Набор реактивов для выявления ph-негативных миелопролиферативных новообразований и способ диагностики на его основе

Авторы патента:

Горбенко Алексей Сергеевич (RU)

Столяр Марина Александровна (RU)

Ольховский Игорь Алексеевич (RU)

G01N33/533 - с флуоресцентными метками

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

G01N33/00 - Исследование или анализ материалов особыми способами, не отнесенными к предыдущим группам

C12Q1/68 - использующие нуклеиновые кислоты

Владельцы патента RU 2679653:

Общество с ограниченной ответственностью "Формула гена" (RU)

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для диагностики выявления Ph-негативных миелопролиферативных новообразований. Предложен набор, содержащий специфичные праймеры и флуоресцентно-меченые ДНК-зонды. Праймеры имеют следующий нуклеотидный состав (5'-3'-): JAK2-W-F, JAK2-W-R, JAK2-W-P, JAK2-M-F, JAK2-M-R, JAK2-M-P, CALR-l-F, CALR-l-R, MPL-K-F, MPL-K-R, CALR-1-P, MPL-K-P, CALR-2-F, CALR-2-R, MPL-L-F, MPL-L-R, CALR-2-P, MPL-L-P. В TaqMan зондах на 5' конце применяют красители: флуоресцеин (FAM) и хлорированный флуоресцеин (HEX). Для тушения флуоресценции используют Black Hole Quencher-1 (BHQ1) на 3' конце. Также предложен способ диагностики Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, включающий проведение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Группа изобретений позволяет проводить одновременное исследование нескольких мутаций в одной аналитической серии, что приводит к результату в более короткие сроки. А также обеспечивает точную диагностику хронических Ph-негативных миелопролиферативных опухолей, позволяет выявлять группу пациентов с наличием сочетанных патогенетических мутаций. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, в том числе к диагностике онкогематологических заболеваний и предназначено для использования при проведении молекулярно-генетических исследований в клинико-диагностических лабораториях с целью диагностики хронических Ph-негативных миелопролиферативных новообразований.

В соответствии с клиническими рекомендациями [Barbui Т., Thiele J., Gisslinger Н., Finazzi G., Vannucchi A.M, Tefferi A. The 2016 revision of WHO classification of myeloproliferative neoplasms: Clinical and molecular advances. Blood Reviews, 2016. 30: 453-459] основным диагностическим критерием для постановки диагноза Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, а именно истинной полицитемии (ИП), эссенциальной тромбоцитемии (ЭТ) и первичного миелофиброза (ПМФ) является выявление одной из пяти наиболее частых патогенетических соматических мутаций в генах янускиназы-2 (V617F JAK2), кальретикулина (CALR 1 типа - с. 1092_1143del и 2 типа - с. 1154_1155insTTGTC) и рецептора тромбопоэтина (MPL W515L и W515К).

Известен алгоритм лабораторной диагностики хронических миелопролиферативных новообразований [Ольховский И.А., Горбенко А.С., Субботина Т.Н., Столяр М.А. Современные возможности молекулярно-генетического анализа в диагностике хронических миелоидных опухолей. Медицинский алфавит, 2015. Т.4 (18): 44-46], который включает последовательное выполнение молекулярно-генетических тестов выявления отдельных мутаций. В лабораторной практике используется алгоритм, учитывающий частоту выявляемых мутаций: вначале выполняется тест на наличие мутации V617F JAK2, при его отрицательном результате - выполняют тест на мутации в гене кальретикулина (CALR 1 и 2 типов), а при их отрицательном значении - определяют мутации гена рецептора тромбопоэтина (MPL W515L и W515K). Выявление хотя бы одной из мутаций считается достаточным основанием для подтверждения диагноза и последующего молекулярно-генетического исследования других более редких патогенетических мутаций как правило не проводится.

Вместе с тем, имеются данные о достаточно частом одновременном сочетании разных патогенетически важных соматических мутаций у одного пациента и предлагается выделять их в отдельную клиническую группу, отличающуюся прогнозом развития заболевания и ответом на терапию [Ahmed RZ, Rashid М, Ahmed N, Nadeem M, Shamsi TS. Coexisting JAK2V617F and CALR Exon 9 Mutations in Myeloproliferative Neoplasms - Do They Designate a New Subtype? Asian Рас J Cancer Prev. 2016; 17(3):923-6].

