Способ оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга

Авторы патента:

Васильева Татьяна Владимировна (RU)

Гусякова Оксана Анатольевна (RU)

Халиулин Алмаз Вадимович (RU)

Селезнева Инна Александровна (RU)

Габрильчак Анастасия Ивановна (RU)

Радомская Виктория Марковна (RU)

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2672471:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга, включающий подсчет количества мегакариоцитов в костном мозге, отличающийся тем, что исследуют аспират костного мозга в объеме 0,3-0,5 мл, который переносят в пробирку с ЭДТА, центрифугируют при 3000 об/мин 5 минут, отбирают 250-400 мкл бесклеточной миелоплазмы и проводят ее биохимическое исследование с определением активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы методами, рекомендуемыми IFCC; рассчитывают показатель метаболической активности мегакариоцитарного ростка (ПМАМ) по формуле: ПМАМ=А*100/В+С, где А - количество мегакариоцитов в 1 мкл костного мозга; В - активность аланинаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; С - активность аспартатаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; ПМАМ <10,9 свидетельствует о снижении метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ >15,9 свидетельствует о высокой метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ от 10,9 до 15,9 свидетельствует о нормальной метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии, цитологии, патоморфологии и может быть использовано как способ оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга.

Известен способ оценки активности мегакариоцитарного ростка костного мозга по определению количества тромбоцитов, основанного на использовании кондуктометрического метода автоматических гематологических анализаторов, связанного с измерением величины электрического импульса, возникающего как результат изменения сопротивления между двумя электродами трансдьюсера, при прохождении через них клеток крови. Недостатком данного способа является исследование периферической крови без учета интенсивности обмена и микроокружения костного мозга, ориентировка только на количественные характеристики тромбоцитов и косвенность полученных данных. Так же существуют трудности при дифференцировке макротромбоцитов, эритроцитов с малым объемом и их фрагментов (шизоцитов) и др., что приводит к искажению количества тромбоцитов. [1].

Существует способ определения способности клеток костного мозга к делению [2] и активности клеток костного мозга [3], заключающийся в исследовании флуоресценции ядросодержащих клеток костного мозга, обработанных иодид 2-(n-диметиламиностирил)-1-метилпиридинием. Общими недостатками последних двух способов являются комплексная оценка пролиферативного потенциала костного мозга, без разделения на разные клеточные линии и невозможности оценки состояния мегакариоцитарного ростка. Следует отметить, что в данных способах отсутствует стандартизация условий проведения исследования, так как в исследуемом материале в силу разного возраста, пола и состояния исходно неодинаковое количество ростовых факторов.

В качестве аналога можно использовать публикацию Л.П. Тер-Татевосян и др. [4] в которой изучали влияние обогащенного пролином полипептида PRP-1 на активность ферментов углеводно-фосфорного обмена у интактных крыс и крыс, подвергнутых фармакологической десимпатизации 6-гидроксидофамином (6-OHDA) (40 мг/кг) в гомогенатах костного мозга и селезенки. В этом способе на холоде извлекали костный мозг, селезенку и готовили гомогенат на физиологическом растворе. В полученных гомогенатах определяли активность щелочной фосфатазы, кислой фосфатазы и гликогенфосфорилазы. Существенным недостатком является то, что изучают гомогенат костного мозга, при получении которого разрушаются и лизосомы, протеазы которых способны разрушить ферменты других видов обмена и исказить результаты.

Известен способ количественной оценки мегакариоцитарного ростка костного мозга, основанный на подсчете количества мегакариоцитов в камере Фукса-Розенталя [5]. Недостатками данного метода являются его трудоемкость, неточность, так как часто пропускаются мелкие, молодые формы мегакариоцитов, а также высока вероятность принятия других крупных клеток костного мозга, таких как остеокласты, многоядерные плазматические клетки, крупные макрофаги и др., за мегакариоциты. Данный способ принят за прототип [5].

Целью изобретения является разработка способа оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга.

