Фармацевтические композиции, содержащие доноры нитроксила

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и касается лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Для этого вводят фармацевтические композиции, содержащие N-замещенные гидроксиламиновые производные, являющиеся донорами нитроксила. Это обеспечивает эффективное лечение сердечно-сосудистых заболеваний за счет оптимального токсикологического профиля и достаточной стабильности композиций, что позволяет использовать их как для внутривенного, так и для перорального введения. 13 н. и 41 з.п. ф-лы, 102 пр., 4 ил., 23 табл.

 

1. УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Показано, что нитроксил (HNO) обладает положительными сердечно-сосудистыми эффектами в in vitro и in vivo моделях сердечной недостаточности. Однако при физиологическом pH, HNO димеризуется до азотноватистой кислоты, которая впоследствии дегидратируется до оксида азота (I); из-за данной метастабильности, HNO для терапевтического применения требуется генерировать in situ из донорных соединений. Ряд соединений, способных служить донором нитроксила, описан и предложен для применения в лечении заболеваний, о которых известно или о которых предполагают, что они являются чувствительными к нитроксилу. Смотри, например, патенты США № 6936639; 7696373; 8030356; 8268890; 8227639 и 8318705 и патентные заявки США, опубликованные через 18 месяцев с даты приоритета, № 2009/0281067; 2009/0298795; 2011/0136827 и 2011/0144067. Хотя все из данных соединений способны служить донором нитроксила, они отличаются по различным физико-химическим свойствам, и сохраняется потребность в обнаружении доноров нитроксила, которые обладают физико-химическими свойствами, наиболее подходящими для лечения конкретных клинических заболеваний посредством конкретных путей введения.

Патент США № 8030056 описывает получение производных соединений типа кислота Пилоти, которые способны служить донором нитроксила при физиологических условиях и являются пригодными в лечении сердечной недостаточности и травмы ишемии/реперфузии. Донор нитроксила CXL-1020 (N-гидрокси-2-метансульфонилбензол-1-сульфамид) оценивают в исследованиях безопасности I фазы на здоровых добровольцах и в контролируемом плацебо, двойном слепом исследовании с увеличением дозы IIa фазы, проводимом в нескольких стационарных медицинских учреждениях. Sabbah et al, "Nitroxyl (HNO) a novel approach for the acute treatment of heart failure", Circ Heart Fail., опубликованная он-лайн 9 октября 2013 (Online ISSN: 1941-3297, Print ISSN: 1941-3289). Исследования показали, что у пациентов с систолической сердечной недостаточностью, CXL-1020, при введении внутривенно в виде водного раствора при pH=4, снижает давление наполнения и правого и левого желудочка сердца и системное сосудистое сопротивление, при этом увеличивая индекс сердечного и систолического объема кровотока. Следовательно, данные исследования показали, что CXL-1020 улучшает функцию миокарда у пациентов, являющихся людьми, страдающих от сердечной недостаточности. Однако было обнаружено, что при пороговых дозах CXL-1020, требуемых для получения гемодинамических эффектов, соединение вызывает побочные эффекты, включая неприемлемые уровни воспалительного раздражения в области и дистально к месту внутривенного введения, и авторы сообщают, что из-за данных побочных эффектов, данное соединение может не быть конкурентоспособным кандидатом в качестве терапевтического средства для людей.

Соответственно, существует необходимость в разработке новых соединений, являющихся донорами нитроксила (называемых донорами нитроксила), и композиций, которые являются пригодными для лечения сердечной недостаточности и которые обладают приемлемых токсикологическим профилем. Разработка данных соединений требует понимания фармакокинетического профиля, связанного с генерированием нитроксила, и факторами, влияющими на токсикологический профиль. Неспособность понять данные факторы затрудняет разработку доноров нитроксила для клинического применения.

Более того, оказалось, что формулирование доноров нитроксила является существенной проблемой. Многие из современных доноров нитроксила является нерастворимыми в водных растворах и/или являются недостаточно стабильными. Проблемы, связанные с растворимостью и стабильностью, часто препятствуют применению данных соединений в фармацевтических композициях для парентерального и/или перорального введения. Соответственно, существует необходимость в разработке композиций, содержащих доноры нитроксила при достаточной концентрации для парентерального и/или перорального введения, которые являются достаточно стабильными и обладают подходящими фармакологическими и токсикологическими профилями.

Цитирование любой ссылки в 1 разделе данной заявки не следует рассматривать как признание того, что данная ссылка является предшествующим уровнем техники для настоящей заявки.

2. СУЩНОСТЬ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к обнаружению композиций, являющихся донорами нитроксила, которые являются крайне эффективными в лечении сердечно-сосудистых заболеваний (например, сердечной недостаточности), обладают подходящим токсикологическим профилем и являются достаточно стабильными для внутривенного или перорального введения.

Было обнаружено, что токсикологический профиль доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, которые обладают достаточно длительными периодами полувыведения в физиологических условиях, является заметно лучшим, чем токсикологический профиль доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа с более короткими периодами полувыведения (например, CXL-1020). В частности, было обнаружено, что доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа с более короткими периодами полувыведения (т.е. 10 минут или меньше при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме (например, человеческой плазме) согласно способу, описанному в примере 2 (в разделе 5.2), обладают нежелательной токсичностью при введении парентерально (например, внутривенно). Ясно, что термин "донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа" включает и соединения со свободной сульфамидной гидроксильной группой (например, соединения, показанные в таблицах 1 и 2 раздела 4.2) и соединения, в которых N-гидрокси группа сульфамида этерифицирована, как показано ниже:

,

где представляет собой ароматическую, гетероароматическую или полициклическую часть соединения (смотри раздел 4.2 для определений R).

Согласно настоящему изобретению, доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, которые имеют периоды полувыведения, большие чем 10 минут при измерении в PBS или плазме человека, показывают значительное улучшение токсикологического профиля по сравнению с донорами нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, такими как CXL-1020, которые имеют периоды полувыведения, меньшие чем 10 минут, при этом сохраняя высокую степень эффективности в лечении сердечно-сосудистых заболеваний (например, сердечной недостаточности).

В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции (т.е. в композиции, являющейся донором нитроксила) настоящего изобретения, имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 в условиях, приведенных в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 12 минут до приблизительно 150 минут при измерении в насыщенном кислородом PBS растворе при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 15 минут до приблизительно 70 минут при измерении в насыщенном кислородом PBS растворе при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2. Конкретные примеры данных соединений настоящего изобретения перечислены в таблицах 1 и 2 (смотри раздел 4.2).

В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия), в условиях, указанных в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от больше чем 10 минут до приблизительно 85 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2. В некоторых вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 12 минут до приблизительно 85 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 75 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2. Конкретные примеры данных соединений настоящего изобретения перечислены в таблицах 1 и 2.

В конкретном варианте осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, представляет собой соединение формулы (1):

В другом варианте осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, представляет собой соединение формулы (2):

Кроме того, было обнаружено, что композиция, содержащая донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, сформулированная при pH приблизительно 5 или более, имеет существенно улучшенный токсикологический профиль по сравнению с композициями, содержащими донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, сформулированный при более кислых значениях pH, такие как CXL-1020 композиции, оцениваемые в клинических испытаниях I фазы и IIa фазы. Таким образом, в различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа можно формулировать для парентеральной инъекции при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6 (например, pH приблизительно 5, приблизительно 5,5 или приблизительно 6). Формулирование в данном диапазоне pH уменьшает потенциальные нежелательные побочные эффекты (например, пониженное раздражение вен) по сравнению с более кислыми композициями. Неожиданностью было то, что формулирование донора нитроксила N-гидроксисульфамидного типа при pH в диапазоне pH от приблизительно 5 до приблизительно 6 можно осуществлять без отрицательного воздействия на стабильность доноров нитроксила.

Кроме того, было обнаружено, что конкретные вспомогательные вещества можно применять для стабилизации и/или растворения доноров нитроксила, пригодных в композициях настоящего изобретения. В различных вариантах осуществления, по меньшей мере, одно данное фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина. В одном данном варианте осуществления, вспомогательное вещество представляет собой β-циклодекстрин. Один предпочтительный β-циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

В вариантах осуществления, где циклодекстрин (например, CAPTISOL^®) служит в качестве вспомогательного вещества в описанных фармацевтических композициях, количество циклодекстрина в композиции будет зависеть от растворимости и/или стабильности донора нитроксила. Например, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрина, присутствующего в композиции, может составлять от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1. В конкретных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 1:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

Соединения и/или композиции настоящего изобретения можно применять для лечения ряда заболеваний, которые являются чувствительными к нитроксильной терапии. Например, соединения и/или композиции настоящего изобретения можно применять для лечения или предотвращения возникновения сердечно-сосудистых заболеваний. В определенных вариантах осуществления композицию, являющуюся донором нитроксила, настоящего изобретения можно применять для лечения сердечно-сосудистого заболевания, ишемически-реперфузионного повреждения, легочной гипертензии или другого заболевания, чувствительного к нитроксильной терапии. В конкретных вариантах осуществления, композицию, являющуюся донором нитроксила, настоящего изобретения, можно применять для лечения сердечной недостаточности. В конкретном варианте осуществления, соединение и/или композицию настоящего изобретения можно применять для лечения декомпенсированной сердечной недостаточности (например, острой декомпенсированной сердечной недостаточности). В определенных вариантах осуществления, соединения и/или композиции настоящего изобретения, можно применять для лечения систолической сердечной недостаточности. В конкретных вариантах осуществления, соединения и/или композиции настоящего изобретения можно применять для лечения диастолической сердечной недостаточности.

В одном аспекте, соединение и/или композицию настоящего изобретения можно вводить парентеральным (например, подкожным, внутримышечным, внутривенным или внутрикожным) введением. При введении парентерально (например, внутривенно) человеческому субъекту, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный, например, в фармацевтической композиции настоящего изобретения, можно дозировать при скорости от приблизительно 5 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, можно дозировать человеческому субъекту в количестве от приблизительно 10 мкг/кг/мин до приблизительно 70 мкг/кг/мин. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, можно дозировать человеческому субъекту в количестве от приблизительно 15 мкг/кг/мин до приблизительно 50 мкг/кг/мин. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, можно дозировать человеческому субъекту в количестве от приблизительно 20 мкг/кг/мин до приблизительно 30 мкг/кг/мин. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, можно дозировать человеческому субъекту в количестве от приблизительно 10 мкг/кг/мин до приблизительно 20 мкг/кг/мин.

В другом варианте осуществления, соединения и/или композиции настоящего изобретения, можно формулировать для перорального введения. Соединения для перорального введения можно формулировать в виде жидких или твердых лекарственных форм. В конкретных вариантах осуществления, когда донор нитроксила формулируют в виде жидкой пероральной лекарственной формы, полиэтиленгликоль 300 (PEG300) может служить в качестве примерного вспомогательного вещества.

3. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1 показывает гемодинамический профиль CXL-1020 и пяти соединений, пригодных в фармацевтических композициях настоящего изобретения (соединения формул (1), (2), (83), (84) и (85)), применяя модель стимуляции тахикардии на собаках с сердечной недостаточностью (смотри пример 3). Каждое соединение вводили внутривенно в количестве 100 мкг/кг/мин. Гемодинамические параметры получали через 180 минут после введения соответствующего соединения.

Фигура 2 показывает оценку токсикологического профиля CXL-1020 и соединений, пригодных в фармацевтических композициях настоящего изобретения (соединения формул (1), (2), (83), (84), (85) и (86)) после 24 часового вливания при различных дозах, применяя модель для определения токсичности в периферических венах на собаках (смотри пример 5). Ключевые измеряемые маркеры воспаления включают белые клетки крови (WBC), фибриноген и C-реактивный белок (CRP).

