Способ воспроизводства микрогельминтов

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ воспроизводства микрогельминтов, включающий приготовление искусственной питательной полусинтетической среды (ИППС), состоящей из муки из ботвы картофеля – 70%, картофельного крахмала – 20%, воды - остальное, раскладывание питательной среды в воронки (3), заражение ИППС соответствующей маточной культурой нематод или выращивание на указанной разложенной среде насекомых–хозяев или растений–хозяев с последующим заражением их маточной культурой нематод при титре 1000 особей на 1 см3, периодическое распыление воды (8), недопускающее высыхания среды, сбор микрогельминтной суспензии. Изобретение позволяет повысить производительность выращивания и расширить видовой состав нарабатываемых микрогельминтов. 2 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к воспроизводству микрогельминтов как биологических агентов для защиты растений от вредителей (колорадский жук, проволочники, озимая совка и др.) и болезней (фитофтора, галловые и цистообразующие нематоды и др.), разработки способов борьбы с патогенами, повышения плодородия почв, корма для мальков рыб и других водных животных, наработки антибиотиков, хищных нематофаговых грибов и в других практических целях.

Известно большое количество видов микрогельминтов поражающих насекомых. Многие из них пригодны для борьбы с колорадским жуком (таблица 1) /1, 2, 3, 6/ и другими вредителями (озимая совка, яблонная плодожорка, проволочники). На основе микрогельминтов разработаны биопрепараты для борьбы с вредителями - ДИПРИН, НЕМАБАКТ, ФИТОВЕРМ и др. /4, 5, 11/, антагонистические нематоды используют для подавления и вытеснения фитопатогенных нематод, многие виды почвенных сапрофитных микрогельминтов способствуют повышению плодородия, повышению урожайности растений и очистке почвы от патогенных микроорганизмов /8/, а также в качестве корма для факультативного нематофагового сапрофагового хищного гриба Артроботрис олигоспора (Arthrobotrys oligospora Fres.) /7/ используемого для борьбы с фитопатогенными нематодами. Однако наработка биопрепаратов сдерживается отсутствием надежных способов промышленного, поточного, круглогодичного, массового разведения микрогельминтов.

Целью изобретения является повышение производительности выращивания и расширение видового состава нарабатываемых микрогельминтов.

Цель изобретения достигается тем, что для повышения производительности выращивания и расширения видового состава нарабатываемых микрогельминтов выращивают в насекомых - хозяевах или без них с помощью автоматической линии на универсальных питательных средах, пригодных для выращивания насекомых и нематод.

Наиболее близким к заявляемому объекту техническим решением является способ получения энтомопатогенного биологического препарата ДИПРИН, включающий заражение гусениц озимой совки (Agrotis segetum Schift) нематодой (Pristionchus uniformis), сбор погибших насекомых, отлов в воду мигрирующих инвазивных личинок, концентрирование нематодной суспензии, ее консервацию и хранение до применения, который мы принимаем за прототип /9/.

Известный способ включает поточное круглогодичное разведение озимой совки, заражение гусениц, сбор погибших насекомых и культивирование в них нематод, сбор нематодной биомассы, концентрирование, стандартизация и хранение нематодной суспензии. В качестве садков для культивирования озимой совки используют вазоны для выращивания растений различного диаметра. Емкости устанавливают попарно одну над другой, стыкуя широкими отверстиями. В качестве корма для гусениц озимой совки используют морковь, пшеничные отруби, картофель и воду с добавлением витаминов - аскорбиновой и фолиевой кислот. Гусениц выращивают до IV-V возраста и затем инвазируют нематодами из расчета 50-100 личинок на гусеницу. Гибель насекомых от заражения наступает на 2 - 3-и сутки. Заражение осуществляют в чашках Петри по 10-20 особей в каждой. Инокулюм наносят в водном растворе на фильтровальную бумагу, которой выстилают донышки чашек Петри, прежде чем поместить туда гусениц. Погибших насекомых, инвазированных нематодами, раскладывают на платформы из перевернутых (меньшего размера) чашек Петри, обернутых фильтровальной бумагой, которые помещают в чашки большего диаметра с тонким слоем воды на дне. Воду с отловленными нематодами сливают ежедневно. На каждую платформу помещают 10-15 особей. Суспензию нематод отстаивают в течение суток, сливают супернатант и добавляют формалин в количестве 0,01%, после чего хранят в течение 1-1,5 года в холодильнике при температуре 4-5°С.

