из qm, qn, qp, qr, qs, qt и qu является отличным от Н. В некоторых вариантах реализации, по меньшей мере один из qm, qn, qp, qr, qs, qt и qu представляет собой метил. В некоторых вариантах реализации представлены ТГП нуклеозиды Формулы X, в которых один из R1 и R2 представляет собой F. В некоторых вариантах реализации R1 представляет собой фтор, a R2 представляет собой Н, R1 представляет собой метокси, а R2 представляет собой Н, и R1 представляет собой метоксиэтокси, а R2 представляет собой Н.

При использовании в настоящем документе, «2'-модифицированный нуклеозид» или «2'-замещенный нуклеозид» относится к нуклеозиду, включающему сахар, содержащий заместитель в 2'-положении фуранозного кольца, отличный от Н или ОН. 2'-модифицированные нуклеозиды включают, но не ограничиваясь этим, бициклические нуклеозиды, в которых мостик, соединяющий два углеродных атома сахароного кольца, соединяет 2' углерода и другой углерод сахарного кольца, а также нуклеозиды с немостиковыми 2' заместителями, такими как аллил, амино, азидо, тио, O-аллил, O-C1-C10 алкил, -OCF3, O-(СН2)2-O-СН3, 2'-O(СН2)2SCH3, O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn) или O-СН2-С(=O)-N(Rm)(Rn), причем каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный C110 алкил. 2'-модифицированные нуклеозиды могут дополнительно содержать другие модификации, например, в других положениях сахара и/или в нуклеоосновании.

При использовании в настоящем документе, «2'-F» относится к сахару, содержащему фтор-группу в 2'-положении.

При использовании в настоящем документе, «2'-ОМе» или «2'-ОСН3», или «2'-O-метил», каждый относится к нуклеозиду, включающему сахар, содержащий группу -ОСН3 в 2'-положении сахарного кольца.

При использовании в настоящем документе, «олигонуклеотид» относится к соединению, содержащему множество связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации, один или несколько из множества нуклеозидов являются модифицированными. В некоторых вариантах реализации, олигонуклеотид содержит один или несколько рибонуклеозидов (РНК) и/или дезоксирибонуклеозидов (ДНК).

В данной области техники известны многие другие бициклические и трициклические кольцевые системы, заменяющие сахар, которые могут быть использованы для модификации нуклеозидов для внедрения в антисмысловые соединения (смотри, например, обзорную статью: Leumann, J.С, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854). Такие кольцевые системы могут подвергаться различным дополнительным замещениям для усиления активности.

Специалистам в данной области хорошо известны способы получения модифицированных сахаров.

В нуклеотидах, имеющих модифицированные сахарные фрагменты, фрагменты нуклеооснования (природные, модифицированные или их комбинации) сохраняются для гибридизации с соответствующей мишенью нуклеиновой кислоты.

В некоторых вариантах реализации, антисмысловые соединения содержат один или несколько нуклеотидов, имеющих модифицированные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ. В некоторых вариантах реализации, 2'-МОЕ модифицированные нуклеотиды расположены в мотиве химерного олигонуклеотида. В некоторых вариантах реализации, модифицированный сахарный фрагмент представляет собой cEt. В некоторых вариантах реализации cEt модифицированные нуклеотиды расположены в крыльях мотива химерного олигонуклеотида.

Композиции и способы составления фармацевтических композиций

Антисмысловые олигонуклеотиды могут быть смешаны с фармацевтически приемлемыми активными или инертными веществами для получения фармацевтических композиций или рецептур. Композиции и способы составления фармацевтических композиций зависят от ряда критериев, включая, но не ограничиваясь этим, способ введения, степень заболевания или дозу, подлежащую введению.

Антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, может быть использовано в фармацевтических композициях путем смешивания указанного антисмыслового соединения с соответствующим фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем. Фармацевтически приемлемый разбавитель включает фосфатно-солевой буферный раствор (PBS). PBS представляет собой разбавитель, пригодный для применения в композициях, доставляемых парентерально. Соответственно, в одном варианте реализации, используемом в способах, описанных в настоящем документе, представлена фармацевтическая композиция, включающая антисмысловое соединение, направленное на нуклеиновую кислоту HBV, и фармацевтически приемлемый разбавитель. В некоторых вариантах реализации, фармацевтически приемлемый разбавитель представляет собой PBS. В некоторых вариантах реализации, антисмысловое соединение представляет собой антисмысловый олигонуклеотид.

Фармацевтические композиции, включающие антисмысловые соединения, охватывают любые фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры или соли таких сложных эфиров, или любые другие олигонуклеотиды, которые, при введении животному, включая человека, могут обеспечивать (прямо или косвенно) биологически активный метаболит или его остаток. Соответственно, например, настоящее описание относится также к фармацевтически приемлемым солям антисмысловых соединений, пролекарствам, фармацевтически приемлемым солям таких пролекарств и другим биоэквивалентам. Применимые фармацевтически приемлемые соли включают, но не ограничиваясь этим, соли натрия и калия.

Пролекарство может включать внедрение дополнительных нуклеозидов с одного или с обоих концов антисмыслового соединения, которые расщепляются под действием эндогенных нуклеаз в организме, с образованием активного антисмыслового соединения.

Сопряженные антисмысловые соединения

Антисмысловые соединения могут быть ковалентно связаны с одним или несколькими фрагментами или конъюгатами, которые усиливают активность, клеточное распределение или клеточное поглощение образующихся антисмысловых олигонуклеотидов. Типичные сопряженные группы включают холестериновые фрагменты и жировые фрагменты. Дополнительные сопряженные группы включают углеводы, фосфолипиды, биотин, феназин, фолат, фенантридин, антрахинон, акридин, флуоресцеины, родамины, кумарины и красители.

Антисмысловые соединения могут быть также модифицированы для получения одной или нескольких стабилизирующих групп, которые обычно присоединяются к одному или к обоим концам антисмысловых соединений для усиления свойств, таких как, например, устойчивость к действию нуклеаз. В стабилизирующие группы включены кэп-структуры. Эти концевые модификации защищают антисмысловое соединение, имеющее концевую нуклеиновую кислоту, от экзонуклеазного расщепления, и могут способствовать доставке и/или локализации в клетке. Кэп может присутствовать на 5'-конце (5'-кэп) или на 3'-конце (3'-кэп), или может присутствовать на обоих концах. Кэп-структуры хорошо известны в данной области и включают, например, инвертированные дезокси-кэпы с удаленными азотистыми основаниями. Дополнительные 3' и 5'-стабилизирующие группы, которые могут быть использованы для закрывания одного или обоих концов антисмыслового соединения, чтобы обеспечить устойчивость к действию нуклеаз, включают группы, описанные в WO 03/004602, опубликованной 16 января 2003 года.

Клеточная культура и обработка антисмысловыми соединениями

Влияние антисмысловых соединений на уровень, активность или экспрессию нуклеиновых кислот HBV может быть испытана in vitro в различных типах клеток. Клеточные, используемые для таких анализов, доступны в продаже у коммерческих поставщиков (например, American Type Culture Collection, Manassus, штат Вирджиния; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, штат Северная Калифорния; Clonetics Corporation, Walkersville, штат Мэриленд), и их выращивают в соответствии с инструкциями поставщика с использованием имеющихся в продаже реактивов (например, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, штат Калифорния). Иллюстративные клеточные типы включают, но не ограничиваясь этим, клетки HuVEC, клетки b.END, клетки HepG2, клетки Нер3В и первичные гепатоциты.

In vitro испытание антисмысловых олигонуклеотидов

В настоящем документе описаны способы обработки клеток антисмысловыми олигонуклеотидами, которые могут быть модифицированы соответствующим образом для обаботки другими антисмысловыми соединениями.

Клетки могут быть обработаны антисмысловыми олигонуклеотидами, когда клетки достигают примерно 60-80% слияния в культуре.

Один реагент, которые обычно используют для введения антисмысловых олигонуклеотидов в выращенные клетки, включает катионный липидный реагент трансфекции LIPOFECTIN (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния). Антисмысловые олигонуклеотиды могут быть смешаны с LIPOFECTIN в среде OPTI-MEM 1 (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния) для достижения заданной конечной концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации LIPOFECTIN, которая может находиться в диапазоне от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.

Другой реагент, используемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в выращенные клетки, включает LIPOFECTAMINE (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния). Антисмысловый олигонуклеотид может быть смешан с LIPOFECTAMINE в среде OPTI-MEM 1 с пониженным содержанием сыворотки (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния) для достижения заданной концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации LIPOFECTAMINE, которая может находиться в диапазоне от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.

Другие методики, используемые для введения антисмысловых олигонуклеотидов в выращенные клетки, включают электропорацию.

Клетки обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами стандартами способами. Клетки могут быть собраны через 16-24 часа после обработки антисмысловым олигонуклеотидов, и в это время измеряют уровни РНК или белка целевых нуклеиновых кислот по способам, известным в данной области техники и описанным в настоящем документе. Как правило, при выполнении обработки в нескольких экземплярах, данные представляют как среднее значение повторных обработок.

Используемая концентрация антисмыслового олигонуклеотида варьируется от одной клеточной линии к другой. Способы определения оптимальной концентрации антисмыслового олигонуклеотида для конкретной клеточной линии хорошо известны в данной области. Антисмысловые олигонуклеотиды, как правило, используют в концентрациях от 1 нМ до 300 нМ, при трансфекции с LIPOFECTAMINE. Антисмысловые олигонуклеотиды использую в более высоких концентрациях, от 625 до 20000 нМ, при трансфекции при помощи электропорации.

Выделение РНК

Анализ РНК может быть выполнен на общей клеточной РНК или поли(А)+мРНК. В данной области техники известны способы выделения РНК. РНК готовят с использованием способов, хорошо известных в данной области, например, используя реагент TRIZOL (Invitrogen, Карлсбад, штат Калифорния) по методикам, рекомендованным производителем.

Анализ ингибированш уровней или экспрессии мишени

Ингибирование уровней или экспрессии нуклеиновой кислоты HBV может быть анализировано различными способами, известными в данной области. Нарпимер, уровни целевой нуклеиновой кислоты могут быть количественно определены, например, нозерн-блоттингом, сравнительной полимеразной цепной реакцией (ПЦР) или количественной ПЦР в реальном времени. Анализ РНК может быть выполнен на общей клеточной РНК или поли(А)+мРНК. Способы выделения РНК хорошо известны в данной области. Анализ нозерн-блоттинга также является стандартным в данной области. Количественная ПЦР в реальном времени может быть легко осуществлена с использованием имеющейся в продаже системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7600, 7700 или 7900 производства PE-Applied Biosystems, Фостер-сити, штат Калифорния, которую используют в соответствии с инструкциями производителя.

Количественный анализ ПЦР в реальном времени уровней целевой РНК

Количественное определение уровней целевой РНК может быть осуществлено количественной ПЦР в реальном времени с использованием системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7600, 7700 или 7900 (PE-Applied Biosystems, Фостер-сити, штат Калифорния) по инструкциям производителя. Способы количественной ПЦР в реальном времени хорошо известны в данной области техники.

Перед ПЦР в реальном времени, выделенную РНК подвергают реакции с обратной транскриптазой (RT), в результате чего образуется комплементарная ДНК (кДНК), которую затем используют как субстрат для амплификации ПЦР в реальном времени. Реакции RT и ПЦР в реальном времени выполняют последовательно в одной и той же лунке с образцом. Реактивы для RT и ПЦР в реальном времени можно приобрести у компании Invitrogen (Карлсбад, штат Калифорния). Реакции RT и ПЦР в реальном времени выполняют по способам, хорошо известным специалистам в данной области.

Количества целевого гена (или РНК), полученные по ПЦР в реальном времени, нормализуют с использованием уровня экспрессии гена, экспрессия которого является постоянной, такого как циклофилин А, или количественным определением общей РНК, используя RIBOGREEN (Invitrogen Inc., Карлсбад, штат Калифорния). Экспрессию циклофилина А количественно определяют по ПЦР в реальном времени, которую осуществляют одновременно с мишенью, поочередно или отдельно. Общую РНК количественно определяют с использованием реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN (Invetrogen Inc., Юджин, штат Орегон). Способы количественного определения РНК при помощи RIBOGREEN описаны в публикации Jones, L.J., et al., (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). Для измерения флуоресценции RIBOGREEN используют прибор CYTOFLUOR 4000 (РЕ Applied Biosystems).

Образцы и праймеры предназначены для гибридизации с нуклеиновой кислотой HBV. Способы разработки образцов и праймеров для ПЦР в реальном времени хорошо известны в данной области, и могут включать применение программного обеспечения, такого как программа PRIMER EXPRESS (Applied Biosystems, Фостер-сити, штат Калифорния).

Количественный анализ ПЦР в реальном времени уровней целевой ДНК

Количественное определение уровней целевой ДНК может быть осуществлено количественной ПЦР в реальном времени с использованием системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7600, 7700 или 7900 (PE-Applied Biosystems, Фостер-сити, штат Калифорния) по инструкциям производителя. Способы количественной ПЦР в реальном времени хорошо известны в данной области техники.

Количества целевого гена (или ДНК), полученные по ПЦР в реальном времени, нормализуют с использованием уровня экспрессии гена, экспрессия которого является постоянной, такого как циклофилин А, или количественным определением общей ДНК, используя RIBOGREEN (Invitrogen Inc., Карлсбад, штат Калифорния). Экспрессию циклофилина А количественно определяют по ПЦР в реальном времени, которую осуществляют одновременно с мишенью, поочередно или отдельно. Общую ДНК количественно определяют с использованием реагента для количественного определения РНК RIBOGREEN (Invetrogen Inc., Юджин, штат Орегон). Способы количественного определения ДНК при помощи RIBOGREEN описаны в публикации Jones, L.J., et al., (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). Для измерения флуоресценции RIBOGREEN используют прибор CYTOFLUOR 4000 (РЕ Applied Biosystems).

Образцы и праймеры предназначены для гибридизации с нуклеиновой кислотой HBV. Способы разработки образцов и праймеров для ПЦР в реальном времени хорошо известны в данной области, и могут включать применение программного обеспечения, такого как программа PRIMER EXPRESS (Applied Biosystems, Фостер-сити, штат Калифорния).

Анализ уровней белка

Антисмысловое ингибирование нуклеиновых кислот HBV может быть определено измерением уровней белка HBV. Уровни белка HBV могут быть оценены или количественно определены различными способами, хорошо известными в данной области, такими как иммунопреципитация, анализ вестерн-блоттинга (иммуноблоттинг), иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA), количественные анализы белка, анализы активности белка (например, анализы активности каспазы), иммуногистохимия, иммуноцитохимия или сортировка флуоресцентно-активированных клеток (FACS). Антитела, направленные на мишень, могут быть идентифицированы и получены из различных источников, таких как каталог антител MSRS (Aerie Corporation, Бирмингем, штат Мичиган), или могут быть получены стандартными способами получения моноклональных или поликлональных антител, хорошо известными в данной области.

In vivo исследование антисмысловых соединений

Антисмысловые соединения, например, антисмысловые олигониклеотиды, испытывают на животных для оценки их способности ингибировать экспрессию HBV и вызывать фенотипические изменения. Испытание может быть выполнено на здоровых животных или в экспериментальных моделях заболеваний. Для введения животным, антисмысловые олигонуклеотиды составляют в композицию в фармацевтически приемлемом разбавителе, таком как фосфатно-солевой буферный раствор. Введение включает парентеральные пути введения, такие как внутрибрюшинное, внутривенное, подкожное, интратекальное и интрацеребровентрикулярное. Расчет дозы антисмыслового олигонуклеотида и частоты доз находится в рамках возможностей специалистов в данной области и зависит от таких факторов, как способ введения и вес тела животного. После периода обработки антисмысловыми олигонуклеотидами, РНК выделяют из печеночной ткани и измеряют изменения экспрессии нуклеиновой кислоты HBV. Измеряют также изменения уровней ДНК HBV. Измеряют также изменения уровней белка HBV. Измеряют также изменения уровней HBeAg HBV. Измеряют также изменения уровней HBsAg HBV.

Некоторые показания

В некоторых вариантах реализации, в настоящем документе представлены способы, соединения и композиции для лечения пациента, включающие введение одной или нескольких фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, пациент страдает HBV-связанным состоянием. В некоторых вариантах реализации, хроническая инфекция HBV, воспаление, фиброз, цирроз, рак печени, серозный гепатит, желтуха, рак печени, воспаление печени, фиброз печени, цирроз печени, печеночная недостаточность, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гепофагоцитарный синдром, серозный гепатит и виремия HBV. В некоторых вариантах реализации, HBV-связанное состояние может включать любое или все из следующих: болезнь, похожую на грипп, слабость, боли, головную боль, жар, потерю аппетита, диарею, желтуху, тошноту и рвоту, боль в области печени, стул земляного или серого цвета, зуд по всему телу и мочу темного цвета, в сочетании с положительным тестом на присутствие вируса гепатита В, вирусного антигена гепатита В или положительным тестом на присутствие антитела, специфичного к вирусному антигену гепатита В. В некоторых вариантах реализации, пациент имеет риск HBV-связанного состояния. Сюда входят пациенты, имеющие один или несколько факторов риска для развития HBV-связанного состояния, включая половые отношения с пациентом, инфицированным вирусом гепатита В, проживание в одном доме с пациентом с хронической инфекцией вируса гепатита В, воздействие крови человека, инфицированного вирусом гепатита В, инъекция запрещенных лекарств, заболевание гемофилией и посещение мест распространения гепатита В. В некоторых вариантах реализации, пациента определяют как нуждающегося в лечении HBV-связанного состояния. В некоторых вариантах реализации, в настоящем документе представлены способы профилактического снижения экспрессии HBV у пациента. Некоторые варианты реализации включают лечение пациента, нуждающегося в этом, путем введения пациенту терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV.

За счет пересечения путей передачи, многие люди подвергаются воздействию вируса гепатита В (HBV) и вируса гепатита С (HCV), и меньшая часть является хронически инфицированной обоими вирусами, особенно в таких регионах, как Азия, где HBV является эндемичным. По оценкам, до 10% людей с HCV могут также страдать HBV, тогда как, вероятно, 20% людей с HBV инфицированы также HCV. Однако лечение гепатита В или гепатита В у пациентов, инфицированных одновременно HBV-HCV, не было хорошо изучено. Лечение усложняется тем фактом, что HCV и HBV ингибируют репликацию друг друга (хотя это взаимодействие наблюдалось не во всех исследованиях). Следовательно, лечение, которое полностью подавляет HBV, может потенциально снижать рецидив HCV или наоборот. Поэтому соединения и композиции, описанные в настоящем документе, могут быть преимущественно использованы для лечения пациентов, инфицированных одновременно HBV и HCV. Примеры возможностей лечения гепатита С (HCV) включают интерфероны, например, интерферон-альфа-2b, интерферон альфа-2а и интерферон альфакон-1. Более редкая частота дозирования интерферона может быть достигнута при использовании пегилированного интерферона (интерферона, присоединенного к полиэтиленгликольному фрагменту, что улучшает его фармакокинетический профиль). Было также показано, что комплексная терапия с интерфероном альфа-2b (пегилированным и не пегилированным) и рибавирином является преимущественной для некоторых групп пациентов. Другие средства, разработанные в настоящее время, включают ингибиторы репликации РНК HCV (например, серии VP50406 производства ViroPharma), антисмысловые агенты HCV, терапевтические вакцины HCV, ингибиторы протеазы HCV, ингибиторы геликазы HCV и терапию антителами HCV (моноклональными или поликлональными).

В некоторых вариантах реализации, лечение способами, соединениями и композициями, описанными в настоящем документе, применимо для предупреждения HBV-связанного состояния, обусловленного наличием вируса гепатита В. В некоторых вариантах реализации, лечение способами, соединениями и композициями, описанными в настоящем документе, применимо для предупреждения HBV-связанного состояния.

В одном варианте реализации, введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, сопровождается контролированием уровней мРНК HBV в сыворотке пациента для определения реакции пациента на введение антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации, введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, сопровождается контролированием уровней ДНК HBV в сыворотке пациента для определения реакции пациента на введение антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации, введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, сопровождается контролированием уровней белка HBV в сыворотке пациента для определения реакции пациента на введение антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации, введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, сопровождается контролированием уровней антигена S HBV (HbsAg) в сыворотке пациента для определения реакции пациента на введение антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации, введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, сопровождается контролированием уровней антигена Е HBV (HBeAg) в сыворотке пациента для определения реакции пациента на введение антисмыслового соединения. Реакцию пациента на введение антисмыслового соединения врач использует для определения количества и продолжительности терапевтического вмешательства.

В некоторых вариантах реализации, введение антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, приводит к снижению экспрессии HBV по меньшей мере на 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или в диапазоне, определенном двумя из этих значений. В некоторых вариантах реализации, введение антисмыслового соединения, направленного на нуклеиновую кислоту HBV, приводит к уменьшению симптомов, связанных с HBV-связанным состоянием, и к снижению HBV-связанных маркеров в крови. В некоторых вариантах реализации, введение антисмыслового соединения HBV снижает уровни РНК HBV, уровни ДНК HBV, уровни белка HBV, уровни HBsAg или уровни HBeAg по меньшей мере на 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 99%, или в диапазоне, определенном двумя из этих значений.

В некоторых вариантах реализации, фармацевтические композиции, содержащие антисмысловое соединение, направленное на HBV, используют для получения лекарственных средств для лечения пациента, страдающего или восприимчивого к HBV-связанному состоянию.

Некоторые комплексные терапии

В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, вводят совместно с одним или несколькими другими фармацевтическими средствами. В некоторых вариантах реализации, такое одно или несколько других фармацевтических средств предназначены для лечения того же заболевания, расстройства или состояния, что и одна или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, такое одно или несколько других фармацевтических средств предназначены для лечения другого заболевания, расстройства или состояния, чем одна или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, такое одно или несколько других фармацевтических средств предназначены для лечения нежелательного побочного действия одной или нескольких фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, вводят совместно с другим фармацевтическим средством для лечения нежелательного действия этого другого фармацевтического средства. В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, вводят совместно с другим фармацевтическим средством для получения комбинационного эффекта. В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, вводят совместно с другим фармацевтическим средством для получения синергетического эффекта.

В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, и один или несколько других фармацевтических средств вводят одновременно. В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, и один или несколько других фармацевтических средств вводят в разное время. В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, и один или несколько других фармацевтических средств готовят вместе в одной композиции. В некоторых вариантах реализации, одну или несколько фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, и один или несколько других фармацевтических средств готовят по отдельности. В некоторых вариантах реализации, описанные антисмысловые олигонуклеотиды вводят в комбинации с HCV агентом. В следующих вариантах реализации, HCV соединение вводят одновременно с антисмысловым соединением; в других вариантах реализации, HCV соединение вводят отдельно; так, чтобы дозы HCV агента и антисмыслового соединения перекрывались, по времени, в организме пациента. В родственных вариантах реализации, агент HCV может быть выбран из интерферона альфа-2b, интерферона альфа-2а и интерферона альфакон-1 (пегилированного и не пегилированного); рибавирина; ингибитора репликации РНК HCV (например, серии VP50406 производства ViroPharma); антисмыслового агента HCV; терапевтической вакцины HCV; ингибитора протеазы HCV; ингибитора геликазы HCV; и терапии HCV антителами (моноклональными или поликлональными антителами).

В других вариантах реализации, антисмысловое соединение HBV настоящего изобретения может быть введено пациенту, инфицированному HBV, в комбинации с одним или несколькими HBV терапевтическими средствами, причем одно или несколько HBV терапевтических средств могут быть введены в той же лекарственной композиции, что и соединение антисмыслового олигонуклеотида HBV, или могут быть введены в отдельной композиции. Одно или несколько HBV терапевтических средств могут быть введены одновременно с соединением антисмыслового олигонуклеотида HBV, или могут быть введены отдельно, так, чтобы дозы соединения антисмыслового олигонуклеотида HBV и терапевтического агента HBV перекрывались, по времени, в организме пациента. В родственных вариантах реализации, одно или несколько HBV терапевтических средств могут быть выбраны из интерферона альфа-2b, интерферона альфа-2а и интерферона альфакон-1 (пегилированного и не пегилированного), рибавирина; ингибитора репликации РНК HBV; второго антисмыслового соединения HBV; терапевтической вакцины HBV; профилактической вакцины HBV; ламивудина (3ТС); энтекавира (ETV); тенофовира; телбивудина (LdT); адефовира; и терапии HBV антителами (моноклональными или поликлональными).

ПРИМЕРЫ

Исключение ограничения настоящего описания и включение путем ссылки

Хотя некоторые соединения, композиции и способы, описанные в настоящем документе, были описаны с особенностями в соответствии с некоторыми вариантами реализации, следующие примеры служат лишь для иллюстрации соединений, описанных в настоящем документе, и не предназначены для их ограничения. Каждая ссылка, цитируемая в настоящей заявке, включена в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.

Пример 1: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. Культивированные клетки HepG2.2.15 при плотности 25000 клеток на лунку трансфицировали при помощи электропорации 15000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Набор вирусных затравочных зондов RTS3370 (прямая последовательность CTTGGTCATGGGCCATCAG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:2; обратная последовательность CGGCTAGGAGTTCCGCAGTA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:3; последовательность зонда TGCGTGGAACCTTTTCGGCTCC, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:4) использовали для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблице 1 разработали как 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды или 3-10-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды. 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по пять нуклеозидов. 3-10-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие три и 4 нуклеозида, соответственно. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла, и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла имеет МОЕ модификацию сахара. Каждый нуклеозид в центральном сегменте гэп имеет дезокси-сахарную модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Колонка «мотив» указывает структуру гэп и крыльев каждого химерного олигонуклеотида. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 1, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1).

Таблица 1
Ингибирование уровней мРНК HBV действием МОЕ химерных олигонуклеотидов, направленных на SEQ ID NO:1
Вирусный сайт инициации Вирусный терминирующий сайт ISIS № Последовательность Мотив % ингибирование SEQ ID NO
245 261 510088 CCACGAGTCTAGACTCT 3-10-4 55 5
250 266 510089 GTCCACCACGAGTCTAG 3-10-4 59 6
251 267 510090 AGTCCACCACGAGTCTA 3-10-4 60 7
252 268 510091 AAGTCCACCACGAGTCT 3-10-4 47 8
253 269 510092 GAAGTCCACCACGAGTC 3-10-4 59 9
254 270 510093 AGAAGTCCACCACGAGT 3-10-4 32 10
255 271 510094 GAGAAGTCCACCACGAG 3-10-4 41 11
256 272 510095 AGAGAAGTCCACCACGA 3-10-4 44 12
257 273 510096 GAGAGAAGTCCACCACG 3-10-4 54 13
258 274 510097 TGAGAGAAGTCCACCAC 3-10-4 57 14
384 400 510098 TGATAAAACGCCGCAGA 3-10-4 55 15
385 401 510099 ATGATAAAACGCCGCAG 3-10-4 59 16
411 427 510100 GGCATAGCAGCAGGATG 3-10-4 85 17
412 428 510101 AGGCATAGCAGCAGGAT 3-10-4 51 18
413 429 510102 GAGGCATAGCAGCAGGA 3-10-4 69 19
414 433 505330 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 5-10-5 74 20
414 430 510103 TGAGGCATAGCAGCAGG 3-10-4 12 21
415 434 509928 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 5-10-5 71 22
415 431 510104 ATGAGGCATAGCAGCAG 3-10-4 69 23
416 435 509929 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 5-10-5 78 24
416 432 510105 GATGAGGCATAGCAGCA 3-10-4 69 25
417 436 509930 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 5-10-5 72 26
417 433 510106 AGATGAGGCATAGCAGC 3-10-4 77 27
418 437 146783 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 5-10-5 15 28
418 434 510107 AAGATGAGGCATAGCAG 3-10-4 69 29
419 435 510108 GAAGATGAGGCATAGCA 3-10-4 59 30
420 436 510109 AGAAGATGAGGCATAGC 3-10-4 0 31
421 437 510110 AAGAAGATGAGGCATAG 3-10-4 38 32
457 473 510111 ACGGGCAACATACCTTG 3-10-4 62 33
639 658 146784 CTGAGGCCCACTCCCATAGG 5-10-5 5 34
639 655 510112 AGGCCCACTCCCATAGG 3-10-4 44 35
640 656 510113 GAGGCCCACTCCCATAG 3-10-4 27 36
641 657 510114 TGAGGCCCACTCCCATA 3-10-4 44 37
642 658 510115 CTGAGGCCCACTCCCAT 3-10-4 52 38
687 706 509931 CGAACCACTGAACAAATGGC 5-10-5 89 39
687 703 510116 ACCACTGAACAAATGGC 3-10-4 89 40
688 704 510117 AACCACTGAACAAATGG 3-10-4 69 41

689 705 510118 GAACCACTGAACAAATG 3-10-4 63 42
690 706 510119 CGAACCACTGAACAAAT 3-10-4 74 43
738 754 510120 АССАСАТСАТССАТАТА 3-10-4 71 44
1176 1192 510121 TCAGCAAACACTTGGCA 3-10-4 73 45
1778 1797 509932 AATTTATGCCTACAGCCTCC 5-10-5 76 46
1778 1794 510122 TTATGCCTACAGCCTCC 3-10-4 76 47
1779 1798 509933 CAATTTATGCCTACAGCCTC 5-10-5 72 48
1779 1795 510123 TTTATGCCTACAGCCTC 3-10-4 75 49
1780 1799 509934 CCAATTTATGCCTACAGCCT 5-10-5 75 50
1780 1796 510124 ATTTATGCCTACAGCCT 3-10-4 73 51
1781 1800 509935 ACCAATTTATGCCTACAGCC 5-10-5 72 52
1781 1797 510125 AATTTATGCCTACAGCC 3-10-4 69 53
1782 1798 510126 CAATTTATGCCTACAGC 3-10-4 59 54
1783 1799 510127 CCAATTTATGCCTACAG 3-10-4 58 55
1784 1800 510128 ACCAATTTATGCCTACA 3-10-4 60 56
1822 1838 510129 AGGCAGAGGTGAAAAAG 3-10-4 47 57
1823 1839 510130 TAGGCAGAGGTGAAAAA 3-10-4 30 58
1865 1884 509936 GCACAGCTTGGAGGCTTGAA 5-10-5 39 59
1865 1881 510131 CAGCTTGGAGGCTTGAA 3-10-4 4 60
1866 1885 509937 GGCACAGCTTGGAGGCTTGA 5-10-5 35 61
1866 1882 510132 ACAGCTTGGAGGCTTGA 3-10-4 0 62
1867 1886 505370 AGGCACAGCTTGGAGGCTTG 5-10-5 36 63
1867 1883 510133 CACAGCTTGGAGGCTTG 3-10-4 12 64
1868 1887 509938 AAGGCACAGCTTGGAGGCTT 5-10-5 7 65
1868 1884 510134 GCACAGCTTGGAGGCTT 3-10-4 20 66
1869 1888 509939 CAAGGCACAGCTTGGAGGCT 5-10-5 36 67
1869 1885 510135 GGCACAGCTTGGAGGCT 3-10-4 22 68
1870 1889 505371 CCAAGGCACAGCTTGGAGGC 5-10-5 35 69
1870 1886 510136 AGGCACAGCTTGGAGGC 3-10-4 14 70
1871 1887 510137 AAGGCACAGCTTGGAGG 3-10-4 0 71
1872 1888 510138 CAAGGCACAGCTTGGAG 3-10-4 6 72
1873 1889 510139 CCAAGGCACAGCTTGGA 3-10-4 17 73
1918 1934 510140 GCTCCAAATTCTTTATA 3-10-4 59 74
2378 2397 509940 TCTGCGAGGCGAGGGAGTTC 3-10-4 10 75
2378 2394 510141 GCGAGGCGAGGGAGTTC 3-10-4 5 76
2379 2395 510142 TGCGAGGCGAGGGAGTT 3-10-4 0 77
2380 2396 510143 CTGCGAGGCGAGGGAGT 3-10-4 8 78
2381 2397 510144 TCTGCGAGGCGAGGGAG 3-10-4 17 79
2820 2836 510145 TTCCCAAGAATATGGTG 3-10-4 22 80
2821 2837 510146 GTTCCCAAGAATATGGT 3-10-4 11 81
2822 2838 510147 TGTTCCCAAGAATATGG 3-10-4 21 82

Пример 2: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК ИВУ в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. Культивированные клетки HepG2.2.15 при плотности 25000 клеток на лунку трансфицировали при помощи электропорации 15000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. RTS3370 обнаружил первичную мРНК и вторичные части транскриптов мРНК pre-S1, pre-S2 и pre-C. Химерные олигонуклеотиды испытали также с дополнительными наборами затравочных зондов. Набор вирусных затравочных зондов RTS3371 (прямая последовательность CCAAACCTTCGGACGGAAA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:311; обратная последовательность TGAGGCCCACTCCCATAGG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO: 312; последовательность зонда CCCATCATCCTGGGCTTTCGGAAAAT, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:313) также использовали для измерения уровней мРНК. RTS3371 обнаружил первичную мРНК и вторичные части транскриптов мРНК pre-S1, pre-S2 и pre-C, аналогичные RTS3370, но в других областях. Набор вирусных затравочных зондов RTS3372 (прямая последовательность ATCCTATCAACACTTCCGGAAACT, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:314; обратная последовательность CGACGCGGCGATTGAG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:315; последовательность зонда AAGAACTCCCTCGCCTCGCAGACG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:316) использовали для измерения уровней мРНК. RTS3372 обнарружил первичную геномную последовательность. Набор вирусных затравочных зондов RTS3373MGB (прямая последовательность CCGACCTTGAGGCATACTTCA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:317; обратная последовательность AATTTATGCCTACAGCCTCCTAGTACA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:318; последовательность зонда TTAAAGACTGGGAGGAGTTG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:319) использовали для измерения уровней мРНК. RTS3373MGB обнаружил первичную мРНК и вторичные части транскриптов мРНК pre-S 1, pre-S2, pre-C и pre-Х.

Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблице 2 разработали как 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды или 3-10-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды, или 2-10-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды. 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по пять нуклеозидов. 3-10-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по три нуклеозида. 2-10-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 14 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по два нуклеозида. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла, и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла имеет МОЕ модификацию сахара. Каждый нуклеозид в центральном сегменте гэп имеет дезокси-сахарную модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Колонка «мотив» указывает структуру гэп и крыльев каждого химерного олигонуклеотида. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 2, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1).