Фигура 3 показывает степени воспаления, наблюдаемые, применяя 72 часовую модель с имплантированным центральным катетером на собаках, применяя различные дозы CXL-1020 и четырех соединений, пригодных в фармацевтических композициях настоящего изобретения (соединения формул (1), (2), (83) и (84)) (смотри пример 5). Баллы, показанные в таблице, основаны на данных микроскопических исследований патологии эдемы, кровоизлияния, васкулярного воспаления и периваскулярного воспаления, наблюдаемых около и вокруг кончика катетера и проксимально к кончику катетера.

Фигура 4 показывает оценку токсикологического профиля CXL-1020 и двух соединений настоящего изобретения (соединения формул (2) и (86)), сформулированных при pH 4 или 6, после 24 часового вливания в количестве 3 мкг/кг/мин (смотри примеры 4 и 6).

4. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящее изобретение включает следующее:

(1.) Способ лечения сердечной недостаточности, включающий введение человеческому пациенту композиции донора нитроксила, причем указанная композиция содержит донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 способом, описанным в примере 2, и циклодекстрин.

(2.) Способ по (1.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 12 минут до приблизительно 85 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(3.) Способ по (1.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 75 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(4.) Способ по (1.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения меньше чем 95 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(5.) Способ по любому из (1.)-(4.) выше, где циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащего шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

(6.) Способ по любому из (1.)-(4.) выше, где циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

(7.) Способ по любому из (1.)-(6.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

(8.) Способ по любому из (1.)-(6.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

(9.) Способ по любому из (1.)-(6.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

(10.) Способ по любому из (1.)-(9.) выше, где композиция является пригодной для парентерального введения.

(11.) Способ по (10.) выше, где композиция является пригодной для внутривенного введения.

(12.) Способ по (10.) выше или по (11.) выше, где композицию формулируют при pH от приблизительно 4 до приблизительно 6.

(13.) Способ по (10.) выше или по (11.) выше, где композицию формулируют при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6.

(14.) Способ по (10.) выше или по (11.) выше, где композицию формулируют при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6.

(15.) Способ по любому из (1.)-(14.) выше, где сердечная недостаточность представляет собой острую декомпенсированную сердечную недостаточность.

(16.) Способ по любому из (1.)-(15.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (1):

(17.) Способ по любому из (1.)-(15.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (2):

(18.) Способ лечения сердечной недостаточности, включающий введение человеческому пациенту композиции донора нитроксила, содержащей донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 способом, описанным в примере 2, где указанную композицию вводят парентерально при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6,5.

(19.) Способ по (18.) выше, где композиция вводят внутривенно.

(20.) Способ по (18.) выше или по (19.) выше, где композицию вводят при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6.

(21.) Способ по (18.) выше или по (19.) выше, где композицию вводят при pH приблизительно 6.

(22.) Способ по любому из (18.)-(21.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 12 минут до приблизительно 85 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(23.) Способ по любому из (18.)-(21.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 75 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(24.) Способ по любому из (18.)-(21.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения меньше чем 95 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(25.) Способ по любому из (18.)-(24.) выше, где композиция дополнительно содержит стабилизирующий агент.

(26.) Способ по (25.) выше, где стабилизирующий агент представляет собой циклодекстрин.

(27.) Способ по (26.) выше, где циклодекстрин представляет собой β-циклодекстрин.

(28.) Способ по любому из (18.)-(27.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (1):

(29.) Способ по любому из (18.)-(27.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (2):

(30.) Фармацевтическая композиция, содержащая донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 способом, описанным в примере 2, и водный буфер, где композиция имеет pH от приблизительно 5 до приблизительно 6.

(31.) Фармацевтическая композиция по (30.) выше, где водный буфер придает pH композиции от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,2.

(32.) Фармацевтическая композиция по (30.) выше, где водный буфер придает pH композиции приблизительно 6.

(33.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(32.) выше, где буфер представляет собой фосфатный или ацетатный буфер.

(34.) Фармацевтическая композиция по (33.) выше, где буфер представляет собой калийфосфатный буфер.

(35.) Фармацевтическая композиция по (33.) выше, где буфер представляет собой калийацетатный буфер.

(36.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(35.) выше, дополнительно содержащая стабилизирующий агент.

(37.) Фармацевтическая композиция по (36.) выше, где стабилизирующий агент представляет собой циклодекстрин.

(38.) Фармацевтическая композиция по (37.) выше, где циклодекстрин представляет собой сульфо-77-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

(39.) Фармацевтическая композиция по (37.) выше или по (38.) выше, где циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

(40.) Фармацевтическая композиция по любому из (37.)-(39.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

(41.) Фармацевтическая композиция по любому из (37.)-(39.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

(42.) Фармацевтическая композиция по любому из (37.)-(39.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

(43.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(42.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 12 минут до приблизительно 85 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(44.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(42.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 75 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(45.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(42.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения меньше чем 95 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(46.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(42.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (1)

(47.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(42.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (2):

(48.) Фармацевтическая композиция, содержащая (i) донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 способом, описанным в примере 2, и (ii) циклодекстрин.

(49.) Фармацевтическая композиция по (48.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 12 минут до приблизительно 85 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(50.) Фармацевтическая композиция по (48.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 75 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(51.) Фармацевтическая композиция по (48.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа имеет период полувыведения меньше чем 95 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 в условиях, указанных в примере 2.

(52.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(51.) выше, где циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

(53.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(51.) выше, где циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

(54.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(53.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

(55.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(53.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

(56.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(53.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

(57.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(53.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (1):

(58.) Фармацевтическая композиция по любому из (48.)-(53.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (2):

(59.) Смесь, содержащая донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который имеет период полувыведения больше чем 10 минут при измерении в плазме человека при pH 7,4 способом, описанным в примере 2, и циклодекстрин, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

(60.) Смесь по (59.) выше, которую получают лиофилизацией.

(61.) Смесь по (59.) выше или по (60.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

(62.) Смесь по (61.) выше, где молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

(63.) Смесь по любому из (59.)-(62.) выше, дополнительно содержащая буферный агент.

(64.) Смесь по (63.) выше, где буферный агент представляет собой ацетат калия.

(65.) Смесь по любому из (59.)-(64.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (1):

(66.) Смесь по любому из (59.)-(64.) выше, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа представляет собой соединение формулы (2):

(67.) Применение фармацевтической композиции по любому из (30.)-(58.) выше для получения лекарственного препарата, пригодного для лечения сердечно-сосудистого заболевания.

(68.) Применение фармацевтической композиции по любому из (30.)-(58.) выше для получения лекарственного препарата, пригодного для лечения сердечной недостаточности.

(69.) Применение фармацевтической композиции по любому из (30.)-(58.) выше для получения лекарственного препарата, пригодного для лечения острой декомпенсированной сердечной недостаточности.

(70.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(58.) выше для применения в лечении сердечно-сосудистого заболевания.

(71.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(58.) выше для применения в лечении сердечной недостаточности.

(72.) Фармацевтическая композиция по любому из (30.)-(58.) выше для применения в лечении острой декомпенсированной сердечной недостаточности.

4.1 Определения

Если явно не указано иначе, следующие термины, как применяют в настоящем изобретении, имеют значения, указанные ниже.

"Фармацевтически приемлемая соль" относится к соли любого терапевтического агента, описанного в настоящем изобретении, где соль может содержать любой из ряда органических и неорганических противоионов, известных в данной области техники, и где соль является фармацевтически приемлемой. Когда терапевтический агент содержит кислотную функцию, различные примерные варианты осуществления противоионов представляют собой натрий, калий, кальций, магний, аммоний, тетраалкиламмоний и подобные. Когда терапевтический агент содержит основную функцию, фармацевтически приемлемая соль может содержать противоион, в качестве примера, органическую или неорганическую кислоту, такую как гидрохлорид, гидробромид, тартрат, мезилат, ацетат, малеат, оксалат и подобные. Иллюстративные соли включают, но не ограничиваются, сульфатную, цитратную, ацетатную, хлоридную, бромидную, йодидную, нитратную, бисульфатную, фосфатную, кислую фосфатную, лактатную, салицилатную, кислую цитратную, тартратную, олеатную, таннатную, пентотенатную, битартратную, аскорбатную, сукцинатную, малеатную, безилатную, фумаратную, глюконатную, глюкуронатную, сахаратную, формиатную, бензоатную, глутаматную, метансульфонатную, этансульфонатную, бензолсульфонат и п-толуолсульфонатную соли. Соответственно, соль можно получить из соединения любой одной из формул, описанных в настоящем изобретении, содержащего кислотную функциональную группу, такую как карбоксильная функциональная группа, и фармацевтически приемлемого неорганического или органического основания. Подходящие основания включают, но не ограничиваются, гидроксиды щелочных металлов, таких как натрий, калий и литий; гидроксиды щелочноземельных металлов, таких как кальция и магний; гидроксиды других металлов, таких как алюминий и цинк; аммиак, и органические амины, такие как незамещенные или гидрокси-замещенные моно-, ди- или триалкиламины; дициклогексиламин; трибутиламин; пиридин; N-метил-N-этиламин; диэтиламин; триэтиламин; моно-, бис- или трис-(2-гидрокси-низший алкиламины), такие как моно-, бис- или трис-(2-гидроксиэтил)амин, 2-гидрокси-трет-бутиламин или трис-(гидроксиметил)метиламин, N,N-ди-низший-алкил-N-(гидрокси-низший-алкил)амины, такие как N,N-диметил-N-(2-гидроксиэтил)амин или три(2-гидроксиэтил)амин; N-метил-D-глюкамин; и аминокислоты, такие как аргинин, лизин и подобные. Соль можно также получить из соединения любой одной из формул, описанных в настоящем изобретении, содержащих основную функциональную группу, такую как амино функциональную группу, и фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислоты. Подходящие кислоты включают гидросульфат, лимонную кислоту, уксусную кислоту, хлористоводородную кислоту (НСl), бромистоводородную кислоту (HBr), йодистоводородную кислоту (HI), азотную кислоту, фосфорную кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, винную кислоту, аскорбиновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, бензиловую кислоту, фумаровую кислоту, глюконовую кислоту, глюкуроновую кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, глутаминовую кислоту, метансульфокислоту, этансульфокислоту, бензолсульфокислоту и п-толуолсульфокислоту.

"Фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество" относится к любому веществу, не являющемуся терапевтическим агентом, применяемому в качестве носителя, разбавителя, вспомогательного вещества, связующего и/или среды для доставки терапевтического агента пациенту, или добавляемому к фармацевтической композиции для улучшения ее свойств обработки или стабильности при хранении или для обеспечения или облегчения формулирования соединения или фармацевтической композиции в виде единичной лекарственной формы для введения. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества являются известными в фармацевтической области техники и описаны, например, в Gennaro, Ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20 Ed. (Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2000) и Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., (например, 1, 2 и 3 издание, 1986, 1994 и 2000, соответственно). Как известно специалисту в данной области техники, фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества могут обеспечивать ряд функций, и их можно описать в качестве смачивающих агентов, буферных агентов, суспендирующих агентов, смазывающих агентов, эмульгаторов, разрыхлителей, абсорбентов, консервантов, поверхностно-активных веществ, красителей, ароматизаторов и подсластителей. Примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают без ограничения: (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза, ацетат целлюлозы, гидроксипропилметилцеллюлоза и гидроксипропилцеллюлоза; (4) порошкообразный трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) вспомогательные вещества, такие как масло какао и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) рН буферные растворы; (21) сложные полиэфиры, поликарбонаты и/или полиангидриды; и (22) другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических композициях.

"Единичная лекарственная форма" относится к физически дискретной единице, подходящей в качестве единичной дозы для человека или животного. Каждая единичная лекарственная форма может содержать предварительно определенное количество терапевтического агента, рассчитанное для обеспечения требуемого эффекта.

