Оксохиназолинилбутанамидные производные

Изобретение относится к новому соединению формулы I и его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают свойствами ингибитора танкираз (TANK) и/или поли(ADP-рибоза)полимеразы (PARP) и могут найти применение для лечения таких заболеваний, как злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечно-сосудистые заболевания. поражения ЦНС и различные формы воспаления. В формуле I

Z означает

X означает СН или N, R¹ означает Н, R² означает Н или F, R³ означает Н, СН₃ или F, R⁴ означает Н, CN, ОСН₃, 1-этил-1Н-пиразол-4-ил, 1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил или 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил, R⁵ означает Н, СН₃, F или ОСН₃, R⁶ означает CN или 2-пиримидинил, R⁷ означает Het², Het² означает пиразолил или имидазолил, каждый из которых может быть замещен посредством А, А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С, где от 1 до 3 атомов Н могут быть заменены на F и/или ОН. Изобретение также относится к способу получения соединений формулы I путем взаимодействия соединения формулы II с соединением формулы III

где Z. R¹, R² и R³ имеют значения, указанные в пункте 1, и L означает Cl, Br, I или свободную или реакционно-способно функционально модифицированную ОН группу. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 12 пр.

 

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Задачей изобретения является обнаружение новых соединений, которые обладают ценными свойствами, в частности, таких, которые можно применять для получения лекарственных средств.

Настоящее изобретение относится к оксохиназолинилбутанамидным производным, которые ингибируют активность танкираз (TANK) и поли(АDР-рибоза)полимеразы PARP-1. Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению пригодны для лечения заболеваний, таких как злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления. Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения этих соединений, фармацевтические композиции, которые содержат эти соединения, и способы лечения заболеваний с использованием фармацевтических композиций, которые содержат эти соединения.

Ядерный фермент поли(АDР-рибоза) полимераза-1 (PARP-1) является представителем семейства ферментов PARP. Это семейство ферментов роста состоит из PARP, таких как, например: PARP-1, PARP-2, PARP-3 и Vault-PARP; и танкираз (TANK), таких как, например: TANK-1 и TANK-2. PARP также обозначается как поли(аденозин5'-дифосфорибоза)полимераза или PARS (поли(АDР-рибоза)синтетаза).

Полагают, что TANK-1 необходима для полимеризаций связанной с митотическим веретеном поли(АDР-рибозы). Поли(АDР-рибозил)ирующая активность TANK-1 должна быть решающей для точного образования и поддержания биполярности веретена. Кроме того, полагают, что PARP активность TANK-1 необходима для нормального разделения теломер перед анафазой. Интерференция с танкиразной PARP активностью приводит к аберрантному митозу, который вызывает временную остановку клеточного цикла, возможно, вследствие активации контрольной точки веретена, с последующей клеточной гибелью. Таким образом, полагают, что ингибирование танкираз имеет цитотоксическое действие на пролиферирующие опухолевые клетки (WO 2008/107478).

Ингибиторы PARP описаны М. Rouleau и др. в Nature Reviews, том 10, 293-301 в клинических исследованиях злокачественных новообразований (таблица 2, страница 298).

В соответствии с обзором Horvath и Szabo (Drug News Perspect 20(3), April 2007, 171-181) в самых последних исследованиях было показано, что PARP ингибиторы усиливают гибель раковых клеток главным образом в связи с их препятствованием репарации ДНК на различных уровнях. В самых последних исследованиях также было показано, что PARP ингибиторы ингибируют ангиогенез, либо путем ингибирования экспрессии фактора роста, либо путем ингибирования индуцированных фактором роста клеточных пролиферативных ответов. Эти данные также могут оказывать влияния на характер противораковых эффектов PARP ингибиторов in-vivo.

Также в исследовании Tentori и др. (Eur. J. Cancer, 2007, 43 (14) 2124-2133) было показано, что PARP ингибиторы аннулируют индуцированную VEGF или плацентным фактором роста миграцию и предотвращают образование трубочкообразных сетей в клеточных системах, и повреждают ангиогенез in-vivo. В исследовании также показано, что индуцированный фактором роста ангиогенез является дефектным у PARP-1 «knock-out» мышей. Результаты исследования обеспечивают подтверждение для нацеливания PARP на анти-ангиогенез, добавляя новые терапевтические показания к применению PARP ингибиторов при лечении злокачественного новообразования.

Хорошо известно, дефекты в консервативных путях передачи сигналов играют ключевую роль в происхождении и поведении по существу всех злокачественных новообразований (E.A. Fearon, Cancer Cell, том 16, изд. 5, 2009, 366-368). Wnt путь является мишенью для противораковой терапии. Ключевой особенностью Wnt пути является регулированный протеолиз (деградация) β-катенина с помощью комплекса, разрушающего β-катенин. Белки, такие как WTX, АРС или Axin, задействованы в процесс разложения. Правильное разложение β-катенина является важным для избегания несоответствующей активации Wnt пути, которая наблюдается при многих злокачественных новообразованиях. Танкиразы ингибируют активность Axin и, следовательно, ингибируют разложение β-катенина. В результате этого, ингибиторы танкиразы повышают разложение β-катенина. В издании журнала Nature были предложены не только важные новые сведения относительно белков, регулирующих Wnt передачу сигналов, но и дополнительно подтвержден подход антагонизации уровней β-катенина и локализации с помощью небольших молекул (Huang и др., 2009; Nature, том 461, 614-620). Соединение XAV939 ингибирует рост DLD-1-раковых клеток. Авторы обнаружили, что XAV9393 блокирует Wnt-стимулированное накопление β-катенина путем повышения уровней белков AXIN1 и AXIN2. В последующей работе авторами было показано, что XAV939 регулирует уровни AXIN посредством ингибирования танкираз 1 и 2 (TNKS1 и TNKS2), которые обе являются членами семейства белков поли(АDР-рибоза) полимеразы (PARP) (S.J. Hsiao и др., Biochimie 90, 2008, 83-92).

Было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением и их соли обладают чрезвычайно ценными фармакологическими свойствами, а также хорошей переносимостью.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I, которые ингибируют танкиразу 1 и 2, к композициям, которые содержат эти соединения, и к способам их применения для лечения заболеваний и осложнений, индуцированных TANK.

Кроме того, соединения формулы I могут использоваться для выделения и исследования активности или экспрессии TANK. Дополнительно, они особенно пригодны для применения в методах диагностики заболеваний, связанных с нерегулированной или нарушенной активностью TANK.

Хозяин или пациент может принадлежать к любому из видов млекопитающих, например, к видам приматов, в частности, к людям; грызунам, включая мышей, крыс и хомяков; кроликам, лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для лечения болезней человека.

Чувствительность определенной клетки к лечению с помощью соединений в соответствии с данным изобретением может определяться с помощью тестов in-vitro. Типично, к культуре клеток прибавляют соединение в соответствии с данным изобретением при различных концентрациях в течение периода времени, который является достаточным для того, чтобы позволить активным агентам, таким, как анти IgM, индуцировать клеточный ответ, такой как экспрессия поверхностного маркера, обычно от одного часа до одной недели. In-vitro тестирование может осуществляться при использовании культивируемых клеток, полученных из крови или из образца биопсии. Количество экспрессированного поверхностного маркера оценивают с помощью проточной цитометрии при использовании специфических антител, которые узнают маркер.

Доза варьирует в зависимости от используемого специфического соединения, специфического заболевания, состояния пациента, и т.д. Терапевтическая доза типично является достаточной для того, чтобы значительно уменьшить численность нежелательной клеточной популяции в целевой ткани при поддержании жизнеспособности пациента. Лечение в общем случае продолжается до возникновения значительного снижения, например, снижения, которое составляет, по крайней мере, 50% клеточной нагрузки, и может продолжаться до отсутствия существенного обнаружения нежелательных клеток в организме.

ИЗВЕСТНЫЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Е. Wahlberg и др., Nature Biotechnology (2012), 30(3), 283.

Следующий хиназолинон описан в качестве ингибитора танкиразы:

IC₅₀ (TNKS1)=590 нМ, IC₅₀ (TNKS2)=600 нМ; клеточное исследование: отсутствие воздействия при 30 мкМ.

М.D. Shultz и др., Journal of Medicinal Chemistry 2013 (опубликованный 11.07.2013)

Следующий хиназолинон описан в качестве ингибитора танкиразы:

литературные данные: IC₅₀ (TNKS1)=50 нМ, IC₅₀ (TNKS2)=22 нМ

В той же публикации в качестве ингибитора танкиразы описано следующее бензоилпиперидиновое производное:

IC₅₀ (TNKS1)=2 нМ, IC₅₀ (TNKS2)=0.6 нМ; клеточное исследование: ЕС₅₀=35 нМ.

Н. Bregman и др., Journal of Medicinal Chemistry (2013), 56(3), 1341

Следующий хиназолинон описан в качестве ингибитора танкиразы:

IC₅₀(TNKS1)=7.4 нМ, IC₅₀(TNKS2)=4.4 нМ; клеточное исследование: ЕС₅₀=320 нМ.

Соединения настоящего изобретения значительно более активны.

Другие ингибиторы танкиразы описаны в WO 2013/012723, WO 2013/010092 и в WO 2013/008217.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к соединениям формулы I

в которой

Z означает

или

X означает СН или N,

R¹, R² каждый, независимо друг от друга, означает Н, F или Сl,

R³ означает Н, F, Сl, СН₃ или ОСН₃,

R⁴ означает Н, F, A, CN, OA или Y,

R⁵ означает Н, F, А или OA,

R⁶ означает CN или 2-пиримидинил,

R⁷ означает Het²,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН- и/или СН₂-группы могут быть заменены на атомы N или О и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F, Cl и/или ОН,

Y означает пиразолил, который может быть замещен посредством А или (CH₂)_nHet¹,

Het¹ означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

Het² означает пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, пирролил, тиазолил, фуранил или тиенил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

n означает 0, 1, 2, 3 или 4,

и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях.

Изобретение также относится к оптически активным формам (стереоизомерам), энантиомерам, рацематам, диастереомерам и гидратам и сольватам этих соединений.

Кроме того, изобретение относится к фармацевтически приемлемым производным соединений формулы I.

Термин сольваты соединений обозначает аддукции молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря их силе взаимного притяжения. Сольваты представляют собой, например, моно- или дигидраты или алкоголяты.

Подразумевается, что изобретение также относится к сольватам солей.

Термин фармацевтически приемлемые производные обозначает, например, соли соединений в соответствии с изобретением, а также так называемые пролекарства соединений.

Как используется в настоящей заявке и если специально не указано иначе, термин "пролекарство" обозначает производное соединения формулы I, которое может быть гидролизовано, окислено или по-другому реагировать в биологических условиях (in-vitro или in-vivo) с обеспечением активного соединения, в частности соединения формулы I. Примеры пролекарств включают, но не ограничиваются только ими, производные и метаболиты соединения формулы I, которые включают биогидролизируемые фрагменты, такие как биогидролизируемые амиды, биогидролизируемые сложные эфиры, биогидролизируемые карбаматы, биогидролизируемые карбонаты, биогидролизируемые уреиды и биогидролизируемые фосфатные аналоги. В определенных вариантах осуществления, пролекарства соединений с карбоксильными функциональными группами представляют собой низшие алкиловые сложные эфиры карбоновой кислоты. Карбоксилатные сложные эфиры легко образуются путем эстерификации любых фрагментов карбоновой кислоты, присутствующих в молекуле. Пролекарства типично можно приготавливать, используя хорошо известные методы, такие как методы, описанные в Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery 6-ое изд. (Donald J. Abraham ред., 2001, Wiley) и Design and Application of Prodrugs (H.Bundgaard ред., 1985, Harwood Academic Publishers Gmfh).

Выражение "эффективное количество" обозначает количество лекарственного средства или фармацевтического активного компонента, которое вызывает в ткани, системе, животном или человеке биологическую или медицинскую ответную реакцию, которую предполагает или желает получить, например, исследователь или лечащий врач.

Дополнительно, выражение "терапевтически эффективное количество" обозначает то количество, которое имеет следующие последствия по сравнению с соответствующим субъектом, который не получал этого количества:

улучшение лечения, излечение, предотвращение или элиминация заболевания, синдрома, состояния, жалобы, расстройства или побочных действий, или также уменьшение прогрессирования заболевания, жалобы или расстройства.

Термин "терапевтически эффективное количество" также охватывает количества, которые эффективны для повышения нормальной физиологической функции.

Изобретение также относится к применению смесей соединений формулы I, например, смесей двух диастереомеров, например, в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000.

Особенно предпочтительными являются смеси стереоизомерных соединений.

"Таутомеры" относятся к изомерным формам соединения, которые находятся в равновесии друг с другом. Концентрации изомерных форм будут зависеть от окружения, в котором находится соединение, и могут отличаться в зависимости от того, например, будет ли соединение представлять собой твердое вещество или находится в органическом или водном растворе.

Изобретение относится к соединениям формулы I и их солям, и к способу получения соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей, сольватов, таутомеров и стереоизомеров, который отличается тем, что

соединение формулы II

в которой Z имеют значения, указанные в пункте 1,

подвергают реакции

с соединением формулы III

в которой R¹, R² и R³ имеют значения, указанные в пункте 1,

и L означает Cl, Br, I или свободную или реакционно-способно функционально модифицированную ОН группу,

и/или

основание или кислоту формулы I превращают в одну из его(ее) солей.

Выше и ниже радикалы R¹, R², R³ и Z имеют значения, указанные для формулы I, если специально не указано иное.

А означает алкил, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным, и содержит 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 атомов С. А предпочтительно означает этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил или трет-бутил, кроме того, также пентил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметил-пропил, 1-этилпропил, гексил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2-этилбутил, 1-этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2- или 1,2,2-триметилпропил, кроме того, предпочтительно, например, трифторметил или 1-гидрокси-1-метилэтил.

А особенно предпочтительно означает алкил, содержащий 2, 3, 4, 5 или 6 атомов С, предпочтительно этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, гексил, трифторметил, пентафторэтил или 1,1,1-трифторэтил.

Более того, А предпочтительно означает СН₂ОСН₃, СН₂СН₂ОН или СН₂СН₂ОСН₃.

R¹ предпочтительно означает Н.

R² предпочтительно означает Н или F.

R³ предпочтительно означает Н, СН₃ или F.

R⁴ предпочтительно означает Н, CN, ОСН₃, 1-этил-1Н-пиразол-4-ил, 1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил или 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил.

R⁵ предпочтительно означает Н, СН₃, F или ОСН₃.

Het¹ предпочтительно означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен метилом.

Het² предпочтительно означает пиразолил или имидазолил, каждый из которых может быть замещен метилом.

Het¹ особенно предпочтительно означает пирролидинил или пиперидинил.

n предпочтительно означает 1, 2 или 3.

Для всего изобретения, все радикалы, которые встречаются более одного раза, могут быть одинаковыми или различными, то есть являются независимыми друг от друга.

Соединения формулы I могут иметь один или несколько хиральных центров и поэтому могут встречаться в различных стереоизомерных формах. Формула I охватывает все эти формы.

Соответственно, изобретение относится, в частности, к соединениям формулы I, в которой по меньшей мере один из указанных радикалов имеет одно из предпочтительных значений, указанных выше. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть изображены с помощью следующих подформул Ia-Iс, которые соответствуют формуле Iа и в которых радикалы, не определенные более подробно, имеют значения, указанные для формулы I, но в которых

в Iа А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН₂-группы могут быть заменены на атомы О и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F и/или ОН;

в Ib R¹, R² каждый, независимо друг от друга, означает Н, F или Сl,

R³ означает Н, F, Сl, СН₃ или ОСН₃,

R⁴ означает Н, F, A, CN, OA или Y,

R⁵ означает Н, F, А или OA,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С, где от 1 до 3 атомов Н могут быть заменены на F и/или ОН;

Y означает пиразолил, который может быть замещен посредством А, метоксиэтил, или (CH₂)_nHet¹,

Het¹ означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

Het² означает пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, пирролил, тиазолил, фуранил или тиенил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

n означает 0, 1, 2, 3 или 4;

в Ic R¹ означает Н,

R² означает Н или F,

R³ означает Н, СН₃ или F,

R⁴ означает Н, CN, ОСН₃, 1-этил-1Н-пиразол-4-ил, 1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил или 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил,

R⁵ означает Н, СН₃, F или ОСН₃,

Het² означает пиразолил или имидазолил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С, где от 1 до 3 атомов Н могут быть заменены на F и/или ОН;

и включают их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.

Предпочтительно, изобретение относится к соединениям формулы Id

в которой

R¹, R² каждый, независимо друг от друга, означает Н, F или Cl,

R³ означает Н, F, Сl, СН₃ или ОСН₃,

R⁴ означает Н, F, A, OA или Y,

R⁵ означает Н, F, А или OA,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 8 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН- и/или СН₂-группы могут быть заменены на атомы N или О и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F или Сl,

Y означает пиразолил, который может быть замещен посредством А или (CH₂)_nHet¹,

Het¹ означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

n означает 0, 1, 2, 3 или 4,

и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях.

