Средство для консервации донорской роговицы


A01N1/02 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2674585:

Федеральное государственное автономное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Средство для консервации донорской роговицы в режиме органотипической консервации содержит на 100 мл: среда 199 - 25,0 мл, среда Хэма F-10 - 25,0 мл, хондроитин-сульфат А – 0,5 г, декстран-40 - 5,0 г, гентамицин-сульфат - 0,00014 г, амфотерицин В - 0,00015 г, среда Дюльбекко-Игла - остальное до 100 мл и препарат Полудан – 1000 ЕД на 100 мл. Предлагаемое средство для консервации донорской роговицы глаза обеспечивает способность кератоцитов вырабатывать эндогенный интерферон при помощи индукторов β-интерфероногенеза для предупреждения репликации герпесвирусов и обеспечения эффективной предоперационной профилактики передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для вирусной деконтаминации, профилактики передачи герпесвирусов от донора к реципиенту и улучшения трансплантационных качеств для сквозной кератопластики.

Известно средство для консервации донорских роговиц глаза (Патент РФ №2450515), содержащее: среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотеррицин В и среду Дюльбекко-Игла, дополнительно содержит препарат NeyDIL №37 St.III (Р/У ЛРС-008827/08-061108) при следующем соотношение компонентов, масс. %: Среда 199 25,0, Среда Хэма F-10 25,0, Хондроитин-сульфат А 0,5, Декстран-40 5,0, Гентамицин-сульфат 0,00014, Амфотерицин В 0,00015, NeyDIL №37 St.III 0,00015, Среда Дюльбекко-Игла остальное.

Недостатком этой среды является то, что использованные регуляторные пептиды NeyDIL №37 St.III не являются индукторами β-интерфероногенеза, не способствуют выработке эндогенного интерферона для деконтаминации герпесвирусов, не обеспечивают эффективную профилактику передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту.

Задачей изобретения является создание многокомпонентного средства для консервации донорской роговицы в режиме органотипической консервации (при температуре 37°С), способствующего выработке эндогенного интерферона для деконтаминации герпесвирусов.

Техническим результатом является предупреждение репликации герпесвирусов и обеспечение эффективной предоперационной профилактики передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту из-за способности кератоцитов вырабатывать эндогенный интерферон при помощи индукторов β-интерфероногенеза.

Технический результат достигается тем, что данное средство для консервации донорской роговицы, в режиме органотипической консервации, содержащее среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, Гентамицин-сульфат, амфотерицин В и среду Дюльбекко-Игла, дополнительно содержит препарат Полудан.

Средство для консервации донорской роговицы глаза человека содержит на 100 мл раствора:

среду 199 25,0 мл
среду Хэма F-10 25,0 мл
хондроитин-сульфат А 0,5 г
декстран-40 5,0 г
гентамицин-сульфат 0,00014 г
амфотерицин В 0,00015 г
Полудан 1000 ЕД
среда Дюльбекко-Игла остальное.

При этом среда 199 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 25; Л-аргинина хлорид 70; аспарагиновая кислота 30; Л-цистеина хлорид - 0,0987; Л-цистина двунатриевая соль; Л глютаминовая кислота 66,82; Л-глютамин 100; глютатион 0,05; глицин 50; Л гистидина хлорид одноводный 21,88; Л гидрооксипролин 10; Л-изолейцин 20; Л-лейцин 60; Л лизина хлорид 70; Л-метионин 15; Л-фенилаланин 25; Л-пролин 40; Л-серин 25; Л-треонин 30; Л-триптофан 10; Л-тирозина двунатриевая соль - 49,72; Л-валин 25; Л-аскорбиновая кислота 0,05; биотин 0,01; кальциферол 0,1; Д-кальция пантотенат 0,01; холина хлорид 0,5; фолиевая кислота - 0,01; и-инозитол 0,05; менафтона натрия бисульфат трехводный 0,019; никотиновая кислота 0,025; никотинамид 0,025; пара-амино-бензойная кислота 0,05; пиридоксальхлорид 0,025; пиридоксинхлорид 0,025; рибофлавин 0,01; тиамина хлорид 0,01; Д-Л--токоферола фосфата двунатриевая соль 0,01; витамина А-ацетат 0,1147; кальция хлорид двухводный 185,5; железа нитрат девятиводный 0,01; калия хлорид 400; калия дегидроортофосфат 60; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 8000; натрия гидроортофосфат 47,5; аденина сульфат 10; 5-АМФ 0,2; АТФ двунатриевая соль 10; холестерол 0,2; 2-дезоксирибоза 0,5; Д-глюкоза 1000; гуанина хлорид - 0,3; гипоксантин 0,3; Д-рибоза 0,5; натрия ацетата 36,71; натриевая соль фенола красного 17; тимин 0,3; твин 80-5; урацил 0,3; ксантин 0,3.