Если явно не указано иначе, "пациент" относится к животному, такому как млекопитающее, включая, но не ограничиваясь, человека. Следовательно, способы, описанные в настоящем изобретении, могут быть пригодными в терапии людей и ветеринарных применениях. В конкретных вариантах осуществления, пациент представляет собой млекопитающее. В определенных вариантах осуществления, пациент представляет собой человека.

"Эффективное количество" относится к такому количеству терапевтического агента или его фармацевтически приемлемой соли, которое в комбинации с его параметрами эффективности и потенциалом токсичности, а также на основании знаний практикующего специалиста, должно быть эффективным в указанной терапевтической форме. Как ясно в данной области техники, эффективное количество можно вводить в виде одной или более доз.

"Лечение" и подобные представляют собой подход к достижению полезного или требуемого результата, включая клинические результаты. Для целей настоящего описания, полезные или требуемые результаты включают, но не ограничиваются, ингибирование и/или подавление возникновения и/или развития заболевания или снижение тяжести данного заболевания, такого как снижение количества и/или тяжести симптомов, связанных с данным заболеванием, улучшение качества жизни субъектов, страдающих от данного заболевания, снижение дозы других лекарственных средств, требуемых для лечения данного заболевания, усиление эффекта других лекарственных средств, которые пациент принимает для лечения данного заболевания, и/или увеличение продолжительности жизни пациентов, страдающих от данного заболевания.

"Предотвращать", "предотвращение" и подобные относятся к снижению вероятности развития заболевания у пациента, которые не имеет, но подвергается риску развития данного заболевания. Пациент, "подвергающийся риску", может иметь или не иметь детектируемое заболевание, и может проявлять или не проявлять детектируемое заболевание перед способами лечения, описанными в настоящем изобретении. "Подвергающийся риску" обозначает то, что пациент имеет один или более так называемых факторов риска, которые представляют собой измеримые параметры, которые коррелируют с развитием заболевания и которые являются известными в данной области техники. Пациент, имеющий один или более данных факторов риска, имеет большую вероятность развития заболевания, чем пациент без данного фактора риска (факторов риска).

"Положительный инотроп" относится к агенту, который вызывает усиление сократительной функции миокарда. Примерные положительные инотропы представляют собой агонист бета-адренергических рецепторов, ингибитор активности фосфодиэстеразы и кальций-сенсибилизирующие агенты. Агонисты бета-адренергических рецепторов включают, среди прочих, дофамин, добутамин, тербуталин и изопротеренол. Также предполагаются аналоги и производные данных соединений. Например, патент США № 4663351 описывает добутаминовое пролекарство, которое можно вводить перорально.

Заболевание, которое является "чувствительным к нитроксильной терапии" включает любое заболевание, при котором введение соединения, которое обеспечивает эффективное количество нитроксила в физиологических условиях, лечит и/или предотвращает заболевание, как данные термины определены в настоящем изобретении. Заболевание, чьи симптомы подавляются или ослабляются после введения донора нитроксила, представляет собой заболевание, чувствительное к нитроксильной терапии.

"Легочная гипертензия" или "PH" относится к заболеванию, при котором повышено легочное артериальное давление. Современное гемодинамическое определение PH представляет собой среднее артериальное легочное давление (MPAP) в состоянии покоя, большее чем или равное 25 мм рт. ст. Badesch et al., J. Amer. Coll. Cardiol. 54(Suppl.):S55-S66 (2009).

"Ν/α" обозначает не оценивали.

"(C₁-C₆)алкил" относится к насыщенным линейным и разветвленным углеводородным структурам, содержащим 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода. Когда называют алкильный остаток, содержащий указанное количество атомов углерода, предполагается, что все геометрические изомеры, содержащие данное количество атомов углерода, являются включенными; таким образом, например, "пропил" включает н-пропил и изопропил, и "бутил" включает н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил. Примеры (C₁-C₆)алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, н-гексил и подобные.

"(C₁-C₄)алкил" относится к насыщенным линейным и разветвленным углеводородным структурам, содержащим 1, 2, 3 или 4 атомов углерода. Примеры (C₁-C₄)алкильных групп включают метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил и трет-бутил.

"(C₃-C₅)алкил" относится к насыщенным линейным и разветвленным углеводородным структурам, содержащим 3, 4, или 5 атомов углерода. Когда называют алкильный остаток, содержащий указанное количество атомов углерода, предполагается, что все геометрические изомеры, содержащие данное количество атомов углерода, являются включенными; таким образом, например, "пропил" включает н-пропил и изопропил, и "бутил" включает н-бутил, втор-бутил, изобутил и трет-бутил. Примеры (C₃-C₅)алкильных групп включают н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил и подобные.

"(C₂-C₄)алкенил" относится к нормальному или разветвленному ненасыщенному углеводородному радикалу, содержащему 2, 3, или 4 атомов углерода и двойную связь в любом положении, например, этенил, 1-пропенил, 2-пропенил (аллил), 1-бутенил, 2-бутенил, 3-бутенил, 1-метилэтенил, 1-метил-1-пропенил, 2-метил-2-пропенил, 2-метил-1-пропенил, 1-метил-2-пропенил и подобные.

"(C₂-C₃)алкенил" относится к нормальному нециклическому углеводороду, содержащему 2 или 3 атомов углерода и содержащему, по меньшей мере, одну углерод-углерод двойную связь. Примеры (C₂-C₃)алкенила включают -винил, -аллил и 1-проп-1-енил.

"(C₅-C₇)гетероциклоалкил" относится к 5-, 6- или 7-членному, насыщенному или ненасыщенному, мостиковому, моно- или бициклическому гетероциклу, содержащему 1, 2, 3, или 4 кольцевых гетероатома, причем каждый независимо выбран из азота, кислорода и серы. Примеры (C₅-C₇)гетероциклоалкильных групп включают пиразолил, пирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, тетрагидрооксазинил, тетрагидрофуран, тиолан, дитиолан, пирролин, пирролидин, пиразолин, пиразолидин, имидазолин, имидазолидин, тетразол, пиперидин, пиридазин, пиримидин, пиразин, тетрагидрофуранон, γ-бутиролактон, α-пиран, γ-пиран, диоксолан, тетрагидропиран, диоксан, дигидротиофен, пиперазин, триазин, тетразин, морфолин, тиоморфолин, диазепан, оксазин, тетрагидро-оксазинил, изотиазол, пиразолидин и подобные.

"(5- или 6-членный)гетероарил" относится к моноциклическому ароматическому гетероциклическому кольцу из 5 или 6 членов, т.е. моноциклическому ароматическому кольцу, содержащему, по меньшей мере, один кольцевой гетероатом, например, 1, 2, 3 или 4 кольцевых гетероатома, причем каждый независимо выбран из азота, кислорода и серы. Примеры -(5- или 6-членных)гетероарилов включают пиридил, пирролил, фурил, имидазолил, оксазолил, имидазолил, тиазолил, изоксазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,2,3-триазолил, пиразолил, изотиазолил, пиридазинил, пиримидил, пиразинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,5-триазинил и тиофенил.

"Галоген" относится к -F, -Cl, -Br или -I.

"Сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина" относится к β-циклодекстрину, содержащему, по меньшей мере, одну -OH группу, которая модифицирована замещением ее атома водорода -(CH₂)₄-S(O)₂-OH или -(CH₂)₄-S(O)₂-O^- Z⁺, давая -O-(CH₂)₄-S(O)₂-OH или -O-(CH₂)₄-S(О)₂-O^- Z⁺ группу, соответственно, где Z⁺ представляет собой катион, такой как натрий, калий, аммоний, тетраметиламмоний и подобные. В одном варианте осуществления, каждый Z представляет собой натрий.

4.2 Доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа

Было обнаружено, что доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, которые имеют достаточно длительные периоды полувыведения в физиологических условиях, обладают существенно лучшими токсикологическими профилями по сравнению с донорами нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, которые имеют более короткие периоды полувыведения (например, CXL-1020). Данные доноры нитроксила с более длительными периодами полувыведения обеспечивают степени эффективности, аналогичные CXL-1020 при введении внутривенно, но показывают существенно сниженные побочные эффекты (например, раздражение и/или воспаление) (смотри примеры 4-6). Более того, данные доноры нитроксила обеспечивают возникновение гемодинамических эффектов в пределах 1 часа или менее, что является клинически желательным.

Не будучи связанными теорией, эксперименты, приведенные в примерах настоящего описания, указывают на то, что доноры нитроксила с периодами полувыведения по существу более короткими, чем 10 минут при измерении в PBS или плазме человека (смотри пример 2), такие как CXL-1020, обеспечивают высокие локальные концентрации нитроксила после введения, и что данная высокая локальная концентрация нитроксила является причиной наблюдаемых побочных эффектов. Нитроксил при высокой концентрации димеризуется, приводя в результате к образованию азотноватистой кислоты, которая способна продуцировать гидроксильные радикалы. Альтернативно или кроме того, пероксид, образующийся в белых клетках крови, может реагировать с нитроксилом, образуя гидроксильные радикалы. Гидроксильные радикалы могут быть токсичными для эндотелиальных клеток, приводя в результате к воспалению или непереносимости. Тогда как нитроксильные соединения с более длительными периодами полувыведения могут, в теории, давать гидроксильные радикалы посредством аналогичных механизмов, ожидают, что образование данных радикалов будет снижено вследствие меньших концентраций нитроксила, таким образом, снижая способность нитроксила димеризоваться или реагировать с пероксидом. Следовательно, ожидают, что соединения с очень длительными периодами полувыведения (например, большими чем 95 минут при измерении в плазме человека согласно способу, описанному в примере 2) будут иметь подходящий токсикологический профиль; однако, поскольку ожидают, что данные соединения будут выводиться из кровотока и/или разбавляться перед образованием существенного количества нитроксила; ожидают, что данные соединения будут иметь низкую эффективность.

Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа с периодами полувыведения большими чем приблизительно 10 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4, или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждую согласно способу, описанному в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, настоящее изобретение обеспечивает фармацевтические композиции, содержащие доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа с периодами полувыведения, большими чем приблизительно 17 минут, при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4, или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждую согласно способу, описанному в примере 2.

Было обнаружено, что доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа с периодами полувыведения в диапазоне от приблизительно 12 минут до приблизительно 85 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2, обладают приемлемой эффективностью и улучшенным токсикологическим профилем по сравнению с соединениями с меньшими периодами полувыведения. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 15 минут до приблизительно 80 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 75 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 25 минут до приблизительно 60 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 35 минут до приблизительно 60 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 35 минут до приблизительно 50 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, имеет период полувыведения от приблизительно 40 минут до приблизительно 50 минут насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) при pH 7,4 или в плазме человека в присутствии антикоагулянта (например, гепарина или цитрата натрия) при pH 7,4, каждый согласно способу, описанному в примере 2.

Доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодные в фармацевтических композициях настоящего изобретения, способны служить донором нитроксила при физиологическом pH (т.е. pH приблизительно 7,4) и физиологической температуре (т.е. температуре приблизительно 37°C) (вместе, "физиологические условия"). Степень способности предоставлять нитроксил можно выразить в процентах теоретического стехиометрического максимума донора нитроксила N-гидроксисульфамидного типа. Соединение, которое предоставляет "значительное количество нитроксила" обозначает, в различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, который предоставляет приблизительно 40% или более, приблизительно 50% или более, приблизительно 60% или более, приблизительно 70% или более, приблизительно 80% или более, приблизительно 90% или более, или приблизительно 95% или более его теоретического максимального количества нитроксила в физиологических условиях. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции, предоставляет от приблизительно 70% до приблизительно 90% его теоретического максимального количества нитроксила. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, предоставляет от приблизительно 85% до приблизительно 95% его теоретического максимального количества нитроксила. В конкретных вариантах осуществления донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции, предоставляет от приблизительно 90% до приблизительно 95% его теоретического максимального количества нитроксила. Соединения, которые предоставляют меньше чем приблизительно 40%, или меньше чем приблизительно 50% их теоретического максимального количества нитроксила все еще являются донорами нитроксила, и их можно применять в описанных способах. Донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который предоставляет меньше чем приблизительно 50% его теоретического количества нитроксила можно применять в описанных способах, но могут требоваться большие уровни дозирования по сравнению с донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, который предоставляет большие количества нитроксила.