Эта цель достигается тем, что исследуют полученный стандартным методом аспират костного мозга в объеме 0,3-0,5 мл, который переносят в пробирку с ЭДТА, пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, далее отбирают бесклеточную миелоплазму в объеме 250-400 мкл и проводят ее биохимическое исследование с определением активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы методами, рекомендуемыми IFCC; рассчитывают показатель метаболической активности мегакариоцитарного ростка (ПМАМ) по формуле: ПМАМ=А*100/В+С, где А - количество мегакариоцитов в 1 мкл костного мозга; В - активность аланинаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; С - активность аспартатаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; ПМАМ<10,9 свидетельствует о снижении метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ>15,9 свидетельствует о высокой метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ от 10,9 до 15,9 свидетельствует о нормальной метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга. Способ позволяет быстро, просто оценить метаболическую активность мегакариоцитарного ростка.

Способ реализуют следующим способом: исследуют полученный стандартным методом аспират костного мозга в объеме 0,3-0,5 мл, который переносят в пробирку с ЭДТА, пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, далее отбирают бесклеточную миелоплазму в объеме 250-400 мкл и проводят ее биохимическое исследование с определением активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы методами, рекомендуемыми IFCC, а именно без использования кофермента пиридоксальфосфат; рассчитывают показатель метаболической активности мегакариоцитарного ростка (ПМАМ) по формуле: ПМАМ=А*100/В+С, где А - количество мегакариоцитов в 1 мкл костного мозга; В - активность аланинаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; С - активность аспартатаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; ПМАМ<10,9 свидетельствует о снижении метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ>15,9 свидетельствует о высокой метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ от 10,9 до 15,9 свидетельствует о нормальной метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга.

Для того чтобы разработать критерий оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка были проанализированы образцы периферической крови и костного мозга у 128 больных с впервые выявленной идиопатической тромбоцитопенической пурпурой (ИТП). Известно много гематологических заболеваний, связанных с патологией мегакариоцитарного ростка. И у большинства из них происходит изменение и других ростков кроветворения. Как мы видим из приложения №1 таблицы №1 «Показатели миелограммы у пациентов с ИТП», установлено, что у всех пациентов с ИТП достоверно увеличено количество мегакариоцитов в среднем до 154,4±23,3×10⁶/л, тогда как другие ростки кроветворения остались без изменений. Именно поэтому для выведения критерия оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка нами была выбрана группа пациентов с ИТП.

Среди обследуемой группы 79 женщин и 43 мужчин в возрасте от 19 до 88 лет (медиана - 55). Критериями исключения служили наличие заболеваний, которые могут привести к тромбоцитопении (вирусные гепатиты, коллагенозы и др.), а также сочетание ИТП с анемиями, так как при этом наблюдаются изменения не только мегакариоцитарного, но и эритроидного ростков костного мозга [6]. Обследование больных включало общепринятый в гематологии перечень: клинический осмотр, общий анализ крови, биохимический анализ, миелограмма, и в дополнение биохимическое исследование миелоплазмы. Активность аланинаминотрансферазы (АЛАТ) и аспартатаминотрансферазы (АСАТ) определяли методами, рекомендуемыми IFCC (Международной Федерации Клинической Химии и Лабораторной Медицины). Данная группа методов в составе диагностического набора не использует кофермент пиридоксальфосфат. Поскольку методы, рекомендованные IFCC, более распространены в применении в современных лабораториях, они и были выбраны нами для данного исследования. Число тромбоцитов в периферической крови у данных пациентов было менее 100*10⁹/л и составило в среднем 40,7±3,1*10⁹/л. Полученные результаты обрабатывали с использованием пакета программ STATISTICA (ver. 6.0). Определяли среднее арифметическое (М), ошибку среднего (m; различия между группами оценивали с помощью t - критерия Стьюдента и U-критерий Манна-Уитни, и различия считали значимыми при р<0,05. Результаты исследования миелоплазмы приведены в приложении №2 таблице №2 «Показатели биохимического исследования миелоплазмы у пациентов с ИТП». Установлено достоверное снижение активности аланинаминотрансферазы до 13,8±4,5 Е/л и аспартатаминотрансферазы до 36,41±6,89 Е/л у пациентов с ИТП.

При проведении корреляционного анализа между количеством мегакариоцитов в костном мозге и ферментами в миелоплазме выявлена высокая степень обратной взаимосвязи с аланинаминотрансферазой (r=-0,728) и с аспартатаминотрансферазой (r=-0,743). То есть, доказано, что существует тесная связь процессов трансаминирования с количеством мегакариоцитов.

