Функционализованные соединения бензопирана и их применение

Изобретение относится к соединению общей формулы (I)

,

где R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₆ алкила, R² представляет собой ОН, R³ выбран из группы, состоящей из: Н, C₁-C₆ алкила и галогена, радикалы с R¹⁰ по R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, С₁-С₆ алкила, С₁-С₆ алкокси и галогена, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, C₁-C₆ алкокси, NH₂, NHMe, NHEt, N(Me)₂ и N(Et)₂, R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, C₁-C₆ алкила и галогена, или R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

Изобретение также относится к способу получения указанного соединения и к фармацевтической композиции на его основе. Технический результат – получены новые соединения и фармацевтическая композиция на их основе, которые могут найти применение в медицине для лечения раковых заболеваний. 8 н. и 44 з.п. ф-лы, 12 фиг., 6 табл., 6 пр.

 

Область изобретения

В широком смысле настоящее изобретение относится к противоопухолевым агентам. В частности, настоящее изобретение относится к определенным соединениям бензопирана, их получению и их применению в способах лечения рака и уменьшения числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака.

Предшествующий уровень техники

Рак убивает много тысяч людей ежегодно во всем мире. Были сделаны значительные прорывы в лечении и предотвращении целого ряда раковых заболеваний. Например, рак молочной железы выявляют при ранних массовых обследованиях, а также различных хирургических методах. Однако они часто подтачивают физическое и эмоциональное здоровье. Кроме того, пациенты, которые перенесли операцию и последующую химиотерапию, часто испытывают рецидив. Исследование в последние годы показало гетерогенный онкогенный потенциал раковых клеток, который привел к гипотезе раковых стволовых клеток (РСК). Кратко, эта гипотеза утверждает, что только доля клеток в опухоли обладает признаками, подобными стволовым клеткам, включая неограниченную способность к пролиферации.

Дополнительные доказательства в литературе подтверждают концепцию, что опухоли представляют собой сложные гетерогенные подобные органу системы с иерархической клеточной организацией, а не просто скопления гомогенных опухолевых клеток единственной линии. Опухолевая клетка инициатор сохраняет способность генерировать разнообразное потомство на разных уровнях дифференцировки, от некоммитированных плюрипотентных стволовых клеток, до коммитированных клеток-предшественников, до полностью дифференцированных стареющих клеток потомков. Таким образом, популяция опухолевых клеток сама по себе является гетерогенной, включая разнообразную структуру, представленную иммуноцитами, стромальными и васкулярными клетками, которые также присутствуют в опухолях. Некоторые из клеток в этом "раковом органе" или опухоли обладают способностью непрерывной пролиферации. Таким образом, филогенетика этих опухолевых клеток свидетельствует о существовании клеточной популяции, которая сохраняет способность самообновляться, в то же время также часто обладая способностью генерировать потомство, которое дифференцируется. Следовательно, раковая стволовая клетка определена как клетка внутри опухоли, которая обладает способностью самообновляться и вызывать гетерогенные линии раковых клеток, которые включают опухоль. Действительно лабораторные данные подтверждают, что введение подобных стволовым клеток, выделенных из рака яичника, головного мозга, толстой кишки, молочной железы, предстательной железы или поджелудочной железы, иммунокомпрометированным мышам приводит к образованию опухолей, которые фенотипически идентичны первоначальной опухоли и содержат как клетки, подобные стволовым, так и неподобные стволовым клетки. Следовательно, существуют две разные популяции; относительно высокодифференцированная субпопуляция с ограниченным пролиферативным потенциалом, образующая основную массу опухоли, которая фенотипически характеризует заболевание, и вторая меньшая, менее дифференцированная субпопуляция, которая содержит клоногенные РСК. Важно отметить, что РСК проявляют множественную устойчивость к лекарственным препаратам, дополнительное свойство, которое обеспечивает их продолжительное существование и метастатический потенциал, позволяя им пережить токсичные нападения, включая многие лекарственные средства, используемые в настоящее время в лечении рака. Следовательно, существует необходимость в разработке способов лечения, которые определенным образом нацелены на самовозобновляющиеся способности популяции стволовых клеток, таким образом, подавляя источник повторного появления опухоли как результат устойчивости к традиционным способам лечения.

Предполагаемые маркеры РСК, которые описаны для других злокачественных новообразований, включая острый миелобластный лейкоз (CD34-положительные/CD38-отрицательные), рак молочной железы (CD44-положительные/CD24-отрицательные/-низкие/отрицательной линии), рак предстательной железы (CD44-положительные/_2_1-высокие/CD133-положительные) и рак головного мозга (CD133-положительные/нестин-положительные), отразили экспрессированных первоначальным состоянием двойников их здоровой ткани. Новейшие данные подтверждают, что CD44+ раковые клетки яичника также обладают способностью образовывать опухоли у иммунокомпрометированных мышей. Как и в случае других фенотипов РСК, раковые стволовые клетки яичника являются медленнорастущими, химиорезистентными и образуют опухоли у иммунокомпрометированных мышей, которые фенотипически идентичны первоначальной опухоли в том смысле, что главным образом существуют CD44-ve клетки, образующие основную массу опухоли с небольшими карманами CD44+ve клеток.

Многие виды прогрессирующего рака рецидивируют, несмотря на применение химиотерапевтических средств и методов облучения, которые в начале приводят к терапевтическим ответам. Например, облучение глиобластом может приводить к значительным рентгенографическим откликам, тем не менее эти опухоли неизменно возвращаются и приводят к смерти пациента. Зачастую глиобластомы снова возникают в нодулярной структуре, предлагая клональный или поликлональный источник клеток рецидивирующей опухоли, которые способны выдерживать традиционные цитотоксические методы лечения, включая лучевую терапию, вызывая рецидив болезни. Кроме того, рецидивирующие опухоли также показывают гетерогенность в пределах популяции опухолевых клеток в отношении присутствия как РСК и не-РСК, так и в гистологических и цитогенетических различиях. Это дает основание полагать, что РСК, которые заполняют первоначальную опухоль, могут выдерживать терапевтическое воздействие, повторно заселяя рецидивирующую опухоль даже после того, как основная масса опухоли была удалена в ходе резекции или химиолучевой терапии, отсюда следует концепция, что РСК являются источником посттерапевтического возвращения опухоли. Изменение в лечебной стратегии, которое приводит к разработке уникальных агентов направленного действия, которые атакуют РСК, может улучшить онкологическую помощь и продлить жизнь многим пациентам.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили набор соединений бензопирана, которые способны оказывать мощные биологические воздействия на не-РСК, а также РСК. Такие соединения предлагают альтернативные химиотерапевтические подходы в лечении рака и уменьшении числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака.

Сущность изобретения

В первом аспекте настоящего изобретения предложено соединение общей формулы (I)

или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат, производное, сольват или пролекарство, где:

R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₆ алкила,

R² выбран из группы, состоящей из: ОН и С₁-С₆ алкокси,

R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₆ алкила и галогена,

радикалы с R¹⁰ по R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из ОН, C₁-С₆ алкила, C₁-C₆ алкокси и галогена,

R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, С₁-С₆ алкокси, NH₂, NHMe, NHEt, N(Me)₂ и N(Et)₂,

R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, ОН, С₁-С₆ алкила и галогена, или

R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ вместе образуют следующую структуру:

.

Во втором аспекте настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, включающая соединение формулы (I) согласно первому аспекту вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

В третьем аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) согласно первому аспекту или композиции по второму аспекту.

Кроме того согласно способу можно вводить другое химиотерапевтическое вещество.

Рак может представлять собой рак, который появляется снова.

Рак может быть устойчив к одному или более чем одному химиотерапевтическому веществу.

Рак может представлять собой рак поджелудочной железы, колоректальный рак, меланому, рак предстательной железы, рак головного мозга (включая детский и взрослый), рак яичника, рак молочной железы, рак легкого, рак печени, рак матки, нейробластому, мезотелиому, злокачественный асцит или перитонеальный рак.

В четвертом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) согласно первому аспекту при изготовлении лекарства для лечения рака.

Кроме того лекарство может включать или может быть введено с другим химиотерапевтическим веществом.

В пятом аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) согласно первому аспекту для применения в лечении рака.

В шестом аспекте настоящего изобретения предложен способ уменьшения числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака у субъекта, считающегося подверженным риску возникновения рецидивов рака, согласно которому вводят субъекту эффективное количество соединения формулы (I) согласно первому аспекту или композиции по второму аспекту.

Субъектом может быть субъект, который находится в состоянии ремиссии рака. Субъект может находиться в состоянии ремиссии рака яичника, рака головного мозга или некоторого другого вида рака, такого как один или более из тех, что перечислены выше.

В седьмом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) согласно первому аспекту в изготовлении лекарства для уменьшения числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака у субъекта, считающегося подверженным риску возникновения рецидивов рака.

В восьмом аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) согласно первому аспекту для применения в уменьшении числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака у субъекта, считающегося подверженным риску возникновения рецидивов рака.

В девятом аспекте настоящего изобретения предложен способ индукции апоптоза или ингибирования пролиферации раковой стволовой клетки, согласно которому раковую стволовую клетку приводят во взаимодействие с эффективным количеством соединения формулы (I) согласно первому аспекту.

Раковая стволовая клетка может представлять собой раковую стволовую клетку яичника или раковую стволовую клетку головного мозга.

В десятом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) согласно первому аспекту в изготовлении лекарства для индукции апоптоза или ингибирования пролиферации раковой стволовой клетки.

В одиннадцатом аспекте настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания у субъекта, вызванного раковыми стволовыми клетками, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) согласно первому аспекту или композиции по второму аспекту.

Заболевание может представлять собой рак. Рак может представлять собой метастатический рак. Раковые стволовые клетки могут представлять собой раковые стволовые клетки яичника или раковые стволовые клетки головного мозга.

В двенадцатом аспекте настоящего изобретения предложено применение соединения формулы (I) согласно первому аспекту в изготовлении лекарства для лечения заболевания, вызванного раковыми стволовыми клетками.

В тринадцатом аспекте настоящего изобретения предложено соединение формулы (I) согласно первому аспекту для применения в лечении заболевания, вызванного раковыми стволовыми клетками.

В четырнадцатом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения соединения формулы (I), включающий стадии, согласно которым:

(а) восстанавливают соединение формулы (II), получая соединение формулы (III):

,

где в соединении формулы (II) R¹, R³ и R¹⁰-R¹⁵ являются такими, как определено в первом аспекте, и R² является ОАс или таким, как определено в первом аспекте, и в соединении формулы (III) радикалы с R¹ по R³ и с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено в первом аспекте, и

(b) гидрируют соединение формулы (III), получая соединение формулы (I),

,

где радикалы с R¹ по R³ и с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено в первом аспекте.

Стадию (а) можно проводить, приводя во взаимодействие соединение формулы (II) с соединением борана, например комплексом боран-диметилсульфид, декабораном, 9-ББН (9-борабицикло[3.3.1]нонаном) или комплексом боран-тетрагидрофуран.

Стадию (b) можно проводить, приводя во взаимодействие соединение формулы (III) с гетерогенным металлическим катализатором с гетерогенным металлическим катализатором в атмосфере водорода.

В одном воплощении способ может дополнительно включать стадию, согласно которой:

(с) соединение формулы (IV) приводят во взаимодействие с соединением формулы (V), получая соединение формулы (II)

,

где в соединении формулы (II) R¹, R³ и R¹⁰-R¹⁵ являются такими, как определено в первом аспекте, и R² является ОАс или таким, как определено в первом аспекте, и в соединении формулы (IV) радикалы с R¹ по R³ и с R¹³ по R¹⁵ являются такими, как определено в первом аспекте, и в соединении формулы (V) радикалы с R¹⁰ по R¹² являются такими, как определено в первом аспекте.

Стадию (с) можно проводить в присутствии основания.

В другом воплощении способ может дополнительно включать стадию, согласно которой:

(d) соединение формулы (VI) приводят во взаимодействие с соединением формулы (VII), получая соединение формулы (IV)

,

где радикалы с R¹ по R³ и с R¹³ по R¹⁵ являются такими, как определено в первом аспекте.

Стадию (d) можно проводить, связывая соединения (VI) и (VII) в присутствии оксихлорида фосфора и хлорида цинка. В альтернативном воплощении стадию (d) можно проводить, подвергая взаимодействию соединение (VII) с тионилхлоридом с последующей реакцией с хлоридом алюминия и соединением (VI).

Определения

Ниже приведены некоторые определения, которые могут быть полезными в понимании описания настоящего изобретения. Их следует понимать как общие определения, и эти термины никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения, а только лишь предложены для лучшего понимания следующего описания.

На протяжении всего описания, если из контекста не следует иное, под словом "включать" или вариантами, такими как "включает" или "включающий", следует понимать включение установленного элемента, числа или стадии, или группы элементов, чисел или стадий, а не исключение любого другого элемента, числа или стадии, или группы элементов, чисел или стадий.

Формы единственного числа используются в данном документе в отношении одного или более чем одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматического объекта изделия. Например, "элемент" означает один элемент или более чем один элемент.

Применительно к этому описанию изобретения под термином "алкил" понимают неразветвленные или разветвленные одновалентные насыщенные углеводородные группы, имеющие указанное число атомов углерода. Примеры алкильных групп включают, но не ограничиваются этим, метил, этил, 1-пропил, изопропил, 1-бутил, 2-бутил, изобутил, трет-бутил, амил, 1,2-диметилпропил, 1,1-диметилпропил, пентил, изопентил, гексил, 4-метилпентил, 1-метилпентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 2,2-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 1,2,2-триметилпропил, 1,1,2-триметилпропил, 2-этилпентил, 3-этилпентил, гептил, 1-метилгексил, 2,2-диметилпентил, 3,3-диметилпентил, 4,4-диметилпентил, 1,2-диметилпентил, 1,3-диметилпентил, 1,4-диметилпентил, 1,2,3-триметилбутил, 1,1,2-триметилбутил, 1,1,3-триметилбутил, 5-метилгептил, 1-метилгептил, октил, нонил и децил.

Применительно к этому описанию изобретения под термином "алкокси" понимают О-алкильные группы, в которых алкил является таким, как определено в данном документе. Примеры алкокси групп включают, но не ограничиваются этим, метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, втор-бутокси и трет-бутокси.

Применительно к этому описанию изобретения термин "пролекарство" означает соединение, которое способно превращаться in vivo в ходе метаболических процессов (например, в ходе гидролиза, восстановления или окисления) в соединение формулы (I). Например, сложноэфирное пролекарство соединения формулы (I), содержащего гидроксигруппу, может гидролизоваться in vivo в исходную молекулу. Подходящими сложными эфирами являются, например ацетаты, цитраты, лактаты, тартраты, малонаты, оксалаты, салицилаты, пропионаты, сукцинаты, фумараты и малеаты.

Применительно к этому описанию изобретения термин "эффективное количество" включает нетоксичное, но достаточное количество активного соединения для обеспечения заявленного эффекта. При использовании в отношении возникновения рецидива рака "эффективное количество" означает количество соединения формулы (I), которое необходимо для уменьшения числа новых случаев или риска единичного случая повторного появления рака. Квалифицированные специалисты в данной области техники определят, что точное количество требуемого соединения варьируется в зависимости от целого ряда факторов, и таким образом невозможно установить точное "эффективное количество". Однако для любого конкретного случая средний специалист в данной области техники может определить надлежащее "эффективное количество".

Применительно к этому описанию изобретения термин "терапевтически эффективное количество" включает нетоксичное, но достаточное количество активного соединения для обеспечения требуемого терапевтического эффекта. Квалифицированные специалисты в данной области техники определят, что точное количество требуемого соединения варьируется в зависимости от целого ряда факторов, и таким образом невозможно установить точное "терапевтически эффективное количество". Однако для любого конкретного случая средний специалист в данной области техники может определить надлежащее "терапевтически эффективное количество".

Применительно к этому описанию изобретения термины "лечить", "лечение", "предотвратить" и "предотвращение" относятся к какому-то и всем применениям, которые излечивают рак или его симптомы, предотвращают установление рака, или иным образом предотвращают, препятствуют, замедляют или инвертируют развитие рака или других нежелательных симптомов любым образом полностью. Таким образом, термины "лечить", "лечение", "предотвратить" и "предотвращение" и подобные следует рассматривать в их самом широком смысле. Например, лечение необязательно означает, что субъект излечился до полного выздоровления.

Применительно к этому описанию изобретения термин "субъект" включает человека и также не относящихся к человеку животных. По сути, в дополнение к тому, что являются полезными в лечении рака у людей, соединения по настоящему изобретению также находят применение в лечении рака у не относящихся к человеку животных, например млекопитающих, таких как домашние животные и сельскохозяйственные животные. Неограничивающие примеры домашних животных и сельскохозяйственных животных включают собак, кошек, лошадей, коров, овец и свиней. Предпочтительно субъектом является человек.

Применительно к этому описанию изобретения под термином "возникновение рецидива", когда он относится к раку, понимают возвращение раковых клеток и/или раковой опухоли после того, как раковые клетки и/или раковая опухоль прежде были успешно вылечены.

Применительно к этому описанию изобретения термин "вводят" и варианты этого термина, включающие "применять" и "введение", включают взаимодействие, употребление, доставку или обеспечение соединением или композицией по изобретению организма любым подходящим способом.

Краткое описание Фигур

Фигура 1: Дифференциальная активность соединения 2 в отношении двух разных эксплантатов, полученных из мультиформной глиобластомы (GBM, от англ. "glioblastoma multiforme") пациента; GBM14-CHA (ромбы) и ODA14-RAV (квадраты).

Фигура 2: Дифференциальная активность соединения 2 и его очищенных энантиомеров в отношении эксплантата GBM14, полученного из GBM пациента.

Фигура 3: Анализ эффективности соединения 2 в отношении раковых стволовых клеток яичника OCSC-2 (от англ. "ovarian cancer stem cells") при использовании изображения слияния (А, В) и клеточного повреждения (С, D). Половину ингибирующей концентрации (IC₅₀) вычисляли из графиков площади под кривой (AUC, от англ. "area under the curve") слияния и интенсивности флуоресценции в зависимости от времени. Вычисления IC₅₀ проводили после 72 часов культивирования.

Фигура 4: Анализ эффективности соединения 2 в отношении клеток OCSC-2 при использовании слияния. Вычисления IC₅₀ проводили после 72 часов культивирования. GAD 305 представляет собой соединение 9 в данном документе, и GAD 310 представляет собой соединение 13 в данном документе.

Фигура 5: Оценка рацемата соединения 2 (А, С) и его эутомера (В, D) в отношении клеточных линий А172 (глиома) (А и В) и OVCAR-3 (рак яичника) (С и D).