Ясно, что донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может также предоставлять ограниченное количество оксида азота, при условии, что количество предоставляемого нитроксила превышает количество предоставляемого оксида азота. В определенных вариантах осуществления донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может предоставлять приблизительно 25 мол% или меньше оксида азота в физиологических условиях. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может предоставлять приблизительно 20 моль% или меньше оксида азота в физиологических условиях. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может предоставлять приблизительно 15 моль% или меньше оксида азота в физиологических условиях. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, соединение, предоставляющее нитроксил, может предоставлять приблизительно 10 моль% или меньше оксида азота в физиологических условиях. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может предоставлять приблизительно 5 моль% или меньше оксида азота в физиологических условиях. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может предоставлять приблизительно 2 моль% или меньше оксида азота в физиологических условиях. В конкретном варианте осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, может предоставлять незначительное количество (например, приблизительно 1 моль% или меньше) оксида азота в физиологических условиях.

Конкретные варианты осуществления доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодные в фармацевтических композициях настоящего изобретения, приведены в таблице 1 и таблице 2. Соединения, перечисленные в таблице 1, разработаны для оптимизации периода полувыведения и токсикологического профиля донора нитроксила, согласно одной из целей настоящего изобретения. Соединения, перечисленные в таблице 2, описаны ранее (смотри, например, патент США № 8030356, содержание которого включено с помощью ссылки во всей своей полноте). Соединения, перечисленные в таблице 1 и таблице 2, обычно имеют периоды полувыведения больше чем 10 минут при измерении в насыщенном кислородом фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) и/или в плазме (смотри таблицу 4 в разделе 5.2).

Таблица 1 Репрезентативные новые N-гидроксисульфамидные соединения настоящего изобретения
N-Гидрокси-5-метилфуран-2-сульфонамид (1)	N-Гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (2)	N-Гидрокси-5-метил-1,2-оксазол-4-сульфонамид (3)
N-Гидрокси-1-бензофуран-7-сульфонамид (4)	4-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид (5)	N-Гидрокси-1-бензофуран-3-сульфонамид (6)
N-Гидрокси-5-метил-2-(трифторметил)фуран-3-сульфонамид (7)	N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-3-сульфонамид (8)	1-Ацетил-5-бром-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид (9)
2-Хлор-N-гидрокси-5-(гидроксиметил) бензол-1-сульфонамид (10)	1-Ацетил-5-хлор-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид (11)	4,5-Дихлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (12)
N-Гидрокси-6-метокси-1-бензофуран-2-сульфонамид (13)	2-Фтор-N-гидрокси-4-метилбензол-1-сульфонамид (14)	N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-5-сульфонамид (15)
N-Гидрокси-4-метансульфонилтиофен-2-сульфонамид (16)	5-Бром-N-гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфонамид (17)	4-Хлор-N-гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфонамид (18)
N,N-диэтил-5-(гидроксисульфамоил)тиофен-2-карбоксамид (19)	5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид (20)	N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонамид (21)
5-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид (22)	N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-2-сульфонамид (23)
N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-4-сульфонамид (24)		N-Гидроксипиридин-3-сульфонамид (26)
	N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-3-сульфонамид (28)	1-N-Гидрокси-2-N-(пропан-2-ил)бензол-1,2-дисульфонамид (29)
5-Хлор-N-гидрокси-1,3-диметил-1H-пиразол-4-сульфонамид (30)	N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-4-сульфонамид (31)	N-Гидроксипиридин-2-сульфонамид (32)
3-Бром-N-гидроксипиридин-2-сульфонамид (33)	4-N-Гидрокситиофен-2,4-дисульфонамид (34)	N-Гидрокси-4-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонамид (35)
N-Гидрокси-5-[5-(трифторметил)-1,2-оксазол-3-ил]тиофен-2-сульфонамид (36)	6-Хлор-N-гидрокси-7H,7aH-имидазо[2,1-b][1,3]тиазол-5-сульфонамид (37)	N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфонамид (38)
4-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид (39)	N-Гидрокси-5-(1,3-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфонамид (40)	N-Гидрокси-2,5-диметилтиофен-3-сульфонамид (41)
Метил 5-(гидроксисульфамоил)-4-метилтиофен-2-карбоксилат (42)	5-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (43)	N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-3-ил)тиофен-2-сульфонамид (44)
5-Бром-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (45)	3,5-дибром-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (46)	5-Хлор-N-гидрокси-4-нитротиофен-2-сульфонамид (47)
3-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (48)	N-Гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфонамид (49)	5-Хлор-N-гидрокси-2,1,3-бензоксадиазол-4-сульфонамид (50)
4-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (51)	N-Гидрокси-3,4-диметоксибензол-1-сульфонамид (52)	N-Гидрокси-2,3,5,6-тетраметилбензол-1-сульфонамид (53)
N-Гидрокси-3,5-бис(трифторметил)бензол-1-сульфонамид (54)	Метил 4-хлор-3-(гидроксисульфамоил)бензоат (55)	2-Фтор-N-гидрокси-5-метилбензол-1-сульфонамид (56)
4-Хлор-N-(3-хлорпропил)-3-(гидроксисульфамоил)бензамид (57)	2-Хлор-N-гидрокси-5-[4-(гидроксиимино) пиперидин-1-карбонил]бензол-1-сульфонамид (58)
2-Гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)бензойная кислота (60)	N-Гидрокси-4-метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-сульфонамид (61)	2-Хлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфонамид (62)
3,5-Дихлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфонамид (63)	4-Хлор-2-гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)-N,N-диметилбензамид (64)	5-Хлор-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид (65)
2-Хлор-N,5-дигидроксибензол-1-сульфонамид (66)	5-Бром-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид (67)	2-Хлор-N-гидрокси-5-(метоксиметил)бензол-1-сульфонамид (68)
Метил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-2-карбоксилат (69)	N-Гидрокси-2,5-диметилфуран-3-сульфонамид (70)	N-Гидрокси-8-оксатрицикло [7,4,0,0]тридека-1(9),2(7),3,5,10,12-гексаен-4-сульфонамид (71)
2-(Этансульфонил)-N-гидроксибензол-1-сульфонамид (72)	N-Гидрокси-2-(пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфонамид (73)	4-Ацетил-N-гидрокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-6-сульфонамид (74)
Метил 5-(гидроксисульфамоил)-1-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат (75)	N-[5-(Гидроксисульфамоил)-1,3-тиазол-2-ил]ацетамид (76)	N-Гидрокси-2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфонамид (77)
Этил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-3-карбоксилат (78)	5-Хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилат (79)
N-Гидрокси-2-(оксан-4-илметансульфонил) бензол-1-сульфонамид (80)	N-Гидрокси-3-метил-1-бензофуран-2-сульфонамид (81)	N-Гидрокси-5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфонамид (82)

Таблица 2 Дополнительные N-гидроксисульфамидные доноры с требуемыми периодами полувыведения
N-Гидроксифуран-2-сульфонамид (83)	N-Гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфонамид (84)	N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-3-сульфонамид (85)
5-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (86)	3-Хлор-4-фтор-N-гидроксибензол-1-сульфонамид (87)	1-N,3-N-Дигидроксибензол-1,3-дисульфонамид (88)
3-Бром-N-гидроксибензол-1-сульфонамид (89)	5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид (90)	N-Гидрокси-3,5-диметил-1,2-оксазол-4-сульфонамид (91)
N-Гидрокси-3-(трифторметокси)бензол-1-сульфонамид (92)	N-Гидрокси-4-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (93)
3,4-Дихлор-N-гидроксибензол-1-сульфонамид (95)

В определенных вариантах осуществления, доноры нитроксила, перечисленные в таблице 1 и таблице 2, можно превратить в их фармацевтически приемлемую соль. Репрезентативные соли включают, но не ограничиваются, оксалатную, хлоридную, бромидную, йодидную, сульфатную, цитратную, ацетатную, трифторацетатную, нитратную, бисульфатную, фосфатную, кислую фосфатную, изоникотинатную, лактатную, глутаматную, салицилатную, кислую цитратную, тартратную, олеатную, таннатную, пентотенатную, битартратную, аскорбатную, сукцинатную, малеатную, гентизинатную, фумаратную, глюконатную, глюкуронатную, сахаратную, формиатную, бензоатную, метансульфонатную, этансульфонатную, бензолсульфонатную, п-толуолсульфонатную и памоатную соли.

В некоторых вариантах осуществления, N-гидроксильную группу соединений, перечисленных в таблицах 1 и 2, можно этерифицировать, получая соединения общей формулы (99), указанной ниже:

,

где представляет собой ароматическую, гетероароматическую или полициклическую часть соединений, приведенных в таблицах 1 и 2 - включая заместитель (заместители), приведенные в таблицах 1 и 2, если они вообще есть - и когда R представляет собой водород, -(C₁-C₆)алкил, -(C₂-C₄)алкенил, фенил, бензил, циклопентил, циклогексил, -(C₅-C₇)гетероциклоалкил, бензилокси, -O-(C₁-C₆)алкил, -NH₂, -NH-(C₁-C₄)алкил или -N((C₁-C₄)алкил)₂, где указанный -(C₁-C₆)алкил, -(C₂-C₄)алкенил, фенил, бензил, циклопентил, циклогексил, -(C₅-C₇)гетероциклоалкил, бензилокси, -O-(C₁-C₆)алкил, -NH-(C1-C₄)алкил или -N((C₁-C₄)алкил)₂ может быть незамещенным или замещенным одним или более заместителями, выбранными из галогена, -(C₁-C₆)алкила, -(C₂-C₄)алкенила, -(C₂-C₃)алкинила, -(5- или 6-членного)гетероарила, -O-(C₁-C₆)алкила, -S-(C₁-C₆)алкила, -C(галоген)₃, -CH(галоген)₂, -CH₂(галоген), -CN, -NO₂, -NH₂, -NH-(C₁-C₄)алкила, -N(-(C₁-C₄)алкила)₂, -C(=O)(C₁-C₄)алкила, -C(=O)O(C₁-C₄)алкила, -OC(=O)(C₁-C₄)алкила, -OC(=O)NH₂, -S(=O)(C₁-C₄)алкила или -S(=O)₂(C₁-C₄)алкила. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой метил, этил, бензил или фенил. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой метил или этил. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой метил. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой этил. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой бензил или фенил. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой бензил. В конкретных вариантах осуществления, R представляет собой фенил.

4.3 Измерение способности подавать нитроксил

Соединения легко испытывать на подачу нитроксила стандартными экспериментами. Поскольку обычно непрактично непосредственно измерять, подается ли нитроксил, несколько аналитических подходов принято в качестве подходящих заменителей для определения, подает ли соединение нитроксил. Например, исследуемое соединение можно помещать в раствор, например, в фосфатно-буферный солевой раствор (PBS) или в фосфатно-буферный раствор при pH приблизительно 7,4, в герметичной емкости. После достаточного времени для протекания диссоциации, такого как от нескольких минут до нескольких часов, паровую фазу над жидкостью отбирают и анализируют, определяя ее состав, таким как газовая хроматография и/или масс-спектрометрия. Если образуется газообразный N₂O (который возникает за счет димеризации HNO), испытание является положительным на предоставление нитроксила, и считают, что соединение является донором нитроксила.