Соответственно, изобретение относится, в частности, к соединениям формулы Id, в которой по меньшей мере один из указанных радикалов имеет одно из предпочтительных значений, указанных выше. Некоторые предпочтительные группы соединений могут быть изображены с помощью следующих подформул Ida - Idc, которые соответствуют формуле Id и в которых радикалы, не определенные более подробно, имеют значения, указанные для формулы Id, но в которых

в Ida А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С, где одна или две не расположенные рядом СН₂-группы могут быть заменены на атомы О и где от 1 до 7 атомов Н могут быть заменены на F;

в Idb R¹, R² каждый, независимо друг от друга, означает Н, F или Сl,

R³ означает Н, F, Сl, СН₃ или ОСН₃,

R⁴ означает Н, F, A, OA или Y,

R⁵ означает Н, F, А или OA,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С,

Y означает пиразолил, который может быть замещен посредством А, метоксиэтила, или (СН₂)_nНеt¹,

Het¹ означает пирролидинил, пиперидинил, морфолинил или пиперазинил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

n означает 0, 1, 2, 3 или 4;

в Idc R¹ означает Н,

R² означает H или F,

R³ означает СН₃ или F,

R⁴ означает Н, ОСН₃, 1-этил-1Н-пиразол-4-ил, 1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил или 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил,

R⁵ означает Н, СН₃, F или ОСН₃;

и включают их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.

Соединения формулы I, а также исходные вещества для их получения, кроме того, получают при помощи методов, известных per se, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Методы органической химии], Georg-Thieme-Verlag, Штутгарт), точнее, в условиях реакций, которые известны и являются пригодными для указанных реакций. Также при этом можно применять разнообразные модификации, которые известны per se, но о которых здесь подробно не упоминается.

Исходные соединения формул II и III как правило, известны. Тем не менее, если они являются новыми, то их можно получить при помощи методов, известных per se.

Соединения формулы I предпочтительно можно получить по реакции соединения формулы II с соединением формулы III.

В соединениях формулы III, L предпочтительно означает Cl, Br, I или свободную или реакционноспособно модифицированную ОН группу, такую как, например, группу активированного сложного эфира, имидазолида или алкилсульфонилоксигруппу, содержащую от 1 до 6 атомов С (предпочтительно метилсульфонилокси или трифторметилсульфонилоксигруппу) или арилсульфонилоксигруппу, содержащую от 6 до 10 атомов С (предпочтительно фенил- или n-толилсульфонилоксигруппу).

Реакцию обычно проводят в присутствии связывающего кислоту вещества, предпочтительно органического основания, такого как DIPEA, триэтиламин, диметиланилин, пиридин или хинолин.

Также может быть полезным добавление гидроксида, карбоната или бикарбоната щелочного или щелочноземельного металла, или другой соли слабой кислоты и щелочного или щелочноземельного металла, предпочтительно, калия, натрия, кальция или цезия.

В зависимости от используемых условий, время реакции находится в интервале от нескольких минут до 14 дней, температура реакции находится в интервале от приблизительно -30° до 140°С, обычно от -10° до 90°С, в частности, от приблизительно 0° до приблизительно 70°С.

Примерами пригодных инертных растворителей являются углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2-дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; гликолевые эфиры, такие как монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид (ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат, или смеси вышеуказанных растворителей.

Особое предпочтение отдают ацетонитрилу, 1,2-дихлорэтану, дихлорметану и/или ДМФА.

Фармацевтические соли и другие формы

Указанные соединения в соответствии с изобретением могут применяться в своей заключительной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также охватывает применение таких соединений в форме их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены с помощью разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии со способами, хорошо известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые солевые формы соединений формулы I получают, главным образом, при использовании традиционных способов. В случае, если соединение формулы I содержит карбоксильную группу, то его приемлемая соль может быть образована с помощью реакции соединения с приемлемым основанием для получения соответствующей соли присоединения основания. Примерами таких оснований являются гидроксиды щелочных металлов, включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития; гидроксиды щелочноземельных металлов, такие, как гидроксид бария и гидроксид кальция; алкоксиды щелочных металлов, например, этанолят калия и пропанолят натрия; а также различные органические основания, такие, как пиперидин, диэтаноламин и N-метилглутамин. Сюда также включены соли алюминия соединений формулы I. Для некоторых соединений формулы I соли присоединения кислоты могут быть образованы путем обработки указанных соединений фармацевтически приемлемыми органическими и неорганическими кислотами, например, гидрогалогенидами, такими как гидрохлорид, гидробромид или гидройодид, другими минеральными кислотами, и их соответствующими солями, такими как, сульфат, нитрат или фосфат, и т.п., и алкил- и моноарилсульфонатами, такими как этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат, и другими органическими кислотами и их соответствующими солями, такими как ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, сукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбат и т.п. Таким образом, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений формулы I включают следующие соли, но не ограничиваются только ими: ацетат, адипат, альгинат, аргинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат (безилат), бисульфат, бисульфит, бромид, бутират, камфорат, камфорсульфонат, каприлат, хлорид, хлорбензоат, цитрат, циклопентанпропионат, диглюконат, дигидрофосфат, динитробензоат, додецилсульфат, этансульфонат, фумарат, формиат, галактерат (из слизевой кислоты), галактуронат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гемисукцинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, йодид, изетионат, изобутират, лактат, лактобионат, малат, малеат, малонат, манделат, метафосфат, метансульфонат, метилбензоат, моногидрофосфат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, олеат, пальмоат, пектинат, персульфат, фенилацетат, 3-фенилпропионат, фосфат, фосфонат, фталат.

Кроме того, основные соли соединений в соответствии с изобретением включают, но не ограничиваются только ими, соли алюминия, аммония, кальция, меди, железа(III), железа(II), лития, магния, марганца(III), марганца(II), калия, натрия и цинка. Предпочтительными среди перечисленных выше солей являются аммонийные; соли щелочных металлов - натрия и калия; и соли щелочноземельных металлов - кальция и магния. Соли соединений формулы I, которые имеют происхождение от фармацевтически приемлемых органических нетоксических оснований, включают, но не ограничиваются только ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, также включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, например, аргинин, бетаин, кофеин, хлорпрокаин, холин, N,N'-дибензилэтилендиамин (бензатин), дициклогексиламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-диэтиламиноэтанол, 2-диметиламиноэтанол, этаноламин, этилендиамин, N-этилморфолин, N-этилпиперидин, глюкамин, глюкозамин, гистидин, гидрабамин, изопропиламин, лидокаин, лизин, меглумин, N-метил-D-глюкамин, морфолин, пиперазин, пиперидин, полиаминные смолы, прокаин, пурины, теобромин, триэтаноламин, триэтиламин, триметиламин, трипропиламин и трис-(гидроксиметил)метиламин (трометамин).

Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые включают основные азотсодержащие группы, могут быть кватернизированы с использованием таких агентов, как (С₁-С₄)-алкилгалогениды, например, метил-, этил-, изопропил- и трет-бутилхлорид, бромид и йодид; ди-(С₁-С₄)-алкилсульфаты, например, диметил-, диэтил- и диамилсульфат; (С₁₀-C₁₈)-алкилгалогениды, например, децил-, додецил-, лаурил-, миристил- и стеарилхлорид, бромид и йодид; и арил-(С₁-С₄)-алкилгалогениды, например, бензилхлорид и фенетилбромид. Указанные соли позволяют получать как растворимые в воде, так и растворимые в масле соединения в соответствии с изобретением.

Предпочтительные фармацевтические соли, указанные выше, включают, но не ограничиваются только ими, ацетат, трифторацетат, безилат, цитрат, фумарат, глюконат, гемисукцинат, гиппурат, гидрохлорид, гидробромид, изетионат, манделат, меглумин, нитрат, олеат, фосфонат, пивалат, фосфат натрия, стеарат, сульфат, сульфосалицилат, тартрат, тиомалат, тозилат и трометамин.

Особенно предпочтительными являются гидрохлорид, дигидрохлорид, гидробромид, малеат, мезилат, фосфат, сульфат и сукцинат.

Кислотно-аддитивные соли основных соединений формулы I получают путем приведения в контакт формы свободного основания с достаточным количеством желаемой кислоты для получения соли традиционным способом. Свободное основание можно регенерировать путем приведения в контакт солевой формы с основанием и выделения свободного основания традиционным способом. Формы свободного основания в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм своими определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных оснований для целей настоящего изобретения.

Как было указано, фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений формулы I образуют с металлами или аминами, такими как щелочные металлы и щелочноземельные металлы или органические амины. Предпочтительные металлы представляют собой натрий, калий, магний и кальций. Предпочтительные органические амины представляют собой N,N'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, холин, диэтаноламин, этилендиамин, N-метил-D-глюкамин и прокаин.

Соли присоединения основания кислых соединений в соответствии с изобретением получают путем приведения в контакт формы свободной кислоты с достаточным количеством желаемого основания для получения соли традиционным способом. Форма свободной кислоты может быть регенерирована путем приведения в контакт солевой формы с кислотой и выделения формы свободной кислоты известным способом. Формы свободной кислоты в некоторой степени отличаются от своих соответствующих солевых форм определенными физическими свойствами, такими как растворимость в полярных растворителях, однако во всем остальном соли являются эквивалентными своим соответствующим формам свободных кислот для целей настоящего изобретения.

Если соединение в соответствии с изобретением включает более, чем одну группу, которая способна к образованию фармацевтически приемлемых солей этого типа, то изобретение также охватывает составные соли. Примеры типичных составных солевых форм включают, но не ограничиваются только ими, битартрат, диацетат, дифумарат, димеглумин, дифосфат, динатрий и тригидрохлорид.

В свете описанного выше можно увидеть, что выражение "фармацевтически приемлемая соль" в контексте данной заявки предназначено для обозначения активного компонента, который включает соединение формулы I в форме одной из его солей, особенно в том случае, если указанная солевая форма обеспечивает указанному активному компоненту улучшенные фармакокинетические свойства по сравнению со свободной формой указанного активного компонента или любой другой солевой формой указанного активного компонента, которые использовались ранее. Фармацевтически приемлемая солевая форма активного компонента может также изначально обеспечивать желаемое фармакокинетическое свойство указанному активному компоненту, которым он ранее не обладал, а также может даже положительно влиять на фармакодинамику указанного активного компонента в отношении его терапевтической активности в организме.

Изотопы

Далее также предполагается, что соединение формулы I включает его изотопно-меченные формы. Изотопно-меченная форма соединения формулы I является идентичной указанному соединению, за исключением того факта, что один или более атомов указанного соединения замещены атомом или атомами, которые имеют атомную массу или массовое число, отличное от атомной массы или массового числа упомянутого атома, которое обычно существует в природе. Примеры изотопов, которые являются легкодоступными коммерчески и которые могут быть введены в соединение формулы I хорошо известными способами, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора и хлора, например, ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁸О, ¹⁷О, ³¹P, ³²P, ³⁵S, ¹⁸F и ³⁶СI, соответственно. Соединение формулы I, его пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль, которые содержат один или более указанных выше изотопов и/или другие изотопы других атомов также составляют объем настоящего изобретения. Изотопно-меченное соединение формулы I может использоваться в ряде выгодных способов. Например, меченное изотопами соединение формулы I, например, в которое введен радиоактивный изотоп, такой, как ³Н или ¹⁴С, будет полезным в исследованиях распределения лекарственного средства и/или субстрата в ткани. Такие радиоактивные изотопы, например, тритий (³Н) и углерод-14 (¹⁴С), являются особенно предпочтительными вследствие простоты получения и высокой способности к выявлению. Введение более тяжелых изотопов, например, дейтерия (²Н), в соединение формулы I, будет обеспечивать терапевтические преимущества, основывающиеся на большей метаболической стабильности указанного соединения, меченного изотопами. Большая метаболическая стабильность проявляется непосредственно в повышении времени полураспада in-vivo или снижении требуемой дозы, что при большинстве условий будет составлять предпочтительный вариант указанного изобретения. Меченное изотопом соединение формулы I обычно получают путем осуществления методик, раскрытых в схемах синтеза и в описании, относящемся к ним, в разделах, касающихся примеров и способов получения, описанных в данной заявке, путем замены немеченого изотопами реагента его соответствующим легко доступным реагентом, меченным изотопом.

Дейтерий (²Н) также может быть введен в соединение формулы I с целью изменения окислительного метаболизма соединения путем первичного кинетического изотопного эффекта. Первичный кинетический изотопный эффект представляет собой изменение скорости химической реакции, которое происходит по причине замещения изотопного ядра, что, в свою очередь, вызывается изменением энергий основного состояния, что необходимо для образования ковалентной связи после указанного изотопного замещения. Замещение тяжелым изотопом обычно приводит к снижению энергии основного состояния для химической связи, вызывая, таким образом, уменьшение скорости скорость-лимитирующей стадии разрушения связи. Когда происходит разрушение связи в или поблизости участка седлообразной конфигурации вдоль координаты реакции образования нескольких продуктов, коэффициент распределения продуктов может существенно изменяться. Например, в случае, если дейтерий связывается с атомом углерода в положении, в котором не происходит обмен, различия скорости k_M/k_D=2-7 являются типичными. Такое отличие в скорости, которое успешно применяется к соединению формулы I, чувствительному к окислению, может в значительной степени влиять на профиль указанного соединения in-vivo и приводить к улучшению фармакокинетических свойств.

В процессе обнаружения и совершенствования терапевтических агентов специалист в данной области ищет пути оптимизации фармакокинетических параметров при сохранении желательных in-vitro свойств. Является рациональным предположить, что многие соединения со слабыми фармакокинетическими профилями страдают неустойчивостью к окислительному метаболизму. Исследования in-vitro микросом печени, которые сейчас являются доступными, обеспечивают ценную информацию о процессе окислительного метаболизма такого типа, что, в свою очередь, позволяет получить рациональную модель меченных дейтерием соединений формулы I с улучшенной стабильностью вплоть до резистентности к такому окислительному метаболизму. Таким образом, получают значительное улучшение фармакокинетических профилей соединений формулы I, что может быть количественно выражено в величинах увеличения периода полураспада in-vivo (t/2), в концентрации при максимальном терапевтическом эффекте (С_mах), площадью под кривой ответа на определенную дозу (AUC) и F; в величинах уменьшения клиренса, дозы и материальных затрат.

Приведенное далее предназначено для иллюстрации сказанного выше: соединение формулы I, которое имеет многочисленные потенциальные сайты для окислительного метаболизма, например, атомы водорода бензила и атомы водорода, соединенные с атомом азота, получают как серии аналогов, в которых различные комбинации атомов водорода заменяются атомами дейтерия так, что некоторые, большинство или все указанные атомы водорода заменяются на атомы дейтерия. Определение периода полураспада обеспечивает подходящее и точное определение степени улучшения резистентности к окислительному метаболизму. Таким образом определяют, что период полураспада исходного соединения может быть продлен вплоть до 100% как результат такого замещения водорода дейтерием.

Замещение водорода дейтерием в соединении формулы I может также использоваться для достижения благоприятного изменения профиля метаболитов исходного соединения как пути уменьшения или устранения нежелательных токсических метаболитов. Например, когда токсический метаболит возникает при окислительном расщеплении углерод-водородной связи С-Н, то с достаточной вероятностью предполагается, что меченый дейтерием аналог значительно уменьшит или устранит выработку нежелательного метаболита, даже в случае, когда отдельное окисление не является лимитирующей скорость стадией. Дополнительная информация, относящаяся к уровню техники в отношении замещения водорода дейтерием, может быть найдена, например, в работе Hanzlik и др., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990; Reider и др., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987; Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985; Gillette и др., Biochemistry 33 (10) 2927-2937, 1994; и Jarman и др. Carcinogenesis 16 (4), 683-688, 1993.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые производные, сольваты и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества.

Фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Такая единица может включать, например, от 0.5 мг до 1 г, предпочтительно от 1 мг до 700 мг, особенно предпочтительно от 5 мг до 100 мг, соединения в соответствии с изобретением, в зависимости от состояния, подвергаемого лечению, способа введения, а также возраста, веса тела и состояния пациента, или фармацевтические составы могут вводиться в виде дозированных единиц, которые содержат заранее установленное количество активного компонента на дозированную единицу. Предпочтительными составами дозированных единиц являются те, которые содержат суточную дозу или часть суточной дозы, как указано выше, или соответствующую ей порцию активного компонента. Кроме того, фармацевтические составы этого типа могут быть получены способом, который хорошо известен в области фармацевтики.

Фармацевтические составы могут адаптироваться для введения при помощи любого подходящего способа, например, путем перорального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) введения. Такие препараты могут быть приготовлены с помощью любого способа, известного в области фармацевтики, например, путем объединения активного компонента с наполнителем(-ями) или вспомогательным(-ыми) веществом(-ами).

Фармацевтические составы, адаптированные для перорального введения, могут вводиться в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевых пен или пенистых пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле.

Так, например, в случае перорального введения в виде таблетки или капсулы, активный компонент может быть объединен с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и т.п. Порошки получают путем измельчения соединения до подходящего небольшого размера и смешивания его с фармацевтическим наполнителем, измельченным аналогичным способом, таким как, например, пищевой углеводород, такой как, например, крахмал или маннит. Также можно добавлять ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель.

Капсулы получают путем приготовления порошковой смеси, как описано выше, и заполнения ею желатиновых капсул определенной формы. Перед заполнением капсул к порошковой смеси можно добавлять скользящие и смазывающие вещества, такие как, например, высокодисперсная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме. Для улучшения доступности лекарственного средства, заключенного в капсулу, также можно добавлять дезинтегрирующее вещество или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия.