Поскольку существующие наборы реагентов для выполнения наиболее распространенных в практике клинико-диагностических лабораторий методов детекции мутаций на основе реакции полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени предусматривают возможность проведения исследования только мутаций в отдельных генах, выполнение полного лабораторного тестирования занимает достаточно большой промежуток времени. При этом продолжительность (время проведения) стандартной для медицинских лабораторий ПЦР превышает 3 часа.

Известно одновременное исследование всех возможных мутаций в ДНК с использованием методов секвенирования ДНК [Langabeer SE, Andrikovics Н, Asp J, et al. Molecular diagnostics of myeloproliferative neoplasms. Eur J Haematol. 2015, 95:270-279] и микрочипов

(https://tools.mermofisher.com/content/sfs/brochures/genomewide_snp6_datasheet.pdf).

Однако, требования к оборудованию и квалификации персонала, а также высокая трудоемкость выполнения и стоимость тестирования осложняет широкое использование данных методов в реальной практике клинико-диагностических лабораторий.

Известен способ, который заключается в использовании аллель-специфичных праймеров с регистрацией результатов ПЦР в режиме реального времени с использованием флуоресцентно-меченных проб. Реакционная смесь включает праймеры, отличающиеся для каждого аллеля, и общие для двух аллелей праймер и пробу, а также общий флуоресцентный зонд [RU, п. 2445373, МПК C12Q1/68, опубл. 20.03.2012 г., бюл. №8].

Недостатки способа заключаются в невозможности проведения мультиплексной реакции в виду использования одного флуоресцентного зонда общего для двух анализируемых аллелей.

Наиболее близким набором реактивов для выявления Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, к заявляемому набору в группе изобретений, являются наборы реактивов, предлагаемые фирмой ООО «Генотехнология» для выявления мутации V617F в гене JAK2, мутаций 1 и 2 типа в гене CALR и мутаций W515L и W515K в гене MPL (http://www.genetechnology.ru/?q=node/98). (прототип).

Однако данные наборы позволяют выявлять эти мутации только в отдельных генах и в разных постановках ПЦР с помощью разных наборов, что существенно увеличивает время проведения анализа и затраты на его выполнение.

Наиболее близким способом к заявляемому способу в группе изобретений по совокупности признаков является способ диагностики вирусного иммунодефицита крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с использованием набора для выявления ДНК провируса иммунодефицита крупного рогатого скота содержащего пару специфичных праймеров и ДНК-зонд, следующего состава (5'-3'-): pf-TAGGGTAGTGGGATCTCAGAAATC, pr-ACATCCGTAACATCTCCTACCATC, z-GAGGATGGTAGGAGATGTTACGGAT, при этом реакционную смесь готовят путем смешения буфера 10-кратного для ПЦР - 2,5 мкл, дНТФ (25 мМ) - 0,2 мкл, праймеров pf и рr (10 пмоль/мкл) по 1 мкл, зонда z (10 пмоль/мкл) - 0,5 мкл, Taq полимеразы (5 ед./мкл) - 0,2 мкл, MgCl₂ (50 мМ) - 2 мкл, бидистиллированной воды - 7.6 мкл, а амплификацию проводят в следующем режиме: денатурация-95°С-5 мин, циклирование: денатурация (95°С - 20 с) - отжиг (55°С - 20 с) - элонгация (72°С - 20 с), причем цикл денатурация - отжиг - элонгация повторяется 10 раз, циклирование 2 с детекцией: денатурация (95°С - 20 с) - отжиг (55°С - 20 с) - элонгация (72°С - 20 с), причем цикл денатурация - отжиг - элонгация повторяется 25 или 30 раз, при этом флуоресценцию измеряют по каналу Orange при температуре 55°С, и пересечение кривой флуоресценции линии threshold, установленной на уровне 30% от максимального уровня флуоресценции в последнем цикле амплификации, свидетельствует о наличии в образце провируса BIV, причем, чем меньше значение показателя «Ct», тем выше количество провируса BIV в исследуемом образце, в то время как отсутствие пересечения кривой флуоресценции линии threshold свидетельствует об отсутствии провируса BIV в образце [RU, 2595373, МПК C12N 15/49, C12Q 1/68, опубл. 27.08.2016 г., бюл. №24 (прототип)].