Недостатками указанного способа являются низкая производительнось и ограничение видового состава производимых микрогельминтов их пищевыми предпочтениями.

В предлагаемом нами способе технологический процесс осуществляется на автоматической линии, состоящей из: емкости для окукливания насекомых или сбора суспензии гельминтов 1, перфорированной крышки 2, воронки для воспроизводства насекомых и нематод 3, мелкоперфорированная крышка для перекрытия воронок 4, фильтровального вкладыша 5, сливного устройства 6, автомата для включения или отключения слива 7, распылительной трубки с форсунками для воды 8, автомата для включения или отключения распылителя воды 9, датчика - автомата для ограничения повышения объема суспензии и включения (или отключения) слива 10, датчика для включения или отключения распылителя воды 11, питательной среды 12, емкости для изготовленного препарата 13 (Фиг 1).

Универсальная среда для насекомых и нематод имеет следующий состав - мука из ботвы картофеля - 70%, картофельный крахмал - 20%, вода - остальное. Среду готовят следующим образом. Картофельную ботву сушат при температуре 70-80°С в течение 1-2 часов. Нужное количество компонентов отвешивают на технических весах, после чего заливают водой и смешивают в миксере в течение 3-5 минут.

Линия работает следующим образом: в отверстия крышки 2 расставляют воронки 3. В воронки 3 раскладывают выполненные из мягкой, ткани, сложенные в виде воронки фильтровальные вкладыши 5 и раскладывают питательную среду 12, которую используют как для выращивания насекомых - хозяев (личинки колорадского жука, гусеницы озимой совки) и для выращивания микрогельминтов как на насекомых -хозяевах (облигатные паразиты), так и на питательной среде (факультативные паразиты, сапрофиты). Для выращивания фитопатогенных нематод в воронки высаживают растения - хозяева (зерновые, картофель, свеклу и др.), заселенные воронки закрывают мелкоперфорированными крышками 4.

Для воспроизводства микрогельминтов воронки с насекомыми -хозяевами или без них инвазируют соответствующей маточной культурой (10 тыс.особей - около 10 см3 маточной суспензии).

Через каждые двое суток определяют количество нематод в среде, для чего берут соответствующую пробу (1-2 г) и подсчитывают количество микрогельминтов в поле зрения бинокуляра при одинаковом увеличении. При титре 1000 особей в 10 см3 включают распылитель воды 8, который автоматически отключается после заполнения воронок 4, после чего микрогельмины мигрируют в емкость для сбора суспензии 2. В дальнейшем автомат для включения или отключения распылителя воды 9 с помощью датчика 11, периодически включает и отключает распылитель воды 9, не допуская высыхания среды и перегоняя микрогельминты в емкость 2. После наполнения емкости 2 сливное устройство с помощью автомата для включения или отключения слива 10 микрогельминтную суспензию переливают в емкости для изготовленного препарата и используют по назначению.

При выращивании насекомых - хозяев после завершения развития и появлении первых куколок перфорированную крышку 2 снимают, а воронки 3 переворачивают, устанавливая на дно емкостей 2, после чего насекомые завершают окукливание и готовы для дальнейшего применения.

К микрогельминтам относятся микроскопические нематоды (класс Nematoda) и микроскопические черви из других систематических групп. Это - обширная группа микроскопических круглых червей. По широте распространения и количеству видов они занимают одно из первых мест в мире среди беспозвоночных животных и микроорганизмов.

При воспроизводстве соответствующих культур микрогельминтов следует обращать внимание на экологические особенности их жизни и питания в природе.

