Способ диагностики газового состава метаболитов микробиоты человека



Способ диагностики газового состава метаболитов микробиоты человека
Способ диагностики газового состава метаболитов микробиоты человека
Способ диагностики газового состава метаболитов микробиоты человека
Способ диагностики газового состава метаболитов микробиоты человека

Владельцы патента RU 2683949:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и микробиологии и описывает способ определения наличия газовых сигнальных молекул в метаболитах микробиоты человека. Способ характеризуется тем, что осуществляют выращивание культуры микроорганизмов в течение 24 часов в аэробных, микроаэрофильных или анаэробных условиях при температуре 37°С, после инкубирования забирают пробу, представляющую собой пар над питательным бульоном, и проводят анализ пробы в режиме программирования температуры в течение от 6 до 15 минут, детектор ПИД используют для определения углеродсодержащих газов в течение 15 минут, детектор ЭЗД для определения NO, H2S, Н2О в течение 12 минут, детектор ДТП для определения Н2, О2, N2 в течение 6 минут. Изобретение позволяет определять наличие газовых сигнальных молекул, выделяемых микробиотой человека, и далее использовать их в качестве маркеров в диагностике заболеваний различного профиля. 3 пр.

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для определения газовых сигнальных молекул, выделяемых микробиотой человека.

Микроорганизмы в процессе жизнедеятельности могут потреблять из внешней среды или выделять в нее различные вещества, в том числе короткоцепочечные летучие жирные кислоты, КЛЖК, (уксусная, пропионовая, масляная, изомасляная, валерьяновая, изовалерьяновая, капроновая, изокапроновая), а также простейшие по химической структуре газообразные соединения (оксид азота - NO, оксид углерода - СО, сероводород - H2S, водород - Н2, метан- СН4, аммиак- NH3 и другие), являющиеся разнообразными регуляторами внутри- и межклеточной коммуникации, и динамика их концентрации в среде является важным физиологическим показателем.

Микробные аутоиндукторы (КЛЖК), позволяют симбиотическим микроорганизмам распознавать окружающую их среду, взаимодействовать друг с другом и с клетками хозяина. Эти молекулы запускают каскад процессов в прокариотических и эукариотических клетках, когда их количество достигает определенного уровня («quorum»). Аутоиндукторы взаимодействуют с клеточными рецепторами, с распознающими их регуляторными белками и, в конечном счете, активируют экспрессию соответствующих генов в ДНК микробных, митохондриальных и эукариотических клеток хозяина. Благодаря аутоиндукторам, микроорганизмы и клетки макроорганизма обмениваются информацией и координируют свою деятельность.

Хотя точные концентрации газов в тканях до настоящего времени отсутствуют, доказано, что многие из них способны проявлять разнообразные физиологические эффекты практически в каждом органе человека, а в определенных условиях участвовать и в патофизиологии тех или иных заболеваний. Большое количество газовых молекул, например, О2, NO, СО, H2S, и СН4, может проникать через клеточные мембраны, что является необходимым условием для выполнения ауто-, пара- или эндокринных функций. Газы способны влиять на взаимодействие клеток со средой, электролитный гомеостаз и межклеточная электрохимическая взаимосвязь происходит через изменение в окислительно-восстановительной сигнализации, разрыв распределительных каналов и ионное канальное регулирование, что дает им возможность регулировать множество физиологических процессов в клетках и тканях. Так, например, «психобиотики» используются для обозначения пробиотических бактериальных штаммов, применяемых в качестве биологически активных добавок или функционального питания для оптимизации пула газотрансмиттеров в человеческом организме и благотворного воздействия на мозговую и поведенческую деятельность, которые подлежат регулированию КЛЖК, оксидом азота, окисью углерода, H2S и аммиаком. Таким образом, большинство газовых молекул, должны рассматриваться как совместно функционирующие агенты с низкой молекулярной массой, которые контролируют определенную функцию или целый комплекс функций. Газы отличаются стабильностью и, следовательно, могут проявлять свой эффект или непосредственно на месте образования (H2S), или на удалении - в тканях/органах (например, СО и NH3). Молекулы NO могут диффундировать и влиять на метаболические процессы на расстоянии в несколько клеточных диаметров. Благодаря их высокой реакционной способности, газы не накапливаются в одном месте, вместо этого, они быстро достигают свои клетки-мишени, где взаимодействуют с внутриклеточными ферментами, транспортерами и белками ионовых каналов.