Среда Хэма F-10 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 8,91; Л-аргинина хлорид 210,7; Л-аспарагин 1-водный - 15,01; Л-аспарагиновая кислота 13,31; Л-цистеина хлорид 31,53; Л-глютаминовая кислота 14,71; Л-глютамин 146,2; глицин 7,51; Л-гистидина хлорид одноводный 20,96; Л-изолейцин 2,62; Л-лейцин 13,12; Л-лизин 29,3; Л-метионин 4,48; Л-фенилаланин 4,96; Л-пролин 11,51; Л-серии 10,5; Л-треонин 3,57; Л-триптофан 0,61; Л-тирозина натриевая соль 2,25; Л-валин 3,51; биотин 0,024; Д кальция пантотенат 0,715; хлорид холина 0,698; фолиевая кислота 1,32; и-инозитол 0,541; никотинамид 0,611; пиридоксин-хлорид 0,206; рибофлавин 0,376; тиамина хлорид 1,012; витамин В12 1,36; кальция хлорид двухводный 44,1; сульфат меди пятиводный 0,0025; сульфат железа семиводный 0,8346; хлорид калия - 285; калия дегидрофосфат 83; магния сульфат семиводный 152,7; натрия хлорид 7400; натрия гидроортофосфат 156,2; цинка сульфат семиводный 0,0288; Д-глюкоза 1100; гипоксантин 4,08; липоевая кислота 0,206; натриевая соль фенола красного 12; натрия пируват 110; тимидин 0,727.

Среда Дюльбекко-Игла имеет следующий состав, мг/л: Л-аргинин 84; Л-цистина двунатриевая соль 56,78; Л-глютамин 584; глицин 30; Л-гистидина хлорид одноводный 42; Л-изолейцин 104,8; Л-лейцин 104,8; Л-лизина хлорид 146,2; Л-метионин 30; Л-фенилаланин - 66; Л-серии 42; Л-треонин 95,2; Л-триптофан 16; Л-тирозина двунатриевая соль 89,5; Л-валин 93,6; Д кальция пантотенат 4; холина хлорид 4; фолиевая кислота 4; и-инозитол 7; никотинамид 4; пиридоксаль-хлорид 4; рибофлавин 0,4; тиамина хлорид 4; кальция хлорид двухводный 264,9; нитрат железа девятиводный 0,1; калия хлорид 400; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 6400; натрия бикарбонат 3700; натрия дигидроортофосфат двухводный 141,3; Д-глюкоза 4500; натриевая соль фенола красного 15; натрия пируват 110.

Полудан (ЛС-002205), содержит полирибоадениловой кислоты калиевую соль (калия полирибоаденилат) 0,1 мг, полирибоуридиловой кислоты калиевую соль (калия полирибоуридилат) 0,107 мг; Вспомогательные вещества: натрий гидрофосфат (натрия фосфорнокислого 2-замещенного) 2,0 мг, калий дигидрофосфат (калия фосфорнокислого 1-замещенного безводного) 0,408 мг, натрий хлорид 8,5 мг.