Для размножения сапрофитных (свободно живущих) видов микрогельминтов (в основном представителей семейства Тиленхиды (Tilenchidae), которые в обычных условиях питаются разлагающимися растительными остатками или сами способствуют их разложению, выделяя соответствующие ферменты) и факультативных (не обязательных) паразитов, которые в отсутствии жертвы могут питаться растительными и животными остатками (истребляют многие виды вредных беспозвоночных и зооспоры), а также хищных (свободно живущих) микрогельминтов (типичный представитель Мононхус папилата - Mononchus papillatus способный питаться личинками галловых и цистообразующих нематод и зооспорами фитофторы). В среде, такие микрогельминты находят для своего питания других микроскопических животных (простейшие, коловратки, подвижные зооспоры и др.) отчего можно использовать предлагаемую среду без внесения добавок.

Для размножения облигатных (питающихся исключительно жертвами - членистоногими хозяевами) паразитических микрогельминтов (типичные представители - Неоаплектана карпокапса (Neoaplectana carpocapsae Veizer и различные виды гетерорабдитид (Heterorhabditidae) и мермитид (Mermitidae) в среду для их выращивания надо периодически (раз в 2 недели) добавлять их членистоногих хозяев (личинки колорадского жука, проволочников, гусениц озимой совки и др.), которые также могут питаться предлагаемой средой.

Для размножения в научных целях (определение вирулентности штаммов, спектр растений хозяев и др.) фитопатогенных (поражающих растения) микрогельминтов - типичные представители стеблевая нематода (Ditylenchus destructor Thome, 1945, галловая нематода Meloidogyne incognita), золотистой картофельной цистообразующей нематоды (ЗКЦН) (гетеродера ростошиенза (Heterodera rostochiensis Wollenweber) и др. в среду следует добавлять нестандартные клубни картофеля (в случае размножения галловой, стеблевой или цистообразующей нематод картофеля) или засевать среду злаковыми культурами (овес, рожь, пшеница и др., которые развиваясь в среде через 1-2 недели дают корневую систему и готовы к инвазированию галловыми злаковыми нематодами.

Насекомых - хозяев (колорадский жук, проволочники, озимая совка и др.) выращивают на предлагаемой среде в отдельных воронках и периодически используют для подкормки облигатно паразитирующих микрогельминтов.

Источники информация

1. Абашкин О.В., Масюк Ю.А., Абросимов Д.В., Марьяновская М.В., Алексютина О.А. Черников В.И. Нематоды против колорадского жука. // Журнал Картофельная система. - 2013. №3 - 4. - С. 38-40.

2. Данилов Л.Г. Восприимчивость колорадского жука Leptinotarsae decemlineata Say, к заражению энтомопатогенными нематодами Neoaplectana carpocapsa штамм. «Agriotos» // Бюллетень ВИЗР, 1978, №44, с. 3-6.

3. Данилов Л.Г., Каверзнева Г.Д. Перспективы использования энтомопатогенных нематод в защите растений. // Обзор. - М.: ВНИИТЭИАГРОПРОМ. 1991. - 40 стр.

4. Данилов Л.Г., Павлюшин В.А., Айрапетян В.Г., Нащекина Т.Ю., Турицын В.С. Биологические препараты на основе энтомопатогенных нематод (Rhabditidae. Steinernematidae). // В кн.: Второй Всероссийский съезд по защите растений. Фитосанитарное оздоровление экосистем. Материалы съезда. Том 2. Санкт-Петербург. 2005. (600 стр. ). С. 37-38.

5. Зейрук В.Н., Черников В.И., Кукушкина Л.Н., Тихонова Л.В., Масюк Ю.А., Сычев А.Е. Защитное и биостимулирующее действие биопрепаратов на основе нематодно - бактериального комплекса биоудобрений, биостимуляторов и агротехнических приемов на состояние и урожайность картофеля. // В кн.; Первая Всероссийская конференция по иммунитету растений к болезням и вредителям. СП (Л). 2002. - С. -140-141.

