Способ определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов in vitro

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов in vitro. Эритроциты деформируют в искусственном сдвиговом потоке при напряжении сдвига от 10 до 24 Па в течение 20 с. Суспензию деформированных эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. В супернатанте определяют количество аденозинтрифосфорной кислоты. Изобретение обеспечивает возможность определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов в условиях искусственного сдвигового потока. 2 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов в искусственном сдвиговом потоке.

Известно, что аденозинтрифосфорная кислота (АТФ) высвобождается из эритроцитов под влиянием деформации их клеточных мембран (Sprague R.S., Ellsworth М.L., Stephenson А.Н., Kleinhenz М.Е., Lonigro A.J. Deformation-induced ATP release from red blood cells requires CFTR activity. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. - 1998. - Vol. 275, - No. 5. - P. H1726-H1732). Определение количества высвободившейся АТФ очень важно, так как известна ее способность инициировать продукцию оксида азота - потенциального вазодилятора (Лунева О.Г., Сидоренко С.В., Максимов Г.В., Григорчик Р., Орлов С.Н. Эритроциты как регуляторы сосудистого тонуса. Биологические мембраны. 2015. Т. 32. №4. С. 223-234; Kato М., Shiode К, Teragawa Н., Hirao Н., Yamada Т., Yamagata Т., Matsuura Н., Kajiyama G. The role of nitric oxide in bradykinin-induced dilation of coronary resistance vessels in patients with hypercholesterolemia. - Internal Medicine. - 1999. - Vol. 38. - No. 5. - P. 324-329).

В качестве прототипа выбран способ определения высвобождения АТФ из эритроцитов in vitro, включающий деформацию клеток и определение высвободившейся аденозинтрифосфорной кислоты (Sprague R.S., Ellsworth M.L., Stephenson A.H., Kleinhenz M.E., Lonigro A.J. Deformation-induced ATP release from red blood cells requires CFTR activity. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. - 1998. - Vol. 275, - No. 5. - P. H1726-H1732).

Для проведения деформации клеток в способе используется промышленно выпускаемый прибор для фильтрации цельной крови -фильтрометр крови (Carri-Med, Dorking, UK). Под воздействием определенного давления эритроциты деформируются путем прохождения через поликарбонатные фильтры, в результате чего происходит высвобождение из эритроцитов АТФ. После этого во внеклеточной жидкости определяют количество АТФ, высвобождающейся в процессе деформации клеток.

Недостаток известного способа состоит в том, что в данном приборе невозможно создать условия, происходящие с клетками в сдвиговом потоке в живом организме при различных напряжениях сдвига. Кроме того, определение высвобождения АТФ происходит при фиксированном низком гематокрите (10%), что затрудняет процесс определения высвобождения АТФ из эритроцитов со сниженным содержанием АТФ.

Задача предполагаемого изобретения - усовершенствование способа.

Технический результат - определение количества высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов после их деформации в искусственном сдвиговом потоке при различных напряжениях сдвига.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем деформацию клеток и определение высвободившейся аденозинтрифосфорной кислоты, эритроциты деформируют в искусственном сдвиговом потоке в течение 20 с при напряжениях сдвига от 10 до 24 Па, суспензию деформированных клеток центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, в супернатанте определяют количество аденозинтрифосфорной кислоты люциферин-люциферазным методом.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Эритроциты, трижды отмытые в физиологическом растворе, помещают в забуференный физиологический раствор (10 мМ трис HCl, 150 мМ NaCl, рН 7,4), подвергают деформации в искусственном сдвиговом потоке при напряжениях сдвига от 10 до 24 Па в течение 20 с в устройстве для деформации эритроцитов в сдвиговом потоке (Левин Г.Я., Яхно В.Г., Царевский Н.Н., Котяева Н.П. Устройство для деформации эритроцитов в сдвиговом потоке. А.с. СССР №1363065, 1987). Данное устройство состоит их двух коаксиальных цилиндров, между которыми помещается суспензия эритроцитов. При вращении наружного цилиндра создается ламинарный поток с напряжением сдвига от 10 до 24 Па. После прекращения вращения суспензию эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. В супернатанте определяют количество аденозинтрифосфорной кислоты люциферин-люциферазным методом с помощью хемилюминометра.