Каждая в отдельности взятая среда, как-то: среда 199 как наиболее сложная по своему составу, среда Хэма F-10 и Среда Дюльбекко-Игла как наиболее универсальные, поддерживает высокую жизнеспособность чувствительных клеток перевиваемых линий. Однако для органных культур, которые в процессе культивирования остаются интактными и не относятся к перевиваемым линиям, требуется экспериментальный подбор соотношений нескольких сред, в зависимости от гистогенетической характеристики органной культуры. В этой связи для эндотелия трупной донорской роговицы, который относится к глиальной ткани, наиболее оптимальным является выбор трех сред - среда 199, среда Хэма F-10 и Среда Дюльбекко-Игла, в заявленных соотношениях, имитирующих аминокислотный и метаболический состав водянистой влаги передней камеры интактного глаза.

Хондроитин-сульфат А относится к цитопротекторам - вискоэлластикам, обладая соответствующим знаком и электронным зарядом, он образует поверхностную защитную пленку на клетках эндотелиального пласта роговицы. Тем самым предотвращается механическое повреждение и десквамация клеток эндотелия роговицы в процессе гипотермической консервации донорского материала.

Декстран с молекулярной массой 40000 D относится к высокомолекулярным онкотическим компонентам среды и, таким образом, подобранный в заявленной концентрации создает в среде онкотическое давление равное 320 млОсм/л, при котором предотвращается процесс набухания клеток и коллоидного вещества стромы донорской роговой оболочки в процессе длительной гипотермической консервации.

Для предотвращения роста патогенной микрофлоры добавлены: гентамицин-сульфат, оказывающий бактерицидное действие в отношении широкого спектра грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, и амфотерицин В, обладающий фунгицидным и фунгистатическим действиями.

Иммуностимулирующий препарат Полудан представляет собой биосинтетический полирибонуклеотидный комплекс полирибоадениловой и полирибоуридиловой кислот, является индуктором синтеза эндогенного интерферона. Обладает выраженной противовирусной и иммуномодулирующей активностью. Разрешен к применению в офтальмологии.

Заявленное средство для консервации донорской роговицы благодаря входящим в его состав компонентам в обозначенных концентрациях обладает выраженной иммуномодулирующей и противовирусной активностью, стимулирует функцию естественных иммунокомпетентных клеток.

В результате этого создаются условия для вирусной деконтаминации трупных донорских роговиц человека на этапе консервации, способствующие эффективной профилактике передачи герпесвирусной инфекции реципиентам после кератопластики.

Это подтверждают результаты исследования, в котором использовались жизнеспособные трупные роговицы человека, полученные из Глазного банка МНТК «Микрохирургия глаза» им. С.Н. Федорова в количестве 16 роговиц от 8 доноров, с наличием вируса простого герпеса типа I, верифицированного методом полимеразной цепной реакции (ПНР). Одна роговица от каждого донора являлась опытной, другая, парная, служила контрольным образцом.

Роговицы из опытной группы подвергались краткосрочной органотипической консервации при 33-38°С в течение 24 часов в заявленном средстве с Полуданом (препарат разрешен к применению в офтальмологии) для индукции кератоцитами β-интерфероногенеза. Через 24 часа роговицы подвергались гипотермической консервации в среде для консервации роговицы, полученной по патенту РФ №2069951, при 4°С в течение 2-х (n=4) и 6-ти (n=4) суток, затем выводились из эксперимента для проведения гистохимического анализа жизнеспособности эндотелия и анализа на наличие вирусов методом клеточного цитопатического эффекта (золотой стандарт). Контрольная группа роговиц подвергалась идентичному алгоритму исследования, за исключением состава среды, в которой вместо добавленного в опытной группе препарата Полудан, были использованы регуляторные пептиды, которые, по данным литературы, потенциально способны стимулировать интерфероногенез. Из всех консервационных сред 16-ти образцов роговиц до начала опыта и через 24 часа после нормотермической консервации отбирались аликвоты для проведения анализа на количественное содержание β-интерферона.