Недостаток этого способа заключается в том, что он предусматривает возможность выявления только одной искомой последовательности ДНК.

Задача изобретения - разработка набора реактивов для мультиплексного ПЦР анализа, а также ускоренного и экономичного способа диагностики Ph-негативных миелопролиферативных новообразований на его основе.

Техническим результатом достигаемым заявляемой группой изобретений является изготовление набора реактивов для мультиплексного ПЦР анализа, сокращение рабочего времени на выполнение лабораторных тестов и экономии расходных материалов.

Указанный единый технический результат при осуществлении группы изобретений по объекту набор реактивов достигается тем, что в наборе реактивов для выявления Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, содержащем специфичные праймеры и флуоресцентно-меченые ДНК-зонды, новым является то, что он имеет следующий нуклеотидный состав (5-3'-):

в качестве источника флуоресценции в TaqMan зондах на 5' конце применяют красители: флуоресцеин (FAM) и хлорированный флуоресцеин (HEX), а для тушения флуоресценции используют Black Hole Quencher-1 (BHQ1) на 3' конце.

Указанный единый технический результат при осуществлении группы изобретений по объекту способу достигается тем, что в способе диагностики Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, включающем проведение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени путем смешивания буфера, дНТФ, специфичных праймеров, TaqMan зондов, Taq-полимеразы, MgCI₂ и воды в оптимальных объемах и последующую амплификацию, новым является то, что используют мультиплексный вариант полимеразной цепной реакции, с участием специфичных праймеров и зондов имеющих следующий нуклеотидный состав (5'-3'-):

а амплификацию проводят в следующем режиме: предварительная активация при 95°С - 5 минут и последующие циклы включающие денатурацию при 95°С - 15 секунд, отжиг и элонгацию при 60°С - 60 секунд, цикл повторяют 50 раз, результат признают положительным, если значение порогового цикла (Ct) для образца не больше 32.

Заявляемая группа изобретений соответствует требованию единства изобретения, поскольку группа разнообъектных изобретений образует единый изобретательский замысел, причем один из заявляемых объектов - набор реактивов для выявления Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, предназначен для использования в другом - способе диагностики Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, при этом оба объекта группы изобретений направлены на решение одной и той же задачи с получением единого технического результата.

Сопоставительный анализ с прототипом позволил выявить совокупность существенных по отношению к техническому результату отличительных признаков для каждого из заявляемых объектов группы, изложенных в формулах. Следовательно, каждый из объектов группы изобретений соответствует критерию «новизна».

Из литературы и практики ПЦР-исследований неизвестно о способе мультиплексного ПЦР-анализа и (или) наборе реактивов для одновременного выявления отдельных патогенетических соматических мутаций V617F, с. 1092_1143del, c. 1154_1155insTTGTC, W515L, W515K в генах JAK2, CALR и MPL соответственно, которые были бы идентичны заявляемым, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию «изобретательский уровень».

Сущность изобретения поясняется с помощью графических материалов:

На фиг. 1 представлены кривые накопления флуоресцентного сигнала после проведения ПЦР-РВ для пробы без соматических мутаций.

На фиг. 2 представлены кривые накопления флуоресцентного сигнала после проведения ПЦР-РВ для пробы с одной из пяти соматических мутаций.

На фиг. 3 представлены кривые накопления флуоресцентного сигнала после проведения ПЦР-РВ для пробы одновременно с двумя соматическим мутациями.

Способ осуществляется следующим образом.

Образцы крови получают из локтевой вены и стабилизируются раствором ЭДТА К2 или 3,8% раствором цитрата натрия в объемном отношении 9:1. В процессе исследования кровь сохраняют в закрытых пластиковых пробирках при комнатной температуре, с соблюдением общепринятых мер предосторожности при работе с клетками крови. В качестве материала для исследования также возможно использование образцов крови в виде сухих капель на целлюлозном носителе, например, на бумаге типа ватман. В этом случае, для выделения ДНК использовали вырезанные фрагменты, пропитанные кровью, на пощади от 0,2 см². Выделение ДНК из лейкоцитов цельной крови человека и из сухих пятен крови проводится стандартными методами, обеспечивающими выделение ДНК в количестве не менее 40 нг на один образец.