Таблица 2
Ингибирование уровней мРНК HBV действием МОЕ химерных олигонуклеотидов, направленных на SEQ ID NO:1 (обнаружено по RTS3370, RTS3371, RTS3372 и RTS3373MGB)
Сайт инициации Терминирующий сайт № ISIS Последовательность RTS3370% ингибирование RTS3371% ингибирование RTS3372% ингибирование RTS3373 MGB % ингибирование Мотив SEQ ID NO
58 77 146779 GAACTGGACCACCAGCAGG 76 80 82 81 5-10-5 83
58 71 510019 GAGCCACCAGCAGG 38 32 45 31 2-10-2 84
61 80 505314 CCTGAACTGGAGCCACCAGC 68 71 67 66 5-10-5 85
62 77 509941 GAACTGGAGCCACCAG 36 32 71 53 3-10-3 86
196 215 505315 AAAAACCCCGCCTGTAACAC 69 74 80 88 5-10-5 87

199 218 505316 AAGAAAAACCCCGCCTGTAA 60 60 64 64 5-10-5 88
205 224 505317 GTCAACAAGAAAAACCCCGC 85 83 79 85 5-10-5 89
228 241 510020 GTATTGTGAGGATT 28 18 0 16 2-10-2 90
229 242 510021 GGTATTGTGAGGAT 40 37 19 34 2-10-2 91
244 263 146821 CACCACGAGTCTAGACTCTG 74 73 62 75 5-10-5 92
245 260 509942 CACGAGTCTAGACTCT 18 15 45 46 3-10-3 93
245 258 510022 CGAGTCTAGACTCT 32 26 23 19 2-10-2 94
246 261 509943 CCACGAGTCTAGACTC 34 35 63 60 3-10-3 95
247 266 505318 GTCCACCACGAGTCTAGACT 75 77 64 75 5-10-5 96
250 269 509921 GAAGTCCACCACGAGTCTAG 46 46 39 40 5-10-5 97
250 265 509944 TCCACCACGAGTCTAG 38 39 65 59 3-10-3 98
251 270 509922 AGAAGTCCACCACGAGTCTA 55 56 17 38 5-10-5 99
251 266 509945 GTCCACCACGAGTCTA 34 35 64 51 3-10-3 100
252 271 509923 GAGAAGTCCACCACGAGTCT 39 38 39 33 5-10-5 101
252 267 509946 AGTCCACCACGAGTCT 47 51 50 45 3-10-3 102
253 272 505319 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 88 83 80 78 5-10-5 103
253 268 509947 AAGTCCACCACGAGTC 46 50 56 46 3-10-3 104
254 273 509924 GAGAGAAGTCCACCACGAGT 43 40 49 44 5-10-5 105
254 269 509948 GAAGTCCACCACGAGT 41 46 51 44 3-10-3 106
254 267 510023 AGTCCACCACGAGT 41 32 47 48 2-10-2 107
255 274 509925 TGAGAGAAGTCCACCACGAG 50 57 55 55 5-10-5 108

255 270 509949 AGAAGTCCACCACGAG 40 41 52 34 3-10-3 109
255 268 510024 AAGTCCACCACGAG 26 29 19 23 2-10-2 110
256 275 505320 TTGAGAGAAGTCCACCACGA 51 57 55 66 5-10-5 111
256 271 509950 GAGAAGTCCACCACGA 30 31 43 33 3-10-3 112
256 269 510025 GAAGTCCACCACGA 44 38 53 54 2-10-2 113
257 270 510026 AGAAGTCCACCACG 39 42 32 25 2-10-2 114
258 273 509952 GAGAGAAGTCCACCAC 54 52 60 48 3-10-3 115
258 271 510027 GAGAAGTCCACCAC 29 30 25 19 2-10-2 116
259 274 509953 TGAGAGAAGTCCACCA 39 44 47 38 3-10-3 117
259 272 510028 AGAGAAGTCCACCA 31 29 3 15 2-10-2 118
260 273 510029 GAGAGAAGTCCACC 21 19 23 18 2-10-2 119
261 274 510030 TGAGAGAAGTCCAC 16 22 21 20 2-10-2 120
262 281 505321 AGAAAATTGAGAGAAGTCCA 53 58 52 56 5-10-5 121
265 284 505322 CCTAGAAAATTGAGAGAAGT 62 65 69 67 5-10-5 122
293 312 505323 ATTTTGGCCAAGACACACGG 86 84 81 85 5-10-5 123
296 315 505324 CGAATTTTGGCCAAGACACA 67 67 69 64 5-10-5 124
302 321 505325 GGACTGCGAATTTTGGCCAA 77 75 73 76 5-10-5 125
360 379 505326 TCCAGCGATAACCAGGACAA 89 90 77 91 5-10-5 126
366 385 505327 GACACATCCAGCGATAACCA 83 85 75 86 5-10-5 127
369 388 505328 GCAGACACATCCAGCGATAA 65 68 49 57 5-10-5 128
384 399 509954 GATAAAACGCCGCAGA 37 46 53 35 3-10-3 129

384 397 510031 TAAAACGCCGCAGA 36 36 33 33 2-10-2 130
385 398 510032 ATAAAACGCCGCAG 12 7 19 15 2-10-2 131
386 401 509955 ATGATAAAACGCCGCA 49 55 57 53 3-10-3 132
386 399 510033 GATAAAACGCCGCA 39 39 45 37 2-10-2 133
387 400 510034 TGATAAAACGCCGC 40 37 29 39 2-10-2 134
388 401 510035 ATGATAAAACGCCG 22 24 9 22 2-10-2 135
411 430 505329 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 60 64 47 55 5-10-5 136
411 426 509956 GCATAGCAGCAGGATG 62 64 71 60 3-10-3 137
411 424 510036 ATAGCAGCAGGATG 44 34 30 48 2-10-2 138
412 431 509926 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 45 54 71 62 5-10-5 139
412 427 509957 GGCATAGCAGCAGGAT 72 75 80 71 3-10-3 140
412 425 510037 CATAGCAGCAGGAT 29 24 24 20 2-10-2 141
413 432 509927 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 54 58 54 49 5-10-5 142
413 428 509958 AGGCATAGCAGCAGGA 63 66 68 64 3-10-3 143
413 426 510038 GCATAGCAGCAGGA 55 54 37 46 2-10-2 144
414 433 505330 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 85 87 74 82 5-10-5 20
414 429 509959 GAGGCATAGCAGCAGG 64 64 80 68 3-10-3 145
414 427 510039 GGCATAGCAGCAGG 58 54 41 45 2-10-2 146
415 430 509960 TGAGGCATAGCAGCAG 59 59 66 64 3-10-3 147
415 428 510040 AGGCATAGCAGCAG 58 55 38 41 2-10-2 148
416 431 509961 ATGAGGCATAGCAGCA 56 54 65 56 3-10-3 149
416 429 510041 GAGGCATAGCAGCA 64 62 64 57 2-10-2 150
417 432 509962 GATGAGGCATAGCAGC 57 52 58 49 3-10-3 151

417 430 510042 TGAGGCATAGCAGC 48 50 55 48 2-10-2 152
418 433 509963 AGATGAGGCATAGCAG 50 52 64 51 3-10-3 153
418 431 510043 ATGAGGCATAGCAG 36 31 36 26 2-10-2 154
419 434 509964 AAGATGAGGCATAGCA 48 47 72 65 3-10-3 155
419 432 510044 GATGAGGCATAGCA 44 28 0 14 2-10-2 156
420 435 509965 GAAGATGAGGCATAGC 45 41 65 62 3-10-3 157
420 433 510045 AGATGAGGCATAGC 41 43 37 29 2-10-2 158
421 436 509966 AGAAGATGAGGCATAG 32 29 64 51 3-10-3 159
421 434 510046 AAGATGAGGCATAG 21 18 26 27 2-10-2 160
422 437 509967 AAGAAGATGAGGCATA 21 17 55 46 3-10-3 161
422 435 510047 GAAGATGAGGCATA 25 24 23 25 2-10-2 162
423 436 510048 AGAAGATGAGGCAT 21 17 25 19 2-10-2 163
424 437 510049 AAGAAGATGAGGCA 17 11 38 27 2-10-2 164
454 473 505331 ACGGGCAACATACCTTGATA 55 57 65 60 5-10-5 165
457 476 505332 CAAACGGGCAACATACCTTG 73 77 77 74 5-10-5 166
457 472 509968 CGGGCAACATACCTTG 60 61 73 70 3-10-3 167
458 473 509969 ACGGGCAACATACCTT 58 63 64 58 3-10-3 168
458 471 510050 GGGCAACATACCTT 58 56 57 46 2-10-2 169
459 472 510051 CGGGCAACATACCT 49 43 47 37 2-10-2 170
460 473 510052 ACGGGCAACATACC 50 50 54 51 2-10-2 171
463 482 505333 AGAGGACAAACGGGCAACAT 64 68 64 71 5-10-5 172
466 485 505334 ATTAGAGGACAAACGGGCAA 59 62 42 69 5-10-5 173
472 491 505335 CCTGGAATTAGAGGACAAAC 78 81 73 86 5-10-5 174

475 494 505336 GATCCTGGAATTAGAGGACA 56 65 61 72 5-10-5 175
639 654 509970 GGCCCACTCCCATAGG 38 55 74 48 3-10-3 176
641 656 509971 GAGGCCCACTCCCATA 30 46 77 54 3-10-3 177
642 657 509972 TGAGGCCCACTCCCAT 58 57 84 66 3-10-3 178
643 658 509973 CTGAGGCCCACTCCCA 38 53 70 66 3-10-3 179
670 689 146823 GGCACTAGTAAACTGAGCCA 61 64 63 63 5-10-5 180
670 685 509974 CTAGTAAACTGAGCCA 71 71 78 80 3-10-3 181
670 683 510053 AGTAAACTGAGCCA 49 48 52 53 2-10-2 182
671 684 510054 TAGTAAACTGAGCC 41 38 19 30 2-10-2 183
672 685 510055 CTAGTAAACTGAGC 25 27 42 47 2-10-2 184
673 692 505337 AATGGCACTAGTAAACTGAG 34 46 49 52 5-10-5 185
679 698 505338 TGAACAAATGGCACTAGTAA 74 77 71 80 5-10-5 186
682 701 505339 CACTGAACAAATGGCACTAG 82 83 71 82 5-10-5 187
687 702 509975 CCACTGAACAAATGGC 72 73 76 80 3-10-3 188
688 707 505340 ACGAACCACTGAACAAATGG 69 69 78 76 5-10-5 189
688 703 509976 ACCACTGAACAAATGG 47 48 67 65 3-10-3 190
689 704 509977 AACCACTGAACAAATG 33 33 39 41 3-10-3 191
690 705 509978 GAACCACTGAACAAAT 50 49 63 48 3-10-3 192
691 710 505341 CCTACGAACCACTGAACAAA 64 70 70 72 5-10-5 193
691 706 509979 CGAACCACTGAACAAA 67 66 78 77 3-10-3 194
691 704 510056 AACCACTGAACAAA 36 36 23 32 2-10-2 195
692 705 510057 GAACCACTGAACAA 45 44 51 43 2-10-2 196

693 706 510058 CGAACCACTGAACA 59 52 48 49 2-10-2 197
697 716 505342 GAAAGCCCTACGAACCACTG 76 80 73 83 5-10-5 198
738 753 509980 ССАСАТСАТССАТАТА 40 33 62 54 3-10-3 199
738 751 510059 АСАТСАТССАТАТА 19 9 30 27 2-10-2 200
739 754 509981 АССАСАТСАТССАТАТ 76 78 93 85 3-10-3 201
739 752 510060 САСАТСАТССАТАТ 45 35 24 17 2-10-2 202
740 753 510061 ССАСАТСАТССАТА 52 49 43 40 2-10-2 203
741 754 510062 АССАСАТСАТССАТ 44 45 48 47 2-10-2 204
756 775 505343 TGTACAGACTTGGCCCCCAA 47 56 55 68 5-10-5 205
823 842 505344 AGGGTTTAAATGTATACCCA 66 71 64 72 5-10-5 206
1170 1189 505345 GCAAACACTTGGCACAGACC 76 80 35 70 5-10-5 207
1176 1191 509982 CAGCAAACACTTGGCA 42 44 56 54 3-10-3 208
1177 1192 509983 TCAGCAAACACTTGGC 60 54 74 70 3-10-3 209
1259 1278 505346 CCGCAGTATGGATCGGCAGA 88 82 57 80 5-10-5 210
1261 1276 509984 GCAGTATGGATCGGCA 61 58 65 72 3-10-3 211
1262 1281 505347 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 84 81 71 83 5-10-5 212
1268 1287 505348 CTAGGAGTTCCGCAGTATGG 78 68 70 79 5-10-5 213
1271 1290 505349 CGGCTAGGAGTTCCGCAGTA 47 54 59 61 5-10-5 214
1277 1296 505350 AACAAGCGGCTAGGAGTTCC 55 62 69 69 5-10-5 215
1280 1299 505351 CAAAACAAGCGGCTAGGAGT 20 49 49 54 5-10-5 216

1283 1302 505352 GAGCAAAACAAGCGGCTAGG 53 83 73 87 5-10-5 217
1286 1305 505353 TGCGAGCAAAACAAGCGGCT 64 73 68 78 5-10-5 218
1413 1426 510063 ACAAAGGACGTCCC 14 8 0 0 2-10-2 219
1515 1534 505354 GAGGTGCGCCCCGTGGTCGG 68 81 61 80 5-10-5 220
1518 1537 505355 AGAGAGGTGCGCCCCGTGGT 59 75 75 84 5-10-5 221
1521 1540 505356 TAAAGAGAGGTGCGCCCCGT 63 76 83 78 5-10-5 222
1550 1563 510064 AAGGCACAGACGGG 35 38 25 32 2-10-2 223
1577 1596 146786 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 88 91 84 93 5-10-5 224
1580 1599 505357 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 70 75 71 82 5-10-5 225
1583 1602 505358 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 77 82 72 84 5-10-5 226
1586 1605 505359 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 72 73 67 80 5-10-5 227
1655 1674 505360 AGTCCAAGAGTCCTCTTATG 66 68 54 68 5-10-5 228
1706 1719 510065 CAGTCTTTGAAGTA 19 19 26 17 2-10-2 229
1778 1793 509985 TATGCCTACAGCCTCC 64 60 64 63 3-10-3 230
1779 1794 509986 TTATGCCTACAGCCTC 66 66 77 73 3-10-3 231
1780 1795 509987 TTTATGCCTACAGCCT 56 55 68 67 3-10-3 232
1781 1796 509988 ATTTATGCCTACAGCC 52 52 68 63 3-10-3 233
1782 1797 509989 AATTTATGCCTACAGC 48 44 70 59 3-10-3 234
1783 1798 509990 CAATTTATGCCTACAG 24 18 39 40 3-10-3 235
1784 1799 509991 CCAATTTATGCCTACA 37 37 55 55 3-10-3 236
1785 1800 509992 ACCAATTTATGCCTAC 35 36 60 55 3-10-3 237

1806 1825 505361 AAAGTTGCATGGTGCTGGTG 42 55 75 61 5-10-5 238
1809 1828 505362 GAAAAAGTTGCATGGTGCTG 45 56 64 53 5-10-5 239
1812 1831 505363 GGTGAAAAAGTTGCATGGTG 71 70 80 72 5-10-5 240
1815 1834 505364 AGAGGTGAAAAAGTTGCATG 51 57 77 82 5-10-5 241
1818 1837 505365 GGCAGAGGTGAAAAAGTTGC 54 63 76 78 5-10-5 242
1821 1840 505366 TTAGGCAGAGGTGAAAAAGT 61 65 80 66 5-10-5 243
1822 1837 509993 GGCAGAGGTGAAAAAG 47 51 74 54 3-10-3 244
1823 1838 509994 AGGCAGAGGTGAAAAA 47 40 76 54 3-10-3 245
1824 1843 505367 TGATTAGGCAGAGGTGAAAA 41 39 62 29 5-10-5 246
1824 1839 509995 TAGGCAGAGGTGAAAA 46 42 79 59 3-10-3 247
1826 1839 510066 TAGGCAGAGGTGAA 40 33 44 31 2-10-2 248
1827 1846 505368 AGATGATTAGGCAGAGGTGA 27 46 62 51 5-10-5 249
1861 1880 146787 AGCTTGGAGGCTTGAACAGT 59 61 65 72 5-10-5 250
1864 1883 505369 CACAGCTTGGAGGCTTGAAC 11 21 48 31 5-10-5 251
1865 1880 509996 AGCTTGGAGGCTTGAA 13 1 45 40 3-10-3 252
1865 1878 510067 CTTGGAGGCTTGAA 22 17 20 14 2-10-2 253
1866 1881 509997 CAGCTTGGAGGCTTGA 29 19 51 45 3-10-3 254
1866 1879 510068 GCTTGGAGGCTTGA 24 25 37 32 2-10-2 255
1867 1886 505370 AGGCACAGCTTGGAGGCTTG 32 36 58 33 5-10-5 63
1867 1882 509998 ACAGCTTGGAGGCTTG 1 4 23 12 3-10-3 256

1867 1880 510069 AGCTTGGAGGCTTG 23 24 17 23 2-10-2 257
1868 1883 509999 CACAGCTTGGAGGCTT 5 1 48 41 3-10-3 258
1868 1881 510070 CAGCTTGGAGGCTT 21 20 0 18 2-10-2 259
1869 1884 510000 GCACAGCTTGGAGGCT 14 10 50 37 3-10-3 260
1869 1882 510071 ACAGCTTGGAGGCT 19 22 24 27 2-10-2 261
1870 1889 505371 CCAAGGCACAGCTTGGAGGC 27 40 68 38 5-10-5 69
1870 1885 510001 GGCACAGCTTGGAGGC 10 12 43 16 3-10-3 262
1870 1883 510072 CACAGCTTGGAGGC 28 31 33 30 2-10-2 263
1871 1886 510002 AGGCACAGCTTGGAGG 24 20 46 25 3-10-3 264
1871 1884 510073 GCACAGCTTGGAGG 20 18 22 15 2-10-2 265
1872 1887 510003 AAGGCACAGCTTGGAG 6 0 45 24 3-10-3 266
1872 1885 510074 GGCACAGCTTGGAG 18 18 32 23 2-10-2 267
1873 1892 505372 CACCCAAGGCACAGCTTGGA 18 8 55 16 5-10-5 268
1873 1888 510004 CAAGGCACAGCTTGGA 9 0 31 15 3-10-3 269
1873 1886 510075 AGGCACAGCTTGGA 23 9 27 10 2-10-2 270
1874 1889 510005 CCAAGGCACAGCTTGG 0 0 39 25 3-10-3 271
1876 1895 505373 AGCCACCCAAGGCACAGCTT 47 50 69 56 5-10-5 272
1879 1898 505374 CAAAGCCACCCAAGGCACAG 27 27 55 30 5-10-5 273
1882 1901 505375 CCCCAAAGCCACCCAAGGCA 34 40 54 39 5-10-5 274
1885 1904 505376 ATGCCCCAAAGCCACCCAAG 41 43 54 52 5-10-5 275
1888 1907 505377 TCCATGCCCCAAAGCCACCC 40 42 72 40 5-10-5 276
1891 1910 505378 ATGTCCATGCCCCAAAGCCA 35 33 70 40 5-10-5 277

1918 1933 510006 СТССАААТТСТТТАТА 9 2 53 41 3-10-3 278
1918 1931 510076 ССАААТТСТТТАТА 28 22 7 22 2-10-2 279
1919 1934 510007 GCTCCAAATTCTTTAT 43 39 72 57 3-10-3 280
1919 1932 510077 ТССАААТТСТТТАТ 19 11 0 2 2-10-2 281
1920 1933 510078 СТССАААТТСТТТА 19 11 0 0 2-10-2 282
1921 1934 510079 GCTCCAAATTCTTT 50 48 61 55 2-10-2 283
1957 1976 505379 GGAAAGAAGTCAGAAGGCAA 17 14 81 39 5-10-5 284
2270 2285 510008 GTGCGAATCCACACTC 21 4 36 11 3-10-3 285
2270 2283 510080 GCGAATCCACACTC 32 29 41 33 2-10-2 286
2271 2284 510081 TGCGAATCCACACT 28 20 25 11 2-10-2 287
2272 2285 510082 GTGCGAATCCACAC 28 20 32 22 2-10-2 288
2368 2387 505380 GAGGGAGTTCTTCTTCTAGG 24 22 90 48 5-10-5 289
2378 2393 510009 CGAGGCGAGGGAGTTC 12 1 65 10 3-10-3 290
2378 2391 510083 AGGCGAGGGAGTTC 17 18 29 25 2-10-2 291
2379 2394 510010 GCGAGGCGAGGGAGTT 18 13 82 37 3-10-3 292
2379 2392 510084 GAGGCGAGGGAGTT 29 22 54 30 2-10-2 293
2380 2395 510011 TGCGAGGCGAGGGAGT 13 11 69 44 3-10-3 294
2380 2393 510085 CGAGGCGAGGGAGT 25 20 53 42 2-10-2 295
2381 2396 510012 CTGCGAGGCGAGGGAG 17 14 79 53 3-10-3 296
2381 2394 510086 GCGAGGCGAGGGAG 33 29 66 48 2-10-2 297
2382 2397 510013 TCTGCGAGGCGAGGGA 18 4 77 47 3-10-3 298
2420 2439 505381 CCGAGATTGAGATCTTCTGC 12 18 83 28 5-10-5 299
2459 2478 505382 CCCACCTTATGAGTCCAAGG 14 19 80 36 5-10-5 300

2819 2838 505383 TGTTCCCAAGAATATGGTGA 29 32 78 44 5-10-5 301
2820 2835 510014 TCCCAAGAATATGGTG 10 10 68 40 3-10-3 302
2821 2836 510015 TTCCCAAGAATATGGT 5 0 62 24 3-10-3 303
2822 2837 510016 GTTCCCAAGAATATGG 6 2 42 16 3-10-3 304
2823 2838 510017 TGTTCCCAAGAATATG 18 18 47 18 3-10-3 305
2824 2839 510018 TTGTTCCCAAGAATAT 7 5 57 19 3-10-3 306
2825 2838 510087 TGTTCCCAAGAATA 25 20 44 25 2-10-2 307
2873 2892 505384 GAAAGAATCCCAGAGGATTG 8 4 61 22 5-10-5 308
3161 3180 146833 ACTGCATGGCCTGAGGATGA 47 46 82 54 5-10-5 309
3163 3182 505385 CCACTGCATGGCCTGAGGAT 25 34 69 19 5-10-5 310

Пример 3: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepAD38 (Tet-HBV) химерными олигонуклеотидами МОЕ

Некоторые антисмысловые олигонуклеотиды, выбранные из исследования, описанного в Примере 2, испытали на их влияние на мРНК HBV в другой клеточной линии, клетках гепатомы человека HepAD38, в которых выработка HBV контролируется тетрациклин-регулируемым промотором. Культивированные клетки HepAD38 (Tet-HBV) при плотности 45000 клеток на лунку трансфицировали при помощи электропорации 15000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПНР в реальном времени. Наборы вирусных затравочных зондов RTS3372 и RTS3373MGB использовали по отдельности для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены в Таблице 3 как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Таблица 3
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV МОЕ химерными олигонуклеотидами в клетках HepAD38 (Tet-HBV) (обнаружено по RTS3372 и RTS3373MGB)
Сайт инициации Терминирующий сайт № ISIS Мотив RTS3373MGB % ингибирование RTS3372% ингибирование SEQ ID NO

58 77 146779 5-10-5 76 82 83
58 71 510019 5-10-5 0 9 84
61 80 505314 5-10-5 65 75 85
196 215 505315 5-10-5 46 65 87
199 218 505316 5-10-5 57 71 88
205 224 505317 5-10-5 83 87 89
228 241 510020 2-10-2 6 0 90
229 242 510021 2-10-2 19 24 91
244 263 146821 5-10-5 72 71 92
245 258 510022 2-10-2 6 24 94
247 266 505318 5-10-5 68 77 96
250 269 509921 5-10-5 25 47 97
251 270 509922 5-10-5 28 46 99
252 271 509923 5-10-5 19 40 101
253 272 505319 5-10-5 69 66 103
254 273 509924 5-10-5 9 39 105
254 267 510023 2-10-2 19 15 107
255 274 509925 5-10-5 26 55 108
255 268 510024 2-10-2 0 5 110
256 275 505320 5-10-5 62 68 111
256 269 510025 2-10-2 0 8 113
257 270 510026 2-10-2 7 21 114
258 271 510027 2-10-2 0 0 116
259 272 510028 2-10-2 0 0 118
260 273 510029 2-10-2 0 9 119
261 274 510030 2-10-2 0 0 120
262 281 505321 5-10-5 53 54 121
265 284 505322 5-10-5 59 60 122
293 312 505323 5-10-5 65 77 123
296 315 505324 5-10-5 78 83 124
302 321 505325 5-10-5 71 80 125
360 379 505326 5-10-5 76 84 126
366 385 505327 5-10-5 77 83 127
369 388 505328 5-10-5 65 78 128
384 397 510031 2-10-2 0 16 130
385 398 510032 2-10-2 0 0 131
386 399 510033 2-10-2 1 21 133
387 400 510034 2-10-2 8 28 134
388 401 510035 2-10-2 0 0 135
411 430 505329 5-10-5 58 72 136
411 424 510036 2-10-2 6 11 138
412 431 509926 5-10-5 20 54 139
412 425 510037 2-10-2 0 10 141

413 432 509927 5-10-5 56 76 142
413 426 510038 2-10-2 54 68 144
414 433 505330 5-10-5 66 81 20
414 427 510039 2-10-2 60 74 146
415 428 510040 2-10-2 33 39 148
416 429 510041 2-10-2 30 58 150
417 430 510042 2-10-2 34 57 152
418 431 510043 2-10-2 0 2 154
419 432 510044 2-10-2 0 29 156
420 433 510045 2-10-2 3 31 158
421 434 510046 2-10-2 0 0 160
422 435 510047 2-10-2 0 0 162
423 436 510048 2-10-2 0 0 163
424 437 510049 2-10-2 0 0 164
454 473 505331 5-10-5 60 77 165
457 476 505332 5-10-5 55 74 166
458 471 510050 2-10-2 47 47 169
459 472 510051 2-10-2 35 55 170
460 473 510052 2-10-2 27 41 171
463 482 505333 5-10-5 66 78 172
466 485 505334 5-10-5 53 63 173
472 491 505335 5-10-5 70 76 174
475 494 505336 5-10-5 64 77 175
670 689 146823 5-10-5 74 79 180
670 683 510053 2-10-2 18 20 182
671 684 510054 2-10-2 13 21 183
672 685 510055 2-10-2 4 2 184
673 692 505337 5-10-5 60 72 185
679 698 505338 5-10-5 62 75 186
682 701 505339 5-10-5 81 90 187
688 707 505340 5-10-5 67 81 189
691 710 505341 5-10-5 68 80 193
691 704 510056 2-10-2 0 0 195
692 705 510057 2-10-2 37 48 196
693 706 510058 2-10-2 44 59 197
697 716 505342 5-10-5 80 87 198
738 751 510059 2-10-2 0 0 200
739 752 510060 2-10-2 0 0 202
740 753 510061 2-10-2 23 19 203
741 754 510062 2-10-2 25 30 204
756 775 505343 5-10-5 62 71 205
823 842 505344 5-10-5 52 66 206
1170 1189 505345 5-10-5 83 81 207

1259 1278 505346 5-10-5 84 81 210
1262 1281 505347 5-10-5 89 84 212
1268 1287 505348 5-10-5 78 78 213
1271 1290 505349 5-10-5 74 77 214
1277 1296 505350 5-10-5 75 77 215
1280 1299 505351 5-10-5 49 62 216
1283 1302 505352 5-10-5 70 66 217
1286 1305 505353 5-10-5 62 60 218
1413 1426 510063 2-10-2 0 0 219
1515 1534 505354 5-10-5 85 75 220
1518 1537 505355 5-10-5 81 74 221
1521 1540 505356 5-10-5 57 52 222
1550 1563 510064 2-10-2 0 0 223
1577 1596 146786 5-10-5 94 85 224
1580 1599 505357 5-10-5 86 79 225
1583 1602 505358 5-10-5 89 79 226
1586 1605 505359 5-10-5 82 68 227
1655 1674 505360 5-10-5 84 74 228
1706 1719 510065 2-10-2 0 0 229
1806 1825 505361 5-10-5 66 66 238
1809 1828 505362 5-10-5 52 59 239
1812 1831 505363 5-10-5 72 75 240
1815 1834 505364 5-10-5 73 80 241
1818 1837 505365 5-10-5 68 82 242
1821 1840 505366 5-10-5 50 76 243
1824 1843 505367 5-10-5 58 76 246
1826 1839 510066 2-10-2 0 31 248
1827 1846 505368 5-10-5 71 84 249
1861 1880 146787 5-10-5 25 35 250
1864 1883 505369 5-10-5 29 65 251
1865 1878 510067 2-10-2 0 0 253
1866 1879 510068 2-10-2 0 20 255
1867 1886 505370 5-10-5 45 70 63
1867 1880 510069 2-10-2 0 0 257
1868 1881 510070 2-10-2 0 0 259
1869 1882 510071 2-10-2 0 0 261
1870 1889 505371 5-10-5 48 66 69
1870 1883 510072 2-10-2 0 0 263
1871 1884 510073 2-10-2 0 0 265
1872 1885 510074 2-10-2 0 2 267
1873 1892 505372 5-10-5 48 67 268
1873 1886 510075 2-10-2 0 0 270
1876 1895 505373 5-10-5 23 48 272

1879 1898 505374 5-10-5 0 34 273
1882 1901 505375 5-10-5 39 66 274
1885 1904 505376 5-10-5 0 40 275
1888 1907 505377 5-10-5 4 47 276
1891 1910 505378 5-10-5 65 77 277
1918 1931 510076 2-10-2 0 0 279
1919 1932 510077 2-10-2 0 0 281
1920 1933 510078 2-10-2 0 0 282
1921 1934 510079 2-10-2 18 50 283
1957 1976 505379 5-10-5 42 84 284
2270 2283 510080 2-10-2 0 0 286
2271 2284 510081 2-10-2 0 0 287
2272 2285 510082 2-10-2 0 10 288
2368 2387 505380 5-10-5 29 79 289
2378 2391 510083 2-10-2 0 0 291
2379 2392 510084 2-10-2 31 17 293
2380 2393 510085 2-10-2 0 8 295
2381 2394 510086 2-10-2 10 2 297
2420 2439 505381 5-10-5 30 86 299
2459 2478 505382 5-10-5 16 87 300
2819 2838 505383 5-10-5 26 81 301
2825 2838 510087 2-10-2 0 0 307
2873 2892 505384 5-10-5 31 59 308
3161 3180 146833 5-10-5 55 76 309
3163 3182 505385 5-10-5 58 83 310

Пример 4: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepAD38 (Tet-HBV) химерными олигонуклеотидами МОЕ

Некоторые антисмысловые олигонуклеотиды из исследования, описанного в Примерах 1 и 2, испытали на их влияние на мРНК HBV in vitro. Культивированные клетки HepAD38 (Tet-HBV) при плотности 45000 клеток на лунку трансфицировали при помощи электропорации 15000 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПНР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3372. При помощи набора затравочных зондов RTS3373MGB измерили также уровни мРНК. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены в Таблице 4 как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Таблица 4
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV МОЕ химерными олигонуклеотидами (RTS3372 и RTS3373MGB)
Сайт инициации Терминирующий сайт № ISIS Мотив RTS3372% ингибирование RTS3373MGB % ингибирование SEQ ID NO
62 77 509941 3-10-3 36 5 86
245 260 509942 3-10-3 3 0 93
245 261 510088 3-10-4 24 10 5
246 261 509943 3-10-3 27 13 95
250 265 509944 3-10-3 46 34 98
250 266 510089 3-10-4 61 33 6
251 266 509945 3-10-3 54 43 100
251 267 510090 3-10-4 58 32 7
252 267 509946 3-10-3 50 28 102
252 268 510091 3-10-4 60 42 8
253 268 509947 3-10-3 49 40 104
253 269 510092 3-10-4 40 9 9
254 269 509948 3-10-3 13 22 106
254 270 510093 3-10-4 39 2 10
255 270 509949 3-10-3 33 24 109
255 271 510094 3-10-4 40 16 11
256 271 509950 3-10-3 31 23 112
256 272 510095 3-10-4 24 6 12
257 273 510096 3-10-4 62 44 13
258 273 509952 3-10-3 42 40 115
258 274 510097 3-10-4 65 48 14
259 274 509953 3-10-3 35 29 117
384 399 509954 3-10-3 35 18 129
384 400 510098 3-10-4 62 43 15
385 401 510099 3-10-4 67 50 16
386 401 509955 3-10-3 44 37 132
411 426 509956 3-10-3 67 53 137
411 427 510100 3-10-4 88 69 17
412 427 509957 3-10-3 86 76 140
412 428 510101 3-10-4 71 46 18
413 428 509958 3-10-3 78 74 143
413 429 510102 3-10-4 77 52 19
414 433 505330 5-10-5 81 60 20
414 429 509959 3-10-3 62 49 145
414 430 510103 3-10-4 9 5 21
415 434 509928 5-10-5 81 66 22
415 430 509960 3-10-3 67 57 147
415 431 510104 3-10-4 71 57 23

416 435 509929 5-10-5 82 69 24
416 431 509961 3-10-3 62 43 149
416 432 510105 3-10-4 81 64 25
417 436 509930 5-10-5 74 45 26
417 432 509962 3-10-3 59 48 151
417 433 510106 3-10-4 86 70 27
418 437 146783 5-10-5 19 3 28
418 433 509963 3-10-3 48 28 153
418 434 510107 3-10-4 74 51 29
419 434 509964 3-10-3 50 39 155
419 435 510108 3-10-4 67 50 30
420 435 509965 3-10-3 49 38 157
420 436 510109 3-10-4 12 13 31
421 436 509966 3-10-3 23 22 159
421 437 510110 3-10-4 34 16 32
422 437 509967 3-10-3 3 12 161
457 472 509968 3-10-3 56 38 167
457 473 510111 3-10-4 68 51 33
458 473 509969 3-10-3 53 39 168
639 658 146784 5-10-5 0 0 34
639 654 509970 3-10-3 51 15 176
639 655 510112 3-10-4 66 32 35
640 656 510113 3-10-4 70 31 36
641 656 509971 3-10-3 54 31 177
641 657 510114 3-10-4 67 45 37
642 657 509972 3-10-3 51 25 178
642 658 510115 3-10-4 73 50 38
643 658 509973 3-10-3 49 32 179
670 685 509974 3-10-3 74 67 181
687 706 509931 5-10-5 92 83 39
687 702 509975 3-10-3 72 71 188
687 703 510116 3-10-4 83 74 40
688 703 509976 3-10-3 46 52 190
688 704 510117 3-10-4 71 57 41
689 704 509977 3-10-3 18 22 191
689 705 510118 3-10-4 71 50 42
690 705 509978 3-10-3 57 37 192
690 706 510119 3-10-4 80 64 43
691 706 509979 3-10-3 65 55 194
738 753 509980 3-10-3 48 44 199
738 754 510120 3-10-4 70 54 44
739 754 509981 3-10-3 54 45 201
1176 1191 509982 3-10-3 44 36 208

1176 1192 510121 3-10-4 74 69 45
1177 1192 509983 3-10-3 57 53 209
1261 1276 509984 3-10-3 57 50 211
1778 1797 509932 5-10-5 30 76 46
1778 1793 509985 3-10-3 0 46 230
1778 1794 510122 3-10-4 0 60 47
1779 1798 509933 5-10-5 54 78 48
1779 1794 509986 3-10-3 56 81 231
1779 1795 510123 3-10-4 74 85 49
1780 1799 509934 5-10-5 69 84 50
1780 1795 509987 3-10-3 52 78 232
1780 1796 510124 3-10-4 75 84 51
1781 1800 509935 5-10-5 72 85 52
1781 1796 509988 3-10-3 57 68 232
1781 1797 510125 3-10-4 68 72 53
1782 1797 509989 3-10-3 46 41 234
1782 1798 510126 3-10-4 56 51 54
1783 1798 509990 3-10-3 16 25 234
1783 1799 510127 3-10-4 61 69 55
1784 1799 509991 3-10-3 41 41 236
1784 1800 510128 3-10-4 61 68 56
1785 1800 509992 3-10-3 43 43 237
1822 1837 509993 3-10-3 72 44 244
1822 1838 510129 3-10-4 66 33 57
1823 1838 509994 3-10-3 79 32 245
1823 1839 510130 3-10-4 49 31 58
1824 1839 509995 3-10-3 63 30 247
1865 1884 509936 5-10-5 74 59 59
1865 1880 509996 3-10-3 36 0 252
1865 1881 510131 3-10-4 26 0 60
1866 1885 509937 5-10-5 78 63 61
1866 1881 509997 3-10-3 5 0 254
1866 1882 510132 3-10-4 37 4 62
1867 1886 505370 5-10-5 54 17 63
1867 1882 509998 3-10-3 13 0 256
1867 1883 510133 3-10-4 42 25 64
1868 1887 509938 5-10-5 9 6 65
1868 1883 509999 3-10-3 47 6 258
1868 1884 510134 3-10-4 56 27 66
1869 1888 509939 5-10-5 64 29 67
1869 1884 510000 3-10-3 24 1 260
1869 1885 510135 3-10-4 70 43 68
1870 1889 505371 5-10-5 63 46 69

1870 1885 510001 3-10-3 39 12 262
1870 1886 510136 3-10-4 52 23 70
1871 1886 510002 3-10-3 10 0 264
1871 1887 510137 3-10-4 28 0 71
1872 1887 510003 3-10-3 21 0 266
1872 1888 510138 3-10-4 25 7 72
1873 1888 510004 3-10-3 21 38 269
1873 1889 510139 3-10-4 18 0 73
1874 1889 510005 3-10-3 8 0 271
1918 1933 510006 3-10-3 0 0 278
1918 1934 510140 3-10-4 81 67 74
1919 1934 510007 3-10-3 69 66 280
2270 2285 510008 3-10-3 23 0 285
2378 2397 509940 3-10-4 66 7 75
2378 2393 510009 3-10-3 23 0 290
2378 2394 510141 3-10-4 10 11 76
2379 2394 510010 3-10-3 39 6 292
2379 2395 510142 3-10-4 46 24 77
2380 2395 510011 3-10-3 33 23 294
2380 2396 510143 3-10-4 59 36 78
2381 2396 510012 3-10-3 38 22 296
2381 2397 510144 3-10-4 54 20 79
2382 2397 510013 3-10-3 42 0 298
2820 2835 510014 3-10-3 51 9 302
2820 2836 510145 3-10-4 68 19 80
2821 2836 510015 3-10-3 35 2 303
2821 2837 510146 3-10-4 65 15 81
2822 2837 510016 3-10-3 9 0 304
2822 2838 510147 3-10-4 30 0 85
2823 2838 510017 3-10-3 18 0 305
2824 2839 510018 3-10-3 24 5 306

Пример 5: Зависимое от дозы ингибирование вирусной РНК HBV в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Некоторые химерные олигонуклеотиды из исследования, описанного в Примерах 3 и 4, испытали при различных дозах в клетках HepG2.2.15 человека. Клетки поместили на планшет при плотности 25000 клеток на лунку и трансфицировали электропорацией антисмысловыми олигонуклеотидами в концентрациях 2, 5 мкМ, 5,0 мкМ, 10,0 мкМ и 20,0 мкМ, как показано в Таблице 5. Примерно через 16 часов обработки, РНК выделили из клеток, и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Полумаксимальные ингибирующие концентрации (IC50) каждого олигонуклеотида также представлены в Таблице 5. Как показано в Таблице 5, в клетках, обработанных антисмысловыми олигонуклеотидами, существенно снизились уровни мРНК HBV зависимым от дозы образом.

Таблица 5
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15 с использованием RTS3370
№ ISIS 2, 5 мкМ 5,0 мкМ 10,0 мкМ 20,0 мкМ IC50 (мкМ)
146786 33 50 54 81 5,7
505317 35 40 63 67 6,6
505323 16 33 48 63 11,1
505326 27 44 64 67 6,9
509929 21 44 60 62 8,4
509931 51 63 75 75 <2, 5
509957 37 53 57 70 5,4
509974 25 35 54 63 9, 5
509975 36 55 62 81 4,7
509981 7 23 35 52 18,8
510039 27 46 60 69 6,9
510040 10 28 43 59 13,4
510041 29 41 53 66 8,3
510058 9 34 42 63 11,9

Пример б: Зависимое от дозы ингибирование вирусной РНК HBV в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Дополнительные химерные олигонуклеотиды из исследования, описанного в Примерах 3 и 4, дополнительно испытали при различных дозах в клетках HepG2.2.15 человека. Клетки поместили на планшет при плотности 28000 клеток на лунку и трансфицировали при помощи реагента LipofectAMINE 2000® антисмысловыми олигонуклеотидами в концентрациях 15,625 нМ, 31,25 нМ, 62, 5 нМ, 125,0 нМ и 250,0 нМ, как показано в Таблице 6. Примерно через 16 часов обработки, РНК выделили из клеток, и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК

HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Полумаксимальные ингибирующие концентрации (IC50) каждого олигонуклеотида также представлены в Таблице 6. Как показано в Таблице 6, в некоторых клетках, обработанных антисмысловыми олигонуклеотидами, существенно снизились уровни мРНК HBV зависимым от дозы образом.

Таблица 6
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15 с использованием RTS3370
№ ISIS 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125,0 нМ 250,0 нМ IC50 (нМ)
146779 14 25 44 70 78 73,1
146786 10 35 64 85 93 49,4
146833 12 16 32 62 72 99,8
505317 19 31 44 69 83 65,2
505319 5 11 24 39 69 152,8
505323 2 11 26 68 90 85,4
505326 1 15 45 72 89 73,7
505327 0 4 12 56 74 128, 5
505329 3 16 33 51 64 130,4
505339 26 32 59 82 92 46,0
505342 10 4 34 69 74 95,7
505347 20 26 41 70 92 63,0
505356 0 0 0 38 69 182,0
505358 8 28 47 71 84 67,9
505382 5 0 3 26 19 >250,0
509926 0 6 18 42 67 159,3
509927 3 17 33 55 76 103,2
509929 7 19 36 60 69 102,9
509931 18 28 52 76 87 57,4
509934 14 14 40 61 76 89,3
509957 20 28 51 71 79 63,1
509958 12 17 37 56 76 96,4
509959 12 11 18 59 70 121,7
509960 9 19 30 57 74 103,4
509972 15 6 17 27 45 >250,0
509974 25 35 57 83 92 45,3
509975 33 44 45 61 80 53,1
509981 0 15 11 35 60 224,4
510007 0 0 15 31 45 >250,0

510038 12 19 48 73 84 68,9
510039 17 25 44 69 72 77,3
510040 17 20 23 59 72 108,6
510041 11 21 43 64 79 80, 5
510050 3 21 16 51 70 132,4
510058 7 9 16 22 46 >250,0
510079 0 6 11 29 32 >250,0
510100 18 34 50 79 83 56,1
510106 23 25 35 69 74 78,4
510116 20 44 65 79 91 42,6
510140 7 28 30 55 58 136, 5

При помощи набора затравочных зондов RTS3371 измерили также уровни мРНК. Результаты представлены в Таблице 7.