Эндотелий всех опытных и контрольных роговиц, по данным иммуноцитохимического анализа, оставался жизнеспособным в течение всех сроков наблюдения. Его потеря через 24 часа нормотермической консервации и через 2 и 6 сут гипотермической консервации была незначительной и не превышала 1,5%. Во всех опытных образцах после нормотермической консервации при сокультивировании роговиц на конфлуэнтном слое эпителиальных клеток не было получено цитопатического эффекта, что подтверждало полную вирусную деконтаминацию. В контрольных роговицах от тех же доноров при сокультивировании в 6 случаях из 8-ми был получен выраженный клеточный цитопатический эффект. Во всех опытных аликвотах сред после гипертермической консервации определялось наличие β-интерферона в 8-кратной концентрации по сравнению с аликвотами от контрольных роговиц, что экспериментально показало неспособность ближайшего аналога средства для консервации донорских роговиц, за счет входящих в его состав регуляторных пептидов, вырабатывать кератоцитами эндогенный β-интерферон.

Средство для консервации роговицы получают следующим образом: в условиях ламинарной комнаты в химически чистую и стерильную мерную колбу сливают вместе две среды: 25 мл среды 199 и 25 мл среды Хэма F-10. Далее последовательно вносят 0,00014 г гентамицин-сульфата, 0,00015 г амфотерицина В. Состав разделяют на две равные части по 25 мл и растворяют в первой части 5 г декстрана-40, а во второй части 0,5 г хондроитин-сульфата А путем медленного нанесения сухого вещества на поверхность жидкой смеси. После внесения указанных компонентов растворы оставляют до полного набухания на 80-120 минут, после чего полностью растворяют. Затем оба раствора сливают вновь вместе в мерную колбу, добавляют Полудан в количестве 1000 ЕД и добавляют среду Дюльбекко-Игла до метки 100 мл. Затем, после префильтрации через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм, полученные 100 мл средства для консервации роговицы, разливают по 20 мл во флаконы, с одновременной «Глубинной стерилизацией» через систему миллипоровых фильтров с диаметром пор 0,22 мкм. Флаконы укупориваются стерильными крышками и помещаются в холодильник для хранения при температуре +4°С не более суток, либо используются сразу при температуре +37°С.

Средство используют следующим образом. В условиях стерильного бокса выкраивают роговицу с ободком склеры диаметром 16 мм и помещают во флакон с предварительно подготовленным заявленным средством, плотно закрывают и консервируют при температуре +37°С в течение 24-х часов, после чего переносят в среду для консервации роговицы, полученную по патенту №2069951, в условия гипотермии (4-8°С) и хранят в ней.

Использование предлагаемого средства для консервации донорской роговицы в Глазном банке ФГАУ МНТК «Микрохирургия глаза» позволило обеспечить эффективную предоперационную профилактику передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту, благодаря способности вырабатывать эндогенный интерферон при помощи индуктора β-интерфероногенеза.

Средство для консервации донорской роговицы глаза человека, содержащее на 100 мл раствора:

среда 199 25,0 мл
среда Хэма F-10 25,0 мл
хондроитин-сульфат А 0,5 г
декстран-40 5,0 г
гентамицин-сульфат 0,00014 г
амфотерицин В 0,00015 г
Полудан 1000 ЕД
среда Дюльбекко-Игла остальное



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к криоконсервации биологических объектов. Предложенный способ подбора условий для криоконсервации биологических объектов в вязких средах с использованием гидратообразующих газов предусматривает внесение исследуемых криопротекторов в среду для криоконсервации, при этом: а) на первом этапе измеряют вязкость контрольного раствора одного или более криопротекторов, дополнительно содержащего наночастицы при его охлаждении в рабочем диапазоне температур от +20˚С до целевой температуры, выбранной в интервале от -10 до -130°С; б) на втором этапе измеряют вязкость раствора криопротектора или композиции криопротекторов, дополнительно содержащего наночастицы с пониженной концентрацией на 5-45% под давлением гидратообразующего газа в процессе охлаждении раствора; в) если значение вязкости криопротектора или композиции криопротекторов с пониженной концентрацией не достигает вязкости контрольного раствора вплоть до целевой температуры, то сниженную концентрацию криопротектора или композиции криопротекторов необходимо повышать и снова проводить измерение согласно пункту б); г) если же в интервале до целевой температуры значение вязкости криопротектора или композиции криопротекторов с пониженной концентрацией достигает значения параметра вязкости в контрольном растворе, то проводится третий этап.