Далее с полученными образцами ДНК проводят мультиплексную ПЦР в режиме реального времени с использованием разработанного набора, содержащего четыре реакционных смеси: №1 (JAK2-W), №2 (JAK2-M), №3 (С ALR1+MPL-K), №4 (CALR2+MPL-L), Taq-полимеразу, положительный контрольный образец (ПКО) и отрицательный контрольный образец (ОКО). ПКО представляет собой человеческую геномную ДНК с наличием мутантных аллелей всех исследуемых генов. ОКО представляет собой человеческую геномную ДНК здорового донора, не имеющего мутаций в исследуемых генах.

Указанные в таблице 1 реакционные смеси входящие в состав набора включают специфичные праймеры и зонды:

Реакционная смесь №1 используется для контроля прохождения реакции и качества выделенной ДНК, содержит праймеры JAK2-W-F, JAK2-W-R и зонд JAK2-W-P;

Реакционная смесь №2 содержит праймеры JAK2-M-F, JAK2-M-R и зонд JAK2-M-P

Реакционная смесь №3 содержит праймеры CALR-l-F, CALR-l-R, MPL-K-F, MPL-K-R и зонды CALR-1-P, MPL-K-P;

Реакционная смесь №4 содержит праймеры CALR-2-F, CALR-2-R, MPL-L-F, MPL-L-R и зонды CALR-2-P, MPL-L-P.

Праймеры и зонды подбирали с использованием программы «Primer 3». Подобранные последовательности были проанализированы в GenBank с помощью программы BLAST (таблица 2). По итогам анализа не было обнаружено последовательностей в геноме человека, гомологичных подобранным праймерам и зондам.

Примечание: Tm - температура плавления

Пример:

Мультиплексную полимеразную цепную реакцию проводят в смеси объемом 25 мкл на 1 пробу ДНК. Для каждого анализируемого образца ДНК пациента готовят 4 пробирки, в которые вносят реакционные смеси соответствующие номеру пробирки (таблица 1). В каждую пробирку добавляют Taq-полимеразу (5 ед/мкл) в объеме 0.2 мкл, а затем ДНК исследуемого образца с концентрацией не менее 40 нг в объеме 10 мкл. При каждом исследовании необходимо использовать две дополнительные пробирки в которые вместо ДНК вносят контрольные образцы ОКО и ПКО.

Температурно-временной режим проведения реакции для амплификатора «CFX96» («Bio-Rad», США) следующий: предварительная активация при 95°С - 5 минут и последующие циклы включающие денатурацию при 95°С - 15 секунд и отжиг и элонгацию при 60°С - 60 секунд, цикл повторяют 50 раз.

Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируют с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в режиме «реального времени» в соответствии с инструкцией к прибору (фиг. 1-3). Необходимо определять пороговый цикл (Ct) для каждой пробирки. Результат признают положительным в случае, если значение Ct для данного образца было не больше 32. Расчет количества мутантного аллеля осуществляют по формуле:

1. для мутации V617F в гене JАК2:

аллельная нагрузка =

2. для мутаций 1 и 2 типа в гене CALR и мутаций W515L, W515К в гене MPL:

аллельная нагрузка = где

Ct_JAK2M - пороговый цикл мутантного аллеля JAK2;

Ct_JAK2WT - пороговый цикл аллеля дикого типа JAK2;

X - пороговый цикл одного из мутантных аллелей - CALR 1 типа, CALR 2 типа, MPL W515L, MPL W515K.

Кривые накопления флуоресцентного сигнала для образца, не содержащего ни одной из анализируемых мутаций, имеют вид, представленный на фиг. 1. На фиг. 2 представлены кривые для образца с одной соматической мутацией, в данном случае с мутацией CALR 1 типа. На фиг. 3 представлены кривые интенсивности флуоресценции для образца с двумя одновременно выявленными соматическими мутациями - JAK2 V617F и MPL W515L. Во всех примерах - по оси Х - указаны циклы амплификации, по оси У - уровень флюоресценции освобождающегося в реакции продукта амплификации

Проведенные нами исследования позволили разработать два сочетания четырех праймеров и двух TaqMan-зондов для выявления: мутаций CALR 1 тип + MPL W515K и CALR 2 тип + MPL W515L. При этом для идентификации мутантного гена (CALR или MPL) можно использовать TaqMan-зонды с разными флуоресцентными метками. Для выявления дикого (JAK2-W) и мутантного аллеля (JAK2-M) JAK2 были разработаны две соответствующие реакционные смеси, содержащие по два праймера и по одному TaqMan-зонду.