Для соединений, в которых N-гидроксильная группа донора нитроксила N-гидроксисульфамидного типа этерифицирована, эстеразу печени свиньи (PLE) можно добавлять к исходному раствору, применяемому для проведения анализа паровой фазы над жидкостью.

При необходимости, подачу нитроксила можно также обнаружить при воздействии на испытуемое соединение метмиоглобином (Mb³⁺). Смотри Bazylinski et al., J Amer. Chem. Soc. 107(26):7982-7986 (1985). Нитроксил реагирует с Mb³⁺, образуя Mb²⁺-NO комплекс, который можно обнаружить за счет изменения ультрафиолетового/видимого спектра или электронным парамагнитным резонансом (ЭПР). Mb²⁺-NO комплекс имеет EPR сигнал, сосредоточенный в районе g-величины приблизительно 2. Оксид азота, с другой стороны, реагирует с Mb³⁺, образуя Mb³⁺-NO комплекс, который имеет незначительный, если вообще имеет, ЭПР сигнал. Соответственно, если соединение реагирует с Mb³⁺, образуя комплекс, обнаруживаемый стандартными способами, таким как ультрафиолетовый/видимый или ЭПР, то соединение является положительным относительно предоставления нитроксила.

4.4 Фармацевтические композиции

Настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, содержащие донор нитроксила и, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество. Примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ включают вспомогательные вещества, описанные выше, такие как носители, поверхностно-активные агенты, загущающие или эмульгирующие агенты, твердые связующие, агенты, способствующие образованию дисперсии или суспензии, солюбилизаторы, красители, ароматизаторы, покрытия, разрыхлители, смазывающие вещества, подсластители, консерванты, изотонические агенты и любую их комбинацию. Выбор и применение фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ описано, например, в Troy, Ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21^st Ed. (Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2005).

Фармацевтические композиции можно формулировать для введения в твердой или жилкой форме, включая формы, приспособленные для следующего: (1) пероральное введение, например, жидкой лекарственной формы для перорального введения (например, водные или неводные растворы или суспензии), таблетки (например, таблетки, предназначенные для буккального, сублингвального и системного поглощения), каплеты, пилюли, порошки, гранулы, пасты для нанесения на язык, твердые желатиновые капсулы, мягкие желатиновые капсулы, спреи для рта, пастилки, лепешки, гранулы, сиропы, суспензии, эликсиры, жидкости, эмульсии и микроэмульсии; или (2) парентеральное введение, например, подкожной, внутримышечной, внутривенной или эпидуральной инъекцией, например, в виде стерильного раствора или суспензии. Фармацевтические композиции могут быть предназначены для немедленного, замедленного или контролируемого высвобождения.

Соединения и фармацевтические композиции, описанные в настоящем изобретении, можно получить в виде любой подходящей единичной лекарственной формы, такой как капсулы, саше, таблетки, порошок, гранулы, раствор, суспензия в водной жидкости, суспензия в неводной жидкости, жидкая эмульсия масло-в-воде, жидкая эмульсия вода-в-масле, липосомы или болюс.

4.4.1 Композиции для парентерального введения

Настоящее изобретение обеспечивает композиции, являющиеся донорами нитроксила, для парентерального (например, внутривенного) введения. В одном варианте осуществления, фармацевтическую композицию формулируют для внутривенного введения непрерывным вливанием.

Различные варианты осуществления фармацевтических композиций, пригодных для парентерального введения, включают, без ограничения, или водные стерильные растворы для инъекции, или неводные стерильные растворы для инъекции, причем каждый содержит, например, антиоксиданты, буферы, бактериостаты и растворенные компоненты, которые делают композицию изотоничной крови предполагаемого реципиента; и водные стерильные суспензии и неводные стерильные суспензии, причем каждая содержит, например, суспендирующие агенты и загустители. Композиции можно предоставлять в виде емкостей с одной дозой или несколькими дозами, например, герметичные ампулы или пробирки, и их можно хранить в лиофилизированном состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, такого как вода, непосредственно перед применением. Альтернативно, композиция может быть в виде жидкости.

Фармацевтические композиции, вводимые парентерально, можно вводить в кислом, нейтральном или основном растворе. В одном варианте осуществления, фармацевтические композиции, содержащие донор нитроксила, можно формулировать в виде кислого раствора, имеющего pH от приблизительно 4 до приблизительно 5, например, pH приблизительно 4, приблизительно 4,5, приблизительно 4,8 или приблизительно 5, включая величины между ними. Тогда как pH приблизительно 4, в общем, считают оптимальным для формулирования доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа для того, чтобы достигать достаточной стабильности донора. Было обнаружено, что формулирование в данных кислых условиях может потенциально вызывать или усиливать раздражение вен после парентерального введения. Степень раздражения можно уменьшить формулированием доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа в менее кислой среде (смотри пример 6 и фигуру 4).

Соответственно, в определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, формулируют для парентеральной инъекции при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6,5 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5 до приблизительно 6 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,5 до приблизительно 6 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5 до приблизительно 5,5 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,2 до приблизительно 6,2 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,2 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,8 до приблизительно 6,2 в некоторых вариантах осуществления, и при pH приблизительно 6 в конкретных вариантах осуществления. В другом варианте осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, формулируют для парентеральной инъекции при pH приблизительно 5.

Для получения требуемого pH фармацевтической композиции, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа можно формулировать в водном буфере. Например, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа можно формулировать в фосфатном или ацетатном буфере. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа формулируют в калийфосфатном или натрийфосфатном буфере. В других вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа формулируют в калийфосфатном буфере или натрийфосфатном буфере. В других вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа формулируют в калийцитратном буфере или натрийцитратном буфере.

Водный буфер может также содержать подходящий сахар для того, чтобы поддерживать подходящую осмолярность. Например, фармацевтическая композиция может содержать подходящее количество декстрозы. Фармацевтические композиции, приведенные в примерах настоящего изобретения, обычно получали разбавлением концентрата, содержащего донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, необязательно циклодекстрин (смотри раздел 4.4.3) и подходящий буфер в водном растворе, содержащем 5% декстрозы (D5W) или 2,5% декстрозы (D2.5W).

4.4.2 Композиции для перорального введения

Фармацевтические композиции, содержащие доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, можно формулировать для перорального введения. Соединения для перорального введения можно формулировать в виде жидких или твердых лекарственных форм. В конкретных вариантах осуществления, когда доноры нитроксила формулируют в виде пероральных жидких лекарственных форм, полиэтиленгликоль 300 (PEG300) может эффективно служить в качестве вспомогательного вещества.

Таблетки для перорального введения можно получить прессованием или формованием, необязательно с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки можно получить прессованием в подходящем устройстве терапевтического агента или агентов в свободно текучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанные со связующим, смазывающим агентом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным агентом или диспергирующим агентом. Формованные таблетки можно получить формованием в подходящем устройстве смеси порошкообразного соединения, смоченного инертным жидким разбавителем. Таблетки можно необязательно покрывать или наносить риски и можно формулировать так, чтобы обеспечивать медленное или контролируемое высвобождение из них активного ингредиента. Способы формулирования данных композиций с медленным или контролируемым высвобождением фармацевтически активных ингредиентов, таких как терапевтические агенты в них, и других соединений, известных в данной области техники, являются известными в данной области техники и описаны в опубликованных патентах США, некоторые из которых включают, но не ограничиваются, патенты США № 4369174, 4842866 и приводимые в них ссылки. Покрытия можно применять для доставки соединений в кишечник (смотри, например, патенты США № 6638534, 5217720, 6569457 и приводимые в них ссылки). Специалисту в данной области техники ясно, что в добавление к таблеткам, другие лекарственные формы можно формулировать для обеспечения медленного или контролируемого высвобождения активного ингредиента. Данные лекарственные формы включают, но не ограничиваются, капсулы, гранулы и желатиновые капсулы.

4.4.3 Агенты, увеличивающие стабильность и растворимость

Было обнаружено, что доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа могут иметь проблемы со стабильностью при формулировании для парентерального и перорального введения. В частности, доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа обычно высвобождают нитроксил и, по меньшей мере, один побочный продукт в фармацевтической композиции, который может негативно сказываться на эффективности и безопасности композиции. Например, соединения формулы (1) и формулы (2) высвобождают нитроксил и побочные продукты, являющиеся производными сульфиновой кислоты (соответственно, соединения формулы (100) и формулы (101)) согласно следующим схемам.

Более того, доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа могут также иметь проблемы с растворимостью, которые ограничивают или препятствуют их применению в пероральной или парентеральной лекарственной форме. Соответственно, повышение стабильности и растворимости доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа может быть важным перед тем, как доноры можно будет применять в терапевтических применениях.

Согласно одному аспекту настоящего изобретения, было обнаружено, что можно применять циклодекстрины, резко увеличивая стабильность и/или растворимость доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа. Конкретно, циклодекстрины могут уменьшать или устранять образование нитроксила и побочных продуктов, являющихся производными сульфиновой кислоты (например, соединений формулы (100) и (101)) в фармацевтической композиции в процессе хранения перед введением пациенту. Присутствие циклодекстрина также обеспечивает стабилизацию некоторых из доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа при больших pH (например, pH 5-6), что, по причинам, обсуждаемым в разделе 4.4.2, приводит в результате к получению композиции с улучшенным токсикологическим профилем.

В различных вариантах осуществления, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина. В конкретном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой циклическую структуру, содержащую остатки глюкозы, соединенные (1-4) связями. В другом варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой β-циклодекстрин, т.е. циклическую структуру, содержащую семь остатков глюкозы, соединенных (1-4) связями. В другом варианте осуществления, циклодекстрин химически модифицирован получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

В некоторых вариантах осуществления, когда фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₁-C₆)алкилэфирное производное β-циклодекстрина. В определенных из данных вариантов осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₁-C₆)алкилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее от приблизительно шести до приблизительно семи сульфо(C₁-C₆)алкилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В различных вариантах осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₁-C₆)алкилэфирное производное β-циклодекстрина, содеращее в среднем от приблизительно шести до приблизительно семи сульфо(C₁-C₆)алкилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В другом данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₁-C₆)алкилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо(C₁-C₆)алкилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

В конкретной серии вариантов осуществления, где фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₃-C₅)алкилэфирное производное β-циклодекстрина. В одном данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₃-C₅)алкилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее от приблизительно шести до приблизительно семи сульфо(C₃-C₅)алкилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В данных различных вариантах осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₃-C₅)алкилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее в среднем от приблизительно шести до приблизительно семи сульфо(C₃-C₅)алкилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В другом данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо(C₃-C₅)алкилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо(C₃-C₅)алкилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

В конкретных вариантах осуществления, когда фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина, циклодекстрин представляет собой сульфобутилэфирное производное β-циклодекстрина. В некоторых из данных вариантов осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфобутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее от приблизительно шести до приблизительно семи сульфобутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В другом данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфобутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее в среднем от приблизительно шести до приблизительно семи сульфобутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В другом данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфобутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфобутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

В определенных вариантах осуществления, когда фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина, циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина. В одном данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее от приблизительно шести до приблизительно семи сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В другом данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее в среднем от приблизительно шести до приблизительно семи сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина. В другом данном варианте осуществления, циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

В различных конкретных вариантах осуществления, когда фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает, по меньшей мере, один тип циклодекстрина, циклодекстрин содержит несколько отрицательных зарядов при физиологически совместимых величинах pH, например, при pH от приблизительно 5,0 до приблизительно 6,8 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,5 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,7 до приблизительно 6,3 в некоторых вариантах осуществления, от приблизительно 5,8 до приблизительно 6,2 в некоторых вариантах осуществлении, от приблизительно 5,9 до приблизительно 6,1 в некоторых вариантах осуществления, и приблизительно 6,0 в конкретных вариантах осуществления. В одном данном варианте осуществления, по меньшей мере, одно фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество включает циклодекстрин CAPTISOL^® (Ligand Pharmaceuticals, La Jolla, CA).

Молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 1:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,7:1 до приблизительно 1:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 0,8:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,1:1 до приблизительно 0,6:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,2:1 до приблизительно 1:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,2:1 до приблизительно 0,8:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,4:1 до приблизительно 0,8:1. В определенных вариантах осуществления, молярное соотношение между донором нитроксила N-гидроксисульфамидного типа и циклодекстрином, присутствующим в композиции, может составлять от приблизительно 0,4:1 до приблизительно 0,6:1. В конкретных вариантах осуществления, циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®. Для целей расчета молярных количеств, принимают, что CAPTISOL^® имеет среднюю молекулярную массу (MW) 2163 г/моль.

В вариантах осуществления, где донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа вводят парентерально (например, внутривенно) в виде водной композиции, циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 0,001% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 10% циклодекстрина (мас./об.). В некоторых вариантах осуществления циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 0,005% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 8% циклодекстрина (мас./об.). В определенных вариантах осуществления, циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 0,010% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 6% циклодекстрина (мас./об.). В определенных вариантах осуществления, циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 0,5% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 8% циклодекстрина (мас./об.). В определенных вариантах осуществления, циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 1% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 8% циклодекстрина (мас./об.). В определенных вариантах осуществления, циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 2% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 8% циклодекстрина (мас./об.). В определенных вариантах осуществления, циклодекстрин может присутствовать в композиции в диапазоне от приблизительно 2% циклодекстрина (мас./об.) до приблизительно 6% циклодекстрина (мас./об.). В конкретных вариантах осуществления, циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

Как описано в примере 7, композиции, содержащие донор нитроксила и циклодекстрин, можно получить в виде концентрата при конкретном pH. Данный концентрат можно получить добавлением донора нитроксила к водному раствору циклодекстрина при конкретном pH (например, pH 4). Затем, концентрат можно разбавлять в подходящем водном растворе (например, буфере) и вводить пациенту. Альтернативно, концентрат, содержащий донор нитроксила и циклодекстрин, можно лиофилизировать, получая порошок. Лиофилизированный порошок можно растворять в подходящей водной среде перед введением.

4.5 Способы применения соединений и фармацевтических композиций настоящего изобретения

В одном аспекте, настоящее изобретение обеспечивает способ увеличения концентрация нитроксила in vivo, включающий введение нуждающемуся пациенту эффективного количества соединения или фармацевтической композиции, как описано в настоящем изобретении. В различных вариантах осуществления, пациент имеет, подозревается в наличии или подвергается риску возникновения или развития заболевания, которое является чувствительным к нитроксильной терапии.

В конкретных вариантах осуществления, настоящее изобретение обеспечивает способ лечения, предотвращения или замедления возникновения и/или развития заболевания, включающий введение пациенту (включая пациента, определенного в качестве нуждающегося в данном лечении, предотвращении или замедлении) эффективного количества соединения или фармацевтической композиции, как описано в настоящем изобретении. Определение нуждающегося пациента может быть основано на решении терапевта, персонала медицинского учреждения, персонала аварийно-спасательных служб или других работников сферы здравоохранения и может быть субъективным (например, мнение) или объективным (например, измеряемым способом испытания или диагностическим способом).

Конкретные заболевания, включенные способами, описанными в настоящем изобретении, включают, без ограничения, сердечно-сосудистые заболевания, ишемически-реперфузионное повреждение и легочную гипертензию (PH).

4.5.1 Сердечно-сосудистые заболевания

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение обеспечивает способ лечения сердечно-сосудистого заболевания, включающий введение эффективного количества соединения или фармацевтической композиции, как описано в настоящем изобретении, нуждающемуся пациенту.

Примеры сердечно-сосудистых заболеваний и симптомов, которые можно обычно лечить соединениями и композициями, описанными в настоящем изобретении, включают сердечно-сосудистые заболевания, которые являются чувствительными к нитроксильной терапии, коронарные обструкции, болезнь коронарной артерии (CAD), стенокардию, инфаркт, инфаркт миокарда, высокое кровяное давление, ишемическую кардиомиопатию и образование инфаркта, закупорку легких, отек легких, сердечный фиброз, заболевания клапанов сердца, перикардиальную болезнь, сосудистые застойные состояния, периферические отеки, асцит, болезнь Шагаса, гипертрофии желудочков, порок сердца, сердечную недостаточность, диастолическую сердечную недостаточность, систолическую сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность, острую застойную сердечную недостаточность, острую декомпенсированную сердечную недостаточность и гипертрофию сердца.

4.5.1.1 Сердечная недостаточность

Композиции, являющиеся донорами нитроксила, настоящего изобретения, можно применять для лечения пациентов, страдающих от сердечной недостаточности. Сердечная недостаточность может быть любого вида или формы, включая любую из видов сердечной недостаточности, описанных в настоящем изобретении. Неограничивающие примеры сердечной недостаточности включают сердечную недостаточность ранней стадии, сердечную недостаточность I, II, III и IV класса, острую сердечную недостаточность, застойную сердечную недостаточность (CHF) и острую застойную сердечную недостаточность. В одном варианте осуществления, соединения и композиции настоящего изобретения можно применять для лечения острой декомпенсированной сердечной недостаточности.

В вариантах осуществления, где композиции, являющиеся донорами нитроксила, настоящего изобретения применяют для лечения пациентов, страдающих от сердечной недостаточности, можно также вводить другой активный агент, который лечит сердечную недостаточность. В одном данном варианте осуществления, донор нитроксила можно вводить в сочетании с положительным инотропом, таким как бета-агонист. Примеры бета-агонистов включают, без ограничения, дофамин, добутамин, изопротеренол, аналоги данных соединений и производные данных соединений. В другом варианте осуществления, донор нитроксила можно вводить в сочетании с антагонистом бета-адренергических рецепторов (также называемым в настоящем изобретении бета-антагонистом или бета-блокатором). Примеры бета-антагонистов включают, без ограничения, пропранодол, метопролол, бисопролол, буциндолол и карведилол.

Как описано в примере 3, модель сердечной недостаточности применяли для оценки гемодинамических профилей композиций, содержащих несколько из доноров нитроксила с более длительным периодом полувыведения. Как показано на фигуре 1, которая обсуждается в примере 3, композиции настоящего изобретения обеспечивают заметное улучшение сокращения и расслабления миокарда и умеренное снижение кровяного давления без тахикардии. Более того, возникновение заметных гемодинамических эффектов было быстрым (например, в пределах 1 часа), и для всех композиций близкий к максимальному эффект достигали в пределах 2 часов.

Тогда как гемодинамическая активность композиций настоящего изобретения является аналогичной гемодинамической активности композиций, содержащих донор нитроксила, CXL-1020, при введении внутривенно, токсикологический профиль доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, которые имеют более длительные периоды полувыведения, чем CXL-1020, существенно улучшен по сравнению с композициями, содержащими CXL-1020 (смотри примеры 5 и 6 и фигуры 2-4). Например, "максимальные дозы, не вызывающие обнаруживаемого вредного воздействия на здоровье человека" (NOAEL) доноров нитроксила, пригодных в композициях настоящего изобретения, были по существу большими, чем NOAEL для CXL-1020 (смотри пример 5 относительно описания определения NOAEL). В частности, соединение формулы (1) обладает наиболее подходящим токсикологическим профилем из всех доноров нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, испытуемых до сих пор, и не проявляет неблагоприятных эффектов на клинические маркеры воспаления при введении внутривенно при концентрациях, по меньшей мере, вплоть до 30 мкг/кг/мин (фигура 2). Наоборот, CXL-1020 начинает проявлять нежелательные побочные эффекты при концентрациях всего лишь 0,3 мкг/кг/мин.

4.5.1.2 Ишемически-реперфузионное повреждение

В другом варианте осуществления, описанный объект обеспечивает способ лечения, предотвращения или замедления возникновения и/или развития ишемически-реперфузионного повреждения, включающий введение эффективного количества соединения или фармацевтической композиции, как описано в настоящем изобретении, нуждающемуся субъекту.

В конкретном варианте осуществления, способ предназначен для предотвращения ишемически-реперфузионного повреждения. В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят до возникновения ишемии. В конкретном варианте осуществления фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят перед способами, при которых может возникать ишемия миокарда, например, ангиопластикой или хирургической операцией, такой как шунтирование коронарных артерий. В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят после ишемии, но перед реперфузией. В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят после ишемии и реперфузии.

В другом варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения, можно вводить пациенту, который подвержен риску возникновения ишемии. В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят пациенту, находящемуся в группе риска возникновения в будущем ишемии, но который на данный момент не проявляет признаки ишемии. Определение подвержен ли пациент риску возникновения ишемии, можно осуществлять любым способом, известным в данной области техники, таким как осмотр пациента или история болезни пациента. В конкретном варианте осуществления, пациент имел предшествующее ишемическое состояние. Таким образом, пациент может быть подвержен риску возникновения первого или последующего ишемического состояния. Примеры пациентов, находящихся в группе риска развития ишемического состояния, включают пациентов с известной гиперхолестеринемией, ЭКГ изменениями, связанными с ишемией (например, заостренные или обращенные T-зубцы или подъем или депрессия ST сегмента в подходящем клиническом контексте), нарушенной ЭКГ, не связанной с активной ишемией, повышенной CKMB, клиническими признаками ишемии (например, давящая подгрудинная боль или боль в верхних конечностях, затруднение дыхания и/или диафорез), предшествующей историей инфаркта миокарда, повышенным холестерином в сыворотке, сидячим образом жизни, ангиографическими данными частичной обструкции коронарной артерии, эхокардиографическими данными повреждения миокарда или любыми другими данными, связанными с риском будущего ишемического состояния. Примеры ишемических состояний включают, без ограничения, инфаркт миокарда (MI) и нейроваскулярную ишемию, такую как острое нарушение мозгового кровообращения (CVA).

В другом варианте осуществления, объект лечения представляет собой орган, который будут трансплантировать. В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно вводить перед реперфузией органа трансплантата реципиенту. В конкретном варианте осуществления, фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно вводить перед удалением органа из донора, например, через канюли для перфузии, применяемую в способе удаления органа. Если донор органа представляет собой живой донор, например донор почки, соединения или фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить донору органа. В конкретном варианте осуществления соединения или фармацевтические композиции настоящего изобретения вводят выдерживанием органа в растворе, содержащем соединение или фармацевтическую композицию. Например, соединение или фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно включать в раствор для хранения органа, такой как раствор университета Висконсина "UW", который представляет собой раствор, содержащий гидроксиэтиловый крахмал, по существу не содержащий этиленгликоля, этиленхлоргидрина и ацетона (смотри патент США № 4798824). В конкретном варианте осуществления, фармацевтическая композиция настоящего изобретения, которую вводят, является такой, что ишемически-реперфузионное повреждение тканей органа снижается после реперфузии у реципиента трансплантированного органа. В конкретном варианте осуществления, способ ослабляет некроз ткани (размер инфаркта) подверженных риску тканей.