Существуют способы для количественного определения летучих и нелетучих жирных кислот с помощью газо-жидкостной хроматографии:

а) Способ, основанный на детектировании жирных кислот после их этерификации [Braunegg G., Sonnleither В., Lalferty R.M. 1978. A rapid method for the determination poly-hydroxybutyric acid in microbial biomass. Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. V. 6. P. 2937.]. Газохроматографический способ определения поли-β-гидроксимасляной кислоты (поли-β-ГОМК) состоит из слабого кислотного или щелочного метанолиза поли-β-гидроксимасляной кислоты непосредственно без предварительной экстракции поли-β-ГОМК из клеток; за этим следует газовая хроматография метилового эфира 3-гидроксимасляной кислоты. Этот способ характеризуется высокой точностью и воспроизводимостью, позволяя определять до 10-5 г/л. Только 4 часа требуется от отбора проб из ферментера до завершения определения поли-β-ГОМК.

Также используется модифицированный способ кислотного метанолиза Braunegg et al. [Mustafa Kansiz, Helen Billman-Jacobe, and Don McNaughton 2000 Quantitative Determination of the Biodegradable Polymer Poly(P-hydroxybutyrate) in a Recombinant Escherichia coli Strain by Use of Mid-Infrared Spectroscopy and Multivariative Statistics Appl. Environ. Microbiol. V. 66 №8. P. 3415-3420]. Точно взвешенную часть лиофилизированной клеточной массы от 20 до 30 мг помещали в пробирку с пробкой из политетрафторэтилена и измельчали до мелкого порошка. К этому добавляли объем хлороформа, который приводил к концентрации лиофилизированной клеточной массы от 3 до 4 мг/см3 хлороформа и полученный раствор обрабатывали ультразвуком в течение 30 мин или до полной гомогенизации раствора. Один кубический сантиметр этого раствора затем помещали в другую пробирку с крышкой из политетрафторэтилена, к которой добавляли 0,85 см3 метанола, содержащего 0,5 мг бензойной кислоты на см3, внутренний стандарт, и 0,15 мл концентрированной серной кислоты. Реакционную смесь нагревали при 100°С в течение 2 ч и быстро охлаждали; затем добавляли 1 см3 дистиллированной воды и смесь перемешивали в течение 1 мин. Органический и водный слои оставляли для разделения, и 0,5 мкл нижнего органического слоя вводили в газовый хроматограф (ГХ). Используемая ГХ модель Varian 3700 GC, оборудована капиллярной колонкой DB-Wax (15 м на 0,53 мм, толщина внутренней пленки 1,0 мкм), соединенной с интегратором Hewlett-Packard модели 3396А. Температуры инжектора и пламени ионизационного детектора устанавливались соответственно на уровне 200 и 250°С. Температуру устанавливали при 80°С и затем увеличивали со скоростью 10°С/мин до достижения максимальной температуры 200°С. В этих условиях время удерживания для производного РНВ (метил-3-гидроксимасляная кислота) и внутреннего стандарта бензойной кислоты составляло 4,4 и 5,8 мин соответственно.

б) Определение жирных кислот непосредственно в водных растворах [T.V. Laurinavichene, D.N. Tekucheva, K.S. Laurinavichius, M.L. Ghirardi, M.Seibert, A.A. Tsygankov. Towards the integration of dark and photo fermentative waste treatment. 1. Hydrogen photoproduction by purple bacterium Rhodobacter capsulatus using potential products of starch fermentation // Int. J. of hydrogen energy. 2008. V. 33. P. 7020-7026.].