Изобретение относится к медицине, в частности к хранению биологических образцов. Устройство для криоконсервации в закрытой системе для витрификации биологических образцов содержит удлиненный корпус, усеченный конус, проходящий от первого конца удлиненного корпуса, наконечник для сбора образцов, проходящий от указанного конуса в направлении, противоположном удлиненному корпусу, и удлиненный колпачок для герметичного закрытия биологического образца удлиненной полой камерой.
Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии человека, и может быть использовано для визуализации металлических стентов в коронарных артериях.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Амидное соединение представлено общей формулой (I) в которой каждая из A1, A2 и A3 представляет собой атом азота или CH группу, R1 представляет собой алкильную группу, каждый из R2 и R4 представляет собой галогеналкильную группу, R3 представляет собой алкильную группу, а m равен 0, 1 или 2, или его соль.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу сохранения клеток млекопитающего в течение длительного периода времени с использованием раствора для трансплантации клеток, содержащего 2,0-6,0% (масс./об.) трегалозы, либо соли указанной трегалозы, и 4,0-7,0% (масс./об.) декстрана, либо соли декстрана.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к консервации клеток. Предложены раствор для консервации клеток и способ его получения, способ консервации клеток, способ изготовления фиксированных клеток и способ анализа клеток.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения композиций, содержащих адгезивные плацентарные клетки. Способ включает: (а) контактирование адгезивных плацентарных клеток с раствором, включающим декстран и сывороточный альбумин человека (HSA), для получения раствора, содержащего клетки; (b) фильтрацию раствора, содержащего клетки, через 70 мкм – 100 мкм фильтр; (с) разбавление раствора, содержащего клетки, раствором, содержащим 5,5% декстрана 40, 10% HSA и 5% ДМСО, до содержания не более примерно 10±3х106 клеток/мл; (d) криоконсервацию клеток; (е) оттаивание клеток и (f) разбавление раствора, содержащего клетки, раствором для регенерации клеток, содержащим 5,5% декстрана 40 и 10% HSA.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и трансплантологии. Для получения органной культуры трабекулярной сети из кадаверного глаза человека проводят выполнение кругового разреза склеры и сосудистой оболочки, отделение переднего полюса глаза (ПСГ), удаление хрусталика, и разделение ПСГ на части.

Изобретение относится к области медицины, в частности к консервации и хранению биологических объектов. Способ консервации тромбоцитарной массы в газопроницаемом пакете включает: по меньшей мере частичное насыщение тромбоцитарной массы ксеноном под давлением, составляющим по меньшей мере 1,1 бар (0,11 МПа), при этом тромбоцитарная масса имеет температуру, составляющую по меньшей мере около 15°С; выдерживание тромбоцитарной массы в присутствии указанной газовой композиции в течение по меньшей мере 0,001 ч для достижения желаемого насыщения газообразным ксеноном; охлаждение до температуры хранения, которая составляет от 0,01 до 15°С.

Изобретение относится к пантовому оленеводству, в частности к способам консервирования пантов. Способ консервирования пантов маралов включает сортировку пантов на три группы по величине обхвата главного ствола между вторым и третьим отростками соответственно 12-15 см, 16-18 см, 19-21 см, двухдневную варку пантов путем погружения в горячую воду с отдыхом-остыванием после каждого погружения и чередованием ветровых и жаровых сушек.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Средство для консервации донорской роговицы в режиме органотипической консервации содержит на 100 мл: среда 199 - 25,0 мл, среда Хэма F-10 - 25,0 мл, хондроитин-сульфат А – 0,5 г, декстран-40 - 5,0 г, гентамицин-сульфат - 0,00014 г, амфотерицин В - 0,00015 г, среда Дюльбекко-Игла - остальное до 100 мл и препарат Полудан – 1000 ЕД на 100 мл. Предлагаемое средство для консервации донорской роговицы глаза обеспечивает способность кератоцитов вырабатывать эндогенный интерферон при помощи индукторов β-интерфероногенеза для предупреждения репликации герпесвирусов и обеспечения эффективной предоперационной профилактики передачи герпесвирусной инфекции от донора к реципиенту.

Наверх