Ишемически-реперфузионное повреждение может повреждать ткани, отличные от тканей миокарда, и описанный предмет включает способы лечения или предотвращения данного повреждения. В различных вариантах осуществления ишемически-реперфузионное повреждение является немиокардиальным. В конкретных вариантах осуществления, способ ослабляет повреждение в результате ишемии/реперфузии в ткани мозга, печени, кишечника, почки, пищеварительного тракта или любой части тела, отличной от миокарда. В другом варианте осуществления, пациент подвержен риску данного повреждения. Выбор индивида, подверженного риску немиокардиальной ишемии, должен включать определение индикаторов, применяемых для оценки риска миокардиальной ишемии. Однако другие факторы могут указывать на риск ишемии/реперфузия в других тканях. Например, пациенты, подвергаемые хирургической операции, часто страдают от ишемии, связанной с хирургической операцией. Таким образом, пациенты, для которых запланирована хирургическая операция, можно считать подверженными риску возникновения ишемического состояния. Следующие факторы риска для инсульта (или поднабор данных факторов риска) могут показывать подверженность пациента риску возникновения ишемии ткани мозга: гипертензия, курение сигарет, стеноз сонной артерии, физическая неактивность, сахарный диабет, гиперлипидемия, транзиторная ишемическая атака, мерцательная аритмия, ишемическая болезнь сердца, застойная сердечная недостаточность, инфаркт миокарда в прошлом, дисфункция левого желудочка с пристеночным тромбом и митральный стеноз. Ingall, Postgrad. Med. 107(6):34-50 (2000). Further, complications of untreated infectious diarrhea in the elderly can include myocardial, renal, cerebrovascular and intestinal ischemia. Slotwiner-Nie et al., Gastroenterol. Clin. N. Amer. 30(3):625-635 (2001). Альтернативно, пациентов можно отбирать на основе факторов риска для ишемической болезни кишечника, почек и/или печени. Например, лечение будут предпринимать для пожилых пациентов, подверженных риску возникновения гипотензивных эпизодов (таких как потеря крови при хирургической операции). Таким образом, пациенты, предоставляющие данный признак, будут считать подверженными риску возникновения ишемического состояния. В другом варианте осуществления, пациент имеет любое одно или более из заболеваний, перечисленных в настоящем изобретении, таких как сахарный диабет и гипертензия. Другие заболевания, которые могут приводить в результате к ишемии, такие как церебральная артериовенозная мальформация, могут показывать подверженность риску возникновения ишемического состояния у пациента.

4.5.2 Легочная гипертензия

В другом варианте осуществления фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно применять для предотвращения или замедления возникновения и/или развития легочной гипертензии. В одном данном варианте осуществления фармацевтическую композицию настоящего изобретения можно применять для предотвращения или замедления возникновения и/или развития легочной артериальной гипертензии (PAH).

В другом варианте осуществления настоящее изобретение обеспечивает способ снижения среднего давления в легочной артерии (MPAP), включающий введение эффективного количества соединения или фармацевтической композиции, описанных в настоящем изобретении, нуждающемуся пациенту. В другом варианте осуществления, MPAP снижают вплоть до на приблизительно 50%. В другом варианте осуществления, MPAP снижают вплоть до на приблизительно 25%. В другом варианте осуществления MPAP снижают до на приблизительно 20%. В другом варианте осуществления, MPAP снижают вплоть до на приблизительно 15%. В другом варианте осуществления, MPAP снижают вплоть до 10%. В другом варианте осуществления, MPAP снижают до на приблизительно 5%. В другом варианте осуществления, MPAP снижают так, чтобы оно составляло от приблизительно 12 мм рт. ст. до приблизительно 16 мм рт. ст. В другом варианте осуществления, MPAP снижают так, чтобы оно составляло приблизительно 15 мм рт. ст.

4.6 Способы введения, режимы и уровни доз

Соединения и фармацевтические композиции настоящего изобретения модно вводить парентеральным (например, подкожным, внутримышечным, внутривенным или внутрикожным) введением. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят внутривенным вливанием. В других вариантах осуществления, соединения и фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить пероральным введением.

Когда вводят фармацевтическую композицию, содержащую соединение настоящего изобретения, дозы выражают на основе количества активного фармацевтического ингредиента, т.е. количества соединения (соединений), являющегося донором нитроксила настоящего изобретения, присутствующего в фармацевтической композиции.

Для внутривенного введения, дозу можно удобно выразить в единицу времени, или в виде фиксированного количества в единицу времени или в виде количества на основе веса в единицу времени.

В различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят внутривенно в количестве, по меньшей мере, приблизительно 0,1 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 0,2 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 0,3 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 0,4 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 0,5 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 1 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 2,5 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 5 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 7,5 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 10 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 11 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 12 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 13 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 14 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 15 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 16 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 17 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 18 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 19 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 20 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 21 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 22 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 23 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 24 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 25 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 26 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 27 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 28 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 29 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 30 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 31 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 32 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 33 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 34 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 35 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 36 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 37 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 38 мкг/кг/мин, по меньшей мере, приблизительно 39 мкг/кг/мин, или, по меньшей мере, приблизительно 40 мкг/кг/мин.

В различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят внутривенно в количестве не больше чем приблизительно 100 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 90 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 80 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 70 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 60 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 50 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 49 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 48 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 47 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 46 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 45 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 44 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 43 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 42 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 41 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 40 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 39 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 38 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 37 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 36 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 35 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 34 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 33 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 32 мкг/кг/мин, не больше чем приблизительно 31 мкг/кг/мин, или не больше чем приблизительно 30 мкг/кг/мин.

В некоторых вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят внутривенно в количестве в диапазоне от приблизительно 0,1 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин, приблизительно 1 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин, приблизительно 2,5 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин, приблизительно 5 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин, приблизительно 10 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин, приблизительно 1,0 мкг/кг/мин до приблизительно 80 мкг/кг/мин, от приблизительно 10,0 мкг/кг/мин до приблизительно 70 мкг/кг/мин, от приблизительно 20 мкг/кг/мин до приблизительно 60 мкг/кг/мин, от приблизительно 15 мкг/кг/мин до приблизительно 50 мкг/кг/мин, от приблизительно 0,01 мкг/кг/мин до приблизительно 1,0 мкг/кг/мин, от приблизительно 0,01 мкг/кг/мин до приблизительно 10 мкг/кг/мин, от приблизительно 0,1 мкг/кг/мин до приблизительно 1,0 мкг/кг/мин, от приблизительно 0,1 мкг/кг/мин до приблизительно 10 мкг/кг/мин, от приблизительно 1,0 мкг/кг/мин до приблизительно 5 мкг/кг/мин, от приблизительно 70 мкг/кг/мин до приблизительно 100 мкг/кг/мин, или от приблизительно 80 мкг/кг/мин до приблизительно 90 мкг/кг/мин.

В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят внутривенно в количестве в диапазоне от приблизительно 10 мкг/кг/мин до приблизительно 50 мкг/кг/мин, от приблизительно 20 мкг/кг/мин до приблизительно 40 мкг/кг/мин, от приблизительно 25 мкг/кг/мин до приблизительно 35 мкг/кг/мин или от приблизительно 30 мкг/кг/мин до приблизительно 40 мкг/кг/мин. В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят внутривенно в количестве от приблизительно 20 мкг/кг/мин до приблизительно 30 мкг/кг/мин.

В ряде вариантов осуществления, включая различные варианты осуществления с пероральным введением, соединения или фармацевтические композиции настоящего изобретения вводят согласно режиму ежедневного дозирования на основе веса, или в виде единичной дневной дозы (КВД) или в виде нескольких раздельных доз, вводимых, например, дважды в день (BID), три раза в день (TID) или четыре раза в день (QID).

В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, предоставляющий нитоксил, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе, по меньшей мере, приблизительно 0,5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 0,75 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 1,0 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 1,5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 2 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 2,5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 3 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 4 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 7,5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 10 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 12,5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 15 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 17,5 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 20 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 25 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 30 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 35 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 40 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 45 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 50 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 60 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 70 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 80 мг/кг/д, по меньшей мере, приблизительно 90 мг/кг/д, или, по меньшей мере, приблизительно 100 мг/кг/д.

В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, предоставляющий нитроксил, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе не больше чем приблизительно 100 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 100 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 90 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 80 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 80 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 75 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 70 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 60 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 50 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 45 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 40 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 35 мг/кг/д, не больше чем приблизительно 30 мг/кг/д.

В ряде вариантов осуществления, доза составляет от приблизительно 0,001 мг/кг/д до приблизительно 10000 мг/кг/д. В определенных вариантах осуществления, доза составляет от приблизительно 0,01 мг/кг/д до приблизительно 1000 мг/кг/д. В определенных вариантах осуществления доза составляет от приблизительно 0,01 мг/кг/д до приблизительно 100 мг/кг/д. В определенных вариантах осуществления доза составляет от приблизительно 0,01 мг/кг/д до приблизительно 10 мг/кг/д. В определенных вариантах осуществления доза составляет от приблизительно 0,1 мг/кг/д до приблизительно 1 мг/кг/д. В определенных вариантах осуществления, доза является меньшей, чем приблизительно 1 г/кг/д.

В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят в диапазоне доз, в котором нижний предел диапазона представляет собой любое количество от приблизительно 0,1 мг/кг/день до приблизительно 90 мг/кг/день, и верхний предел диапазона представляет собой любое количество от приблизительно 1 мг/кг/день до приблизительно 100 мг/кг/день (например, от приблизительно 0,5 мг/кг/день до приблизительно 2 мг/кг/день в одной серии вариантов осуществления и от приблизительно 5 мг/кг/день до приблизительно 20 мг/кг/день в другой серии вариантов осуществления).

В конкретных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят в диапазоне доз от приблизительно 3 до приблизительно 30 мг/кг, вводимые от одного раза в день (КВД) до трех раз в день (TID).

В определенных вариантах осуществления, соединения или фармацевтические композиции настоящего изобретения вводят согласно постоянному режиму дозирования (т.е., не на основе веса), или в виде единичной дневной дозы (КВД) или в виде нескольких раздельных доз, вводимых, например, дважды в день (BID), три раза в день (TID) или четыре раза в день (QID).

В различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе, по меньшей мере, приблизительно 0,01 грамм/день (г/д), по меньшей мере, приблизительно 0,05 г/д, по меньшей мере, приблизительно 0,1 г/д, по меньшей мере, приблизительно 0,5 г/д, по меньшей мере, приблизительно 1 г/д, по меньшей мере, приблизительно 1,5 г/д, по меньшей мере, приблизительно 2,0 г/д, по меньшей мере, приблизительно 2,5 г/д, по меньшей мере, приблизительно 3,0 г/д, или, по меньшей мере, приблизительно 3,5 г/д.

В различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе не больше чем приблизительно 5 г/д, не больше чем приблизительно 4,5 г/д, не больше чем приблизительно 4 г/д, не больше чем приблизительно 3,5 г/д, не больше чем приблизительно 3 г/д, не больше чем приблизительно 2,5 г/д, или не больше чем приблизительно 2 г/д.

В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе от приблизительно 0,01 грамм в день до приблизительно 4,0 грамм в день. В определенных вариантах осуществления донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, можно вводить при дозе, для которой нижний предел диапазона представляет собой любое количество от приблизительно 0,1 мг/день до приблизительно 400 мг/день, и верхний предел диапазона может представлять собой любое количество от приблизительно 1 мг/день до приблизительно 4000 мг/день. В определенных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе от приблизительно 5 мг/день до приблизительно 100 мг/день. В различных вариантах осуществления, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, вводят при дозе от приблизительно 150 мг/день до приблизительно 500 мг/день.

Интервал дозирования для парентерального или перорального введения можно регулировать согласно требованиям пациента. Что касается более длительных интервалов между введениями, можно применять составы с продленным высвобождением или в виде депо-форм.

Донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, как описано в настоящем изобретении, можно вводить перед, по существу одновременно или после введения дополнительного терапевтического агента. Режим введения может включать предварительное лечение и/или совместное введение с дополнительным терапевтическим агентом. В данном случае, донор нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодный в фармацевтической композиции настоящего изобретения, и дополнительный терапевтический агент можно вводить одновременно, раздельно или последовательно.