Основываясь на выявленной корреляции, эмпирическим путем был разработан показатель метаболической активности мегакариоцитарного ростка (ПМАМ), который рассчитывается по формуле:

ПМАМ=А* 100/В+С, где

А - количество мегакариоцитов в 1 мкл костного мозга;

В - активность аланинаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л;

С - активность аспартатаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л.

Нами было определено, что в норме значения данного показателя колеблются в диапазоне 10,9-15,9. Таким образом, получение результата ниже 10,9 говорит о сниженной метаболической активности мегакариоцитарного ростка, а получение результата выше 15,9 говорит наоборот о высокой метаболической активности мегакариоцитарного ростка.

Способ иллюстрируется клиническими примерами.

Пример 1.

Пациентка К., 52 года, поступила в стационар с количеством тромбоцитов в общем анализе крови 14×10⁹/л. При подсчете миелограммы обнаружено расширение мегакариоцитарного ростка - количество мегакариоцитов 157×10⁶/л. Клеточность костного мозга - 112×10⁹/л. Пациентке был выставлен диагноз «идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура» (ИТП). При исследовании миелоплазмы предлагаемым способом активность АЛАТ оказалась 12,8 Ед/л, ACAT - 40,4 Ед/л. Далее рассчитывался ПМАМ, который оказался равным 2951,12. Таким образом, можно отметить, что в данном случае наблюдается высокая метаболическая активность мегакариоцитарного ростка.

Пример 2.

Пунктат костного мозга донора при исследовании содержал количество мегакариоцитов 73,9×10⁶/л, клеточность костного мозга - 124×10⁹/л. При исследовании миелоплазмы предлагаемым способом активность АЛАТ оказалась 259,8 Ед/л, АСАТ - 269,4 Ед/л. Далее рассчитывался ПМАМ, который оказался равным 13,9. Таким образом, можно отметить, что в данном случае наблюдается нормальная метаболическая активность мегакариоцитарного ростка.

Пример 3.

Пациентка Р., 49 лет, поступила в стационар с количеством тромбоцитов в общем анализе крови, которое составило 28×109/л. Количество мегакариоцитов в костном мозге - 17×106/л. Клеточность костного мозга равна 49,8×109/л. После дообследования был выставлен диагноз «апластическая анемия». При исследовании миелоплазмы предлагаемым способом активность АЛАТ оказалась 125,6 Ед/л, АСАТ - 274,0 Ед/л. Далее рассчитывался ПМАМ, который оказался равным 4,25. Таким образом, можно заключить, что в данном случае отмечается низкая метаболическая активность мегакариоцитарного ростка. Способ позволяет быстро, просто оценить метаболическую активность мегакариоцитарного ростка. Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии, цитологии, патоморфологии.

Источники информации

1. Патент на изобретение RU №2289133

2. Патент на изобретение № RU 2537141

3. Патент на изобретение RU №2488826

4. Тер-Татевосян Л.П., Саркисян Л.В., Ераносян Л.А. и др. Ферменты углеводно-фосфорного обмена в костном мозге и селезенке при десимпатизации. Эффекты нейропептида PRP-1 // Нейрохимия.- 2009.- т. 26, №4.- С. 333-336.

5. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования под ред. Е.А. Кост. Москва "Медицина" 1975 г.

6. Evstatiev R., Bukaty A., Jimenez K. et al. Iron deficiency alters megakaryopoiesis and platelet phenotype independent of thrombopoietin // Am. J. Hematol.- 2014.- Vol. 89.- P. 524-529.

Примечание: * отличие от нормы с уровнем достоверности р<0,005.

Примечание: * - отличие от нормы с уровнем достоверности р<0,005.

Способ оценки метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга, включающий подсчет количества мегакариоцитов в костном мозге, отличающийся тем, что исследуют полученный стандартным методом аспират костного мозга в объеме 0,3-0,5 мл, который переносят в пробирку с ЭДТА, пробирку центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут, далее отбирают бесклеточную миелоплазму в объеме 250-400 мкл и проводят ее биохимическое исследование с определением активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы методами, рекомендуемыми IFCC; рассчитывают показатель метаболической активности мегакариоцитарного ростка (ПМАМ) по формуле: ПМАМ=А*100/В+С, где А - количество мегакариоцитов в 1 мкл костного мозга; В - активность аланинаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; С - активность аспартатаминотрансферазы в миелоплазме, Е/л; ПМАМ <10,9 свидетельствует о снижении метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ >15,9 свидетельствует о высокой метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга; ПМАМ от 10,9 до 15,9 свидетельствует о нормальной метаболической активности мегакариоцитарного ростка костного мозга.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы определения статуса плоидности хромосомы или сегмента хромосомы у вынашиваемого плода.