Фигура 6: Способность соединения 2 замедлять пролиферацию раковых стволовых клеток яичника.

Фигура 7: Микроскопическая оценка клеток OCSC2, обработанных соединением 2 при 1 мкг/мл, через 24 (В) и 48 часов (С) по сравнению с контрольной пробой, 72 часа (А).

Фигура 8: Флуоресцентная микроскопия ЗФБ(зеленым флуоресцентным белком)-меченых стволовых клеток OCSC-2 и mCherry-меченых сокультур раковых клеток яичника ОСС2 (от англ. "ovarian cancer cells"), обработанных соединением 2 при 1 мкг/мл, через 48 часов (В) по сравнению с контрольной пробой (А).

Фигура 9: Соединение 2 разрушает сфероиды раковых стволовых клеток яичника. Сфероиды OCSC-2 получали, используя стандартную методику, и подвергали увеличивающейся концентрации соединения 2 в течение 24 часов. А, контрольная проба; В, 0,1 мкг/мл - 24 часа; С, 1 мкг/мл - 24 часа. Структуру сфероида оценивали в ходе микроскопического исследования.

Фигура 10: Фармакокинетический (ФК) профиль соединений 2, 6, 9 и 13 (которое обозначено как 31) при 1 мг/кг, доставленных в 30% препарате Captisol®.

Фигура 11: Эффективность in vivo эутомера соединения 9 в отношении модели подвздошной области GBM (U87MG). Используя прежде описанную модель подвздошной области U87, мышей делили на две группы, лечебную группу (эутомер соединения 9), разработанный в суппозиторной основе какао-масла и дозируемый ежедневно при 100 мг/кг - и суппозиторную контрольную группу (n равно 10 для контрольной группы, и n равно 4 для соединения 9). Мышей наблюдали ежедневно, взвешивали раз в три дня и подвергали эвтаназии через 12 дней после обработки. По окончании обработки опухоли вырезали и взвешивали. Соединение 9 вводили ежедневно при 100 мг/кг в суппозиторном препарате, тогда как контрольным животным дозировали только суппозиторный препарат. Кривые роста опухоли (среднее значение плюс/минус СОС (стандартная ошибка среднего)) на протяжении обработки (12 дней) значительно различались (показаны Р значения). Вес опухоли (средний и квартили) также значительно уменьшился (Р значения показаны выше графика).

Фигура 12: Эффективность in vivo эутомера соединения 2 на животной модели рака яичника. Животным вводили OCSC1-F2 m-Cherry клетки и затем дозировали на 4 день после инокуляции препарат эутомера соединения 2 с Captisol®, используя два разных режима (100 мг/кг, интраперитонеально (ип), ежедневно, 50 мг/кг, ип), и эффективность сравнивали с контрольной пробой. А, Средняя интенсивность флуоресценции опухоли (за опухолями наблюдали раз в три дня, используя систему визуализации Vivo FX, область интереса (ROI, от англ. "region of interest")) , контрольная проба Captisol®; , эутомер соединения 2 (50 мг/кг, ип, ежедневно); , эутомер соединения 2 (100 мг/кг, ип, ежедневно); В, Среднюю конечную опухолевую массу оценивали, удаляя и взвешивая все опухоли животных, обработанных как контрольной пробой, так и препаратом эутомера соединения 2 с Captisol®, *, p менее 0,02; **, p менее 0,0001; в сравнении с соответствующими контрольными пробами.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение относится к определенным соединениям бензопирана общей формулы (I), получению этих соединений и их применению в лечении рака и уменьшении числа новых случаев возникновения рецидивов рака. Соединения, раскрытые в данном документе, представляют собой селективное изобретение относительно US 2012/0251630 и WO 2012/061409.

В одном аспекте настоящего изобретения предложено соединение общей формулы (I)

или его фармацевтически приемлемая соль, гидрат, производное, сольват или пролекарство, где:

R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и C₁-C₆ алкила,

R² выбран из группы, состоящей из: ОН и С₁-С₆ алкокси,

R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₆ алкила и галогена,

радикалы с R¹⁰ по R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, C₁-C₆ алкила, С₁-С₆ алкокси и галогена,

R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, С₁-С₆ алкокси, NH₂, NHMe, NHEt, N(Me)₂ и N(Et)₂,

R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, ОН, C₁-С₆ алкила и галогена, или

R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ вместе образуют следующую структуру:

.

В одном воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила.

В другом воплощении R² представляет собой ОН или ОМе. В дополнительном воплощении R² представляет собой ОН.

В еще другом воплощении R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила и галогена. В дополнительном воплощении R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl.

В еще дополнительном воплощении R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и галогена. В другом воплощении R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, F и Cl. В еще другом воплощении R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и F.

В дополнительном воплощении R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, ОМе, С₁-С₄ алкила и F. В еще другом воплощении R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, ОМе, метила, трет-бутила и F. В еще дополнительном воплощении R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОМе, метила, трет-бутила и F. В еще другом воплощении R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, ОМе, трет-бутила и F. В еще дополнительном воплощении R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила и F.

В другом воплощении R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, NH₂, NHEt и N(Et)₂.

В дополнительном воплощении R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила.

В еще дополнительном воплощении R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

.

В одном воплощении соединения формулы (I) имеют следующую структуру

,

где R¹, R³ и радикалы с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено выше.

В одном воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₆ алкила. В другом воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила.

В дополнительном воплощении R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₆ алкила и галогена. В дополнительном воплощении R³ выбран из группы, состоящей изй: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl.

В другом воплощении R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и галогена. В еще дополнительном воплощении R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, F и Cl. В другом воплощении R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и F.

В еще дополнительном воплощении R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе, метила и галогена. В еще другом воплощении R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе, метила, F и Cl. В еще другом воплощении R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе, метила и F.

В дополнительном воплощении R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила, метила и галогена. В еще другом воплощении R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила, метила, F и Cl. В еще дополнительном воплощении R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, метила, трет-бутила и F.

В еще дополнительном воплощении R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе и галогена. В еще другом воплощении R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе, F и Cl. В еще другом воплощении R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе и F.

В дополнительном воплощении R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила и галогена. В еще другом воплощении R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила, F и Cl. В еще дополнительном воплощении R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила и F.

В еще другом воплощении R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, NH₂, NHEt и NEt₂.

В другом воплощении R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, галогена и метила. В другом воплощении R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила.

В еще дополнительном воплощении R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

.

В одном воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила, R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, метила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе и ОН, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила.

В другом воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила, R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, метила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе и ОН, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила, или R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

.

В дополнительном воплощении R¹ и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, метила или этила, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, метила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе и ОН, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F и метила. В этом воплощении R¹⁵ может находиться в орто- или мета-положении относительно R¹³.

В другом воплощении R¹ и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, метила или этила, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, метила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе и ОН, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F и метила, или R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

.

В одном воплощении R¹ и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, метила или этила, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе и ОН, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F и метила. В этом воплощении R¹⁵ может находиться в орто-положении относительно R¹³.

В другом воплощении R¹ и R³ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, метила или этила, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе и ОН, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F и метила, или R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

.

В одном воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила, R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, метила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН, NH₂, NHEt и NEt₂, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила.

В другом воплощении R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила, R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl, R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН и F, R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: трет-бутила, метила, ОМе и F, R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОМе, ОН, NH₂, NHEt и NEt₂, и R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила, или R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

.

Примерные соединения согласно формуле (I) включают:

В одном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из: соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 41. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из: соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 40. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из: соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 35. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из: соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 36. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из: соединений 2, 6, 9, 13, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 41. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из: соединений 2, 6, 9, 13, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 40. В дополнительном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9, 13, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 36. В дополнительном воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9, 13, 16, с 18 по 22, 24 и с 32 по 35. В дополнительном воплощении соединение формулы (I) выбрано из соединений 33 и с 36 по 41. В дополнительном воплощении соединение формулы (I) выбрано из соединений 33, 36, 37 и 39. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 9 и 36. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 9, 20, 33 и 36. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 9, 33 и 36. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9, 13 и с 36 по 41. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9, 13 и с 36 по 40. В другом воплощении соединение формулы (I) выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9, 13, 36, 37 и 39. В другом воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение 2. В другом воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение 9. В другом воплощении соединение формулы (I) представляет собой соединение 36. В альтернативных воплощениях соединение формулы (I) может представлять собой любое сочетание одного или более соединений с 1 по 41.

Соединения формулы (I) включают по меньшей мере два хиральных центра. Настоящее изобретение включает все энантиомеры и диастереомеры, а также их смеси в любых пропорциях. Также изобретение распространяется на выделенные энантиомеры или пары энантиомеров. Способы разделения энантиомеров и диастереомеров хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области техники. В некоторых воплощениях соединения формулы (I) представляют собой рацемические смеси. В других воплощениях соединения формулы (I) находятся в оптически чистой форме.

Также квалифицированным специалистам в данной области техники понятно, что в соединениях формулы (I) фенильные заместители, присоединенные к гетероциклическому кольцу, могут находиться либо в цис-, либо транс-положении относительно друг друга. Предпочтительно в соединениях формулы (I) эти заместители будут находиться в цис-положении относительно друг друга. Альтернативно, в соединениях формулы (I) эти заместители могут находиться в транс-положении относительно друг друга.

В некоторых воплощениях соединения формулы (I), включая соединения с 1 по 41, имеют следующую структуру:

.

В других воплощениях соединения формулы (I), включая соединения с 1 по 41, имеют следующую структуру:

.

Также принято, что соединения формулы (I) включают гидраты и сольваты. Сольваты представляют собой комплексы, образующиеся в ходе ассоциации молекул растворителя с соединением формулы (I). В случае соединений формулы (I), которые представляют собой твердые вещества, квалифицированным специалистам в данной области техники понятно, что такие соединения могут существовать в разных кристаллических или полиморфных формах, все из которых, как подразумевается, находятся в объеме настоящего изобретения.

Соединения формулы (I) могут находиться в форме фармацевтически приемлемых солей. Такие соли хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области техники. S.М. Berge с соавт. подробно описывает фармацевтически приемлемые соли в J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66:1-19. Фармацевтически приемлемые соли можно получить в реакционной смеси в ходе завершающего выделения и очистки соединений формулы (I), или отдельно при взаимодействии соединения в форме свободного основания с подходящей органической кислотой. Подходящие фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты соединений по настоящему изобретению можно получить из неорганической кислоты или из органической кислоты. Примерами таких неорганических солей являются хлористоводородная, бромистоводородная, йодистоводородная, азотная, угольная, серная и фосфорная кислота. Соответствующие органические кислоты можно выбрать из алифатического, циклоалифатического, ароматического, гетероциклического, карбонового и сульфонового классов органических кислот, примерами которых являются муравьиная, уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, глюконовая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, глюкороновая, фумаровая, малеиновая, пировиноградная, алкилсульфоновая, арилсульфоновая, аспарагиновая, глутаминовая, бензойная, антраниловая, метансульфоновая, салициловая, п-гидроксибензойная, фенилуксусная, миндальная, амбоновая, памовая, пантотеновая, сульфаниловая, циклогексиламиносульфоновая, стеариновая, альгеновая, β-гидроксимасляная, галактаровая и галактуроновая кислоты. Подходящие фармацевтически приемлемые соли присоединения основания соединений по настоящему изобретению включают соли металлов, полученные из лития, натрия, калия, магния, кальция, алюминия и цинка, и органические соли, полученные из органических оснований, таких как холин, диэтаноламин, морфолин. Альтернативно, органические соли, полученные из N,N'-дибензилэтилендиамина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглюмина (N-метилглюкамина), прокаина, солей аммония, четвертичных солей, таких как соль тетраметиламмония, солей присоединения аминокислоты, таких как соли с глицином и аргинином.

Также соединения формулы (I) охватывают все производные с отщепляемыми при физиологических условиях уходящими группами, которые можно отщепить in vivo с образованием соединений формулы (I). Подходящие уходящие группы включают ацил, фосфат, сульфат, сульфонат, и предпочтительно представляют собой моно-, ди- и пер-ацил окси-замещенные соединения, где одна или более гидроксигрупп в боковой цепи защищены ацильной группой, предпочтительно ацетильной группой. Как правило, ацилокси-замещенные соединения легко расщепляются до соответствующих гидрокси-замещенных соединений.

Репрезентативные соединения формулы (I) можно синтезировать, как описано ниже.

На первой стадии синтеза промежуточное соединение бензофенона (IV) получают из подходящим образом замещенного фенола (VI) и подходящим образом замещенной бензойной кислоты (VII) согласно схеме 1.

Относительное расположение заместителей R₁₄ и R₁₅ на фенильном кольце соединения (VII) можно выбрать с учетом схемы замещения, необходимой на 4-фенильном кольце соединения формулы (I), которое получают. Когда целесообразно или необходимо, можно использовать защитные группы. Стандартные защитные группы известны квалифицированным специалистам в данной области техники и включают те, что описаны, например в 'Protective Groups in Organic Synthesis' у Theodora Greene и Peter Wuts (Third edition, 1999, John Wiley and Sons).

Как правило, в реакции, изображенной на схеме 1, фенольное соединение (VI) и соединение бензойной кислоты (VII) подвергают взаимодействию в условиях ацилирования. Например, в одном способе, описанном в Indian Journal of Chemistry, 1971, 619-62, фенольное соединение (VI) и соединение бензойной кислоты (VII) можно объединить с помощью оксихлорида фосфора и хлорида цинка, и смесь нагревали в течение времени, достаточном по существу для завершения реакции. Точный период времени будет зависеть от масштаба реакции, однако квалифицированные специалисты в данной области техники легко способны определить подходящее время и температурные условия. В обычной реакции реагенты нагревают при температуре приблизительно 70°С в течение приблизительно от 1 до 3 часов. Когда считают, что реакция завершилась в значительной степени, реакционную смесь охлаждают, например, выливая в лед, после чего промежуточное соединение бензофенона (IV) можно выделить и очистить, используя стандартные методики, известные квалифицированным специалистам в данной области техники.

В альтернативном способе соединение бензойной кислоты (VII) можно перемешивать с тионилхлоридом при нагревании с обратным холодильником в течение приблизительно 2-6 часов, затем добавить каталитический N,N-диметилформамид в подходящем органическом растворителе (например, дихлорметане) в течение приблизительно от 20 минут до 1 часа. После удаления оставшегося тионилхлорида смесь обычно охлаждают (например, в ванне со льдом), затем добавляют хлорид алюминия и фенольное соединение (VI) и смесь перемешивают в течение подходящего периода времени, обычно приблизительно от 18 до 36 часов, в то же время медленно нагревая до комнатной температуры, затем нагревают с обратным холодильником в течение приблизительно от 2 до 8 часов. Реакцию можно проводить в инертной атмосфере.

Промежуточное соединение бензофенона (IV) можно очистить, используя стандартные методики, известные квалифицированным специалистам в данной области техники. Например, промежуточное соединение бензофенона (IV) можно собрать в ходе фильтрации, промыть (например, водой), затем перекристаллизовать из подходящей системы растворителей. Примеры растворителей для перекристаллизации включают метанол, этанол, воду и их смеси. Альтернативно, промежуточное соединение бензофенона (IV) можно очистить с помощью колоночной хроматографии.

Следующая стадия синтеза включает реакцию промежуточного соединения бензофенона (IV) с подходящим образом замещенной фенилкарбоновой кислотой (V) с получением замещенного бензопиранона (II) (смотрите схему 2). Относительное расположение заместителей R₁₁ и R₁₂ на фенильном кольце соединения (V) можно выбрать с учетом схемы замещения, необходимой на 3-фенильном кольце соединения формулы (I), которое получают. Когда целесообразно или необходимо, можно использовать защитные группы.

Обычно в реакции конденсации, изображенной на схеме 2, промежуточное соединение бензофенона (IV) подвергают взаимодействию с подходящим образом замещенной фенилуксусной кислотой (V) в присутствии основания и уксусного ангидрида. Как правило, основание представляет собой ненуклеофильное основание, такое как N,N-диизопропилэтиламин (ДИПЭА), N-метилморфолин или триэтиламин. В ходе этой реакции гидрокси заместители, присутствующие на фенильных кольцах, можно превратить в соответствующий ацетат. Реакцию обычно проводят при нагревании при температуре и в течение периода времени до, как считают, завершения реакции в значительной степени (например, анализ с помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) или газовой хроматографии (ГХ)). Квалифицированным специалистам в данной области техники известно, что подходящие периоды времени будут зависеть от масштаба реакции и конкретных используемых реагентов. Обычно реагенты можно нагреть при температуре приблизительно от 40 до 60°С (например, приблизительно 50°С) в течение приблизительно от 20 до 30 минут, чтобы удостовериться в том, что все реагенты находятся в растворе, затем нагреть при более высокой температуре, такой как приблизительно от 130 до 150°С (например, приблизительно 135°С), в течение приблизительно от 6 до 48 часов (например, приблизительно 18 часов). Замещенный бензопиранон (II) можно выделить обычными способами, такими как экстракция растворителем (например, используя органический растворитель, такой как этилацетат, хлороформ или подобные), и промывая водным щелочным раствором (например, раствором карбоната натрия или гидрокарбоната натрия), с последующей стандартной очисткой при использовании методик, известных квалифицированным специалистам в данной области техники, таких как колоночная хроматография, перекристаллизация из подходящего растворителя (например, этанола или смеси этанола/воды) или растирание с подходящим растворителем (например, метанолом, этанолом или их смесями).

Следующая стадия синтеза включает восстановление лактона замещенного бензопиранона (II) с получением замещенного соединения хромена (III) (смотрите схему 3).

Обычно реакцию восстановления проводят, обрабатывая бензопиранон (II) подходящим восстановителем, способным восстанавливать кетонную группировку кольца пиранона. Предпочтительно, чтобы восстановитель избирательно восстанавливал кетонную группировку кольца пиранона и не восстанавливал 3,4 двойную связь. При восстановлении также могут быть удалены ацилированные гидроксигруппы, находящиеся на фенильных кольцах. Подходящие восстановители известны квалифицированным специалистам в данной области техники и включают соединения борана, такие как, например комплекс боран-диметилсульфид, декаборан, 9-ББН или комплекс боран-тетрагидрофуран. В некоторых воплощениях восстановитель представляет собой боран-диметилсульфид. Восстановлению может способствовать применение хирального вспомогательного вещества. Например, боран-диметилсульфид подходит для ассиметричного восстановления кетона при использовании хирального оксазаборолидинового катализатора (Corey, E.J.; Helal, С.J. Angew. Chem. Int. Ed. 1998, 1986). Реакцию можно проводить в органическом растворителе, таком как тетрагидрофуран, толуол или хлороформ. Реакцию можно выполнять в инертной атмосфере при температуре ниже комнатной температуры, обычно при температуре от приблизительно -10°С до приблизительно 10°С, или при приблизительно -5°С до приблизительно 0°С, или при приблизительно 0°С, в течение приблизительно 15 минут до приблизительно 4 часов, обычно в течение приблизительно 30 минут до приблизительно 2 часов. Когда считают, что реакция восстановления завершилась (или фактически завершилась), то продукт можно выделить в ходе кислотной обработки при использовании стандартных способов, известных квалифицированному специалисту, затем очистить, используя общепринятые методики, такие как колоночная хроматография.