Дополнительно, если это является желательным или необходимым, в смесь также можно добавлять подходящие связующие, смазывающие вещества, дезинтеграторы, а также красители. Подходящие связующие включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или бета-лактоза, подсластители, полученные из кукурузы, природные и синтетические смолы, такие как, например, аравийская камедь, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу, полиэтиленгликоль, воски и т.п. Смазывающие вещества, которые могут применяться в таких дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и т.п. Дезинтеграторы включают, но не ограничиваются только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и т.п. Лекарственные средства в виде таблеток получают, например, путем приготовления порошковой смеси, гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и дезинтегратора и прессования полученной смеси в таблетки. Порошковую смесь готовят путем смешивания соединения, измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлителем растворения, таким как, например, парафин, усилителем поглощения, таким как, например, четвертичная соль, и/или абсорбентом, таким как, например, бентонит, каолин или дикальцийфосфат. Порошковую смесь можно гранулировать путем смачивания связующим, таким как, например, сироп, крахмальная паста, слизь акации или растворы целлюлозы или полимерных веществ, и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции, порошковую смесь можно пропускать через таблетировочную машину, получая куски неправильной формы, которые распадаются, образуя гранулы. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеарата, талька или минерального масла для предотвращения слипания в таблетировочной литейной форме. После этого смазанную смесь спрессовывают, получая таблетки. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять с сыпучим инертным наполнителем и затем подвергать прямому прессованию, получая таблетки без осуществления стадий грануляции или сухого прессования. Таблетки также можно покрывать прозрачным или светонепроницаемым защитным слоем, состоящим из шеллакового запечатывающего слоя, слоя сахара или полимерного вещества и глянцевого слоя воска. К этим покрытиям также можно добавлять красители для возможности различения между разными дозируемыми единицами.

Жидкости для перорального введения, такие как, например, раствор, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в виде дозируемых единиц таким образом, чтобы они содержали заранее установленное количество соединения. Сиропы могут быть получены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры готовят с применением нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые эфиры сорбита, консерванты, ароматические добавки, такие как, например, масло мяты перечной, или натуральные заменители сахара или сахарин, или другие искусственные заменители сахара и т.п.

Составы для перорального введения в виде дозированных единиц могут быть инкапсулированы в микрокапсулы, если это является желательным. Также состав может быть приготовлен таким образом, чтобы пролонгировать или замедлить высвобождение, например, путем применения покрытий или заделывания требуемого вещества в полимеры, воск и т.п.

Соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры также могут вводиться в виде липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы с помощью различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Соединения формулы I и их соли, таутомеры и стереоизомеры также могут доставляться с использованием моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, к которым присоединены молекулы соединения. Соединения также могут быть соединены с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такими полимерами могут являться поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтиленоксидполилизин, замещенный пальмитоиловыми радикалами. Кроме того, соединения можно связывать с биоразлагаемыми полимерами, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например, полимолочной кислотой, поли-эпсилон-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиортоэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестно-сшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Фармацевтические составы, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для удлиненного, тесного контакта с эпидермисом реципиента. Таким образом, например, активный компонент может доставляться из пластыря путем ионофореза, как в общем описано в Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986).

Фармацевтические соединения, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Для лечения глаз или других наружных тканей, например рта и кожи, предпочтительно применяются составы в виде местной мази или крема. Для приготовления состава в виде мази, активный компонент может применяться с парафиновым или смешивающимся с водой мазевым основанием. Альтернативно, для получения крема активный компонент может быть приготовлен с основой для крема типа масло-в-воде или основой вода-в-масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в глаза, включают глазные капли, в которых активный компонент растворен или суспендирован в подходящем носителе, предпочтительно в водном растворителе.

Фармацевтические составы, адаптированные для местного введения в полость рта, включают лепешки, пастилки и жидкости для полоскания рта.

Фармацевтические составы, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в виде суппозиториев или клизм.

Фармацевтические составы, адаптированные для назального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, включают крупный порошок, имеющий размер частичек, например, в интервале 20-500 микрон, который вводится путем вдыхания, то есть путем быстрого вдоха через нос из контейнера, содержащего порошок, который придерживают возле носа. Подходящие составы для введения в виде назального спрея или носовых капель с жидкостью в качестве носителя включают растворы активного вещества в воде или в масле.

Фармацевтические составы, адаптированные для введения путем ингаляции, включают тонкоизмельченные частички в виде пыли или тумана, которые могут быть получены с помощью различных диспергирующих устройств под давлением с аэрозолями, распылителей или инсуффляторов.

Фармацевтические составы, адаптированные для вагинального введения, могут вводиться в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пен или аэрозолей.

Фармацевтические составы, адаптированные для парентерального введения, включают водные или неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические вещества и растворенные вещества, с помощью которых состав поддерживается изотоническим по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные или неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Составы могут вводиться с помощью емкостей для однократного или многократного введения, например, запечатанных ампул и флаконов, и храниться в лиофилизированном состоянии, при этом непосредственно перед введением необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например, воду для инъекций. Растворы и суспензии для инъекций, приготовленные согласно рецептуре, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Также является очевидным, что дополнительно к предпочтительным вышеописанным составляющим, составы также могут содержать другие вещества, которые используются в данной области для конкретных типов составов; например, составы, пригодные для перорального введения, могут содержать ароматизаторы.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы I зависит от многих факторов, включая, например, возраст и вес животного, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу лекарственного средства и способ введения, и в конечном счете оно может быть определено лечащим врачом или ветеринаром. Тем не менее, эффективное количество соединения в соответствии с изобретением, как правило, находится в интервале от 0.1 до 100 мг/кг веса тела реципиента (млекопитающего) в сутки и предпочтительно обычно находится в интервале от 1 до 10 мг/кг веса тела в сутки. Следовательно, действующее суточное количество для взрослого млекопитающего весом 70 кг обычно может составлять от 70 до 700 мг, причем это количество может вводиться в виде отдельной дозы один раз в день или обычно в виде циклов частичных доз (таких как, например, два, три, четыре, пять или шесть раз) в день, таким образом, что общая суточная доза является аналогичной. Эффективное количество его соли, сольвата или физиологически функционального производного может быть определено в виде доли эффективного количества соединения в соответствии с изобретением per se. Также можно предположить, что аналогичные дозы пригодны для лечения других состояний, описанных выше.

Комбинированное лечение этого типа можно осуществлять с помощью одновременного, последовательного или раздельного дозирования индивидуальных компонентов лечения. В комбинированных продуктах такого типа применяются соединения в соответствии с изобретением.

Кроме того, изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, таутомеры и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и по меньшей мере один дополнительный активный компонент лекарственного средства.

Изобретение также относится к комплекту (набору), состоящему из отдельных упаковок

(а) эффективного количества соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,

и

(б) эффективного количества дополнительного активного компонента лекарственного средства.

Комплект включает подходящие емкости, такие как коробки, индивидуальные бутылки, пакеты или ампулы. Комплект может включать, например, отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения формулы I и/или его фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях,

и эффективное количество дополнительного активного компонента лекарственного средства в растворенной или лиофиллизированной форме.

"Лечение", как используется в настоящей заявке, обозначает облегчение, полностью или частично, симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или замедление, или остановку дальнейшего прогрессирования или ухудшения этих симптомов, или предотвращение или профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего риск развития такого заболевания или нарушения.

Термин "эффективное количество" применительно к соединению формулы (I) может обозначать количество, способное облегчать, полностью или частично, симптомы, связанные с нарушением или заболеванием, или замедлять или останавливать дальнейшее прогрессирование или ухудшение этих симптомов, или предотвращать или обеспечивать профилактику заболевания или нарушения у субъекта, имеющего заболевание или с риском развития заболевания, описанного в настоящей заявке, такого как воспалительные состояния, иммунологические состояния, злокачественные новообразования или метаболические состояния.

В одном варианте осуществления эффективное количество соединения формулы (I) представляет собой количество, которое ингибирует танкиразу в клетке, например, in-vitro или in-vivo. В некоторых вариантах осуществления, эффективное количество соединения формулы (I) ингибирует танкиразу в клетке на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 99%, по сравнению с активностью танкиразы в необработанной клетке. Эффективное количество соединения формулы (I), например, в фармацевтической композиции, может находиться на уровне, который превышает желательный эффект; например, от приблизительно 0,005 мг/кг веса тела субъекта до приблизительно 10 мг/кг веса тела субъекта в единичной лекарственной форме как для перорального, так и для парентерального введения.

ПРИМЕНЕНИЕ

Соединения согласно настоящему изобретению пригодны в качестве фармацевтически активных компонентов для млекопитающих, в особенности для людей, для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение охватывает применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Примеры воспалительных заболеваний включают ревматоидный артрит, псориаз, контактный дерматит, аллергическую реакцию замедленного типа и другие.

Также охватывается применение соединений формулы I и/или их фармацевтически приемлемых солей, таутомеров и стереоизомеров для приготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения заболевания, индуцированного танкиразой, или состояния, индуцированного танкиразой у млекопитающего, при котором в этом способе терапевтически эффективное количество соединения в соответствии с изобретением вводят больному млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении. Терапевтическое количество изменяется в зависимости от конкретного заболевания и легко может быть определено специалистом в данной области.

Выражение "заболевания или состояния, индуцированные танкиразой" относится к патологическим состояниям, которые зависят от активности одной или нескольких танкираз. Заболевания, связанные с активностью танкиразы, включают злокачественное новообразование, рассеянный склероз, сердечнососудистые заболевания, поражения центральной нервной системы и различные формы воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях,

для применения для лечения заболеваний, при которых ингибирование, регуляция и/или модуляция ингибирования танкиразы играет роль.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для ингибирования танкиразы.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, для применения для лечения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления.

Настоящее изобретение, в особенности, относится к способам лечения или предотвращения злокачественного новообразования, рассеянного склероза, сердечнососудистых заболеваний, поражений центральной нервной системы и различных форм воспаления, которые включают введение субъекту, который в этом нуждается, эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, таутомера, стереоизомера или сольвата.

Репрезентативные злокачественные новообразования, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рак головы, шеи, глаз, рта, горла, пищевода, бронхов, гортани, глотки, груди, костей, легких, ободочной кишки, прямой кишки, желудка, предстательной железы, мочевого пузыря, матки, шейки матки, молочной железы, яичников, яичек или других репродуктивных органов, кожи, щитовидной железы, крови, лимфатических узлов, почек, печени, поджелудочной железы, головного мозга, центральной нервной системы, солидных опухолей и злокачественного перерождения крови.

Репрезентативные сердечно-сосудистые заболевания, для лечения или предотвращения которых являются полезными соединения формулы I, включают, но не ограничиваются таковыми, рестеноз, атеросклероз и его последствия, такие как инсульт, инфаркт миокарда, ишемические повреждения сердца, легких, кишечника, почек, печени, поджелудочной железы, селезенки или мозга.

Настоящее изобретение относится к способу лечения пролиферативного, аутоиммунного, противовоспалительного или инфекционного заболевания или нарушения, который включает введение субъекту, который в этом нуждается, терапевтически эффективного количества соединения формулы I.

Предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование.

Особенно предпочтительно, настоящее изобретение относится к способу, где заболевание представляет собой злокачественное новообразование, где введение является одновременным, последовательным или чередующимся с введением по меньшей мере одного другого активного лекарственного средства.

Раскрытые соединения формулы I могут вводиться в комбинации с другими известными лекарственными средствами, включая противораковые средства. Как используется в настоящем изобретении, термин "противораковое средство" относится к любому средству, которое вводят пациенту со злокачественным новообразованием для лечения такого злокачественного новообразования.

Противораковое лечение, определенное выше, может применяться в виде монотерапии, или, может включать, дополнительно к применению соединений формулы I, раскрытых в данной заявке, обычные хирургические методы или радиотерапию или лекарственную терапию. Такая лекарственная терапия, например, химиотерапия или таргетная терапия, может включать применение одного или нескольких, однако предпочтительно одного, противоопухолевого(-ых) средства(-в), выбранного(-ых) из следующих:

Алкилирующие агенты

такие как алтретамин, бендамустин, бусульфан, кармустин, хлорамбуцил, хлорметин, циклофосфамид, дакарбазин, ифосфамид, импросульфан тозилат, ломустин, мельфалан, митобронитол, митолактол, нимустин, ранимустин, темозоломид, тиотепа, треосульфан, мехлороэтамин, карбоквон;

апазиквон, фотемустин, глуфосфамид, палифосфамид, пипоброман, трофосфамид, урамустин ТН-302⁴, VAL-083⁴;

Соединения платины

такие как карбоплатин, цисплатин, эптаплатин, мириплатин гидрат, оксалиплатин, лобаплатин, недаплатин, пикоплатин, сатраплатин;

лобаплатин, недаплатин, пикоплатин, сатраплатин;

Средства, изменяющие ДНК

такие как амрубицин, бисантрен, децитабин, митоксантрон, прокарбазин, трабектедин, клофарабин, амсакрин, бросталлицин, пиксантрон, ларомустин^1,3;

Ингибиторы топоизомеразы

такие как этопозид, иринотекан, разоксан, собузоксан, тенипозид, топотекан,

амонафид, белотекан, эллиптиния ацетат, ворелоксин;

Модификаторы микротрубочек

такие как кабазитаксел, доцетаксел, эрибулин, иксабепилон, паклитаксел, винбластин, винкристин, винорелбин, виндезин, винфлунин,

фосбретабулин, тезетаксел;

Антиметаболиты

такие как аспарагиназа³, азацитидин, левофолинат кальция, капецитабин,

кладрибин, цитарабин, эноцитабин, флоксуридин, флударабин, фторурацил, гемцитабин, меркаптопурин, метотрексат, неларабин, пеметрексед,

пралатрексат, азатиоприн, тиогуанин, кармофур;

доксифлуридин, элацитарабин, ралтитрексед, сапацитабин, тегафур^2,3, триметрексат;

Противораковые антибиотики

такие как блеомицин, дактиномицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, левамизол, милтефозин, митомицин С, ромидепсин, стрептозоцин, валрубицин, зиностатин, зорубицин, даунуробицин, пликамицин;

акларубицин, пепломицин, пирарубицин;

Гормоны/антагонисты

такие как абареликс, абиратерон, бикалутамид, бусерелин, калустерон, хлортрианизен, дегареликс, дексаметазон, эстрадиол, флуокортолон,

флуоксиместерон, флутамид, фулвестрант, гозерелин, гистрелин, лейпрорелин, мегестрол, митотан, нафарелин, нандролон, нилутамид, октреотид, преднизолон, ралоксифен, тамоксифен, тиротропин альфа, торемифен, трилостан, трипторелин, диэтилстильбэстрол;

аколбифен, даназол, деслорелин, эпитиостанол, ортеронел, энзалутамид^1,3;

Ингибиторы ароматазы

такие как аминоглутетимид, анастрозол, эксеместан, фадрозол, летрозол, тестолактон;

форместан;

Низкомолекулярные ингибиторы киназ

такие как кризотиниб, дазатиниб, эрлотиниб, иматиниб, лапатиниб, нилотиниб, пазопаниб, регорафениб, руксолитиниб, сорафениб, санитиниб, вандетаниб, вемурафениб, босутиниб, гефитиниб, акситиниб;

афатиниб, алисертиб, дабрафениб, дакомитиниб, динациклиб, довитиниб, энзастаурин, нинтеданиб, ленватиниб, линифаниб, линситиниб, маситиниб, мидостаурин, мотесаниб, нератиниб, орантиниб, перифосин, понатиниб, радотиниб, ригосертиб, типифарниб, тивантиниб, тивозаниб, траметиниб, пимазертиб, бриваниб аланинат, седираниб, апатиниб⁴, кабозантиниб S-малат^1,3, ибрутиниб^1,3, икотиниб⁴, бупарлисиб², ципатиниб⁴, кобиметиниб^1,3, иделалисиб^1,3, федратиниб¹, XL-647⁴;

Фотосенсибилизаторы

такие как метоксален³;

порфимер натрия, талапорфин, темопорфин;

Антитела

такие как алемтузумаб, бесилесомаб, брентуксимаб ведотин, цетуксимаб, деносумаб, ипилимумаб, офатумумаб, панитумумаб, ритуксимаб, тозитумомаб,

трастузумаб, бевацизумаб, пертузумаб^2,3;

катумаксомаб, элотузумаб, эпратузумаб, фарлетузумаб, могамулизумаб, нецитумумаб, нимотузумаб, обинутузумаб, окаратузумаб, ореговомаб, рамуцирумаб, рилотумумаб, силтуксимаб, тоцилизумаб, залутумумаб, занолимумаб, матузумаб, далотузумаб^1,2,3, онартузумаб^1,3, ракотумомаб¹, табалумаб^1,3, EMD-525797⁴, ниволумаб^1,3;

Цитокины

такие как альдеслейкин, интерферон альфа², интерферон альфа2а³, интерферон альфа2b^2,3;

целмолейкин, тазонермин, тецелейкин, опрелвекин^1,3, рекомбинантный интерферон бета-1а⁴;

Конъюгаты лекарственных препаратов

такие как денилейкин дифтитокс, ибритумомаб тиуксетан, йобенгуан I123, преднимустин, трастузумаб эмтансин, эстрамустин, гемтузумаб, озогамицин, афлиберцепт;

цинтредекин бесудотокс, эдотреотид, инотузумаб озогамицин, наптумомаб эстафенатокс, опортузумаб монатокс, технеций (99mТс) арцитумомаб^1,3,

винтафолид^1,3;

Вакцины

такие как сипулейцел³, витеспен³, эмепепимут-S³, онковакс⁴, риндопепимут³, тровакс⁴, MGN-1601⁴, MGN-1703⁴;

Прочие препараты

алитретиноин, бексаротен, бортезомиб, эверолимус, ибандроновая кислота, имиквимод, леналидомид, лентинан, метирозин, мифамуртид, памидроновая кислота, пэгаспаргаза, пентостатин, сипулейцел³, сизофиран, тамибаротен, темсиролимус, талидомид, третиноин, висмодегиб, золедроновая кислота, вориностат;

целекоксиб, циленгитид, энтиностат, этанидазол, ганетеспиб, идроноксил, инипариб, иксазомиб, лонидамин, ниморазол, панобиностат, перетиноин, плитидепсин, помалидомид, прокодазол, ридафоролимус, тасквинимод, телотристат, тимальфазин, тирапазамин, тоседостат, трабедерсен, убенимекс, вальсподар, гендицин⁴,

пицибанил⁴, реолизин⁴, гидрохлорид ретаспимицина^1,3, требананиб^2,3, вирулизин⁴, карфилзомиб^1,3, эндостатин⁴, иммукотел⁴, белиностат³, MGN-1703⁴;

¹Предл. МНН (предложенное международное непатентованное название)

²Рекоменд. МНН (рекомендуемое международное непатентованное название)

³Название в США (наименование препарата по Справочнику национальных непатентованных названий США)

⁴нет МНН.