Способ диагностики субклинической стадии диабетической нейропатии // 2671630

Изобретение относится к области медицины, неврологии, эндокринологии и касается способа диагностики субклинической стадии диабетической нейропатии. Сущность способа: у пациента с нарушением углеводного обмена исследуют сывороточный уровень мозгового нейротрофического фактора (BDNF) с помощью иммуноферментного анализа, дополнительно определяют уровни высокоспецифичного тропомиозинового рецептора киназы (Trk-B), васкулоэндотелиального фактора роста (VEGF) и уровень гликемии натощак (Glu).

Объективная оценка наличия тревоги и стресса у беременных путём определения изменения концентрации α-амилазы слюны во время операции кесарево сечение // 2671580

Изобретение относится к клинической медицине, а именно к анестезиологии и реанимации как способ объективной оценки наличия тревоги и стресса у беременных во время операции кесарево сечение.

Способ дифференциации штаммов vibrio cholerae о1 биовара эль тор с различной эпидемиологической значимостью методом мультиплексной полимеразной цепной реакции // 2671412

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и предназначено для дифференциации штаммов V. cholerae биовара Эль Тор.

Способ прогноза объема циторедуктивной операции у больных распространенным раком яичников после завершения третьего курса неоадъювантной химиотерапии // 2671409

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам интерпретации результатов лабораторных анализов, и может быть использовано в качестве способа прогноза объема циторедуктивной операции у больных распространенным раком яичников после завершения третьего курса неоадъювантной химиотерапии.

Отличные от человека животные, содержащие гуманизированный ген индуцирующего пролиферацию лиганда // 2671101

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированному животному-грызуну, экспрессирующему гуманизированный белок April, а также к способу его получения.

Способ обоснования возникновения у детей негативного эффекта в виде заболевания костной системы, ассоциированного с аэрогенным воздействием соединений фтора // 2670769

Изобретение относится к медицине и предназначено для обоснования с помощью маркерных лабораторных показателей негативных медико-биологических эффектов у детей при воздействии соединений фтора.

Способ определения показаний для срочного родоразрешения при преэклампсии // 2670747

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для определения показаний для срочного родоразрешения при преэклампсии в гестационном сроке по меньшей мере 22 недели беременности.

Индивидуализированные противоопухолевые вакцины // 2670745

Настоящее изобретение относится к предоставлению вакцин, которые специфичны к опухолям пациентов и потенциально применимы для иммунотерапии первичной опухоли, а также метастазов опухоли.

Способ прогнозирования преждевременных родов в сроке гестации 24-34 недели // 2670672

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и лабораторной диагностике, и может быть использовано для прогнозирования наступления преждевременных родов в сроке гестации 24-34 недели.

Способ непрерывного мониторинга содержания аналита в крови // 2672354

Изобретение относится к области медицины. Способ непрерывного мониторинга концентрации аналита в крови с массой молекул 400 Дальтон и менее заключается в том, что в тело пациента имплантируют устройство мониторинга и посредством бесконтактного датчика непрерывно замеряют концентрацию аналита в крови и передают сигналы о концентрации аналита в крови на монитор.

Способ прогнозирования исходов вспомогательных репродуктивных технологий при трубном бесплодии // 2672267

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования исходов вспомогательных репродуктивных технологий при трубном бесплодии на догоспитальном этапе.

Способ диагностики жерёбости у кобыл // 2672261

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой способ диагностики жеребости у кобыл, включающий воздействие на образцы крови ультразвуковой волной с несущей частотой 0,88 МГц, интенсивностью 0,2 Вт/см2, частотой модуляции 10000 Гц, с экспозицией 25 с, проведение анализа цитоморфологических особенностей клеток крови методами световой микроскопии, и в случае агрегации эритроцитов на фоне отсутствия анизо- и пойкилоцитоза диагностируют наличие жеребости.