Пример.

Эритроциты здорового донора, трижды отмытые в физиологическом растворе, помещали в забуференный физиологический раствор (10 мМ трис HCl, 150 мМ NaCl, рН 7,4), подвергали деформации в искусственном сдвиговом потоке при напряжении сдвига 21 Па в течение 20 сек в устройстве для деформации эритроцитов в сдвиговом потоке. После прекращения вращения суспензию эритроцитов центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 мин. В супернатанте определяли количество аденозинтрифосфорной кислоты люциферин-люциферазным методом с помощью хемилюминометра. В этих условиях количество аденозинтрифосфорной кислоты, высвободившейся из эритроцитов здоровых доноров, составило 0,36 мкМ.

Аналогичным образом определяли количество аденозинтрифосфорной кислоты, высвободившейся из эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом. Оно составило 0,15 мкМ., что свидетельствует о резком снижении высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов при неспецифическом язвенном колите. Это может играть роль в нарушении микроциркуляции у данного больного.

Таким образом, предполагаемый способ определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов in vitro обеспечивает возможность определять высвобождение АТФ из эритроцитов после их деформации в искусственном сдвиговом потоке при значениях напряжения сдвига от 10 до 24 Па, близким к показателям, характерным для различных сосудов организма. Кроме того, предлагаемый способ позволяет работать с различными значениями гематокрита - от 2,5 до 60%, что, в частности, позволяет определить высвобождение АТФ из эритроцитов с ее пониженным содержанием.

Способ определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов in vitro, включающий деформацию клеток и определение высвободившейся аденозинтрифосфорной кислоты, отличающийся тем, что эритроциты деформируют в искусственном сдвиговом потоке при напряжении сдвига от 10 до 24 Па в течение 20 с, суспензию деформированных эритроцитов центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин, в супернатанте определяют количество аденозинтрифосфорной кислоты.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для скринингового определения высокой вероятности наличия аллергического характера воспаления при бронхолегочных заболеваниях у детей старше 2 лет с повышенным уровнем в крови интерлейкина-8.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для диагностики и лечения синдрома раздраженного кишечника (СРК). Описаны способы, анализы и системы для диагностики, выбора терапии и лечения СРК на основании уровня антител к винкулину и к CdtB у субъекта.

Изобретение относится к медицине, кардиологии, оценке индивидуального риска развития отдаленных (более 5 лет после чрескожного коронарного вмешательства, ЧКВ) фатальных сердечных и цереброваскулярных событий.

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и предназначено для прогнозирования течения репаративного процесса лапаротомной раны при остром перитоните.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской диагностике, и может быть использовано для диагностики хламидийной урогенитальной инфекции у мужчин на основе оценки уровней цитокинов.

Изобретение относится к области исследования характеристик крови и ее компонентов, в частности их свертываемости. Устройство для исследования пространственного свертывания крови и ее компонентов содержит термостатируемую камеру с узлом термостабилизации, внутри которой размещена емкость с исследуемым образцом и активатором, светодиоды, и регистрирующий модуль с видеокамерой.

Настоящее изобретение относится к способу измерения гемолиза или гематокрита в образце крови, включающему: a) измерение проводимости образца крови по меньшей мере на трех многочастотных входах переменного тока; b) вычисление значения иммиттанса за каждый из по меньшей мере трех многочастотных входов переменного тока; и c) подвергание каждого значения иммиттанса, вычисленного на этапе b), одной из (1) функции, которая отображает значения иммиттанса к уровням лизированной крови, и определение уровня лизированной крови в образце, или (2) функции, которая отображает значения иммиттанса к уровням гематокрита, и определение уровня гематокрита в образце, в то же время компенсируя уровень электролита образца.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ диагностики нарушений обмена нуклеиновых кислот (НК) у критических больных.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ диагностики нарушений обмена нуклеиновых кислот (НК) у критических больных.

Изобретение относится к измерительной технике и может быть использовано для неинвазивного анализа материала. Раскрыты способ и система для анализа материала (100).