Следующие сокращения относятся соответственно к определениям, приведенным ниже:

водн. (водн), ч (час), г (грам), л (литр), мг (миллиграм), МГц (мегагерц), мин. (минута), мм (милиметр), ммоль (милимоль), мМ (милимолярный), т.пл. (температура плавления), экв. (эквивалент), мл (милилитр), мкл (микролитр), ACN (ацетонитрил), АсОН (уксусная кислота), CDCl₃ (дейтерированный хлороформ), CD₃OD (дейтерированный метанол), CH₃CN (ацетонитрил), с-hех (циклогексан), DCC (дициклогексил карбодиимид), ДХМ (дихлорметан), DIC (диизопропил карбодиимид), DIEA (диизопропилэтил-амин), ДМФА (диметилформамид), ДМСО (диметилсульфоксид), ДМСО-d₆ (дейтерированный диметилсульфоксид), EDC (1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид), ЭРИ (электрораспылительная ионизация), EtOAc (этилацетат), Et₂O (простой диэтиловый эфир), EtOH (этанол), HATU гексафторфосфат (диметиламино-([1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-илокси)-метилен]-диметиламмония), ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), i-PrOH (2-пропанол), К₂СО₃ (карбонат калия), ЖХ (жидкостная хроматография), МеОН (метанол), MgSO₄ (сульфат магния), МС (масс-спектрометрия), МТВЕ (метил-трет-бутиловый эфир), NaHCO₃ (бикарбонат натрия), NaBH₄ (борогидрид натрия), NMM (N-метилморфолин), ЯМР (ядерный магнитный резонанс), РуВОР (гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония), КТ (комнатная температура), Rt (время удержания), SPE (твердофазная экстракция), TBTU (тетрафторборат 2-(1-Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония), TEA (триэтиламин), ТФУ (трифторуксусная кислота), ТГФ (тетрагидрофуран), ТСХ (тонкослойная хроматография), УФ (ультрафиолет).

Описание исследований in-vitro

Сокращения:

GST = глутатион-S-трансфераза

FRET = резонансный перенос энергии флуоресценции

HTRF® = (гомогенная флуоресценция с временным разрешением)

HEPES = буфер 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазин - этансульфоновая кислота

DTT = дитиотреитол

BSA = бычий сывороточный альбумин

CHAPS = детергент;

CHAPS = 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфонат

Стрептавидин-XLent® представляет собой высококачественный конъюгат стрептавидин-ХL665, для которого были оптимизированы условия сочетания для получения конъюгата с улучшенными характеристиками для некоторых исследований, в частности тех, для которых требуется высокая чувствительность.

Измерение клеточного ингибирования танкиразы

Поскольку было описано, что танкиразы модулируют клеточный уровень Axin2 (Huang и др., 2009; Nature), то повышение уровня Axin2 используют в качестве считываемых данных для определения клеточного ингибирования танкираз в исследовании на основе Luminex.

Клетки клеточной линии карциномы ободочной кишки DLD1 высевают в планшеты на 96 лунок при плотности 1.5×10⁴ клеток на лунку. На следующий день, клетки обрабатывают серийными разведениями тестируемого соединения за семь стадий в виде трех повторов с конечной концентрацией ДМСО 0.3%. Через 24 часа, клетки лизируют в лизирующем буфере (20 мМ Tris/HCl рН 8.0, 150 мМ NaCl, 1% NP40, 10% глицерин) и лизаты очищают путем центрифугирования через фильтровальный планшет на 96 лунок (0.65 мкм). Белок Axin2 выделяют из клеточных лизатов путем инкубирования с моноклональным анти-Ахт2 антителом (R&D Systems #МАВ6078), которое связывается с флуоресцентными карбоксишариками. После этого, связанный Axin2 специфически обнаруживают с помощью поликлонального анти-Ахin2 антитела (Cell Signaling #2151) и подходящего РЕ-флуоресцентного вторичного антитела. Количество выделенного Axin2 белка определяют с помощью прибора Luminex²⁰⁰ (Luminex Corporation) в соответствии с инструкциями производителя путем подсчитывания 100 событий на лунку. Ингибирование танкиразы тестируемыми соединениями приводит к более высоким уровням Axin2, которые прямо коррелируют с повышением обнаруживаемой флуоресценции. В качестве контролен клетки обрабатывают только растворителем (нейтральный контроль) и сравнительным ингибитором танкиразы IWR-2 (3Е-06 М), который служит в качестве контроля для максимального повышения Axin2. Для анализа, полученные данные нормализуют по отношению к необработанному контролю с растворителем и подгоняют для определения значений ЕС₅₀, используя программное обеспечение Assay Explorer (Accelrys).

Описание исследования PARP1

Тестирование биохимической активности PARP-1: Исследование аутопарсилирования

Исследование аутопарсилирования осуществляют за две стадии: ферментативная реакция, в которой His-меченная Раrр-1 переносит биотинилированную ADP-рибозу/АОР-рибозу на себя с биотинилированного NAD/NAD в качестве ко-субстрата, и реакция обнаружения, где анализируют FRET с временным разрешением между меченным криптатом анти-His антителом, связанным с His меткой фермента и Xlent® меченным-стрептавидин связанным биотин-парсилированным остатком. Аутопарсилирующую активность определяют непосредственно через повышение HTRF сигнала.

Исследование аутопарсилирования осуществляют в формате исследования на 384 лунок HTRF® (Cisbio, Codolet, France) в микротитровальных низкообъемных планшетах на 384 лунки Greiner nb. 35 нМ His-меченную Раrр-1 (человеческая, рекомбинантная, Enzo Life Sciences GmbH, Lorrach, Germany) и смесь 125 нМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) и 800 нМ NAD в качестве ко-субстрата инкубируют в общем объеме 6 мкл (100 мМ Tris/HCl, 4 мМ Mg-хлорид, 0,01% IGEPAL® СА630, 1 мМ DTT, 0,5% ДМСО, рН 8, 13 нг/мкл активированной ДНК (BPS Bioscience, San Diego, US)) при отсутствии или в присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 150 мин при 23°С. Реакцию останавливают путем добавления 4 мкл раствора стоп/обнаружение (70 нМ SA-Xlent® (Cisbio, Codolet, France), 2.5 нМ анти-His-K® (Eu-меченные анти-His, Cisbio, Codolet, France) в 50 мМ HEPES, 400 мМ KF, 0.1% BSA, 20 мМ EDTA, pH 7.0). После инкубирования в течение 1 ч при комнатной температуре HTRF измеряют с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при длине волны возбуждения 340 нм (лазерный режим) и длинах волн эмиссии 615 нм и 665 нм. Определяют соотношение сигналов эмиссии. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой Olaparib. (LClabs, Woburn, US) в конечной концентрации 1 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Описание ELISA исследования TNKS1 и TNKS2

Тестирование биохимической активности TNK 1 и 2: активности ELISA (исследование аутопарсилирования)

Для исследования аутопарсилирующей активности TNKS 1 и 2 осуществляют ELISA: На первой стадии GST меченную TNKS захватывают на покрытом глутатионом планшете. После этого осуществляют исследование активности с биотинилированным NAD при отсутствии /в присутствии соединений. В процессе ферментативной реакции GST меченная TNKS переносит биотинилированную ADP-рибозу на себя с биотинилированного NAD в качестве ко-субстрата. Для обнаружения добавляют конъюгат стрептавидин-HRP, который связывается с биотинилированной TNKS и таким образом захватывается на планшеты. Определяют количество биотинилированной соотв. аутопарсилированной TNKS с люминесцентным субстратом для HRP. Уровень сигнала люминесценции прямо коррелируется с количеством аутопарсилированной TNKS и, следовательно, с активностью TNKS.

Активность ELISA осуществляют в микротитровальных планшетах на 384 лунки, покрытых глутатионом (планшеты для захвата Express, покрытые глутатионом, Biocat, Heidelberg, Germany). Планшеты предварительно уравновешивают с помощью PBS. Затем планшеты инкубуют с 50 мкл 20 нг/лунку GST-меченной Tnks-1 (1023-1327 а/к, собственного производства), соответственно GST-меченной Tnks-2 (873-1166 а/к, собственного производства) в буфере для исследования (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 2 мМ DTT, рН 7.7) в течение ночи при 4°С. Планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Лунки блокируют путем инкубирования при комнатной температуре в течение 20 минут с 50 мкл блокирующего буфера (PBS, 0.05% Tween-20, 0.5% BSA). После этого планшеты промывают 3 раза с помощью PBS-Tween-20. Ферментативную реакцию осуществляют в 50 мкл реакционного раствора (50 мМ HEPES, 4 мМ Mg-хлорид, 0.05% Pluronic F-68, 1.4 мМ DTT, 0.5% ДМСО, рН 7.7) с 10 мкМ bio-NAD (Biolog, Life science Inst., Bremen, Germany) в качестве ко-субстрата при отсутствии или присутствии тестируемого соединения (10 концентраций разведения) в течение 1 часа при 30°С. Реакцию останавливают путем промывания 3 раза с PBS-Tween-20. Для обнаружения добавляют 50 мкл 20 нг/мкл стрептавидин, HRP конъюгата (MoBiTec, Gottingen, Germany) в PBS/0.05%Tween-20/0.01%BSA и планшеты инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре. После трехразового промывания PBS-Tween-20 добавляют 50 мкл SuperSignal ELISA Femto Maximum чувствительного субстратного раствора (ThermoFisherScientific (Pierce), Bonn, Germany). После инкубирования в течение 1 минуты при комнатной температуре, измеряют люминесцентные сигналы с помощью многорежимного планшет-ридера Envision (Perkin Elmer LAS Germany GmbH) при 700 нм. Полное используемое значение представляет реакцию без ингибитора. Используемое значение фармакологического нуля представляет собой XAV-939 (Tocris) в конечной концентрации 5 мкМ. Определяют ингибирующие значения (IC50), используя либо программу Symyx Assay Explorer®, либо Condosseo® от GeneData.

Выше и ниже, все температуры указаны в градусах Цельсия°С. В последующих примерах "обычная обработка" обозначает: при необходимости добавляют воду, рН устанавливают, при необходимости, на значение от 2 до 10, в зависимости от строения конечного продукта, смесь экстрагируют этилацетатом или дихлорметаном, фазы разделяют, органическую фазу высушивают над сульфатом натрия и упаривают, и остаток очищают при помощи хроматографии на силикагеле и/или кристаллизации. Rf значения на силикагеле; элюент: этилацетат/метанол 9:1.

¹Н ЯМР записывали на спектрометре Bruker DPX-300, DRX-400 или А VII-400, используя остаточный сигнал дейтерированного растворителя в качестве внутреннего стандарта. Химические сдвиги (δ) представлены в виде м.д. относительного остаточного сигнала растворителя (δ=2.49 м.д. для ¹Н ЯМР в ДМСО-d₆). Данные ¹Н ЯМР представляли следующим образом: химический сдвиг (мультиплетность, константы взаимодействия и число водородов). Мультиплетность сокращали следующим образом: s (синглет), d (дублет), t (триплет), q (квартет), m (мультиплет), br (широкий).

Микроволновую химию выполняли в микроволновом реакторе EmrysTM Optimiser от Personal Chemistry.

Микроволновую химию выполняли в микроволновом реакторе СЕМ.

ВЭЖХ/МС условия А

колонка: Chromolith PerformanceROD RP-18e, 100×3 мм²

градиент: А:В=99:1 до 0:100 за 1.8 мин

скорость потока: 2.0 мл/мин

элюент А: вода + 0.05% муравьиной кислоты

элюент В: ацетонитрил + 0.04% муравьиной кислоты

длина волны: 220 нм

масс-спектроскопия: положительный режим

ВЭЖХ/МС условия В

колонка: XBridge С8, 3.5 мкм, 4.6×50 мм

градиент: 0 мин: 5% В, 8 мин: 100% В, 8.1 мин: 100% В, 8.5 мин: 5% В, 10 мин 5% В

скорость потока: 2.0 мл/мин

элюент А: вода + 0.1% ТФУ

элюент В: ацетонитрил + 0.1% ТФУ

ВЭЖХ/МС условия С:

Градиент: А:В=96:4 до 0:100 за 3.4 мин; скорость потока: 2.40 мл/мин

А: вода + муравьиная кислота (0.05%); В: ацетонитрил + муравьиная кислота (0.04%)

Колонка: Chromolith SpeedROD RP-18e, 50×4.6 мм²

Длина волны: 220 нм

Фармакологические данные

Соединения, показанные в таблице 1, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Соединения, показанные в таблице 2, являются особенно предпочтительными соединениями в соответствии с изобретением.

Синтез промежуточных соединений

Синтез 4-(6,8-дифтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты

Смесь 2-амино-3,5-дифторбензамида (1.72 г, 10.0 ммоль) и глутарового ангидрида (1.48 г, 13.0 ммоль) в толуоле (37 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 2 дней. Растворитель удаляли в вакууме и добавляли 2 н. NaOH (25 мл). Полученную в результате суспензию нагревали до 80°С и перемешивали при этой температуре в течение 1 дня. Смесь охлаждали до комнатной температуры и подкисляли уксусной кислотой до достижения рН 5. Твердое вещество собирали путем фильтрования, промывали водой и сушили в вакууме с получением 4-(6,8-дифтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты в виде светло-коричневых кристаллов;

ВЭЖХ/МС 1.48 мин (А), [М+Н] 269.

4-(4-Оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляную кислоту получали подобным образом; бежевое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 1.37 мин (А), [М+Н] 233.

Синтез 4-(6-фтор-8-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты

Смесь 2-амино-5-фтор-3-метилбензамида (1.56 г, 9.3 ммоль) и глутарового ангидрида (1.38 г, 12.1 ммоль) в толуоле (32 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 3 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 9 дней. Твердое вещество собирали путем фильтрования, промывали толуолом и сушили в вакууме с получением 4-(6-фтор-8-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты в виде белых кристаллов;

ВЭЖХ/МС 1.63 мин (А), [М+Н] 265;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.25 (bs, 1Н), 7.80-7.38 (m, 2Н), 2.65 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.53 (s, 3Н), 2.34 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 1.98 (р, J=7.4 Гц, 2Н).

4-(6-Фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляную кислоту получали подобным образом; белое твердое вещество;

ЖХ/МС (В): 251.3 (М+Н), Rt 1.91 мин.

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 11.82 (brs, 1H), 7.73 (dd, J=1.8, 8.6 Гц, 1Н), 7.66-7.64 (ш, 2Н), 2.62 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.27 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 1.95-1.91 (m, 2Н).

4-(8-Фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляную кислоту получали подобным образом; бесцветное твердое вещество;

ЖХ/МС (В): 251.3 (М+Н), Rt 2.05 мин.

¹H ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.36 (bs, 1Н), 11.90 (bs, 1H), 7.88-7.87 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.66-7.61 (dd, J=8.2, 6.9 Гц, 1H), 7.45-7.40 (m, 1H), 2.67-2.63 (m, 2H), 2.33-2.30 (m, 2H), 1.99-1.96 (m, 2H).

Синтез гидрохлорида (4-метокси-3-метилфенил)-пиперидин-4-илметанона

К раствору сложного моно-трет-бутилового эфира пиперидин-1,4-дикарбоновой кислоты (25.00 г, 107.72 ммоль) в ДМФА (250 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (57.01 мл, 323.16 ммоль), гидрат 1-гидроксибензотриазола (1.67 г, 10.77 ммоль) и гидрохлорид (3-диметиламинопропил)-этилкарбодиимида (25.03 г, 129.27 ммоль) с последующим добавлением небольшими порциями гидрохлорида O,N-диметилгидроксиламина (11.68 г, 118.49 ммоль) при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. После завершения реакции растворитель упаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в этилацетате (300 мл), промывали 10%-ным бикарбонатом натрия (2×200 мл), 0.5 н. НСl (2×100 мл), водой (200 мл) и солевым раствором (200 мл). Органический слой сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме с получением сложного трет-бутилового эфира 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты в виде бесцветной жидкости;

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 4.15-4.09 (m, 2Н), 3.70 (s, 3Н), 3.17 (s, 3Н), 2.79-2.72 (m, 3Н), 1.72-1.60 (m, 4Н), 1.44 (s, 9Н);

ЖХ/МС (метод В): 173.2 (М+Н; масса после отщепления ВОС), Rt. 3.54 мин.