С помощью этого способа можно проводить определение количества ацетата, пропионата, бутирата и изобутирата (и др. при подборе условий) в пробе. Образец: клетки микроорганизмов из 1 мл культуры осаждают при 12 тыс.g в течение 2 мин., затем 300 мкл надосадочной жидкости подкисляют до рН=3 30% H2PO4. 3 мкл образца исследуют без дополнительной предобработки методом газо-жидкостной хроматографии на хроматографе Цвет-800 (Дзержинск, Россия). Газовый хроматограф оснащен пламенно-ионизационным детектором и стеклянной колонкой длиной 1 м с диаметром 2 мм (наполнитель Chromosorb W/AW-DMCS+5% неопентилгликолсукцинат фракция 100-200 (Fluka)). Температура инжектора 145°С, температура детектора 185°С. Температурный режим программы колонки следующий: 80°С в течение 3 мин; затем возрастание температуры до 175°С со скоростью 60 С/мин; финальная температура 175°С поддерживается в течение 8 мин. Диоксид углерода используется в качестве газа-носителя и подается со скоростью 30 мл/мин.

Недостаток аналога: известно, что жирные кислоты участвуют в поддержании ионного обмена, осуществлении антибактериального эффекта и блокировке адгезии патогенов, активации местного иммунитета, но они не могут считаться маркерами в диагностике заболеваний различных систем органов, как сигнальные молекулы NO, СО, H2S, Н2.

Наиболее близким по своим признакам, принятым за прототип является бактериологический метод, который является золотым стандартом в микробиологии и позволяет идентифицировать микроорганизмы с определением морфологических, тинкториальных, культур альных, биохимических, антигенных свойств, чувствительности к антибиотикам, бактериофагам.

Прототип не может быть применен для определения газовых сигнальных молекул, которые участвуют в различных фундаментальных физиологических и патофизиологических процессах организма хозяина.

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение является разработка способа определения простых газовых сигнальных молекул, таких как NO, СО, H2S, Н2, летучих жирных кислот (уксусная, пропионовая, масляная, изомасляная, валерьяновая, изовалерьяновая, капроновая, изокапроновая и др.), выделяемых представителями микробиоты здоровых людей и с различными заболеваниями неврологического, стоматологического, терапевтического, гинекологического и других профилей с помощью газового хроматографа.

Предлагаемой способ позволит выявить закономерности между выделением газовых сигнальных молекул и различными заболеваниями (например, сердечно-сосудистыми, неврологическими) и составить диагностические критерии, что в свою очередь позволит использовать эти молекулы как маркеры в диагностике заболеваний.

Авторы предлагают способ, характеризующийся простотой, удобством, малыми временными затратами и высокой результативностью.

Способ позволяет определить количество газовых сигнальных молекул, выделяемых микробиотой человека, с большой точностью и специфичностью.

Техническим результатом заявленного изобретения является разработка быстрого способа определения газовых сигнальных молекул, выделяемых микробиотой человека, обладающего хорошей воспроизводимостью результатов, использованием минимального количества биомассы микроорганизмов в микрообъемах, отсутствием необходимости использования опасных химических реагентов. В итоге будет создана база данных для дальнейшего использования с диагностическими, профилактическими и терапевтическими целями.

Заявленное техническое решение осуществляется следующим образом:

Определение газовых сигнальных молекул (Н2, H2S, N2, О2, NO, СО2, СО, СН4, С2Н6, С3Н8 и др.) проводится с помощью газовой хроматографии с применением газового хроматографа «Хроматэк-Кристалл 5000.2», оснащенного детектором по теплопроводности (ДТП), пламенно-ионизационным детектором (ПИД) и электронозахватным детектором (ЭЗД), подключенными последовательно, что обеспечивает одновременный анализ горючих и негорючих компонентов. Разделение газовой смеси проводится на трехметровой надосадочной и капиллярной хроматографической колонках, заполненной полимером MN270, фракции 100-125 мкм. Анализ проводится в режиме программирования температуры в течение от 6 до 15 минут.