При наличии незащищенного в целом соединения хромена (III) конечная стадия синтеза включает каталитическое цисоидное восстановление олефина соединения хромена (III) с получением соединений формулы (I) (смотрите схему 4).

Восстановление двойной связи можно выполнить в ходе гидрирования при использовании реагентов и условий, которые хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области техники. Подходящие реагенты включают гетерогенные металлические катализаторы, такие как палладиевые и платиновые катализаторы, в присутствии водорода. Предпочтительные в настоящее время катализаторы включают, но не ограничиваются этим, Pd/C, Pd(OH)₂/C, Pt/C, никель Ренея, Rh катализаторы, включая хиральные Rh катализаторы, такие как Rh DIPAMP (1,2-бис[(2-метоксифенил)фенилфосфино]этан) и катализатор Уилкинсона. Примеры подходящих растворителей включают метанол и этанол. Реакцию можно проводить при комнатной температуре или реакционную смесь можно нагреть (например, до температуры приблизительно от 50 до 60°С). Альтернативно, реакцию гидрирования можно проводить под давлением. Квалифицированные специалисты в данной области техники легко способны определить, когда реакция завершилась (или фактически завершилась) при использовании стандартных методик (например, ТСХ, газовая хроматография - масс-спектрометрия (ГХ-МС)). Продукт можно очистить, используя стандартные методики (например, хроматографию).

После очистки соединения формулы (I) могут быть по существу чистыми. Например, соединения формулы (I) можно выделить в форме, которая является по меньшей мере приблизительно на 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99%, 99,5% или 99,9% чистой.

Соединения формулы (I) можно получить в виде рацемических смесей. Энантиомеры можно выделить, используя методики, известные квалифицированным специалистам в данной области техники, включая хиральное разделение, сверхкритическую флюидную хроматографию и энантиоселективный синтез. Отдельные энантиомеры можно выделить по существу в чистой форме или в энантиомерном избытке (эи). Например, в предпочтительных воплощениях энантиомер можно выделить в энантиомерном избытке приблизительно 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше 99%.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что соединения формулы (I) способны оказывать неожиданно мощные биологические воздействия на дифференцированные раковые клетки, а также на недифференцированные раковые клетки, которые по-разному называют "раковыми стволовыми клетками" или "раковыми клетками-предшественниками". Биологические эффекты могут включать ингибирование пролиферации клеток, вызывание гибели клеток, вызывание клеточной дифференцировки и изменение аномального поведения.

Следовательно, соединения формулы (I) находят применение в лечении рака. В частности, соединения формулы (I) можно использовать в лечении рака, когда желательно воздействовать как на недифференцированные, так и дифференцированные раковые клетки, и когда воздействие на оба вида раковых клеток может быть различным или даже противоположным. Например, соединения формулы (I) могут вызывать гибель клеток в дифференцированных раковых клетках и вызывать клеточную дифференцировку в недифференцированных раковых клетках. В других воплощениях соединения формулы (I) могут ингибировать пролиферацию раковых стволовых клеток и дифференцированных раковых стволовых клеток, таких как соматические раковые клетки.

Соединения формулы (I) можно использовать совместно с, или альтернативно в отсутствие, других химиотерапевтических веществ.

Соединения формулы (I) можно использовать в лечении рака, который устойчив к одному или более чем одному химиотерапевтическому веществу.

В силу их биологических эффектов на недифференцированные раковые клетки соединения формулы (I) в частности находят применение в лечении рецидивирующего рака у субъекта, и в уменьшении числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака у субъекта, считающегося подверженным риску возникновения рецидивов рака, например субъекта, который находится в состоянии ремиссии рака. Субъект может находиться в состоянии ремиссии солидной опухоли, как определено в данном документе. Соединения формулы (I) также могут находить применение в индукции апоптоза или ингибировании пролиферации раковых стволовых клеток. Соединения формулы (I) также могут находить применение в лечении заболеваний, вызванных раковыми стволовыми клетками, таких как рак. Рак может представлять собой метастатический рак.

Кроме того, соединения формулы (I) могут обладать превосходными фармацевтическими свойствами, такими как улучшенная устойчивость к конъюгации под действием глюкуронилтрансфераз и других водорастворимых трансфераз, таких как сульфазы, которые могут быть сверхэкспрессированы на пролиферативных клетках, таких как раковые клетки. Это может преимущественно обеспечивать превосходные фармацевтические свойства, такие как улучшенный фармакокинетический профиль за счет пониженной конъюгации и выделения.

Во всех аспектах изобретения рак может представлять собой солидную опухоль, такую как, например рак молочной железы, рак легкого (немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) и мелкоклеточный рак легкого (МРЛ)), рак предстательной железы, рак яичника, рак матки, перитонеальный рак, рак головного мозга (включая, например, глиомы, такие как глиобластома, диффузная внутренняя понтинная глиома (DIPG, от англ. "Diffuse Intrinsic Pontine Glioma") и медуллобластома), рак кожи, рак толстой кишки, рак мочевого пузыря, колоректальный рак, рак желудка, рак печени, рак поджелудочной железы, рак головы и шеи, меланома, злокачественный асцит, мезотелиома или нейробластома. Рак головного мозга может быть взрослым или детским. Глиома может быть устойчивой к темозоломиду (ТМЗ) или чувствительной к ТМЗ.

В конкретных воплощениях рак представляет собой рак яичника, нейробластому, рак предстательной железы или рак головного мозга (включая, например, глиомы, такие как глиобластома, DIPG и медуллобластома). В других воплощениях рак представляет собой рак яичника, рак предстательной железы или рак головного мозга (включая, например, глиомы, такие как глиобластома, DIPG и медуллобластома). В дополнительных воплощениях рак представляет собой рак яичника, глиому, колоректальный рак, рак предстательной железы, рак молочной железы, рак легкого, рак печени, меланому или злокачественный асцит. В других воплощениях рак может представлять собой рак поджелудочной железы, колоректальный рак, меланому, рак предстательной железы, рак головного мозга (включая детский и взрослый), рак яичника, рак молочной железы, рак легкого, рак печени, рак матки, нейробластому, мезотелиому, злокачественный асцит или перитонеальный рак.

Соединения формулы (I) могут находить применение в индукции апоптоза или ингибировании пролиферации раковых стволовых клеток яичника. Таким образом, в одном воплощении изобретения предложен способ индукции апоптоза или ингибирования пролиферации раковых стволовых клеток яичника, согласно которому раковые стволовые клетки яичника приводят во взаимодействие с эффективным количеством соединения формулы (I). Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 41, или альтернативно соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 40, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, 13 и 36, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 2. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера. Раковые стволовые клетки яичника могут быть устойчивы к цисплатину и/или паклитакселу. Соединение формулы (I) можно вводить внутрибрюшинно.

Соединения формулы (I) могут находить применение в лечении рака яичника у субъекта. Таким образом, в одном воплощении изобретения предложен способ лечения рака яичника у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Рак может представлять собой рецидивирующий рак. Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 41, или альтернативно соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 40, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, 13 и 36, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 2. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера. Рак яичника может быть устойчив к цисплатину и/или паклитакселу. Соединение формулы (I) можно вводить внутрибрюшинно.

Соединения формулы (I) могут находить применение в уменьшении числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака у субъекта, считающегося подверженным риску возникновения рецидивов рака. Таким образом, в одном воплощении изобретения предложен способ уменьшения числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака у субъекта, считающегося подверженным риску возникновения рецидивов рака, согласно которому вводят субъекту эффективное количество соединения формулы (I). Субъект, считающийся подверженным риску возникновения рецидивов рака, может представлять собой субъект в состоянии ремиссии рака яичника или субъект в состоянии ремиссии рака головного мозга, такого как глиома. Способ может включать уменьшение числа новых случаев или риска возникновения рецидивов рака яичника или возникновения рецидивов рака головного мозга у субъекта. Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 2 или соединение 9. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

Соединения формулы (I) могут находить применение в лечении заболевания у субъекта, вызванного раковыми стволовыми клетками яичника. Таким образом, в одном воплощении изобретения предложен способ лечения заболевания у субъекта, вызванного раковыми стволовыми клетками яичника, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Заболевание может представлять собой рак. Рак может представлять собой рак яичника или какой-нибудь другой вид рака, например метастатический рак. Рак может быть устойчив к цисплатину и/или паклитакселу. Соединение формулы (I) можно вводить внутрибрюшинно. Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 2. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

Соединения формулы (I) могут находить применение в индукции апоптоза или ингибировании пролиферации раковых стволовых клеток головного мозга, таких как стволовые клетки глиомы. Таким образом, в одном воплощении изобретения предложен способ ингибирования пролиферации раковых стволовых клеток головного мозга, таких как стволовые клетки глиомы, согласно которому раковые стволовые клетки головного мозга приводят во взаимодействие с эффективным количеством соединения формулы (I). Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 41, или альтернативно соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 40, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 36, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6 и 9, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13, или альтернативно можно выбрать из соединений 2 и 9. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 9. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

Соединения формулы (I) могут находить применение в лечении заболевания у субъекта, вызванного раковыми стволовыми клетками головного мозга, такими как стволовые клетки глиомы. Таким образом, в одном воплощении изобретения предложен способ лечения заболевания у субъекта, вызванного раковыми стволовыми клетками головного мозга, такими как стволовые клетки глиомы, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Заболевание может представлять собой рак. Рак может представлять собой рак головного мозга или какой-нибудь другой вид рака, например метастатический рак. Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 41, или альтернативно соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 40, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 36, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6 и 9, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13, или альтернативно можно выбрать из соединений 2 и 9. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 9. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

В другом воплощении изобретения предложен способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Рак может представлять собой колоректальный рак, рак головного мозга (такой как, например глиома, DIPG или медуллобластома), рак яичника, рак поджелудочной железы, рак предстательной железы, рак молочной железы, рак легкого, рак печени, меланому, нейробластому или злокачественный асцит. Рак головного мозга может быть взрослым или детским. Рак может представлять собой рак яичника, рак предстательной железы, рак головного мозга или нейробластому. Рак может представлять собой рак яичника, рак предстательной железы или рак головного мозга. Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 или с 32 по 41, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 или с 32 по 40, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 или с 32 по 36, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, 16, с 18 по 22, 24 или с 32 по 35, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, 13 и 36, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

В другом воплощении изобретения предложен способ лечения рака головного мозга у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Рак головного мозга может представлять собой глиому, например глиобластому, DIPG или медуллобластому. Рак головного мозга может быть взрослым или детским. Рак может представлять собой рецидивирующий рак. Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 41, или альтернативно соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 1 по 14 и с 32 по 40, или альтернативно можно выбрать из соединений с 1 по 14, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 36, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6 и 9, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9 и 13, или альтернативно можно выбрать из соединений 2 и 9. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 9. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Глиома может быть ТМЗ-устойчивой или чувствительной к ТМЗ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

В еще дополнительном воплощении изобретения предложен способ лечения рака предстательной железы у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 41, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 40. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений с 33 по 41 или из соединений с 33 по 40. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 33 или 36. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 36. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера. Соединение формулы (I) можно вводить ректально.

В еще дополнительном воплощении изобретения предложен способ лечения нейробластомы у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 41, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 40. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 9 или соединение 36. Нейробластома может представлять собой детскую нейробластому. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

В еще дополнительном воплощении изобретения предложен способ лечения меланомы у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 41, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 40. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 9. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

В еще другом воплощении изобретения предложен способ лечения злокачественного асцита у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения формулы (I). Соединение формулы (I) может представлять собой любую комбинацию одного или более соединений с 1 по 41. Соединение формулы (I) можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 41, или альтернативно можно выбрать из соединений 2, 6, 9, с 19 по 22, 24 и с 32 по 40. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 2 или соединение 9. Соединение формулы (I) может представлять собой соединение 2. Соединения формулы (I) можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

В другом воплощении изобретения предложен способ лечения рака яичника, перитонеального рака, злокачественного асцита, рака матки, рака поджелудочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака печени, рака молочной железы, рака легкого или рака предстательной железы у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения 2. Соединение можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединение может находиться в форме (+) энантиомера.

В другом воплощении изобретения предложен способ лечения рака головного мозга, нейробластомы, меланомы, рака яичника, рака поджелудочной железы, рака легкого, рака печени, колоректального рака или рака предстательной железы у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения 9. Рак головного мозга может представлять собой глиому, например, DIPG. Соединение можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединение может находиться в форме (+) энантиомера.

В другом воплощении изобретения предложен способ лечения рака предстательной железы, рака головного мозга, рака легкого, рака печени, рака молочной железы, меланомы, рака поджелудочной железы, рака яичника или колоректального рака у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения 36. Рак головного мозга может представлять собой глиому, например, DIPG. Соединение можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединение может находиться в форме (+) энантиомера.

В другом воплощении изобретения предложен способ лечения рака печени у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому вводят субъекту терапевтически эффективное количество соединения 20 или соединения 33. Соединения можно использовать в отсутствие других химиотерапевтических веществ. Соединения могут находиться в форме (+) энантиомера.

Квалифицированным специалистам в данной области техники будет понятно, что соединения и фармацевтические композиции по настоящему изобретению можно вводить любым способом, который доставляет эффективное количество соединений к ткани или месту, которое подвергается лечению. В общем, соединения и композиции можно вводить парентеральным (например, внутривенным, внутрипозвоночным, подкожным или внутримышечным), пероральным способом или местным образом. Введение может быть системным, регионарным или местным. В одном воплощении введение может быть ректальным.

Конкретный способ введения, который используется в каждом отдельно взятом случае, будет зависеть от ряда факторов, включая природу подвергаемого лечению рака, тяжесть и степень рака, необходимую дозировку конкретного доставляемого соединения и возможные побочные эффекты соединения.

В общем, подходящие композиции могут быть получены в соответствии со способами, которые известны специалистам в данной области техники, и могут включать фармацевтически приемлемые носители, разбавители и/или эксципиенты. Носители, разбавители и эксципиенты должны быть "приемлемыми" с точки зрения совместимости с другими ингредиентами композиции и не вредными для реципиента.

Примеры фармацевтически приемлемых носителей или разбавителей представляют собой деминерализованную или дистиллированную воду; солевой раствор; масла растительного происхождения, такие как арахисовое масло, сафлоровое масло, оливковое масло, хлопковое масло, кукурузное масло или кокосовое масло; силиконовые масла, включая полисилоксаны, такие как метилполисилоксан, фенилполисилоксан и метилфенилполисилоксан; летучие силиконы; минеральные масла, такие как жидкий парафин, мягкий парафин или сквалан; производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия или гидроксипропилметилцеллюлоза; Кремофор; циклодекстрины; низшие алифатические спирты, например этанол или изопропанол; низшие аралифатические спирты; низшие полиалкиленгликоли или низшие алкиленгликоли, например полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль, этиленгликоль, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль или глицерин; сложные эфиры жирных кислот, такие как изопропилпальмитат, изопропилмиристат или этилолеат; поливинилпиридон; агар; каррагенан; трагакантовую камедь или аравийскую камедь и вазелин. Обычно носитель или носители составляют от 10% до 99,9% от массы композиций.

Фармацевтические композиции по изобретению могут находиться в форме, подходящей для введения в ходе инъекции, в форме препарата, подходящего для перорального приема внутрь (такой как, например капсулы, таблетки, таблетки в форме капсулы, эликсиры), в форме мази, крема или лосьона, подходящего для местного введения, в форме, подходящей для доставки в виде глазных капель, в аэрозольной форме, подходящей для введения путем ингаляции, такой как внутриносовая ингаляция или пероральная ингаляция, в форме, подходящей для парентерального введения, которое представляет собой подкожную, внутримышечную или внутривенную инъекцию.

Для введения в виде инъекционного раствора или суспензии нетоксичные парентерально приемлемые разбавители или носители могут включать циклодекстрины (например, Captisol®), Кремофор, раствор Рингера, изотонический солевой раствор, фосфатно-солевой буферный раствор, этанол и 1,2-пропиленгликоль. Для помощи в инъекции и доставки соединения также могут быть дополнены полиэтиленгликолем (ПЭГ) и непегилированными липосомами или мицеллами со специфическими направленными метками, присоединенными к группировкам ПЭГ, такими как RGD-пептид или глутатион, что способствует прохождению через гематоэнцефалический барьер.

Некоторые примеры подходящих носителей, разбавителей, эксципиентов и адъювантов для перорального применения включают циклодекстрины, Кремофор, арахисовое масло, жидкий парафин, карбоксиметилцеллюлозу натрия, метилцеллюлозу, альгинат натрия, аравийскую камедь, трагакантовую камедь, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, желатин и лецитин. Кроме того эти пероральные препараты могут содержать подходящие ароматизирующие и окрашивающие вещества. При использовании в капсульной форме капсулы могут быть покрыты соединениями, такими как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, которые замедляют разложение.

Адъюванты обычно включают смягчающие вещества, эмульгаторы, загустители, консерванты, бактерициды и буферные вещества.

Твердые формы для перорального введения могут содержать связующие вещества, приемлемые для фармацевтического применения человеком и в ветеринарии, подсластители, разрыхлители, разбавители, ароматизаторы, покрывающие вещества, консерванты, смазывающие вещества и/или замедляющие вещества. Подходящие связывающие вещества включают аравийскую камедь, желатин, кукурузный крахмал, трагакантовую камедь, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлозу или полиэтиленгликоль. Подходящие подсластители включают сахарозу, лактозу, глюкозу, аспартам или сахарин. Подходящие разрыхлители включают кукурузный крахмал, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, гуаровую камедь, ксантановую камедь, бентонит, альгиновую кислоту или агар. Подходящие разбавители включают лактозу, сорбит, маннит, декстрозу, каолин, целлюлозу, карбонат кальция, силикат кальция или гидрофосфат кальция. Подходящие ароматизаторы включают масло мяты перечной, масло винтергрена, вещество, придающее аромат вишни, апельсина или малины. Подходящие покрывающие вещества включают полимеры или сополимеры акриловой кислоты и/или метакриловой кислоты, и/или их сложных эфиров, воски, жирные спирты, зеин, шеллак или глютен. Подходящие консерванты включают бензоат натрия, витамин Е, альфа-токоферол, аскорбиновую кислоту, метилпарабен, пропилпарабен или гидросульфит натрия. Подходящие смазывающие вещества включают стеарат магния, стеариновую кислоту, олеат натрия, хлорид натрия или тальк. Подходящие замедляющие вещества включают глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат.