Таблица 7
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15 с использованием RTS3371
№ ISIS 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125,0 нМ 250,0 нМ IC50 (нМ)
146779 16 7 38 69 68 96,9
146786 28 39 65 86 93 35
146833 26 22 52 61 65 82,3
505317 18 33 40 77 84 61,4
505319 0 0 0 15 55 >250,0
505323 0 0 33 66 87 100, 5
505326 0 21 7 57 85 114,6
505327 0 0 40 50 63 132,3
505329 11 22 35 66 77 90,7
505342 15 0 1 40 59 190,1
505347 3 35 44 65 90 68,4
505356 0 0 3 42 76 153,2
505358 20 11 39 71 78 79,7
505382 0 0 0 0 0 >250,0
509926 0 4 14 55 72 130,6
509927 11 25 31 61 78 88,4
509929 11 26 41 70 77 75,8
509931 25 39 55 79 85 46,6
509934 0 25 32 54 65 119,9
509957 25 44 48 74 80 50,6
509958 24 18 20 57 72 114, 5
509959 2 9 31 52 65 132,3

509960 16 28 22 57 75 101,8
509972 3 5 1 39 60 236,3
509974 38 46 65 83 94 31,2
509975 30 7 24 49 67 148,2
509981 22 22 23 46 58 194,7
510007 3 0 15 33 39 >250,0
510038 16 22 50 76 84 62,9
510039 23 36 32 70 68 79,7
510040 18 15 41 59 67 101,9
510041 0 27 38 62 81 84, 5
510050 1 16 17 52 63 149
510058 20 19 40 44 51 214,1
510079 0 2 5 41 49 >250,0
510100 35 52 61 86 90 30,7
510106 27 23 5 75 81 87,9
510116 11 44 70 72 94 46, 5
510140 0 18 26 45 41 >250,0

Пример 7: Переносимость МОЕ химерных олигонуклеотидов, направленных на HBV, у мышей BALB/c

Мыши BALB/c mice (Charles River, штат Массачусетс) представляют собой многоцелевую модель мышей, которую часто использвют для испытаний безопасности и эффективности. Мышей обработали антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, выбранными из исследований, описанных выше, и оценили изменения уровней различных метаболических маркеров.

Испытание 1

Каждой мыши из группы четырех мышей BALB/c дважды в неделю, в течение 3 недель, подкожно вводили 50 мг/кг ISIS 146779, ISIS 146786, ISIS 505317, ISIS 505319, ISIS 505330, ISIS 505332, ISIS 505339, ISIS 505346, ISIS 505347, ISIS 505358, ISIS 509929, ISIS 509931, ISIS 509932, ISIS 509934, ISIS 509957, ISIS 510100, ISIS 510106, ISIS 510116 и ISIS 510140. Группе из четырех мышей BALB/c дважды в неделю, в течение 3 недель, подкожно вводили 50 мг/кг ISIS 141923 (CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC (SEQ ID NO:320)), МОЕ химерного олигонуклеотида 5-10-5 без известной гомологии с какой-либо генной последовательностью человека или мыши. Другой группе из 4 мышей BALB/c дважды в неделю, в течение 3 недель, подкожно вводили PBS. Эта группа мышей служила в качестве контрольной группы. Через три дня после последней дозы в каждой временной точке измерили вес тела, мышей умертвили и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Вес тела и органов

Вес тела мышей измерили перед введением дозы и в конце каждого периода обработки. Вес тела представлен в Таблице 8 и выражен как процентное изменение от веса, измеренного перед началом обработки. В конце исследования измерили вес печени, селезенки и почек, значения представлены в Таблице 9 как процентная разница от веса соответствующего органа контрольного образца с PBS. Результаты показывают, что большинство олигонуклеотидов ISIS не приводят к каким-либо неблагоприятным эффектам на вес тела или органов.

Таблица 8
Изменение веса тела мышей BALB/c после обработки антисмысловым олигонуклеотидом (%)
Вес тела
PBS 9
ISIS 141923 9
ISIS 146779 11
ISIS 146786 9
ISIS 505317 10
ISIS 505319 14
ISIS 505330 11
ISIS 505332 10
ISIS 505339 14
ISIS 505346 12
ISIS 505347 16
ISIS 505358 12
ISIS 509929 8
ISIS 509931 9
ISIS 509932 21
ISIS 509934 14
ISIS 509957 10
ISIS 510100 10
ISIS 510106 15
ISIS 510116 16
ISIS 510140 19
Таблица 9
Изменение веса органов мышей BALB/c после обработки антисмысловым олигонуклеотидом (%)
Печень Почки Селезенка
PBS - - -
ISIS 141923 3 -3 -9
ISIS 146779 10 1 13
ISIS 146786 19 -3 4

ISIS 505317 -4 -7 9
ISIS 505319 1 -16 23
ISIS 505330 12 -4 9
ISIS 505332 7 -2 14
ISIS 505339 5 -6 7
ISIS 505346 7 -6 0
ISIS 505347 12 -7 5
ISIS 505358 8 0 3
ISIS 509929 17 14 200
ISIS 509931 -4 -9 3
ISIS 509932 18 -9 79
ISIS 509934 6 -6 2
ISIS 509957 0 -2 15
ISIS 510100 2 1 8
ISIS 510106 5 -2 58
ISIS 510116 12 -8 7
ISIS 510140 20 -8 49

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на печеночную функцию, измерили концентрации трансаминаз в плазме при помощи автоматического клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили концентрации ALT (аланин-трансаминазы) и AST (аспартат-трансаминазы) в плазме и представили результаты, выраженные в МЕ/л, в Таблице 10. Измерили также уровни холестерина и триглицеридов в плазме, используя тот же клинический анализатор химического состава, и также представили результаты в Таблице 10.

Таблица 10
Влияние обработки антисмысловым олигонуклеотидом на метаболические маркеры в печени мышей BALB/c
ALT (МЕ/л) AST (МЕ/л) Холестерин (мг/дл) Триглицериды (мг/дл)
PBS 37 58 114 238
ISIS 141923 36 57 114 234
ISIS 146779 43 56 121 221
ISIS 146786 53 76 118 327
ISIS 505317 68 103 117 206
ISIS 505319 136 152 144 168
ISIS 505330 281 194 119 188
ISIS 505332 67 70 123 226

ISIS 505339 113 111 135 249
ISIS 505346 56 63 128 234
ISIS 505347 79 83 122 347
ISIS 505358 78 175 112 214
ISIS 509929 111 166 61 175
ISIS 509931 635 508 110 179
ISIS 509932 92 113 118 131
ISIS 509934 38 89 97 176
ISIS 509957 159 229 85 173
ISIS 510100 90 87 86 222
ISIS 510106 61 88 79 239
ISIS 510116 70 95 124 214
ISIS 510140 1247 996 161 167

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на почечную функцию, измерили концентрации азота мочевины крови (BUN) при помощи автоматического клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в Таблице 11.

Таблица 11
Влияние обработки антисмысловым олигонуклеотидом на почечные маркеры мышей BALB/c
BUN (мг/дл)
PBS 29
ISIS 141923 29
ISIS 146779 28
ISIS 146786 30
ISIS 505317 30
ISIS 505319 30
ISIS 505330 29
ISIS 505332 28
ISIS 505339 29
ISIS 505346 27
ISIS 505347 26
ISIS 505358 26
ISIS 509929 25
ISIS 509931 23
ISIS 509932 28
ISIS 509934 25

ISIS 509957 24
ISIS 510100 27
ISIS 510106 27
ISIS 510116 25
ISIS 510140 22

Испытание 2

Каждой мыши из группы четырех мышей BALB/c дважды в неделю, в течение 3 недель, подкожно вводили 50 мг/кг ISIS 505329, ISIS 509926, ISIS 509927, ISIS 509958, ISIS 509959, ISIS 509960, ISIS 509974, ISIS 509975, ISIS 510038, ISIS 510039, ISIS 510040, ISIS 510041 и ISIS 510050. Группе из 4 мышей BALB/c дважды в неделю, в течение 3 недель, подкожно вводили PBS. Эта группа мышей служила в качестве контрольной группы. Через три дня после последней дозы в каждой временной точке измерили вес тела, мышей умертвили и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Вес органов

В конце исследования измерили вес печени, селезенки и почек, и значения также представлены в Таблице 12 как процентное изменение от веса соответствующего органа контрольного образца с PBS.

Таблица 12
Изменение веса органов мышей BALB/c после обработки антисмысловым олигонуклеотидом (%)
№ ISIS Печень Почки Селезенка
505329 12 2 12
509926 23 3 30
509927 8 -4 27
509958 1 -4 9
509959 7 0 26
509960 16 6 30
509974 5 8 7
509975 1 -1 7
510038 6 4 23
510039 0 15 9
510040 3 1 2
510041 6 6 10
510050 5 5 18

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на печеночную функцию, измерили концентрации трансаминаз в плазме при помощи автоматического клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Измерили концентрации ALT (аланин-трансаминазы) и AST (аспартат-трансаминазы) в плазме и представили результаты, выраженные в МЕ/л, в Таблице 13.

Таблица 13
Влияние обработки антисмысловым олигонуклеотидом на трансаминазы (МЕ/л) в печени мышей BALB/c
ALT AST
PBS 37 78
ISIS 505329 48 65
ISIS 509926 77 120
ISIS 509927 71 92
ISIS 509958 106 105
ISIS 509959 119 122
ISIS 509960 40 66
ISIS 509974 38 43
ISIS 509975 33 45
ISIS 510038 69 66
ISIS 510039 32 61
ISIS 510040 83 113
ISIS 510041 32 45
ISIS 510050 26 47

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на почечную функцию, измерили концентрации азота мочевины крови (BUN) при помощи автоматического клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк). Результаты, выраженные в мг/дл, представлены в Таблице 14.

Таблица 14
Влияние обработки антисмысловым олигонуклеотидом на почечные маркеры мышей BALB/c
BUN
PBS 21
ISIS 505329 22
ISIS 509926 20
ISIS 509927 20
ISIS 509958 22
ISIS 509959 21
ISIS 509960 20
ISIS 509974 19
ISIS 509975 19
ISIS 510038 19
ISIS 510039 19
ISIS 510040 22
ISIS 510041 18
ISIS 510050 22

Пример 8: Завимое от дозы подтверждение направленного действия МОЕ химерных олигонуклеотидов на HBV в клетках HepG2.2.15

Химерные олигонуклеотиды выбрали на основании сохранения последовательности, активности и переносимости, по результатам измерения в исследовании, описанном в Примерах 7 и 8, и испытали в различных дозах на клетках HepG2.2.15. Клетки поместили на планшет при плотности 28000 клеток на лунку и трансфицировали при помощи реагента LipofectAMINE 2000 антисмысловым олигонуклеотидом в концентрациях 15,625 нМ, 31,25 нМ, 62, 5 нМ, 125,0 нМ и 250,0 нМ. Через два дня после трансфекции среду заменили свежей средой. Образцы собрали через 4 дня после трансфекции. В надосадочной жидкости измерили уровни ДНК, РНК, HBsAg и HBeAg.

Уровни мРНК HBV измерили количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками. Как показано в Таблице 15, уровни мРНК HBV снизились зависимым от дозы образом в большинстве клеток, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом.

Антигены HBV в надосадочных жидкостях обнаружили при помощи иммуноферментого анализа твердофазного (ELISA). Уровни антигена HBs (HBsAg) обнаружили иммуноферментным твердофазным анализом компании Abazyme LLC, штат Массачусетс. Как показано в Таблице 16, обработка олигонуклеотидами ISIS 146779, 146786, 505329, 505330, 505339, 505347, 505358, 509927, 509934, 509958, 509959, 509960, 509974, 5100038, 510039, 510040, 510041, 510100, 510106 и 510116 вызвала существенное снижение уровней HBsAg. Уровни антигена НВе (HBeAg) обнаружили иммуноферментным твердофазным анализом компании International Immune-diagnostics, штат Калифорния. Как показано в Таблице 17, обработка олигонуклеотидами ISIS 146779, 146786, 505329, 505330, 505339, 505347, 505358, 509927, 509934, 509958, 509959, 509960, 509974, 5100038, 510039, 510040, 510041, 510100, 510106 и 510116 вызвала существенное снижение уровней HBeAg. Уровни ДНК HBV измерили при помощи набора затравочных зондов RTS3370. Как показано в Таблице 18, обработка олигонуклеотидами ISIS 146779, 146786, 505329, 505330, 505339, 505347, 505358, 509927, 509934, 509958, 509959, 509960, 509974, 5100038, 510039, 510040, 510041, 510100, 510106 и 510116 вызвала существенное снижение уровней ДНК HBV. Общее содержание белка в надосадочных жидкостях измерили DC анализом белка (BioRad), как показано в Таблице 19.

Таблица 15
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15
№ ISIS 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125 нМ 250 нМ
146779 10 25 42 64 95
146786 23 59 78 84 90
505329 45 49 57 69 83
505330 31 61 65 80 93
505339 31 56 78 89 97
505347 30 50 72 87 96
505358 28 52 75 86 95
509927 41 61 67 61 76
509934 38 61 64 82 58
509958 50 67 72 79 89
509959 50 63 73 80 86
509960 63 61 72 82 74
509974 29 44 75 91 96
510038 29 40 85 89 93
510039 32 34 63 84 84
510040 18 0 51 71 77
510041 34 53 67 76 71
510100 29 64 70 89 93
510106 28 65 64 81 85
510116 13 34 78 89 95
Таблица 16
Зависимое от дозы снижение антигена S в надосадочной жидкости клеток HepG2.2.15
№ ISIS 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125 нМ
146779 40 58 80 92
146786 47 75 92 98

505329 37 58 71 89
505330 45 66 84 95
505339 62 79 93 96
505347 68 71 89 97
505358 69 83 92 96
509927 54 74 88 94
509934 40 59 78 89
509958 57 77 91 93
509959 54 72 84 100
509960 44 72 91 91
509974 58 77 92 95
510038 58 78 94 98
510039 53 74 89 95
510040 39 70 80 90
510041 47 65 82 92
510100 74 83 95 96
510106 54 75 86 92
510116 61 74 91 94
Таблица 17
Зависимое от дозы снижение антигена Е в надосадочной жидкости клеток HepG2.2.15
№ ISIS 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125 нМ
146779 14 45 66 76
146786 26 58 75 80
505329 19 26 60 73
505330 28 70 69 80
505339 31 57 77 82
505347 24 33 64 77
505358 26 45 72 81
509927 34 54 72 79
509934 21 42 59 73
509958 29 45 72 77
509959 60 64 77 80
509960 19 36 67 77
509974 16 48 72 80
510038 20 35 79 80
510039 14 41 64 78
510040 0 8 37 69
510041 9 34 63 76
510100 26 52 73 81

510106 7 42 62 76
510116 27 56 76 81
Таблица 18
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование ДНК HBV в клетках HepG2.2.15
№ ISIS 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125 нМ
146779 71 71 84 85
146786 67 81 82 75
505329 53 65 72 67
505330 72 76 86 90
505339 83 85 89 88
505347 76 78 81 87
505358 79 82 90 87
509927 51 75 78 69
509934 61 60 64 75
509958 57 73 69 71
509959 59 54 73 73
509960 48 66 63 54
509974 76 90 84 85
510038 69 76 90 87
510039 70 79 81 86
510040 40 67 68 68
510041 53 71 62 68
510100 76 81 87 87
510106 46 74 73 76
510116 79 84 89 86
Таблица 19
Общие уровни белка в надосадочной жидкости клеток HepG2.2.15
15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125 нМ
PBS 5601 5601 5601 5601
146779 6491 6631 6027 5067
146786 5408 5328 4839 3518
505329 5719 5285 5384 4994
505330 7514 7262 6627 5179
505339 6572 6343 5349 4550
505347 7315 6602 6378 5908
505358 6357 6871 5798 5720

509927 5581 5487 5145 3601
509934 5476 5610 5394 4127
509958 5193 5492 5071 3957
509959 5051 5312 5144 3893
509960 4726 5160 5071 3305
509974 6913 7624 5798 5389
510038 5707 6381 5772 6733
510039 5981 7629 4802 6156
510040 4302 5209 5049 4188
510041 5565 5607 5205 3757
510100 8466 8378 7985 6402
510106 5703 5940 5231 4005
510116 5880 5380 4797 4757

Пример 9: In vivo ингибирование мРНК HBV МОЕ химерными олигонуклеотиды у HBV-трансгенных мышей

ISIS 146786, МОЕ химерный олигонуклеотид 5-10-5, и ISIS 510100, МОЕ химерный олигонуклеотид 3-10-4 МОЕ, демонстрирующие существенное ингибирование мРНК HBV, испытали на трансгенных мышах, содержащих ген HBV (линия Chisari 1.3.32) (Guidotti, L.G. et al., J. Virol. 1995, 69, 6158-6169) и оценили эффективность указанных химерных олигонуклеотидов.

Обработка

Двум группам по десять-одиннадцать HBV-трансгенных самцов и самок мышей дважды в неделю, в течение четырех недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786 или ISIS 510100. Другой группе из 14 самцов и самок HBV-трансгенных мышей вводили энтекавир, пероральное противовирусное лекарство, которое используют для лечения инфекции гепатита В, в дозе 1 мг/кг, ежедневно в течение двух недель. Другой группе из 10 самцов и самок HBV-трансгенных самок мышей подкожно вводили PBS дважны в неделю, в течение четырех недель. Мышей, которым делали инъекции PBS, использовали в качестве контрольной группы. Измерили уровни мРНК и ДНК HBV, ALT в плазме и вес тела и органов.

Анализ РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР HBV в реальном времени, используя наборы затравочных зондов RTS3370, RTS3371 и RTS3372. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК HBV, по сравнению с контрольным образцом с PBS. Как показано в Таблице 20, обработка антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS привела к существенному снижению мРНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом, независимо от набора затравочных зондов, использованного для измерения. Энтекавир не снижает экспрессию мРНК HBV.

Таблица 20
Ингибирование мРНК HBV в печени HBV-трансгенных мышей по сравнению с PBS контролем
№ ISIS RTS3370 RTS3371 RTS3372
146786 82 75 81
510100 93 83 89

Анализ ДНК

ДНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР HBV в реальном времени, используя наборы затравочных зондов RTS3370 и RTS3371. Уровни нормализовали к RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом с PBS. Как показано в Таблице 21, обработка антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS привела к существенному снижению ДНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом, независимо от набора затравочных зондов, использованного для измерения. Обработка энтекавиром, как и ожидалось, также снижает уровни ДНК.

Таблица 21
Ингибирование ДНК HBV в печени HBV-трансгенных мышей по сравнению с PBS контролем
№ ISIS RTS3370 RTS3371
146786 65 69
510100 67 73
Энтекавир 75 96

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на печеночную функцию, измерили концентрации трансаминазы в плазме с использованием ручного клинического анализатора химическогосостава (Тесо Diagnostics, Анахайм, штат Калифорния). Измерили концентрации ALT (аланин-трансаминазы) и представили результаты, выраженные в МЕ/л, в Таблице 22. Эти результаты показывают, что антисмысловое ингибирование HBV не вызывает неблагоприятного действия на функцию печени мышей.

Таблица 22
Влияние обработки антисмысловым олигонуклеотидом на ALT в печени трансгенных мышей
МЕ/мл
PBS 12,7
ISIS 146786 24,1
ISIS 510100 25,8
Энтекавир 23,7

Данные этого исследования показывают, что ISIS 146786 and ISIS 510100 вызывают устойчивое снижение РНК и ДНК HBV в печени, и обработка этими олигонуклеотидами хорошо переносится трансгенными мышами.

Пример 10: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. В этот анализ включили также несколько антисмысловых олигонуклеотидов из исследований, описанных выше. Культивированные клетки HepG2.2.15 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблице 23 были разработаны как 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды. Эти химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по пять нуклеозидов. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла, и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла имеет МОЕ модификацию сахара. Каждый нуклеозид в центральном сегменте гэп имеет дезокси-сахарную модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 23, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1).

Таблица 23
Ингибирование уровней мРНК HBV действием химерных антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на SEQ ID NO:1 (RTS3370)
Вирусный сайт инициации Вирусный терминирующий сайт № ISIS Последовательность % ингибирования SEQ ID NO
1 20 524410 TGGTGAAAGGTTGTGGAATT 70 321
4 23 524411 GTTTGGTGAAAGGTTGTGGA 51 322
7 26 524412 AGAGTTTGGTGAAAGGTTGT 47 323
10 29 524413 TGCAGAGTTTGGTGAAAGGT 74 324
13 32 524414 TCTTGCAGAGTTTGGTGAAA 91 325
16 35 524415 GGATCTTGCAGAGTTTGGTG 93 326
19 38 524416 CTGGGATCTTGCAGAGTTTG 85 327
22 41 524417 ACTCTGGGATCTTGCAGAGT 66 328
25 44 524418 CTCACTCTGGGATCTTGCAG 86 329
28 47 524419 CCTCTCACTCTGGGATCTTG 81 330
31 50 524420 AGGCCTCTCACTCTGGGATC 77 331
34 53 524421 TACAGGCCTCTCACTCTGGG 71 332
37 56 524422 AAATACAGGCCTCTCACTCT 68 333
40 59 524423 GGGAAATACAGGCCTCTCAC 43 334
43 62 524424 GCAGGGAAATACAGGCCTCT 76 335
46 65 524425 CCAGCAGGGAAATACAGGCC 89 336
49 68 524426 CCACCAGCAGGGAAATACAG 82 337
52 71 524427 GAGCCACCAGCAGGGAAATA 53 338
55 74 524428 CTGGAGCCACCAGCAGGGAA 76 339
56 75 524429 ACTGGAGCCACCAGCAGGGA 55 340
57 76 524430 AACTGGAGCCACCAGCAGGG 45 341
58 77 146779 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 57 83
59 78 524431 TGAACTGGAGCCACCAGCAG 85 342
60 79 524432 CTGAACTGGAGCCACCAGCA 90 343
61 80 505314 CCTGAACTGGAGCCACCAGC 93 85
62 81 524433 TCCTGAACTGGAGCCACCAG 79 344
63 82 524434 CTCCTGAACTGGAGCCACCA 82 345
65 84 524435 TGCTCCTGAACTGGAGCCAC 78 346
68 87 524436 TACTGCTCCTGAACTGGAGC 58 347
71 90 524437 GTTTACTGCTCCTGAACTGG 40 348
74 93 524438 AGGGTTTACTGCTCCTGAAC 45 349
77 96 524439 AACAGGGTTTACTGCTCCTG 69 350
80 99 524440 CGGAACAGGGTTTACTGCTC 67 351

83 102 524441 AGTCGGAACAGGGTTTACTG 47 352
86 105 524442 AGTAGTCGGAACAGGGTTTA 59 353
89 108 524443 GGCAGTAGTCGGAACAGGGT 47 354
92 111 524444 AGAGGCAGTAGTCGGAACAG 54 355
95 114 524445 GGGAGAGGCAGTAGTCGGAA 49 356
98 117 524446 TAAGGGAGAGGCAGTAGTCG 81 357
101 120 524447 CGATAAGGGAGAGGCAGTAG 86 358
104 123 524448 TGACGATAAGGGAGAGGCAG 79 359
107 126 524449 GATTGACGATAAGGGAGAGG 27 360
110 129 524450 GAAGATTGACGATAAGGGAG 53 361
113 132 524451 CGAGAAGATTGACGATAAGG 67 362
116 135 524452 CCTCGAGAAGATTGACGATA 84 363
119 138 524453 AATCCTCGAGAAGATTGACG 79 364
122 141 524454 CCCAATCCTCGAGAAGATTG 65 365
125 144 524455 GTCCCCAATCCTCGAGAAGA 66 366
128 147 524456 AGGGTCCCCAATCCTCGAGA 67 367
131 150 524457 CGCAGGGTCCCCAATCCTCG 76 368
134 153 524458 CAGCGCAGGGTCCCCAATCC 59 369
137 156 524459 GTTCAGCGCAGGGTCCCCAA 80 370
140 159 524460 CATGTTCAGCGCAGGGTCCC 90 371
143 162 524461 CTCCATGTTCAGCGCAGGGT 75 372
146 165 524462 GTTCTCCATGTTCAGCGCAG 54 373
149 168 524463 GATGTTCTCCATGTTCAGCG 27 374
152 171 524464 TGTGATGTTCTCCATGTTCA 72 375
158 177 524466 TCCTGATGTGATGTTCTCCA 91 376
161 180 524467 GAATCCTGATGTGATGTTCT 77 377
164 183 524468 TAGGAATCCTGATGTGATGT 77 378
167 186 524469 TCCTAGGAATCCTGATGTGA 94 379
170 189 524470 GGGTCCTAGGAATCCTGATG 56 380
188 207 524471 CGCCTGTAACACGAGAAGGG 65 381
191 210 524472 CCCCGCCTGTAACACGAGAA 71 382
194 213 524473 AAACCCCGCCTGTAACACGA 74 383
195 214 524474 AAAACCCCGCCTGTAACACG 72 384
196 215 505315 AAAAACCCCGCCTGTAACAC 52 87
197 216 524475 GAAAAACCCCGCCTGTAACA 38 385
198 217 524476 AGAAAAACCCCGCCTGTAAC 18 386
200 219 524477 CAAGAAAAACCCCGCCTGTA 86 387
203 222 524478 CAACAAGAAAAACCCCGCCT 84 388
204 223 524479 TCAACAAGAAAAACCCCGCC 80 389
205 224 505317 GTCAACAAGAAAAACCCCGC 84 89
206 225 524480 TGTCAACAAGAAAAACCCCG 79 390
207 226 524481 TTGTCAACAAGAAAAACCCC 76 391
209 228 524482 TCTTGTCAACAAGAAAAACC 86 392

212 231 524483 GATTCTTGTCAACAAGAAAA 57 393
215 234 524484 GAGGATTCTTGTCAACAAGA 51 394
218 237 524485 TGTGAGGATTCTTGTCAACA 83 395
221 240 524486 TATTGTGAGGATTCTTGTCA 61 396
224 243 524487 CGGTATTGTGAGGATTCTTG 74 397
227 246 524488 CTGCGGTATTGTGAGGATTC 49 398
230 249 524489 ACTCTGCGGTATTGTGAGGA 67 399
233 252 524490 TAGACTCTGCGGTATTGTGA 88 400
236 255 524491 GTCTAGACTCTGCGGTATTG 84 401
239 258 524492 CGAGTCTAGACTCTGCGGTA 82 402
242 261 524493 CCACGAGTCTAGACTCTGCG 94 403
243 262 524494 ACCACGAGTCTAGACTCTGC 87 404
244 263 146821 CACCACGAGTCTAGACTCTG 87 92
245 264 524495 CCACCACGAGTCTAGACTCT 80 405
246 265 524496 TCCACCACGAGTCTAGACTC 65 406
247 266 505318 GTCCACCACGAGTCTAGACT 65 96
248 267 524497 AGTCCACCACGAGTCTAGAC 46 407
249 268 524498 AAGTCCACCACGAGTCTAGA 54 408
250 269 509921 GAAGTCCACCACGAGTCTAG 35 97
251 270 509922 AGAAGTCCACCACGAGTCTA 51 99
252 271 509923 GAGAAGTCCACCACGAGTCT 49 101
253 272 505319 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 60 103
254 273 509924 GAGAGAAGTCCACCACGAGT 46 105
255 274 509925 TGAGAGAAGTCCACCACGAG 79 108
256 275 505320 TTGAGAGAAGTCCACCACGA 84 111
257 276 524499 ATTGAGAGAAGTCCACCACG 83 409
260 279 524500 AAAATTGAGAGAAGTCCACC 71 410
263 282 524501 TAGAAAATTGAGAGAAGTCC 67 411
266 285 524502 CCCTAGAAAATTGAGAGAAG 88 412
269 288 524503 TCCCCCTAGAAAATTGAGAG 82 413
272 291 524504 AGTTCCCCCTAGAAAATTGA 66 414
275 294 524505 GGTAGTTCCCCCTAGAAAAT 0 415
278 297 524506 CACGGTAGTTCCCCCTAGAA 65 416
281 300 524507 ACACACGGTAGTTCCCCCTA 87 417
284 303 524508 AAGACACACGGTAGTTCCCC 76 418
287 306 524509 GCCAAGACACACGGTAGTTC 61 419
290 309 524510 TTGGCCAAGACACACGGTAG 87 420
291 310 524511 TTTGGCCAAGACACACGGTA 87 421
292 311 524512 TTTTGGCCAAGACACACGGT 93 422
293 312 505323 ATTTTGGCCAAGACACACGG 83 123
294 313 524513 AATTTTGGCCAAGACACACG 79 423
295 314 524514 GAATTTTGGCCAAGACACAC 74 424
298 317 524515 TGCGAATTTTGGCCAAGACA 78 425

300 319 524516 ACTGCGAATTTTGGCCAAGA 71 426
301 320 524517 GACTGCGAATTTTGGCCAAG 71 427
302 321 505325 GGACTGCGAATTTTGGCCAA 50 125
303 322 524518 GGGACTGCGAATTTTGGCCA 55 428
321 340 524519 GTGAGTGATTGGAGGTTGGG 68 429
324 343 524520 TTGGTGAGTGATTGGAGGTT 84 430
327 346 524521 AGGTTGGTGAGTGATTGGAG 64 431
330 349 524522 AGGAGGTTGGTGAGTGATTG 58 432
333 352 524523 GACAGGAGGTTGGTGAGTGA 62 433
336 355 524524 GAGGACAGGAGGTTGGTGAG 56 434
339 358 524525 TTGGAGGACAGGAGGTTGGT 81 435
342 361 524526 AAGTTGGAGGACAGGAGGTT 77 436
345 364 524527 GACAAGTTGGAGGACAGGAG 69 437
348 367 524528 CAGGACAAGTTGGAGGACAG 82 438
351 370 524529 AACCAGGACAAGTTGGAGGA 67 439
354 373 524530 GATAACCAGGACAAGTTGGA 53 440
357 376 524531 AGCGATAACCAGGACAAGTT 55 441
358 377 524532 CAGCGATAACCAGGACAAGT 84 442
359 378 524533 CCAGCGATAACCAGGACAAG 86 443
360 379 505326 TCCAGCGATAACCAGGACAA 79 126
361 380 524534 ATCCAGCGATAACCAGGACA 85 444
362 381 524535 CATCCAGCGATAACCAGGAC 90 445
364 383 524536 CACATCCAGCGATAACCAGG 82 446
365 384 524537 ACACATCCAGCGATAACCAG 72 447
366 385 505327 GACACATCCAGCGATAACCA 61 127
367 386 524538 AGACACATCCAGCGATAACC 79 448
368 387 524539 CAGACACATCCAGCGATAAC 73 449
370 389 524540 CGCAGACACATCCAGCGATA 94 450
373 392 524541 CGCCGCAGACACATCCAGCG 84 451
390 409 524542 AGAGGAAGATGATAAAACGC 45 452
393 412 524543 TGAAGAGGAAGATGATAAAA 62 453
396 415 524544 GGATGAAGAGGAAGATGATA 58 454
399 418 524545 GCAGGATGAAGAGGAAGAT G 48 455
402 421 524546 GCAGCAGGATGAAGAGGAA G 60 456
405 424 524547 ATAGCAGCAGGATGAAGAGG 84 457
408 427 524548 GGCATAGCAGCAGGATGAAG 56 458
409 428 524549 AGGCATAGCAGCAGGATGAA 78 459
410 429 524550 GAGGCATAGCAGCAGGATGA 67 460
411 430 505329 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 85 136
412 431 509926 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 84 139
413 432 509927 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 68 142

414 433 505330 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 82 20
415 434 509928 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 83 22
416 435 509929 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 80 24
417 436 509930 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 78 26
418 437 146783 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 80 28
419 438 524551 CAAGAAGATGAGGCATAGCA 55 461
422 441 524552 CAACAAGAAGATGAGGCATA 90 462
425 444 524553 AACCAACAAGAAGATGAGGC 82 463
428 447 524554 AAGAACCAACAAGAAGATG А 79 464
431 450 524555 CAGAAGAACCAACAAGAAG А 72 465
434 453 524556 GTCCAGAAGAACCAACAAGA 87 466
437 456 524557 ATAGTCCAGAAGAACCAACA 72 467
440 459 524558 TTGATAGTCCAGAAGAACCA 76 468
443 462 524559 ACCTTGATAGTCCAGAAGAA 78 469
446 465 524560 CATACCTTGATAGTCCAGAA 77 470
449 468 524561 CAACATACCTTGATAGTCCA 69 471
452 471 524562 GGGCAACATACCTTGATAGT 39 472
455 474 524563 AACGGGCAACATACCTTGAT 72 473
456 475 524564 AAACGGGCAACATACCTTGA 86 474
457 476 505332 CAAACGGGCAACATACCTTG 85 166
458 477 524565 ACAAACGGGCAACATACCTT 80 475
459 478 524566 GACAAACGGGCAACATACCT 42 476
461 480 524567 AGGACAAACGGGCAACATAC 47 477
464 483 524568 TAGAGGACAAACGGGCAACA 81 478
467 486 524569 AATTAGAGGACAAACGGGCA 72 479
470 489 524570 TGGAATTAGAGGACAAACGG 84 480
471 490 524571 CTGGAATTAGAGGACAAACG 86 481
472 491 505335 CCTGGAATTAGAGGACAAAC 89 174
473 492 524572 TCCTGGAATTAGAGGACAAA 92 482
474 493 524573 ATCCTGGAATTAGAGGACAA 86 483
476 495 524574 GGATCCTGGAATTAGAGGAC 76 484
479 498 524575 TGAGGATCCTGGAATTAGAG 77 485
482 501 524576 GGTTGAGGATCCTGGAATTA 62 486
485 504 524577 GGTGGTTGAGGATCCTGGAA 73 487
488 507 524578 GCTGGTGGTTGAGGATCCTG 84 488
491 510 524579 CGTGCTGGTGGTTGAGGATC 79 489
494 513 524580 TCCCGTGCTGGTGGTTGAGG 83 490
497 516 524581 TGGTCCCGTGCTGGTGGTTG 66 491
500 519 524582 GCATGGTCCCGTGCTGGTGG 77 492
503 522 524583 TCGGCATGGTCCCGTGCTGG 0 493
506 525 524584 GGTTCGGCATGGTCCCGTGC 56 494

509 528 524585 GCAGGTTCGGCATGGTCCCG 61 495
512 531 524586 CATGCAGGTTCGGCATGGTC 87 496
515 534 524587 AGTCATGCAGGTTCGGCATG 77 497
518 537 524588 AGTAGTCATGCAGGTTCGGC 64 498
521 540 524589 AGCAGTAGTCATGCAGGTTC 61 499
524 543 524590 TTGAGCAGTAGTCATGCAGG 86 500
527 546 524591 TCCTTGAGCAGTAGTCATGC 80 501
530 549 524592 GGTTCCTTGAGCAGTAGTCA 50 502
533 552 524593 AGAGGTTCCTTGAGCAGTAG 61 503
536 555 524594 CATAGAGGTTCCTTGAGCAG 89 504
539 558 524595 ATACATAGAGGTTCCTTGAG 87 505
542 561 524596 GGGATACATAGAGGTTCCTT 0 506
545 564 524597 GGAGGGATACATAGAGGTTC 38 507
548 567 524598 ACAGGAGGGATACATAGAGG 73 508
551 570 524599 GCAACAGGAGGGATACATAG 67 509
554 573 524600 ACAGCAACAGGAGGGATACA 72 510
557 576 524601 GGTACAGCAACAGGAGGGAT 59 511
560 579 524602 TTTGGTACAGCAACAGGAGG 81 512
563 582 524603 AGGTTTGGTACAGCAACAGG 74 513
566 585 524604 CGAAGGTTTGGTACAGCAAC 85 514
569 588 524605 GTCCGAAGGTTTGGTACAGC 76 515
572 591 524606 TCCGTCCGAAGGTTTGGTAC 80 516
575 594 524607 ATTTCCGTCCGAAGGTTTGG 88 517
578 597 524608 GCAATTTCCGTCCGAAGGTT 50 518
581 600 524609 GGTGCAATTTCCGTCCGAAG 55 519
584 603 524610 ACAGGTGCAATTTCCGTCCG 81 520
587 606 524611 AATACAGGTGCAATTTCCGT 88 521
590 609 524612 GGGAATACAGGTGCAATTTC 32 522
593 612 524613 GATGGGAATACAGGTGCAAT 49 523
608 627 524614 AGCCCAGGATGATGGGATGG 89 524
611 630 524615 GAAAGCCCAGGATGATGGGA 71 525
614 633 524616 TCCGAAAGCCCAGGATGATG 86 526
617 636 524617 TTTTCCGAAAGCCCAGGATG 97 527
620 639 524618 GAATTTTCCGAAAGCCCAGG 80 528
623 642 524619 TAGGAATTTTCCGAAAGCCC 95 529
626 645 524620 CCATAGGAATTTTCCGAAAG 88 530
629 648 524621 CTCCCATAGGAATTTTCCGA 83 531
632 651 524622 CCACTCCCATAGGAATTTTC 68 532
635 654 524623 GGCCCACTCCCATAGGAATT 60 533
638 657 524624 TGAGGCCCACTCCCATAGGA 57 534
641 660 524625 GGCTGAGGCCCACTCCCATA 62 535
644 663 524626 ACGGGCTGAGGCCCACTCCC 57 536
647 666 524627 GAAACGGGCTGAGGCCCACT 62 537

650 669 524628 GGAGAAACGGGCTGAGGCCC 31 538
653 672 524629 CCAGGAGAAACGGGCTGAGG 77 539
656 675 524630 GAGCCAGGAGAAACGGGCTG 48 540
659 678 524631 ACTGAGCCAGGAGAAACGGG 43 541
662 681 524632 TAAACTGAGCCAGGAGAAAC 67 542
665 684 524633 TAGTAAACTGAGCCAGGAGA 86 543
668 687 524634 CACTAGTAAACTGAGCCAGG 96 544
669 688 524635 GCACTAGTAAACTGAGCCAG 83 545
671 690 524636 TGGCACTAGTAAACTGAGCC 84 546
672 691 524637 ATGGCACTAGTAAACTGAGC 82 547
674 693 524638 AAATGGCACTAGTAAACTGA 74 548
677 696 524639 AACAAATGGCACTAGTAAAC 63 549
678 697 524640 GAACAAATGGCACTAGTAAA 67 550
679 698 505338 TGAACAAATGGCACTAGTAA 84 186
680 699 524641 CTGAACAAATGGCACTAGTA 95 551
681 700 524642 ACTGAACAAATGGCACTAGT 77 552
682 701 505339 CACTGAACAAATGGCACTAG 95 187
683 702 524643 CCACTGAACAAATGGCACTA 89 553
684 703 524644 ACCACTGAACAAATGGCACT 90 554
686 705 524646 GAACCACTGAACAAATGGCA 82 555
687 706 509931 CGAACCACTGAACAAATGGC 90 39
689 708 524647 TACGAACCACTGAACAAATG 79 556
690 709 146824 CTACGAACCACTGAACAAAT 72 557
692 711 524648 CCCTACGAACCACTGAACAA 73 558
693 712 524649 GCCCTACGAACCACTGAACA 83 559
695 714 524650 AAGCCCTACGAACCACTGAA 82 560
696 715 524651 AAAGCCCTACGAACCACTGA 81 561
697 716 505342 GAAAGCCCTACGAACCACTG 66 198
698 717 524652 GGAAAGCCCTACGAACCACT 59 562
699 718 524653 GGGAAAGCCCTACGAACCAC 46 563
718 737 524654 ACTGAAAGCCAAACAGTGGG 64 564
721 740 524655 ATAACTGAAAGCCAAACAGT 0 565
724 743 524656 CATATAACTGAAAGCCAAAC 70 566
727 746 524657 ATCCATATAACTGAAAGCCA 91 567
730 749 524658 ATCATCCATATAACTGAAAG 69 568
733 752 524659 CACATCATCCATATAACTGA 70 569
736 755 524660 ТАССАСАТСАТССАТАТААС 57 570
739 758 524661 СААТАССАСАТСАТССАТАТ 70 571
742 761 524662 ССССААТАССАСАТСАТССА 85 572
745 764 524663 GGCCCCCAATACCACATCAT 70 573
748 767 524664 CTTGGCCCCCAATACCACAT 82 574
751 770 524665 AGACTTGGCCCCCAATACCA 77 575
754 773 524666 TACAGACTTGGCCCCCAATA 77 576