ПИД используется для детекции углеродсодержащих газов (СО, СО2, СН4) в течении 15 минут в следующем режиме:

Канал старта - 1

Время анализа, мин 15,00

Время продувки, мин 0,00

Время стабилизации, мин 0,00

Термостат колонок - 1

Температура,°С 120,0; 15,0

Температура продувки,°С 0,0

ПИД - 1

Температура,°С 270,0

Расход водорода, мл/мин 25,0

Расход воздуха, мл/мин 250,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход водорода при продувке, мл/мин 0,0

Расход воздуха при продувке, мл/мин 0,0

ЭЗД - 1

Температура,°С 270,0

Расход поддувного газа, мл/мин 10,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход поддувного газа при продувке, мл/мин 0,0

ДТП - 1

Температура,°С 100,0

Расход газа сравнения, мл/мин 20,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход газа сравнения при продувке, мл/мин 0,0

Порт ввода - 1

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Порт ввода - 2

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Порт ввода - 3

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Колонка - 1

Расход, мл/мин 30,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Колонка - 2

Расход, мл/мин 30,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Колонка - 3

Расход, мл/мин 20,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Метанатор - 1

Температура,°С 350,0

Температура продувки,°С 0,0

ЭЗД используется для детекции NO, H2S, H2O в течение 12 минут в следующем режиме:

Канал старта -1

Время анализа, мин 12,00

Время продувки, мин 0,00

Время стабилизации, мин 0,00

Термостат колонок - 1

Температура,°С 45,0; 5,0; 4,0; 60,0; 3,3

Температура продувки,°С 0,0

ПИД - 1

Температура,°С 270,0

Расход водорода, мл/мин 25,0

Расход воздуха, мл/мин 250,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход водорода при продувке, мл/мин 0,0

Расход воздуха при продувке, мл/мин 0,0

ЭЗД - 1

Температура,°С 270,0

Расход под дувного газа, мл/мин 0,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход поддувного газа при продувке, мл/мин 0,0

ДТП - 1

Температура,°С 100,0

Расход газа сравнения, мл/мин 20,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход газа сравнения при продувке, мл/мин 0,0

Порт ввода - 1

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Порт ввода - 2

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Порт ввода - 3

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Колонка -1

Расход, мл/мин 30,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Колонка - 2

Расход, мл/мин 45,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Колонка - 3

Расход, мл/мин 20,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Метанатор - 1

Температура,°С 350,0

Температура продувки,°С 0,0

ДТП используется для детекции H2, О2, N2 в течение 6 минут следующем режиме:

Канал старта - 1

Время анализа, мин 6,00

Время продувки, мин 0,00

Время стабилизации, мин 0,00

Термостат колонок - 1

Температура,°С 60,0; 6,0

Температура продувки,°С 0,0

ПИД-1

Температура,°С 270,0

Расход водорода, мл/мин 25,0

Расход воздуха, мл/мин 250,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход водорода при продувке, мл/мин 0,0

Расход воздуха при продувке, мл/мин 0,0

ЭЗД - 1

Температура,°С 270,0

Расход поддувного газа, мл/мин 10,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход поддувного газа при продувке, мл/мин 0,0

ДТП - 1

Температура,°С 100,0

Расход газа сравнения, мл/мин 15,0

Температура продувки,°С 0,0

Расход газа сравнения при продувке, мл/мин 0,0

Порт ввода - 1

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Порт ввода - 2

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Порт ввода - 3

Температура,°С 80,0

Экономия газа False

Температура продувки,°С 0,0

Колонка - 1

Расход, мл/мин 30,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Колонка - 2

Расход, мл/мин 30,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Колонка - 3

Расход, мл/мин 15,000; 0,000

Расход при продувке, мл/мин 0,0

Метанатор -1

Температура,°С 350,0

Температура продувки,°С 0,0

В качестве эталона для калибровочных кривых используются чистые газы с объемной долей компонентов (производитель ООО «Мониторинг» Санкт-Петербург). Первый баллон (вместимость 4 дм3) содержит: СО 5,1 млн-1, СН4 5,0 млн-1, СО2 5,1 млн-1, N2 (остальное). Второй баллон (вместимость 4 дм3) содержит: H2S 1020 млн-1 и Ar (остальное). Третий баллон (вместимость 4 дм3) содержит: Н2 5,2 млн-1 и N2 (остальное). Четвертый баллон (вместимость 5 дм3) содержит: NO 5,1 млн-1 и N2 (остальное).