Жидкие формы для перорального введения могут содержать в дополнение к вышеперечисленным веществам жидкий носитель. Подходящие жидкие носители включают воду, масла, такие как оливковое масло, арахисовое масло, кунжутное масло, подсолнечное масло, сафлоровое масло, кокосовое масло, жидкий парафин, этиленгликоль, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, этанол, пропанол, изопропанол, глицерин, жирные спирты, триглицериды или их смеси.

Суспензии для перорального введения могут дополнительно содержать диспергирующие вещества и/или суспендирующие вещества. Подходящие суспендирующие вещества включают карбоксиметилцеллюлозу натрия, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, поливинилпирролидон, альгинат натрия или ацетиловый спирт. Подходящие диспергирующие вещества включают лецитин, полиоксиэтиленовые эфиры жирных кислот, таких как стеариновая кислота, полиоксиэтилен сорбита моно- или ди-олеат, -стеарат или -лаурат, полиоксиэтилен сорбитана моно- или ди-олеат, -стеарат или -лаурат и подобные.

Эмульсии для перорального введения могут дополнительно содержать одно или более эмульгирующих веществ. Подходящие эмульгирующие вещества включают диспергирующие вещества, примеры которых приведены выше, или природные камеди, такие как гуаровая камедь, аравийская камедь или трагакантовая камедь.

Способы получения парентерально вводимых композиций очевидны квалифицированным специалистам в данной области техники, и описаны подробно, например, в Remington's Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., включенного в данный документ путем ссылки на него.

Препараты для местного применения могут содержать активный ингредиент вместе с одним или более приемлемыми носителями, и возможно другими терапевтическими ингредиентами. Препараты, подходящие для местного введения, включают жидкие или полужидкие составы, подходящие для проникания через кожу к месту, которое требуется лечить, такие как линименты, лосьоны, крема, мази или пасты, и капли, подходящие для введения в глаза, уши или нос.

Капли по настоящему изобретению могут содержать стерильные водные или масляные растворы или суспензии. Их можно получить, растворяя активный ингредиент в водном растворе бактерицидного и/или противогрибкового вещества, и/или любого другого подходящего консерванта, и возможно включая поверхностно-активное вещество. Полученный в результате раствор затем можно сделать прозрачным в ходе фильтрации, перенести в подходящий контейнер и стерилизовать. Стерилизацию можно выполнить в автоклаве, или выдерживая при температуре от 90°С до 100°С в течение получаса, или в ходе фильтрации с последующим переносом в контейнер асептическим способом. Примерами бактерицидных и противогрибковых веществ, подходящих для включения в капли, являются нитрат или ацетат фенилртути (0,002%), бензалкония хлорид (0,01%) и хлоргексидина ацетат (0,01%). Подходящие растворители для получения масляных растворов включают глицерин, разбавленный спирт и пропиленгликоль.

Лосьоны по настоящему изобретению включают те, что подходят для применения на кожи или в глаза. Глазной лосьон может включать стерильный водный раствор, возможно содержащий бактерицид, и может быть получен способами, подобными тем, что описаны выше применительно к получению капель. Лосьоны или линименты для применения на кожи также могут включать вещество, ускоряющее высыхание и охлаждающее кожу, такое как спирт или ацетон, и/или увлажнитель, такой как глицерин, или масло, такое как оливковое масло.

Крема, мази или пасты по настоящему изобретению представляют собой полутвердые препараты активного ингредиента для наружного применения. Их можно получить, смешивая активный ингредиент в тонкоизмельченной или порошкообразной форме, отдельно или в растворе или суспензии в водной или неводной жидкости, с жирной или нежирной основой. Основа может содержать углеводороды, такие как твердый, мягкий или жидкий парафин, глицерин, пчелиный воск, металлсодержащее мыло; растительный клей; масло природного происхождения, такое как миндальное, кукурузное, арахисовое, касторовое или оливковое масло; шерстяной жир или его производные, или жирную кислоту, такую как стеариновая или олеиновая кислота, вместе со спиртом, таким как пропиленгликоль или макроголи.

Композиция может включать любое подходящее поверхностно-активное вещество, такое как анионное, катионное или неионное поверхностно-активное вещество, такое как сложные эфиры сорбитана или его полиоксиэтиленовые производные. Также могут быть включены суспендирующие вещества, такие как природные камеди, производные целлюлозы или неорганические вещества, такие как кремнезем, и другие ингредиенты, такие как ланолин.

В некоторых воплощениях композиции вводят в форме суппозиториев, подходящих для ректального введения соединений формулы (I). Эти композиции получают, смешивая соединение формулы (I) с подходящим нераздражающим эксципиентом, являющимся твердым при обычных температурах, но жидким при ректальной температуре и, следовательно, он будет плавиться в прямой кишке с выделением соединения формулы (I). Такие вещества включают какао-масло, желатин с глицерином, гидрогенизированные растительные масла, смеси полиэтиленгликолей с разными молекулярными массами и полиэтиленгликолевые эфиры жирных кислот.

Композиции также можно вводить или доставлять к намеченным клеткам в форме липосом. Липосомы обычно получают из фосфолипидов или других липидных веществ, и они образованы моно- или многопластинчатыми гидратированными жидкими кристаллами, которые диспергируются в водной среде. Конкретные примеры липосом, используемых при введении или доставке композиции к намеченным клеткам, представляют собой синтетический холестерин (Sigma), фосфолипид 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (ДСФХ) (Avanti Polar Lipids), ПЭГ липид 3-N-[(-метокси-поли(этиленгликоль)2000)карбамоил]-1,2-димиристилокси-пропиламин (ПЭГ-кДМА) и катионный липид 1,2-ди-о-октадеценил-3-(N,N-диметил)аминопропан (ДОДМА) или 1,2-дилинолеилокси-3-(N,N-диметил)аминопропан (ДЛинДМА) в молярных отношениях 55:20:10:15 или 48:20:2:30, соответственно, ПЭГ-кДМА, ДОДМА и ДЛинДМА. Липосомы могут быть созданы из 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин-N-[метокси(полиэтиленгликоль)-2000] (ДСФЭ ПЭГ2000) и фосфатидилхолина, полученного из сои и гидрированного на 50-100%, например Soy РС-75 или Soy РС-100. Можно использовать ПЭГ с различной молекулярной массой (ММ) и ковалентно связывать с разными специфически направленными веществами, такими как глутатион, RGD-пептиды или другие общепризнанные липосомальные направленные вещества. Можно использовать любой нетоксичный, физиологически приемлемый и преобразующийся в ходе обмена веществ липид, способный образовывать липосомы. Композиции в липосомальной форме могут содержать стабилизаторы, консерванты, эксципиенты и т.п. Предпочтительными липидами являются фосфолипиды и фосфатидилхолины (лецитины), как природные, так и синтетические. Способы образования липосом известны в данной области техники, и в отношении их сделана конкретная ссылка: Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y. (1976), стр. 33 и далее, содержание которой включено в данной документ путем ссылки на нее.

Композиции также могут быть введены в форме микрочастиц или наночастиц. Биоразлагаемые микрочастицы, полученные из полилактида (ПЛА), полилактид-ко-гликолида (ПЛГА) и эпсилон-капролактона (-капролактона), широко используются в качестве носителей лекарственного средства для увеличения периода полураспада в плазме и таким образом продлевают эффективность (R. Kumar, М., 2000, J. Pharm. Pharmaceut. Sci. 3(2) 234-258). Микрочастицы разработаны для доставки целого ряда потенциальных лекарственных средств, включая вакцины, антибиотики, и дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК). Кроме того эти препараты разработаны для разных способов доставки, включая парентеральную подкожную инъекцию, внутривенную инъекцию и ингаляцию.

Композиции могут включать матрицу с контролируемым высвобождением, которая содержит сахарозы ацетат-изобутират (САИБ) и органический растворитель или смесь органических растворителей. Полимерные добавки можно прибавить к наполнителю в качестве модификатора высвобождения, чтобы дополнительно увеличить вязкость и замедлить скорость высвобождения. САИБ является хорошо известной пищевой добавкой. Он представляет собой очень гидрофобное, полностью этерифицированное производное сахарозы, при номинальном отношении шести изобутиратов к двум ацетатным группам. В виде смешанного эфира САИБ не кристаллизуется, а существует в виде прозрачной вязкой жидкости. При смешивании САИБ с фармацевтически приемлемым органическим растворителем, таким как этанол или бензиловый спирт, достаточно уменьшается вязкость смеси, чтобы провести инъекцию. Активный фармацевтический ингредиент можно добавить к наполнителю доставки САИБ с образованием препаратов в виде раствора или суспензии САИБ. Когда препарат в ходе инъекции вводят подкожно, растворитель отличается от матрицы, чтобы САИБ-лекарство или смеси САИБ-лекарство-полимер создать в виде образующегося в реакционной смеси депо.

Для целей настоящего изобретения соединения и композиции можно вводить субъектам либо терапевтически, либо предупредительно. При применении в терапевтических целях композиции вводят пациенту, уже страдающему от рака, в количестве достаточном, чтобы вылечить или по меньшей мере частично подавить рак и его осложнения. Композиция должна обеспечивать количество соединения или агента достаточное, чтобы эффективно лечить субъект.

Терапевтически эффективное количество для конкретного субъекта будет зависеть от целого ряда факторов, включая: подвергаемый лечению рак и его тяжесть; активность вводимого соединения; композицию, в которой находится соединение; возраст, вес, общее состояние здоровья, пол и режим питания субъекта; время введения; способ введения; скорость разрушения соединения; продолжительность лечения; лекарства, используемые в сочетании или случайно с соединением, наряду с другими связанными факторами, хорошо известными в медицине.

Квалифицированный специалист в данной области техники способен в ходе обычного экспериментирования определить эффективное, нетоксичное количество соединения, которое необходимо для лечения или предотвращения конкретного вида рака.

В общем, эффективная доза ожидаемо находится в диапазоне приблизительно 0,0001 мг до приблизительно 1000 мг на кг массы тела на 24 часа; обычно, приблизительно 0,001 мг до приблизительно 750 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 0,01 мг до приблизительно 500 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 0,1 мг до приблизительно 500 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 0,1 мг до приблизительно 250 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 1,0 мг до приблизительно 250 мг на кг массы тела на 24 часа. А именно, эффективная доза ожидаемо находится в диапазоне приблизительно 1,0 мг до приблизительно 200 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 1,0 мг до приблизительно 100 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 1,0 мг до приблизительно 50 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 1,0 мг до приблизительно 25 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 5,0 мг до приблизительно 50 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 5,0 мг до приблизительно 20 мг на кг массы тела на 24 часа; приблизительно 5,0 мг до приблизительно 15 мг на кг массы тела на 24 часа.

Альтернативно, эффективная доза может составлять приблизительно 500 мг/м². Как правило эффективная доза ожидаемо находится в диапазоне приблизительно 25 до приблизительно 500 мг/м², предпочтительно приблизительно 25 до приблизительно 350 мг/м², более предпочтительно приблизительно 25 до приблизительно 300 мг/м², еще более предпочтительно приблизительно 25 до приблизительно 250 мг/м², даже более предпочтительно приблизительно 50 до приблизительно 250 мг/м², и даже еще более предпочтительно приблизительно 75 до приблизительно 150 мг/м².

Обычно при применении в терапевтических целях лечение будет длиться в течение всего болезненного состояния.

Кроме того среднему специалисту в данной области техники очевидно, что оптимальное количество и интервал между отдельными дозами определяется природой и степенью подвергаемого лечению рака, формой, способом и местом введения, и природой конкретного субъекта, которого лечат. При этом такие оптимальные условия можно определить общепринятыми способами.

Соединения формулы (I) можно использовать сами по себе в лечении рака, или альтернативно в сочетании с радиотерапией и/или операцией, и/или другими лекарственными средствами, например химиотерапевтическими веществами и иммуностимулирующими веществами, в рамках комбинированного лечения. Соединения формулы (I) могут делать недифференцированные раковые клетки восприимчивыми к другим химиотерапевтическим веществам и/или радиотерапии.

Предполагается, что термины "комбинированное лечение" и "вспомогательная терапия" охватывают введение многочисленных лекарственных средств последовательным образом в режиме, который обеспечит положительные эффекты, и предполагается, что охватывают введение этих веществ либо в одном препарате, либо в раздельных препаратах.

Комбинированное лечение может включать активные вещества, вводимые совместно, последовательно или раздельно в зависимости от конкретного случая. Комбинации активных веществ, включая соединения по изобретению, могут оказывать синергетическое действие.

Совместное введение соединений формулы (I) с другим терапевтическим веществом(ами) можно выполнить, когда соединение формулы (I) находится в той же стандартной лекарственной форме, что и другое терапевтическое вещество(а), или соединение формулы (I) и другое терапевтическое вещество(а) могут находиться в индивидуальных и раздельных стандартных лекарственных формах, которые вводят последовательно, в одно и то же время или в похожее время. Последовательное введение можно осуществлять в любом порядке, как требуется, и может потребоваться непрерывный физиологический эффект первого или исходного агента, который является действующим, когда вводят второй или последующей агент, особенно когда желателен кумулятивный или синергический эффект. При раздельном введении это может быть предпочтительно для соединения формулы (I) и другого агента, который вводят тем же способом введения, хотя это не обязательно должно быть так.

Согласно разным воплощениям настоящего изобретения одно или более соединений формулы (I) могут быть включены в комбинированное лечение с оперативным вмешательством и/или радиотерапией, и/или одним или более химиотерапевтическими веществами.

Существует большое число химиотерапевтических веществ, которые применяются в настоящее время в клиническом обследовании и доклиническом исследовании, которые можно выбрать для лечения рака в сочетании с соединениями формулы (I). Такие вещества разделяют на несколько основных классов, а именно, вещества типа антибиотиков, алкилирующие агенты, антиметаболиты, гормональные препараты, иммунологические вещества, вещества типа интерферона и класс смешанных веществ. Альтернативно, можно использовать другие химиотерапевтические вещества, такие как ингибиторы металломатричных протеаз (ММП). Подходящие вещества, которые можно использовать в комбинированных лечениях, включают те, что перечислены, например, в Merck Index, An Encyclopaedia of Chemicals, Drugs and Biologicals, 12th Ed., 1996, содержание которого включено в данный документ полностью путем ссылки на него.

При использовании в лечении солидных опухолей соединения формулы (I) можно вводить с одним или более следующими химиотерапевтическими веществами: адриамицин, таксол, доцетаксел, фторурацил, мелфалан, цисплатин, альфа-интерферон, СОМР (циклофосфамид, винкристин, метотрексат и преднизон), этопозид, mBACOD (метотрексат, блеомицин, доксорубицин, циклофосфамид, винкристин и дексаметазон), PROMACE/MOPP (преднизон, метотрексат (с лейковорином в качестве резервного препарата), доксорубицин, циклофосфамид, таксол, этопозид/мехлоретамин, винкристин, преднизон и прокарбазин), винкристин, винбластин, ангиоингибины, TNP 470, пентосан полисульфат, тромбоцитарный фактор 4, ангиостатин, LM 609, SU 101, СМ 101, Techgalan, талидомид, SP-PG и подобные.

Настоящее изобретение дополнительно описано ниже со ссылкой на следующие неограничивающие примеры.

Примеры

Пример 1 - Синтез соединений Формулы (I)

Репрезентативные соединения формулы (I) получали следующим образом.

1a R1 - Me, R2, R3 - H, R13, R15 - H, R14 - OH	1k R1 - Me, R2 - Et, R3, R13, R15 - H, R14 - OH
1b R1, R2, R3, R15 - H, R13 - F, R14 - OH	1l R1 - Et, R2, R3, R13, R15 - H, R14 - OH
1c R1 - Me, R2, R3, R15 - H, R13 - F, R14 - OH	1m R2 - Me, R1, R3, R13, R15 - H, R14 - OH
1d R1, R2, R3, R13, R15 - Me, R14 - OMe	1n R3, R13 - F, R1, R2, R15 - H, R14 - OH
1e R1 - Me, R2, R3 - H, R13, R15 - F, R14 - OH	1o R2 - Cl, R1, R3, R15 - H, R13 - F, R14 - OH
1f R1 - iPr, R2, R3, R15 - H, R13 - F, R14 - OH	1p R1 - Me, R2, R3, R15 - H, R13 - Cl, R14 - OH
1g R1, R3, R15 - H, R2 - Et, R13 - F, R14 - OH	1q R1 - Me, R2 - Et, R3, R15 - H, R13 - F, R14 - OH
1h R1 - Me, R2, R3, R15 - H, R13, R14 - -OCH2O-	1r R1 - Me, R2 - Et, R3, R15 - H, R13- Me, R14 - OH
1i R1 - Me, R2, R3 - H, R13, R15 - H, R14 - NH2	1s R1 - Me, R2 - Et, R3, R15 - H, R13 - Me, R14 - OH
1j R1 - Me, R2, R3 - H, R13, R15 - H, R14 - NHAc	1t R1 - Me, R2 - Et, R3, R15 - H, R13 - F, R14 - OH

a R₁ - Me, R₁₀, R₁₁, R₁₂ - OMe, R₂, R₃, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₄ - OH

b R₁ - Me, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH, R₂, R₃, R₁₃, R₁₅ - H

с R₁ - Me, R₁₀, R₁₂ - t-Bu, R₁₁, R₁₄ - OH, R₂, R₃, R₁₃, R₁₅ - H

d R₁ - Me, R₁₀, R₁₁, R₁₂ - F, R₂, R₃, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₄ - OH

e R₁, R₂, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃ - F, R₁₄ - OH

f R₁, R₂, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH, R₁₃ - F

g R₁, R₂, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₁, R₁₂ - OMe, R₁₃ - F, R₁₄ - OH

h R₁ - Me, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₃ - F, R₁₄ - OH, R₂, R₃, R₁₅ - H

i R₁ -Me, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH, R₁₃ - F, R₂, R₃, R₁₅ - H

j R₁ - Me, R₁₀, R₁₁, R₁₂ - OMe, R₁₃ - F, R₁₄ - OH, R₂, R₃, R₁₅ - H

k R₁, R₁₃, R₁₅ - Me, R₁₀, R₁₂, R₁₄ - OMe, R₂, R₃, R₁₁ - OH

l R₁, R₁₃, R₁₅ - Me, R₁₀, R₁₁, R₁₂, R₁₄ - OMe, R₂, R₃ - H

m R₁ - Me, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH, R₁₃, R₁₅ - F, R₂, R₃, - H

n R₁ - Me, R₁₀, R₁₁, R₁₂ - OMe, R₁₃, R₁₅ - F, R₁₄ - OH, R₂, R₃ - H

o R₁ - iPr, R₂, R₃, R₁₅ - H, R₁₃ - F, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

p R₁, R₃, R₁₅ - H, R₂ - Et, R₁₃ - F, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

q R₁ - Me, R₂, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁ - OMe, R₁₁ - OH, R₁₃, R₁₄ - -OCH₂O-

r R₁ - Me, R₂, R₃ - H, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁ - OH, R₁₄ - NH₂

s R₁ - Me, R₂, R₃ - H, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁ -OH, R₁₄ - NHEt

t R₁ - Me, R₂ - Et, R₃, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

u R₁ - Et, R₂, R₃, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

v R₂ - Me, R₁, R₃, R₁₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

w R₃, R₁₃ - F, R₁, R₂, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

x R₂ - Cl, R₁, R₃, R₁₅ - H, R₁₃ - F, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

y R₁ - Me, R₂, R₃, R₁₅ - H, R₁₃ - Cl, R₁₀, R₁₂ - OMe, R₁₁, R₁₄ - OH

z R₁ - Me, R₂ - Et, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₃ - OMe, R₁₃ - F, R₁₁, R₁₄ - OH

aa R₁ - Me, R₂ - Et, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₃ - OMe, R₁₃ - Me, R₁₁, R₁₄ - OH

bb R₁ - Me, R₂ - Et, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₃ - Me, R₁₃ - F, R₁₁, R₁₄ - OH

cc R₁ - Me, R₂ - Et, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₃ - OMe, R₁₃ - Me, R₁₁, R₁₄ - OH

dd R₁ - Me, R₂ - Et, R₃, R₁₅ - H, R₁₀, R₁₃ - Me, R₁₃ - F, R₁₁, R₁₄ - OH

Стадия 1. ZnCl₂, POCl₃, 70°С, 2 часа; Стадия 2. Диизопропилэтиламин (ДИПЭА), Ac₂O, 135°С, 18 часов. Стадия 3. Тетрагидрофуран (ТГФ), BH₃.Me₂S в ТГФ, 35°С, 18 часов; Стадия 4. Н₂, Pd/C, EtOH, 3 бар, 40°С, 18 часов.