Была проведена сравнительная оценка результатов, полученных с помощью заявляемого способа с использованием заявляемого набора, с результатами, полученными с использованием праймеров, зондов и условий проведения ПЦР-РВ, описанных в следующих статьях:

1. Коммерческий набор фирмы НПО «Генотехнология»

2. Pancrazzi A, Guglielmelli Р, Ponziani V, et al. A Sensitive Detection Method for MPLW515L or MPLW515K Mutation in Chronic Myeloproliferative Disorders with Locked Nucleic Acid-Modified Probes and Real-Time Polymerase Chain Reaction. The Journal of Molecular Diagnostics. 2008; 10(5):435-441.

3. Chi J, Nicolaou KA, Nicolaidou V, et al. Calreticulin gene exon 9 frameshift mutations in patients with thrombocytosis. Leukemia. 2014; 28(5):1152-1154.

Параллельный анализ 20 образцов клинического материала от человека, установил, что во всех образцах совпали положительные результаты ПЦР (таблица 3).

Преимуществом заявляемого изобретения является то, что разработанный набор реактивов и использование мультиплексной ПЦР позволяют проводить одновременное исследование нескольких мутаций в одной аналитической серии, с использованием стандартного оборудования клинико-диагностических лабораторий и имеющегося уровня квалификации персонала. А одновременное выполнение тестирования нескольких мутаций методом мультиплексной ПЦР в реальном времени позволяет получить результат в более короткие сроки, а также способствует более точной диагностике хронических Ph-негативных миелопролиферативных опухолей позволяя выявлять группу пациентов с наличием сочетанных патогенетических мутаций.

1. Набор реактивов для выявления Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, содержащий специфичные праймеры и флуоресцентно-меченые ДНК-зонды, ОТЛИЧАЮЩИЙСЯ тем, что имеет следующий нуклеотидный состав (5'-3'-):

2.Способ диагностики Ph-негативных миелопролиферативных новообразований, включающий проведение полимеразной цепной реакции в режиме реального времени путем смешивания буфера, дНТФ, специфичных праймеров, TaqMan зондов, Taq-полимеразы, MgCI₂ и воды в оптимальных объемах и последующую амплификацию, ОТЛИЧАЮЩИЙСЯ тем, что используют мультиплексный вариант полимеразной цепной реакции с участием специфичных праймеров и зондов, имеющих следующий нуклеотидный состав (5'-3'-):

а амплификацию проводят в следующем режиме: предварительная активация при 95°С - 5 минут и последующие циклы, включающие денатурацию при 95°С - 15 секунд, отжиг и элонгацию при 60°С - 60 секунд, цикл повторяют 50 раз, результат признают положительным, если значение порогового цикла (Ct) для образца не больше 32.

Изобретение относится к медицине, а именно к репродуктологии, андрологии и вспомогательным репродуктивным технологиям, и может быть использовано для оценки качества эякулята по содержанию в нем индивидуальных сперматозоидов с высоким уровнем гидроксиметилирования ДНК.

Способ обнаружения внутриклеточных возбудителей инфекции в клетках спермы // 2664734

Группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ и набор для исследования на присутствие цитомегаловируса (CMV), вируса простого герпеса I (HSV I), вируса простого герпеса II (HSV II), вируса Эпштейна-Барра (EBV), HHV6, HHV7, HHV8, парвовируса 19, вируса гепатита В (HBV), вируса гепатита С (HCV), коксаки-вируса, вирусов иммунодефицита человека (HIV-1, HIV-2), аденоассоциированного вируса (AAV), вируса краснухи, HPV, хламидий, токсоплазмы и норовируса внутри сперматозоидов.