6. Костина Л.Я., Макаров П.П., Масюк Ю.А., Черников В.И., Жиляева И.Н., Тихонова Л.В. Pristionchys uniformis var. Oz. - Новый для России вид почвенной нематоды, патогенной для колорадского жука. / В кн. Тезисы докладов Всероссийского съезда по защите растений. - Л.: 1995. - С. 327.

7. Мацкевич Н.В. Нематофаговые хищные грибы. // Защита растений. №8, - 1990. - Стр. 23-24.

8. Павлюшин В.А., Исси И.В., Воронина Э.Г., Митрофанов В.Б., Данилов Л.Г., Новикова И.И. Микробиологическая защита растений как неотъемлемый элемент фитосанитарной оптимизации агроэкосистем. // В кн.: Семьдесят лет ВИЗР. Ретроспектива исследований (методология, теория, практика). 1929-1999. Сборник научных трудов. СП. (Л). 1999. 316 стр. С. 146-162. /П01. /МЗРК04.

9. Тихонова Л.В., Бессонов А.С, Шестов А.Л., Писарев Б.А., Макаров П.П., Масюк Ю.А., Зейрук В.Н., Коноплев Г.К., Костина Л.Я., Вышинский Г.В., Туманов Л.Л., Трофименков В.Н. Способ получения энтомопатогенного препарата Диприн. // Патент на изобретение. РФ. №2128911. Кл. A01K 67/33. Б. И. 1999. №11.

10. Тихонова Л.В., Зейрук В.Н., Абашкин О.В., Кукушкина Л.Н., Масюк Ю.A., Марьяновская М.В., Черников В.И. Борьба с фитофторозом с помощью энтомопатогенных нематод. В кн.: Современная микология в России. Тезисы докладов Второго съезда микологов. Т. 2. М., - 2008. стр. 305

11. Тихонова Л.В., Зейрук В.Н., Масюк Ю.А., Абашкин О.В., Абросимов Д.B. Черников В.И., Овэс Е.В. Культивирование неоаплектан в различных насекомых - хозяевах. В кн.: Культурные растения для устойчивого сельского хозяйства в XXI веке (иммунитет, селекция, интродукция), том 1У. Часть. 1. К 100-летию академика ВАСХНИЛ и Россельхозакадемии М.С. Дунина. 2011. Стр. 454-459.

Способ воспроизводства микрогельминтов, включающий приготовление искусственной питательной полусинтетической среды (ИППС), состоящей из муки из ботвы картофеля – 70%, картофельного крахмала – 20%, воды - остальное, раскладывание питательной среды в воронки (3), заражение ИППС соответствующей маточной культурой нематод или выращивание на указанной разложенной среде насекомых–хозяев или растений–хозяев с последующим заражением их маточной культурой нематод при титре 1000 особей на 1 см3, периодическое распыление воды (8), недопускающее высыхания среды, сбор микрогельминтной суспензии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированной мыши для получения антитела, причем антитело содержит первую тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую первый вариабельный домен тяжелой цепи иммуноглобулина человека, кодируемый вариабельной областью тяжелой цепи иммуноглобулина человека, содержащей VH2-26, VH3-21, VH3-64 или их соматически гипермутированный вариант.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ инкубации перепелиных яиц, включающий предынкубационную обработку ультрафиолетом яиц, на которые воздействуют в ограниченном затемненном пространстве с отражающими поверхностями длинноволновым ультрафиолетовым излучением в диапазоне 350-400 нм с помощью лампы BL350, где яйца с темным и светлым свечением скорлупы отбирают на инкубацию, при этом смешивают их в соотношении не более 30% - «светлые» и не более 70% - «темные» для повышения инкубационных качеств.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ определения молочной продуктивности коров за сутки, включающий санитарную подготовку вымени, вызов рефлекса молокоотдачи перед доением, соблюдение правил машинного доения животных, пригодных и приученных к машинному доению, при контрольных доениях, определение количества молока, отбор проб молока и анализ в нем содержания жира и белка за сутки, где определение количества молока и его анализ проводится отдельно по каждой дойке, затем рассчитывается количество молока и содержание в нем жира и белка за сутки, далее рассчитываются коэффициенты пересчета количества молока и массовой доли жира и белка за каждую дойку в суточные показатели, при этом в течение года при последующих определениях молочной продуктивности коров за сутки проводится одно контрольное доение в сутки, и по его показателям, умноженным на соответствующий ему расчетный коэффициент, вычисляется тот же показатель за сутки при однотипном кормлении, содержании и доении, где при неравных временных интервалах между дойками за сутки, молочную продуктивность более точно определяют по одному разовому удою после более длительного промежутка между дойками, при этом для определения молочной продуктивности берутся дойные коровы с десятого дня лактации и больше.