Стадия 1. (2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(4-гидроксифенил)метанон (1-1а)

2-Метилрезорцин (50 г, 1 экв.), 4-гидроксибензойную кислоту (55,5 г, 1 экв.), хлорид цинка (120 г, 2,2 экв.) и POCl₃ (550 мл) добавляли в колбу в атмосфере N₂ и перемешивали. Смесь нагревали до 70°С в течение 2 часов, охлаждали до комнатной температуры (к.т.) и выливали в лед/воду (4 л), поддерживая температуру менее 30°С. Твердое вещество фильтровали, промывали водой (3×500 мл). Затем влажное твердое вещество перекристаллизовывали из промышленного метилированного спирта (ПМС) (250 мл) и сушили, получая продукт в виде оранжевого твердого вещества, 85 г (87%). ¹Н ЯМР (ядерный магнитный резонанс) (300 МГц, дейтерированный диметилсульфоксид (ДМСО-d₆)) δ 12,91 (s, 1Н), 10,59 (s, 1Н), 10,30 (s, 1Н), 7,28 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 7,18 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 6,46 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 6,24 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 2,02 (s, 3Н).

Другие аналоги, полученные этим способом:

(2,4-Дигидроксифенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1b) (47%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 11,90 (bs, 1Н), 7,51-7,32 (m, 3Н), 7,09 (t, J=8,5 Гц, 1Н), 6,45-6,33 (m, 2Н).

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1с) (41%). ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,72 (s, 1Н), 10,76 (s, 1Н), 10,65 (s, 1Н), 7,43 (dd, J=1,96, 11,74 Гц, 1Н), 7,33 (d, J=9,00 Гц, 2Н), 7,06 (t, J=8,41 Гц, 1Н), 6,45 (d, J=9,00 Гц, 1Н), 1,99 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(4-метокси-3,5-диметилфенил)метанон (1-1d) (63%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,89 (s, 1Н), 10,67 (s, 1Н), 10,15 (s, 1Н), 7,38-7,15 (m, 3Н), 6,52-6,43 (m, 1Н), 3,72 (s, 3Н), 2,28 (s, 6Н).

(3,5-Дифтор-4-гидроксифенил)(2,4-дигидрокси-3-метилфенил)метанон (1-1е) (43%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,61 (s, 1Н), 10,84 (bs, 1Н), 9,70 (bs, 1Н), 7,23-7,10 (m, 2Н), 6,98-6,85 (m, 1Н), 2,20 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-3-изопропилфенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1f) (18%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,88 (bs, 1Н), 7,62 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 7,31 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 7,12 (d, J=8,9 Гц, 2Н), 6,47 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 1,95 (m, 2Н), 1,65 (m, 2Н), 1,2 (t, J=9,1 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-этилфенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1g) (77%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 7,41 (d, J=1,2 Гц, 1Н), 7,32 (d, J=1,4 Гц, 1Н), 7,22 (dd, J=1,2, 8,2 Гц), 7,08 (d, J=1,2 Гц, 1H), 7,00 (d, J=8,1 Гц, 1H), 2,51 (q, J=9,1 Гц, 2H), 1,22 (t, J=9,2 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(3-4-метилендиоксифенил)метанон (1-1h) (22%) ¹H ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,65 (br s, 1Н), 9,87 (br s, 1H), 7,38 (d, J=8,2 Гц, 1H), 7,25 (m, 2H), 7,05 (d, J=8,3 Гц, 1H), 6,43 (d, J=8,2 Гц, 1H), 6,06 (s, 2H), 2,02 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(4-нитрофенил)метанон (1-1i) (38%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,96 (br s, 1Н), 8,33 (d, J=8,7 Гц, 2Н), 7,97 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,09 (d, J=8,12 Гц, 1Н), 6,90 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 2,05 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(4-ацетамидфенил)метанон (1-1j) (38%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 13,21 (br s, 1Н), 9,66 (br s, 1Н), 7,88 (d, J=8,1 Гц, 2H), 7,44 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,56 (d, J=8,2 Гц, 1H), 6,50 (d, J=8,3 Гц, 2H), 6,10 (s, 1Н), 2,09 (s, 3Н), 2,02 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-этил-3-метилфенил)(4-гидроксифенил)метанон (1-1k) (42%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 13,55 (s, 1Н), 11,20 (br, 1Н), 10,90 (br, 1Н), 7,44 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,11 (s, 1Н), 6,99 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 3,45 (q, J=7,9 Гц, 2Н), 2,2 (s, 3Н), 1,34 (t, J=8,0 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-3-этилфенил)(4-гидроксифенил)метанон (1-1l) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,2 (s, 1Н), 7,43 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,35 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,11 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,55 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 2,65 (m, 2Н), 1,04 (t, J=7,8 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-метилфенил)(4-гидроксифенил)метанон (1-1m) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 11,90 (s, 1Н), 10,90-95 (br, 2Н), 7,40 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 7,33 (s, 1Н), 7,11 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,33 (s, 1Н), 2,05 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-фторфенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1n) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 7,99 (m, 1Н), 7,55-7,35 (m, 3Н), 7,05 (m, 1Н), 6,55 (s, 1Н).

(5-Хлор-2,4-дигидроксифенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1o) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 11,11 (s, 1Н), 7,89 (m, 1Н), 7,55-45 (m, 2Н), 7,11 (s, 1Н), 6,5 (s, 1Н).

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(3-хлор-4-гидроксифенил)метанон (1-1p) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 12,91 (s, 1Н), 11,11 (br, 1Н), 10,65 (br, 1Н), 7,90 (s, 1Н), 7,55 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 7,36 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 7,11 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,23 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 2,05 (s, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-этил-3-метилфенил)(3-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1q) (42%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 13,55 (s, 1Н), 11,20 (br, 1Н), 10,90 (br, 1Н), 7,55-7,45 (m, 2Н), 7,11 (brs, 1Н), 7,01 (s, 1Н), 3,45 (q, J=7,9 Гц, 2Н), 2,2 (s, 3Н), 1,34 (t, J=8,0 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-этил-3-метилфенил)(3-метил-4-гидроксифенил)метанон (1-1r) (41%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 9,55 (s, 1Н), 8,20 (br, 1Н), 7,90 (br, 1Н), 6,65 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,60 (dd, J=7,1, 2,1 Гц, 1Н), 6,45 (s, 1Н), 6,35 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 3,15 (q, J=7,9 Гц, 2Н), 2,2 (s, 3Н), 1,14 (t, J=8,0 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-этил-3-метилфенил)(2-метил-4-гидроксифенил)метанон (1-1s) (32%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 9,59 (s, 1Н), 8,60 (br, 1Н), 7,95 (br, 1Н), 6,68 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,60 (s, 1Н), 6,56 (d, J=7,Гц, 1Н), 6,35 (dd, J=6,9, 2,1 Гц, 1Н), 3,25 (q, J=7,8 Гц, 2Н), 2,2 (s, 3Н), 1,24 (t, J=8,0 Гц, 3Н).

(2,4-Дигидрокси-5-этил-3-метилфенил)(2-фтор-4-гидроксифенил)метанон (1-1t) (38%) ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 10,9 (s, 1Н), 9,16 (br, 1Н), 7,95 (br, 1Н), 6,78 (dd J=6,9, 6,2 Гц, 1Н), 6,62 (brd, J=7,1 Гц, 1Н), 6,56 (s, 1Н), 6,45 (brd, J=6,9 Гц, 1Н), 3,28 (q, J=7,8 Гц, 2Н), 2,2 (s, 3Н), 1,14 (t, J=8,0 Гц, 3Н).

Стадия 2. 3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетоксифенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2а)

(2,4-Дигидрокси-3-метилфенил)(4-гидроксифенил)метанон (36,8 г, 1 экв.) и 3,5-диметокси-4-гидроксифенилуксусную кислоту (32 г, 1 экв.) добавляли в уксусный ангидрид (110 мл), при перемешивании затем добавляли диизопропилэтиламин (64,4 г, 4,5 экв.) в течение 5 минут. Реакционную смесь нагревали до температуры от 130 до 140°С в течение 18 часов, затем охлаждали до комнатной температуры и выливали в воду (750 мл). Водную фазу экстрагировали дихлорметаном (ДХМ) (2×750 мл), промывали водой (500 мл), солевым раствором (300 мл), сушили над MgSO₄, затем упаривали, получая темно-коричневое вязкое твердое вещество. Неочищенное вещество обрабатывали EtOAc (200 мл), перемешивали, нагревали с обратным холодильником и охлаждали, твердое вещество отфильтровывали, промывали ледяным EtOAc (50 мл), получая светло-желтое твердое вещество (66 г). Твердое вещество обрабатывали 2×EtOAc (100 мл), перемешивая при к.т. в течение 30 минут, фильтровали, получая белое твердое вещество (62 г, 76%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,18-7,07 (m, 5Н), 6,93 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,37 (s, 2Н), 3,62 (s, 6Н), 2,38 (s, 3Н), 2,36 (s, 3Н), 2,30 (s, 3Н), 2,28 (s, 3Н).

Другие аналоги, полученные этим способом:

4-(7-Ацетокси-8-метил-2-оксо-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-4-ил)фенилацетат (1-2b) (61%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,17-7,06 (m, 5Н), 6,91 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,34 (s, 2Н), 3,80 (s, 3Н), 3,65 (s, 6Н), 2,38 (s, 3Н), 2,36 (s, 3Н), 2,30 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-ди-трет-бутилфенил)-4-(4-ацетоксифенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2с) (21%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,20-7,00 (m, 7Н), 6,94-6,86 (m, 2Н), 2,36 (s, 3Н), 2,34 (s, 3Н), 2,29 (s, 3Н), 1,44 (s, 9Н), 1,09 (s, 9Н).

4-(7-Ацетокси-8-метил-2-оксо-3-(3,4,5-трифторфенил)-2Н-хромен-4-ил)фенилацетат (1-2d) (20%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,18-7,08 (m, 5Н), 7,01 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 6,80-6,71 (m, 2Н), 2,38 (s, 3Н), 2,36 (s, 3Н), 2,33 (s, 3Н).

4-(7-Ацетокси-2-оксо-3-(3,4,5-трифторфенил)-2Н-хромен-4-ил)-2-фторфенилацетат (1-2е) (76%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 7,57-7,29 (m, 4Н), 7,21-7,10 (m, 4Н), 2,31 (s, 6Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-3-фторфенил)-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2f) (68%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,31-7,20 (m, 2Н), 7,17-7,10 (m, 1Н), 7,07-6,98 (m, 2Н), 6,94-6,88 (m, 1Н), 6,38 (s, 2Н), 3,64 (s, 6Н), 2,36 (s, 3Н), 2,34 (s, 3Н), 2,29 (s, 3Н).

4-(7-Ацетокси-2-оксо-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-4-ил)-2-фторфенилацетат (1-2g) (50%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,32-7,22 (m, 2Н), 7,18-7,05 (m, 1Н), 7,08-6,90 (m, 3Н), 6,33 (s, 2Н), 3,72 (s, 3Н), 3,69 (s, 6Н), 2,38 (s, 6Н).

4-(4-Ацетокси-3-фторфенил)-8-метил-2-оксо-3-(3,4,5-трифторфенил)-2Н-хромен-7-илацетат (1-2h) (49%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,37-7,05 (m, 4Н), 7,03-6,88 (m, 2Н), 6,81-6,70 (m, 1Н), 6,38 (s, 1Н), 2,36 (bs, 9Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-3-фторфенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2i) (46%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,18-6,87 (m, 5Н), 6,39 (s, 2Н), 3,66 (s, 6Н), 2,38 (s, 3Н), 2,36 (s, 3Н), 2,33 (s, 3Н), 2,29 (s, 3Н).

4-(4-Ацетокси-3-фторфенил)-8-метил-2-оксо-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-илацетат (1-2j) (49%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,16-6,89 (m, 5Н), 6,34 (s, 2Н), 3,82 (s, 3Н), 3,68 (s, 6Н), 2,38 (s, 3Н), 2,34 (s, 3Н), 2,31 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2k) (30%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,20 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 6,92 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 6,77 (s, 2Н), 6,42 (s, 2Н), 3,72 (s, 3Н), 3,61 (s, 6Н), 2,38 (s, 3Н), 2,36 (s, 3Н), 2,30 (s, 3Н), 2,20 (s, 6Н).

4-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-8-метил-2-оксо-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-илацетат (1-2l) (34%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,15 (d, J=8,7 Гц, 1Н), 6,90 (d, J=8,7 Гц, 1Н), 6,76 (s, 2Н), 6,38 (s, 2Н), 3,80 (s, 3Н), 3,71 (s, 3Н), 3,66 (s, 6Н), 2,39 (s, 3Н), 2,37 (s, 3Н), 2,30 (s, 3Н), 2,20 (s, 6Н).

4-(4-Ацетокси-3,5-дифторфенил)-3-(4-ацетокси-3,5-диметоксифенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2m) (30%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,03-6,90 (m, 3Н), 6,84-6,76 (m, 1H), 6,47 (s, 2H), 3,73 (s, 6H), 2,39 (s, 3Н), 2,37 (s, 3Н), 2,34 (s, 3Н), 2,28 (s, 3Н).

4-(4-Ацетокси-3,5-дифторфенил)-8-метил-2-оксо-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-илацетат (1-2n) (22%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,03-6,77 (m, 4Н), 6,40 (s, 2Н), 3,77 (s, 3Н), 3,71 (s, 6Н), 2,38 (s, 3Н), 2,36 (s, 3Н), 2,34 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(3-фтор-4-ацетоксифенил)-8-пропил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2o) (34%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,18 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,15-09 (m, 2Н), 6,87 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 6,82 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,36 (s, 2Н), 3,73 (s, 6Н), 2,75 (t, J=7,6 Гц, 2Н), 2,13 (s, 3Н), 2,10 (s, 3Н), 2,05 (s, 3Н), 1,65 (m, 1Н), 1,06 (t, J=7,6 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(3-фтор-4-ацетоксифенил)-6-этил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2р) (34%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,18 (s, 1Н), 7,16 (m, 1Н), 7,08 (s, 1Н), 7,04 (dd, J=8,2, 1,5 Гц, 1Н), 6,95 (dd, J=8,3, 2,5 Гц, 1Н), 6,35 (s, 2Н), 3,56 (s, 6Н), 2,56 (q, J=7,6 Гц, 2Н), 2,12 (s, 3Н), 2,10 (s, 3Н), 2,09 (s, 3Н), 1,04 (t, J=7,7 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(3,4-метилендиоксифенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2q) (75%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,20 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,96 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,75 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,56 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,51 (s, 1Н), 6,34 (s, 2Н), 5,96 (s, 1Н), 5,91 (s, 1Н), 3,58 (s, 6Н), 2,25 (s, 3Н), 2,20 (s, 3Н), 1,65 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-нитрофенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2r) (25%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 8,25 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 7,35 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,96 (m, 2Н), 6,34 (s, 2Н), 3,67 (s, 6Н), 2,25 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 1,89 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-этиламинофенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2s) (45%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,51 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,17 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 7,09 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 6,87 (d, J=8,3 Гц, 1Н), 6,43 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,42 (s, 3Н), 2,25 (s, 3Н), 2,12 (s, 3Н), 1,96 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетоксифенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2t) (25%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,18 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 6,96 (s, 1Н), 6,87 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,35 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,32 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,25 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 2,16 (s, 3Н), 1,95 (s, 3Н), 1,05 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетоксифенил)-8-этил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2u) (45%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,21 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,10 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 6,97 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,91 (d, J=8,4 Гц, 1Н), 6,41 (s, 2Н), 3,61 (s, 6H), 2,81 (q, J=7,2 Гц, 2H), 2,25 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н), 1,25 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетоксифенил)-6-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2v) (55%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,21 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,18 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 7,07 (m, 1Н), 6,88 (m, 1Н), 6,34 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,28 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н), 1,96 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-3-фторфенил)-5-фтор-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2w) (15%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,07-7,02 (m, 2Н), 6,96-86 (m, 1Н), 6,58 (s, 1Н), 6,50 (s, 1Н), 6,36 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,23 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетоксифенил)-6-хлор-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2х) (45%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,21 (m, 2Н), 7,18 (dd, J=1,4, 1,2 Гц, 1Н), 7,02 (dd, J=1,2, 8,1 Гц, 1Н), 6,96 (dd, J=1,3, 8,6 Гц, 1Н), 6,41 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,45 (s, 3Н), 2,35 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-3-хлорфенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2y) (55%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,31 (s, 1Н), 7,10 (m, 2Н), 7,05-7,01 (m, 2Н), 6,45 (s, 2Н), 3,66 (s, 6Н), 2,35 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-3-фторфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2z) (35%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 7,07-7,02 (m, 2Н), 6,96-88 (m, 1Н), 6,86 (s, 1Н), 6,35 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,32 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,25 (s, 3Н), 2,21 (s, 3Н), 2,16 (s, 3Н), 1,95 (s, 3Н), 1,05 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-3-метилфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2аа) (38%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6,65 (dd, J=7,1, 2,1 Гц, 1Н), 6,45 (s, 1Н), 6,35 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 5,98 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,38 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,26 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н), 2,16 (s, 3Н), 1,95 (s, 3Н), 1,05 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметилфенил)-4-(4-ацетокси-3-метилфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2bb) (38%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6,65 (dd, J=7,1, 2,1 Гц, 1Н), 6,45 (s, 1Н), 6,35 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 6,23 (s, 2Н), 2,31 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,23 (s, 3Н), 2,15 (s, 3Н), 2,14 (s, 3Н), 2,11 (s, 6Н), 1,98 (s, 3Н), 1,15 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетокси-2-метилфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2сс) (36%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,60 (s, 1Н), 6,46 (d, J=7,Гц, 1Н), 6,30 (dd, J=6,9, 2,1 Гц, 1Н), 5,92 (s, 2H), 3,65 (s, 6H), 2,33 (q, J=7,2 Гц, 2H), 2,2 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 1,95 (s, 3H), 1,15 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметилфенил)-4-(4-ацетокси-2-фторфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-2dd) (38%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,88 (dd J=6,9, 6,5 Гц, 1Н), 6,66 (brd, J=7,0 Гц, 1Н), 6,56 (s, 1Н), 6,45 (brd, J=6,5 Гц, 1Н), 2,31 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,29 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н), 2,14 (s, 3Н), 2,12 (s, 6Н), 1,95 (s, 3Н), 1,17 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