757 776 524667 CTGTACAGACTTGGCCCCCA 90 577
760 779 524668 ATGCTGTACAGACTTGGCCC 79 578
763 782 524669 AAGATGCTGTACAGACTTGG 79 579
766 785 524670 CTCAAGATGCTGTACAGACT 84 580
769 788 524671 GGACTCAAGATGCTGTACAG 24 581
772 791 524672 AAGGGACTCAAGATGCTGTA 57 582
775 794 524673 AAAAAGGGACTCAAGATGCT 66 583
778 797 524674 GGTAAAAAGGGACTCAAGAT 30 584
781 800 524675 AGCGGTAAAAAGGGACTCAA 68 585
784 803 524676 AACAGCGGTAAAAAGGGACT 67 586
787 806 524677 GGTAACAGCGGTAAAAAGGG 48 587
790 809 524678 ATTGGTAACAGCGGTAAAAA 81 588
793 812 524679 AAAATTGGTAACAGCGGTAA 89 589
796 815 524680 AAGAAAATTGGTAACAGCGG 84 590
799 818 524681 CAAAAGAAAATTGGTAACAG 41 591
802 821 524682 AGACAAAAGAAAATTGGTAA 51 592
805 824 524683 CAAAGACAAAAGAAAATTGG 66 593
808 827 524684 ACCCAAAGACAAAAGAAAAT 61 594
811 830 524685 TATACCCAAAGACAAAAGAA 79 595
814 833 524686 ATGTATACCCAAAGACAAAA 84 596
817 836 524687 TAAATGTATACCCAAAGACA 77 597
820 839 524688 GTTTAAATGTATACCCAAAG 80 598
821 840 524689 GGTTTAAATGTATACCCAAA 71 599
822 841 524690 GGGTTTAAATGTATACCCAA 85 600
823 842 505344 AGGGTTTAAATGTATACCCA 85 206
824 843 524691 TAGGGTTTAAATGTATACCC 90 601
825 844 524692 TTAGGGTTTAAATGTATACC 83 602
827 846 524693 TGTTAGGGTTTAAATGTATA 53 603
830 849 524694 TTTTGTTAGGGTTTAAATGT 67 604
845 864 524695 AACCCCATCTCTTTGTTTTG 81 605
848 867 524696 AGTAACCCCATCTCTTTGTT 71 606
851 870 524697 GAGAGTAACCCCATCTCTTT 65 607
854 873 524698 TCAGAGAGTAACCCCATCTC 96 608
857 876 524699 AATTCAGAGAGTAACCCCAT 94 609
860 879 524700 TAAAATTCAGAGAGTAACCC 71 610
863 882 524701 CCATAAAATTCAGAGAGTAA 90 611
866 885 524702 AACCCATAAAATTCAGAGAG 86 612
869 888 524703 CATAACCCATAAAATTCAGA 72 613
872 891 524704 TGACATAACCCATAAAATTC 81 614
875 894 524705 CAATGACATAACCCATAAAA 81 615
878 897 524706 TTCCAATGACATAACCCATA 95 616
881 900 524707 AACTTCCAATGACATAACCC 91 617
884 903 524708 CATAACTTCCAATGACATAA 83 618

887 906 524709 ACCCATAACTTCCAATGACA 95 619
890 909 524710 AGGACCCATAACTTCCAATG 66 620
893 912 524711 GCAAGGACCCATAACTTCCA 41 621
896 915 524712 GTGGCAAGGACCCATAACTT 53 622
899 918 524713 CTTGTGGCAAGGACCCATAA 91 623
902 921 524714 GTTCTTGTGGCAAGGACCCA 77 624
905 924 524715 TGTGTTCTTGTGGCAAGGAC 90 625
908 927 524716 TGATGTGTTCTTGTGGCAAG 90 626
911 930 524717 GTATGATGTGTTCTTGTGGC 82 627
914 933 524718 TTTGTATGATGTGTTCTTGT 95 628
930 949 524719 AAACATTCTTTGATTTTTTG 61 629
933 952 524720 CTAAAACATTCTTTGATTTT 43 630
936 955 524721 TTTCTAAAACATTCTTTGAT 90 631
939 958 524722 AGTTTTCTAAAACATTCTTT 75 632
942 961 524723 GGAAGTTTTCTAAAACATTC 52 633
945 964 524724 ATAGGAAGTTTTCTAAAACA 74 634
948 967 524725 TTAATAGGAAGTTTTCTAAA 40 635
951 970 524726 CTGTTAATAGGAAGTTTTCT 93 636
954 973 524727 GGCCTGTTAATAGGAAGTTT 87 637
957 976 524728 ATAGGCCTGTTAATAGGAAG 85 638
960 979 524729 TCAATAGGCCTGTTAATAGG 92 639
963 982 524730 CAATCAATAGGCCTGTTAAT 90 640
966 985 524731 TTCCAATCAATAGGCCTGTT 96 641
969 988 524732 ACTTTCCAATCAATAGGCCT 77 642
972 991 146826 CATACTTTCCAATCAATAGG 92 643
975 994 524733 TGACATACTTTCCAATCAAT 91 644
978 997 524734 CGTTGACATACTTTCCAATC 95 645
996 1015 524735 CCCAAAAGACCCACAATTCG 92 646
999 1018 524736 AAACCCAAAAGACCCACAAT 74 647
1002 1021 524737 GCAAAACCCAAAAGACCCAC 85 648
1005 1024 524738 GCAGCAAAACCCAAAAGACC 70 649
1025 1044 524739 AACCACATTGTGTAAATGGG 90 650
1028 1047 524740 GATAACCACATTGTGTAAAT 58 651
1031 1050 524741 CAGGATAACCACATTGTGTA 83 652
1034 1053 524742 ACGCAGGATAACCACATTGT 84 653
1037 1056 524743 TTAACGCAGGATAACCACAT 93 654
1040 1059 524744 GCATTAACGCAGGATAACCA 60 655
1043 1062 524745 AGGGCATTAACGCAGGATAA 58 656
1046 1065 524746 ACAAGGGCATTAACGCAGGA 75 657
1049 1068 524747 CATACAAGGGCATTAACGCA 89 658
1052 1071 524748 ATGCATACAAGGGCATTAAC 87 659
1055 1074 524749 TACATGCATACAAGGGCATT 86 660
1058 1077 524750 GAATACATGCATACAAGGGC 75 661

1061 1080 524751 ATTGAATACATGCATACAAG 81 662
1064 1083 524752 TAGATTGAATACATGCATAC 85 663
1067 1086 524753 GCTTAGATTGAATACATGCA 69 664
1070 1089 524754 CCTGCTTAGATTGAATACAT 90 665
1073 1092 524755 AAGCCTGCTTAGATTGAATA 76 666
1076 1095 524756 TGAAAGCCTGCTTAGATTGA 76 667
1079 1098 524757 AAGTGAAAGCCTGCTTAGAT 68 668
1082 1101 524758 AGAAAGTGAAAGCCTGCTTA 81 669
1085 1104 524759 GCGAGAAAGTGAAAGCCTGC 61 670
1088 1107 524760 TTGGCGAGAAAGTGAAAGCC 89 671
1091 1110 524761 AAGTTGGCGAGAAAGTGAAA 74 672
1094 1113 524762 TGTAAGTTGGCGAGAAAGTG 85 673
1097 1116 524763 CCTTGTAAGTTGGCGAGAAA 90 674
1100 1119 524764 AGGCCTTGTAAGTTGGCGAG 93 675
1103 1122 524765 GAAAGGCCTTGTAAGTTGGC 78 676
1106 1125 524766 ACAGAAAGGCCTTGTAAGTT 76 677
1109 1128 524767 TACACAGAAAGGCCTTGTAA 94 678
1112 1131 524768 GTTTACACAGAAAGGCCTTG 80 679
1115 1134 524769 ATTGTTTACACAGAAAGGCC 83 680
1118 1137 524770 GGTATTGTTTACACAGAAAG 63 681
1121 1140 524771 TCAGGTATTGTTTACACAGA 93 682
1124 1143 524772 GGTTCAGGTATTGTTTACAC 68 683
1127 1146 524773 AAAGGTTCAGGTATTGTTTA 82 684
1130 1149 524774 GGTAAAGGTTCAGGTATTGT 68 685
1150 1169 524775 TGGCCGTTGCCGGGCAACGG 74 686
1153 1172 524776 ACCTGGCCGTTGCCGGGCAA 77 687
1156 1175 524777 CAGACCTGGCCGTTGCCGGG 88 688
1159 1178 524778 GCACAGACCTGGCCGTTGCC 80 689
1162 1181 524779 TTGGCACAGACCTGGCCGTT 85 690
1165 184 524780 CACTTGGCACAGACCTGGCC 93 691
1168 187 524781 AAACACTTGGCACAGACCTG 90 692
1169 188 524782 CAAACACTTGGCACAGACCT 75 693
1170 189 505345 GCAAACACTTGGCACAGACC 78 207
1171 190 524783 AGCAAACACTTGGCACAGAC 84 694
1172 1191 524784 CAGCAAACACTTGGCACAGA 90 695
1174 1193 524785 GTCAGCAAACACTTGGCACA 79 696
1200 1219 524786 ACCAAGCCCCAGCCAGTGGG 57 697
1203 1222 524787 ATGACCAAGCCCCAGCCAGT 74 698
1206 1225 524788 CCCATGACCAAGCCCCAGCC 90 699
1209 1228 524789 TGGCCCATGACCAAGCCCCA 96 700
1212 1231 524790 TGATGGCCCATGACCAAGCC 79 701
1215 1234 524791 CGCTGATGGCCCATGACCAA 97 702
1218 1237 524792 ACGCGCTGATGGCCCATGAC 98 703

1221 1240 524793 CGCACGCGCTGATGGCCCAT 98 704
1224 1243 524794 CCACGCACGCGCTGATGGCC 98 705
1227 1246 524795 GTTCCACGCACGCGCTGATG 98 706
1230 1249 524796 AAGGTTCCACGCACGCGCTG 99 707
1233 1252 524797 GAAAAGGTTCCACGCACGCG 97 708
1236 1255 524798 GCCGAAAAGGTTCCACGCAC 98 709
1239 1258 524799 GGAGCCGAAAAGGTTCCACG 75 710
1242 1261 524800 AGAGGAGCCGAAAAGGTTCC 79 711
1245 1264 524801 GGCAGAGGAGCCGAAAAGGT 98 712
1248 1267 524802 ATCGGCAGAGGAGCCGAAAA 73 713
1251 1270 524803 TGGATCGGCAGAGGAGCCGA 91 714
1254 1273 524804 GTATGGATCGGCAGAGGAGC 98 715
1257 1276 524805 GCAGTATGGATCGGCAGAGG 98 716
1258 1277 524806 CGCAGTATGGATCGGCAGAG 98 717
1259 1278 505346 CCGCAGTATGGATCGGCAGA 98 210
1260 1279 146785 TCCGCAGTATGGATCGGCAG 98 718
1261 1280 524807 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 98 719
1262 1281 505347 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 98 212
1263 1282 524808 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 96 720
1264 1283 524809 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 97 721
1266 1285 524810 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 96 722
1269 1288 524811 GCTAGGAGTTCCGCAGTATG 96 723
1272 1291 524812 GCGGCTAGGAGTTCCGCAGT 75 724
1275 1294 524813 CAAGCGGCTAGGAGTTCCGC 86 725
1278 1297 524814 AAACAAGCGGCTAGGAGTTC 73 726
1281 1300 524815 GCAAAACAAGCGGCTAGGAG 71 727
1282 1301 524816 AGCAAAACAAGCGGCTAGGA 89 728
1283 1302 505352 GAGCAAAACAAGCGGCTAGG 76 217
1284 1303 524817 CGAGCAAAACAAGCGGCTAG 78 729
1285 1304 524818 GCGAGCAAAACAAGCGGCTA 71 730
1286 1305 505353 TGCGAGCAAAACAAGCGGCT 82 218
1287 1306 524819 CTGCGAGCAAAACAAGCGGC 82 731
1288 1307 524820 GCTGCGAGCAAAACAAGCGG 67 732
1290 1309 524821 CTGCTGCGAGCAAAACAAGC 79 733
1293 1312 524822 GACCTGCTGCGAGCAAAACA 87 734
1296 1315 524823 CCAGACCTGCTGCGAGCAAA 94 735
1299 1318 524824 GCTCCAGACCTGCTGCGAGC 80 736
1302 1321 524825 TTTGCTCCAGACCTGCTGCG 70 737
1305 1324 524826 ATGTTTGCTCCAGACCTGCT 75 738
1308 1327 524827 ATAATGTTTGCTCCAGACCT 55 739
1311 1330 524828 CCGATAATGTTTGCTCCAGA 87 740
1314 1333 524829 GTCCCGATAATGTTTGCTCC 80 741

1317 1336 524830 TCAGTCCCGATAATGTTTGC 76 742
1320 1339 524831 TTATCAGTCCCGATAATGTT 53 743
1577 1596 146786 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 96 224

Пример 11: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК ИВУ в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. В этот анализ включили также несколько антисмысловых олигонуклеотидов из исследований, описанных выше. Культивированные клетки HepG2.2.15 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® 70 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК некоторых химерных олигонуклеотидов также измерили при помощи RTS3372. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблицах 24 и 25 были разработаны как 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды. Эти химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по пять нуклеозидов. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла, и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла имеет МОЕ модификацию сахара. Каждый нуклеозид в центральном сегменте гэп имеет дезокси-сахарную модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 24, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1). Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 25, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1286 (переставленная версия доступа GENBANK №U95551.1). «Н/и» указывает, что данные ингибирования для этого конкретного химерного олигонуклеотида не были измерены конкретным набором затравочных зондов.

Таблица 24
Ингибирование уровней мРНК HBV действием химерных антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на SEQ ID NO:1 (RTS3370 и RTS3372)
Сайт инициации Терминирующий сайт № ISIS Последовательность RTS3370% ингибирование RTS3372% ингибирование SEQ ID NO
1323 1342 524832 GAGTTATCAGTCCCGATAAT 63 н/и 744
1326 1345 524833 ACAGAGTTATCAGTCCCGAT 82 н/и 745
1329 1348 524834 ACAACAGAGTTATCAGTCCC 52 н/и 746
1332 1351 524835 AGGACAACAGAGTTATCAGT 57 н/и 747
1335 1354 524836 GAGAGGACAACAGAGTTATC 49 н/и 748
1338 1357 524837 CGGGAGAGGACAACAGAGTT 0 н/и 749
1341 1360 524838 TTGCGGGAGAGGACAACAGA 17 н/и 750
1344 1363 524839 TATTTGCGGGAGAGGACAAC 30 н/и 751
1347 1366 524840 GTATATTTGCGGGAGAGGAC 22 н/и 752
1350 1369 524841 GATGTATATTTGCGGGAGAG 32 н/и 753
1353 1372 524842 TACGATGTATATTTGCGGGA 76 н/и 754
1356 1375 524843 GGATACGATGTATATTTGCG 76 н/и 755
1359 1378 524844 CATGGATACGATGTATATTT 87 н/и 756
1362 1381 524845 AGCCATGGATACGATGTATA 70 н/и 757
1365 1384 524846 AGCAGCCATGGATACGATGT 22 н/и 758
1368 1387 524847 CCTAGCAGCCATGGATACGA 67 н/и 759
1371 1390 524848 CAGCCTAGCAGCCATGGATA 56 н/и 760
1374 1393 524849 GCACAGCCTAGCAGCCATGG 38 н/и 761
1377 1396 524850 GCAGCACAGCCTAGCAGCCA 11 н/и 762
1380 1399 524851 TTGGCAGCACAGCCTAGCAG 34 н/и 763
1383 1402 524852 CAGTTGGCAGCACAGCCTAG 47 н/и 764

1386 1405 524853 ATCCAGTTGGCAGCACAGCC 45 н/и 765
1389 1408 524854 AGGATCCAGTTGGCAGCACA 36 н/и 766
1392 1411 524855 CGCAGGATCCAGTTGGCAGC 41 н/и 767
1395 1414 524856 CCGCGCAGGATCCAGTTGGC 72 н/и 768
1398 1417 524857 GTCCCGCGCAGGATCCAGTT 55 н/и 769
1457 1476 524858 AGCGACCCCGAGAAGGGTCG 17 н/и 770
1460 1479 524859 CCAAGCGACCCCGAGAAGGG 45 н/и 771
1463 1482 524860 GTCCCAAGCGACCCCGAGAA 8 н/и 772
1466 1485 524861 AGAGTCCCAAGCGACCCCGA 51 н/и 773
1469 1488 524862 GAGAGAGTCCCAAGCGACCC 28 н/и 774
1472 1491 524863 GACGAGAGAGTCCCAAGCGA 37 н/и 775
1492 1511 524864 GAACGGCAGACGGAGAAGGG 27 н/и 776
1498 1517 524866 CGGTCGGAACGGCAGACGGA 78 н/и 777
1501 1520 524867 GGTCGGTCGGAACGGCAGAC 78 н/и 778
1504 1523 524868 CGTGGTCGGTCGGAACGGCA 79 н/и 779
1507 1526 524869 CCCCGTGGTCGGTCGGAACG 70 н/и 780
1510 1529 524870 GCGCCCCGTGGTCGGTCGGA 78 н/и 781
1513 1532 524871 GGTGCGCCCCGTGGTCGGTC 74 н/и 782
1514 1533 524872 AGGTGCGCCCCGTGGTCGGT 63 н/и 783
1515 1534 505354 GAGGTGCGCCCCGTGGTCGG 70 н/и 220
1516 1535 524873 AGAGGTGCGCCCCGTGGTCG 72 н/и 784
1517 1536 524874 GAGAGGTGCGCCCCGTGGTC 49 н/и 785
1518 1537 505355 AGAGAGGTGCGCCCCGTGGT 64 н/и 221
1519 1538 524875 AAGAGAGGTGCGCCCCGTGG 57 н/и 786
1520 1539 524876 AAAGAGAGGTGCGCCCCGTG 63 н/и 787

1521 1540 505356 TAAAGAGAGGTGCGCCCCGT 68 н/и 222
1522 1541 524877 GTAAAGAGAGGTGCGCCCCG 50 н/и 788
1523 1542 524878 CGTAAAGAGAGGTGCGCCCC 64 н/и 789
1550 1569 524879 GATGAGAAGGCACAGACGGG 70 н/и 790
1553 1572 524880 GCAGATGAGAAGGCACAGAC 81 н/и 791
1556 1575 524881 CCGGCAGATGAGAAGGCACA 80 н/и 792
1559 1578 524882 GGTCCGGCAGATGAGAAGGC 84 н/и 793
1562 1581 524883 CACGGTCCGGCAGATGAGAA 79 н/и 794
1565 1584 524884 GCACACGGTCCGGCAGATGA 83 н/и 795
1568 1587 524885 AGTGCACACGGTCCGGCAGA 77 н/и 796
1571 1590 524886 CGAAGTGCACACGGTCCGGC 89 н/и 797
1574 1593 524887 AAGCGAAGTGCACACGGTCC 85 н/и 798
1575 1594 524888 GAAGCGAAGTGCACACGGTC 83 н/и 799
1576 1595 524889 TGAAGCGAAGTGCACACGGT 83 н/и 800
1577 1596 146786 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 88 85 224
1578 1597 524890 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 83 н/и 801
1579 1598 524891 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 82 н/и 802
1580 1599 505357 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 79 н/и 803
1581 1600 524892 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 73 н/и 804
1582 1601 524893 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 80 н/и 805
1583 1602 505358 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 84 н/и 226
1584 1603 524894 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 74 н/и 806
1585 1604 524895 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 72 н/и 807
1586 1605 505359 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 78 н/и 227
1604 1623 524896 ACGGTGGTCTCCATGCGACG 79 н/и 808
1607 1626 524897 TTCACGGTGGTCTCCATGCG 75 н/и 809

1630 1649 524898 CCTTGGGCAACATTCGGTGG 77 н/и 810
1633 1652 524899 AGACCTTGGGCAACATTCGG 76 н/и 811
1636 1655 524900 GTAAGACCTTGGGCAACATT 73 н/и 812
1639 1658 524901 TATGTAAGACCTTGGGCAAC 60 н/и 813
1642 1661 524902 TCTTATGTAAGACCTTGGGC 72 н/и 814
1645 1664 524903 TCCTCTTATGTAAGACCTTG 75 н/и 815
1648 1667 524904 GAGTCCTCTTATGTAAGACC 65 н/и 816
1651 1670 524905 CAAGAGTCCTCTTATGTAAG 76 н/и 817
1654 1673 524906 GTCCAAGAGTCCTCTTATGT 78 н/и 818
1657 1676 524907 AGAGTCCAAGAGTCCTCTTA 82 н/и 819
1660 1679 524908 CAGAGAGTCCAAGAGTCCTC 82 н/и 820
1663 1682 524909 TTGCAGAGAGTCCAAGAGTC 76 н/и 821
1666 1685 524910 ACATTGCAGAGAGTCCAAGA 76 н/и 822
1669 1688 524911 TTGACATTGCAGAGAGTCCA 74 н/и 823
1689 1708 524912 GTATGCCTCAAGGTCGGTCG 76 н/и 824
1692 1711 524913 GAAGTATGCCTCAAGGTCGG 73 н/и 825
1695 1714 524914 TTTGAAGTATGCCTCAAGGT 76 н/и 826
1698 1717 524915 GTCTTTGAAGTATGCCTCAA 75 н/и 827
1701 1720 524916 ACAGTCTTTGAAGTATGCCT 77 н/и 828
1704 1723 524917 CAAACAGTCTTTGAAGTATG 55 н/и 829
1707 1726 524918 AAACAAACAGTCTTTGAAGT 59 н/и 830
1710 1729 524919 TTTAAACAAACAGTCTTTGA 53 н/и 831
1713 1732 524920 GTCTTTAAACAAACAGTCTT 3 н/и 832
1716 1735 524921 CCAGTCTTTAAACAAACAGT 75 н/и 833
1719 1738 524922 CTCCCAGTCTTTAAACAAAC 70 н/и 834

1722 1741 524923 CTCCTCCCAGTCTTTAAACA 68 н/и 835
1725 1744 524924 CAACTCCTCCCAGTCTTTAA 62 н/и 836
1728 1747 524925 CCCCAACTCCTCCCAGTCTT 63 н/и 837
1731 1750 524926 CTCCCCCAACTCCTCCCAGT 62 н/и 838
1734 1753 524927 СТССТСССССААСТССТССС 55 н/и 839
1737 1756 524928 ААТСТССТСССССААСТССТ 61 н/и 840
1740 1759 524929 ТСТААТСТССТСССССААСТ 61 н/и 841
1743 1762 524930 ТААТСТААТСТССТСССССА 70 н/и 842
1746 1765 524931 СТТТААТСТААТСТССТССС 74 н/и 843
1749 1768 524932 GACCTTTAATCTAATCTCCT 74 н/и 844
1752 1771 524933 AAAGACCTTTAATCTAATCT 60 н/и 845
1755 1774 524934 TACAAAGACCTTTAATCTAA 55 н/и 846
1758 1777 524935 TAGTACAAAGACCTTTAATC 54 н/и 847
1761 1780 524936 TCCTAGTACAAAGACCTTTA 69 н/и 848
1764 1783 524937 GCCTCCTAGTACAAAGACCT 72 н/и 849
1767 1786 524938 ACAGCCTCCTAGTACAAAGA 60 н/и 850
1770 1789 524939 CCTACAGCCTCCTAGTACAA 66 н/и 851
1773 1792 524940 ATGCCTACAGCCTCCTAGTA 70 н/и 852
1776 1795 524941 TTTATGCCTACAGCCTCCTA 63 н/и 853
1777 1796 524942 ATTTATGCCTACAGCCTCCT 70 н/и 854
1778 1797 509932 AATTTATGCCTACAGCCTCC 68 н/и 46
1779 1798 509933 CAATTTATGCCTACAGCCTC 68 н/и 48
1780 1799 509934 CCAATTTATGCCTACAGCCT 65 н/и 50
1781 1800 509935 ACCAATTTATGCCTACAGCC 64 н/и 52
1782 1801 524943 GACCAATTTATGCCTACAGC 57 н/и 855
1783 1802 524944 AGACCAATTTATGCCTACAG 60 н/и 856

1785 1804 524945 GCAGACCAATTTATGCCTAC 54 н/и 857
1788 1807 524946 TGCGCAGACCAATTTATGCC 68 н/и 858
1791 1810 524947 TGGTGCGCAGACCAATTTAT 64 н/и 859
1794 1813 524948 TGCTGGTGCGCAGACCAATT 75 н/и 860
1797 1816 524949 TGGTGCTGGTGCGCAGACCA 68 н/и 861
1800 1819 524950 GCATGGTGCTGGTGCGCAGA 69 н/и 862
1803 1822 524951 GTTGCATGGTGCTGGTGCGC 59 н/и 863
1807 1826 524952 AAAAGTTGCATGGTGCTGGT 61 н/и 864
1810 1829 524953 TGAAAAAGTTGCATGGTGCT 60 н/и 865
1813 1832 524954 AGGTGAAAAAGTTGCATGGT 61 н/и 866
1816 1835 524955 CAGAGGTGAAAAAGTTGCAT 63 н/и 867
1819 1838 524956 AGGCAGAGGTGAAAAAGTTG 57 н/и 868
1822 1841 524957 ATTAGGCAGAGGTGAAAAAG 50 н/и 869
1823 1842 524958 GATTAGGCAGAGGTGAAAAA 57 н/и 870
1825 1844 524959 ATGATTAGGCAGAGGTGAAA 54 н/и 871
1828 1847 524960 GAGATGATTAGGCAGAGGTG 59 н/и 872
1831 1850 524961 CAAGAGATGATTAGGCAGAG 61 н/и 873
1834 1853 524962 GAACAAGAGATGATTAGGCA 56 н/и 874
1837 1856 524963 CATGAACAAGAGATGATTAG 24 н/и 875
1840 1859 524964 GGACATGAACAAGAGATGAT 54 н/и 876
1843 1862 524965 GTAGGACATGAACAAGAGAT 52 н/и 877
1846 1865 524966 ACAGTAGGACATGAACAAGA 47 н/и 878
1849 1868 524967 TGAACAGTAGGACATGAACA 33 н/и 879
1852 1871 524968 GCTTGAACAGTAGGACATGA 44 н/и 880
1855 1874 524969 GAGGCTTGAACAGTAGGACA 43 н/и 881

1858 1877 524970 TTGGAGGCTTGAACAGTAGG 28 н/и 882
1862 1881 524971 CAGCTTGGAGGCTTGAACAG 30 н/и 883
1871 1890 524972 CCCAAGGCACAGCTTGGAGG 38 н/и 884
1874 1893 524973 CCACCCAAGGCACAGCTTGG 47 н/и 885
1877 1896 524974 AAGCCACCCAAGGCACAGCT 49 н/и 886
1880 1899 524975 CCAAAGCCACCCAAGGCACA 32 н/и 887
1883 1902 524976 GCCCCAAAGCCACCCAAGGC 56 н/и 888
1886 1905 524977 CATGCCCCAAAGCCACCCAA 63 н/и 889
1889 1908 524978 GTCCATGCCCCAAAGCCACC 64 н/и 890
1892 1911 524979 GATGTCCATGCCCCAAAGCC 65 н/и 891
1895 1914 524980 GTCGATGTCCATGCCCCAAA 80 н/и 892
1898 1917 524981 AGGGTCGATGTCCATGCCCC 79 н/и 893
1901 1920 524982 ATAAGGGTCGATGTCCATGC 79 н/и 894
1904 1923 524983 TTTATAAGGGTCGATGTCCA 71 н/и 895
1907 1926 524984 TTCTTTATAAGGGTCGATGT 77 н/и 896
1910 1929 524985 AAATTCTTTATAAGGGTCGA 79 н/и 897
1913 1932 524986 TCCAAATTCTTTATAAGGGT 80 н/и 898
1916 1935 524987 AGCTCCAAATTCTTTATAAG 80 н/и 899
1919 1938 524988 AGTAGCTCCAAATTCTTTAT 76 н/и 900
1922 1941 524989 CACAGTAGCTCCAAATTCTT 59 н/и 901
1925 1944 524990 CTCCACAGTAGCTCCAAATT 46 н/и 902
1928 1947 524991 TAACTCCACAGTAGCTCCAA 63 н/и 903
1931 1950 524992 GAGTAACTCCACAGTAGCTC 65 н/и 904
1934 1953 524993 CGAGAGTAACTCCACAGTAG 69 н/и 905
1937 1956 524994 AAACGAGAGTAACTCCACAG 61 н/и 906
1940 1959 524995 CAAAAACGAGAGTAACTCCA 46 н/и 907

1943 1962 524996 AGGCAAAAACGAGAGTAACT 39 н/и 908
1946 1965 524997 AGAAGGCAAAAACGAGAGTA 53 н/и 909
1949 1968 524998 GTCAGAAGGCAAAAACGAGA 56 н/и 910
1952 1971 524999 GAAGTCAGAAGGCAAAAACG 49 н/и 911
1955 1974 525000 AAAGAAGTCAGAAGGCAAAA 29 н/и 912
1958 1977 525001 AGGAAAGAAGTCAGAAGGCA 41 н/и 913
1961 1980 525002 TGAAGGAAAGAAGTCAGAAG 34 н/и 914
1964 1983 525003 TACTGAAGGAAAGAAGTCAG 26 н/и 915
1984 2003 525004 GCGGTATCTAGAAGATCTCG 24 н/и 916
1987 2006 525005 GAGGCGGTATCTAGAAGATC 29 н/и 917
1990 2009 525006 GCTGAGGCGGTATCTAGAAG 29 н/и 918
1993 2012 525007 AGAGCTGAGGCGGTATCTAG 13 н/и 919
1996 2015 525008 TACAGAGCTGAGGCGGTATC 6 н/и 920
1999 2018 525009 CGATACAGAGCTGAGGCGGT 3 н/и 921
2002 2021 525010 TCCCGATACAGAGCTGAGGC 27 н/и 922
2005 2024 525011 GCTTCCCGATACAGAGCTGA 43 н/и 923
2008 2027 525012 AAGGCTTCCCGATACAGAGC 33 н/и 924
2011 2030 525013 TCTAAGGCTTCCCGATACAG 34 н/и 925
2014 2033 525014 GACTCTAAGGCTTCCCGATA 38 н/и 926
2017 2036 525015 GGAGACTCTAAGGCTTCCCG 16 н/и 927
2020 2039 525016 TCAGGAGACTCTAAGGCTTC 16 н/и 928
2023 2042 525017 TGCTCAGGAGACTCTAAGGC 14 н/и 929
2026 2045 525018 CAATGCTCAGGAGACTCTAA 34 н/и 930
2029 2048 525019 GAACAATGCTCAGGAGACTC 32 н/и 931
2032 2051 525020 GGTGAACAATGCTCAGGAGA 9 н/и 932

2035 2054 525021 TGAGGTGAACAATGCTCAGG 50 н/и 933
2038 2057 525022 TGGTGAGGTGAACAATGCTC 54 н/и 934
2041 2060 525023 GTATGGTGAGGTGAACAATG 47 н/и 935
2044 2063 525024 GCAGTATGGTGAGGTGAACA 40 н/и 936
2047 2066 525025 AGTGCAGTATGGTGAGGTGA 35 н/и 937
2050 2069 525026 CTGAGTGCAGTATGGTGAGG 43 н/и 938
2053 2072 525027 TGCCTGAGTGCAGTATGGTG 45 н/и 939
2056 2075 525028 GCTTGCCTGAGTGCAGTATG 42 н/и 940
2059 2078 525029 ATTGCTTGCCTGAGTGCAGT 39 н/и 941
2062 2081 525030 AGAATTGCTTGCCTGAGTGC 27 н/и 942
2065 2084 525031 CAAAGAATTGCTTGCCTGAG 42 н/и 943
2068 2087 525032 CAGCAAAGAATTGCTTGCCT 49 н/и 944
2071 2090 525033 CCCCAGCAAAGAATTGCTTG 41 н/и 945
2074 2093 525034 TCCCCCCAGCAAAGAATTGC 39 н/и 946
2077 2096 525035 AGTTCCCCCCAGCAAAGAAT 39 н/и 947
2080 2099 525036 ATTAGTTCCCCCCAGCAAAG 43 н/и 948
2083 2102 525037 GTCATTAGTTCCCCCCAGCA 64 н/и 949
2086 2105 525038 AGAGTCATTAGTTCCCCCCA 45 н/и 950
2089 2108 525039 GCTAGAGTCATTAGTTCCCC 58 н/и 951
2092 2111 525040 GTAGCTAGAGTCATTAGTTC 45 н/и 952
2095 2114 525041 CAGGTAGCTAGAGTCATTAG 44 н/и 953
2098 2117 525042 ACCCAGGTAGCTAGAGTCAT 39 н/и 954
2101 2120 525043 CCCACCCAGGTAGCTAGAGT 51 н/и 955
2104 2123 525044 ACACCCACCCAGGTAGCTAG 27 н/и 956
2107 2126 525045 TTAACACCCACCCAGGTAGC 41 н/и 957
2110 2129 525046 AAATTAACACCCACCCAGGT 44 н/и 958

2113 2132 525047 ТССАААТТААСАСССАСССА 29 н/и 959
2116 2135 525048 TCTTCCAAATTAACACCCAC 31 н/и 960
2119 2138 525049 GGATCTTCCAAATTAACACC 42 н/и 961
2122 2141 525050 GCTGGATCTTCCAAATTAAC 53 н/и 962
2125 2144 525051 GATGCTGGATCTTCCAAATT 41 н/и 963
2128 2147 525052 CTAGATGCTGGATCTTCCAA 62 н/и 964
2131 2150 525053 TCTCTAGATGCTGGATCTTC 41 83 965
2134 2153 525054 AGGTCTCTAGATGCTGGATC 26 73 966
2137 2156 525055 ACTAGGTCTCTAGATGCTGG 36 74 967
2140 2159 525056 ACTACTAGGTCTCTAGATGC 22 63 968
2143 2162 525057 CTGACTACTAGGTCTCTAGA 28 80 969
2146 2165 525058 TAACTGACTACTAGGTCTCT 47 83 970
2149 2168 525059 ACATAACTGACTACTAGGTC 31 77 971
2152 2171 525060 TTGACATAACTGACTACTAG 34 75 972
2155 2174 525061 GTGTTGACATAACTGACTAC 42 75 973
2158 2177 525062 TTAGTGTTGACATAACTGAC 48 81 974
2161 2180 525063 ATATTAGTGTTGACATAACT 33 73 975
2164 2183 525064 CCCATATTAGTGTTGACATA 41 82 976
2167 2186 525065 AGGCCCATATTAGTGTTGAC 39 77 977
2170 2189 525066 TTTAGGCCCATATTAGTGTT 46 83 978
2173 2192 525067 AACTTTAGGCCCATATTAGT 38 69 979
2176 2195 525068 CTGAACTTTAGGCCCATATT 41 85 980
2179 2198 525069 TGCCTGAACTTTAGGCCCAT 38 81 981
2182 2201 525070 AGTTGCCTGAACTTTAGGCC 17 67 982
2185 2204 525071 AAGAGTTGCCTGAACTTTAG 27 62 983

2188 2207 525072 CACAAGAGTTGCCTGAACTT 27 64 984
2191 2210 525073 AACCACAAGAGTTGCCTGAA 41 80 985
2194 2213 525074 TGAAACCACAAGAGTTGCCT 32 75 986
2197 2216 525075 ATGTGAAACCACAAGAGTTG 43 67 987
2200 2219 525076 GAAATGTGAAACCACAAGAG 34 74 988
2203 2222 525077 CAAGAAATGTGAAACCACAA 22 65 989
2206 2225 525078 AGACAAGAAATGTGAAACCA 39 70 990
2209 2228 525079 GTGAGACAAGAAATGTGAAA 32 74 991
2212 2231 525080 AAAGTGAGACAAGAAATGTG 30 63 992
2215 2234 525081 CCAAAAGTGAGACAAGAAAT 25 58 993
2218 2237 525082 CTTCCAAAAGTGAGACAAGA 36 74 994
2221 2240 525083 TCTCTTCCAAAAGTGAGACA 42 84 995
2224 2243 525084 GTTTCTCTTCCAAAAGTGAG 33 75 996
2227 2246 525085 ACGGTTTCTCTTCCAAAAGT 32 68 997
2230 2249 525086 ATAACGGTTTCTCTTCCAAA 51 80 998
2233 2252 525087 TCTATAACGGTTTCTCTTCC 36 77 999
2236 2255 525088 TACTCTATAACGGTTTCTCT 23 69 1000
2239 2258 525089 AAATACTCTATAACGGTTTC 45 77 1001
2242 2261 525090 ACCAAATACTCTATAACGGT 57 82 1002
2245 2264 525091 GACACCAAATACTCTATAAC 36 77 1003
2248 2267 525092 AAAGACACCAAATACTCTAT 42 80 1004
2251 2270 525093 CCGAAAGACACCAAATACTC 41 89 1005
2254 2273 525094 ACTCCGAAAGACACCAAATA 29 73 1006
2257 2276 525095 CACACTCCGAAAGACACCAA 33 92 1007
2260 2279 525096 ATCCACACTCCGAAAGACAC 18 74 1008
2263 2282 525097 CGAATCCACACTCCGAAAGA 30 57 1009