Группа изобретений относится к области определения концентрации глюкозы. Способ определения концентрации глюкозы в крови содержит этапы, на которых: вставляют тест-полоску в разъем порта полоски измерительного устройства для соединения по меньшей мере двух электродов; инициируют последовательность измерения после нанесения образца. При этом инициирование содержит этапы, на которых: прикладывают первое напряжение, близкое к заземляющему потенциалу; прикладывают второе напряжение; изменяют второе напряжение на третье напряжение; переключают третье напряжение на четвертое напряжение; изменяют четвертое напряжение на пятое напряжение; изменяют пятое напряжение на шестое напряжение; изменяют шестое напряжение на седьмое напряжение. Причём каждое из напряжений от второго до седьмого составляет приблизительно один милливольт, и при этом второе напряжение составляет напряжение, противоположное по полярности третьему, пятому и седьмому напряжениям и имеющее одинаковую полярность с четвёртым и шестым напряжениями. Далее измеряют не менее чем: первое выходное значение переходного тока измерительной камеры во время первого интервала в непосредственной близости от второго и третьего промежутков времени; второе выходное значение переходного тока во время второго интервала в непосредственной близости от пятого промежутка времени; третье выходное значение переходного тока во время третьего интервала в непосредственной близости от шестого промежутка времени; четвертое выходное значение переходного тока во время четвертого интервала в непосредственной близости от шестого и седьмого промежутков времени; пятое выходное значение переходного тока во время пятого интервала в непосредственной близости от седьмого промежутка времени и шестое выходное значение переходного тока во время шестого интервала в непосредственной близости от седьмого промежутка времени; и вычисляют посредством микроконтроллера концентрацию глюкозы в образце из упомянутых измеренных первого, второго, третьего, четвертого, пятого и шестого выходных значений переходных токов. Также раскрывается вариант способа определения концентрации глюкозы в крови с помощью системы измерения глюкозы в крови. Группа изобретений обеспечивает получение точных и достоверных значений концентрации глюкозы в крови, которые не чувствительны к гематокриту. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 10 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования состояния микрофлоры кишечника у новорожденных детей. Способ прогнозирования состояния микробиоты кишечника новорожденных включает определение синдрома избыточного бактериального роста у беременных методом водородного дыхательного теста с лактулозой, и при обнаружении синдрома избыточного бактериального роста у матери прогнозируется нарушение формирования микробиоценоза кишечника новорожденного. 1 пр., 2 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки состояния микробиоты кишечника. Для этого осуществляют взятие пробы крови. Проводят центрифугирование крови при 1500 об/мин в течение 15 минут. После чего на пластинку Сорбфил ПТСХ-АХ-В-УФ отдельно наносят 2 пробы: 0,1 мкл плазмы крови и 1,0 мкл стандартной смеси деконъюгированных желчных кислот. Затем пластинку помещают в камеру с концентрированной уксусной кислотой. По окончании элюирования пластинку вынимают и вентилируют в течение 20 мин при 100°C. Обрабатывают водным аэрозолем и выдерживают до появления белых пятен на прозрачном фоне пластинки. По длине пробега пятна пробы в сравнении с длиной пробега пятна стандартной смеси идентифицируют деконъюгированные желчные кислоты в пробе. Контуры пятен обрисовывают и рассчитывают их площади, по величинам которых устанавливают количественное содержание деконъюгированных желчных кислот. При их величине, равной и менее 15,8±1,56 нг/л, состояние микробиоты кишечника оценивают сбалансированным. Способ позволяет установить избыточный рост патогенной микрофлоры и оценить состояние микробиоценоза кишечника. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и предназначено для прогнозирования течения репаративного процесса лапаротомной раны при механической желтухе неопухолевого происхождения. У больного сразу же после операции и через двое суток после нее по показателям периферической крови определяют выраженность нарушений функционального состояния печени по уровню общего билирубина, общей и эффективной концентрации альбумина и определяют активность оксидативного стресса по уровню малонового диальдегида. Рассчитывают индекс прогнозирования течения процесса заживления лапаротомной раны (ИППЗТ) по формуле ,где ОКАн – общая концентрация альбумина в крови в норме, ОКА1 – общая концентрация альбумина в крови после операции, ОКА2 – общая концентрация альбумина в крови через двое суток после операции, ЭКАн – эффективная концентрация альбумина в крови в норме, ЭКА1 – эффективная концентрация альбумина в крови после операции, ЭКА2 – эффективная концентрация альбумина в крови через двое суток после операции, ОБн – уровень общего билирубина в крови в норме, ОБ1 – уровень общего билирубина в крови после операции, ОБ2 – уровень общего билирубина в крови через двое суток после операции, МДАн – уровень малонового диальдегида в крови в норме, МДА1 – уровень малонового диальдегида в крови после операции, МДА2 – уровень малонового диальдегида в крови через двое суток после операции. Значение ИППЗТ более 17,1 свидетельствует о низкой степени вероятности нарушения процесса заживления тканей послеоперационной раны. Значение ИППЗТ от 13,1 до 17,0 констатирует среднюю степень вероятности нарушения процесса заживления тканей послеоперационной раны. Значение ИППЗТ менее 13,0 констатирует высокую степень вероятности нарушения процесса заживления тканей послеоперационной раны. Использование изобретения позволяет повысить точность прогнозирования течения процесса заживления лапаротомной раны при механической желтухе неопухолевого происхождения. 4 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для подбора оптимального криопротектора по содержанию гликогена в лейкоцитах консервированной крови. Для этого у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба (КП) крови не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП). Пробирки герметизируют пробками, содержимое перемешивают на шейкере при температуре плюс 37°C в течение 4 ч, капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, быстро высушивают на воздухе при комнатной температуре, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси, окрашивают на гликоген по методу Шабадаша, лейкоциты микроскопируют в проходящем свете. Проводят сравнительное исследование среднего цитохимического коэффициента (СЦК) сегментоядерных (с/я) нейтрофилов и лимфоцитов ОП и КП; при равности показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодный к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. Изобретение обеспечивает возможность индивидуального подбора оптимального криопротектора на доклиническом этапе криогемотрансфузионной терапии. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармакологии и токсикологии, может быть использовано для количественного определения 4-амино-1-(3-нитро-2-оксо-1-фенил-1,2-дигидро-1,6-нафтиридин-5-ил)пиридиний хлорида в биологических средах. Способ включает экстракцию определяемого вещества ацетонитрилом при кислом значении рН среды с добавлением натрия хлорида с последующим определением его методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с градиентным режимом элюирования с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,5% раствора калия фосфорнокислого однозамещенного, подкисленного до рН 4,0 ортофосфорной кислотой, и метанола при градиенте концентрации последнего от 5 до 75%. 2 пр., 5 ил., 2 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, клинической лабораторной диагностике и гематологии. Способ определения резистентности к антиагрегантным препаратам у пациентов с ишемической болезнью сердца, принимающих лекарственные средства группы антиагрегантов не менее 6 месяцев, заключается во взятии крови в пробирку с 3,8% цитратом натрия в соотношении 9:1, разделении центрифугированием на плазму и эритроциты с получением богатой и бедной тромбоцитами плазмы, определении индивидуально пациенту значений светопропускания с графической регистрацией в течение 5 мин с постоянным перемешиванием и температурой 37°С, добавлении к суспензии тромбоцитов в соотношении 10:1 индуктора агрегации тромбоцитов коллагена однократно на 10 секунде регистрации агрегации тромбоцитов на лазерном агрегометре в концентрации 2 мкмоль/л, при этом дополнительно вносят к богатой тромбоцитами плазме индуктор коллаген в соотношении 2:1 по 2 мкмоль/л на 1, 2, 3 и 4 минутах исследования и при получении значений агрегации тромбоцитов в диапазоне от 45 до 100% определяют резистентность к антиагрегантным препаратам. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов in vitro. Эритроциты деформируют в искусственном сдвиговом потоке при напряжении сдвига от 10 до 24 Па в течение 20 с. Суспензию деформированных эритроцитов центрифугируют при 3000 обмин в течение 5 мин. В супернатанте определяют количество аденозинтрифосфорной кислоты. Изобретение обеспечивает возможность определения высвобождения аденозинтрифосфорной кислоты из эритроцитов в условиях искусственного сдвигового потока. 2 пр.

Наверх