Стадия 3. 3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-гидроксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3а)

3-(4-Ацетокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-ацетоксифенил)-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (24 г, 1 экв.) и ТГФ (1500 мл) добавляли в колбу в атмосфере N₂ и охлаждали до 5°С. Добавляли 2 М комплекс боран-диметилсульфид в ТГФ (400 мл, 18 экв.) в течение 10 минут. Раствор перемешивали в течение 2 часов при этой температуре, затем нагревали до 40°С в течение ночи. Смесь выливали в 2 М HCl (2000 мл) при менее 15°С, затем экстрагировали EtOAc (2×1000 мл). Объединенные органические вещества промывали водой (2×1000 мл), солевым раствором, сушили (MgSO₄), затем упаривали досуха, получая неочищенное вещество (1-3а) в виде вязкого желтого твердого вещества. Вещество очищали с помощью колоночной хроматографии, элюируя гептаном до гептан/EtOAc 3:2. Фракции продукта упаривали, получая указанное в заголовке соединение (9,5 г, 53%) в виде оранжевого твердого вещества. ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,39 (bs, 2Н), 7,14 (s, 1Н), 6,98 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 6,82 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 6,54 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,40 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,35 (s, 2Н), 5,07 (s, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 2,12 (s, 3Н).

Другие аналоги, полученные этим способом:

4-(4-Гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3b) (47%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,38 (bs, 2Н), 6,98 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,81 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,53 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,43-6,35 (m, 3Н), 5,08 (s, 2Н), 3,66 (s, 3Н), 3,61 (s, 6Н), 2,22 (s, 3Н).

3-(3,5-Ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-4-(4-гидроксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3с) (36%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,36-8,29 (m, 2Н), 7,50-7,42 (m, 1Н), 6,94-6,77 (m, 5Н), 6,52 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,39 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 5,97 (s, 1Н), 5,09 (s, 2Н), 2,13 (s, 3Н), 1,51 (s, 9Н), 1,30 (s, 9Н).

4-(4-Гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-трифторфенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3d) (41%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,52 (bs, 1Н), 8,50 (bs, 1Н), 6,98 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,90-6,80 (m, 4Н), 6,54 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,47 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 5,05 (s, 2Н), 2,12 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(3,4,5-трифторфенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3е) (34%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,80 (bs, 1Н), 8,66 (bs, 1Н), 7,05-6,77 (m, 5Н), 6,74-6,66 (m, 1Н), 6,45-6,34 (m, 2Н), 5,03 (s, 2Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3f) (44%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,72 (bs, 1Н), 8,57 (bs, 1Н), 7,20 (bs, 1Н), 7,06-6,96 (m, 1Н), 6,91-6,80 (m, 2Н), 6,81-6,75 (m, 1Н), 6,45-6,37 (m, 4Н), 5,08 (s, 2Н), 3,63 (s, 6Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3g) (48%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,74 (bs, 1Н), 8,59 (bs, 1Н), 7,04-6,80 (m, 3Н), 6,84-6,82 (m, 1Н), 6,48-6,37 (m, 4Н), 5,08 (s, 2Н), 3,70 (s, 3Н), 3,62 (s, 6Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-трифторфенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3h) (48%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,80 (bs, 1Н), 8,57 (bs, 1Н), 7,04-6,75 (m, 5Н), 6,54 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,43 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 5,06 (s, 2Н), 2,12 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3i) (53%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,66 (bs, 1Н), 8,37 (bs, 1Н), 7,19 (bs, 1Н), 7,06-6,76 (m, 3Н), 6,53 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,45-6,35 (m, 3Н), 5,07 (s, 2Н), 3,63 (s, 6Н), 2,17 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3j) (49%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,68 (bs, 1Н), 8,49 (bs, 1Н), 7,04-6,77 (m, 3Н), 6,53 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,48-6,36 (m, 3Н), 5,07 (s, 2Н), 3,68 (s, 3Н), 3,65 (s, 6Н), 2,13 (s, 3Н).

3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3k) (22%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,37 (bs, 1Н), 7,21 (bs, 1Н), 6,32 (s, 2Н), 6,49-6,34 (m, 4Н), 5,08 (s, 2Н), 3,71 (s, 3Н), 3,60 (s, 6Н), 2,22 (s, 6Н), 2,13 (s, 3Н).

4-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3l) (15%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,41 (bs, 1Н), 6,81 (s, 2Н), 6,49-6,36 (m, 4Н), 5,08 (s, 2Н), 3,73 (s, 3Н), 3,66 (s, 3Н), 3,61 (s, 6Н), 2,22 (s, 6Н), 2,12 (s, 3Н).

4-(3,5-Дифтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3m) (47%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,86-6,74 (m, 2Н), 6,47-6,36 (m, 4Н), 5,10 (s, 2Н), 3,66 (s, 6Н), 2,13 (s, 3Н).

4-(3,5-Дифтор-4-гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3n) (55%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,86-6,75 (m, 2Н), 6,49-6,37 (m, 4Н), 5,12 (s, 2Н), 3,66 (s, 9Н), 2,14 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-8-пропил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3o) (36%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,72 (s, 1Н), 8,12 (s, 1Н), 7,05 (s, 1Н), 7,01 (m, 1Н), 6,95-78 (m, 2Н), 6,48 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 6,45 (d, J=8,1 Гц, 2Н), 6,41 (s, 2Н), 5,02 (s, 2Н), 3,71 (s, 6Н), 2,65 (m, 1Н), 1,65 (m, 1Н), 1,06 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-6-этил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3р) (54%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,54 (s, 1Н), 8,05 (s, 1Н), 7,29 (s, 1Н), 7,05 (m, 1Н), 6,78 (m, 1Н), 6,66 (s, 1Н), 6,45 (s, 1Н), 6,34 (s, 2Н), 5,04 (s, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 2,45 (m, 2Н), 1,06 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(3,4-метилендиоксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3q) (54%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,23 (s, 1Н), 7,31 (s, 1Н), 6,82 (d, J=8,01 Гц, 1Н), 6,66 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,61 (s, 1Н), 6,50 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,42 (s, 2Н), 6,40 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,04 (s, 2Н), 5,11 (s, 2Н), 3,57 (s, 6Н), 1,78 (s, 3Н).

3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-нитрофенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3r) (24%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,23 (s, 1Н), 8,23 (d, J=8,6 Гц, 2Н), 7,45 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,25 (s, 1Н), 6,38 (s, 2Н), 6,32 (s, 2Н), 5,04 (s, 2Н), 3,56 (s, 6Н), 2,01 (s, 3Н).

3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-этиламинофенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3s) (21%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,23 (s, 1Н), 7,22 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,97 (d, J=8,2 Гц, 2Н), 6,66 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,34 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,34 (s, 2Н), 5,04 (s, 2Н), 3,45 (s, 6Н), 3,05 (m, 2Н), 1,06 (t, J=7,6 Гц, 3Н).

4-(4-Гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3t) (31%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,67 (s, 1Н), 7,45 (s, 1Н), 7,05 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,98 (d, J=8,3 Гц, 2Н), 6,65 (s, 1Н), 6,45 (s, 2Н), 5,08 (s, 2Н), 3,56 (s, 6Н), 2,55 (m, 2Н), 2,05 (s, 3Н), 1,07 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

4-(4-Гидроксифенил)-8-этил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3u) (61%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,34 (s, 1Н), 8,11 (s, 1Н), 7,26 (s, 1Н), 7,01 (m, 2Н), 6,76 (m, 2Н), 6,56 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,50 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,45 (s, 2Н), 5,10 (s, 2Н), 3,47 (s, 6Н), 2,65 (m, 2Н), 1,06 (t, J=7,5 Гц, 3Н).

4-(4-Гидроксифенил)-6-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3v) (68%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,88 (s, 1Н), 8,23 (s, 1Н), 7,33 (d, J=3 Гц, 1Н), 7,05 (m, 2Н), 6,78 (m, 2Н), 6,65 (s, 1Н), 6,34 (s, 2Н), 5,11 (s, 2Н), 3,56 (s, 6Н), 2,07 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-5-фтор-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3w) (21%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,12 (s, 1Н), 7,23 (s, 1Н), 6,88-76 (m, 3Н), 6,50 (s, 1H), 6,45 (s, 2H), 6,05 (d, J=8,2 Гц, 1H), 4,89 (s, 2H), 3,56 (s, 6H).

6-Хлор-4-(3-фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-триметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3x) (21%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 7,32 (m, 1Н), 7,16-09 (m, 2Н), 6,94 (s, 1Н), 6,59 (s, 1Н), 6,39 (s, 2Н), 5,10 (s, 2Н), 3,65 (s, 6Н).

4-(3-Хлор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (1-3y) (41%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 7,11 (d, J=1,6 Гц, 1Н), 6,96 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,88 (dd, J=1,2, 8,2 Гц, 1Н), 6,55 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,45 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,42 (s, 2Н), 5,11 (s, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 2,05 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3z) (41%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,77 (s, 1Н), 7,49 (s, 1Н), 7,15 (m, 2Н), 6,98 (brs, 1Н), 6,65 (s, 1Н), 6,45 (s, 2Н), 5,08 (s, 2Н), 3,56 (s, 6Н), 2,55 (m, 2Н), 2,05 (s, 3Н), 1,07 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

4-(3-Метил-4-гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3аа) (38%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 8,22 (br, 2Н), 7,66 (s, 1Н), 6,62 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,55 (dd, J=7,1, 2,3 Гц, 1Н), 6,41 (s, 1Н), 6,38 (d, J=2,5 Гц, 1Н), 5,95 (s, 2Н), 3,51 (s, 6Н), 2,32 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,21 (s, 3Н), 2,18 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 1,92 (s, 3Н), 1,05 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (1-3bb) (38%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6,65 (dd, J=7,1, 2,1 Гц, 1Н), 6,45 (s, 1Н), 6,35 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 6,23 (s, 2Н), 2,31 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,23 (s, 3Н), 2,15 (s, 3Н), 2,14 (s, 3Н), 2,11 (s, 6Н), 1,98 (s, 3Н), 1,15 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметилфенил)-4-(4-ацетокси-3-метилфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-3сс) (36%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,60 (s, 1Н), 6,46 (d, J=7 Гц, 1Н), 6,30 (dd, J=6,9, 2,1 Гц, 1Н), 5,92 (s, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 2,33 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,2 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н), 2,16 (s, 3Н), 1,95 (s, 3Н), 1,15 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

3-(4-Ацетокси-3,5-диметилфенил)-4-(4-ацетокси-2-фторфенил)-6-этил-8-метил-2-оксо-2Н-хромен-7-илацетат (1-3dd) (38%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 9,08 (br 1Н), 8,65 (s, 1Н), 8,22 (br 1Н), 6,81 (dd J=6,6, 6,3 Гц, 1Н), 6,62 (brd, J=7,0 Гц, 1Н), 6,46 (s, 1Н), 6,35 (brd, J=6,5 Гц, 1Н), 2,31 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,29 (s, 3Н), 2,18 (s, 3Н), 2,14 (s, 3Н), 2,12 (s, 6Н), 1,95 (s, 3Н), 1,17 (t, J=7,2 Гц, 3Н).

Стадия 4. 3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-гидроксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 2) (1-4а)

3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-гидроксифенил)-8-метил-2Н-хромен-7-ол (4,8 г, 1 экв.), ПМС (500 мл) и Pd/C 10% тип 338 паста (3,0 г) добавляли в автоклав для гидрирования и наполняли 2,5 бар Н₂. Реакционную смесь оставляли при 40°С на ночь до полного превращения. Катализатор отфильтровывали, и фильтраты упаривали досуха. Три равные порции смешивали и сушили, получая 12,6 г (88%) соединения 2 в виде твердого вещества белого оттенка. ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,65-6,51 (m, 5Н), 6,40 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,04 (s, 2Н), 4,44-4,35 (m, 1Н), 4,25-4,15 (m, 2Н), 3,64 (s, 6Н), 3,46-3,37 (m, 1Н), 2,15 (s, 3Н).

Другие соединения формулы (I), полученные этим способом:

4-(4-Гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)хроман-7-ол (Соединение 1) (1-4b) (99%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,63-6,49 (m, 5Н), 6,36 (d, J=7,9 Гц, 1Н), 6,04 (s, 2Н), 4,46-4,36 (m, 1Н), 4,25-4,17 (m, 2Н), 3,68 (s, 3Н), 3,63 (s, 6Н), 3,49-3,40 (m, 1Н), 2,15 (s, 3Н).

3-(3,5-Ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-4-(4-гидроксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 3) (1-4с) (33%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,10 (bs 1Н), 8,05 (bs, 1Н) 7,28-7,20 (m, 1Н), 6,63-6,52 (m, 3Н), 6,43-6,36 (m, 2Н), 6,04 (s, 2Н), 4,47-4,35 (m, 1Н), 4,24-4,09 (m, 2Н), 3,64 (s, 6Н), 3,78-3,66 (m, 1Н), 2,15 (s, 3Н), 1,45 (s, 9Н), 1,32 (s, 9Н).

4-(4-Гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-трифторфенил)хроман-7-ол (Соединение 4) (1-4d) (95%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,67-6,52 (m, 7Н), 6,42 (d, J=7,8 Гц, 1Н), 4,48-4,40 (m, 1Н), 4,35-4,26 (m, 2Н), 3,64-3,55 (m, 1Н), 2,15 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(3,4,5-трифторфенил)хроман-7-ол (Соединение 5) (1-4е) (50%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,84-6,65 (m, 4Н), 6,49-6,30 (m, 4Н), 4,48-4,18 (m, 3Н), 3,67-3,56 (m, 1Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)хроман-7-ол (Соединение 6) (1-4f) (39%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,80-6,74 (m, 2Н), 6,44-6б32 (m, 4Н), 6,08 (s, 2Н), 4,41-4,33 (m, 1Н), 4,24-4,12 (m, 2Н), 3,66 (s, 6Н), 3,52-3,38 (m, 1Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(3,4,5-триметоксифенил)хроман-7-ол (Соединение 7) (1-4g) (22%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,80-6,72 (m, 2Н), 6,48-6,33 (m, 4Н), 6,11 (s, 2Н), 4,44-4,35 (m, 1Н), 4,25-4,14 (m, 2Н), 3,70 (s, 3Н), 3,64 (s, 6Н), 3,52-3,45 (m, 1Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-трифторфенил)хроман-7-ол (Соединение 8) (1-4h) (50%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,81-6,65 (m, 3Н), 6,60 (d, J=8,6 Гц, 1Н), 6,49-6,40 (m, 2Н), 6,39-6,30 (m, 1Н), 4,50-4,42 (m, 1Н), 4,38-4,30 (m, 2Н), 3,66-3,55 (m, 1Н), 2,16 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 9) (1-4i) (60%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,78-6,70 (m, 1Н), 6,60 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,46-6,32 (m, 3Н), 6,07 (s, 2Н), 4,45-4,35 (m, 1Н), 4,28-4,17 (m, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 3,49-3,41 (m, 1Н), 2,20 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)хроман-7-ол (Соединение 10) (1-4j) (44%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,80-6,71 (m, 1Н), 6,60 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,46-6,32 (m, 4Н), 6,10 (s, 2Н), 4,48-4,38 (m, 1Н), 4,31-4,22 (m, 2Н), 3,69 (s, 3Н), 3,65 (s, 6Н), 3,53-3,41 (m, 1Н), 2,17 (s, 3Н).

3-(4-Гидрокси-3,5-диметоксифенил)-4-(4-метокси-3,5-диметилфенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 11) (1-4k) (83%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆) δ 6,52 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,33 (d, J=8,5 Гц, 1Н), 6,25 (s, 2Н), 5,91 (s, 2Н), 4,34-4,24 (m, 1Н), 4,18-4,05 (m, 2Н), 3,57 (s, 3Н), 3,50 (s, 6Н), 3,48-3,33 (m, 1Н), 2,05 (s, 3Н), 2,03 (s, 6Н).

4-(4-Метокси-3,5-диметилфенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)хроман-7-ол (Соединение 12) (1-4l) (99%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,58 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 6,42 (d, J=8,8 Гц, 1Н), 6,33 (s, 2Н), 6,05 (s, 2Н), 4,52-4,37 (m, 1Н), 4,25-4,12 (m, 2Н), 3,68 (s, 3Н), 3,65 (s, 3Н), 3,11 (s, 6Н), 3,50-3,39 (m, 1Н), 2,15 (s, 3Н), 2,07 (s, 6Н).