2266 2285 525098 GTGCGAATCCACACTCCGAA 28 67 1010
2269 2288 146789 GGAGTGCGAATCCACACTCC 37 72 1011
2272 2291 525099 GGAGGAGTGCGAATCCACAC 36 64 1012
2275 2294 525100 GCTGGAGGAGTGCGAATCCA 52 90 1013
2278 2297 525101 TAAGCTGGAGGAGTGCGAAT 49 96 1014
2281 2300 525102 CTATAAGCTGGAGGAGTGCG 37 96 1015
2284 2303 525103 GGTCTATAAGCTGGAGGAGT 30 97 1016
2287 2306 525104 GGTGGTCTATAAGCTGGAGG 22 77 1017
2290 2309 525105 TTTGGTGGTCTATAAGCTGG 41 76 1018
2293 2312 525106 GCATTTGGTGGTCTATAAGC 39 76 1019
2313 2332 525107 GAAGTGTTGATAGGATAGGG 27 97 1020
2316 2335 525108 CCGGAAGTGTTGATAGGATA 42 97 1021
2319 2338 525109 TTTCCGGAAGTGTTGATAGG 48 99 1022
2322 2341 525110 TAGTTTCCGGAAGTGTTGAT 18 98 1023
2325 2344 525111 CAGTAGTTTCCGGAAGTGTT 19 98 1024
2328 2347 525112 CAACAGTAGTTTCCGGAAGT 29 96 1025
2331 2350 525113 TAACAACAGTAGTTTCCGGA 39 95 1026
2334 2353 525114 GTCTAACAACAGTAGTTTCC 40 99 1027
2369 2388 525115 CGAGGGAGTTCTTCTTCTAG 42 98 1028
2372 2391 525116 AGGCGAGGGAGTTCTTCTTC 31 97 1029
2375 2394 525117 GCGAGGCGAGGGAGTTCTTC 22 98 1030
2379 2398 525118 GTCTGCGAGGCGAGGGAGTT 20 99 1031
2398 2417 525119 CGCGGCGATTGAGACCTTCG 26 97 1032
2401 2420 525120 CGACGCGGCGATTGAGACCT 23 97 1033
2404 2423 525121 CTGCGACGCGGCGATTGAGA 47 92 1034

2407 2426 525122 CTTCTGCGACGCGGCGATTG 27 74 1035
2410 2429 525123 GATCTTCTGCGACGCGGCGA 36 87 1036
2413 2432 146790 TGAGATCTTCTGCGACGCGG 25 85 1037
2416 2435 525124 GATTGAGATCTTCTGCGACG 17 84 1038
2419 2438 525125 CGAGATTGAGATCTTCTGCG 24 82 1039
2422 2441 525126 TCCCGAGATTGAGATCTTCT 29 74 1040
2425 2444 525127 GGTTCCCGAGATTGAGATCT 14 79 1041
2428 2447 525128 TGAGGTTCCCGAGATTGAGA 41 76 1042
2431 2450 525129 CATTGAGGTTCCCGAGATTG 39 72 1043
2434 2453 525130 TAACATTGAGGTTCCCGAGA 37 71 1044
2437 2456 525131 TACTAACATTGAGGTTCCCG 42 76 1045
2440 2459 525132 GAATACTAACATTGAGGTTC 21 75 1046
2443 2462 525133 AAGGAATACTAACATTGAGG 36 75 1047
2446 2465 525134 TCCAAGGAATACTAACATTG 29 77 1048
2449 2468 525135 GAGTCCAAGGAATACTAACA 32 76 1049
2452 2471 525136 TATGAGTCCAAGGAATACTA 23 62 1050
2455 2474 525137 CCTTATGAGTCCAAGGAATA 27 57 1051
2458 2477 525138 CCACCTTATGAGTCCAAGGA 52 82 1052
2461 2480 525139 TCCCCACCTTATGAGTCCAA 46 80 1053
2464 2483 525140 AGTTCCCCACCTTATGAGTC 14 59 1054
2467 2486 525141 TAAAGTTCCCCACCTTATGA 20 45 1055
2470 2489 525142 CAGTAAAGTTCCCCACCTTA 14 72 1056
2473 2492 525143 GACCAGTAAAGTTCCCCACC 30 77 1057
2476 2495 525144 AAAGACCAGTAAAGTTCCCC 19 72 1058
2479 2498 525145 AATAAAGACCAGTAAAGTTC 18 55 1059
2482 2501 525146 AAGAATAAAGACCAGTAAAG 16 51 1060

2485 2504 525147 TAGAAGAATAAAGACCAGTA 22 68 1061
2488 2507 525148 CAGTAGAAGAATAAAGACCA 13 59 1062
2491 2510 525149 GTACAGTAGAAGAATAAAGA 0 45 1063
2494 2513 525150 CAGGTACAGTAGAAGAATAA 31 62 1064
2497 2516 525151 AGACAGGTACAGTAGAAGAA 8 62 1065
2500 2519 525152 TAAAGACAGGTACAGTAGAA 29 61 1066
2503 2522 525153 GATTAAAGACAGGTACAGTA 28 67 1067
2506 2525 525154 GAGGATTAAAGACAGGTACA 38 76 1068
2509 2528 525155 AATGAGGATTAAAGACAGGT 30 72 1069
2512 2531 525156 TCCAATGAGGATTAAAGACA 24 67 1070
2515 2534 525157 TTTTCCAATGAGGATTAAAG 0 44 1071
2518 2537 525158 GTGTTTTCCAATGAGGATTA 20 74 1072
2521 2540 525159 ATGGTGTTTTCCAATGAGGA 30 71 1073
2524 2543 525160 AAGATGGTGTTTTCCAATGA 22 68 1074
2527 2546 525161 GAAAAGATGGTGTTTTCCAA 19 61 1075
2530 2549 525162 TAGGAAAAGATGGTGTTTTC 14 52 1076
2533 2552 525163 TATTAGGAAAAGATGGTGTT 1 47 1077
2536 2555 525164 GTATATTAGGAAAAGATGGT 0 60 1078
2539 2558 525165 AATGTATATTAGGAAAAGAT 0 30 1079
2542 2561 525166 GTAAATGTATATTAGGAAAA 1 18 1080
2545 2564 525167 GGTGTAAATGTATATTAGGA 23 72 1081
2548 2567 525168 CTTGGTGTAAATGTATATTA 32 75 1082
2551 2570 525169 TGTCTTGGTGTAAATGTATA 12 65 1083
2554 2573 525170 TAATGTCTTGGTGTAAATGT 3 51 1084
2557 2576 525171 TGATAATGTCTTGGTGTAAA 24 62 1085

2560 2579 525172 TTTTGATAATGTCTTGGTGT 18 66 1086
2563 2582 525173 ATTTTTTGATAATGTCTTGG 11 63 1087
2566 2585 525174 CACATTTTTTGATAATGTCT 20 68 1088
2569 2588 525175 GTTCACATTTTTTGATAATG 38 68 1089
2572 2591 525176 ACTGTTCACATTTTTTGATA 12 61 1090
2575 2594 525177 CAAACTGTTCACATTTTTTG 25 56 1091
2578 2597 525178 CTACAAACTGTTCACATTTT 21 47 1092
2581 2600 525179 GGCCTACAAACTGTTCACAT 28 83 1093
2584 2603 525180 GTGGGCCTACAAACTGTTCA 7 72 1094
2587 2606 525181 TAAGTGGGCCTACAAACTGT 26 75 1095
2590 2609 525182 CTGTAAGTGGGCCTACAAAC 35 78 1096
2593 2612 525183 TAACTGTAAGTGGGCCTACA 29 69 1097
2596 2615 525184 CATTAACTGTAAGTGGGCCT 22 73 1098
2599 2618 525185 TCTCATTAACTGTAAGTGGG 31 81 1099
2602 2621 525186 TTTTCTCATTAACTGTAAGT 15 58 1100
2605 2624 525187 TTCTTTTCTCATTAACTGTA 14 71 1101
2608 2627 525188 ATCTTCTTTTCTCATTAACT 19 71 1102
2611 2630 525189 GCAATCTTCTTTTCTCATTA 36 79 1103
2614 2633 525190 ATTGCAATCTTCTTTTCTCA 38 82 1104
2617 2636 525191 TCAATTGCAATCTTCTTTTC 23 61 1105
2620 2639 525192 TAATCAATTGCAATCTTCTT 10 67 1106
2623 2642 525193 GCATAATCAATTGCAATCTT 27 71 1107
2626 2645 525194 CAGGCATAATCAATTGCAAT 23 71 1108
2629 2648 525195 TAGCAGGCATAATCAATTGC 30 77 1109
2632 2651 525196 ACCTAGCAGGCATAATCAAT 7 70 1110
2635 2654 525197 AAAACCTAGCAGGCATAATC 47 70 1111

2638 2657 525198 GATAAAACCTAGCAGGCATA 41 81 1112
2641 2660 525199 TTGGATAAAACCTAGCAGGC 30 78 1113
2644 2663 525200 CCTTTGGATAAAACCTAGCA 31 76 1114
2647 2666 525201 TAACCTTTGGATAAAACCTA 25 63 1115
2650 2669 525202 TGGTAACCTTTGGATAAAAC 24 76 1116
2653 2672 525203 ATTTGGTAACCTTTGGATAA 20 64 1117
2656 2675 525204 AATATTTGGTAACCTTTGGA 16 77 1118
2659 2678 525205 GTAAATATTTGGTAACCTTT 39 80 1119
2662 2681 525206 ATGGTAAATATTTGGTAACC 40 75 1120
2665 2684 525207 CCAATGGTAAATATTTGGTA 38 75 1121
2668 2687 525208 TATCCAATGGTAAATATTTG 0 0 1122
2671 2690 525209 CCTTATCCAATGGTAAATAT 28 57 1123
2674 2693 525210 TACCCTTATCCAATGGTAAA 18 71 1124
2677 2696 525211 TAATACCCTTATCCAATGGT 35 76 1125
2680 2699 525212 GTTTAATACCCTTATCCAAT 41 77 1126
2683 2702 525213 AAGGTTTAATACCCTTATCC 11 79 1127
2686 2705 525214 AATAAGGTTTAATACCCTTA 35 75 1128
2689 2708 525215 GATAATAAGGTTTAATACCC 22 54 1129
2692 2711 525216 CTGGATAATAAGGTTTAATA 19 35 1130
2695 2714 525217 GTTCTGGATAATAAGGTTTA 24 58 1131
2698 2717 525218 GATGTTCTGGATAATAAGGT 20 73 1132
2701 2720 525219 CTAGATGTTCTGGATAATAA 26 66 1133
2704 2723 525220 TAACTAGATGTTCTGGATAA 21 66 1134
2707 2726 525221 GATTAACTAGATGTTCTGGA 30 78 1135
2710 2729 525222 AATGATTAACTAGATGTTCT 30 61 1136

2713 2732 525223 AGTAATGATTAACTAGATGT 9 57 1137
2716 2735 525224 GGAAGTAATGATTAACTAGA 18 72 1138
2719 2738 525225 TTTGGAAGTAATGATTAACT 7 67 1139
2722 2741 525226 TAGTTTGGAAGTAATGATTA 2 30 1140
2725 2744 525227 GTCTAGTTTGGAAGTAATGA 27 78 1141
2728 2747 525228 AGTGTCTAGTTTGGAAGTAA 27 75 1142
2731 2750 525229 AATAGTGTCTAGTTTGGAAG 34 73 1143
2734 2753 525230 GTAAATAGTGTCTAGTTTGG 28 68 1144
2737 2756 525231 TGTGTAAATAGTGTCTAGTT 27 79 1145
2740 2759 525232 GAGTGTGTAAATAGTGTCTA 27 71 1146
2743 2762 525233 ATAGAGTGTGTAAATAGTGT 17 75 1147
2746 2765 525234 TCCATAGAGTGTGTAAATAG 18 75 1148
2749 2768 525235 CCTTCCATAGAGTGTGTAAA 23 80 1149
2752 2771 525236 CCGCCTTCCATAGAGTGTGT 26 82 1150
2755 2774 525237 TACCCGCCTTCCATAGAGTG 19 80 1151
2758 2777 525238 ATATACCCGCCTTCCATAGA 0 67 1152
2761 2780 525239 ATAATATACCCGCCTTCCAT 19 70 1153
2764 2783 525240 TATATAATATACCCGCCTTC 9 73 1154
2767 2786 525241 TCTTATATAATATACCCGCC 20 80 1155
2770 2789 525242 CTCTCTTATATAATATACCC 29 76 1156
2773 2792 525243 TTTCTCTCTTATATAATATA 16 58 1157
2776 2795 525244 TTGTTTCTCTCTTATATAAT 26 57 1158
2779 2798 525245 GTGTTGTTTCTCTCTTATAT 35 85 1159
2782 2801 525246 TATGTGTTGTTTCTCTCTTA 34 82 1160
2785 2804 525247 CGCTATGTGTTGTTTCTCTC 34 86 1161
2802 2821 525248 TGACCCACAAAATGAGGCGC 17 71 1162

2805 2824 525249 TGGTGACCCACAAAATGAGG 31 67 1163
2808 2827 525250 ATATGGTGACCCACAAAATG 38 69 1164
2811 2830 525251 AGAATATGGTGACCCACAAA 37 77 1165
2814 2833 525252 CCAAGAATATGGTGACCCAC 35 79 1166
2817 2836 146831 TTCCCAAGAATATGGTGACC 27 75 1167
2820 2839 525253 TTGTTCCCAAGAATATGGTG 33 69 1168
2823 2842 525254 ATCTTGTTCCCAAGAATATG 27 65 1169
2826 2845 525255 TAGATCTTGTTCCCAAGAAT 31 70 1170
2829 2848 525256 CTGTAGATCTTGTTCCCAAG 42 81 1171
2832 2851 525257 ATGCTGTAGATCTTGTTCCC 34 80 1172
2835 2854 525258 CCCATGCTGTAGATCTTGTT 38 80 1173
2838 2857 525259 TGCCCCATGCTGTAGATCTT 36 80 1174
2841 2860 525260 TTCTGCCCCATGCTGTAGAT 32 74 1175
2844 2863 525261 AGATTCTGCCCCATGCTGTA 27 75 1176
2847 2866 525262 GAAAGATTCTGCCCCATGCT 34 70 1177
2850 2869 525263 GTGGAAAGATTCTGCCCCAT 22 76 1178
2853 2872 525264 CTGGTGGAAAGATTCTGCCC 36 72 1179
2856 2875 525265 TTGCTGGTGGAAAGATTCTG 32 71 1180
2859 2878 525266 GGATTGCTGGTGGAAAGATT 20 74 1181
2862 2881 525267 AGAGGATTGCTGGTGGAAAG 25 73 1182
2865 2884 525268 CCCAGAGGATTGCTGGTGGA 40 82 1183
2868 2887 525269 AATCCCAGAGGATTGCTGGT 32 79 1184
2871 2890 525270 AAGAATCCCAGAGGATTGCT 23 69 1185
2874 2893 525271 GGAAAGAATCCCAGAGGATT 10 66 1186
2877 2896 525272 TCGGGAAAGAATCCCAGAGG 29 73 1187

2880 2899 525273 TGGTCGGGAAAGAATCCCAG 31 77 1188
2883 2902 525274 TGGTGGTCGGGAAAGAATCC 38 71 1189
2886 2905 525275 AACTGGTGGTCGGGAAAGAA 33 78 1190
2889 2908 525276 TCCAACTGGTGGTCGGGAAA 29 76 1191
2892 2911 525277 GGATCCAACTGGTGGTCGGG 19 81 1192
2895 2914 525278 GCTGGATCCAACTGGTGGTC 24 74 1193
2898 2917 525279 AAGGCTGGATCCAACTGGTG 33 83 1194
2901 2920 525280 CTGAAGGCTGGATCCAACTG 18 81 1195
2904 2923 525286 GCTCTGAAGGCTGGATCCAA 40 79 1196
2907 2926 525287 TTTGCTCTGAAGGCTGGATC 34 69 1197
2910 2929 525288 GTGTTTGCTCTGAAGGCTGG 38 72 1198
2913 2932 525289 GCTGTGTTTGCTCTGAAGGC 40 82 1199
2916 2935 525290 TTTGCTGTGTTTGCTCTGAA 44 78 1200
2919 2938 525291 GGATTTGCTGTGTTTGCTCT 38 76 1201
2922 2941 525292 TCTGGATTTGCTGTGTTTGC 28 79 1202
2925 2944 525293 CAATCTGGATTTGCTGTGTT 26 61 1203
2928 2947 525294 TCCCAATCTGGATTTGCTGT 32 68 1204
2931 2950 525295 AAGTCCCAATCTGGATTTGC 33 59 1205
2934 2953 146832 TTGAAGTCCCAATCTGGATT 17 35 1206
2937 2956 525296 GGATTGAAGTCCCAATCTGG 35 62 1207
2940 2959 525297 TTGGGATTGAAGTCCCAATC 10 36 1208
2943 2962 525298 TTGTTGGGATTGAAGTCCCA 24 49 1209
2946 2965 525299 TCCTTGTTGGGATTGAAGTC 16 52 1210
2949 2968 525300 GTGTCCTTGTTGGGATTGAA 18 71 1211
2952 2971 525301 CAGGTGTCCTTGTTGGGATT 25 73 1212
2955 2974 525302 GGCCAGGTGTCCTTGTTGGG 31 70 1213

2958 2977 525303 TCTGGCCAGGTGTCCTTGTT 29 75 1214
2978 2997 525304 CAGCTCCTACCTTGTTGGCG 29 71 1215
2981 3000 525305 CTCCAGCTCCTACCTTGTTG 19 63 1216
2984 3003 525306 ATGCTCCAGCTCCTACCTTG 35 75 1217
2987 3006 525307 CGAATGCTCCAGCTCCTACC 13 77 1218
2990 3009 525308 GCCCGAATGCTCCAGCTCCT 28 72 1219
2993 3012 525309 CCAGCCCGAATGCTCCAGCT 32 77 1220
2996 3015 525310 AACCCAGCCCGAATGCTCCA 34 72 1221
2999 3018 525311 TGAAACCCAGCCCGAATGCT 28 69 1222
3002 3021 525312 GGGTGAAACCCAGCCCGAAT 18 68 1223
3020 3039 525313 AAAGGCCTCCGTGCGGTGGG 36 77 1224
3023 3042 525314 CCAAAAGGCCTCCGTGCGGT 34 83 1225
3026 3045 525315 ACCCCAAAAGGCCTCCGTGC 28 70 1226
3029 3048 525316 TCCACCCCAAAAGGCCTCCG 26 65 1227
3032 3051 525317 GGCTCCACCCCAAAAGGCCT 19 36 1228
3035 3054 525318 GAGGGCTCCACCCCAAAAGG 14 36 1229
3038 3057 525319 CCTGAGGGCTCCACCCCAAA 32 71 1230
3041 3060 525320 GAGCCTGAGGGCTCCACCCC 37 61 1231
3044 3063 525321 CCTGAGCCTGAGGGCTCCAC 42 70 1232
3047 3066 525322 TGCCCTGAGCCTGAGGGCTC 24 56 1233
3050 3069 525323 GTATGCCCTGAGCCTGAGGG 14 75 1234
3053 3072 525324 GTAGTATGCCCTGAGCCTGA 29 83 1235
3056 3075 525325 TTTGTAGTATGCCCTGAGCC 32 61 1236
3059 3078 525326 AAGTTTGTAGTATGCCCTGA 35 70 1237
3062 3081 525327 GCAAAGTTTGTAGTATGCCC 37 61 1238

3065 3084 525328 CTGGCAAAGTTTGTAGTATG 26 63 1239
3068 3087 525329 TTGCTGGCAAAGTTTGTAGT 37 74 1240
3071 3090 525330 GATTTGCTGGCAAAGTTTGT 20 56 1241
3074 3093 525331 GCGGATTTGCTGGCAAAGTT 28 80 1242
3077 3096 525332 GAGGCGGATTTGCTGGCAAA 38 74 1243
3080 3099 525333 CAGGAGGCGGATTTGCTGGC 41 66 1244
3083 3102 525334 AGGCAGGAGGCGGATTTGCT 27 55 1245
3086 3105 525335 TGGAGGCAGGAGGCGGATTT 13 17 1246
3089 3108 525336 TGGTGGAGGCAGGAGGCGGA 7 21 1247
3092 3111 525337 GATTGGTGGAGGCAGGAGGC 21 44 1248
3095 3114 525338 GGCGATTGGTGGAGGCAGGA 31 65 1249
3098 3117 525339 TCTGGCGATTGGTGGAGGCA 15 76 1250
3101 3120 525340 CTGTCTGGCGATTGGTGGAG 35 73 1251
3104 3123 525341 TTCCTGTCTGGCGATTGGTG 32 72 1252
3107 3126 525342 GCCTTCCTGTCTGGCGATTG 28 64 1253
3110 3129 525343 GCTGCCTTCCTGTCTGGCGA 25 69 1254
3113 3132 525344 TAGGCTGCCTTCCTGTCTGG 32 79 1255
3116 3135 525345 GGGTAGGCTGCCTTCCTGTC 35 80 1256
3134 3153 525346 TCAAAGGTGGAGACAGCGGG 4 57 1257
3137 3156 525347 TTCTCAAAGGTGGAGACAGC 32 72 1258
3140 3159 525348 TGTTTCTCAAAGGTGGAGAC 32 66 1259
3143 3162 525349 GAGTGTTTCTCAAAGGTGGA 34 63 1260
3146 3165 525350 GATGAGTGTTTCTCAAAGGT 35 68 1261
3149 3168 525351 GAGGATGAGTGTTTCTCAAA 36 84 1262
3152 3171 525352 CCTGAGGATGAGTGTTTCTC 44 77 1263
3155 3174 52535 TGGCCTGAGGATGAGTGTTT 32 72 1264

3158 3177 525354 GCATGGCCTGAGGATGAGTG 27 73 1265
3162 3181 525355 CACTGCATGGCCTGAGGATG 40 69 1266
Таблица 25
Ингибирование уровней мРНК HBV действием химерных антисмысловых олигонуклеотидов, направленных на SEQ ID NO:1286 (RTS3370 и RTS3372)
Вирусный сайт инициации Вирусный терминирующий сайт № ISIS Последовательность RTS3370% ингибирование RTS3372% ингибирование SEQ ID NO
85 104 525356 TTCCACTGCATGGCCTGAGG 53 78 1267
88 107 525357 GAATTCCACTGCATGGCCTG 44 68 1268
91 110 525358 GTGGAATTCCACTGCATGGC 42 80 1269
94 113 525359 GTTGTGGAATTCCACTGCAT 45 77 1270
97 116 525360 AAGGTTGTGGAATTCCACTG 65 67 1271
100 119 525361 TGAAAGGTTGTGGAATTCCA 56 61 1272

Пример 12: Зависимое от дозы ингибирование вирусной РНК HBV в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Некоторые химерные олигонуклеотиды из исследования, описанного в Примерах 11 и 12, испытали при различных дозах в клетках HepG2.2.15 человека. Клетки поместили на планшет при плотности 28 ООО клеток на лунку и трансфицировали при помощи реагента LipofectAMINE 2000® антисмысловыми олигонуклеотидами в концентрациях 5, 56 нМ, 16,67 нМ, 50,0 нМ и 150,0 нМ, как показано в Таблице 26. Примерно через 16 часов обработки, РНК выделили из клеток, и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Полумаксимальные ингибирующие концентрации (IC50) каждого олигонуклеотида также представлены в Таблице 26. Как показано в Таблице 26, в клетках, обработанных антисмысловыми олигонуклеотидами, уровни мРНК HBV снизились зависимым от дозы образом.

Таблица 26
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15 с использованием RTS3370
№ ISIS 5, 5556 нМ 16,6667 нМ 50,0 нМ 150,0 нМ IC50 (нМ)
146785 0 0 14 66 120,8
146786 40 64 78 88 8, 5
505314 23 35 58 84 28,8
505339 28 42 62 84 23,2
505347 9 21 45 75 53, 5
514469 11 22 69 79 35,4
524493 13 39 56 81 32,8
524540 15 38 54 80 34,0
524617 14 32 78 83 27,1
524619 33 42 60 84 21,3
524634 20 45 63 80 26,3
524641 39 49 62 86 14,9
524698 34 34 49 64 47,4
524699 25 31 44 63 66,1
524706 29 20 36 58 128,8
524709 32 26 48 56 89,1
524718 46 41 61 79 15,8
524731 49 53 68 83 8,1
524734 42 31 35 64 87,2
524767 19 38 62 84 27,8
524768 35 38 62 75 23, 5
524769 16 26 61 75 38,1
524806 0 0 0 35 >150,0
524807 3 22 39 74 60,2
524907 22 35 63 80 29,1
524908 25 45 67 78 22,9
524976 7 3 0 16 >150,0
524978 6 0 0 27 >150,0
524979 3 0 11 34 >150,0
524980 18 51 48 59 51, 5
524981 16 27 49 61 65,8
524982 21 19 29 54 >150,0
524983 23 40 50 60 53,2
524984 19 25 45 74 50,0
524985 13 19 40 56 107,2
524986 29 48 46 64 39,3
524987 17 0 43 61 102,8

524988 22 39 52 63 47,6
524991 0 7 19 20 >150,0
524997 17 0 1 9 >150,0
524998 1 5 8 34 >150,0
525095 5 0 0 18 >150,0
525100 14 5 14 26 >150,0
525101 0 0 15 19 >150,0
525102 0 0 18 23 >150,0
525103 0 0 3 15 >150,0
525179 18 7 9 18 >150,0
525245 0 0 8 8 >150,0
525247 12 15 16 23 >150,0
525289 1 1 15 30 >150,0
525314 17 0 18 25 >150,0
525324 0 6 13 16 >150,0
525351 28 13 22 30 >150,0

Некоторые ISIS-олигонуклеотиды испытали также с использованием набора затравочных зондов RTS3372. Результаты представлены в Таблице 27.

Таблица 27
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15 с использованием RTS3372
№ ISIS 5, 5556 нМ 16,6667 нМ 50,0 нМ 150,0 нМ IC50 (нМ)
146785 0 0 0 51 >150,0
146786 41 68 81 91 7,9
505347 0 13 44 75 59,7
524103 0 0 1 9 >150,0
524245 0 0 6 10 >150,0
524767 18 46 60 85 25,8
524768 34 41 66 79 20, 5
524769 12 38 60 77 34, 5
524806 0 0 0 0 >150,0
524807 0 9 34 70 78,6
524907 20 41 62 84 26,4
524908 27 45 66 82 21,3
524976 0 0 0 16 >150,0
524978 3 0 0 22 >150,0
524979 0 0 0 33 >150,0
524980 28 51 52 67 30,1
524981 7 29 51 66 55,8

524982 22 29 37 63 83, 5
524983 20 51 43 62 50,9
524984 20 30 38 75 51,7
524985 30 33 40 60 83,6
524986 25 51 51 66 33,8
524987 19 0 24 65 157,6
524988 12 41 45 62 59,2
524991 0 0 4 8 >150,0
524997 19 0 0 15 >150,0
524998 0 0 1 42 >150,0
525095 0 0 0 17 >150,0
525100 10 0 4 19 >150,0
525101 10 0 21 25 >150,0
525102 0 0 10 15 >150,0
525247 11 12 15 28 >150,0
525289 0 9 11 33 >150,0
525314 1 0 18 24 >150,0
525324 9 8 15 10 >150,0

Пример 13: Зависимое от дозы ингибирование вирусной РНК HBV в клетках HepG2.2.15 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Некоторые химерные олигонуклеотиды из исследований, описанных выше, испытали при различных дозах на клетках HepG2.2.15 человека. Клетки поместили на планшет при плотности 30000 клеток на лунку и трансфицировали при помощи реагента LipofectAMINE 2000® антисмысловыми олигонуклеотидами в концентрациях 7,8125 нМ, 15,625 нМ, 31,25 нМ, 62, 5 нМ, 125,0 нМ и 250,0 нМ, как показано в Таблице 28. Примерно через 16 часов обработки, РНК выделили из клеток, и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3370. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Полумаксимальные ингибирующие концентрации (ICso) каждого олигонуклеотида также представлены в Таблице 28. Как показано в Таблице 28, в некоторых клетках, обработанных антисмысловыми олигонуклеотидами, уровни мРНК HBV снизились зависимым от дозы образом.

Таблица 28
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2.2.15 с использованием RTS3370
№ ISIS 7,8125 нМ 15,625 нМ 31,25 нМ 62, 5 нМ 125,0 нМ 250,0 нМ IC50 (нМ)
146786 0 0 14 49 33 50 161,2
510100 0 17 30 28 44 53 177,8
510106 0 4 0 0 29 0 >250,0
509934 0 0 0 7 16 0 >250,0
510116 0 0 8 21 27 25 >250,0
505347 31 3 30 63 80 81 48,7

Пример 14: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepG2 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. Антисмысловые олигонуклеотиды испытали в серии экспериментов, имеющих такие же культуральные условия. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах. Включили также ISIS 146786, 509934, ISIS 509959 и ISIS 510100 из исследований, описанных выше. Культивированные клетки HepG2 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® 70 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПНР в реальном времени. Набор вирусных затравочных зондов RTS3370 (прямая последовательность CTTGGTCATGGGCCATCAG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:2; обратная последовательность CGGCTAGGAGTTCCGCAGTA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO: 3; последовательность зонда TGCGTGGAACCTTTTCGGCTCC, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:4) использовали для измерения уровней мРНК. Уровни измерили также с использованием набора затравочных зондов RTS3371 (прямая последовательность CCAAACCTTCGGACGGAAA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:311; обратная последовательность TGAGGCCCACTCCCATAGG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO: 312; последовательность зонда CCCATCATCCTGGGCTTTCGGAAAAT, в настоящем документе обозначена как SEQ Ю NO: 313). Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками. В некоторых анализах, показанных в Таблицах 32, 35, 42, 45 и 46, эффективность ISIS 146786 измерили в двух лунках на одном планшете. В этих случаях представлены значения уровней ингибирования в обеих лунках.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблицах ниже были разработаны как 2-9-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 2-9-6 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 2-10-8 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 3-9-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 3-9-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 3-10-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 3-10-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 3-10-7 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 4-9-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 4-9-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 4-10-6 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 5-9-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 5-9-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 6-9-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 6-10-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды, 7-10-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды или 8-10-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды. 2-9-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие два и пять нуклеозидов, соответственно. 2-9-6 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие два и шесть нуклеозидов, соответственно. 2-10-8 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие два и восемь нуклеозидов, соответственно. 3-9-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие три и четыре нуклеозида, соответственно. 3-9-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие три и пять нуклеозидов, соответственно. 3-10-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по три нуклеозида. 3-10-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие три и четыре нуклеозида, соответственно. 3-10-7 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие три и семь нуклеозидов, соответственно. 4-9-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие четыре и три нуклеозида, соответственно. 4-9-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по четыре нуклеозидов. 4-10-6 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие четыре и шесть нуклеозидов, соответственно. 5-9-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие пять и два нуклеозида, соответственно. 5-9-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие пять и три нуклеозида, соответственно. 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по пять нуклеозидов. 6-9-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 17 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие шесть и два нуклеозида, соответственно. 6-10-4 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие шесть и четыре нуклеозида, соответственно. 7-10-3 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие семь и три нуклеозида, соответственно. 8-10-2 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие восемь и два нуклеозида, соответственно. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла, и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла имеет МОЕ модификацию сахара. Колонка «мотив» указывает мотивы с количеством нуклеозидов в крыльях и сегменте гэп каждого олигонуклеотида. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Колонка «мотив» указывает структуру гэп и крыльев каждого химерного олигонуклеотида. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблицах, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №LJ95551.1). Эффективность новых разработанных олигонуклеотидов сравнили с ISIS 146786, 509934, ISIS 509959 и 510100, информация для которых помещена в верхнюю часть каждой таблице.

Таблица 29
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 50 224
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 62 17
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552276 5-9-3 42 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552277 5-9-3 46 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552278 5-9-3 31 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552279 5-9-3 41 1291
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552280 5-9-3 5 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552281 5-9-3 11 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552282 5-9-3 20 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552283 5-9-3 28 12
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552230 4-9-4 57 17
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552284 5-9-3 0 17
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552231 4-9-4 29 18
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552285 5-9-3 61 18
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552232 4-9-4 35 19
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552286 5-9-3 47 19
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552233 4-9-4 38 21
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552287 5-9-3 45 21
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552234 4-9-4 0 23
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552288 5-9-3 50 23
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552235 4-9-4 0 25
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552289 5-9-3 46 25
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552236 4-9-4 45 27
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552290 5-9-3 41 27
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552237 4-9-4 44 29
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552291 5-9-3 26 29
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552239 4-9-4 62 1292
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552293 5-9-3 67 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552240 4-9-4 61 1293
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552294 5-9-3 71 1293

672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552241 4-9-4 55 1294
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552295 5-9-3 58 1294
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552242 4-9-4 60 40
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552296 5-9-3 59 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552243 4-9-4 57 41
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552297 5-9-3 55 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552244 4-9-4 33 42
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552298 5-9-3 48 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552245 4-9-4 48 43
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552299 5-9-3 34 43
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552246 4-9-4 81 1295
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552300 5-9-3 56 1295
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552247 4-9-4 87 1296
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552301 5-9-3 86 1296
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552248 4-9-4 72 1297
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552302 5-9-3 77 1297
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552249 4-9-4 56 1298
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552303 5-9-3 65 1298
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552250 4-9-4 52 1299
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552304 5-9-3 57 1299
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552251 4-9-4 43 1300
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552305 5-9-3 56 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552252 4-9-4 62 1301
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552306 5-9-3 75 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552253 4-9-4 82 1302
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552307 5-9-3 90 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552254 4-9-4 74 1303
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552255 4-9-4 78 1304
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552256 4-9-4 65 1305
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552257 4-9-4 62 1306
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552258 4-9-4 72 1307
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552259 4-9-4 63 1308
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552260 4-9-4 58 1309
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552261 4-9-4 63 1310
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552262 4-9-4 50 1311
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552263 4-9-4 60 1312
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552264 4-9-4 52 1313
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552265 4-9-4 68 1314
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552266 4-9-4 62 1315
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552267 4-9-4 58 1316
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552268 4-9-4 62 1317
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552269 4-9-4 52 47
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552270 4-9-4 54 49

1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552271 4-9-4 58 51
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552272 4-9-4 40 53
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552273 4-9-4 34 54
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552274 4-9-4 34 55
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552275 4-9-4 39 56
Таблица 30
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA CGG 146786 5-10-5 49 224
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 509959 3-10-3 43 145
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 54 17
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552384 2-9-5 29 1318
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552440 3-9-4 58 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552385 2-9-5 57 1319
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552441 3-9-4 42 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552386 2-9-5 53 1320
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552442 3-9-4 53 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552387 2-9-5 48 1321
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552443 3-9-4 59 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552388 2-9-5 40 86
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552444 3-9-4 51 86
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552389 2-9-5 39 137
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552445 3-9-4 60 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552390 2-9-5 52 140
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552446 3-9-4 54 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552391 2-9-5 57 143
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552447 3-9-4 54 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552392 2-9-5 0 145
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552448 3-9-4 58 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552393 2-9-5 59 147
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552449 3-9-4 60 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552394 2-9-5 53 149
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552450 3-9-4 53 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552395 2-9-5 57 151
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552451 3-9-4 39 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552396 2-9-5 62 153

418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552452 3-9-4 57 153
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552238 4-9-4 38 33
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552292 5-9-3 48 33
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552346 6-9-2 0 33
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552397 2-9-5 63 167
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552453 3-9-4 56 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552398 2-9-5 61 168
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552454 3-9-4 48 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552399 2-9-5 52 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552400 2-9-5 57 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552401 2-9-5 52 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552402 2-9-5 54 1324
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552403 2-9-5 74 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552404 2-9-5 43 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552405 2-9-5 15 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552406 2-9-5 37 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552407 2-9-5 37 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552408 2-9-5 76 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552409 2-9-5 76 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552410 2-9-5 63 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552411 2-9-5 70 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552412 2-9-5 62 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552413 2-9-5 56 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552414 2-9-5 63 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552415 2-9-5 52 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552416 2-9-5 67 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552417 2-9-5 50 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552418 2-9-5 79 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552419 2-9-5 70 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552420 2-9-5 71 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552421 2-9-5 69 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552422 2-9-5 68 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552423 2-9-5 65 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552424 2-9-5 70 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552425 2-9-5 51 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552426 2-9-5 40 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552427 2-9-5 35 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552428 2-9-5 58 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552429 2-9-5 46 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552430 2-9-5 53 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552431 2-9-5 51 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552432 2-9-5 57 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552433 2-9-5 54 230

1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552434 2-9-5 44 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552435 2-9-5 46 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552436 2-9-5 36 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552437 2-9-5 27 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552438 2-9-5 27 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552439 2-9-5 13 236
Таблица 31
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 35 224
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 509959 3-10-3 52 145
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552496 4-9-3 47 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552497 4-9-3 57 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552498 4-9-3 45 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552499 4-9-3 52 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552500 4-9-3 46 86
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552501 4-9-3 44 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552502 4-9-3 57 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552503 4-9-3 52 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552504 4-9-3 45 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552505 4-9-3 56 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552506 4-9-3 54 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552507 4-9-3 34 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552508 4-9-3 34 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552509 4-9-3 48 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552510 4-9-3 50 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552455 3-9-4 66 181
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552511 4-9-3 66 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552456 3-9-4 64 1322
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552512 4-9-3 62 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552457 3-9-4 14 1323
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552513 4-9-3 56 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552458 3-9-4 59 1324
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552514 4-9-3 52 1324
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552459 3-9-4 69 188
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552515 4-9-3 57 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552460 3-9-4 0 190

688 703 ACCACTGAACAAATGG 552516 4-9-3 54 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552461 3-9-4 20 191
689 704 AACCACTGAACAAATG 552517 4-9-3 52 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552462 3-9-4 46 192
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552518 4-9-3 34 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552463 3-9-4 48 194
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552519 4-9-3 44 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552464 3-9-4 81 211
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552520 4-9-3 69 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552465 3-9-4 84 1325
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552521 4-9-3 80 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552466 3-9-4 75 1326
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552522 4-9-3 76 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552467 3-9-4 65 1327
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552523 4-9-3 71 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552468 3-9-4 53 1328
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552524 4-9-3 43 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552469 3-9-4 51 1329
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552525 4-9-3 57 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552470 3-9-4 46 1330
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552526 4-9-3 60 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552471 3-9-4 54 1331
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552527 4-9-3 72 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552472 3-9-4 78 1332
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552528 4-9-3 78 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552473 3-9-4 67 1333
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552529 4-9-3 77 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552474 3-9-4 79 1334
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552530 4-9-3 78 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552475 3-9-4 74 1335
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552531 4-9-3 68 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552476 3-9-4 52 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552477 3-9-4 76 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552478 3-9-4 70 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552479 3-9-4 67 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552480 3-9-4 68 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552481 3-9-4 57 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552482 3-9-4 51 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552483 3-9-4 48 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552484 3-9-4 58 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552485 3-9-4 51 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552486 3-9-4 55 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552487 3-9-4 62 1347

1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552488 3-9-4 51 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552489 3-9-4 49 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552490 3-9-4 51 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552491 3-9-4 51 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552492 3-9-4 38 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552493 3-9-4 52 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552494 3-9-4 17 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552495 3-9-4 49 236
Таблица 32
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 43 224
52
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 509959 3-10-3 38 145
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552552 5-9-2 33 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552553 5-9-2 46 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552554 5-9-2 54 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552555 5-9-2 50 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552556 5-9-2 46 86
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552557 5-9-2 57 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552558 5-9-2 55 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552559 5-9-2 66 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552560 5-9-2 44 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552561 5-9-2 48 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552562 5-9-2 52 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552563 5-9-2 45 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552564 5-9-2 41 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552565 5-9-2 54 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552566 5-9-2 56 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552567 5-9-2 71 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552568 5-9-2 64 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552569 5-9-2 59 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552570 5-9-2 60 1324
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552571 5-9-2 55 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552572 5-9-2 60 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552573 5-9-2 24 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552574 5-9-2 34 192