Йод (0.93 мг) и 5 мл 4-бром-2-метиланизола (5.96 г, 29.06 ммоль), растворенные в ТГФ (40 мл), добавляли к суспензии магниевых стружек (0.72 г, 29.06 ммоль) в сухом ТГФ (40 мл) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин и затем нагревали до 50°С. Смесь охлаждали до комнатной температуры и оставшийся раствор 4-бром-2-метиланизола в ТГФ добавляли по каплям в течение периода 20 мин. Смесь перемешивали в течение дополнительных 2 ч при комнатной температуре до завершения растворения магния. Этот раствор реактива Гриньяра добавляли по каплям к раствору сложного трет-бутиловото эфира 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (4.00 г, 14.53 ммоль) в ТГФ (40.00 мл) при -78°С. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 15 ч. Затем ее охлаждали до 0°С, гасили насыщенным раствором хлорида аммония (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Органический слой промывали 10%-ным бикарбонатом натрия (100 мл), водой (100 мл) и солевым раствором (100 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Сырое вещество очищали с помощью флэш-хроматографии, используя силикагель (230-400) и смеси петролейный эфир/этилацетат (0-30%) при градиентном элюировании с получением сложного трет-бутилового эфира 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты в виде бесцветного твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 7.82 (dd, J=2.2, 8.6 Гц, 1Н), 7.76 (d, J=1.6 Гц, 1H), 6.86 (d, J=8.6 Гц, 1H), 4.17 (d, J=13.0 Гц, 2Н), 3.90 (s, 3Н), 3.41-3.34 (m, 1Н), 2.93-2.86 (m, 2Н), 2.26 (s, 3Н), 1.83-1.80 (m, 2Н), 1.76-1.65 (m, 2Н), 1.45 (s, 9Н):

ЖХ/МС (метод В): 234.3 (М+Н; масса после отщепления ВОС), Rt. 5.31 мин.

Раствор сложного трет-бутилового эфира 4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (1.50 г, 4.36 ммоль) в растворе НСl/диоксан (3М, 14.53 мл, 43.60 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере азота. Растворитель упаривали досуха при пониженном давлении с получением гидрохлорида (4-метокси-3-метилфенил)-пиперидин-4-илметанона в виде бесцветного твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 9.25 (brs, 1H), 8.92 (brs, 1H), 7.90 (dd, J=2.2, 8.6 Гц, 1H), 7.81 (d, J=1.6 Гц, 1Н), 7.05 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 3.87 (s, 3Н), 3.75-3.67 (m, 1Н), 3.29-3.25 (m, 2Н), 3.06-2.97 (m, 2Н), 2.19 (s, 3Н), 1.89-1.86 (m, 2Н), 1.81-1.78 (m, 2Н);

ЖХ/МС (метод В): 234.3 (М+Н), Rt. 2.65 мин.

Следующие соединения получали подобным образом:

Гидрохлорид пиперидин-4-ил-м-толилметанона

бесцветное, аморфное твердое вещество;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆): δ 9.27 (brs, 1Н), 8.98 (brs, 1H), 7.80 (d, J=8.4 Гц, 2H), 7.48-7.40 (m, 2H), 3.79-3.71 (m, 1H), 3.27 (d, J=12.6 Гц, 2H), 3.06-2.97 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.92-1.89 (m, 2H), 1.81-1.74 (m, 2H).

ЖХ/МС (метод В): 204.3 (M+H), Rt. 2.48 мин;

Гидрохлорид (3-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона

бесцветное твердое вещество;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆): δ 9.15 (brs, 1Н), 8.83 (brs, 1H), 7.60 (d, J=7.9 Гц, 1H), 7.47 (t, J=7.9 Гц, 2H), 7.24 (dd, J=2.6, 8.2 Гц, 1H), 7.22 (s, 3H), 3.79-3.73 (m, 1H), 3.30-3.27 (m, 2H), 3.10-2.95 (m, 2H), 1.94-1.91 (m, 2H), 1.81-1.71 (m, 2H);

ЖХ/МС (метод В): 220.3 (M+H), Rt. 2.19 мин;

Гидрохлорид (3-фтор-4-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона

бесцветное, аморфное твердое вещество;

¹Н ЯМP (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 9.17 (brs, 1H), 8.86 (brs, 1H), 7.89-7.81 (m, 2H), 7.31 (t, J=8.5 Гц, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.74-3.68 (m, 1H), 3.29-3.26 (m, 2H), 3.05-2.96 (m, 2H), 1.91-1.88 (m, 2H), 1.80-1.73 (m, 2H).

ЖХ/МС (метод В): 238 (M+H), Rt. 2.32 мин.

Синтез (4-бромфенил)-пиперидин-4-илметанона

Смесь 1-ацетилпиперидин-4-карбоновой кислоты (10.00 г, 57.24 ммоль) и тионилхлорида (20.85 г, 171.73 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч в атмосфере азота. Тионилхлорид удаляли при пониженном давлении и остаток перегоняли вместе с дихлорметаном (2×200 мл). Этот хлорангидрид кислоты затем добавляли по каплям к суспензии бромбензола (27.24 г, 171.73 ммоль) и безводного хлорида алюминия (9.25 г, 68.69 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (200 мл) при 0°С в атмосфере азота. Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч, гасили льдом и экстрагировали дихлорметаном (2×200 мл). Органический слой промывали водой (2×200 мл), солевым раствором (200 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Полученный в результате черный остаток вносили в 6М водную НСl (200 мл), кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч и концентрировали до половины его первоначального объема. Водную часть подщелачивали 10%-ным бикарбонатом натрия и экстрагировали дихлорметаном (2×200 мл), промывали водой (2×200 мл), солевым раствором (200 мл), сушили над безводным Na₂SO₄ и упаривали в вакууме. Сырое вещество очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (60-120) и смеси дихлорметан/метанол при градиентном элюировании с получением (4-бромфенил)-пиперидин-4-илметанона в виде желтой смолы;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆): δ 7.95-7.92 (m, 2Н), 7.78-7.74 (m, 2Н), 3.71-3.68 (m, 1Н), 3.25-3.22 (m, 2Н), 2.98-2.92 (m, 2Н), 1.90-1.87 (m, 2Н), 1.76-1.70 (m, 2Н);

ЖХ/МС (метод В): 268/270 (М+Н), Rt. 2.73 мин.

Синтез гидрохлорида (6-метоксипиридин-3-ил)-пиперидин-4-илметанона

1.1 Сложный трет-бутиловый эфир 4-(6-метоксипиридин-3-карбонил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты

К раствору 5-бром-2-метоксипиридина (6.60 г; 34.40 ммоль) в ТГФ (132 мл) в атмосфере азота при -78°С по каплям добавляли н-бутиллитий (1.6 М в гексанах) (25.80 мл; 41.28 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч при такой же температуре. При -78°С по каплям добавляли раствор сложного трет-бутилового эфира 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (10.52 г; 37.84 ммоль) в ТГФ (25 мл) и перемешивали в течение 4 ч при -78°С. Реакционную смесь затем оставляли для медленного достижения комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным NH₄Cl (250 мл) и экстрагировали этилацетатом (2×300 мл). Объединенные органические слои промывали водой (200 мл), солевым раствором (200 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Сырое вещество очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (60-120) и смеси петролейный эфир/этилацетат при градиентном элюировании с получением сложного трет-бутилового эфира 4-(6-метоксипиридин-3-карбонил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (5.00 г; 44.5%) в виде бледно-желтого масла;

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8.80 (d, J=2.3 Гц, 1H), 8.14 (dd, J=2.4, 8.7 Гц, 1Н), 6.82 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 4.20-4.17 (m, 2Н), 4.02 (s, 3Н), 3.35-3.27 (m, 1H), 2.92-2.86 (m, 2Н), 1.85-1.82 (m, 2Н), 1.76-1.66 (m, 2Н), 1.47 (s, 9Н); ЖХ/МС (В): 265 (М+Н; масса после отщепления ВОС), Rt: 4.64 мин.

1.2 Гидрохлорид (6-метоксипиридин-3-ил)-пиперидин-4-илметанона

Бесцветное твердое вещество;

ЖХ/МС (метод В): 221.0 (M+H), Rt 1.84 мин;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.21 (s, 1H), 8.91 (d, J=1.08 Гц, 2Н), 8.23-8.20 (m, 1H), 6.95 (d, J=8.76 Гц, 1Н), 6.55 (bs, 3Н), 6.09 (bs, 2Н), 3.94 (s, 3Н), 3.78-3.67 (m, 1H), 3.29-3.26 (m, 2Н), 3.04-2.95 (m, 2Н), 1.93-1.90 (m, 2Н), 1.82-1.71 (m, 2Н).

Гидрохлорид (1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-пиперидин-4-илметанона

4-Йод-1-метил-1Н-пиразол (1.12 г; 5,385 ммоль) и сложный трет-бутиловый эфир 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (1.47 г; 5.385 ммоль) растворяли в сухом ТГФ (15 мл) в атмосфере аргона. При перемешивании прозрачный светло-желтый раствор охлаждали до -60°С и по каплям добавляли бутиллитий (15% раствор в н-гексане) (3.72 мл; 5.923 ммоль) при этой температуре в течение периода 10 мин. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре между -60 и -45°С, затем медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 14 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, гасили 10%-ным раствором лимонной кислоты, разбавляли этилацетатом (70 мл) и промывали водой и солевым раствором, сушили Na₂SO₄, фильтровали и упаривали досуха.

Маслянистый остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (Companion RF; 120 г Si50 колонка с силикагелем); выход: 999 мг (63%) светло-зеленое масло (чистота: 99.4; Rt: 2.33 мин);

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.42 (s, 1Н), 7.94 (d, J=0.7 Гц, 1Н), 3.97 (d, J=12.6 Гц, 2Н), 3.87 (s, 3Н), 3.15 (tt, J=11.4, 3.6 Гц, 1H), 2.93-2.75 (m, 2Н), 1.76-1.67 (m, 2Н), 1.33-1.46 (m, 11Н);

ЖХ/МС (С), Rt: 1.93 мин; 238.1 (М+Н; масса после отщепления ВОС).

Вос-отщепление дает указанное в заголовке соединение; бесцветное твердое вещество;

ЖХ/МС (С): 194.2 (М+Н), Rt: 0.34/0.47 мин.

Дигидрохлорид (1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-пиперидин-4-илметанона

Получали подобным образом, как описано выше; выход: 484 мг (96%) бесцветное твердое вещество;

ЖХ/МС (С): 194.2 (М+Н), Rt: 0.47/0.61 мин.

Синтез дигидрохлорида 6-амино-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-5-карбонитрила

1.1 2-Амино-5-бромникотинонитрил

К раствору 2-аминоникотинонитрила (0.50 г; 4.11 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) при 0°С добавляли карбонат натрия (0.48 г; 4.52 ммоль) с последующим добавлением по каплям брома (0.74 г; 4.52 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре окружающей среды в течение 2 ч. Растворитель упаривали в вакууме, остаток суспендировали в воде (50 мл), фильтровали с отсасыванием и сушили с получением указанного в заголовке соединения (0.60 г; 73%). Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.26 (d, J=2.5 Гц, 1Н), 8.14 (d, J=2.5 Гц, 1Н), 7.13 (brs, 2Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 2.59 мин; (М+2Н) 200.

1.2 Сложный трет-бутиловый эфир 6-амино-5-циано-3',6'-дигидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты

К раствору 2-амино-5-бромникотинонитрила (0.60 г; 3.02 ммоль) в диоксане (24 мл) и воде (6 мл) добавляли сложный трет-бутиловый эфир 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-карбоновой кислоты (1.04 г; 3.32 ммоль) и Nа₂СО₃ (0.98 г; 9.05 ммоль) и смесь дегазировали в течение 30 мин. Добавляли комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)-ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (0.13 г; 0.15 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение 10 ч. Реакционную смесь охлаждали до температуры окружающей среды, фильтровали через целит и растворитель концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии, используя петролейный эфир и этилацетат (5:5), с получением указанного в заголовке соединения (450.0 мг; 50%) в виде бледно-желтого твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.32 (d, J=2.5 Гц, 1H), 7.92 (d, J=2.5 Гц, 1H), 6.92 (s, 2Н), 6.08 (s, 1Н), 3.94 (s, 2Н), 3.49 (t, J=5.6 Гц, 2Н), 2.37 (d, J=1.5 Гц, 2Н), 1.40 (s, 9Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 3.50 мин; (М+Н) 301.2.

1.3 Сложный трет-бутиловый эфир 6-амино-5-циано-3',4',5',6'-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты

Сложный трет-бутиловый эфир 6-амино-5-циано-3',6'-дигидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты (5.00 г; 16.63 ммоль) растворяли в метаноле (150 мл) и гидрировали с палладием на угле (10% мас./мас.) (1.77 г; 1.66 ммоль) в течение 15 ч. Реакционную смесь концентрировали и остаток использовали на следующей стадии без дополнительной очистки; выход: 4.50 г (87%) бледно-желтого твердого вещества (чистота: 97%);

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.11 (d, J=2.4 Гц, 2Н), 7.76 (d, J=2.4 Гц, 2Н), 4.05-4.01 (m, 2Н), 2.85-2.55 (m, 2Н), 2.59-2.53 (m, 1H), 1.67 (d, J=12.2 Гц, 2Н), 1.47-1.38 (m, 11Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 3.27 мин; (М+Н-трет-бутил) 247.

1.4 Дигидрохлорид 6-амино-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-5-карбонитрила

К раствору сложного трет-бутилового эфира 6-амино-5-циано-3',4',5',6'-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты (4.50 г; 14.43 ммоль) в 1,4-диоксане (45 мл) при 0°С добавляли НСl (4М в 1,4-диоксане) (10.82 мл; 43.30 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (3.50 г; 85%) в виде бесцветного твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ.22-8.95 (m, 2Н), 8.15-7.98 (m, 5Н), 3.38-3.29 (m, 2Н), 2.95-2.87 (m, 2Н), 2.85-2.70 (m, 1Н), 1.92-1.81 (m, 2Н), 1.80-1.58 (m, 2Н); ЖХ/МС (В), Rt: 2.13 мин; (М+Н) 203.2.

Синтез гидрохлорида 5-пиримидин-2-ил-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-6-иламина

1.1 2-(2-Фторпиридин-3-ил)-пиримидин

К раствору (2-фтор-3-пиридил)бороновой кислоты (6.00 г; 40.45 ммоль) в 1,4-диоксане (108 мл) и воде (12 мл) добавляли 2-бромпиримидин (6.56 г; 40.45 ммоль) и Na₂CO₃ (13.12 г; 121.36 ммоль) и раствор дегазировали в течение 30 мин. Затем добавляли комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]-дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (1.70 г; 2.02 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 90°С в течение 6 ч. Реакционную смесь охлаждали при комнатной температуре, фильтровали через целит и растворитель концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии, используя смесь петролейный эфир - этилацетат (8:2), с получением указанного в заголовке соединения (3.00 г; 42%) в виде не совсем белого твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.99 (d, J=4.9 Гц, 2Н), 8.57 (t, J=9.8 Гц, 1H), 8.39 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.57-7.52 (m, 2Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 1.77 мин; (М+Н) 176.

1.2 3-Пиримидин-2-илпиридин-2-иламин

К раствору 2-(2-фторпиридин-3-ил)-пиримидина (11.0 г; 62.55 ммоль) в ТГФ (110 мл) при -20°С добавляли аммиак (6М в ТГФ) (330 мл). Реакционную смесь нагревали до 70°С в течение 40 ч в автоклаве. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (230-400) и смесь петролейный эфир - этилацетат (2:8) в качестве элюента, с получением указанного в заголовке соединения (6.50 г; 60%) в виде не совсем белого твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 8.91 (d, J=4.9 Гц, 2Н), 8.64 (d, J=7.8 Гц, 1H), 8.12 (d, J=6.6 Гц, 1H), 7.40 (t, J=4.8 Гц, 1H), 6.70-6.67 (m, 1H);

ЖХ/МС (B), Rt: 1.49 мин; (M+H) 173.

1.3 5-Бром-3-пиримидин-2-илпиридин-2-иламин

К раствору 3-пиримидин-2-илпиридин-2-иламина (6.30 г; 36.22 ммоль) в ацетонитриле (315 мл) добавляли NBS (7.89 г; 43.47 ммоль) при 0°С в течение 5 мин в атмосфере азота. Реакционную смесь оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении до 50 мл с последующим горячим фильтрованием. Остаток промывали петролейным эфиром с получением 5-бром-3-пиримидин-2-илпиридин-2-иламина (8.50 г; 93%) в виде желтого твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.93 (d, J=4.9 Гц, 2Н), 8.72 (s, 1H), 8.20 (d, J=2.6 Гц, 1Н), 7.46 (t, J=4.9 Гц, 1Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 2.25 мин; (М+2Н) 253/255.

1.4 Сложный трет-бутиловый эфир 6-амино-5-пиримидин-2-ил-3',6'-дигидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты

К раствору 5-бром-3-пиримидин-2-илпиридин-2-иламина (4.80 г; 19.03 ммоль) в 1,4-диоксане (192 мл) и воде (48 мл) добавляли сложный трет-бутиловый эфир 4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-карбоновой кислоты (6.54 г; 20.94 ммоль) и Na₂CO₃ (6.18 г; 57.10 ммоль) и раствор дегазировали в течение 30 мин. Затем к реакционной смеси добавляли комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладия(II) с дихлорметаном (0.80 г; 0.95 ммоль) и нагревали до 90°С в течение 10 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через целит и растворитель концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии, используя смесь петролейный эфир - этилацетат (5:5), с получением указанного в заголовке соединения (6.20 г; 90%) в виде бледно-желтого твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.93 (s, 2Н), 8.70 (s, 1H), 8.27 (s, 1Н), 7.94 (bs, 2Н), 7.42 (t, J=4.8 Гц, 1H), 6.06 (s, 1H), 3.98-3.98 (m, 2Н), 3.56-3.53 (m, 2Н), 2.49-2.48 (m, 2Н), 1.42 (s, 9Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 3.52 мин; (М+Н) 354.2.