4-(2,3-Дифтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 13) (1-4m) (60%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,73-6,68 (m, 1Н), 6,64-6,57 (m, 1Н), 6,55-6,49 (m, 1Н), 6,42 (d, J=9,6 Гц, 1Н), 6,08 (s, 2Н), 4,59-4,55 (m, 1Н), 4,46-4,36 (m, 1Н), 4,25-4,21 (m, 1Н), 3,63 (s, 6Н), 3,53-3,47 (m, 1Н), 2,14 (s, 3Н).

4-(2,3-Дифтор-4-гидроксифенил)-8-метил-3-(3,4,5-триметоксифенил)хроман-7-ол (Соединение 14) (1-4n) (66%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,74-6,68 (m, 1Н), 6,60 (d, J=9,5 Гц, 1Н), 6,55-6,47 (m, 1Н), 6,44 (d, J=9,5 Гц, 1Н), 6,13 (s, 2Н), 4,61-4,57 (m, 1Н), 4,48-4,36 (m, 1Н), 4,29-4,22 (m, 1Н), 3,67 (s, 3Н), 3,64 (s, 6Н), 3,58-3,48 (m, 1Н), 2,14 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-пропилхроман-7-ол (Соединение 16) (1-4o) (80%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,76 (m, 1Н), 6,65 (d, J=8,1 Гц, 1Н), 6,45-33 (m, 3Н), 6,05 (s, 2Н), 4,44 (m, 1Н), 4,27 (m, 1Н), 3,56 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 2,65 (m, 2Н), 1,67 (m, 2Н), 1,07 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-этилхроман-7-ол (Соединение 18) (1-4р) (80%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,76 (m, 1Н), 6,66 (s, 1Н), 6,56-38 (m, 3Н), 6,05 (s, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,12 (m, 1Н), 3,55 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 2,51 (m, 2Н), 1,05 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(3,4-Метилендиоксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 32) (1-4q) (80%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,08 (s, 1H), 7,01 (s, 1H), 6,71 (m, 2H), 6,55 (d, J=8,2 Гц, 1H), 6,23 (d, J=8,1 Гц, 2H), 6,06 (s, 2H), 4,47 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,65 (s, 6H), 3,46 (m, 1H), 2,05 (s, 3Н).

4-(4-Аминофенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 21) (1-4r) (70%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,67 (m, 1Н), 6,45-33 (m, 5Н), 6,09 (s, 2Н), 4,47 (m, 1Н), 4,13 (m, 1Н), 3,64 (s, 6Н), 3,35 (m, 1Н), 2,06 (s, 3Н).

4-(4-Этиламинофенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 22) (1-4s) (78%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,65 (m, 1Н), 6,51-39 (m, 5Н), 6,01 (s, 2Н), 4,65 (m, 1Н), 4,45 (m, 1Н), 4,40 (m, 1Н), 3,65 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 3,11 (m, 2Н), 2,06 (s, 3Н), 1,32 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(4-Гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-этил-8-метилхроман-7-ол (Соединение 33) (1-4t) (80%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,75 (m, 1Н), 6,61 (s, 1Н), 6,45 (m, 3Н), 6,01 (s, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,23 (m, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 2,55 (m, 2Н), 2,01 (s, 3Н), 1,07 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(4-Гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-этилхроман-7-ол (Соединение 34) (1-4u) (86%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,72 (m, 1Н), 6,56 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,50-33 (m, 4Н), 6,01 (s, 2Н), 4,51 (m, 1Н), 4,32 (m, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 2,65 (m, 2Н), 1,06 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(4-Гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-метилхроман-7-ол (Соединение 35) (1-4v) (96%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,67 (m, 1Н), 6,56 (s, 1Н), 6,45-32 (m, 4Н), 6,01 (s, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,32 (m, 2Н), 3,67 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 2,06 (s, 3Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-5-фторхроман-7-ол (Соединение 19) (1-4w) (66%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,67 (m, 1Н), 6,45 (m, 2Н), 6,25 (m, 1Н), 6,18 (m, 1Н), 6,01 (s, 2Н), 4,50 (m, 1Н), 4,35 (m, 1Н), 4,27 (m, 1Н), 3,67 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-хлорхроман-7-ол (Соединение 20) (1-4х) (56%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,16 (s, 1Н), 7,89 (s, 1Н), 7,21 (s, 1Н), 6,96 (s, 1Н), 6,75 (m, 1Н), 6,60 (s, 1Н), 6,45 (m, 1Н), 6,01 (s, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,30 (m, 2Н), 3,67 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н).

4-(3-Хлор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-8-метилхроман-7-ол (Соединение 24) (1-4y) (66%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 8,1 (s, 1Н), 7,6 (s, 1Н), 7,0 (s, 1Н), 6,65-50 (m, 4Н), 6,42 (d, J=8,2 Гц, 1Н), 6,01 (s, 2Н), 4,41 (m, 1Н), 4,35 (m, 2Н), 3,64 (s, 6Н), 3,46 (m, 1Н).

4-(3-Фтор-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-этил-8-метилхроман-7-ол (Соединение 36) (1-4z) (80%). ¹Н ЯМР (300 МГц, ацетон-d₆) δ 6,75 (m, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,45 (m, 3Н), 6,01 (s, 2H), 4,45 (m, 1H), 4,23 (m, 2H), 3,65 (s, 6H), 3,45 (m, 1H), 2,55 (m, 2H), 2,01 (s, 3Н), 1,07 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(3-Метил-4-гидроксифенил)-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-6-этил-8-метилхроман-7-ол (Соединение 37) (1-4аа) (88%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 8,22 (br, 2Н), 7,66 (s, 1Н), 6,62 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,55 (dd, J=7,1, 2,3 Гц, 1Н), 6,41 (s, 1Н), 6,38 (d, J=2,5 Гц, 1Н), 5,95 (s, 2Н), 4,48 (m, 1Н), 4,21 (m, 2Н), 3,61 (s, 6Н), 3,45 (m, 1Н), 2,55 (m, 2Н), 2,01 (s, 3Н), 1,07 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(3-Метил-4-гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-2Н-хромен-7-ол (соединение 38) (1-4bb) (80%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,5 Гц, 1Н), 6,65 (dd, J=7,1, 2,1 Гц, 1Н), 6,45 (s, 1Н), 6,35 (d, J=2,1 Гц, 1Н), 6,23 (s, 2Н), 4,45 (m, 1Н), 4,23 (m, 2Н), 3,45 (m, 1Н), 2,55 (m, 2Н), 2,15 (s, 6Н), 2,01 (s, 3Н), 1,02 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(2-Метил-4-гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметоксифенил)-2Н-хромен-7-ол (соединение 39) (1-4сс) (76%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 6,68 (d, J=7,1 Гц, 1Н), 6,60 (s, 1Н), 6,46 (d, J=7 Гц, 1Н), 6,30 (dd, J=6,9, 2,1 Гц, 1Н), 5,92 (s, 2Н), 4,42 (m, 1Н), 4,31 (m, 2Н), 3,65 (s, 6Н), 3,41 (m, 1Н), 2,51 (m, 2Н), 2,11 (s, 3Н), 1,01 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

4-(2-Фтор-4-гидроксифенил)-6-этил-8-метил-3-(4-гидрокси-3,5-диметилфенил)-2Н-хромен-7-ол (соединение 40) (1-4dd) (70%). ¹Н ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ 9,1 (br 1Н), 8,75 (s, 1Н), 7,22 (br 1Н), 6,85 (dd J=6,6, 6,1 Гц, 1Н), 6,58 (brd, J=7,3 Гц, 1Н), 6,42 (s, 1Н), 6,25 (brd, J=6,1 Гц, 1Н), 4,35 (m, 1Н), 4,13 (m, 2Н), 3,35 (m, 1Н), 2,45 (m, 2Н), 2,18 (s, 6Н), 2,11 (s, 3Н), 1,05 (t, J=7,1 Гц, 3Н).

Энантиомеры соединения 2 получали в ходе хирального разделения на нормально-фазовой колонке Chiralcel OD-H, 30×250 мм, 5 микрон. Анализ соединения с самым коротким временем удерживания на этой колонке показал следующие свойства оптического вращения:

Энантиомер с самым длительным временем удерживания на этой колонке имел следующие свойства оптического вращения.

Энантиомеры соединения о получали в ходе хирального разделения на нормально-фазовой колонке Chiralcel OD-H, 30×250 мм, 5 микрон. Анализ соединения с самым коротким временем удерживания (энантиомер 1) на этой колонке показал следующие свойства оптического вращения:

Энантиомер с самым длительным временем удерживания (энантиомер 2) на этой колонке имел следующие свойства оптического вращения:

Энантиомеры соединения 9 получали в ходе хирального разделения на нормально-фазовой колонке Chiralcel OD-H, 30×250 мм, 5 микрон. Анализ соединения с самым коротким временем удерживания (энантиомер 1) на этой колонке показал следующие свойства оптического вращения:

Энантиомер с самым длительным временем удерживания (энантиомер 2) на этой колонке имел следующие свойства оптического вращения:

Пример 2 - Исследование вне организма (in vitro)

Противоопухолевую активность соединения 2 (рацемическая форма и очищенные эутомер и дистомер) определяли с помощью XenTech на двух эксплантатах, полученных из мультиформной глиобластомы пациента, основываясь на биопсиях опухоли с последующей подробной методологией. Первичные культуры клеток получали из эксплантированных и разделенных ксенотрансплантатов ODA14-RAV и GBM14-CHA. Клетки быстро размораживали при 37°С на водяной бане. Одну пробирку с клетками (~10 миллионов клеток) разбавляли 10 мл готовой питательной среды (F12/модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (DMEM, от англ. "Dulbecco modified Eagle's medium"), дополненные 8% фетальной бычьей сывороткой, 100 мкг/мл пенициллин G натрия, 100 мкг/мл стрептомицина сульфата). После центрифугирования при 150×g в течение 5 минут клеточный осадок ресуспендировали в готовой питательной среде и высевали при плотности по меньшей мере 140,000 клеток/см² в 75 см² колбах для клеточных культур. Клетки выдерживали при 37°С во влажной атмосфере с 5% CO₂ в течение по меньшей мере одной недели. Затем клетки собирали и высевали в 96-луночные планшеты при плотности 2,5×10³ клеток/лунка для анализов на цитотоксичность. Клетки инкубировали в течение 48 часов при 37°С перед добавлением исследуемых соединений. Исследуемые соединения добавляли при требуемых конечных концентрациях и затем инкубировали в течение 72 часов.

Жизнеспособность клеток оценивали перед добавлением исследуемых соединений (Т0) и через 72 часа, измеряя содержание в клетке клеточного аденозинтрифосфата (АТФ), используя люминесцентный анализ жизнеспособности клеток CellTiter-Glo® (Promega) согласно инструкциям производителя.

ODA14 обозначали как степень злокачественности III (определен по гистопатологии), чувствительный к ТМЗ при определении в ходе изучений ксенотрансплантатов, р53 мутантный, pTEN дикого типа (дт), и имеет увеличенную экспрессию рецептора эпидермального фактора роста (EGFR, от англ. "epidermal growth factor receptor"). GBM14 обозначали как устойчивый к ТМЗ, р53 дт, pTEN мутантный, EGFR дт. Степень злокачественности GBM не известна. После 72 часов воздействия соединения 2 наблюдали IC₅₀ 0,14 мкМ в отношении GBM14 и 48 мкМ в отношении ODA14. Результаты показаны на фигуре 1. После 72 часов воздействия эутомера соединения 2 наблюдали IC₅₀ 0,051 мкМ, тогда как наоборот дистомер соединения 2 имел IC₅₀ 3,43 мкМ (смотрите фигуру 2) в отношении клеточной линии GBM14-CHA. Эти данные показывают, что эутомер соединения 2 (+ энантиомер) приблизительно в 2-3 раза более активен в отношении GBM14-CHA по сравнению с рацематом соединения 2 и более 60 раз более активен, чем дистомер соединения 2 (- энантиомер).

Энантиомеры соединений 6 и 9 также оценивали в отношении клеточной линии глиобластомы GBM14-CHA, используя описанную выше методику. Результаты представлены ниже в таблице 1.

Как установлено для соединения 2, так и эутомеры соединений 6 и 9 были существенно более активными, чем соответствующие дистомеры.

Также определяли антипролиферативную активность соединения 2 в подходящих чувствительных к ТМЗ (D54-S и U87-S) или устойчивых к ТМЗ (D54-R и U87-R) клеточных линиях (Hong Kong University, Dr Gilberto Leung). Данные подтверждают, что ТМЗ имел пониженную эффективность в отношении устойчивых к ТМЗ субклонов как U87, так и D54, по сравнению с их соответствующими чувствительными к ТМЗ субклонами. В противоположность ТМЗ соединение 2 и его эутомер демонстрировали равносильную антипролиферативную активность в отношении как D54, так и U87 клеточных линий GBM независимо от их состояния устойчивости к ТМЗ. Использовали два метода (окрашивание с помощью сульфородамина-Б (СРБ) и 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ)) для определения жизнеспособности, и оба показали, что соединение 2 одинаково эффективно в подавлении жизнеспособности клеток GBM независимо от состояния устойчивости к ТМЗ. СРБ имел тенденцию преувеличивать цитотоксичность по сравнению с МТТ. Однако значения IC₅₀ были ниже 0,36 мкМ независимо от метода, клеточной линии и отношения к ТМЗ при обработке соединением 2. Следовательно, значения IC₅₀ соединения 2 заметно ниже, чем ТМЗ, даже в отношении чувствительных к ТМЗ субклонов. Также эутомер соединения 2 был равносилен в отношении устойчивых и чувствительных к ТМЗ субклонов, но противораковая эффективность была более мощной для активного энантиомера, чем рацемата. Значения IC₅₀ были ниже 0,065 мкМ независимо от клеточной линии и отношения к ТМЗ (смотрите таблицу 2).

Также определяли антипролиферативную активность эутомера соединения 9 (+ энантиомер) и было найдено, что он равносилен в отношении устойчивых и чувствительных к ТМЗ субклонов как U87, так и D54, и подобен эутомеру соединения 2, значения IC₅₀ были ниже 0,065 мкМ независимо от клеточной линии и отношения к ТМЗ.

Также эффективность эутомеров соединений 9 и 36 исследовали в отношении клеточных линий детской нейробластомы. Значения IC₅₀ находились в диапазоне от 0,020 мкМ до 0,088 мкМ для эутомера соединения 9 и от 0,243 мкМ до 0,698 мкМ для эутомера соединения 36 (смотрите таблицу 3). Оценивали два вида преимущественно детского рака головного мозга на чувствительность к эутомеру соединения 9. Также изучения in vitro показали низкую микромолярную - субмикромолярную эффективность в отношении клеточной линии DIPG, и наномолярную эффективность в отношении клеточных линий медуллобластомы (D283L равно 0,097 мкМ; 547L равно 0,063 мкМ и D425L равно 0,101 мкМ). Наряду с прежними изучениями при использовании клеточных линий GBM и PDX культур эти результаты указывают на то, что соединение 9 имеет значительную эффективность в отношении целого ряда видов рака головного мозга, включая основные виды детского рака.

Способность соединений с 1 по 14 ингибировать пролиферацию раковых стволовых клеток яичника определяли на полученных у пациента эксплантатах. Лаборатория Доктора Gil Mor (Йельский университет) установила два типа клеток эпителиального рака яичника: Тип I представляет собой хемостойкие CD44+ve клетки эпителиального рака яичника (ЕОС, от англ. "epithelial ovarian cancer"), и Тип II представляет собой хемочувствительные CD44-ve клетки ЕОС. Раковые стволовые клетки яичника получали, как описано ранее (Alvero et al., 2009). Пролиферацию клеток оценивали, используя кинетическую систему формирования изображений Incucyte. Одновременно оценивали цитотоксический эффект соединений, используя анализ на цитотоксичность CellPlayer с CellTox™ (Promega, № по каталогу: G8731). Монослойные клетки трипсинизировали и высевали в 96-луночные планшеты. Через 24 часа, когда клетки соединялись, обработку совершали в среде RPMI (от англ. "Roswell Park Memorial Institute") с 10% эмбриональной бычьей сывороткой (ЭБС). Используемые концентрации лекарства составляли: 0,001, 0,01, 0,1, 1 и 10 мкг/мл. Соответствующим образом разбавленный раствор реагента CellTox™ (1:1000) добавляли в каждую лунку после добавления исследуемого соединения. Культуральные планшеты сразу же помещали в систему Incucyte и получали изображения каждые 2 часа, используя функцию "Флуоресценция и Фазовый контраст" на оборудовании Incucyte. Кривые роста вычисляли как измерение слияния клеток, используя встроенный алгоритм слияния в качестве заменителя количества клеток, чтобы определить скорость пролиферации. Площадь под кривой, рассчитанную, исходя из графика CsttTox количество/мм² в зависимости от времени, затем использовали, чтобы вычислить IC₅₀. В двух параллельных опытах было обнаружено, что соединение 2 было самым эффективным в замедлении пролиферации раковых стволовых клеток яичника при концентрациях между от 0,01 до 0,1 мкг/мл для OCSC-1 и OCSC-2. Соединения 6, 9 и 13 также были эффективными в ингибировании пролиферации клеток OCSC-2 при концентрациях между 0,1 и 1 мкг/мл (таблица 4). Соединение 2 также проявляло подобный эффект в отношении клеток F2 при логарифмически высоких концентрациях (от 0,1 до 1 мкг/мл). При оценке все прочие аналоги проявляли антипролиферативную активность от 1 до 10 мкг/мл (смотрите таблицу 4).

Подтверждающие исследования при использовании анализов слияния Incucyte, в ходе которых использовали большое количество концентраций, показали, что соединение 2 имело IC₅₀ 0,052 мкг/мл в отношении OCSC2. Кроме того, это наблюдение подтвердилось при использовании Cytotox зеленого, красящего реагента, который использует нарушенную целостность мембраны фиксированной клетки, реагента, способного проникать через мембрану и связываться с ДНК, тем самым давая флуоресцентный сигнал, который можно выразить количественно. IC₅₀ для соединения 2 при использовании CellTox зеленого составила 0,051 мкг/мл. Эти данные показывают, что соединение 2 представляет собой высокоактивное противораковое соединение, что определено двумя разными методами. Значения IC₅₀ 0,12 г/мл также получены для соединений 9 и 13 (смотрите фигуры 3 и 4).