691 706 CGAACCACTGAACAAA 552575 5-9-2 36 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552576 5-9-2 67 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552577 5-9-2 64 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552578 5-9-2 75 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552579 5-9-2 75 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552580 5-9-2 59 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552581 5-9-2 54 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552582 5-9-2 61 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552583 5-9-2 69 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552584 5-9-2 74 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552585 5-9-2 62 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552586 5-9-2 79 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552587 5-9-2 71 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552532 4-9-3 48 1336
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552588 5-9-2 70 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552533 4-9-3 43 1337
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552589 5-9-2 59 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552534 4-9-3 62 1338
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552590 5-9-2 70 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552535 4-9-3 55 1339
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552591 5-9-2 51 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552536 4-9-3 3 1340
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552592 5-9-2 50 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552537 4-9-3 14 1341
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552593 5-9-2 46 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552538 4-9-3 52 1342
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552594 5-9-2 55 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552539 4-9-3 47 1343
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552595 5-9-2 60 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552540 4-9-3 60 1344
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552596 5-9-2 63 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552541 4-9-3 60 1345
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552597 5-9-2 61 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552542 4-9-3 64 1346
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552598 5-9-2 57 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552543 4-9-3 46 1347
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552600 5-9-2 59 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552544 4-9-3 53 1348
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552602 5-9-2 6 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552545 4-9-3 33 230
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552604 5-9-2 47 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552546 4-9-3 42 231
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552606 5-9-2 53 231

1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552547 4-9-3 51 232
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552608 5-9-2 53 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552548 4-9-3 52 233
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552610 5-9-2 47 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552549 4-9-3 38 234
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552612 5-9-2 39 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552550 4-9-3 19 235
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552614 5-9-2 24 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552551 4-9-3 24 236
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552616 5-9-2 15 236
Таблица 33
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 51 224
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 5-10-5 76 50
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 552007 6-10-4 61 83
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 552039 7-10-3 84 83
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 552008 6-10-4 48 103
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 552040 7-10-3 48 103
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 552009 6-10-4 77 136
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 552041 7-10-3 73 136
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 552010 6-10-4 63 139
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 552042 7-10-3 66 139
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 552011 6-10-4 52 142
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 552043 7-10-3 54 142
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 552012 6-10-4 73 20
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 552044 7-10-3 86 20

415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 552013 6-10-4 73 22
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 552045 7-10-3 65 22
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 552014 6-10-4 76 24
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 552046 7-10-3 93 24
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 552015 6-10-4 70 26
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 552047 7-10-3 77 26
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 552016 6-10-4 61 28
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 552048 7-10-3 66 28
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 552017 6-10-4 73 39
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 552049 7-10-3 73 39
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 552018 6-10-4 98 719
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 552050 7-10-3 98 719
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 552019 6-10-4 98 212
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 552051 7-10-3 99 212
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 551986 4-10-6 92 720
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 552020 6-10-4 97 720
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 552052 7-10-3 98 720
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 551987 4-10-6 95 721
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 552021 6-10-4 97 721
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 552053 7-10-3 98 721
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 551988 4-10-6 50 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552005 5-10-5 99 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552022 6-10-4 99 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552054 7-10-3 99 1349
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 551989 4-10-6 96 722
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 552023 6-10-4 99 722

1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 552055 7-10-3 98 722
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 551990 4-10-6 86 224
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 552024 6-10-4 89 224
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 552056 7-10-3 88 224
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 551991 4-10-6 0 801
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 552025 6-10-4 90 801
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 552057 7-10-3 92 801
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 551992 4-10-6 72 802
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 552026 6-10-4 88 802
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 552058 7-10-3 86 802
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 551993 4-10-6 82 225
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 552027 6-10-4 87 225
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 552059 7-10-3 88 225
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 551994 4-10-6 85 804
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 552028 6-10-4 83 804
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 552060 7-10-3 82 804
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 551995 4-10-6 84 805
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 552029 6-10-4 88 805
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 552061 7-10-3 85 805
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 551996 4-10-6 87 226
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 552030 6-10-4 88 226
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 552062 7-10-3 85 226
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 551997 4-10-6 83 806
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 552031 6-10-4 82 806
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 551998 4-10-6 85 807

1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 552032 6-10-4 87 807
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 551999 4-10-6 82 227
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 552033 6-10-4 87 227
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552000 4-10-6 83 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552006 5-10-5 88 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552034 6-10-4 89 1350
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552001 4-10-6 65 46
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552035 6-10-4 60 46
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552002 4-10-6 63 48
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552036 6-10-4 65 48
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552003 4-10-6 65 50
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552037 6-10-4 58 50
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552004 4-10-6 58 52
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552038 6-10-4 70 52
Таблица 34
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 64 224
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 62 17
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552168 3-9-5 79 1288
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552222 4-9-4 79 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552169 3-9-5 67 1289
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552223 4-9-4 40 1289

60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552170 3-9-5 69 1290
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552224 4-9-4 64 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552171 3-9-5 65 1291
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552225 4-9-4 69 1291
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552172 3-9-5 33 9
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552226 4-9-4 48 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552173 3-9-5 41 10
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552227 4-9-4 32 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552174 3-9-5 31 11
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552228 4-9-4 42 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552175 3-9-5 59 12
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552176 3-9-5 68 17
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552177 3-9-5 55 18
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552178 3-9-5 66 19
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552179 3-9-5 70 21
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552180 3-9-5 66 23
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552181 3-9-5 51 25
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552182 3-9-5 69 27
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552183 3-9-5 69 29
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552184 3-9-5 43 33
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552185 3-9-5 66 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552186 3-9-5 54 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552187 3-9-5 74 1294
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552188 3-9-5 78 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552189 3-9-5 57 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552190 3-9-5 39 42

690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552191 3-9-5 60 43
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552192 3-9-5 85 1295
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552193 3-9-5 86 1296
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552194 3-9-5 68 1297
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552195 3-9-5 73 1298
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552196 3-9-5 60 1299
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552197 3-9-5 60 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552198 3-9-5 61 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552199 3-9-5 89 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552200 3-9-5 85 1303
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552201 3-9-5 81 1304
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552202 3-9-5 76 1305
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552203 3-9-5 74 1306
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552204 3-9-5 71 1307
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552151 2-9-6 77 1308
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552205 3-9-5 78 1308
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552152 2-9-6 72 1309
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552206 3-9-5 77 1309
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552153 2-9-6 67 1310
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552207 3-9-5 81 1310
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552154 2-9-6 56 1311
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552208 3-9-5 70 1311
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552155 2-9-6 61 1312
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552209 3-9-5 63 1312
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552156 2-9-6 20 1313

1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552210 3-9-5 75 1313
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552157 2-9-6 39 1314
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552211 3-9-5 75 1314
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552158 2-9-6 70 1315
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552212 3-9-5 67 1315
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552159 2-9-6 74 1316
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552213 3-9-5 70 1316
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552160 2-9-6 78 1317
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552214 3-9-5 79 1317
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552161 2-9-6 56 47
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552215 3-9-5 61 47
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552162 2-9-6 64 49
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552216 3-9-5 62 49
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552163 2-9-6 71 51
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552217 3-9-5 58 51
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552164 2-9-6 52 53
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552218 3-9-5 56 53
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552165 2-9-6 53 54
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552219 3-9-5 33 54
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552166 2-9-6 41 55
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552220 3-9-5 53 55
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552167 2-9-6 54 56
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552221 3-9-5 31 56

Таблица 35
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 60 224
85
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 5-10-5 76 50
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 73 17
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 552071 8-10-2 79 83
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552114 2-9-6 66 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552115 2-9-6 70 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552116 2-9-6 68 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552117 2-9-6 70 1291
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 552072 8-10-2 50 103
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552118 2-9-6 66 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552119 2-9-6 62 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552120 2-9-6 35 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552121 2-9-6 39 12
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 552073 8-10-2 80 136
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552122 2-9-6 55 17
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 552074 8-10-2 73 139
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552123 2-9-6 75 18
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 552075 8-10-2 78 142
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552124 2-9-6 64 19
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 552076 8-10-2 70 20
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552125 2-9-6 73 21
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 552077 8-10-2 83 22
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552126 2-9-6 64 23
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 552078 8-10-2 80 24
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552127 2-9-6 72 25
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 552079 8-10-2 86 26
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552128 2-9-6 76 27
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 552080 8-10-2 83 28
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552129 2-9-6 72 29
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552131 2-9-6 61 1292

671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552132 2-9-6 73 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552133 2-9-6 75 1294
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 552081 8-10-2 76 39
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552134 2-9-6 58 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552135 2-9-6 67 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552136 2-9-6 65 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552137 2-9-6 55 43
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 552082 8-10-2 98 719
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552138 2-9-6 82 1295
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 552083 8-10-2 99 212
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552139 2-9-6 86 1296
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 552084 8-10-2 99 720
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552140 2-9-6 74 1297
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 552085 8-10-2 100 721
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552141 2-9-6 67 1298
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552086 8-10-2 100 1349
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552142 2-9-6 45 1299
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 552087 8-10-2 100 722
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552143 2-9-6 68 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552144 2-9-6 78 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552145 2-9-6 88 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552146 2-9-6 81 1303
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 552088 8-10-2 95 224
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552147 2-9-6 88 1304
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 552089 8-10-2 93 801
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552148 2-9-6 79 1305
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 552090 8-10-2 87 802
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552149 2-9-6 81 1306
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 552091 8-10-2 88 225
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 552092 8-10-2 90 804
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 552093 8-10-2 91 805
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 552094 8-10-2 88 226
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 552063 7-10-3 81 806

1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 552095 8-10-2 89 806
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 552064 7-10-3 85 807
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 552096 8-10-2 92 807
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 552065 7-10-3 86 227
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 552097 8-10-2 93 227
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552066 7-10-3 33 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552098 8-10-2 88 1350
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552067 7-10-3 50 46
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552099 8-10-2 70 46
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552068 7-10-3 73 48
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552100 8-10-2 70 48
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552069 7-10-3 73 50
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552101 8-10-2 76 50
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552070 7-10-3 71 52
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552102 8-10-2 64 52
Таблица 36
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 84 224
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 76 17
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552330 6-9-2 54 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552331 6-9-2 66 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552332 6-9-2 70 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552333 6-9-2 55 1291
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552334 6-9-2 42 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552335 6-9-2 39 10

255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552336 6-9-2 27 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552337 6-9-2 74 12
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552338 6-9-2 68 17
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552339 6-9-2 71 18
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552340 6-9-2 61 19
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552341 6-9-2 58 21
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552342 6-9-2 55 23
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552343 6-9-2 63 25
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552344 6-9-2 51 27
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552345 6-9-2 65 29
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552346 6-9-2 0 33
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552347 6-9-2 84 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552348 6-9-2 87 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552349 6-9-2 74 1294
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552350 6-9-2 59 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552351 6-9-2 60 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552352 6-9-2 53 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552353 6-9-2 0 43
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552354 6-9-2 83 1295
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552355 6-9-2 90 1296
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552356 6-9-2 0 1297
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552357 6-9-2 45 1298
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552358 6-9-2 74 1299
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552359 6-9-2 72 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552360 6-9-2 87 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552361 6-9-2 96 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552308 5-9-3 81 1303
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552362 6-9-2 92 1303
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552309 5-9-3 77 1304
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552363 6-9-2 92 1304
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552310 5-9-3 80 1305
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552364 6-9-2 87 1305
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552311 5-9-3 13 1306
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552365 6-9-2 84 1306
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552150 2-9-6 73 1307
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552312 5-9-3 77 1307
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552366 6-9-2 87 1307
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552313 5-9-3 64 1308
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552367 6-9-2 85 1308
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552314 5-9-3 73 1309
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552368 6-9-2 77 1309
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552315 5-9-3 75 1310
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552369 6-9-2 75 1310

1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552316 5-9-3 64 1311
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552370 6-9-2 63 1311
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552317 5-9-3 99 1312
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552371 6-9-2 81 1312
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552318 5-9-3 76 1313
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552372 6-9-2 65 1313
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552319 5-9-3 55 1314
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552373 6-9-2 74 1314
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552320 5-9-3 68 1315
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552374 6-9-2 78 1315
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552321 5-9-3 74 1316
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552375 6-9-2 81 1316
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552322 5-9-3 73 1317
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552376 6-9-2 78 1317
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552323 5-9-3 75 47
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552377 6-9-2 70 47
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552324 5-9-3 0 49
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552378 6-9-2 72 49
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552325 5-9-3 70 51
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552379 6-9-2 74 51
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552326 5-9-3 63 53
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552380 6-9-2 53 53
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552327 5-9-3 30 54
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552381 6-9-2 26 54
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552328 5-9-3 25 55
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552382 6-9-2 13 55
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552329 5-9-3 33 56
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552383 6-9-2 5 56
Таблица 37
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 5-10-5 30 50
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 551909 2-10-8 62 83
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 551941 3-10-7 74 83
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 551973 4-10-6 64 83

253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 551910 2-10-8 52 103
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 551942 3-10-7 54 103
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 551974 4-10-6 51 103
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 551911 2-10-8 58 136
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 551943 3-10-7 64 136
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 551975 4-10-6 57 136
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 551912 2-10-8 59 139
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 551944 3-10-7 66 139
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 551976 4-10-6 57 139
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 551913 2-10-8 58 142
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 551945 3-10-7 56 142
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 551977 4-10-6 56 142
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 551914 2-10-8 0 20
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 551946 3-10-7 48 20
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 551978 4-10-6 53 20
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 551915 2-10-8 44 22
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 551947 3-10-7 53 22
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 551979 4-10-6 64 22
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 551916 2-10-8 57 24
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 551948 3-10-7 68 24
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 551980 4-10-6 56 24
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 551917 2-10-8 58 26
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 551949 3-10-7 64 26
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 551981 4-10-6 63 26
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 551918 2-10-8 59 28
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 551950 3-10-7 71 28

418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 551982 4-10-6 63 28
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 551919 2-10-8 76 39
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 551951 3-10-7 71 39
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 551983 4-10-6 73 39
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 551920 2-10-8 68 719
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 551952 3-10-7 76 719
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 551984 4-10-6 81 719
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 551921 2-10-8 83 212
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 551953 3-10-7 82 212
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 551985 4-10-6 76 212
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 551922 2-10-8 73 720
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 551954 3-10-7 68 720
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 551923 2-10-8 59 721
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 551955 3-10-7 71 721
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 551924 2-10-8 80 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 551956 3-10-7 80 1349
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 551925 2-10-8 82 722
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 551957 3-10-7 88 722
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 551926 2-10-8 71 224
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 551958 3-10-7 74 224
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 551927 2-10-8 68 801
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 551959 3-10-7 69 801
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 551928 2-10-8 69 802
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 551960 3-10-7 62 802
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 551929 2-10-8 54 225

1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 551961 3-10-7 20 225
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 551930 2-10-8 53 804
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 551962 3-10-7 60 804
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 551931 2-10-8 47 805
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 551963 3-10-7 63 805
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 551932 2-10-8 68 226
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 551964 3-10-7 56 226
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 551933 2-10-8 72 806
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 551965 3-10-7 67 806
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 551934 2-10-8 64 807
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 551966 3-10-7 73 807
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 551935 2-10-8 68 227
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 551967 3-10-7 60 227
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 551936 2-10-8 67 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 551968 3-10-7 63 1350
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 551937 2-10-8 47 46
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 551969 3-10-7 36 46
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 551938 2-10-8 41 48
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 551970 3-10-7 43 48
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 551939 2-10-8 53 50
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 551971 3-10-7 55 50
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 551940 2-10-8 50 52
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 551972 3-10-7 58 52

Таблица 38
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 5-10-5 21 50
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 551909 2-10-8 52 83
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 551941 3-10-7 62 83
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 551973 4-10-6 58 83
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 551910 2-10-8 48 103
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 551942 3-10-7 36 103
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 551974 4-10-6 45 103
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 551911 2-10-8 61 136
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 551943 3-10-7 56 136
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 551975 4-10-6 60 136
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 551912 2-10-8 53 139
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 551944 3-10-7 48 139
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 551976 4-10-6 48 139
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 551913 2-10-8 53 142
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 551945 3-10-7 54 142
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 551977 4-10-6 48 142
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 551914 2-10-8 0 20
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 551946 3-10-7 56 20
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 551978 4-10-6 36 20
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 551915 2-10-8 47 22
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 551947 3-10-7 45 22
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 551979 4-10-6 54 22
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 551916 2-10-8 44 24

416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 551948 3-10-7 59 24
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 551980 4-10-6 49 24
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 551917 2-10-8 48 26
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 551949 3-10-7 60 26
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 551981 4-10-6 57 26
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 551918 2-10-8 53 28
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 551950 3-10-7 57 28
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 551982 4-10-6 57 28
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 551919 2-10-8 65 39
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 551951 3-10-7 57 39
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 551983 4-10-6 53 39
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 551920 2-10-8 57 719
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 551952 3-10-7 67 719
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 551984 4-10-6 62 719
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 551921 2-10-8 60 212
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 551953 3-10-7 57 212
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 551985 4-10-6 58 212
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 551922 2-10-8 63 720
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 551954 3-10-7 61 720
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 551923 2-10-8 50 721
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 551955 3-10-7 44 721
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 551924 2-10-8 52 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 551956 3-10-7 46 1349
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 551925 2-10-8 54 722
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 551957 3-10-7 51 722
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 551926 2-10-8 70 224

1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 551958 3-10-7 72 224
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 551927 2-10-8 60 801
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 551959 3-10-7 61 801
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 551928 2-10-8 57 802
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 551960 3-10-7 58 802
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 551929 2-10-8 49 225
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 551961 3-10-7 26 225
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 551930 2-10-8 54 804
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 551962 3-10-7 57 804
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 551931 2-10-8 46 805
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 551963 3-10-7 56 805
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 551932 2-10-8 57 226
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 551964 3-10-7 53 226
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 551933 2-10-8 65 806
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 551965 3-10-7 54 806
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 551934 2-10-8 58 807
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 551966 3-10-7 69 807
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 551935 2-10-8 63 227
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 551967 3-10-7 53 227
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 551936 2-10-8 67 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 551968 3-10-7 60 1350
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 551937 2-10-8 51 46
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 551969 3-10-7 42 46
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 551938 2-10-8 40 48
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 551970 3-10-7 38 48

1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 551939 2-10-8 32 50
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 551971 3-10-7 46 50
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 551940 2-10-8 39 52
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 551972 3-10-7 51 52
Таблица 39
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 40 224
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 60 17
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552276 5-9-3 44 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552277 5-9-3 39 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552278 5-9-3 37 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552279 5-9-3 50 1291
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552280 5-9-3 2 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552281 5-9-3 0 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552282 5-9-3 13 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552229 4-9-4 17 12
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552283 5-9-3 27 12
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552230 4-9-4 53 17
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552284 5-9-3 0 17
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552231 4-9-4 31 18
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552285 5-9-3 56 18
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552232 4-9-4 35 19
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552286 5-9-3 43 19
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552233 4-9-4 40 21
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552287 5-9-3 44 21
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552234 4-9-4 0 23
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552288 5-9-3 44 23
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552235 4-9-4 13 25
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552289 5-9-3 21 25
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552236 4-9-4 40 27
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552290 5-9-3 34 27
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552237 4-9-4 37 29

418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552291 5-9-3 34 29
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552239 4-9-4 58 1292
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552293 5-9-3 61 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552240 4-9-4 54 1293
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552294 5-9-3 62 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552241 4-9-4 47 1294
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552295 5-9-3 63 1294
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552242 4-9-4 61 40
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552296 5-9-3 61 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552243 4-9-4 55 41
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552297 5-9-3 52 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552244 4-9-4 45 42
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552298 5-9-3 27 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552245 4-9-4 41 43
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552299 5-9-3 32 43
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552246 4-9-4 67 1295
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552300 5-9-3 57 1295
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552247 4-9-4 74 1296
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552301 5-9-3 76 1296
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552248 4-9-4 65 1297
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552302 5-9-3 68 1297
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552249 4-9-4 38 1298
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552303 5-9-3 59 1298
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552250 4-9-4 43 1299
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552304 5-9-3 30 1299
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552251 4-9-4 52 1300
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552305 5-9-3 49 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552252 4-9-4 51 1301
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552306 5-9-3 56 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552253 4-9-4 47 1302
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552307 5-9-3 49 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552254 4-9-4 50 1303
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552255 4-9-4 64 1304
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552256 4-9-4 57 1305
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552257 4-9-4 51 1306
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552258 4-9-4 62 1307
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552259 4-9-4 59 1308
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552260 4-9-4 56 1309
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552261 4-9-4 54 1310
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552262 4-9-4 47 1311
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552263 4-9-4 45 1312
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552264 4-9-4 52 1313
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552265 4-9-4 58 1314

1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552266 4-9-4 54 1315
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552267 4-9-4 43 1316
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552268 4-9-4 57 1317
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552269 4-9-4 34 47
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552270 4-9-4 37 49
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552271 4-9-4 42 51
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552272 4-9-4 36 53
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552273 4-9-4 25 54
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552274 4-9-4 11 55
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552275 4-9-4 38 56
Таблица 40
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 38 1354
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 509959 3-10-3 49 145
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 55 17
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552384 2-9-5 41 1318
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552440 3-9-4 57 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552385 2-9-5 53 1319
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552441 3-9-4 38 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552386 2-9-5 42 1320
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552442 3-9-4 72 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552387 2-9-5 43 1321
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552443 3-9-4 56 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552388 2-9-5 18 86
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552444 3-9-4 39 86
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552389 2-9-5 24 137
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552445 3-9-4 53 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552390 2-9-5 40 140
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552446 3-9-4 57 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552391 2-9-5 51 143
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552447 3-9-4 53 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552392 2-9-5 0 145
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552448 3-9-4 57 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552393 2-9-5 52 147
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552449 3-9-4 49 147

416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552394 2-9-5 32 149
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552450 3-9-4 44 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552395 2-9-5 33 151
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552451 3-9-4 38 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552396 2-9-5 46 153
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552452 3-9-4 30 153
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552130 2-9-6 46 33
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552184 3-9-5 34 33
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552238 4-9-4 41 33
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552292 5-9-3 45 33
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552346 6-9-2 0 33
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552397 2-9-5 37 167
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552453 3-9-4 45 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552398 2-9-5 42 168
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552454 3-9-4 39 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552399 2-9-5 34 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552400 2-9-5 47 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552401 2-9-5 53 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552402 2-9-5 47 1324
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552403 2-9-5 70 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552404 2-9-5 44 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552405 2-9-5 0 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552406 2-9-5 25 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552407 2-9-5 23 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552408 2-9-5 73 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552409 2-9-5 71 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552410 2-9-5 52 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552411 2-9-5 62 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552412 2-9-5 50 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552413 2-9-5 55 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552414 2-9-5 64 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552415 2-9-5 45 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552416 2-9-5 45 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552417 2-9-5 37 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552418 2-9-5 73 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552419 2-9-5 68 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552420 2-9-5 64 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552421 2-9-5 54 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552422 2-9-5 60 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552423 2-9-5 62 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552424 2-9-5 60 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552425 2-9-5 46 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552426 2-9-5 48 1342

1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552427 2-9-5 36 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552428 2-9-5 57 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552429 2-9-5 36 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552430 2-9-5 42 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552431 2-9-5 60 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552432 2-9-5 44 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552433 2-9-5 55 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552434 2-9-5 46 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552435 2-9-5 47 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552436 2-9-5 25 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552437 2-9-5 19 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552438 2-9-5 25 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552439 2-9-5 22 236
Таблица 41
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 509959 3-10-3 49 145
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552496 4-9-3 35 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552497 4-9-3 60 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552498 4-9-3 20 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552499 4-9-3 45 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552500 4-9-3 53 86
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552501 4-9-3 56 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552502 4-9-3 50 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552503 4-9-3 36 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552504 4-9-3 50 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552505 4-9-3 53 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552506 4-9-3 49 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552507 4-9-3 35 151

418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552508 4-9-3 62 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552509 4-9-3 65 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552510 4-9-3 54 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552455 3-9-4 60 181
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552511 4-9-3 65 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552456 3-9-4 69 1322
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552512 4-9-3 63 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552457 3-9-4 4 1323
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552513 4-9-3 50 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552458 3-9-4 59 1324
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552514 4-9-3 53 1324
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552459 3-9-4 69 188
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552515 4-9-3 68 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552460 3-9-4 3 190
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552516 4-9-3 65 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552461 3-9-4 37 191
689 704 AACCACTGAACAAATG 552517 4-9-3 54 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552462 3-9-4 42 192
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552518 4-9-3 23 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552463 3-9-4 28 194
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552519 4-9-3 32 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552464 3-9-4 72 211
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552520 4-9-3 61 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552465 3-9-4 68 1325
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552521 4-9-3 68 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552466 3-9-4 76 1326

1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552522 4-9-3 71 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552467 3-9-4 72 1327
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552523 4-9-3 73 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552468 3-9-4 50 1328
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552524 4-9-3 49 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552469 3-9-4 65 1329
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552525 4-9-3 45 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552470 3-9-4 58 1330
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552526 4-9-3 39 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552471 3-9-4 30 1331
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552527 4-9-3 39 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552472 3-9-4 43 1332
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552528 4-9-3 43 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552473 3-9-4 25 1333
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552529 4-9-3 50 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552474 3-9-4 70 1334
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552530 4-9-3 73 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552475 3-9-4 64 1335
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552531 4-9-3 62 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552476 3-9-4 50 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552477 3-9-4 66 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552478 3-9-4 68 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552479 3-9-4 60 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552480 3-9-4 58 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552481 3-9-4 54 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552482 3-9-4 44 1342

1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552483 3-9-4 17 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552484 3-9-4 64 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552485 3-9-4 56 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552486 3-9-4 26 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552487 3-9-4 42 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552488 3-9-4 35 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552489 3-9-4 46 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552490 3-9-4 41 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552491 3-9-4 38 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552492 3-9-4 47 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552493 3-9-4 49 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552494 3-9-4 22 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552495 3-9-4 0 236
Таблица 42
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 56 224
55
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 509959 3-10-3 54 145
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552552 5-9-2 32 1355
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552553 5-9-2 53 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552554 5-9-2 48 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552555 5-9-2 39 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552556 5-9-2 39 86
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552557 5-9-2 54 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552558 5-9-2 41 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552559 5-9-2 56 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552560 5-9-2 39 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552561 5-9-2 51 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552562 5-9-2 56 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552563 5-9-2 31 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552564 5-9-2 31 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552565 5-9-2 53 167

458 473 ACGGGCAACATACCTT 552566 5-9-2 46 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552567 5-9-2 63 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552568 5-9-2 66 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552569 5-9-2 60 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552570 5-9-2 60 1324
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552571 5-9-2 44 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552572 5-9-2 52 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552573 5-9-2 20 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552574 5-9-2 36 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552575 5-9-2 19 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552576 5-9-2 61 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552577 5-9-2 57 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552578 5-9-2 71 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552579 5-9-2 59 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552580 5-9-2 58 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552581 5-9-2 51 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552582 5-9-2 40 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552583 5-9-2 35 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552584 5-9-2 50 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552585 5-9-2 48 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552586 5-9-2 74 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552587 5-9-2 68 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552532 4-9-3 59 1336
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552588 5-9-2 67 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552533 4-9-3 52 1337
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552589 5-9-2 47 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552534 4-9-3 71 1338
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552590 5-9-2 58 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552535 4-9-3 59 1339
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552591 5-9-2 46 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552536 4-9-3 19 1340
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552592 5-9-2 44 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552537 4-9-3 26 1341
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552593 5-9-2 39 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552538 4-9-3 54 1342
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552594 5-9-2 52 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552539 4-9-3 50 1343
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552595 5-9-2 57 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552540 4-9-3 60 1344
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552596 5-9-2 58 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552541 4-9-3 68 1345
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552597 5-9-2 52 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552542 4-9-3 63 1346

1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552598 5-9-2 51 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552543 4-9-3 44 1347
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552600 5-9-2 51 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552544 4-9-3 45 1348
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552602 5-9-2 13 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552545 4-9-3 42 230
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552604 5-9-2 42 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552546 4-9-3 46 231
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552606 5-9-2 42 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552547 4-9-3 38 232
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552608 5-9-2 37 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552548 4-9-3 49 233
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552610 5-9-2 41 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552549 4-9-3 34 234
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552612 5-9-2 23 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552550 4-9-3 13 235
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552614 5-9-2 11 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552551 4-9-3 8 236
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552616 5-9-2 6 236
Таблица 43
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 47 224
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 5-10-5 67 50
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 552007 6-10-4 53 83
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 552039 7-10-3 74 83
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 552008 6-10-4 47 103
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 552040 7-10-3 57 103
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 552009 6-10-4 70 136
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 552041 7-10-3 65 136
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 552010 6-10-4 51 139

412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 552042 7-10-3 59 139
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 552011 6-10-4 47 142
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 552043 7-10-3 36 142
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 552012 6-10-4 62 20
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 552044 7-10-3 82 20
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 552013 6-10-4 72 22
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 552045 7-10-3 62 22
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 552014 6-10-4 73 24
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 552046 7-10-3 74 24
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 552015 6-10-4 66 26
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 552047 7-10-3 60 26
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 552016 6-10-4 67 28
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 552048 7-10-3 60 28
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 552017 6-10-4 72 39
687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 552049 7-10-3 68 39
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 552018 6-10-4 89 719
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 552050 7-10-3 86 719
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 552019 6-10-4 87 212
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 552051 7-10-3 86 212
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 551986 4-10-6 64 720
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 552020 6-10-4 86 720
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 552052 7-10-3 87 720
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 551987 4-10-6 76 721
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 552021 6-10-4 84 721
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 552053 7-10-3 75 721
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 551988 4-10-6 5 1349

1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552005 5-10-5 72 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552022 6-10-4 80 1349
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552054 7-10-3 83 1349
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 551989 4-10-6 64 722
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 552023 6-10-4 78 722
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 552055 7-10-3 57 722
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 551990 4-10-6 83 224
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 552024 6-10-4 89 224
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 552056 7-10-3 82 224
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 551991 4-10-6 0 801
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 552025 6-10-4 89 801
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 552057 7-10-3 89 801
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 551992 4-10-6 67 802
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 552026 6-10-4 84 802
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 552058 7-10-3 82 802
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 551993 4-10-6 78 225
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 552027 6-10-4 85 225
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 552059 7-10-3 85 225
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 551994 4-10-6 82 804
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 552028 6-10-4 82 804
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 552060 7-10-3 74 804
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 551995 4-10-6 81 805
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 552029 6-10-4 81 805
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 552061 7-10-3 81 805
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 551996 4-10-6 79 226

1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 552030 6-10-4 86 226
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 552062 7-10-3 85 226
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 551997 4-10-6 80 806
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 552031 6-10-4 86 806
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 551998 4-10-6 74 807
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 552032 6-10-4 78 807
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 551999 4-10-6 79 227
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 552033 6-10-4 80 227
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552000 4-10-6 84 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552006 5-10-5 86 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552034 6-10-4 81 1350
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552001 4-10-6 66 46
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552035 6-10-4 55 46
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552002 4-10-6 54 48
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552036 6-10-4 58 48
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552003 4-10-6 50 50
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552037 6-10-4 43 50
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552004 4-10-6 56 52
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552038 6-10-4 66 52
Таблица 44
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 61 224

411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 66 17
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552168 3-9-5 64 1288
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552222 4-9-4 76 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552169 3-9-5 65 1289
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552223 4-9-4 41 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552170 3-9-5 58 1290
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552224 4-9-4 58 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552171 3-9-5 51 1291
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552225 4-9-4 49 1291
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552172 3-9-5 23 9
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552226 4-9-4 36 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552173 3-9-5 44 10
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552227 4-9-4 20 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552174 3-9-5 28 11
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552228 4-9-4 29 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552175 3-9-5 56 12
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552176 3-9-5 66 17
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552177 3-9-5 53 18
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552178 3-9-5 57 19
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552179 3-9-5 56 21
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552180 3-9-5 51 23
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552181 3-9-5 51 25
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552182 3-9-5 63 27
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552183 3-9-5 60 29
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552185 3-9-5 67 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552186 3-9-5 37 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552187 3-9-5 68 1294
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552188 3-9-5 71 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552189 3-9-5 51 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552190 3-9-5 47 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552191 3-9-5 50 43
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552192 3-9-5 80 1295
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552193 3-9-5 73 1296
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552194 3-9-5 58 1297
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552195 3-9-5 60 1298
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552196 3-9-5 54 1299
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552197 3-9-5 64 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552198 3-9-5 62 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552199 3-9-5 57 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552200 3-9-5 52 1303
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552201 3-9-5 73 1304
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552202 3-9-5 60 1305
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552203 3-9-5 60 1306

1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552204 3-9-5 63 1307
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552151 2-9-6 71 1308
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552205 3-9-5 64 1308
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552152 2-9-6 69 1309
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552206 3-9-5 71 1309
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552153 2-9-6 63 1310
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552207 3-9-5 71 1310
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552154 2-9-6 56 1311
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552208 3-9-5 52 1311
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552155 2-9-6 61 1312
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552209 3-9-5 50 1312
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552156 2-9-6 40 1313
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552210 3-9-5 66 1313
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552157 2-9-6 45 1314
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552211 3-9-5 63 1314
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552158 2-9-6 66 1315
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552212 3-9-5 62 1315
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552159 2-9-6 68 1316
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552213 3-9-5 64 1316
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552160 2-9-6 78 1317
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552214 3-9-5 72 1317
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552161 2-9-6 57 47
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552215 3-9-5 54 47
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552162 2-9-6 54 49
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552216 3-9-5 49 49
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552163 2-9-6 65 51
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552217 3-9-5 50 51
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552164 2-9-6 48 53
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552218 3-9-5 39 53
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552165 2-9-6 46 54
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552219 3-9-5 41 54
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552166 2-9-6 42 55
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552220 3-9-5 32 55
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552167 2-9-6 47 56
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552221 3-9-5 33 56
Таблица 45
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO

1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 87 224
56
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 5-10-5 56 50
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 69 17
58 77 GAACTGGAGCCACCAGCAGG 552071 8-10-2 73 83
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552114 2-9-6 64 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552115 2-9-6 61 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552116 2-9-6 53 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552117 2-9-6 69 1291
253 272 AGAGAAGTCCACCACGAGTC 552072 8-10-2 39 103
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552118 2-9-6 49 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552119 2-9-6 49 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552120 2-9-6 21 11
256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552121 2-9-6 27 12
411 430 TGAGGCATAGCAGCAGGATG 552073 8-10-2 73 136
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552122 2-9-6 48 17
412 431 ATGAGGCATAGCAGCAGGAT 552074 8-10-2 69 139
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552123 2-9-6 68 18
413 432 GATGAGGCATAGCAGCAGGA 552075 8-10-2 78 142
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552124 2-9-6 47 19
414 433 AGATGAGGCATAGCAGCAGG 552076 8-10-2 63 20
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552125 2-9-6 72 21
415 434 AAGATGAGGCATAGCAGCAG 552077 8-10-2 62 22
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552126 2-9-6 64 23
416 435 GAAGATGAGGCATAGCAGCA 552078 8-10-2 59 24
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552127 2-9-6 65 25
417 436 AGAAGATGAGGCATAGCAGC 552079 8-10-2 80 26
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552128 2-9-6 78 27
418 437 AAGAAGATGAGGCATAGCAG 552080 8-10-2 74 28
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552129 2-9-6 68 29
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552130 2-9-6 46 33
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552131 2-9-6 61 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552132 2-9-6 66 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552133 2-9-6 78 1294

687 706 CGAACCACTGAACAAATGGC 552081 8-10-2 69 39
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552134 2-9-6 68 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552135 2-9-6 59 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552136 2-9-6 39 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552137 2-9-6 36 43
1261 1280 TTCCGCAGTATGGATCGGCA 552082 8-10-2 86 719
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552138 2-9-6 80 1295
1262 1281 GTTCCGCAGTATGGATCGGC 552083 8-10-2 85 212
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552139 2-9-6 80 1296
1263 1282 AGTTCCGCAGTATGGATCGG 552084 8-10-2 86 720
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552140 2-9-6 70 1297
1264 1283 GAGTTCCGCAGTATGGATCG 552085 8-10-2 83 721
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552141 2-9-6 72 1298
1265 1284 GGAGTTCCGCAGTATGGATC 552086 8-10-2 83 1349
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552142 2-9-6 58 1299
1266 1285 AGGAGTTCCGCAGTATGGAT 552087 8-10-2 77 722
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552143 2-9-6 70 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552144 2-9-6 66 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552145 2-9-6 78 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552146 2-9-6 63 1303
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 552088 8-10-2 90 224
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552147 2-9-6 80 1304
1578 1597 GGTGAAGCGAAGTGCACACG 552089 8-10-2 87 801
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552148 2-9-6 74 1305
1579 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCACAC 552090 8-10-2 85 802
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552149 2-9-6 79 1306
1580 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGCACA 552091 8-10-2 84 225
1581 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTGCAC 552092 8-10-2 86 804
1582 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGTGCA 552093 8-10-2 82 805
1583 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 552094 8-10-2 84 226
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 552063 7-10-3 79 806
1584 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAAGTG 552095 8-10-2 85 806

1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 552064 7-10-3 83 807
1585 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGAAGT 552096 8-10-2 88 807
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 552065 7-10-3 86 227
1586 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCGAAG 552097 8-10-2 90 227
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552066 7-10-3 35 1350
1587 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGCGAA 552098 8-10-2 86 1350
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552067 7-10-3 53 46
1778 1797 AATTTATGCCTACAGCCTCC 552099 8-10-2 66 46
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552068 7-10-3 70 48
1779 1798 CAATTTATGCCTACAGCCTC 552100 8-10-2 67 48
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552069 7-10-3 68 50
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 552101 8-10-2 65 50
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552070 7-10-3 64 52
1781 1800 ACCAATTTATGCCTACAGCC 552102 8-10-2 54 52
Таблица 46
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 5-10-5 69 224
57
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 510100 3-10-4 59 17
58 74 CTGGAGCCACCAGCAGG 552330 6-9-2 50 1288
59 75 ACTGGAGCCACCAGCAG 552331 6-9-2 46 1289
60 76 AACTGGAGCCACCAGCA 552332 6-9-2 50 1290
61 77 GAACTGGAGCCACCAGC 552333 6-9-2 48 1291
253 269 GAAGTCCACCACGAGTC 552334 6-9-2 42 9
254 270 AGAAGTCCACCACGAGT 552335 6-9-2 30 10
255 271 GAGAAGTCCACCACGAG 552336 6-9-2 23 11