1.5 Сложный трет-бутиловый эфир 6-амино-5-пиримидин-2-ил-3',4',5',6'-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты

Сложный трет-бутиловый эфир 6-амино-5-пиримидин-2-ил-3',6'-дигидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты (1.20 г; 3.31 ммоль) растворяли в метаноле (36 мл) и гидрировали с палладием на угле (10% мас./мас.) (0.24 г; 0.23 ммоль) при комнатной температуре в течение 10 ч. Реакционную смесь упаривали досуха с получением указанного в заголовке соединения (1.00 г; 77%) в виде бледно-желтого твердого вещества;

ЖХ/МС (В), Rt: 3.51 мин; (М+Н) 356.3.

1.6: Гидрохлорид 5-пиримидин-2-ил-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-6-иламина

К раствору сложного трет-бутилового эфира 6-амино-5-пиримидин-2-ил-3',4',5',6'-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-карбоновой кислоты (1.00 г; 2.54 ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) при 0°С добавляли НСl (4М в 1,4-диоксане) (5.00 мл; 20.00 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением гидрохлорида 5-пиримидин-2-ил-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-6-иламина (0.80 г; 94%) в виде желтого твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.15-9.14 (m, 1Н), 9.05-9.02 (m, 3Н), 8.95-8.92 (m, 1Н), 8.14 (s, 1H), 7.62 (t, J=4.9 Гц, 1H), 3.38-3.35 (m, 1Н), 2.98-2.93 (m, 3Н), 2.01-1.98 (m, 2Н), 1.92-1.82 (m, 2Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 1.31 мин; (М+Н) 256.2.

Синтез гидрохлорида [4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-пиперидин-4-илметанона

1.1 Сложный трет-бутиловый эфир 4-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-бензоил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты

К раствору 2-(4-бромфенил)-пропан-2-ола (5.00 г; 22.78 ммоль) в ТГФ (100 мл) в атмосфере азота при -78°С по каплям добавляли н-бутиллитий (23%-ный в гексанах) (13.92 мл; 50.12 ммоль) и перемешивали в течение 15 мин при такой же температуре. При -78°С по каплям добавляли раствор сложного трет-бутилового эфира 4-(метоксиметилкарбамоил)-пиперидин-1-карбоновой кислоты (6.96 г; 25.06 ммоль) в ТГФ (100 мл) и перемешивали в течение 2 ч при -78°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при -78°С и гасили насыщенным раствором NH₄Cl (100 мл). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (2×100 мл). Объединенные экстракты промывали водой (200 мл), солевым раствором (100 мл), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии, используя силикагель (60-120) и смесь петролейный эфир - этилацетат (1:1) при градиентном элюировании, с получением указанного в заголовке соединения (2.30 г; 29%) в виде бледно-желтого масла;

¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7.92 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 7.60 (d, J=8.52 Гц, 2Н), 5.18 (s, 1Н), 3.96 (d, J=12.56 Гц, 2Н), 3.63-3.57 (m, 1Н), 2.90 (s, 2Н), 1.74 (d, J=11.52 Гц, 2Н), 1.43-1.38 (m, 17Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 4.50 мин; (М+Н-ВОС) 248.3.

1.2 Гидрохлорид [4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-фенил]-пиперидин-4-илметанона

Раствор сложного трет-бутилового эфира 4-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-бензоил]-пиперидин-1-карбоновой кислоты (2.30 г; 6.69 ммоль) в растворе НСl/1,4-диоксан (22.28 мл; 66.85 ммоль) перемешивали при температуре окружающей среды в течение 6 ч в атмосфере азота. Растворитель упаривали досуха при пониженном давлении с получением сырого продукта, который растирали с эфиром с получением указанного в заголовке соединения (1.90 г; 99%) в виде бесцветного твердого вещества;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 9.08 (s, 1Н), 8.77 (s, 1Н), 7.94 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 7.62 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 5.21 (s, 1Н), 3.78-3.70 (m, 1Н), 3.34-3.27 (m, 2Н), 3.02 (q, J=12.32 Гц, 2Н), 1.99-1.90 (m, 2Н), 1.80-1.70 (m, 2Н), 1.43 (s, 6Н);

ЖХ/МС (В), Rt: 1.95 мин; (М+Н) 248.3.

Пример 1

Синтез 2-{4-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она ("А1")

К раствору 4-(4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты (51.0 мг, 0.22 ммоль), гидрохлорида (4-метоксифенил)-пиперидин-4-илметанона (84.4 мг, 0.33 ммоль) и гидрата бензотриазол-1-ола (50.5 мг, 0.33 ммоль) в ДМФА (0.5 мл) добавляли гидрохлорид N-(3-диметиламинопропил)-N'-этилкарбодиимида (74.8 мг, 0.30 ммоль) и 4-метилморфолин (39.5 мг, 0.39 ммоль). Смесь перемешивали в течение 18 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь распределяли между водой и дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 2-{4-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она в виде бесцветного, аморфного твердого вещества;

ВЭЖХ/МС 1.71 мин (А), [М+Н] 435;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.15 (s, 1H), 8.08 (dd, J=8.1, 1.5 Гц, 1Н), 8.04-7.95 (m, 2Н), 7.76 (ddd, J=8.5, 7.1, 1.6 Гц, 1H), 7.59 (dt, J=8.1, 0.8 Гц, 1Н), 7.45 (ddd, J=8.1, 7.1, 1.2 Гц, 1Н), 7.12-6.99 (m, 2Н), 4.40 (d, J=12.9 Гц, 1H), 3.93 (d, J=13.7 Гц, 1Н), 3.85 (s, 3Н), 3.65 (tt, J=11.2, 3.6 Гц, 1Н), 3.25-3.11 (m, 1Н), 2.73 (td, J=12.8, 2.8 Гц, 1H), 2.65 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.42 (td, J=7.3, 2.9 Гц, 2Н), 1.98 (р, J=7.2 Гц, 2Н), 1.77 (m, 2Н), 1.51 (qd, J=12.1, 4.0 Гц, 1H), 1.34 (qd, J=12.1, 4.1 Гц, 1Н).

Следующие соединения получали аналогично

2-[4-(4-Бензоилпиперидин-1-ил)-4-оксобутил]-3Н-хиназолин-4-он ("А2")

ВЭЖХ/МС 1.68 мин (А), [М+Н] 404;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.15 (s, 1Н), 8.07 (dd, J=8.0, 1.5 Гц, 1Н), 8.04-7.94 (m, 2Н), 7.76 (ddd, J=8.5, 7.1, 1.6 Гц, 1Н), 7.71-7.62 (m, 1Н), 7.62-7.51 (m, 3Н), 7.45 (ddd, J=8.1, 7.2, 1.2 Гц, 1H), 4.39 (d, J=13.0 Гц, 1Н), 3.93 (d, J=13.6 Гц, 1H), 3.70 (tt, J=11.2,3.6 Гц, 1H), 3.27-3.08 (m, 1Н), 2.75 (td, J=12.5, 2.8 Гц, 1H), 2.65 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.42 (td, J=7.3, 3.1 Гц, 2Н), 1.98 (р, J=7.2 Гц, 2Н), 1.80 (m, 2Н), 1.59-1.44 (m, 1H), 1.35 (qd, J=12.3, 4.1 Гц, 1Н); 2-[4-(4-Бензоилпиперидин-1-ил)-4-оксобутил]-6-фтор-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("A3")

ВЭЖХ/МС 1.91 мин (А), [М+Н] 436;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.26 (s, 1H), 8.26-7.84 (m, 2Н), 7.76-7.60 (m, 1Н), 7.61-7.47 (m, 4Н), 4.39 (d, J=13.1 Гц, 1Н), 3.91 (d, J=13.6 Гц, 1H), 3.70 (tt, J=11.2, 3.6 Гц, 1Н), 3.26-3.09 (m, 1Н), 2.74 (ddd, J=12.8, 10.9, 2.8 Гц, 1Н), 2.66 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.53 (s, 3Н), 2.46 (td, J=7.3, 3.1 Гц, 2Н), 1.99 (р, J=7.4 Гц, 2Н), 1.80 (d, J=13.2 Гц, 2Н), 1.50 (qd, J=12.1, 3.9 Гц, 1Н), 1.34 (qd, J=12.3, 4.2 Гц, 1Н);

6-Фтор-2-{4-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А4")

ВЭЖХ/МС 1.91 мин (А), [М+Н] 466;

¹H ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.23 (s, 1H), 8.09-7.88 (m, 2Н), 7.56 (m, 2Н), 7.12-6.99 (m, 2Н), 4.48-4.30 (m, 1Н), 3.91 (d, J=13.6 Гц, 1Н), 3.85 (s, 3Н), 3.64 (tt, J=11.2, 3.6 Гц, 1Н), 3.17 (td, J=13.0, 2.7 Гц, 1Н), 2.73 (td, J=12.6, 2.8 Гц, 1Н), 2.66 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.53 (s, 3Н), 2.45 (td, J=7.3, 4.2 Гц, 2Н), 1.99 (р, J=7.4 Гц, 2Н), 1.76 (dt, J=13.0, 3.5 Гц, 2Н), 1.49 (qd, J=12.0, 4.0 Гц, 1Н), 1.41-1.26 (m, 1H);

6,8-Дифтор-2-{4-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А5")

ВЭЖХ/МС 1.81 мин (А), [М+Н] 440;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.45 (s, 1H), 8.08-7.93 (m, 2Н), 7.76 (ddd, J=10.5, 9.0, 2.9 Гц, 1H), 7.69-7.58 (m, 2Н), 7.55 (dd, J=8.3, 7.0 Гц, 2Н), 4.39 (dd, J=12.9, 3.7 Гц, 1H), 3.95 (d, J=13.5 Гц, 1Н), 3.70 (tt, J=11.3, 3.6 Гц, 1Н), 3.19 (td, J=13.5, 12.9, 2.7 Гц, 1Н), 2.74 (td, J=12.7, 2.7 Гц, 1H), 2.67 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.44 (td, J=7.2, 1.8 Гц, 2Н), 1.97 (p, J=7.4 Гц, 2Н), 1.80 (dd, J=11.6, 7.2 Гц, 2Н), 1.50 (qd, J=12.0, 4.0 Гц, 1Н), 1.34 (qd, J=12.1, 4.1 Гц, 1Н);

2-[4-(4-Бензоилпиперидин-1-ил)-4-оксобутил]-6,8-дифтор-3Н-хиназолин-4-он ("А6")

ВЭЖХ/МС 1.82 мин (А), [М+Н] 470;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.46 (s, 1Н), 8.11-7.93 (m, 2Н), 7.76 (ddd, J=10.5, 9.0, 2.9 Гц, 1H), 7.61 (ddd, J=8.4, 2.9, 1.4 Гц, 1H), 7.13-6.98 (m, 2Н), 4.39 (d, J=13.1 Гц, 1Н), 3.95 (d, J=13.6 Гц, 1Н), 3.85 (s, 3Н), 3.65 (tt, J=11.2, 3.6 Гц, 1Н), 3.18 (t, J=12.3 Гц, 1Н), 2.80-2.59 (m, 3Н), 2.48-2.37 (m, 2Н), 1.97 (р, J=7.4 Гц, 2Н), 1.75 (m, 2Н), 1.50 (qd, J=12.1, 4.0 Гц, 1Н), 1.34 (tt, J=12.2, 6.0 Гц, 1Н).

Пример 2

Синтез 2-{4-[4-(3-метилбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она ("А7")

К раствору 4-(4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты (167 мг, 0.72 ммоль) и гидрохлорида пиперидин-4-ил-м-толилметанона (173 мг, 0.72 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляли триэтиламин (0.31 мл, 2.2 ммоль) и, далее, ангидрид пропанфосфоновой кислоты (Т3Р, 50%-ный в этилацетате; 794 мг, 1.08 ммоль) по каплям при 0°С в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре. Растворитель упаривали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане (50 мл), промывали 10%-ным раствором бикарбоната натрия и водой. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 2-{4-[4-(3-метилбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она в виде не совсем белого твердого вещества;

ВЭЖХ/МС 3.53 мин (В), [М+Н] 418;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.15 (s, 1Н), 8.06 (dd, J=1.2, 7.9 Гц, 1Н), 7.79-7.73 (m, 3Н), 7.58 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 7.57-7.39 (m, 3Н), 4.37 (d, J=Гц, 1Н), 3.92 (d, J=13.5 Гц, 1Н), 3.71-3.65 (m, 1Н), 3.16 (t, J=11.8 Гц, 1Н), 2.75-2.69 (m, 1Н), 2.63 (t, J=7.32 Гц, 2Н), 2.41-2.37 (m, 5Н), 1.99-1.92 (m, 2Н), 1.79-1.75 (m, 2Н), 1.53-1.44 (m, 1Н), 1.33 (td, 1H).

Следующие соединения получали аналогично

2-{4-[4-(3-Фтор-4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А8")

ВЭЖХ/МС 3.40 мин (В), [М+Н] 452;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.18 (s, 1Н), 8.06 (dd, J=1.1, 7.9 Гц, 1H), 7.87 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 7.82 (dd, J=1.9, 12.3 Гц, 1H), 7.78-7.74 (m, 1Н), 7.59 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.46-7.42 (m, 1Н), 7.29 (t, J=8.6 Гц, 1Н), 4.37 (d, J=13.0 Гц, 1H), 3.93-3.90 (m, 4Н), 3.68-3.63 (m, 1Н), 3.16 (t, J=11.96 Гц, 1H), 2.75-2.69 (m, 1H), 2.63 (t, J=7.32 Гц, 2Н), 2.43-2.39 (m, 2Н), 1.99-1.92 (m, 2Н), 1.80-1.70 (m, 2Н), 1.53-1.47 (m, 1H), 1.36-1.29 (m, 1Н);

2-{4-[4-(3-Метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А9")

ВЭЖХ/МС 3.36 мин (В), [М+Н] 434;

¹Н ЯМР (400 МГц, AMCO-d₆) δ 12.17 (s, 1Н), 8.07 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.76 (t, J=7.6 Гц, 1H), 7.61-7.58 (m, 2H), 7.48-7.45 (m, 3H), 7.22 (d, J=7.6 Гц, 1H), 4.38 (d, J=12.6 Гц, 1H), 3.93-3.90 (m, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.72-3.63 (m, 1H), 3.17 (t, J=12.28 Гц, 1H), 2.73 (t, J=11.60 Гц, 1H), 2.63 (t, J=7.24 Гц, 2H), 2.41-2.32 (m, 2H), 1.96 (t, J=7.16 Гц, 2H), 1.85-1.72 (m, 2H), 1.53-1.45 (m, 1H), 1.36-1.28 (m, 1H).

Пример 3

Синтез 2-(4-{4-[4-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)-бензоил]-пиперидин-1-ил}-4-оксобутил)-3Н-хиназолин-4-она ("А10")

К раствору 4-(4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты (671 мг, 2.89 ммоль) и (4-бромфенил)-пиперидин-4-илметанона (852 мг, 3.18 ммоль) в ДМФА (16 мл) добавляли триэтиламин (1.23 мл, 4.34 ммоль) и, далее, Т3Р (50%-ный в этилацетате; 3.18 г, 4.34 ммоль) при 0°С по каплям в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 часов при комнатной температуре. Растворитель упаривали в вакууме. Остаток растворяли в дихлорметане (50 мл), промывали 10%-ным раствором бикарбоната натрия и водой. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 2-{4-[4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она в виде бледно-желтого твердого вещества;

ВЭЖХ/МС 3.79 мин (В), [М+Н] 482/484;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.18 (s, 1Н), 8.06 (dd, J=1.3, 7.9 Гц, 1H), 7.94-7.92 (m, 2Н), 7.78-7.74 (m, 3Н), 7.58 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.46-7.42 (m, 1Н), 4.36 (d, J=13.0 Гц, 1Н), 3.92 (d, J=13.4 Гц, 1Н), 3.70-3.64 (m, 1Н), 3.19-3.13 (m, 1Н), 2.74-2.66 (m, 1Н), 2.63 (t, J=7.36 Гц, 2Н), 2.43-2.38 (m, 2Н), 1.82-1.60 (m, 2Н), 1.55-1.40 (m, 1Н), 1.33-1.29 (m, 1H).

Раствор 2-{4-[4-(4-бромбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она (183 мг, 0.38 ммоль), 1-этил-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-1Н-пиразола (102 мг, 0.46 ммоль) и карбоната цезия (379 мг, 1.15 ммоль) в диоксане (4 мл) и воде (0.4 мл) продували азотом. Затем добавляли 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]дихлорпалладий(II) (32 мг, 0,040 ммоль). Смесь нагревали до 100°С в атмосфере азота и перемешивали при этой температуре в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через набивку целита. Фильтрат упаривали и остаток распределяли между водой и этилацетатом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и упаривали. Остаток хроматографировали на колонке с силикагелем смесью метанол/дихлорметан в качестве элюента с получением 2-(4-{4-[4-(1-этил-1Н-пиразол-4-ил)-бензоил]-пиперидин-1-ил}-4-оксобутил)-3Н-хиназолин-4-она в виде не совсем белого твердого вещества;

ВЭЖХ/МС 3.36 мин (В), [М+Н] 498;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.17 (s, 1H), 8.36 (s, 1Н), 8.07 (d, J=7.2 Гц, 1Н), 8.00-7.97 (m, 3Н), 7.78-7.71 (m, 3Н), 7.59 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.44 (t, J=7.6 Гц, 1Н), 4.40 (d, J=12.8 Гц, 1Н), 4.16 (q, J=7.2 Гц, 2Н), 3.93 (d, J=12.9 Гц, 1Н), 3.72-3.66 (m, 1Н), 3.18 (t, J=12.12 Гц, 1Н), 2.74 (t, J=12.08 Гц, 1H), 2.64 (t, J=7.32 Гц, 2Н), 2.44-2.40 (m, 2Н), 2.0 (q, J=7.0 Гц, 2Н), 1.85-1.72 (m, 2Н), 1.55-1.50 (m, 1H), 1.42-1.40 (m, 3Н), 1.35-1.33 (m, 1Н).