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Предложено устройство искусственного гнездовья для дождевых червей.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированному грызуну, способному демонстрировать фенотип гетеротопической оссификации. При этом вышеуказанный грызун содержит внутри аллеля Acvr1 конструкцию, причем указанная конструкция содержит мутантный экзон 5 Acvr1 в антисмысловой ориентации, фланкированный парой сайтов распознавания сайт-специфической рекомбиназы (SRRS), а также дополнительно содержит вторую пару SRRS, направляющих удаление экзона 5 Acvr1 дикого типа при действии индуцируемой сайт-специфической рекомбиназы, и ген, кодирующий индуцируемую сайт-специфическую рекомбиназу.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу направленной модификации представляющего интерес геномного локуса в одной или более плюрипотентных клетках крысы, включающему введение в плюрипотентные клетки крысы большого таргетирующего вектора (LTVEC), содержащего вставку нуклеиновой кислоты, и идентификацию генетически модифицированной плюрипотентной клетки крысы, содержащей направленную генетическую модификацию в представляющем интерес геномном локусе, а также к способу создания гуманизированной крысы с использованием вышеуказанного способа модификации.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует зрелый полипептид IL-15 человека, в геноме которой в эндогенном локусе IL-15 мыши заменен геномный фрагмент мыши, содержащий последовательности экзонов 3, 4, 5 и 6 IL-15 мыши, которые кодируют зрелый полипептид IL-15 мыши, на человеческий геномный фрагмент, содержащий 3-6-й экзоны человеческого гена IL-15 и кодирующий зрелый полипептид IL-15 человека.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированной мыши, которая экспрессирует IL-6 человека, к мыши, которая экспрессирует IL-6 человека и один дополнительный человеческий полипептид, выбранный из человеческого M-CSF, человеческого IL-3, человеческого GM-CSF, человеческого SIRPα и человеческого TPO, а также к мыши, которая экспрессирует IL-6 человека и SIRPα человека, M-CSF человека, IL-3 человека, GM-CSF человека и TPO человека.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к мыши для экспрессии гуманизированного белка SIRPα, содержащей замещение экзонов 2, 3 и 4 гена SIRPα мыши в эндогенном локусе SIRPα мыши на экзоны 2, 3 и 4 гена SIRPα человека с образованием гуманизированного гена SIRPα, а также к клетке и ткани вышеуказанной мыши.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированному животному-грызуну, экспрессирующему гуманизированный белок April, а также к способу его получения.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ воспроизводства микрогельминтов, включающий приготовление искусственной питательной полусинтетической среды, состоящей из муки из ботвы картофеля – 70, картофельного крахмала – 20, воды - остальное, раскладывание питательной среды в воронки, заражение ИППС соответствующей маточной культурой нематод или выращивание на указанной разложенной среде насекомых–хозяев или растений–хозяев с последующим заражением их маточной культурой нематод при титре 1000 особей на 1 см3, периодическое распыление воды, недопускающее высыхания среды, сбор микрогельминтной суспензии. Изобретение позволяет повысить производительность выращивания и расширить видовой состав нарабатываемых микрогельминтов. 2 табл., 1 ил.

Наверх