Способ лабораторной диагностики ранних стадий жерёбости кобыл // 2672114

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой способ лабораторной диагностики ранних стадий жеребости кобыл, включающий воздействие в течение 30 с на термостатируемые образцы крови ультразвуковой волной интенсивностью 0,05 Вт/см2 с несущей частотой 0,88 МГц, частотой модуляции 1100 кГц и анализ морфологического состояния клеток методами световой микроскопии, в случае агрегации лимфоцитов диагностируют наличие жеребости.

Обнаружение тест-полоски контрольно-измерительного устройства для измерения аналита // 2672111

Группа изобретений относится к области контрольно-измерительных систем для измерения аналита в крови. Контрольно-измерительное устройство для измерения аналита включает соединитель порта для тест-полоски, схему входного каскада, электрически соединенную с аналитической тест-полоской и содержащую операционный усилитель, микроконтроллер и сигнальную линию обнаружения тест-полоски, соединенную с источником напряжения питания и с землей, при этом соединение заземления выполнено проходящим через вставленную тест-полоску и через выходной узел операционного усилителя.

Способы неинвазивного пренатального установления плоидности // 2671980

Способ диагностики вида рефлюкса при гастроэзофагеальной рефлюксной болезни // 2671962

Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики высоких дуоденогастроэзофагеальных, кислых, слабокислых и слабощелочных рефлюксов.

Способ прогнозирования риска отторжения почки до ее трансплантации // 2671637

Изобретение относится к медицине и может быть использовано как критерий прогноза степени риска отторжения почки до ее трансплантации. В крови реципиента до хирургического вмешательства определяют в комплексе уровень концентрации цитокинов: IL-1RA, IL-2, IL-6, Eotaxin, МСР-1, MIP-1alpha, MIP-1beta, SDF-1alpha, GM-CSF, BDNF, LIF и по уровню значений цитокинов прогнозируют низкую степень риска отторжения, неопределенную или значительную.

Способ неинвазивной оценки среднего уровня нейротрофического фактора мозга (bdnf) в плазме крови на основе показателей микроэлементного анализа волос // 2671636

Изобретение относится к медицине, в частности к неврологии, и может быть использовано при лабораторной диагностике в качестве способа неинвазивной оценки среднего уровня нейротрофического фактора мозга (BDNF) в плазме крови на основе показателей микроэлементного анализа волос.

Способ определения риска рецидива поверхностного рака мочевого пузыря после оперативного лечения // 2670655

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для определения риска рецидива поверхностного рака мочевого пузыря после оперативного лечения.

Способ прогнозирования внутрипеченочного холестаза у беременных женщин // 2672598

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, гастроэнтерологии, акушерству, и касается способа прогнозирования холестатического гепатоза у беременных женщин. Способ включает: сбор жалоб и проведение лабораторных методов обследования, отличающийся тем, что в качестве прогностических параметров определяют наличие и выраженность кожного зуда, наличие изжоги, уровень аланинаминотрансферазы, уровень щелочной фосфатазы, уровень холестерина. Далее каждому прогностическому параметру присваивают цифровое значение, определяемое путем произведения соответствующих ему шифра (n) и коэффициента классификационной функции (k), значение которого для выраженности кожного зуда составляет 0,826, для наличия изжоги - 1,119, для уровня аланинаминотрансферазы - 0,001, для уровня щелочной фосфатазы - 0,006, для уровня холестерина - 0,151, где при отсутствии кожного зуда n составляет 0, при локализованном зуде кожи n составляет 1, при диффузном зуде кожи n составляет 2, при отсутствии изжоги n составляет 0, при наличии изжоги n составляет 1, для аланинаминотрансферазы n составляет значение ее уровня в Ед/л, для щелочной фосфатазы n составляет значение ее уровня в Ед/л, для холестерина n составляет значение его уровня в ммоль/л. Затем полученные цифровые значения суммируют с добавлением к полученной сумме константы (-3,811), таким образом, получают значение прогностического коэффициента, по которому осуществляют прогноз наличия холестатического гепатоза у беременной женщины. При положительном значении прогностического коэффициента беременных женщин относят к группе с холестатическим гепатозом, а при его отрицательном значении - к группе без холестатического гепатоза. Изобретение позволит повысить достоверность, информативность, обеспечить своевременную диагностику внутрипеченочного холестаза беременных и назначение комплекса мероприятий, направленных на профилактику осложнений ХГБ, а также облегчение алгоритмизации и ведения беременных пациенток. 14 табл., 2 пр.