Была изучена способность выбранных соединений ингибировать пролиферацию раковых клеток, характерных для меланомы, немелкоклеточного рака легкого, колоректального рака, рака молочной железы (рецептор к эстрогену негативный (ER-ve, от англ. "Estrogen Receptor negative", трижды негативный рак молочной железы (TNBC, от англ. "Triple-Negative Breast Cancer") - ER-ve, рецептор к прогестерону негативный и негативный для амплификации EGFR), рака предстательной железы, рака печени, рака яичника, рака поджелудочной железы и рака головного мозга. Предварительно определенное число клеток, как рассчитано, исходя из анализов клеточного роста для каждой используемой клеточной линии, высевали в их специальные питательные среды (используя параметры для культур АТСС - http://www.atcc.org) и выращивали в течение 24 часов при 37°С и 5% С0₂ в 96-луночных культуральных планшетах. После связывания каждую клеточную линию подвергали воздействию разных концентраций каждого соответствующего аналога (30, 3, 0,3 и 0,03 мкМ), выращивали в течение еще 72 часов и подвергали воздействию люминесцентного реагента титра клеток (100 мк/лунка) в течение еще 30 минут. Люминесценцию регистрировали, используя многозначное устройство для прочтения планшетов EnVision, и данные для каждой концентрации аналога сравнивали с контрольной пробой. Получали полулогарифмические графики процента контрольной пробы в зависимости от концентрации и определяли IC₅₀, используя линейно-регрессионный анализ. Данные представлены в таблицах 5 и 6. В таблице 6 соединения Соед 1, Соед 2 и Соед 3 являются сравнительными соединениями, имеющими следующие структуры:

Данные показывают, что соединение 2 проявляло высокую антипролиферативную активность (IC₅₀ составляет менее 1 мкМ) в отношении клеточных линий, характерных для НМРЛ (А549), TNBC (MDA-MB-231) и рака предстательной железы (DU-145). Соединение 2 было умеренно активным в отношении раковых клеток печени (HepG2) (IC₅₀ равна 1,9 мкМ).

Соединения 6 и 9 также проявляют сильную активность (IC₅₀ составляет менее 1 мкМ) в отношении НМРЛ (А549) и обеих клеточных линий рака предстательной железы (РС3 и DU-145) в отличие от соединения 2, которое активно только в отношении DU-145. Соединения 6 и 9 также умеренно активны в отношении MDA-MB-231 (IC₅₀ менее 2 мкМ) и HepG2 (IC₅₀ менее 4 мкМ).

Используя такую же методику, рацемат соединения 2 и его энантиомеры оценивали в отношении клеточных линий глиобластомы А172 и рака яичника OVCAR-3. Как отмечено выше в изучении эксплантата GBM, эутомер соединения 2 был по меньшей мере в 2 раза более активен в отношении обеих клеточных линий по сравнению с рацематом (смотрите фигуру 5). Дистомер был более чем в 5 раз менее активен по сравнению с рацематом (не показано).

Принимая во внимание концепцию, что оставшиеся раковые клетки-предшественники в течение последующей обработки опухоли ответственны за рецидив опухоли, решающая лечебная стратегия увеличения продолжительности жизни состоит в том, чтобы уничтожить эти клетки-предшественники опухоли, вызывающие рецидив. Проводили изучения in vitro, чтобы определить, способно ли соединение 2 ингибировать пролиферацию OCSC после устранения воздействия лекарства. Клетки OCSC-2 обрабатывали 0,1, 1 и 10 мкг/мл соединением 2 в течение 24 часов, промывали культуральной средой и выделяли в течение еще 50 часов при стандартных условиях инкубации. Культуральные планшеты сразу же помещали в систему Incucyte и получали изображения каждые 2 часа. Кривые роста вычисляли как измерение слияния клеток, используя встроенный алгоритм слияния в качестве заменителя количества клеток, чтобы определить скорость пролиферации.

В отличие от клеток OCSC-2, обработанных наполнителем, те клетки, что предварительно обрабатывали соединением 2 в течение 24 часов, не давали логарифмический рост после дополнительных 48 часов культивирования в среде без лекарства (смотрите фигуру 6). Морфологически эти клетки выглядели округлыми и имели апоптозные тельца, что указывает на то, что клетки больше не были жизнеспособными из-за 24-часовой обработки (смотрите фигуру 7).

Пример 3 - Клеточные исследования

ЗФБ-меченые OCSC2 и mCherry-меченые ОСС2 клетки получали, заражая клетки лентивирусом, экспрессирующим флуоресцентные белки (Craveiro et al. 2013). Сокультуры ЗФБ+ OCSC2 и mCherry+ ОСС2 обрабатывали 1 мкг/мл соединением 2 в течение 48 часов и извлекали в течение еще 72 часов. Флуоресценцию определяли с помощью флуоресцентной микроскопии. Соединение 2 заметно уменьшало количество ЗФБ-меченых OCSC2 стволовых клеток и заставляло mCherry-меченые ОСС2 клетки округляться и отрываться от поверхности культур (смотрите фигуру 8). Эти данные указывают на то, что соединение 2 нарушает пролиферацию как раковых стволовых клеток яичника, так и раковых соматических клеток яичника.

Сфероиды раковых стволовых клеток яичника получали из культур, выращенных в специальных условиях, которые выбраны для клеток со способностью самовосстанавливаться (Alvero et al., 2009). Кратко CD44+ клетки инкубировали в суспензионной системе, включающей стеклянную трубку при непрерывном вращении, чтобы предотвратить прилипание. Эти клетки образовывали кластеры за 48 часов и формировали сфероиды за 4 дня. Затем сфероиды подвергали воздействию 0,1 и 1 мкг/мл соединения 2 и исследовали под микроскопом через 24 часа. Через 24 часа воздействия соединения 2 при 0,1 мкг/мл внутренняя структура раковых сфероидов яичника начинала распадаться. При 1 мкг/мл соединения 2 структура сфероидов почти полностью разрушалась. Эти данные показывают, что соединение 2 способно проникать внутрь сфероида и разрушать его внутреннюю структуру (смотрите фигуру 9), и позволяют предположить, что соединение должно быть способно проникать в микросреду опухоли.

Используемая литература

Craveiro, V., Yang-Hartwich, Y., Holmberg, J.С., Sumi, N.J., Pizzonia, J., Grffin, В., Gill., S.K., Sliasi, D-A., Azodi, M., Rutherford, Т., Alvero, А,В., Mor, G. (2013). "Phenotypic modifications in ovarian cancer stem cells following Paclitaxel treatment" Cancer Medicine, 2(6), 751-762.

Alvero A.В., Chen R, Fu H.H, Montagna M., Schwartz P.E., Rutherford Т., Silasi D.A., Steffensen K.D., Waldstrom M., Visintin I., Mor G. (2009) "Molecular phenotyping of human ovarian cancer stem cells unravels the mechanisms for repair and chemoresistance" Cell Cycle. 2009 Jan 1; 8(1): 158-66.

Пример 4 - Фармакокинетическое исследование

Осуществляли изучение фармакокинетического поведения соединений 2, 6, 9, 13. Результаты показали, что соединения могут быть доставлены и могут достигать концентраций в плазме с предполагаемым фармацевтическим диапазоном эффективности.

Исследование включало стадию 1, предварительное исследование компонентов лекарственной формы, обеспечивающее растворимость всех соединений в 30% растворе Captisol® и образование гомогенной смеси, подходящей для внутривенной доставки. Разработан целый ряд способов жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией (ЖХ-МС) и они частично проверены, чтобы гарантировать, что каждое анализируемое вещество может быть выражено количественно из матрицы плазмы и что не было взаимного влияния между любыми анализируемыми веществами. Стадия 2 включала прижизненное изучение, согласно которому крысы линии Спрег-Доули акклиматизировались в течение трех дней перед инъекцией в хвостовую вену кассетной дозы четырех соединений, каждое в конечной концентрации 1 мг/кг. Всего использовали трех крыс в исследовании с забором крови с пробирками с антикоагулянтом через 5 минут, 30 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 6 часов и 8 часов. Третья фаза исследования представляла собой биоанализ анализируемых веществ. Пробы крови подвергали центрифугированию при 1200 оборотах в минуту в течение 10 минут при 4°С. Затем разделяли эритроциты (RBCs, от англ. "red blood cells") и плазму, плазму хранили при -80°С до обработки и введения в ЖХ-МС.Пробы из отдельных крыс рассматривали как отдельные образцы с ФК профилем, полученным из среднего значения данных от трех крыс. Результаты показаны на фигуре 10.

Пример 5 - Эффективность in vivo

При использовании прежде описанной модели подвздошной области U87 суппозиторная доставка эутомера соединения 9 при 100 мг/кг ежедневно давала сильный противоопухолевый эффект. Результаты показаны на фигуре 11. Двухфакторный дисперсионный анализ (ANOVA, от англ. "analysis of variance") с коррекцией Сидака на множественные сравнения показал, что размер опухоли был значительно меньше всего через 7 дней от начала последующей обработки, и это продолжалось вплоть до 12 дня (конечный оцениваемый момент времени). Скорость роста опухоли также значительно снижалась под действием эутомера соединения 9. Вес опухоли в конечной точке значительно снижался под действием эутомера соединения 9 по сравнению с контрольной пробой Captisol® (непарный t-критерий, Р равно 0,0036). Конечные массы мышей в экспериментальных и контрольных группах различались не значительно, однако 3 мыши в экспериментальной группе из первоначально 7 умерли (все умершие животные находились в нижнем квартиле диапазона масс животных). Эти мыши также показали значительное снижение роста опухоли, хотя для согласованности данные этих животных были удалены из всех приведенных данных и из статистического анализа. Как и в случае предыдущего режима дозирования, не были отмечены очевидные клинические признаки токсичности (т.е. пилоэрекция, осложнение, диарея). Гистопатологический анализ проводят, чтобы определить причину смерти. Анализы крови были нормальными.

Пример 6 - Эффективность in vivo

Животная модель рака яичника, используемая для определения эффективности in vivo соединения 2, включает внутрибрюшинную инъекцию 7×10⁶ mCherry-CD44+ раковых стволовых клеток яичника бестимусным мышам. В этой модели образование опухоли воспроизводит морфологию рак яичника человека, приводя к образованию диссеминированных опухолей, включающих и CD44+, и CD44- ОСС, тем самым подтверждая, что инъецированные раковые стволовые клетки могут образовывать гетерогенные опухоли. В этой модели на грызунах развитие опухоли характеризуется диссеминированным карциноматозом, когда опухоли находят в яичниках, брыжейке, брюшине, диафрагме, печени, поджелудочной железе и селезенке. Также модель имитирует клинический профиль рак яичника и характеризуется первичным частичным откликом на паклитаксел или цисплатин, за которым следует рецидив и устойчивость к первоначальному лечению. Развитие опухоли контролируют в ходе получения изображений в процессе развития, используя систему формирования флуоресцентных/рентгеновских изображений Bruker Vivo FX System (Bruker Corp., Billerica, MA) (Craveiro et al. 2013).

В сравнении с контрольными животными, обработанными 20% Captisol®, эутомер соединения 2, дозируемый в ежедневном интраперитонеальном режиме, разработанный в циклодекстрине, давал значительное зависимое от дозы снижение в скорости пролиферации опухоли (фигура 12А) и конечной опухолевой массы (фигура 12В). Мы наблюдали зависимый от концентрации отклик, когда животные, которым дозировали соединение 2 при 50 мг/кг и 100 мг/кг, имели 65% и более 80% снижение в опухолевой массе, соответственно, по сравнению с контрольными животными.

Используемая литература

Craveiro, V., Yang-Hartwich, Y., Holmberg, J.С., Sumi, N.J., Pizzonia, J., Grffin, В., Gill., S.K., Sliasi, D-A., Azodi, M., Rutherford, Т., Alvero, А,В., Mor, G. (2013). "Phenotypic modifications in ovarian cancer stem cells following Paclitaxel treatment" Cancer Medicine, 2(6), 751-762.

Упоминание любой используемой литературы в данном документе не должно рассматриваться как признание того, что такая используемая литература доступна в качестве предшествующего уровня техники настоящей заявки. Кроме того, ссылка в этом описании изобретения на любую предшествующую публикацию (или полученную из нее информацию) или на любое вещество, которое известно, не является и не должна считаться подтверждением или признанием, или любой формой предположения, что предшествующая публикация (или полученная из нее информация) или известное вещество являются частью общедоступных знаний в области попыток, к которой это описание изобретения относится.

Квалифицированные специалисты в данной области техники понимают, что изобретение, описанное в данном документе, подвержено изменениям и модификациям помимо тех, что особым образом описаны. Следует понимать, что изобретение включает все такие варианты и модификации. Также изобретение включает все стадии, особенности, композиции и соединения, упомянутые или указанные в этом описании, по отдельности или в сочетании, и любую и все комбинации любых двух или более указанных стадий, особенностей, композиций и соединений.

1. Соединение общей формулы (I)

где:

R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₆ алкила,

R² представляет собой ОН,

R³ выбран из группы, состоящей из: Н, C₁-C₆ алкила и галогена,

радикалы с R¹⁰ по R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, С₁-С₆ алкила, С₁-С₆ алкокси и галогена,

R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, C₁-C₆ алкокси, NH₂, NHMe, NHEt, N(Me)₂ и N(Et)₂,

R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, C₁-C₆ алкила и галогена, или R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

2. Соединение по п. 1, где R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и С₁-С₃ алкила.

3. Соединение по любому из пп. 1-2, где R³ выбран из группы, состоящей из: Н, C₁-C₃ алкила и галогена.

4. Соединение по п. 3, где R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl.

5. Соединение по любому из пп. 1-4, где R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и галогена.

6. Соединение по п. 5, где R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, F и Cl.

7. Соединение по п. 6, где R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и F.

8. Соединение по п. 7, где R¹⁰ представляет собой ОН.

9. Соединение по любому из пп. 1-8, где R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, ОМе, C₁-C₄ алкила и F.

10. Соединение по п. 9, где R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОН, ОМе, трет-бутила, метила и F.

11. Соединение по п. 10, где R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила, метила и F.

12. Соединение по п. 10, где R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила и F.

13. Соединение по любому из пп. 1-12, где R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, NH₂, NHEt и N(Et)₂.

14. Соединение по п. 13, где R¹³ представляет собой ОН.

15. Соединение по любому из пп. 1-14, где R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила.

16. Соединение по любому из пп. 1-12, где R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

17. Соединение формулы (I), имеющее следующую структуру:

где R¹, R³ и радикалы с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено по любому из пп. 1-16.

18. Соединение по п. 17, где R¹ выбран из группы, состоящей из: Н и C₁-C₃ алкила.

19. Соединение по п. 17 или 18, где R³ выбран из группы, состоящей из: Н, С₁-С₃ алкила, F и Cl.

20. Соединение по любому из пп. 17-19, где R¹⁰ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе и F.

21. Соединение по любому из пп. 17-20, где R¹¹ выбран из группы, состоящей из: трет-бутила, ОМе, метила и F.

22. Соединение по любому из пп. 17-21, где R¹² выбран из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила, метила и F.

23. Соединение по любому из пп. 17-20, где R¹¹ и R¹² независимо выбраны из группы, состоящей из: ОМе, трет-бутила и F.

24. Соединение по любому из пп. 17-23, где R¹³ выбран из группы, состоящей из: ОН, ОМе, NH₂, NHEt и NEt₂.

25. Соединение по п. 24, где R¹³ представляет собой ОН.

26. Соединение по любому из пп. 17-25, где R¹⁴ и R¹⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, F, Cl и метила.

27. Соединение по любому из пп. 17-23, где R¹³ и один из R¹⁴ и R¹⁵ образуют следующую структуру:

28. Соединение формулы (I), выбранное из группы, состоящей из:

29. Фармацевтическая композиция для лечения рака, включающая соединение формулы (I) по любому из пп. 1-28 в эффективном количестве вместе с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом.

30. Способ лечения рака у субъекта, нуждающегося в этом, согласно которому субъекту вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) по любому из пп. 1-28 или композиции по п. 29.

31. Способ по п. 30, где рак представляет собой рецидивирующий рак.

32. Способ по п. 30 или 31, где рак устойчив к одному или более химиотерапевтическому веществу, такому как цисплатин, паклитаксел, темозоломид.

33. Способ по любому из пп. 30-32, где рак выбран из группы, состоящей из: рака поджелудочной железы, колоректального рака, меланомы, рака предстательной железы, рака головного мозга (включая детский и взрослый), рака яичника, рака молочной железы, рака легкого, рака печени и нейробластомы.

34. Способ по п. 33, где рак представляет собой рак яичника.

35. Способ по п. 33, где рак представляет собой рак головного мозга.

36. Способ по п. 35, где рак головного мозга представляет собой глиому.

37. Способ по п. 33, где рак представляет собой рак предстательной железы.

38. Способ по п. 33, где рак представляет собой нейробластому.

39. Способ по п. 33, где рак представляет собой рак печени.

40. Способ по любому из пп. 34-36, где соединение выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9 и 13:

41. Способ по п. 37, где соединение представляет собой соединение 33 или соединение 36:

42. Способ по п. 38, где соединение представляет собой соединение 9 или соединение 36:

43. Способ по п. 39, где соединение представляет собой соединение 20 или соединение 33:

44. Способ индукции апоптоза или ингибирования пролиферации раковой стволовой клетки, согласно которому раковую стволовую клетку приводят во взаимодействие с эффективным количеством соединения формулы (I) по любому из пп. 1-28.

45. Способ по п. 44, где раковая стволовая клетка представляет собой раковую стволовую клетку яичника.

46. Способ лечения заболевания у субъекта, вызванного раковыми стволовыми клетками, согласно которому субъекту вводят терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) по любому из пп. 1-28 или композиции по п. 29.

47. Способ по п. 46, где заболевание представляет собой рак.

48. Способ по п. 47, где рак представляет собой метастатический рак.

49. Способ по любому из пп. 46-48, где стволовые клетки представляют собой раковые стволовые клетки яичника.

50. Способ по любому из пп. 44-49, где соединение выбрано из группы, состоящей из соединений 2, 6, 9 и 13:

51. Способ по п. 50, где соединение представляет собой соединение 2 или соединение 9:

52. Способ получения соединения формулы (I) по п. 1, включающий стадии, согласно которым:

(a) соединение формулы (II) восстанавливают, получая соединение формулы (III):

где в соединении формулы (II) R¹, R³ и радикалы с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено в п. 1, и R² является ОАс или таким, как определено в п. 1, и в соединении формулы (III) радикалы с R¹ по R³ и с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено в п. 1, и

(b) гидрируют соединение формулы (III), получая соединение формулы (I),

где радикалы с R¹ по R³ и с R¹⁰ по R¹⁵ являются такими, как определено в п. 1,

где стадию (а) проводят, подвергая соединение формулы (II) взаимодействию с соединением борана, и

где стадию (b) проводят, подвергая соединение формулы (III) взаимодействию с гетерогенным металлическим катализатором в атмосфере водорода.