Культура микроорганизмов выращивается в 5 мл питательного бульона (MRS бульон для лактобацилл, МПБ для стафилококков, стрептококков, грибов рода Candida, Шедлера бульон для бифидобактерий) в стеклянной емкости объемом 10 мл с резиновой пробкой, которую плотно закрывают кримпером, в течение 24 часов в аэробных микроаэрофильных или анаэробных условиях при температуре 37°С. Объем пробы (надбульонного пара) - 1 мл забирается с помощью шприца. Все концентрации пересчитываются с текущих условий анализа на стандартные условия.

Пример 1

Пример 2.

Пример 3.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется базой данных (выборочные данные), включающей сведения о количественном и качественном составе газовых сигнальных молекул, которые выделяют микроорганизмы различных биотопов организма здоровых людей и людей с заболеваниями различного профиля:

Способ определения наличия газовых сигнальных молекул в метаболитах микробиоты человека, заключающийся в том, что осуществляют выращивание культуры микроорганизмов в 5 мл питательного бульона, при этом бульон выбран из MRS бульона для лактобацилл, МПБ бульона для стафилококков, стрептококков, грибов рода Candida, бульона Шедлера для бифидобактерий, в стеклянной емкости объемом 10 мл с резиновой пробкой, которую плотно закрывают кримпером, в течение 24 часов в аэробных, микроаэрофильных или анаэробных условиях при температуре 37°С, после инкубирования забирают с помощью шприца пробу объемом 1 мл, представляющую собой пар над питательным бульоном, и вводят в хроматографический детектор, включают Старт и начинают анализ пробы в режиме программирования температуры в течение от 6 до 15 минут, детектор ПИД используют для определения углеродсодержащих газов в течение 15 минут, детектор ЭЗД для определения NO, H2S, Н2О в течение 12 минут, детектор ДТП для определения Н2, О2, N2 в течение 6 минут, все концентрации пересчитывают с текущих условий анализа на стандартные условия.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится преимущественно к области физической химии и биофизикии, может быть использовано в медицине, а также биологии и физиологии человека и животных.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для определения содержания галогенорганических соединений в волосах человека и касается экологического контроля загрязнения внутренней среды человека.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу пролонгирования высвобождения альбумина из теней эритроцитов. Способ пролонгирования высвобождения альбумина из теней эритроцитов, включающий использование в качестве контейнеров теней эритроцитов, получаемых путем гипоосмотического шока нативных эритроцитов и инкубации их в растворе биологически активных веществ с последующим «замыканием» теней эритроцитов в изотонической среде, при этом «замыкание» теней эритроцитов осуществляют путем добавления к ним раствора глутарового альдегида с последующим отмыванием теней от находящегося вне теней глутарового альдегида.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням, терапии, медицинской генетике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития рожи.

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и предназначено для прогнозирования течения репаративного процесса лапаротомной раны при остром перитоните.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Раскрыт способ скрининга веществ, обладающих противовоспалительной активностью, включающий смешивание исследуемого вещества с фиксированным количеством человеческого ФНО-альфа и добавление этой смеси к культуре клеток хондрального ряда с последующим измерением экспрессии биологического маркера.
Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для морфологической диагностики степени тяжести преэклампсии. Изобретение представляет собой способ морфологической диагностики степени тяжести преэклампсии путем иммуногистохимического исследования базальной децидуальной оболочки плаценты, отличающийся тем, что в цитотрофобласте определяют индекс экспрессии маркера транскрипции (TFAM) митохондриальной ДНК и при значении индекса экспрессии TFAM от 0,32 до 0,4 у.е.
Изобретение относится к способу дифференциальной диагностики посттравматической и идиопатической эпилепсии, заключающемуся в том, что в сыворотке крови определяют концентрацию нейрегулина-1 и при его значении от 0 до 0,035 нг/мл диагностируют идиопатическую эпилепсию, а при значении показателя выше 0,035 нг/мл - посттравматическую эпилепсию.

Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для лечения хронического эрозивного гастрита, ассоциированного с Helicobacter pylori (HP) и вирусом Эпшейн-Барр (ВЭБ).

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для определения степени риска прогрессирования кариеса и гингивита у детей и подростков.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для определения содержания галогенорганических соединений в волосах человека и касается экологического контроля загрязнения внутренней среды человека.

Изобретение относится к фармацевтическому анализу, а именно к анализу материалов с помощью оптических средств, и может быть использовано при количественном определении производных 5-нитроимидазола (группы нидазолов) в субстанциях.

Изобретение относится к способу определения количества гликозилированного гемоглобина (HbA1c) в пробе, включающему гемолиз эритроцитов в пробе для высвобождения содержащегося в них HbA1c, приведение в контакт высвобожденного гемоглобина с протеолитическим агентом для получения гликозилированных продуктов разложения гемоглобина, определение количества HbA1c за счет количественного определения гликозилированных продуктов разложения гемоглобина.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной биологии и онкологии. Предложена тест-система для прогнозирования развития метастазов у больных раком желудка на основании определения числа копий HV2 мтДНК, содержащая высокоспецифичные праймеры для генов HV2 и В2М с концентрацией 1,8 мкМ каждого в водном растворе.

Изобретение относится к средствам измерения и касается устройств погружных зондов для замера температуры и отбора проб металлургических расплавов, в частности жидкой стали и сталеплавильного шлака.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням, терапии, медицинской генетике, и может быть использовано для прогнозирования риска развития рожи.

Предложенная группа изобретений относится к области биомедицины, в частности молекулярной и клинической онкологии. Предложен способ диагностики светлоклеточного почечно-клеточного рака (скПКР), при котором у обследуемых лиц берут образцы ткани почки, производят выделение и очистку ДНК из взятых образцов и производят методом МС-ПЦР анализ метилирования фрагментов ДНК с применением праймеров.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к моноклональному антителу, которое специфически связывает полипептид KIR3DL2, а также к фармацевтической композиции для лечения рака или воспалительного или аутоиммунного нарушения, его содержащей.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ диагностики нарушений обмена нуклеиновых кислот (НК) у критических больных.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для оценки эффективности нейроретинопротекции первичной открытоугольной глаукомы.

Изобретение относится к фармации, фармакологии и клинической фармакологии. Способ количественного определения дабигатрана в сыворотке крови человека включает приготовление калибровочных и анализируемых образцов путем добавления прометазина в качестве внутреннего стандарта, осаждение белков метанолом, перемешивание, центрифугирование с дальнейшим отбором супернатанта, его разбавление деионизированной водой, перемешивание с последующим хроматографическим разделением компонентов пробы, регистрацию сигнала масс-спектрометрического детектора, полученного в режиме мониторинга множественных реакций при положительной ионизации.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и микробиологии и описывает способ определения наличия газовых сигнальных молекул в метаболитах микробиоты человека. Способ характеризуется тем, что осуществляют выращивание культуры микроорганизмов в течение 24 часов в аэробных, микроаэрофильных или анаэробных условиях при температуре 37°С, после инкубирования забирают пробу, представляющую собой пар над питательным бульоном, и проводят анализ пробы в режиме программирования температуры в течение от 6 до 15 минут, детектор ПИД используют для определения углеродсодержащих газов в течение 15 минут, детектор ЭЗД для определения NO, H2S, Н2О в течение 12 минут, детектор ДТП для определения Н2, О2, N2 в течение 6 минут. Изобретение позволяет определять наличие газовых сигнальных молекул, выделяемых микробиотой человека, и далее использовать их в качестве маркеров в диагностике заболеваний различного профиля. 3 пр.

Наверх