Высокопроизводительная и высокомультиплексная визуализация при помощи программируемых зондов на основе нуклеиновых кислот // 2662969

Изобретение относится к биотехнологии и предусматривает способы тестирования образца на наличие одной или нескольких мишеней. Способы включают приведение образца в контакт с одним или несколькими специфичными для мишени партнерами по связыванию, где каждый специфичный для мишени партнер по связыванию соединен с докинг-цепью и где специфичные для мишени партнеры по связыванию с разной специфичностью соединены с разными докинг-цепями, приведение образца в контакт с мечеными визуализирующими цепями с нуклеотидной последовательностью, которая комплементарна докинг-цепям, с получением меченых визуализирующих цепей, стабильно связанных с докинг-цепями, визуализацию образца и тушение сигнала от связанной меченой визуализирующей цепи или удаление связанных меченых визуализирующих цепей от докинг-цепей путем ферментативного расщепления, модификации или разрушения меченых визуализирующих цепей.

Композиция и способ для обнаружения биопленок на жизнеспособных тканях // 2650803

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены композиция, набор и способ для обнаружения присутствия биопленки в жизнеспособных тканях.

Способ экспресс-диагностики нодулярного дерматита крс // 2648773

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу экспресс-диагностики нодулярного дерматита крупного рогатого скота (КРС). Способ экспресс-диагностики вируса нодулярного дерматита КРС включает отбор проб патологического материала из очага инфекционного заболевания от всех животных, находящихся в очаге инфекционного заболевания, и проведение экспресс-диагностики полученного патологического материала в течение суток методом ПЦР с флуоресцентным учетом результатов в режиме реального времени с применением термоциклера типа RotorGene для выявления животных-носителей вируса нодулярного дерматита на начальной стадии инфицирования, при этом учет результатов ПЦР проводят по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией, если наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают положительным - вирус нодулярного дерматита КРС присутствует, при этом значения контрольных образцов находятся в пределах нормы, если не наблюдают рост специфического сигнала, то образец считают отрицательным - вирус нодулярного дерматита крупного рогата скота отсутствует, и значения контрольных образцов также находятся в пределах нормы.

N,n’-диэтил- n,n’-ди(2-бром-4-r-фенил)диамиды 2,2’-бипиридил-6,6’-дикарбоновой кислоты и способ их получения, циклизация полученных амидов с образованием 6,6’-диэтил-9,9’-диr-дибензо[f]-1,7-нафтиридин-5,5’(6н,6’h)-дионов // 2647578

Изобретение относится к новым соединениям N,N'-диэтил-N,N'-ди(2-бром-4-R-фенил)амидам 2,2'-бипиридил-6,6'-дикарбоновой кислоты и 6,6'-диэтил-9,9'-диR-3,3'-дибензо[ƒ]-1,7-нафтиридин-5,5'(6H,6'H)-дионам формулы (1) и (2) соответственно: .Изобретение также относится к способу их получения.

Способ определения цист лямблий и ооцист криптоспоридий в клиническом материале, смывах с объектов окружающей среды, в почве // 2638810

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и представляет собой способ определения в одной постановке цист лямблий и ооцист криптоспоридий в биологическом материале - кале, в смывах объектов окружающей среды и в почве, заключающийся в подготовке пробы, внесении в пробу иммуномагнитных частиц, иммунохимическом связывании, в результате чего образуются агрегаты цист и ооцист с магнитными частицами, улавливании агрегатов цист и ооцист в магнитном поле, отмывке зафиксированных агрегатов цист и ооцист буферным раствором, диссоциации меркаптоэтанолом или соляной кислотой, разделении цист, ооцист и магнитных частиц в магнитном поле, переносе выделенных цист и ооцист на предметное стекло для последующего иммунофлуоресцентного мечения и последующей оценки микроскопированием с применением насадки «Опти-Люм» на микроскоп, где результат учитывают исходя из того, что цисты лямблий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от округлых до овальных от 8 до 14 мкм в длину на 7-10 мкм в ширину, с ярко подсвеченными краями, ооцисты же криптоспоридий представляют собой сверкающие и флюоресцирующие яблочно-зеленым светом объекты, от овальных до сферических от 3 до 5 мкм в диаметре, с ярко подсвеченными краями.