Следующие соединения получали аналогично

2-[4-(4-{4-[1-(2-Метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-ил)-4-оксобутил]-3Н-хиназолин-4-он ("А11")

ВЭЖХ/МС 4.60 мин (В), [М+Н] 528;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.10 (s, 1H), 8.06 (dd, J=1.2, 7.9 Гц, 1H), 8.02-7.97 (m, 3H), 7.78-7.71 (m, 3H), 7.59 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.44 (t, J=7.8 Гц, 1H), 4.39 (d, J=13.0 Гц, 1H), 4.28 (t, J=5.2 Гц, 2H), 3.93 (d, J=13.4 Гц, 1H), 3.71 (t, J=5.2 Гц, 3Н), 3.23 (s, 3Н), 3.19-3.15 (m, 1H), 2.76-2.74 (m, 1H), 2.63 (t, J=7.36 Гц, 2H), 2.41-2.39 (m, 2H), 2.00-1.92 (m, 2H), 1.85-1.73 (m, 2H), 1.52-1.49 (m, 1H), 1.35-1.33 (m, 1H);

2-[4-Оксо-4-(4-{4-[1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил]-бензоил}-пиперидин-1-ил)-бутил]-3Н-хиназолин-4-он ("А12")

ВЭЖХ/МС 2.52 мин (В), [М+Н] 567;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.09 (s, 1Н), 8.36 (s, 1Н), 8.06 (dd, J=1.3, 7.9 Гц, 1Н), 8.01-7.97 (m, 3Н), 7.78-7.71 (m, 3Н), 7.59 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 7.46-7.42 (m, 1Н), 4.39 (d, J=12.8 Гц, 1Н), 4.30-4.15 (m, 2Н), 3.93 (d, J=13.5 Гц, 1Н), 3.72-3.66 (m, 1Н), 3.21-3.18 (m, 1Н), 2.90-2.80 (m, 2Н), 2.76-2.70 (m, 1H), 2.65-2.63 (m, 2Н), 2.43-2.41 (m, 4Н), 1.99-1.90 (m, 2Н), 2.85-2.70 (m, 2Н), 1.70-1.52 (m, 4Н), 1.55-1.46 (m, 1H), 1.37-1.32 (m, 1Н).

Следующие соединения получали аналогично примеру 1:

2-[4-[4-(4-Метокси-3-метилбензоил)-1-пиперидил]-4-оксобутил]-3Н-хиназолин-4-он ("А13")

¹Н ЯМР (400 МГц, AMCO-d₆) δ 8.06 (dd, J=1.24, 7.94 Гц, 1Н), 7.89 (dd, J=2.12, 8.58 Гц, 1H), 7.80-7.78 (m, 1H), 7.76-7.74 (m, 1H), 7.59 (d,J=7.88 Гц, 1H), 7.47-7.42 (m, 1H), 7.05 (d, J=8.68 Гц, 1H), 4.37 (d, J=0.32 Гц, 1H), 3.92 (d, J=13.24 Гц, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.66-3.63 (m, 1H), 3.23 (t, J=12.36 Гц, 1H), 2.75-2.65 (m, 1H), 2.64-2.62 (m, 2H), 2.49-2.39 (m, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.97 (q, J=7.24 Гц, 2H), 1.74 (d, J=10.76 Гц, 2H), 1.50 (t, J=9.68 Гц, 1H), 1.33 (t, J=9.08 Гц, 1H);

6,8-Дифтор-2-[4-[4-(4-метокси-3-метилбензоил)-1-пиперидил]-4-оксобутил]-3Н-хиназолин-4-он ("А14")

ВЭЖХ/МС 1.91 мин (А), [М+Н] 484;

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.48 (s, 1Н), 7.90 (dd, J=8.6, 2.3 Гц, 1Н), 7.85-7.80 (m, 1Н), 7.78 (ddd, J=10.5, 9.0, 2.9 Гц, 1Н), 7.62 (ddd, J=8.4, 2.9, 1.2 Гц, 1H), 7.06 (d, J=8.6 Гц, 1H), 4.44-4.35 (m, 1Н), 3.99-3.91 (m, 1Н), 3.89 (s, 3Н), 3.66 (tt, J=11.2, 3.6 Гц, 1Н), 3.19 (td, J=13.2, 12.8, 2.7 Гц, 1H), 2.80-2.70 (m, 1Н), 2.68 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.44 (td, J=7.3, 2.3 Гц, 2Н), 1.98 (р, J=7.4 Гц, 2Н), 1.82-1.71 (m, 2Н), 1.50 (qd, J=12.1, 4.0 Гц, 1Н), 1.40-1.28 (m, 1H);

6-Фтор-2-[4-[4-(4-метокси-3-метилбензоил)-1-пиперидил]-4-оксобутил]-8-метил-3Н-хиназолин-4-он ("А15")

ВЭЖХ/МС 2.01 мин (А), [М+Н] 480;

¹Н ЯМР (500 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.28 (s, 1H), 7.90 (dd, J=8.6, 2.3 Гц, 1Н), 7.85-7.77 (m, 1Н), 7.64-7.49 (m, 2Н), 7.06 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 4.41 (dt, J=13.3, 3.7 Гц, 1Н), 3.89 (m, 4Н), 3.66 (tt, J=11.2, 3.6 Гц, 1Н), 3.18 (td, J=13.1, 2.6 Гц, 1Н), 2.74 (td, J=12.9, 2.7 Гц, 1H), 2.67 (t, J=7.4 Гц, 2Н), 2.54 (s, 3Н), 2.46 (td, J=7.3, 4.2 Гц, 2Н), 1.99 (р, J=7.2 Гц, 2Н), 1.76 (dt, J=12.9, 3.4 Гц, 2Н), 1.50 (qd, J=12.1, 4.0 Гц, 1Н), 1.34 (qd, J=12.2, 4.1 Гц, 1H).

Следующие соединения получали аналогично примеру 2:

2-{4-[4-(6-Метоксипиридин-3-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А16")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.93 мин (В), [М+Н] 435;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 8.90 (s, 1H), 8.22 (d, J=8.7 Гц, 1Н), 8.07 (d, J=7.9 Гц, 1Н), 7.76 (t, J=8.4 Гц, 1Н), 7.59 (d, J=7.8 Гц, 1H), 7.44 (t, J=8.0 Гц, 1Н), 6.94 (d, J=8.6 Гц, 1H), 4.40-4.34 (m, 1Н), 3.94 (s, 3Н), 3.93-3.90 (m, 1H), 3.67-3.62 (m, 1Н), 3.16 (t, J=11.92 Гц, 1Н), 2.72 (t, J=10.60 Гц, 1Н), 2.67-2.62 (m, 2Н), 2.44-2.39 (m, 2Н), 2.00-1.92 (m, 2Н), 1.78-1.76 (m, 2Н), 1.51-1.39 (m, 1H), 1.34-1.29 (m, 1Н);

4-{1-[4-(4-Оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бутирил]-пиперидин-4-илокси}-бензонитрил ("А17")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.34 мин (В), [М+Н] 417;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.16 (s, ¹H), 8.06 (d, J=1.9 Гц, 1H), 7.78-7.74 (m, 3H), 7.58 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.45 (t, J=7.9 Гц, 1H), 7.15 (d, J=8.9 Гц, 2H), 4.77-4.73 (m, 1H), 3.88-3.85 (m, 1H), 3.73-3.70 (m, 1H), 3.35-3.32 (m, 1H), 3.22-3.17 (m, 1H), 2.64 (t, J=7.48 Гц, 2H), 2.42 (t, J=7.52 Гц, 2H), 2.00-1.88 (m, 4H), 1.61-1.58 (m, 1H), 1.49-1.47 (m, 1H);

2-{4-[4-(4-Фторбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А18")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.40 мин (В), [М+Н] 422;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.12 (s, 1H), 8.11-8.05 (m, 3Н), 7.76 (d, J=8.3 Гц, 1Н), 7.59 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.45 (t, J=7.8 Гц, 1H), 7.36 (t, J=8.8 Гц, 2Н), 4.40-4.37 (m, 1Н), 3.94-3.91 (m, 1Н), 3.71-3.66 (m, 1H), 3.17 (t, J=11.8 Гц, 1Н), 2.72 (t, J=11.88 Гц, 1Н), 2.64 (t, J=7.36 Гц, 2Н), 2.42-2.39 (m, 2Н), 2.00-1.92 (m, 2Н), 1.79-1.76 (m, 2Н), 1.53-1.44 (m, 1Н), 1.37-1.33 (m, 1Н);

6-Фтор-2-{4-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А19")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.70 мин (В), [М+Н] 452;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.30 (s, 1Н), 7.98 (d, J=8.9 Гц, 2Н), 7.75-7.72 (m, 1Н), 7.67-7.62 (m, 2Н), 7.06-7.03 (m, 2Н), 4.45-3.35 (m, 1Н), 3.93-3.89 (m, 1Н), 3.84 (s, 3Н), 3.67-3.61 (m, 1Н), 3.19-3.13 (m, 1Н), 2.74-2.62 (m, 3Н), 2.43-2.38 (m, 2Н), 1.70-1.60 (m, 2Н), 1.53-1.48 (m, 1Н), 1.36-1.28 (m, 1Н);

6-Фтор-2-{4-[4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А20")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.81 мин (В), [М+Н] 470;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.30 (s, 1Н), 7.87 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 7.82 (dd, J=1.9, 12.3 Гц, 1Н), 7.73 (dd, J=1.2, 8.6 Гц, 1Н), 7.67-7.62 (m, 2Н), 7.29 (t, J=8.6 Гц, 1Н), 4.38 (d, J=12.7 Гц, 1H), 3.93-3.90 (m, 4Н), 3.68-3.63 (m, 1H), 3.19-3.13 (m, 1Н), 2.75-2.62 (m, 3Н), 2.43-2.38 (m, 2Н), 1.80-1.70 (m, 2Н), 1.52-1.44 (m, 1H), 1.36-1.32 (m, 1H);

6-Фтор-2-{4-[4-(6-метоксипиридин-3-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А21")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.29 мин (В), [М+Н] 453;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСO-d₆) δ 12.29 (s, 1H), 8.90 (d, J=2.2 Гц, 1Н), 8.22 (dd, J=2.5, 8.8 Гц, 1Н), 7.75-7.72 (m, 1Н), 7.69-7.62 (m, 2Н), 6.94 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 4.38 (s, 1H), 3.94 (s, 3Н), 3.93-3.89 (m, 1H), 3.67-3.62 (m, 1Н), 3.19-3.13 (m, 1Н), 2.74-2.66 (m, 1Н), 2.63 (t, J=7.40 Гц, 2Н), 2.43-2.39 (m, 2Н), 1.99-1.92 (m, 2Н), 1.85-1.70 (m, 2Н), 1.58-1.40 (m, 1Н), 1.35-1.31 (m, 1Н);

4-{1-[4-(6-Фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бутирил]-пиперидин-4-илокси}-бензонитрил ("А22")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.66 мин (В), [М+Н] 435;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.44 (s, 1H), 7.77-7.72 (m, 3Н), 7.66 (d, J=9.6 Гц, 2Н), 7.15 (d, J=9.0 Гц, 2Н), 4.78-4.74 (m, 1H), 3.88-3.85 (m, 1H), 3.73-3.69 (m, 1Н), 3.33-3.32 (m, 1Н), 3.19-3.06 (m, 1Н), 2.67-2.62 (m, 2Н), 2.44-2.40 (m, 2Н), 2.00-1.88 (m, 4Н), 1.60-1.58 (m, 1Н), 1.51-1.44 (m, 1Н);

6-Фтор-2-{4-[4-(4-фторбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А23")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.79 мин (В), [М+Н] 440;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСO-d₆) δ 12.30 (s, 1Н), 8.11-8.07 (m, 2Н), 7.75-7.72 (m, 1Н), 7.67-7.64 (m, 2Н), 7.39-7.36 (m, 2Н), 4.38 (d, J=13.8 Гц, 1Н), 3.92 (d, J=12.9 Гц, 1Н), 3.71-3.66 (m, 1Н), 3.19-3.13 (m, 1Н), 2.75-2.62 (m, 3Н), 2.42-2.38 (m, 2Н), 1.99-1.94 (m, 2Н), 1.85-1.71 (m, 2Н), 1.53-1.47 (m, 1Н), 1.36-1.30 (m, 1Н);

6-Фтор-2-{4-[4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А24")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 4.03 мин (В), [М+Н] 466;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.50 (s, 1H), 7.89 (dd, J=1.8, 8.6 Гц, 1Н), 7.80 (s, 1Н), 7.73 (dd, J=1.6, 8.6 Гц, 1Н), 7.67-7.64 (m, 2Н), 7.04 (d, J=8.6 Гц, 1Н), 4.38 (d, J=12.9 Гц, 1H), 3.93-3.87 (m, 4Н), 3.67-3.61 (m, 1Н), 3.19-3.13 (m, 1H), 2.75-2.72 (m, 1Н), 2.65 (t, J=13.56 Гц, 2Н), 2.43-2.39 (m, 2Н), 1.99-1.92 (m, 2Н), 1.70-1.68 (m, 2Н), 1.53-1.45 (m, 1Н), 1.36-1.27 (m, 1H);

8-Фтор-2-{4-[4-(4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А25")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.63 мин (В), [М+Н] 452;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.35 (bs, 1Н), 7.99-7.97 (m, 2H), 7.88-7,86 (d, J=8.0 Гц, 1H), 7.65-7.60 (m, 1H). 7.45-7.40 (m, 1H), 7.06-7.03 (m, 2H), 4.39-4.36 (d, 1H), 3.96-3.93 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 3.66-3.61 (m, 1H), 3.20-3.14 (m, 1H), 2.74-2.72 (m, 1H), 2.68-2.64 (m. 2H), 2.48-2.41 (m, 2H), 2.00-1.92 (m, 2H), 1.75-1.73 (m, 2H), 1.53-1.45 (m, 1H), 1.37-1.30 (m, 1H);

8-Фтор-2-{4-[4-(3-фтор-4-метоксибензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("A26")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.80 мин (В), [М+Н] 470;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.35 (bs, 1H), 7.88-7.82 (m, 2H), 7.80-7.79 (d, J=8.1 Гц, 1H), 7.66-7.61 (m, 1H). 7.45-7.40 (m, 1H), 7.31-7.27 (m, 1H), 4.39-4.36 (d, 1H), 3.96-3.93 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3.68-3.61 (m, 1H), 3.17-3.14 (m, 1H),

2.74-2.73 (m, 1H), 2.68-2.64 (m, 2H), 2.48-2.41 (m, 2H), 2.00-1.92 (m, 2H), 1.78-1.75 (m, 2H), 1.53-1.45 (m, 1H), 1.37-1.32 (m, 1H);

4-{1-[4-(8-Фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бутирил]-пиперидин-4-илокси}-бензонитрил ("A27")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.76 мин (В), [М+Н] 435;

¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.35 (bs, 1Н), 7.88-7.86 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.77-7.73 (m, 2Н), 7.66-7.61 (m, 1H). 7.45-7.40 (m, 1Н), 7.16-7.14 (m, 2Н), 4.77-4.73 (m, 1Н), 3.86-3.83 (m, 1Н), 3.72-3.71 (m, 1Н), 3.34-3.32 (m, 1Н), 3.21-3.16 (m, 1H), 2.68-2.64 (m, 2Н), 2.69-2.65 (m, 2Н), 2.46-2.42 (m, 2Н), 2.01-1.87 (m, 4Н), 1.62-1.55 (m, 1H), 1.50-1.46 (m, 1Н);

8-Фтор-2-{4-[4-(4-фторбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А28")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.75 мин (В), [М+Н] 440;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.35 (bs, 1Н), 8.10-8.06 (m, 2Н), 7.88-7.86 (m, 1H), 7.65-7.60 (m, 1H), 7.45-7.40 (m, 1Н), 7.38-7.34 (m, 2Н), 4.39-4.36 (m, 1Н), 3.96-3.93 (m, 1H), 3.71-3.64 (m, 1Н), 3.34-3.32 (m, 1Н), 3.21-3.14 (m, 1Н), 2.78-2.64 (m, 3Н), 2.43-2.40 (m, 2Н), 2.01-1.92 (m, 2Н), 1.89-1.76 (m, 2Н), 1.53-1.43 (m, 1Н), 1.36-1.27 (m, 1Н);