256 272 AGAGAAGTCCACCACGA 552337 6-9-2 42 12
411 427 GGCATAGCAGCAGGATG 552338 6-9-2 40 17
412 428 AGGCATAGCAGCAGGAT 552339 6-9-2 50 18
413 429 GAGGCATAGCAGCAGGA 552340 6-9-2 45 19
414 430 TGAGGCATAGCAGCAGG 552341 6-9-2 44 21
415 431 ATGAGGCATAGCAGCAG 552342 6-9-2 51 23
416 432 GATGAGGCATAGCAGCA 552343 6-9-2 44 25
417 433 AGATGAGGCATAGCAGC 552344 6-9-2 24 27
418 434 AAGATGAGGCATAGCAG 552345 6-9-2 41 29
457 473 ACGGGCAACATACCTTG 552346 6-9-2 0 33
670 686 ACTAGTAAACTGAGCCA 552347 6-9-2 75 1292
671 687 CACTAGTAAACTGAGCC 552348 6-9-2 72 1293
672 688 GCACTAGTAAACTGAGC 552349 6-9-2 65 1294
687 703 ACCACTGAACAAATGGC 552350 6-9-2 42 40
688 704 AACCACTGAACAAATGG 552351 6-9-2 45 41
689 705 GAACCACTGAACAAATG 552352 6-9-2 43 42
690 706 CGAACCACTGAACAAAT 552353 6-9-2 20 43
1261 1277 CGCAGTATGGATCGGCA 552354 6-9-2 70 1295
1262 1278 CCGCAGTATGGATCGGC 552355 6-9-2 66 1296
1263 1279 TCCGCAGTATGGATCGG 552356 6-9-2 62 1297
1264 1280 TTCCGCAGTATGGATCG 552357 6-9-2 53 1298
1265 1281 GTTCCGCAGTATGGATC 552358 6-9-2 57 1299
1266 1282 AGTTCCGCAGTATGGAT 552359 6-9-2 46 1300
1267 1283 GAGTTCCGCAGTATGGA 552360 6-9-2 45 1301
1268 1284 GGAGTTCCGCAGTATGG 552361 6-9-2 44 1302
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552308 5-9-3 38 1303
1269 1285 AGGAGTTCCGCAGTATG 552362 6-9-2 51 1303
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552309 5-9-3 76 1304
1577 1593 AAGCGAAGTGCACACGG 552363 6-9-2 73 1304
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552310 5-9-3 58 1305
1578 1594 GAAGCGAAGTGCACACG 552364 6-9-2 66 1305
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552311 5-9-3 38 1306
1579 1595 TGAAGCGAAGTGCACAC 552365 6-9-2 64 1306
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552150 2-9-6 68 1307
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552312 5-9-3 75 1307
1580 1596 GTGAAGCGAAGTGCACA 552366 6-9-2 55 1307
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552313 5-9-3 66 1308
1581 1597 GGTGAAGCGAAGTGCAC 552367 6-9-2 67 1308
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552314 5-9-3 56 1309
1582 1598 AGGTGAAGCGAAGTGCA 552368 6-9-2 41 1309
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552315 5-9-3 46 1310
1583 1599 GAGGTGAAGCGAAGTGC 552369 6-9-2 52 1310
1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552316 5-9-3 55 1311

1584 1600 AGAGGTGAAGCGAAGTG 552370 6-9-2 35 1311
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552317 5-9-3 53 1312
1585 1601 CAGAGGTGAAGCGAAGT 552371 6-9-2 58 1312
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552318 5-9-3 59 1313
1586 1602 GCAGAGGTGAAGCGAAG 552372 6-9-2 68 1313
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552319 5-9-3 56 1314
1587 1603 TGCAGAGGTGAAGCGAA 552373 6-9-2 63 1314
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552320 5-9-3 62 1315
1588 1604 GTGCAGAGGTGAAGCGA 552374 6-9-2 70 1315
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552321 5-9-3 63 1316
1589 1605 CGTGCAGAGGTGAAGCG 552375 6-9-2 64 1316
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552322 5-9-3 52 1317
1590 1606 ACGTGCAGAGGTGAAGC 552376 6-9-2 58 1317
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552323 5-9-3 45 47
1778 1794 TTATGCCTACAGCCTCC 552377 6-9-2 42 47
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552324 5-9-3 49 49
1779 1795 TTTATGCCTACAGCCTC 552378 6-9-2 37 49
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552325 5-9-3 48 51
1780 1796 ATTTATGCCTACAGCCT 552379 6-9-2 57 51
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552326 5-9-3 50 53
1781 1797 AATTTATGCCTACAGCC 552380 6-9-2 48 53
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552327 5-9-3 13 54
1782 1798 CAATTTATGCCTACAGC 552381 6-9-2 22 54
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552328 5-9-3 9 55
1783 1799 CCAATTTATGCCTACAG 552382 6-9-2 20 55
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552329 5-9-3 18 56
1784 1800 ACCAATTTATGCCTACA 552383 6-9-2 18 56

Пример 15: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepG2 дезокси-, МОЕ и (S)-cEt-химерными олигонуклеотидами

Антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. Антисмысловые олигонуклеотиды испытали в серии экспериментов, имеющих такие же культуральные условия. Результаты каждого эксперимента показаны в отдельных таблицах, представленных ниже. ISIS 146786 и ISIS 509934, которые были описаны в более ранней заявке (предварительная заявка на патент США №61/478040, поданная 21 апреля 2011 года), также включили в эти исследования для сравнения. Культивированные клетки HepG2 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® 70 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Набор вирусных затравочных зондов RTS3370 (прямая последовательность CTTGGTCATGGGCCATCAG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:1; обратная последовательность CGGCTAGGAGTTCCGCAGTA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:2; последовательность зонда TGCGTGGAACCTTTTCGGCTCC, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:3) использовали для измерения уровней мРНК. Уровни измерили также с использованием набора затравочных зондов RTS3371 (прямая последовательность CCAAACCTTCGGACGGAAA, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:311; обратная последовательность TGAGGCCCACTCCCATAGG, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:312; последовательность зонда CCCATCATCCTGGGCTTTCGGAAAAT, в настоящем документе обозначена как SEQ ID NO:313). Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблицах ниже были разработаны как дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химерные олигонуклеотиды. Эти химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем нуклеозид имеет или МОЕ сахарную модификацию, или (S)-cEt сахарную модификацию, или дезокси-модификацию. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; и «е» обозначает модификацию МОЕ. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблицах, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1). Эффективность новых разработанных олигонуклеотидов сравнили с ISIS 146786, 509934, ISIS 509959 и ISIS 510100.

Таблица 47
30 Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1780 1799 CCAATTTATGCCTACAGCCT 509934 еееее-10-еееее 30 50

58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552787 ekk-10-kke 57 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552788 ekk-10-kke 60 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552789 ekk-10-kke 67 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552790 ekk-10-kke 67 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552791 ekk-10-kke 65 86
245 260 CACGAGTCTAGACTCT 552792 ekk-10-kke 44 93
246 261 CCACGAGTCTAGACTC 552793 ekk-10-kke 0 95
250 265 TCCACCACGAGTCTAG 552794 ekk-10-kke 54 98
251 266 GTCCACCACGAGTCTA 552795 ekk-10-kke 55 100
252 267 AGTCCACCACGAGTCT 552796 ekk-10-kke 62 102
253 268 AAGTCCACCACGAGTC 552797 ekk-10-kke 59 104
254 269 GAAGTCCACCACGAGT 552798 ekk-10-kke 59 106
255 270 AGAAGTCCACCACGAG 552799 ekk-10-kke 58 109
256 271 GAGAAGTCCACCACGA 552800 ekk-10-kke 62 112
258 273 GAGAGAAGTCCACCAC 552801 ekk-10-kke 65 115
259 274 TGAGAGAAGTCCACCA 552802 ekk-10-kke 53 117
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552803 ekk-10-kke 67 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552804 ekk-10-kke 75 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552805 ekk-10-kke 72 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552806 ekk-10-kke 64 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552807 ekk-10-kke 68 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552808 ekk-10-kke 65 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552809 ekk-10-kke 60 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552810 ekk-10-kke 59 153
419 434 AAGATGAGGCATAGCA 552811 ekk-10-kke 64 155
420 435 GAAGATGAGGCATAGC 552812 ekk-10-kke 69 157
421 436 AGAAGATGAGGCATAG 552813 ekk-10-kke 64 159
422 437 AAGAAGATGAGGCATA 552814 ekk-10-kke 62 161
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552815 ekk-10-kke 61 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552816 ekk-10-kke 63 168
639 654 GGCCCACTCCCATAGG 552817 ekk-10-kke 42 176
641 656 GAGGCCCACTCCCATA 552818 ekk-10-kke 44 177
642 657 TGAGGCCCACTCCCAT 552819 ekk-10-kke 56 178
643 658 CTGAGGCCCACTCCCA 552820 ekk-10-kke 59 179
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552821 ekk-10-kke 76 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552822 ekk-10-kke 77 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552823 ekk-10-kke 73 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552824 ekk-10-kke 73 1324
678 693 AAATGGCACTAGTAAA 552825 ekk-10-kke 51 1364
679 694 CAAATGGCACTAGTAA 552826 ekk-10-kke 55 1365
680 695 ACAAATGGCACTAGTA 552827 ekk-10-kke 67 1366
681 696 AACAAATGGCACTAGT 552828 ekk-10-kke 78 1367
682 697 GAACAAATGGCACTAG 552829 ekk-10-kke 72 1368

683 698 TGAACAAATGGCACTA 552830 ekk-10-kke 71 1369
684 699 CTGAACAAATGGCACT 552831 ekk-10-kke 69 1370
685 700 ACTGAACAAATGGCAC 552832 ekk-10-kke 67 1371
686 701 CACTGAACAAATGGCA 552833 ekk-10-kke 65 1372
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552834 ekk-10-kke 78 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552835 ekk-10-kke 70 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552836 ekk-10-kke 64 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552837 ekk-10-kke 65 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552838 ekk-10-kke 64 194
738 753 ССАСАТСАТССАТАТА 552839 ekk-10-kke 60 199
739 754 АССАСАТСАТССАТАТ 552840 ekk-10-kke 35 201
1176 1191 CAGCAAACACTTGGCA 552841 ekk-10-kke 62 208
1177 1192 TCAGCAAACACTTGGC 552842 ekk-10-kke 67 209
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552843 ekk-10-kke 77 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552844 ekk-10-kke 81 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552845 ekk-10-kke 63 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552846 ekk-10-kke 79 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552847 ekk-10-kke 47 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552848 ekk-10-kke 69 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552849 ekk-10-kke 59 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552850 ekk-10-kke 83 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552851 ekk-10-kke 90 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552852 ekk-10-kke 89 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552853 ekk-10-kke 83 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552854 ekk-10-kke 80 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552855 ekk-10-kke 75 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552856 ekk-10-kke 69 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552857 ekk-10-kke 68 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552858 ekk-10-kke 79 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552859 ekk-10-kke 79 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552860 ekk-10-kke 71 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552861 ekk-10-kke 68 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552862 ekk-10-kke 65 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552863 ekk-10-kke 70 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552864 ekk-10-kke 71 1345
Таблица 48
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO

58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552787 ekk-10-kke 53 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552788 ekk-10-kke 45 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552789 ekk-10-kke 75 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552790 ekk-10-kke 68 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552791 ekk-10-kke 51 86
245 260 CACGAGTCTAGACTCT 552792 ekk-10-kke 38 93
246 261 CCACGAGTCTAGACTC 552793 ekk-10-kke 0 95
250 265 TCCACCACGAGTCTAG 552794 ekk-10-kke 44 98
251 266 GTCCACCACGAGTCTA 552795 ekk-10-kke 56 100
252 267 AGTCCACCACGAGTCT 552796 ekk-10-kke 45 102
253 268 AAGTCCACCACGAGTC 552797 ekk-10-kke 46 104
254 269 GAAGTCCACCACGAGT 552798 ekk-10-kke 53 106
255 270 AGAAGTCCACCACGAG 552799 ekk-10-kke 48 109
256 271 GAGAAGTCCACCACGA 552800 ekk-10-kke 54 112
258 273 GAGAGAAGTCCACCAC 552801 ekk-10-kke 63 115
259 274 TGAGAGAAGTCCACCA 552802 ekk-10-kke 49 117
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552803 ekk-10-kke 71 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552804 ekk-10-kke 64 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552805 ekk-10-kke 70 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552806 ekk-10-kke 67 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552807 ekk-10-kke 61 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552808 ekk-10-kke 83 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552809 ekk-10-kke 59 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552810 ekk-10-kke 56 153
419 434 AAGATGAGGCATAGCA 552811 ekk-10-kke 62 155

420 435 GAAGATGAGGCATAGC 552812 ekk-10-kke 66 157
421 436 AGAAGATGAGGCATAG 552813 ekk-10-kke 63 159
422 437 AAGAAGATGAGGCATA 552814 ekk-10-kke 65 161
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552815 ekk-10-kke 63 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552816 ekk-10-kke 88 168
639 654 GGCCCACTCCCATAGG 552817 ekk-10-kke 94 176
641 656 GAGGCCCACTCCCATA 552818 ekk-10-kke 82 177
642 657 TGAGGCCCACTCCCAT 552819 ekk-10-kke 80 178
643 658 CTGAGGCCCACTCCCA 552820 ekk-10-kke 84 179
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552821 ekk-10-kke 71 181
671 686 ACTAGTAAACTGAGCC 552822 ekk-10-kke 85 1322
672 687 CACTAGTAAACTGAGC 552823 ekk-10-kke 71 1323
673 688 GCACTAGTAAACTGAG 552824 ekk-10-kke 81 1324
678 693 AAATGGCACTAGTAAA 552825 ekk-10-kke 51 1364
679 694 CAAATGGCACTAGTAA 552826 ekk-10-kke 64 1365
680 695 ACAAATGGCACTAGTA 552827 ekk-10-kke 61 1366
681 696 AACAAATGGCACTAGT 552828 ekk-10-kke 76 1367
682 697 GAACAAATGGCACTAG 552829 ekk-10-kke 61 1368
683 698 TGAACAAATGGCACTA 552830 ekk-10-kke 59 1369
684 699 CTGAACAAATGGCACT 552831 ekk-10-kke 58 1370
685 700 ACTGAACAAATGGCAC 552832 ekk-10-kke 64 1371
686 701 CACTGAACAAATGGCA 552833 ekk-10-kke 75 1372
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552834 ekk-10-kke 84 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552835 ekk-10-kke 57 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552836 ekk-10-kke 51 191

690 705 GAACCACTGAACAAAT 552837 ekk-10-kke 53 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552838 ekk-10-kke 48 194
738 753 ССАСАТСАТССАТАТА 552839 ekk-10-kke 50 199
739 754 АССАСАТСАТССАТАТ 552840 ekk-10-kke 54 201
1176 1191 CAGCAAACACTTGGCA 552841 ekk-10-kke 61 208
1177 1192 TCAGCAAACACTTGGC 552842 ekk-10-kke 71 209
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552843 ekk-10-kke 75 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552844 ekk-10-kke 78 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552845 ekk-10-kke 52 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552846 ekk-10-kke 76 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552847 ekk-10-kke 61 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552848 ekk-10-kke 72 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552849 ekk-10-kke 87 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552850 ekk-10-kke 76 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552851 ekk-10-kke 76 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552852 ekk-10-kke 79 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552853 ekk-10-kke 82 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552854 ekk-10-kke 85 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552855 ekk-10-kke 78 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552856 ekk-10-kke 77 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552857 ekk-10-kke 75 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552858 ekk-10-kke 75 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552859 ekk-10-kke 79 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552860 ekk-10-kke 71 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552861 ekk-10-kke 74 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552862 ekk-10-kke 66 1343

1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552863 ekk-10-kke 70 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552864 ekk-10-kke 73 1345
Таблица 49
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 еееее-10-еееее 60 224
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552889 ek-10-keke 59 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552890 ek-10-keke 56 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552891 ek-10-keke 67 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552892 ek-10-keke 65 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552893 ek-10-keke 68 86
250 265 TCCACCACGAGTCTAG 552894 ek-10-keke 71 98
251 266 GTCCACCACGAGTCTA 552895 ek-10-keke 51 100
252 267 AGTCCACCACGAGTCT 552896 ek-10-keke 51 102
253 268 AAGTCCACCACGAGTC 552897 ek-10-keke 43 104
254 269 GAAGTCCACCACGAGT 552898 ek-10-keke 43 106
255 270 AGAAGTCCACCACGAG 552899 ek-10-keke 55 109
256 271 GAGAAGTCCACCACGA 552900 ek-10-keke 34 112
258 273 GAGAGAAGTCCACCAC 552901 ek-10-keke 42 115
259 274 TGAGAGAAGTCCACCA 552902 ek-10-keke 60 117
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552903 ek-10-keke 76 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552904 ek-10-keke 74 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552905 ek-10-keke 66 143
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552907 ek-10-keke 69 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552908 ek-10-keke 63 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552909 ek-10-keke 70 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552910 ek-10-keke 72 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552911 ek-10-keke 72 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552912 ek-10-keke 67 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552913 ek-10-keke 74 181
682 697 GAACAAATGGCACTAG 552914 ek-10-keke 75 1368
684 699 CTGAACAAATGGCACT 552915 ek-10-keke 58 1370
686 701 CACTGAACAAATGGCA 552916 ek-10-keke 74 1372
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552917 ek-10-keke 76 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552918 ek-10-keke 75 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552919 ek-10-keke 55 191

690 705 GAACCACTGAACAAAT 552920 ek-10-keke 49 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552921 ek-10-keke 45 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552922 ek-10-keke 83 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552923 ek-10-keke 83 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552924 ek-10-keke 0 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552925 ek-10-keke 85 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552926 ek-10-keke 50 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552927 ek-10-keke 76 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552928 ek-10-keke 78 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552929 ek-10-keke 75 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552930 ek-10-keke 78 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552931 ek-10-keke 74 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552932 ek-10-keke 86 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552933 ek-10-keke 82 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552934 ek-10-keke 74 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552935 ek-10-keke 76 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552936 ek-10-keke 81 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552937 ek-10-keke 80 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552938 ek-10-keke 78 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552939 ek-10-keke 75 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552940 ek-10-keke 63 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552941 ekk-10-kke 78 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552942 ek-10-keke 80 1344
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552865 ekk-10-kke 67 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552866 ekk-10-kke 68 1347
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552868 ekk-10-kke 55 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552869 ekk-10-kke 48 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552870 ekk-10-kke 55 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552871 ekk-10-kke 57 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552872 ekk-10-kke 70 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552873 ekk-10-kke 49 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552874 ekk-10-kke 42 236
1785 1800 ACCAATTTATGCCTAC 552875 ekk-10-kke 41 237
1822 1837 GGCAGAGGTGAAAAAG 552876 ekk-10-kke 50 244
1823 1838 AGGCAGAGGTGAAAAA 552877 ek-10-keke 39 245
1824 1839 TAGGCAGAGGTGAAAA 552878 ekk-10-kke 31 247
1865 1880 AGCTTGGAGGCTTGAA 552879 ekk-10-kke 5 252
1866 1881 CAGCTTGGAGGCTTGA 552880 ekk-10-kke 5 254
1867 1882 ACAGCTTGGAGGCTTG 552881 ekk-10-kke 10 256
1868 1883 CACAGCTTGGAGGCTT 552882 ekk-10-kke 11 258
1869 1884 GCACAGCTTGGAGGCT 552883 ekk-10-kke 27 260
1870 1885 GGCACAGCTTGGAGGC 552884 ekk-10-kke 36 262
1871 1886 AGGCACAGCTTGGAGG 552885 ekk-10-kke 12 264

1872 1887 AAGGCACAGCTTGGAG 552886 ekk-10-kke 32 266
1874 1889 CCAAGGCACAGCTTGG 552888 ekk-10-kke 1 271
Таблица 50
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
1577 1596 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 146786 еееее-10-еееее 59 224
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552955 eee-10-kkk 60 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552956 eee-10-kkk 60 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552957 eee-10-kkk 64 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552958 eee-10-kkk 56 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552959 eee-10-kkk 59 86
250 265 TCCACCACGAGTCTAG 552960 eee-10-kkk 42 98
251 266 GTCCACCACGAGTCTA 552961 eee-10-kkk 41 100
252 267 AGTCCACCACGAGTCT 552962 eee-10-kkk 35 102
253 268 AAGTCCACCACGAGTC 552963 eee-10-kkk 19 104
254 269 GAAGTCCACCACGAGT 552964 eee-10-kkk 34 106
255 270 AGAAGTCCACCACGAG 552965 eee-10-kkk 42 109
256 271 GAGAAGTCCACCACGA 552966 eee-10-kkk 60 112
258 273 GAGAGAAGTCCACCAC 552967 eee-10-kkk 38 115
259 274 TGAGAGAAGTCCACCA 552968 eee-10-kkk 35 117
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552969 eee-10-kkk 67 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552970 eee-10-kkk 56 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552971 eee-10-kkk 69 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552972 eee-10-kkk 75 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552973 eee-10-kkk 59 145
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552974 eee-10-kkk 71 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552975 eee-10-kkk 56 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552976 eee-10-kkk 50 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552977 eee-10-kkk 56 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552978 eee-10-kkk 43 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552979 eee-10-kkk 71 181
682 697 GAACAAATGGCACTAG 552980 eee-10-kkk 80 1368
684 699 CTGAACAAATGGCACT 552981 eee-10-kkk 64 1370
686 701 CACTGAACAAATGGCA 552982 ek-10-keke 61 1372
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552983 eee-10-kkk 77 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552984 eee-10-kkk 65 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552985 eee-10-kkk 41 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552986 eee-10-kkk 30 192

691 706 CGAACCACTGAACAAA 552987 eee-10-kkk 41 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552988 eee-10-kkk 74 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552989 eee-10-kkk 85 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552990 eee-10-kkk 72 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552991 eee-10-kkk 73 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552992 eee-10-kkk 60 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552993 eee-10-kkk 52 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552994 eee-10-kkk 58 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552995 eee-10-kkk 70 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552996 eee-10-kkk 74 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552997 eee-10-kkk 59 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552998 eee-10-kkk 82 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552999 eee-10-kkk 70 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 553000 eee-10-kkk 67 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 553001 eee-10-kkk 67 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 553002 eee-10-kkk 74 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 553003 eee-10-kkk 72 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 553004 eee-10-kkk 73 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 553005 eee-10-kkk 67 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 553006 eee-10-kkk 69 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 553007 eee-10-kkk 60 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 553008 eee-10-kkk 71 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552943 ek-10-keke 77 1345
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 553009 eee-10-kkk 78 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552944 ek-10-keke 74 1346
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 553010 eee-10-kkk 78 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552945 ek-10-keke 76 1347
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 553011 eee-10-kkk 72 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552946 ek-10-keke 71 1348
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 553012 eee-10-kkk 74 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552947 ek-10-keke 54 230
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 553013 eee-10-kkk 39 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552948 ek-10-keke 50 231
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 553014 eee-10-kkk 37 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552949 ek-10-keke 8 232
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 553015 eee-10-kkk 45 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552950 ek-10-keke 44 233
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 553016 eee-10-kkk 47 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552951 ek-10-keke 60 234
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 553017 eee-10-kkk 47 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552952 ek-10-keke 35 235
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 553018 eee-10-kkk 30 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552953 ek-10-keke 37 236

1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 553019 eee-10-kkk 37 236
1785 1800 ACCAATTTATGCCTAC 552954 ek-10-keke 40 237
1785 1800 ACCAATTTATGCCTAC 553020 eee-10-kkk 24 237
Таблица 51
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552889 ek-10-keke 42 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552890 ek-10-keke 56 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552891 ek-10-keke 55 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552892 ek-10-keke 53 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552893 ek-10-keke 56 86
250 265 TCCACCACGAGTCTAG 552894 ek-10-keke 53 98
251 266 GTCCACCACGAGTCTA 552895 ek-10-keke 38 100
252 267 AGTCCACCACGAGTCT 552896 ek-10-keke 43 102
253 268 AAGTCCACCACGAGTC 552897 ek-10-keke 40 104
254 269 GAAGTCCACCACGAGT 552898 ek-10-keke 50 106
255 270 AGAAGTCCACCACGAG 552899 ek-10-keke 37 109
256 271 GAGAAGTCCACCACGA 552900 ek-10-keke 43 112
258 273 GAGAGAAGTCCACCAC 552901 ek-10-keke 56 115
259 274 TGAGAGAAGTCCACCA 552902 ek-10-keke 43 117
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552903 ek-10-keke 78 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552904 ek-10-keke 75 140

413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552905 ek-10-keke 52 143
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552907 ek-10-keke 75 147
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552908 ek-10-keke 57 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552909 ek-10-keke 66 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552910 ek-10-keke 60 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552911 ek-10-keke 65 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552912 ek-10-keke 37 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552913 ek-10-keke 76 181
682 697 GAACAAATGGCACTAG 552914 ek-10-keke 79 1368
684 699 CTGAACAAATGGCACT 552915 ek-10-keke 71 1370
686 701 CACTGAACAAATGGCA 552916 ek-10-keke 82 1372
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552917 ek-10-keke 78 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552918 ek-10-keke 64 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552919 ek-10-keke 38 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552920 ek-10-keke 43 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552921 ek-10-keke 49 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552922 ek-10-keke 90 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552923 ek-10-keke 92 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552924 ek-10-keke 30 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552925 ek-10-keke 81 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552926 ek-10-keke 39 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552927 ek-10-keke 53 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552928 ek-10- keke 48 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552929 ek-10-keke 68 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552930 ek-10-keke 87 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552931 ek-10-keke 87 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552932 ek-10-keke 88 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552933 ek-10-keke 75 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 552934 ek-10-keke 76 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 552935 ek-10-keke 71 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 552936 ek-10-keke 80 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 552937 ek-10-keke 81 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 552938 ek-10-keke 85 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 552939 ek-10-keke 82 1341
1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 552940 ek-10-keke 76 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 552941 ekk-10-kke 72 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 552942 ek-10-keke 85 1344
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552865 ekk-10-kke 70 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552866 ekk-10-kke 65 1347
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552868 ekk-10-kke 36 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552869 ekk-10-kke 23 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552870 ekk-10-kke 49 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552871 ekk-10-kke 46 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552872 ekk-10-kke 73 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552873 ekk-10-kke 41 235

1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552874 ekk-10-kke 18 236
1785 1800 ACCAATTTATGCCTAC 552875 ekk-10-kke 0 237
1822 1837 GGCAGAGGTGAAAAAG 552876 ekk-10-kke 49 244
1823 1838 AGGCAGAGGTGAAAAA 552877 ek-10-keke 37 245
1824 1839 TAGGCAGAGGTGAAAA 552878 ekk-10-kke 28 247
1865 1880 AGCTTGGAGGCTTGAA 552879 ekk-10-kke 0 252
1866 1881 CAGCTTGGAGGCTTGA 552880 ekk-10-kke 12 254
1867 1882 ACAGCTTGGAGGCTTG 552881 ekk-10-kke 0 256
1868 1883 CACAGCTTGGAGGCTT 552882 ekk-10-kke 0 258
1869 1884 GCACAGCTTGGAGGCT 552883 ekk-10-kke 12 260
1870 1885 GGCACAGCTTGGAGGC 552884 ekk-10-kke 39 262
1871 1886 AGGCACAGCTTGGAGG 552885 ekk-10-kke 37 264
1872 1887 AAGGCACAGCTTGGAG 552886 ekk-10-kke 15 266
1874 1889 CCAAGGCACAGCTTGG 552888 ekk-10-kke 0 271
Таблица 52
Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт Последовательность № ISIS Мотив % ингибирования SEQ ID NO
58 73 TGGAGCCACCAGCAGG 552955 eee-10-kkk 67 1318
59 74 CTGGAGCCACCAGCAG 552956 eee-10-kkk 60 1319
60 75 ACTGGAGCCACCAGCA 552957 eee-10-kkk 73 1320
61 76 AACTGGAGCCACCAGC 552958 eee-10-kkk 63 1321
62 77 GAACTGGAGCCACCAG 552959 eee-10-kkk 58 86
250 265 TCCACCACGAGTCTAG 552960 eee-10-kkk 67 98
251 266 GTCCACCACGAGTCTA 552961 eee-10-kkk 78 100
252 267 AGTCCACCACGAGTCT 552962 eee-10-kkk 29 102

253 268 AAGTCCACCACGAGTC 552963 eee-10-kkk 25 104
254 269 GAAGTCCACCACGAGT 552964 eee-10-kkk 33 106
255 270 AGAAGTCCACCACGAG 552965 eee-10-kkk 55 109
256 271 GAGAAGTCCACCACGA 552966 eee-10-kkk 71 112
258 273 GAGAGAAGTCCACCAC 552967 eee-10-kkk 23 115
259 274 TGAGAGAAGTCCACCA 552968 eee-10-kkk 41 117
411 426 GCATAGCAGCAGGATG 552969 eee-10-kkk 76 137
412 427 GGCATAGCAGCAGGAT 552970 eee-10-kkk 44 140
413 428 AGGCATAGCAGCAGGA 552971 eee-10-kkk 77 143
414 429 GAGGCATAGCAGCAGG 552972 eee-10-kkk 74 145
415 430 TGAGGCATAGCAGCAG 552973 eee-10-kkk 61 145
416 431 ATGAGGCATAGCAGCA 552974 eee-10-kkk 73 149
417 432 GATGAGGCATAGCAGC 552975 eee-10-kkk 66 151
418 433 AGATGAGGCATAGCAG 552976 eee-10-kkk 70 153
457 472 CGGGCAACATACCTTG 552977 eee-10-kkk 65 167
458 473 ACGGGCAACATACCTT 552978 eee-10-kkk 40 168
670 685 CTAGTAAACTGAGCCA 552979 eee-10-kkk 79 181
682 697 GAACAAATGGCACTAG 552980 eee-10-kkk 81 64
684 699 CTGAACAAATGGCACT 552981 eee-10-kkk 74 66
686 701 CACTGAACAAATGGCA 552982 ek-10-keke 52 68
687 702 CCACTGAACAAATGGC 552983 eee-10-kkk 78 188
688 703 ACCACTGAACAAATGG 552984 eee-10-kkk 71 190
689 704 AACCACTGAACAAATG 552985 eee-10-kkk 38 191
690 705 GAACCACTGAACAAAT 552986 eee-10-kkk 48 192
691 706 CGAACCACTGAACAAA 552987 eee-10-kkk 54 194
1261 1276 GCAGTATGGATCGGCA 552988 eee-10-kkk 85 211
1262 1277 CGCAGTATGGATCGGC 552989 eee-10-kkk 84 1325
1263 1278 CCGCAGTATGGATCGG 552990 eee-10-kkk 79 1326
1264 1279 TCCGCAGTATGGATCG 552991 eee-10-kkk 53 1327
1265 1280 TTCCGCAGTATGGATC 552992 eee-10-kkk 68 1328
1266 1281 GTTCCGCAGTATGGAT 552993 eee-10-kkk 67 1329
1267 1282 AGTTCCGCAGTATGGA 552994 eee-10-kkk 69 1330
1268 1283 GAGTTCCGCAGTATGG 552995 eee-10-kkk 62 1331
1269 1284 GGAGTTCCGCAGTATG 552996 eee-10-kkk 82 1332
1270 1285 AGGAGTTCCGCAGTAT 552997 eee-10-kkk 58 1333
1577 1592 AGCGAAGTGCACACGG 552998 eee-10-kkk 86 1334
1578 1593 AAGCGAAGTGCACACG 552999 eee-10-kkk 63 1335
1579 1594 GAAGCGAAGTGCACAC 553000 eee-10-kkk 67 1336
1580 1595 TGAAGCGAAGTGCACA 553001 eee-10-kkk 70 1337
1581 1596 GTGAAGCGAAGTGCAC 553002 eee-10-kkk 84 1338
1582 1597 GGTGAAGCGAAGTGCA 553003 eee-10-kkk 83 1339
1583 1598 AGGTGAAGCGAAGTGC 553004 eee-10-kkk 68 1340
1584 1599 GAGGTGAAGCGAAGTG 553005 eee-10-kkk 57 1341

1585 1600 AGAGGTGAAGCGAAGT 553006 eee-10-kkk 74 1342
1586 1601 CAGAGGTGAAGCGAAG 553007 eee-10-kkk 62 1343
1587 1602 GCAGAGGTGAAGCGAA 553008 eee-10-kkk 50 1344
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 552943 ek-10-keke 86 1345
1588 1603 TGCAGAGGTGAAGCGA 553009 eee-10-kkk 79 1345
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 552944 ek-10-keke 83 1346
1589 1604 GTGCAGAGGTGAAGCG 553010 eee-10-kkk 74 1346
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 552945 ek-10-keke 79 1347
1590 1605 CGTGCAGAGGTGAAGC 553011 eee-10-kkk 60 1347
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 552946 ek-10-keke 68 1348
1591 1606 ACGTGCAGAGGTGAAG 553012 eee-10-kkk 78 1348
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 552947 ek-10-keke 51 230
1778 1793 TATGCCTACAGCCTCC 553013 eee-10-kkk 45 230
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 552948 ek-10-keke 56 231
1779 1794 TTATGCCTACAGCCTC 553014 eee-10-kkk 53 231
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 552949 ek-10-keke 1 232
1780 1795 TTTATGCCTACAGCCT 553015 eee-10-kkk 55 232
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 552950 ek-10-keke 52 233
1781 1796 ATTTATGCCTACAGCC 553016 eee-10-kkk 65 233
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 552951 ek-10-keke 59 234
1782 1797 AATTTATGCCTACAGC 553017 eee-10-kkk 36 234
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 552952 ek-10-keke 34 235
1783 1798 CAATTTATGCCTACAG 553018 eee-10-kkk 20 235
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 552953 ek-10-keke 55 236
1784 1799 CCAATTTATGCCTACA 553019 eee-10-kkk 34 236
1785 1800 ACCAATTTATGCCTAC 552954 ek-10-keke 51 237
1785 1800 ACCAATTTATGCCTAC 553020 eee-10-kkk 28 237

Пример 16: Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование РНК HBV в клетках HepG2 химерными олигонуклеотидами МОЕ

Антисмысловые олигонуклеотиды из исследования, описанного в Примере 14, демонстрирующие т vitro ингибирование мРНК HBV, отобрали и испытали при различных дозах в клетках HepG2. Клетки поместили на планшет при плотности 28000 клеток на лунку и трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® антисмысловыми олигонуклеотидами в концентрациях 9,26 нМ, 27,78 нМ, 83,33 нМ и 250,00 нМ, как показано в Таблице 53. Примерно через 16 часов обработки, РНК выделили из клеток, и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов HBV RTS3371. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Как показано в Таблице 53, уровни мРНК HBV снизились зависимым от дозы образом в клетках, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом. «н/д» показывает, что для указанной дозы нет данных.

Таблица 53
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование HBV человека в клетках HepG2
№ ISIS 9,2593 нМ 27,7778 нМ 83,3333 нМ 250,0 нМ
146786 10 43 74 89
509934 12 31 52 79
509959 4 24 49 67
510100 11 28 60 77
510124 3 11 13 41
551926 1 26 51 76
551958 15 17 56 82
551987 4 40 65 81
551990 7 55 78 91
551993 15 30 70 80
551994 0 30 39 58
551995 6 41 73 85
551996 13 47 71 85
551997 16 38 68 89
551998 4 36 69 85
551999 10 31 67 86
552000 0 17 61 78
552006 6 37 74 89
552009 1 5 39 60
552013 0 28 3 72
552014 0 26 32 77
552018 6 27 63 81
552019 15 34 65 90
552020 2 35 65 91
552021 4 11 53 82
552022 6 35 57 79
552023 11 33 59 81
552024 15 43 69 91
552025 17 35 69 87
552026 14 26 66 86
552027 3 46 62 88
552028 9 43 58 78
552029 8 40 72 89
552030 18 48 77 92

552031 0 38 66 89
552032 42 48 80 88
552033 2 40 64 84
552034 6 40 70 81
552039 2 33 56 83
552044 19 30 63 84
552046 4 21 47 77
552050 15 44 70 92
552051 8 33 69 90
552052 17 38 71 91
552053 0 40 59 86
552054 7 15 58 75
552056 19 62 86 92
552057 11 33 69 86
552058 30 55 79 90
552059 11 25 69 90
552060 9 32 61 86
552061 6 40 69 88
552062 22 48 75 89
552064 23 49 69 90
552065 10 8 69 86
552069 11 4 28 60
552073 9 31 62 78
552075 21 18 33 65
552077 0 17 40 72
552079 1 12 44 70
552080 3 12 34 69
552082 13 29 66 87
552083 24 54 69 88
552084 10 25 48 82
552085 28 35 64 85
552086 0 24 65 84
552088 33 53 77 93
552089 0 41 69 92
552090 17 35 70 87
552091 13 31 69 89
552092 6 23 66 89
552093 0 17 61 89
552094 12 38 65 88
552095 20 42 73 88
552096 Н/Д 39 66 91
552097 24 43 67 88
552098 0 24 56 85

552101 3 13 28 61
552147 11 27 58 80
552160 20 25 69 89
552163 0 21 22 53
552176 16 11 40 66
552192 7 38 78 89
552222 0 24 65 79
552247 0 38 69 86
552255 5 27 69 81
552301 5 38 65 86
552309 8 26 62 85
552312 0 4 32 62
552347 2 15 38 75
552348 12 40 42 65
552354 10 35 44 76
552361 2 25 55 74
552363 20 36 54 76
552374 7 4 38 76
552379 0 12 24 46
552403 8 27 54 76
552408 2 25 44 77
552409 6 31 56 80
552418 0 30 72 84
552420 9 34 53 81
552442 4 23 46 56
552466 0 23 56 79
552474 11 34 66 87
552477 11 22 44 64
552530 25 37 73 87
552559 9 13 29 51

Пример 17: Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование мРНК ИВУ в клетках HepG2 дезокси-, МОЕ и (S)-cEt-химерными олигонуклеотидами

Антисмысловые олигонуклеотиды из исследования, описанного в Примере 15, демонстрирующие in vitro ингибирование мРНК HBV, отобрали и испытали при различных дозах в клетках HepG2. Клетки поместили на планшет при плотности 28 ООО клеток на лунку и трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® антисмысловыми олигонуклеотидами в концентрациях 9,26 нМ, 27,78 нМ, 83,33 нМ и 250,00 нМ, как показано в Таблице 54. Примерно через 16 часов обработки, РНК выделили из клеток, и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор затравочных зондов HBV RTS3371. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN*. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Как показано в Таблице 54, уровни мРНК HBV снизились зависимым от дозы образом в клетках, обработанных антисмысловым олигонуклеотидом.