Способ получения аналитической тест-системы на основе суспензионных микрочипов для детекции маркеров заболеваний // 2638787

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для получения аналитической тест-системы на основе суспензионных микрочипов для детекции маркеров заболеваний.

Способы и средства для мониторинга нарушения тканевого гомеостаза в организме // 2635767

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для ранней диагностики и мониторинга заболевания у субъекта с использованием циркулирующих тканевых макрофагов.

Способ одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов и устройство иммунохроматографического анализа для его реализации // 2614689

Группа изобретений относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использована для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных.

Способ прогнозирования врастания плаценты при беременности // 2679641

Изобретение относится к области акушерства и гинекологии и предназначено для прогнозировании врастания плаценты при беременности. Способ включает иммуноферментный анализ сыворотки крови беременных женщин в сроке 20 недель и позже.

Способ диагностики воспалительного процесса органов мочевыделительной системы у детей раннего возраста // 2679629

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для диагностики воспалительного процесса органов мочевыделительной системы у детей раннего возраста.

Способ обнаружения модификаций днк и связывания с белком путем манипуляций с одиночными молекулами // 2678996

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ обнаружения модифицированного основания в молекуле двуцепочечной нуклеиновой кислоты и способ идентификации по меньшей мере одного соединения, способного предотвращать взаимодействие белка с его сайтом связывания.

Способ выделения внеклеточных везикул из биологических жидкостей // 2678988

Изобретение относится к способу выделения внеклеточных везикул из биологических жидкостей, включающему отделение из образца клеток и клеточного дебриса путем центрифугирования, добавление к полученному супернатанту полиэтиленгликоля, перемешивание и инкубацию смеси, осаждение целевого продукта центрифугированием.

Способ лабораторной диагностики функциональной патологии печени больных псориазом взрослых // 2678765

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторной диагностики функциональной патологии печени у больных псориазом взрослых.

Способ определения выживаемости у больных опухолями проксимальных желчных протоков в предоперационном периоде // 2678472

Изобретение относится к медицине, гепатобилиарной хирургии и онкологии. Для определения отдаленной выживаемости у больных опухолями проксимальных желчных протоков в предоперационном периоде у больных с опухолями проксимальных желчных протоков в предоперационном периоде проводят определение диагностических факторов, используют клинические факторы, морфологические и молекулярные параметры опухоли в биологическом материале, полученном с помощью биопсии.

Способ прогнозирования риска развития гипертонической болезни с учетом генетических и средовых факторов // 2678441

Изобретение относится к области медицины, а именно к прогнозированию риска развития гипертонической болезни у индивидуумов русской национальности, являющихся жителями Центрального Черноземья.

Обнаружение антигена-мишени, фенотипический скрининг и его применение для идентификации специфичных эпитопов-мишеней клеток-мишеней // 2678421

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам для идентификации связывающих полипептидов (например, антител или их антигенсвязывающих фрагментов), которые специфически связываются с антигеном клеточной поверхности, что может быть использовано в медицине.

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы на основе определения различных популяций циркулирующих опухолевых клеток в крови до лечения // 2678202

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается прогнозирования гематогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.

Комбинированный продукт для детекции маркера-мишени // 2678108

Группа изобретений относится к области детекции маркера-мишени в биологическом образце. Набор для детекции маркера-мишени в биологическом образце в комбинации с молекулой, связывающейся с маркером-мишенью, способной специфически связываться с маркером-мишенью, содержит: первое связывающее средство, содержащее первую связывающую молекулу, способную прямо или косвенно специфически связываться с молекулой, связывающейся с маркером-мишенью, и вещество мечения; линкерную молекулу, способную специфически связываться с первым связывающим средством; и второе связывающее средство, содержащее вторую связывающую молекулу, способную специфически связываться с указанной линкерной молекулой, и вещество мечения.

Способ прогнозирования риска развития ишемического инсульта с учетом генетических и средовых факторов // 2679635

Изобретение относится к области медицинской диагностики и предназначено для прогнозирования риска развития ишемического инсульта. У индивидуумов русской национальности, являющихся жителями Центрального Черноземья, выделяют ДНК из венозной крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов rs1061624 TNFR2 и rs767455 TNFR1.