8-Фтор-2-{4-[4-(4-метокси-3-метилбензоил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А29")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.98 (В), [М+Н] 466;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.34 (bs, 1Н), 7.90-7.87 (m, 2Н), 7.80-7.79 (d, J=2.4 Гц, 1Н), 7.66-7.61 (m, 1Н), 7.45-7.40 (m, 1Н), 7.05-7.03 (d, J=8.1 Гц, 1H), 4.39-4.36 (m, 1Н), 3.96-3.92 (m, 1Н), 3.86 (s, 3Н), 3.67-3.61 (m, 1Н), 3.20-3.14 (m, 1H), 2.74-2.72 (m, 1H), 2.68-2.64 (m, 2Н), 2.44-2.41 (m, 2Н), 2.19)s, 3Н), 1.98-1.92 (m, 2Н), 1.79-1.76 (m, 2Н), 1.52-1.44 (m, 1Н), 1.36-1.27 (m, 1H);

2-[4-(6-Амино-5-пиримидин-2-ил-3',4',5',6'-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-ил)-4-оксобутил]-3Н-хиназолин-4-он ("А30")

бледно-желтое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.32 (В), [М+Н] 470;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.17 (s, 1H), 8.90 (s, 2Н), 8.51 (s, 1Н), 8.08-8.04 (m, 2Н), 7.76-7.72 (m, 1Н), 7.59 (d, J=7.6 Гц, 2Н), 7.46-7.42 (m, 1Н), 7.42-7.38 (m, 1H), 4.55-4.52 (m, 1Н), 4.02-3.99 (m, 1H), 3.17-3.06 (m, 1Н), 2.76-2.73 (m, 1H), 2.68-2.66 (m, 2Н), 2.66-2.60 (m, 2Н), 2.50-2.44 (m, 2Н), 2.03-1.97 (m, 2Н), 1.82-1.76 (m, 2Н), 1.59-1.54 (m, 1Н), 1.40-1.37 (m, 1Н);

6-Амино-1'-[4-(6-фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бутирил]-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-5-карбонитрил ("A31")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.39 (В), [М+Н] 435;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.30 (s, 1Н), 8.11 (d, J=2.4 Гц, 1H), 7.76-7.72 (m, 2Н), 7.67-7.64 (m, 2Н), 6.70 (s, 2Н), 4.50 (d, J=13.1 Гц, 1Н), 3.96 (d, J=13.3 Гц, 1Н), 3.06-3.00 (m, 1Н), 2.64 (t, J=7.4 Гц, 3Н), 2.41 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.00-1.93 (m, 2Н), 1.73-1.67 (m, 2Н), 1.55-1.45 (m, 1Н), 1.42-1.30 (m, 1Н);

2-[4-(6-Амино-5-пиримидин-2-ил-3',4',5',6'-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-ил)-4-оксобутил]-6-фтор-3Н-хиназолин-4-он ("А32")

бледно-желтое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.58 (В), [М+Н] 488;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.30 (s, 1Н), 8.89 (d, J=4.9 Гц, 2H), 8.50 (d, J=2.4 Гц, 1H), 8.04 (d, J=2.4 Гц, 1H), 7.74 (dd, J=2.8, 8.6 Гц, 1H), 7.69-7.60 (m, 3H), 7.39 (t, J=4.9 Гц, 1H), 4.55-4.51 (m, 1H), 4.01-3.98 (m, 1H), 3.11-3.05 (m, 1H), 2.76-2.64 (m, 3H), 2.60-2.50 (m, 1H), 2.46-2.42 (m, 2H), 2.03-1.97 (m, 2H), 1.82-1.76 (m, 2H), 1.57-1.53 (m, 1H), 1.41-1.37 (m, 1H);

8-Фтор-2-{4-[4-(6-метоксипиридин-3-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А33")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.40 (В), [М+Н] 453;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.35 (bs, 1H), 8.89 (bs, 1Н), 8.22-8.20 (dd, J=8.8, 2.4 Гц, 1Н), 7.88-7.86 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.65-7.60 (m, 1Н), 7.45-7.40 (m, 1H), 6.94-6.92 (d, J=8.8 Гц, 1Н), 4.39-4.35 (d, 1Н), 3.96-3.89 (m, 4Н), 3.66-3.61 (m, 1H), 3.19-3.13 (m, 1Н), 3.17-3.14 (m, 1H), 2.74-2.64 (m, 1Н), 2.68-2.64 (m, 3Н), 2.44-2.40 (m, 2Н), 1.98-1.92 (m, 2Н), 1.78-1.75 (m, 2Н), 1.50-1.47 (m, 1H), 1.34-1.28 (m, 1Н);

6-Амино-1'-[4-(8-фтор-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бутирил]-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-5-карбонитрил ("А34")

не совсем белое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.39 (В), [М+Н] 435;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСO-d₆) δ 12.36 (bs, 1Н), 8.10 (bs, 1Н), 7.89-7.87 (d, J=8.1 Гц, 1Н), 7.75-7.74 (d, J=2.4 Гц, 1Н). 7.65-7.60 (m, 1H), 7.45-7.40 (m, 1H), 6.69 (s, 2Н), 4.50-4.47 (m, 1Н), 4.01-3.97 (m, 1Н), 3.06-3.03 (m, 1Н), 2.74-2.73 (m, 4Н), 2.44-2.41 (m, 2Н), 2.06-1.94 (m, 2Н), 1.75-1.67 (m, 2Н), 1.50-1.47 (m, 1H), 1.35-1.33 (m, 1H).

2-[4-(6-Амино-5-пиримидин-2-ил-3',4',5',6,-тетрагидро-2'Н-[3,4']бипиридинил-1'-ил)-4-оксобутил]-8-фтор-3Н-хиназолин-4-он ("А35")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.63 (В), [М+Н] 488;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.36 (bs, 1Н), 8.90 (bs, 2Н), 8.50 (d, J=2.4 Гц, 1H), 8.04-8.03 (d, J=2.4 Гц, 1H), 7.88-7.86 (m, 1H), 7.64-7.59 (m, 2Н), 7.45-7.37 (m, 2H), 4.50-4.47 (m, 1H), 4.01-3.97 (m, 1H), 3.06-3.03 (m, 1H), 2.72-2.70 (m, 4H), 2.44-2.41 (m, 2H), 2.06-1.97 (m, 2H), 1.81-1.75 (m, 2H), 1.50-1.47 (m, 1H), 1.35-1.33 (m, 1H);

6-Амино-1'-[4-(4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-бутирил]-1',2',3',4',5',6'-гексагидро-[3,4']бипиридинил-5-карбонитрил ("A36")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.14 (В), [М+Н] 417;

¹H, ЯМP (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.23 (s, 1Н), 8.12 (s, 1Н), 8.07 (d, J=8.0 Гц, 1Н), 7.78-7.74 (m, 2Н), 7.58 (d, J=7.7 Гц, 1Н), 7.45 (t, J=8.0 Гц, 1Н), 6.70 (s, 2Н), 4.52-4.48 (m, 1H), 3.99-3.95 (m, 1Н), 3.03 (t, J=12.5 Гц, 1H), 2.67-2.63 (m, 4Н), 2.43-2.40 (m, 2Н), 2.01-1.94 (m, 2Н), 1.73-1.67 (m, 2Н), 1.53-1.49 (m, 1Н), 1.39-1.36 (m, 1Н);

8-Фтор-2-(4-{4-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-бензоил]-пиперидин-1-ил}-4-оксобутил)-3Н-хиназолин-4-он ("A37")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.32 (В), [М+Н] 480;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.36 (bs, 1Н), 7.93 (d, J=8.4 Гц, 2Н), 7.88 (d, J=2.4 Гц, 1H), 7.66-7.59 (m, 3Н), 7.45-7.40 (m, 1H), 5.18 (s, 1Н), 4.39-4.36 (m, 1Н), 3.96-3.92 (m, 1Н), 3.67-3.64 (m, 1Н), 3.20-3.14 (m, 1H), 2.74-2.72 (m, 1Н), 2.68-2.64 (m, 2Н), 2.44-2.41 (m, 2Н), 2.00-1.94 (m, 2Н), 1.79-1.76 (m, 2Н), 1.53-1.43 (m, 7Н), 1.36-1.30 (m, 1H);

2-(4-{4-[4-(1-Гидрокси-1-метилэтил)-бензоил]-пиперидин-1-ил}-4-оксобутил)-3Н-хиназолин-4-он ("A38")

бесцветное твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 2.98 (В), [М+Н] 462;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.10 (s, 1Н), 8.07 (dd, J=1.24, 7.88 Гц, 1H), 7.93 (d, J=8.44 Гц, 2Н), 7.78-7.74 (m, 1Н), 7.62-7.58 (m, 3Н), 7.47-7.43 (m, 1H), 5.20 (s, 1Н), 4.38 (d, J=13.00 Гц, 1Н), 4.15 (d, J=171.00 Гц, 1H), 3.94-3.65 (m, 1H), 3.33-3.14 (m, 1Н), 2.76-2.66 (m, 1H), 2.66-2.50 (m, 2Н), 2.49-2.39 (m, 2Н), 2.00-1.94 (m, 2Н), 1.80-1.77 (m, 2Н), 1.51-1.43 (m, 1H), 1.35-1.33 (m, 6Н), 1.32-1.22 (m, 1Н);

6-Фтор-2-(4-{4-[4-(1-гидрокси-1-метилэтил)-бензоил]-пиперидин-1-ил}-4-оксобутил)-3Н-хиназолин-4-он ("А39")

желтое твердое вещество;

ВЭЖХ/МС 3.28 (В), [М+Н] 480;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.30 (s, 1Н), 7.93 (d, J=8.48 Гц, 2Н), 7.75-7.72 (m, 1Н), 7.69-7.60 (m, 4Н), 5.18 (s, 1H), 4.38 (d, J=12.88 Гц, 1H), 3.92 (d, J=13.44 Гц, 1Н), 3.90-3.65 (m, 1Н), 3.32-3.14 (m, 1Н), 2.76-2.64 (m, 1Н), 2.62-2.48 (m, 2Н), 2.43-2.39 (m, 2Н), 1.99-1.92 (m, 2Н), 1.77-1.60 (m, 2Н), 1.51-1.43 (m, 7Н), 1.33-1.31 (m, 1Н).

Пример 4

Синтез 2-{4-[4-(1-метил-1Н-имидазол-2-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она ("А40")

К суспензии 4-(4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)-масляной кислоты (48.8 мг, 0.21 ммоль), дигидрохлорида (1-метил-1Н-имидазол-2-ил)-пиперидин-4-илметанона (66.7 мг, 1.20 ммоль) и гексафторфосфата [диметиламино-([1,2,3]триазоло[4,5-b]пиридин-3-илокси)-метилен]-диметиламмония (HATU, 119 мг, 0.31 ммоль) в ДМФА (2.0 мл) добавляли N-этилдиизопропиламин (213 мкл, 1.25 ммоль) и полученный в результате прозрачный раствор перемешивали в течение 4 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь непосредственно хроматографировали на обращенно-фазовой колонке с силикагелем смесью вода/ацетонитрил/0.1%муравьиная кислота в качестве элюента. Фракции, содержащие продукт, объединяли. Ацетонитрил удаляли в вакууме и к оставшемуся раствору добавляли насыщенный раствор NаНСО₃. Водную суспензию экстрагировали дихлорметаном. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и упаривали с получением 2-{4-[4-(1-метил-1Н-имидазол-2-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-она в виде бледно-желтого твердого вещества;

ВЭЖХ/МС 1.53 (С), [М+Н] 408;

¹Н ЯМР (400 МГц, Т=363К, ДМСО-d₆) δ 11.85 (brs, 1Н), 8.10 (dd, J=7.9, 1.3 Гц, 1Н), 7.79-7.72 (m, 1Н), 7.62-7.57 (m, 1H), 7.47-7.41 (m, 2Н), 7.13-7.09 (m, 1H), 3.94 (s, 3Н), 3.83 (tt, J=11.1, 3.9 Гц, 1Н), 2.69 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.45 (t, J=7.3 Гц, 2Н), 2.03 (d, J=7.4 Гц, 2Н), 1.95-1.77 (m, 2Н), 1.53 (d, J=9.2 Гц, 2Н).

Следующие соединения получали аналогично

2-{4-[4-(1-Метил-1Н-пиразол-4-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А41")

ВЭЖХ/МС 1.49 (С), [М+Н] 408;

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12.12 (s, 1Н), 8.42 (s, 1Н), 8.07 (dd, J=7.9, 1.2 Гц, 1H), 7.95 (d, J=0.6 Гц, 1H), 7.79-7.72 (m, 1Н), 7.59 (d, J=7.8 Гц, 1Н), 7.48-7.42 (m, 1Н), 4.39 (d, J=13.0 Гц, 1Н), 3.93 (d, J=13.6 Гц, 1Н), 3.88 (s, 3Н), 3.22 (tt, J=11.3 Гц, 3.7, 1Н), 3.17-3.06 (m, 1H), 2.74-2.61 (m, 3Н), 2.42 (td, J=7.2, 2.5 Гц, 2Н), 1.97 (р, J=7.3 Гц, 2Н), 1.76 (d, J=13.0 Гц, 2Н), 1.58-1.43 (m, 1Н), 1.43-1.27 (m, 1Н);

6,8-Дифтор-2-{4-[4-(1-метил-1Н-пиразол-4-карбонил)-пиперидин-1-ил]-4-оксобутил}-3Н-хиназолин-4-он ("А42")

ВЭЖХ/МС 1.20 (А); [М+Н] 444;

¹Н ЯМР (500 МГц, ДMCO-d₆) δ 12.45 (s, 1Н), 8.43 (s, 1Н), 7.95 (d, J=0.7 Гц, 1H), 7.76 (ddd, J=10.4, 9.0, 2.9 Гц, 1Н), 7.61 (ddd, J=8.4, 2.9, 1.3 Гц, 1Н), 4.47-4.29 (m, 1Н), 3.95 (d, J=13.5 Гц, 1Н), 3.88 (s, 3Н), 3.22 (tt, J=11.4, 3.7 Гц, 1Н), 3.12 (t, J=11.9 Гц, 1Н), 2.67 (m, 3Н), 2.43 (td, J=7.4, 1.9 Гц, 2Н), 1.97 (р, J=7.4 Гц, 2Н), 1.81-1.71 (m, 2Н), 1.58-1.42 (m, 1H), 1.40-1.27 (m, 1Н);

Следующее примеры относятся к лекарственным средствам:

Пример А: Флаконы для инъекций

рН раствора 100 г активного компонента формулы I и 5 г Na₂HPO₄ в 3 л бидистиллированной воды устанавливают на 6.5, используя 2 н. соляную кислоту, стерилизуют фильтрацией, переносят во флаконы для инъекций, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждый флакон для инъекций содержит 5 мг активного компонента.

Пример Б: Суппозитории

Смесь 20 г активного компонента формулы I расплавляют с 100 г соевого лецитина и 1400 г какаового масла, разливают в пресс-формы и позволяют охладиться. Каждый суппозиторий содержит 20 мг активного компонента.

Пример В: Раствор

Раствор приготавливают из 1 г активного компонента формулы I, 9.38 г NaH₂PO₄•2 Н₂O, 28.48 г Na₂HPO₄•12 Н₂O и 0.1 г бензалконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. рН раствора устанавливают на 6.8 и объем раствора доводят до 1 л и стерилизуют путем облучения. Этот раствор может использоваться в форме глазных капель.

Пример Г: Мазь

500 мг активного компонента формулы I смешивают с 99.5 г вазелина в асептических условиях.

Пример Д: Таблетки

Смесь 1 кг активного компонента формулы I, 4 кг лактозы, 1.2 кг картофельного крахмала, 0.2 кг талька и 0.1 кг стеарата магния спрессовывают для получения таблеток обычным способом таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного компонента.

Пример Е: Драже

Таблетки спрессовывают аналогично примеру Д и затем покрывают обычным способом покрытием из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.

Пример Ж: Капсулы

2 кг активного компонента формулы I помещают в твердые желатиновые капсулы обычным способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного компонента.

Пример 3: Ампулы

Раствор 1 кг активного компонента формулы I в 60 л бидистиллированной воды стерилизуют фильтрацией, переносят в ампулы, лиофилизируют в стерильных условиях и запечатывают в стерильных условиях. Каждая ампула содержит 10 мг активного компонента.

1. Соединения формулы I

в которой

Z означает

X означает СН или N,

R¹ означает Н,

R² означает Н или F,

R³ означает Н, СН₃ или F,

R⁴ означает Н, CN, ОСН₃, 1-этил-1Н-пиразол-4-ил, 1-(2-метоксиэтил)-1Н-пиразол-4-ил или 1-(2-пирролидин-1-илэтил)-1Н-пиразол-4-ил,

R⁵ означает Н, СН₃, F или ОСН₃,

R⁶ означает CN или 2-пиримидинил,

R⁷ означает Het²,

Het² означает пиразолил или имидазолил, каждый из которых может быть замещен посредством А,

А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий от 1 до 6 атомов С, где от 1 до 3 атомов Н могут быть заменены на F и/или ОН,

и их фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединения по п. 1, выбранные из группы:

и их фармацевтически приемлемые соли.

3. Способ получения соединений формулы I по пп. 1, 2 и их фармацевтически приемлемых солей, который отличается тем, что соединение формулы II

в которой Z имеют значения, указанные в п. 1,

подвергают реакции

с соединением формулы III

в которой R¹, R² и R³ имеют значения, указанные в п. 1,

и L означает Cl, Br, I или свободную или реакционно-способно функционально модифицированную ОН группу,

и/или

основание или кислоту формулы I превращают в одну из его(ее) солей.

4. Лекарственное средство, обладающее свойствами ингибитора TANK и/или PARP, содержащее в эффективном количестве по меньшей мере одно соединение формулы I и/или его фармацевтически приемлемые соли, и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.