Таблица 54
Зависимое от дозы антисмысловое ингибирование HBV человека в клетках HepG2
№ ISIS 9,2593 нМ 27,7778 нМ 83,3333 нМ 250,0 нМ
146786 10 43 74 89
552808 13 14 55 70
552816 38 73 87 92
552818 29 63 87 85
552820 58 83 90 90
552821 33 49 71 88
552822 24 55 74 88
552824 8 24 65 87
552834 11 28 68 89
552849 12 25 73 84
552851 13 42 74 89
552852 4 35 70 87
552853 19 52 86 93
552854 28 57 80 89
552916 5 26 64 82
552922 25 44 77 89
552923 22 49 82 91
552925 33 56 80 92
552930 12 49 79 89
552931 12 40 62 82
552932 24 62 84 91
552933 20 40 75 89
552936 18 36 75 88
552937 22 51 82 88
552938 12 36 67 80
552939 17 40 65 79
552942 21 48 74 88
552943 5 39 70 85
552944 14 33 70 77
552980 15 40 69 86
552988 4 36 58 84

552989 0 50 74 81
552996 0 25 53 72
552998 17 49 79 90
553002 0 32 68 86
553003 15 42 67 88

Пример 18: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК ИВУ в клетках HepG2 дезокси-, МОЕ и (S)-cEt-химерными олигонуклеотидами

Дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. ISIS 5808 и ISIS 9591, описанные в US 5985662, а также ISIS 146781, ISIS 146786, 524518, ISIS 552859 и ISIS 552870 также включили в эти исследования для сравнения и обозначили звездочкой. Культивированные клетки HepG2 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи LipofectAMINE 2000® 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Наборы вирусных затравочных зондов RTS3370 и RTS3371 использовали для измерения уровней мРНК по отдельности. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблице ниже были разработаны как МОЕ химерные олигонуклеотиды или дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химерные олигонуклеотиды. 5-10-5 МОЕ химерные олигонуклеотиды имеют 20 нуклеозидов в длину, причем центральный сегмент гэп содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов, к которому с обоеих сторон (в направлениях 5' и 3') присоединены крылья, содержащие по пять нуклеозидов. Дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химерные олигонуклеотиды имеют 16 нуклеозидов в длину, причем нуклеозид имеет или МОЕ сахарную модификацию, или (S)-cEt сахарную модификацию, или дезокси-модификацию. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; в противном случае, «d» обозначает дезоксинуклеозид; и «е» обозначает модификацию МОЕ. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 55, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1).

Таблица 55
5 Ингибирование уровней вирусной мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами, измеренное с RTS3370 или RTS3371
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт №1818 Мотив % ингибирование (RTS3370) % ингибирование (RTS3371) Последовательность SEQ ID NO
156 176 5808* Равномерно дезокси 57 64 CCTGATGTGATGTTCTCCATG 1373
303 322 524518* еееее-10-еееее 62 72 GGGACTGCGAATTTTGGCCA 428
376 395 146781* еееее-10-еееее 72 93 AAACGCCGCAGACACATCCA 1374
380 399 582665 еееее-10-еееее 57 59 GATAAAACGCCGCAGACACA 1375
382 401 582666 еееее-10-еееее 49 92 ATGATAAAACGCCGCAGACA 1376
411 426 566831 kdkdk-9-ee 96 73 GCATAGCAGCAGGATG 137
411 427 577123 eekk-9-ekee 84 96 GGCATAGCAGCAGGATG 17
411 427 577124 kdkdk-8-eeee 92 96 GGCATAGCAGCAGGATG 17
411 426 577126 kkk-8-eeeee 87 90 GCATAGCAGCAGGATG 137
413 428 566830 kdkdk-9-ee 93 95 AGGCATAGCAGCAGGA 143
415 430 577130 eek-10-kke 87 94 TGAGGCATAGCAGCAG 147
415 430 577131 kdkdk-9-ee 83 93 TGAGGCATAGCAGCAG 147
1263 1278 566828 kdkdk-9-ee 97 90 CCGCAGTATGGATCGG 1236
1577 1596 146786* еееее-10-еееее 93 71 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 224
1577 1592 566829 kdkdk-9-ee 98 84 AGCGAAGTGCACACGG 1334
1577 1596 577120 kdkdk-10-eeeee 94 93 GTGAAGCGAAGTGCACACGG 224
1577 1592 577127 kkk-8-eeeee 95 70 AGCGAAGTGCACACGG 1334
1577 1592 577134 kek-8-eeeee 94 89 AGCGAAGTGCACACGG 1334
1577 1592 577135 kek-10-kek 96 94 AGCGAAGTGCACACGG 1334
1583 1598 552859* ekk-10-kke 92 91 AGGTGAAGCGAAGTGC 1340
1583 1602 577121 kdkdk-10-eeeee 91 74 GCAGAGGTGAAGCGAAGTGC 226
1583 1598 577128 kkk-8-eeeee 92 85 AGGTGAAGCGAAGTGC 1340
1583 1598 577132 kdkdk-9-ee 97 81 AGGTGAAGCGAAGTGC 1340
1583 1598 577136 kek-10-kek 95 95 AGGTGAAGCGAAGTGC 1340
1588 1603 566832 kdkdk-9-ee 95 78 TGCAGAGGTGAAGCGA 1345
1780 1795 552870* ekk-10-kke 71 93 TTTATGCCTACAGCCT 232
1780 1799 577122 kdkdk-10-eeeee 70 96 CCAATTTATGCCTACAGCCT 50
1780 1796 577125 kdkdk-8-eeee 70 94 ATTTATGCCTACAGCCT 51
1780 1795 577129 kkk-8-eeeee 76 51 TTTATGCCTACAGCCT 232
1780 1795 577133 kdkdk-9-ee 80 52 TTTATGCCTACAGCCT 232
1873 1892 9591* Равномерно дезокси 30 14 CACCCAAGGCACAGCTTGG 1377

Пример 19: Эффективность химерных олигонуклеотидов, направленных на HBV, у трансгенных мышей

В нескольких исследованиях трансгенных мышей обрабатывали антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS для оценки эффективности химерных олигонуклеотидов. Оценили уровни ДНК и РНК HBV.

Испытание 1

Каждой мыши в группе из 12 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 50 мг/кг ISIS 510106, ISIS 510116, ISIS 505347 или ISIS 509934. Контрольной группе из 12 мышей подкожно вводили PBS два раза в неделю, в течение 4 недель. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали печени для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя наборы затравочных зондов RTS3370, RTS3371 и RTS3372. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с наборами затравочных зондов RTS3370 и RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Данные, выраженные как процентное ингибирование по сравнению с контрольной группой, представлены в Таблице 56. Как показано в Таблице 56, большинство антисмысловых олигонуклеотидов привело к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» показывает мотив гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 56
Процентное ингибирование РНК и ДНК HBV в печени трансгенных мышей
№ ISIS Химия % ингибирование ДНК (RTS3370) % ингибирование ДНК (RTS3371) % ингибирование ДНК (RTS3372) % ингибирование РНК (RTS3370) % ингибирование РНК (RTS3371) % ингибирование РНК (RTS3372)
505347 5-10-5 МОЕ 72 79 75 54 28 30
509934 5-10-5 МОЕ 93 95 94 72 75 92
510106 3-10-4 МОЕ 0 0 51 0 0 12
510116 3-10-4 МОЕ 68 79 68 49 54 66

Испытание 2

Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 50 мг/кг ISIS 146779, ISIS 505358, ISIS 146786, ISIS 509974, ISIS 509958 или ISIS 509959. Контрольной группе из 10 мышей подкожно вводили PBS два раза в неделю, в течение 4 недель. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали печени для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3370. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3370 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Данные, выраженные как процентное ингибирование по сравнению с контрольной группой, представлены в Таблице 57. Как показано в Таблице 57, большинство антисмысловых олигонуклеотидов привело к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» показывает мотив гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 57
Процентное ингибирование РНК и ДНК HBV в печени трансгенных мышей
№ ISIS Химия % ингибирование ДНК % ингибирование РНК
146779 5-10-5 МОЕ 39 5
146786 5-10-5 МОЕ 83 73
505358 5-10-5 МОЕ 84 77
509958 3-10-3 МОЕ 82 29
509959 3-10-3 МОЕ 54 30
509974 3-10-3 МОЕ 56 28

Испытание 3

Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 50 мг/кг ISIS 509960, ISIS 505329, ISIS 146786, ISIS 505339 или ISIS 509927. Другой группе из 6 мышей вводили энтекавир, пероральное противовирусное лекарство, используемое для лечения инфекции гепатита В, в дозе 1 мг/кг, ежедневно, в течение двух недель. Контрольной группе из 10 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили PBS. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали печени для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Данные, выраженные как процентное ингибирование по сравнению с контрольной группой, представлены в Таблице 58. Как показано в Таблице 58, большинство антисмысловых олигонуклеотидов привело к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» показывает мотив гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 58
Процентное ингибирование РНК и ДНК HBV в печени трансгенных мышей
Химия олигонуклеотида % ингибирование ДНК % ингибирование РНК
энтекавир - 94 0
ISIS 146786 5-10-5 МОЕ 97 92
ISIS 505329 5-10-5 МОЕ 70 63
ISIS 505339 5-10-5 МОЕ 74 63
ISIS 509927 5-10-5 МОЕ 80 57
ISIS 509960 3-10-3 МОЕ 86 60

Испытание 4

Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786, ISIS 552176 и ISIS 552073. Одной группе из 10 мышей подкожно вводили PBS два раза в неделю, в течение 4 недель. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Данные представлены в Таблице 59. Как показано в Таблице 59, антисмысловые олигонуклеотиды вызывают снижение ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» показывает мотив гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 59
Процентное ингибирование РНК и ДНК HBV у трансгенных мышей
№ ISIS Химия % ингибирование РНК % ингибированиеДНК
146786 5-10-5 МОЕ 81 91
552073 8-10-2 МОЕ 39 22
552176 3-9-5 МОЕ 55 56

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на печеночную функцию, измерили концентрации ALT в плазме при помощи автоматического клинического анализатора химического состава (Hitachi Olympus AU400e, Мелвилл, штат Нью-Йорк) (Nyblom, H. et al., Alcohol & Alcoholism 39: 336-339, 2004; Tietz NW (Ed): Clinical Guide to Laboratory Tests, 3е изд. W.B. Saunders, Филадельфия, штат Пенсильвания, 1995). Результаты, выраженные в МЕ/л, представлены в Таблице 60. Оба ISIS олигонуклеотида считаются переносимыми мышами, что демонстрируется их профилем трансаминазы в печени.

Таблица 60
Уровни ALT (МЕ/л) трансгеных мышей
ALT
PBS 77
ISIS 146786 21
ISIS 552073 19
ISIS 552176 27

Испытание 5

Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786, ISIS 552056, ISIS 552088 и ISIS 552309. Одной группе из 10 мышей подкожно вводили PBS два раза в неделю, в течение 4 недель. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Как показано в Таблице 61, антисмысловые олигонуклеотиды приводят к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» показывает мотив гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 61
Процентное ингибирование ДНК и РНК HBV у трансгенных мышей
Химия % ингибирование (РНК) % ингибирование(ДНК)
ISIS 146786 5-10-5 МОЕ 60 90
ISIS 552056 7-10-3 МОЕ 25 58
ISIS 552088 8-10-2 МОЕ 8 0
ISIS 552309 5-9-3 МОЕ 35 84

Испытание 6

Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786, ISIS 505330, ISIS 509932, ISIS 552032, ISIS 552057, ISIS 552075, ISIS 552092 и ISIS 552255. Одной группе из 10 мышей подкожно вводили PBS два раза в неделю, в течение 4 недель. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Как показано в Таблице 62, антисмысловые олигонуклеотиды приводят к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» показывает мотив гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 62
Процентное ингибирование ДНК и РНК HBV у трансгенных мышей
№ ISIS Химия % ингибирование (РНК) % ингибирование(ДНК)
146786 5-10-5 МОЕ 52 95
505330 5-10-5 МОЕ 7 61
509932 5-10-5 МОЕ 83 98
552032 6-10-4 МОЕ 54 97
552057 7-10-3 МОЕ 19 62
552075 8-10-2 МОЕ 12 18
552092 8-10-2 МОЕ 25 74
552255 4-9-4 МОЕ 41 89

Испытание 7

Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 20 мг/кг ISIS 552859, ISIS 577121, ISIS 577122, ISIS 577123, ISIS 577132, ISIS 577133 и ISIS 577134. Эти химерные олигонуклеотиды имеют дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химию. Одной группе из 10 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили PBS. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Как показано в Таблице 63, антисмысловые олигонуклеотиды приводят к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; в противном случае, «d» обозначает дезоксинуклеозид; и «е» обозначает модификацию МОЕ.

Таблица 63
Процентное ингибирование ДНК и РНК HBV у трансгенных мышей
№ ISIS Химия % ингибирование (РНК) % ингибирование (ДНК)
552859 ekk-10-kke 60 86
577121 kdkdk-10-eeeee 59 93
577122 kdkdk-10-eeeee 42 68
577123 eekk-9-ekee 0 77
577132 kdkdk-9-ee 4 24
577133 kdkdk-9-ee 46 64
577134 kek-8-eeeee 0 17

Испытание 8

Группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786, химерного олигонуклеотида 5-10-5 МОЕ. Каждой мыши в группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 10 мг/кг ISIS 552803, ISIS 552903, ISIS 552817, ISIS 552822 и ISIS 552907. Эти химерные олигонуклеотиды имеют дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химию. Одной группе из 10 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили PBS. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Данные представлены в Таблице 64. Как показано в Таблице 64, антисмысловые олигонуклеотиды вызывают снижение ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; в противном случае, «d» обозначает дезоксинуклеозид; и «е» обозначает модификацию МОЕ; в случае МОЕ химерных олигонуклеотидов, колонка «химия» указывает структуру гэп-крыла.

Таблица 64
Процентное ингибирование РНК и ДНК HBV у трансгенных мышей
№ ISIS Химия Доза (мг/кг в неделю) % ингибирование РНК % ингибирование ДНК
146786 5-10-5 МОЕ 50 81 91
552803 ekk-10-kke 20 71 95
552817 ekk-10-kke 20 86 51
552822 ekk-10-kke 20 90 89
552903 ek-10-keke 20 56 82
552907 ek-10-keke 20 41 45

Испытание 9

Группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786. Группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 10 мг/кг ISIS 552853, ISIS 552854, ISIS 552932 и ISIS 552938. Одной группе из 10 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили PBS. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Как показано в Таблице 65, антисмысловые олигонуклеотиды приводят к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; в противном случае, «d» обозначает дезоксинуклеозид; и «е» обозначает модификацию МОЕ; в случае МОЕ химерных олигонуклеотидов, колонка «химия» указывает структуру гэп-крыла.

Таблица 65
Процентное ингибирование ДНК и РНК HBV у трансгенных мышей
Химия Доза (мг/кг в неделю) % ингибирование (ДНК) % ингибирование (РНК)
ISIS 146786 5-10-5 МОЕ 50 90 60
ISIS 552853 ekk-10-kke 20 94 60
ISIS 552854 ekk-10-kke 20 61 23
ISIS 552932 ek-10-keke 20 75 70
ISIS 552938 ek-10-keke 20 67 56

Испытание 10

Группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 25 мг/кг ISIS 146786. Группе из 6 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили 10 мг/кг ISIS 552922, ISIS 552923, ISIS 552942, ISIS 552872, ISIS 552925, ISIS 552937 и ISIS 552939. Одной группе из 10 мышей дважды в неделю, в течение 4 недель, подкожно вводили PBS. Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и плазму для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя набор затравочных зондов RTS3371. Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с набором затравочных зондов RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Как показано в Таблице 66, антисмысловые олигонуклеотиды приводят к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; в противном случае, «d» обозначает дезоксинуклеозид; и «е» обозначает модификацию МОЕ; в случае МОЕ химерных олигонуклеотидов, колонка «химия» указывает структуру гэп-крыла.

Таблица 66
Процентное ингибирование ДНК и РНК HBV у трансгенных мышей
№ ISIS Химия Доза (мг/кг в неделю) % ингибирование(ДНК) % ингибирование (РНК)
146786 5-10-5 МОЕ 50 52 57
552922 ekk-10-kke 20 61 50
552923 ek-10-keke 20 89 76
552942 ek-10-keke 20 58 52
552872 ek-10-keke 20 77 46
552925 ek-10-keke 20 89 65
552937 ek-10-keke 20 59 35
552939 ek-10-keke 20 57 19

Пример 20: Эффективность химерных олигонуклеотидов, направленных на HBV, у трансгенных мышей

Использовали мышей с фрагментом гена HBV (Guidotti, L.G. et al., J. Virol. 1995, 69, 6158-6169) Мышей обрабатывали ISIS антисмысловыми олигонуклеотидами, выбранными из исследований, описанных выше, и оценили их эффективность в этой модели. Оценили уровни ДНК, РНК и антигена HBV.

Каждой мыши из группы 10 мышей дважды в неделю подкожно вводили сначала 50 мг/кг, а затем, дважды в неделю, в течение следующих 3 недель, 25 мг/кг ISIS 146786 или ISIS 510100. Каждую мышь в контрольной группе из 10 мышей обрабатывали таким же образом при помощи ISIS 141923 (CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC, SEQ ID NO:320; 5-10-5 МОЕ химерный олигонуклеотид без известной мишени у мышей) или ISIS 459024 (CGGTCCTTGGAGGATGC, SEQ ID NO:1351; 3-10-4 МОЕ химерный олигонуклеотид без известной мишени у мышей). Мышей умертвили через 48 часов после последней дозы, и собрали органы и сыворотку для дальнейшего анализа.

Анализ ДНК и РНК

РНК экстрагировали из печеночной ткани для анализа ПЦР ДНК HBV в реальном времени, используя наборы затравочных зондов RTS3370, RTS3371 или RTS3372 (прямая последовательность ATCCTATCAACACTTCCGGAAACT, обозначенная SEQ ID NO: 314; обратная последовательность CGACGCGGCGATTGAG, обозначенная SEQ ID NO:315; последовательность зонда AAGAACTCCCTCGCCTCGCAGACG, обозначенная SEQ ID NO:316). Уровни ДНК нормализовали к Picogreen. Образцы РНК HBV также анализировали с наборами затравочных зондов RTS3370 и RTS3371 после анализа ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК нормализовали к RIBOGREEN®. Данные представлены в Таблице 67. Образцы ДНК в сыворотке анализировали после испытательного периода. Данные, выраженные относительно уровней, измеренных в контрольной группе, представлены в Таблице 68. Как показано в Таблицах 67 и 68, антисмысловые олигонуклеотиды приводят к снижению ДНК и РНК HBV по сравнению с PBS контрольным образцом. Результаты представлены как процентное ингибирование мРНК или ДНК HBV, по сравнению с контрольным образцом. Колонка «химия» указывает структуру гэп-крыла каждого химерного олигонуклеотида.

Таблица 67
10 Процентное ингибирование РНК и ДНК HBV в печени трансгенных мышей
№ ISIS Химия % ингибирование ДНК (RTS3370) % ингибирование ДНК (RTS3371) % ингибирование ДНК (RTS3372) % ингибирование РНК (RTS3370) % ингибирование РНК (RTS3371) % ингибировании РНК (RTS3372)
146786 5-10-5 МОЕ 97 97 95 86 85 89
510100 3-10-4 МОЕ 95 94 94 56 64 77
141923 5-10-5 МОЕ 2 0 13 0 7 31
459024 3-10-4 МОЕ 19 0 8 0 0 0
Таблица 68
Процентное ингибирование ДНК HBV в сыворотке трансгенных мышей
№ ISIS % ингибирование (RTS3370) % ингибирование (RTS3371)
146786 98 98
510100 99 98
141923 0 0
459024 0 0

Анализ антигена HBV

Антигены HBV в надосадочных жидкостях обнаружили при помощи иммуноферментого анализа твердофазного (ELISA). Уровни антигена HBs (HBsAg) обнаружили иммуноферментным твердофазным анализом компании Abazyme LLC, штат Массачусетс. Как показано в Таблице 57, обработка олигонуклеотидами ISIS 146786 или 510100 вызывает снижение уровней HBsAg. Уровни антигена НВе (HBeAg) обнаружили иммуноферментным твердофазным анализом компании International Immune-diagnostics, штат Калифорния. Как показано в Таблице 69, обработка олигонуклеотидами ISIS 146786 или 510100 вызывает также снижение уровней HBeAg.

Таблица 69
Уровни антигенов HBV (Единицы Института Пауля-Эрлиха/мл) у трансгенных мышей
HBsAg HBeAg
PBS 40 80
146786 3 15
510100 15 22
141923 32 80
459024 44 51

Пример 21: Антисмысловое ингибирование вирусной мРНК HBV в клетках HepG2 дезокси-, МОЕ и (S)-cEt-химерными олигонуклеотидами

Дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды были разработаны для направленного действия на вирусную нуклеиновую кислоту HBV, и были испытаны на их действие на мРНК HBV in vitro. В этот анализ включили также ISIS 146786, ISIS 505358, ISIS 509932 и ISIS 510100, описанные в предварительной заявке на патент США №61/478040, поданной 21 апреля 2011 года; ISIS 552859, описанный в предварительной заявке на патент США №61/596692, поданной 8 февраля 2012 года; ISIS 577121, ISIS 577122, ISIS 577123, ISIS 577132, ISIS 577133 и ISIS 577134, описанные в исследовании, раскрытом выше. Культивированные клетки HepG2 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи Cytofectin 9,375 нМ, 18,75 нМ, 37, 50 нМ, 75,00 нМ, 15,00 нМ или 300,00 нМ антисмыслового олигонуклеотида После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3371. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Результаты представлены как процентное ингибирование HBV, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Новые разработанные химерные антисмысловые олигонуклеотиды в Таблицах ниже были разработаны как дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химерные олигонуклеотиды. Дезокси-, МОЕ и (S)-cEt химерные олигонуклеотиды имеют 16, 17 или 18 нуклеозидов в длину, причем нуклеозиды имеют или МОЕ сахарную модификацию, или (S)-cEt сахарную модификацию, или дезокси-модификацию. Колонка «химия» описывает модификации сахара каждого олигонуклеотида. «k» обозначает (S)-cEt модификацию сахара; число обозначает количество дезоксинуклеозидов; в противном случае, «d» обозначает дезоксинуклеозид; и «е» обозначает модификацию МОЕ. Межнуклеозидные связи в каждом химерном олигонуклеотиде представляют собой фосфотиоатные (P=S) связи. Все цитозиновые остатки в каждом олигонуклеотиде представляют собой 5-метилцитозины.

«Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен химерный олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Каждый химерный олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 70, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1).

Таблица 70
Химерные антисмысловые олигонуклеотиды, направленные на SEQ ID NO:1
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт № ISIS Мотив Последовательность SEQ ID NO
411 427 585163 eeekk-8-eeee GGCATAGCAGCAGGATG 17
414 430 585164 eeekk-7-kkeee TGAGGCATAGCAGCAGG 21
414 430 585165 eeek-9-keee TGAGGCATAGCAGCAGG 21
1577 1593 585170 eeekk-7-kkeee AAGCGAAGTGCACACGG 1304
1577 1593 585171 eeek-9-keee AAGCGAAGTGCACACGG 1304
1577 1593 585172 eeeekk-7-eeee AAGCGAAGTGCACACGG 1304
1577 1593 585173 ekek-9-eeee AAGCGAAGTGCACACGG 1304
1577 1593 585174 ekekdk-7-eeee AAGCGAAGTGCACACGG 1304
1583 1599 585166 eeekk-7-kkeee GAGGTGAAGCGAAGTGC 1310
1583 1599 585167 eeek-9-keee GAGGTGAAGCGAAGTGC 1310
1780 1797 577119 kdkdk-8-eeeee AATTTATGCCTACAGCCT 1379
1780 1796 585168 eeekk-7-kkeee ATTTATGCCTACAGCCT 51
1780 1796 585169 eeek-9-keee ATTTATGCCTACAGCCT 51
Таблица 71
Зависимое от дозы ингибирование уровней мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами
№ ISIS 9,375 нМ 18,75 нМ 37, 5 нМ 75,0 нМ 150,0 нМ 300,0 нМ
146786 37 37 58 70 81 93
505358 30 26 28 57 74 85

510100 42 30 43 61 77 91
552859 21 30 39 61 79 91
577119 42 43 46 66 74 75
577121 10 15 42 64 82 89
577122 21 30 53 66 78 84
577123 27 29 45 56 78 84
577132 14 21 42 61 80 92
577133 12 14 32 47 62 77
577134 37 39 59 72 86 90
585174 31 28 48 61 80 90
Таблица 72
Зависимое от дозы ингибирование уровней мРНК HBV химерными антисмысловыми олигонуклеотидами
№ ISIS 9,375 нМ 18,75 нМ 37, 5 нМ 75,0 нМ 150,0 нМ 300,0 нМ
146786 25 34 57 71 85 92
509932 9 28 59 62 70 74
585163 17 32 52 68 77 81
585164 23 4 29 31 36 56
585165 6 31 42 58 66 82
585166 19 27 35 48 50 63
585167 22 25 50 69 76 88
585168 4 30 44 52 67 76
585169 32 32 42 62 76 80
585170 23 19 39 49 66 75
585171 28 27 42 59 81 88
585172 26 29 30 64 80 91
585173 29 30 41 71 86 88

Пример 22: Анализ эффективности однообразных дезоксиолигонуклеотидов при ингибровании мРНК HBV в клетках HepG2

Дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды были испытаны на их влияние на мРНК HBV in vitro. В этот анализ включили также ISIS 5808 и ISIS 9591, описанные в US 5985662. В этот анализ включили ISIS 146786 в качестве эталона. Культивированные клетки HepG2 при плотности 28000 клеток на лунку трансфицировали при помощи LipofectAMINE2000® 18,75 нМ, 37, 50 нМ, 75,00 нМ, 150,00 нМ или 300,00 нМ антисмыслового олигонуклеотида. После примерно 24 часов обработки, РНК выделили из клеток и измерили уровни мРНК HBV количественной ПЦР в реальном времени. Для измерения уровней мРНК и ДНК использовали набор вирусных затравочных зондов RTS3371. Уровни мРНК HBV скорректировали в соответствии с общим содержанием РНК, по результатам измерения с RIBOGREEN®. Уровни антигена S и антигена Е также измерили при помощи иммуноферментного твердофазного анализа (ELISA). Результаты представлены как процентное ингибирование, по сравнению с не обработанными контрольными клетками.

Исследованные антисмысловые олигонуклеотиды, ISIS 582699, ISIS 582700 и ISIS 582701, были разработаны в соответствии с последовательностями и химическими структурами, описанными в публикации Korba and Germ, Antiviral Research, 1995, Vol.28, 225-242; соответствующие названия олигонуклеотидов в представленной ссылке - S1, C1 и L2c, соответственно. Антисмысловые олигонуклеотиды в Таблицах ниже были разработаны как однообразные дезокси-олигонуклеотиды длиной 16 или 21 нуклеозида, причем эти нуклеозиды имеют дезокси-модификации. «Вирусный целевой сайт инициации» указывает 5'-основной нуклеотид, на который направлен олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. «Вирусный целевой терминирующий сайт» указывает 3'-основной нуклеотид, на который направлен олигонуклеотид в последовательности вирусного гена. Каждый олигонуклеотид, перечисленный в Таблице 73, направлен на вирусную геномную последовательность, обозначенную в настоящем документе как SEQ ID NO:1 (доступ GENBANK №U95551.1). Результаты показывают, что дезокси-олигонуклеотиды имеют незначительное влияние на уровни экспрессии мРНК HBV, уровни ДНК и уровни антигена HBV.

Таблица 73
Однообразные дезокси-олигонуклеотиды, направленные на SEQ ID NO:1
Вирусный целевой сайт инициации Вирусный целевой терминирующий сайт № ISIS Последовательность SEQ ID NO
160 180 582699 GAATCCTGATGTGATGTTCTC 1378
1884 1899 582701 CCAAAGCCACCCAAGG 1380
1910 1930 582700 CAAATTCTTTATAAGGGTCGA 1381
Таблица 74
Зависимое от дозы ингибирование уровней мРНК HBV после обработки олигонуклеотидами
№ ISIS 18,75 нМ 37, 5 нМ 75,0 нМ 150,0 нМ 300,0 нМ
5808 38 23 29 40 54
9591 35 20 32 26 40
146786 11 5 45 66 92
582699 32 28 27 39 52
582700 18 12 20 16 23
582701 4 0 0 3 13

Таблица 75
Зависимое от дозы ингибирование уровней ДНК HBV в клетках HepG2 после обработки олигонуклеотидами
№ ISIS 18,75 нМ 37, 5 нМ 75,0 нМ 150,0 нМ
5808 20 17 0 0
9591 0 0 0 0
146786 32 50 77 83
582699 0 44 0 17
582700 0 0 0 0
582701 0 0 0 0
Таблица 76
Уровни антигена S HBV после обработки олигонуклеотидами (произвольные единицы)
№ ISIS 18,75 нМ 37, 5 нМ 75,0 нМ 150,0 нМ
5808 9254 8228 4168 2540
9591 10924 8683 9334 12142
146786 12501 7265 3408 1 017
582699 9340 9325 7589 4712
582700 9697 8350 11 168 10703
582701 15283 18209 14632 15299
Таблица 77
Уровни антигена Е HBV после обработки олигонуклеотидами (произвольные единицы)
ISIS No 18,75 нМ 37, 5 нМ 75,0 нМ 150,0 нМ
5808 8075 8587 5036 3286
9591 9242 8093 8257 6944
146786 8532 4034 2301 449
582699 7815 7191 7026 5278
582700 8690 9304 7941 6315
582701 8847 8257 8211 6276

1. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеооснований, состоящую из последовательностей нуклеооснований SEQ ID NO: 226, 17, 50, 224, 722, 807, 1327, 1340 и 1379, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид содержит:

сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; и при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар или затрудненный этиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь или фосфодиэфирную связь; и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

2. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 226, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 5 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 5 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин представляет собой 5-метилцитозин.

3. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 17 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 17, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 3 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 4 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

4. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 50, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 5 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 5 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

5. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 722, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 6 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 4 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

6. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 1327, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 2 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 4 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; 2 связанных нуклеозида сегмента крыла 5' содержат 2'-O-метоксиэтиловый сахар и затрудненный этиловый сахар в направлении от 5' к 3'; 4 связанных нуклеозида сегмента крыла 3' содержат затрудненный этиловый сахар, 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

7. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 16 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 1340, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 3 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 3 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; 3 связанных нуклеозида сегмента крыла 5' содержат 2'-O-метоксиэтиловый сахар, затрудненный этиловый сахар и затрудненный этиловый сахар в направлении от 5' к 3'; 3 связанных нуклеозида сегмента крыла 3' содержат затрудненный этиловый сахар, затрудненный этиловый сахар и 2'-O-метоксиэтиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

8. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 1379, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 8 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 5 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 5 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3'; 5 связанных нуклеозидов сегмента крыла 5' содержат затрудненный этиловый сахар, дезоксисахар, затрудненный этиловый сахар, дезоксисахар и затрудненный этиловый сахар в направлении от 5' к 3'; каждый из 5 связанных нуклеозидов сегмента крыла 3' содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар; каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь; и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

9. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 224, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 6 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 4 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

10. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по п. 1, отличающийся тем, что указанный одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов, имеющих последовательность нуклеооснований SEQ ID NO: 807, и содержит:

сегмент гэп, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

сегмент крыла 5', состоящий из 6 связанных нуклеозидов; и

сегмент крыла 3', состоящий из 4 связанных нуклеозидов;

причем сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит 2'-O-метоксиэтиловый сахар, каждая межнуклеозидная связь указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой фосфотиоатную связь, и каждый цитозин указанного одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида представляет собой 5-метилцитозин.

11. Одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид является сопряженным.

12. Композиция для лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния, содержащая одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид по любому из пп. 1-10 или его фармацевтически приемлемое производное и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

13. Применение соединения по любому из пп. 1-10, для производства лекарства для лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у пациента, при этом заболевание, расстройство или состояние представляет собой желтуху, воспаление печени, фиброз печени, воспаление, цирроз печени, печеночную недостаточность, рак печени, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV или заболевание печени, связанное с трансплантацией.

14. Применение композиции по п. 12, для производства лекарства для лечения HBV-связанного заболевания, расстройства или состояния у пациента, при этом заболевание, расстройство или состояние представляет собой желтуху, воспаление печени, фиброз печени, воспаление, цирроз печени, печеночную недостаточность, рак печени, диффузное гепатоцеллюлярное воспалительное заболевание, гемофагоцитарный синдром, серозный гепатит, виремию HBV или заболевание печени, связанное с трансплантацией.

15. Применение соединения по любому из пп. 1-10 для производства лекарства для снижения уровней HBsAG у пациента, инфицированного HBV.

16. Применение композиции по п. 12 для производства лекарства для снижения уровней HBsAG у пациента, инфицированного HBV.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны композиции и способы для определения находящихся в системе кровообращения биомолекул до, во время и/или после лечения пациента противораковым или противоопухолевым лекарственным препаратом (или предполагаемым лекарственным препаратом).

Настоящее изобретение относится к биотехнологии, в частности к композиции для продукции целевого полипептида в клетке или ткани млекопитающего и способу получения указанного полипептида в клетке или ткани млекопитающего in vitro с применением такой композиции.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая фармацевтическую композицию для экспрессии полипептида в клетке млекопитающего и применение композиции для получения лекарственного средства для повышения уровня интересующего полипептида у млекопитающего.

Изобретение относится к области медицины, в частности к репродуктивной медицине и вспомогательным репродуктивным технологиям, а также к области науки, в частности к молекулярной биологии и эмбриологии.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ перепрограммирования клетки в менее дифференцированное состояние, включающий культивирование дифференцированной клетки в среде для перепрограммирования, содержащей альбумин, где альбумин обработан ионообменной смолой или древесным углем, трансфицирование клетки одной или более синтетических молекул РНК, где указанные одна или более синтетических молекул РНК включают по меньшей мере одну молекулу РНК, кодирующую один или более факторов перепрограммирования, и где указанное трансфицирование приводит к получению клетки, экспрессирующей один или более факторов перепрограммирования; и повторение стадии (b) по меньшей мере дважды в течение 5 последовательных дней с получением клетки, перепрограммированной в менее дифференцированное состояние.

Изобретение относится к самодоставляющейся интерферирующей РНК (sd-РНК), которая может использоваться в медицине. Самодоставляющаяся интерферирующая sd-РНК содержит ведущую нить и пассажирскую нить, причем sd-РНК содержит двухцепочечную область и одноцепочечную область, где одноцепочечная область расположена на 3'-конце ведущей нити, двухцепочечная область имеет длину 8-15 нуклеотидов, а одноцепочечная область имеет длину 4-12 нуклеотидов, по меньшей мере 40% нуклеотидов sd-РНК модифицированы, причем модификации выбраны из группы, включающей 5'-фосфорилирование, фосфоротиоатную модификацию каркаса, 2'-дезокси-, 2'F- и 2'O-метильную модификацию рибозы, гидрофобную модификацию U и/или С, причем гидрофобная модификация находится в положении 4 или 5 U и/или С, по меньшей мере два U и/или С включают гидрофобную модификацию, выбранную из группы, состоящей из метильной, октильной, тиофеновой, октин-1-ильной, этинильной, пиридиламидной, изобутильной, фенильной, 4-пиридильной, 2-пиридильной, индолильной, бутильной, нафтильной и имидазольной модификации; одноцепочечная область содержит 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 фосфоротиоатных модификаций; и модификации включают по меньшей мере одну 2'F- или 2'O-метильную модификацию; sd-РНК необязательно содержит по меньшей мере одну дополнительную одноцепочечную область и sd-РНК необязательно содержит холестерин или длинноцепочечный алкилхолестериновый аналог, присоединенный к 3'-концу непосредственно или посредством линкерного фрагмента.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения свободного от белка биологически активного препарата высокополимерной РНК из сухих пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу и диагностическому набору для диагностики коклюша и определения авирулентных мутантов возбудителя коклюша.
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению интерфероногенных противовирусных препаратов на основе дрожжевой РНК, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к биохимии и представляет собой способ ослабления экспрессии мРНК TNFR1 у субъекта. .

Изобретение относится к области биохимии, в частности к одноцепочечному олигонуклеотиду, где все нуклеозиды олигонуклеотида представляют собой 2'-O-алкилрибонуклеозиды, а также к применению вышеуказанного олигонуклеотида в лечении муковисцидоза человеческого организма или организма животного.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ лечения или предотвращения миотонической дистрофии типа 1 (DM1) у индивидуума.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к конъюгату антисмыслового олигомера, и может быть использовано в медицине. Изобретение направлено на получение конструкции, позволяющей улучшить терапевтический индекс представляющего интерес антисмыслового олигонуклеотида и его высвобождение в клетках вследствие конъюгации олигонуклеотида с расщепляемой фосфодиэфирной областью и направляющей группой, способствующей доставке полученного конструкта в нужное место в клетке и обеспечивающей направленный захват действующего антисмыслового олигомера целевыми клетками.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к конъюгату антисмыслового олигомера, и может быть использовано в медицине. Изобретение направлено на получение конструкции, позволяющей улучшить терапевтический индекс представляющего интерес антисмыслового олигонуклеотида и его высвобождение в клетках вследствие конъюгации олигонуклеотида с расщепляемой фосфодиэфирной областью и направляющей группой, способствующей доставке полученного конструкта в нужное место в клетке и обеспечивающей направленный захват действующего антисмыслового олигомера целевыми клетками.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана молекула нуклеиновой кислоты, содержащая двухцепочечную структуру,где двухцепочечная структура образована первой цепью и второй цепью, где первая цепь состоит из следующей нуклеотидной последовательности:5'-acGaGcUgGaCcAcUgGuCdTSdT-3' и вторая цепь состоит из следующей нуклеотидной последовательности:5'-GAcCaGuGgUcCaGcUcGudTSdT-3', где то, что нуклеотид указан строчной буквой, указывает на то, что нуклеотид является 2'-F-модифицированным, и подчеркивание нуклеотида указывает на то, что нуклеотид является 2'-O-метил-модифицированным и где dTSdT указывает на то, что на 3'-конце присоединен динуклеотид, состоящий из двух нуклеотидов dT, где указанные два dT ковалентно связаны посредством фосфотиоатной связи.

Изобретение относится к пригодному для применения в медицине соединению, содержащему модифицированный олигонуклеотид и конъюгирующую группу при этом модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных азотистых оснований, комплементарных равной по длине части азотистых оснований 3533-3552 в SEQ ID NO: 3, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов; сегмент крыла 5', состоящий из связанных нуклеозидов; сегмент крыла 3', состоящий из связанных нуклеозидов; при этом сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', и при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар, и где по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированное азотистое основание; и модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к кардиологии. Проводят экстренную коронарную ангиографию и при выявлении острой окклюзии коронарной артерии и наличия длины тромба более 3 диаметров артерии осуществляют антитромбоцитарную терапию, включающую итегрилин с гепарином или бивалирудин.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая конъюгат, снижающий уровень экспрессированной в печени РНК, содержащий антисмысловой LNA-олигомер и ковалентно связанную с ним конъюгатную группировку, содержащую группу, направленную на асиалогликопротеиновый рецептор и фармацевтическую композицию, содержащую вышеуказанный конъюгат в эффективном количестве.

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии, в частности к РНК-аптамеру, представляющему 26-звенный олигонуклеотид смешанного типа. Настоящий РНК-аптамер содержит пуриновые рибонуклеотиды и 2’-дезокси-2’-фторпиримидиновые рибонуклеотиды.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к аптамеру, специфически связывающемуся с фактором роста нервов (NGF), и может быть использовано в медицине как противовоспалительное или обезболивающее средство.
Наверх