Примеры режимов введения включают, без ограничения: введение каждого соединения, фармацевтической композиции или терапевтического агента последовательно; и совместное введение каждого соединения, фармацевтической композиции или терапевтического агента по существу одновременным способом (например, в виде одной единичной лекарственной формы) или в виде нескольких, отдельных единичных лекарственных форм для каждого соединения, фармацевтической композиции или терапевтического агента.

Специалисту в данной области техники ясно, что "эффективное количество" или "доза" ("уровень дозы") будет зависеть от различных факторов, таких как конкретный способ введения, режим введения, соединение и выбранная фармацевтическая композиция, а также конкретного заболевания и пациента, которого будут подвергать лечению. Например, подходящий уровень дозы может изменяться в зависимости от активности, скорости выведения и потенциальной токсичности конкретного донора нитроксила N-гидроксисульфамидного типа, пригодного в применяемой фармацевтической композиции настоящего изобретения; возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола и рациона пациента, которого будут подвергать лечению; частоты введения; другого терапевтического агента (агентов), вводимого совместно; и типа и тяжести заболевания.

4.7 Наборы, содержащие соединения или фармацевтические композиции

Настоящее изобретение обеспечивает наборы, содержащие соединение или фармацевтическую композицию, описанные в настоящем изобретении. В конкретном варианте осуществления, набор содержит соединение или фармацевтическую композицию, описанные в настоящем изобретении, каждый в сухом виде, и фармацевтически приемлемый жидкий разбавитель.

Или соединение в сухом виде, или фармацевтическая композиция в сухом виде содержит приблизительно 2,0% или меньше воды по весу, приблизительно 1,5% или меньше воды по весу, приблизительно 1,0% или меньше воды по весу, приблизительно 0,5% или меньше воды по весу, приблизительно 0,3% или меньше воды по весу, приблизительно 0,2% или меньше воды по весу, приблизительно 0,1% или меньше воды по весу, приблизительно 0,05% или меньше воды по весу, приблизительно 0,03% или меньше воды по весу, или приблизительно 0,01% или меньше воды по весу.

Фармацевтически приемлемые жидкие разбавители являются известными в данной области техники и включают, но не ограничиваются, стерильную воду, соляные растворы, водную декстрозу, глицерин, растворы глицерина и подобные. Другие примеры подходящих жидких разбавителей описаны Nairn, "Solutions, Emulsions, Suspensions and Extracts," стр. 721-752 в Gennaro, Ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Ed. (Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2000).

В одном варианте осуществления, набор дополнительно содержит инструкции для применения соединения или фармацевтической композиции. Инструкции могут быть в подходящей форме, такой как письменная или электронная форма. В другом варианте осуществления, инструкции могут представлять собой письменные инструкции. В другом варианте осуществления, инструкции содержатся в устройстве для хранения в электронном виде (например, магнитная дискета или оптический диск). В другом варианте осуществления, инструкции включают информацию относительно соединения или фармацевтической композиции и способа введения соединения или фармацевтической композиции пациенту. В другом варианте осуществления, инструкции относятся к способу применения, описанному в настоящем изобретении (например, лечения, предотвращения и/или замедления возникновения и/или развития заболевания, выбранного из сердечно-сосудистых заболеваний, ишемически-реперфузионного повреждения, легочной гипертензии и других заболеваний, чувствительных к нитроксильной терапии).

В другом варианте осуществления, набор дополнительно содержит подходящую упаковку. Когда набор содержит более одного соединения или фармацевтической композиции, соединения или фармацевтические композиции можно упаковывать в отдельные контейнеры, или смешивать в одном контейнере, когда это позволяет перекрестная реактивность и срок хранения.

5. ПРИМЕРЫ

Следующие примеры представлены для иллюстративных целей и не должны служить для ограничения объема описанного предмета.

5.1 Пример 1: синтез HNO, как определено количественным определением N₂O

Оксид одновалентного азота (N₂O) синтезируется димеризацией и дегидрированием HNO, и представляет собой самый распространенный маркер для синтеза нитроксила (Fukuto et al., Chem. Res. Toxicol. 18:790-801 (2005)). Однако нитроксил может также частично блокироваться кислородом, давая продукт, который не дает N₂O (смотри Mincione et al., J. Enzyme Inhibition 13:267-284 (1998); и Scozzafava et al., J. Med. Chem. 43:3677-3687 (2000)). Применяя или газообразный оксид одновалентного азота или соль Анжели (AS) в качестве стандарта, относительные количества N₂O, высвободившегося из соединений настоящего изобретения, исследовали анализом паровой фазы над жидкостью газовой хроматографией (ГХ).

Способ определения относительных количеств N₂O, высвободившихся из соединений настоящего изобретения, является следующим. ГХ осуществляли на Agilent газовом хроматографе, снабженном устройством ввода пробы с делением потока (10:1 деление), электрозахватным детектором и капиллярной колонкой HP-MOLSIV 30 м×0,32 м×25 мкм молекулярными ситами. Гелий применяли в качестве газообразного носителя (4 мл/мин), и азот применяли в качестве вспомогательного газа (20 мл/мин). Инжекторный нагревательный элемент и нагревательный элемент детектора поддерживали при 200°C и 325°C, соответственно. Все анализы на оксид одновалентного азота проводили с нагревательным элементом колонки, поддерживаемым при постоянной температуре 200°C.

Все введения газа осуществляли, применяя автоматический анализатор паровой фазы над жидкостью. Повышенное давление сосуда составляло 15 psi. Нагревательный элемент образца анализатора, клапан отбора проб и переходную линию поддерживали при 40°C, 45°C и 50°C, соответственно. Продолжительности стабилизации нагревательного элемента, повышения давления сосуда, заполнения петлей, уравновешивания петлей и введения образцов составляли 1,00 мин, 0,20 мин, 0,20 мин, 0,05 мин и 1,00 мин соответственно.

Во всех определениях применяли партию сосудов для парофазного анализа с номинальным объемом 20 мл с объемами, предварительно измеренными на однородность образцов (фактический объем сосудов изменялся на ≤2,0% относительное среднеквадратическое отклонение (n=6)). Средний объем сосуда для партии определяли для шести выбранных случайным образом сосудов расчетом разницы в массе между закрытым крышкой и герметичным пустым (т.е., заполненным воздухом) сосудом и закрытым крышкой и герметичным сосудом, заполненным деионизированной водой, применяя известную плотность деионизированной воды, затем усредняли. Холостые растворы получали закрытием герметичной крышкой двух сосудов, затем продуванием каждого в течение 20 секунд слабым потоком азота. Стандарты нитроксила получали закрытием герметичной крышкой сосудов, затем продуванием каждого в течение 1 минуты слабым потоком из газового баллона 3000 м.д. стандарта нитроксила.

CXL-1020 (N-гидрокси-2-метансульфонилбензол-1-сульфамид) "стандарты" получали в двух экземплярах точным взвешиванием 10±0,5 мг CXL-1020 и добавлением его к каждому 4 мл сосуду. Применяя автоматическую пипетку, 1 мл продутого азотом безводного DMF (Sigma-Aldrich) добавляли в каждый 4 мл сосуд, получая исходные растворы CXL-1020 для каждого образца, и сосуды закрывали крышками и встряхивали и/или обрабатывали ультразвуком, обеспечивая полное растворение при внешнем осмотре. Применяя автоматическую пипетку, 20 мл сосуды заполняли 5 мл PBS (продутого в течение, по меньшей мере, 30 мин аргоном перед применением), продували аргоном в течение, по меньшей мере, 20 секунд и герметично закрывали резиновой прокладкой. Применяя 50 мкл шприц, 50 мкл CXL-1020 исходного раствора вводили в каждый 20 мл сосуд, содержащий PBS.

Образцы получали следующим способом. В двух экземплярах, 18±1 мг каждого образца точно взвешивали в каждый 4 мл сосуд. Применяя автоматическую пипетку, 1 мл продутого аргоном безводного DMF добавляли в каждый 4 мл сосуд, получая исходный раствор образца для каждого образца, и сосуды закрывали крышками и встряхивали и/или обрабатывали ультразвуком, обеспечивая полное растворение при внешнем осмотре. Применяя автоматическую пипетку, в 20 мл сосуды загружали 5 мл PBS (продутого в течение, по меньшей мере, 30 мин аргоном перед применением), продували аргоном в течение, по меньшей мере, 20 секунд и герметично закрывали резиновой прокладкой. Сосуды уравновешивали в течение, по меньшей мере, 10 мин при 37°C в сухом нагревательном блоке. После этого, применяя 50 мкл шприц, 50 мкл исходного раствора образца вводили в каждый 20 мл сосуд, содержащий PBS. Затем сосуды поддерживали при 37°C в сухом нагревательном приборе в течение такого периода времени, чтобы сумма времени, проведенного в сухом нагревательном приборе плюс время, проведенное в нагревательном приборе автоматического анализатора паровой фазы над жидкостью перед введением образца, компенсировало требуемое время выдерживания.

Последовательность для автоматического введения была следующей: копия 1 холостого раствора, копия 2 холостого раствора, копия 1 стандарта N₂O, копия 2 стандарта N₂O, копия 1 стандарта CXL-1020, копия 2 стандарта CXL-1020, копия 1 образца 1, копия 2 образца 1, копия 1 образца 2, копия 2 образца 2 и т.д., заканчивая копией 3 стандарта N₂O 3 и копией 4 стандарта N₂O 4. Электронную таблицу EXCEL применяли для ввода данных, таким образом определяя и рассчитывая для каждого образца относительный выход N₂O в процентах для каждого времени выдерживания. Полученные результаты приведены в таблице 3. "-" показывает, что результаты не определяли.

Таблица 3 Результаты N2O анализа паровой фазы над жидкостью
Соединение №	Соединение	Относительный выход N2O (90 минутное выдерживание)	Относительный выход N2O (360 минутное выдерживание)
1	N-Гидрокси-5-метилфуран-2-сульфонамид	52%	-
2	N-Гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфонамид	82%	94%
3	N-Гидрокси-5-метил-1,2-оксазол-4-сульфонамид	45%	56%
4	N-Гидрокси-1-бензофуран-7-сульфонамид	64%	-
5	4-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид	48%	72%
6	N-Гидрокси-1-бензофуран-3-сульфонамид	85%	-
7	N-Гидрокси-5-метил-2-(трифторметил)фуран-3-сульфонамид	51%	-
8	N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-3-сульфонамид	77%	-
9	1-Ацетил-5-бром-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид	53%	71%
10	2-Хлор-N-гидрокси-5-(гидроксиметил)бензол-1-сульфонамид	91%	-
11	1-Ацетил-5-хлор-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид	55%	81%
12	4,5-Дихлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	29%	-
13	N-Гидрокси-6-метокси-1-бензофуран-2-сульфонамид	86%	-
14	2-Фтор-N-гидрокси-4-метилбензол-1-сульфонамид	48%	70%
15	N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-5-сульфонамид	59%	71%
16	N-Гидрокси-4-метансульфонилтиофен-2-сульфонамид	86%	-
17	5-Бром-N-гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфонамид	53%	77%
18	4-Хлор-N-гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфонамид	56%	73%
19	N,N-диэтил-5-(гидроксисульфамоил)тиофен-2-карбоксамид	77%	-
20	5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид	90%	-
21	N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонамид	73,5%	-
22	5-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид	85%	-
24	N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-4-сульфонамид	60%	69%
25	N-Гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфонамид	7%	28%
26	N-Гидроксипиридин-3-сульфонамид	73,5%	-
27	N-Гидрокси-3,5-диметил-1,2-оксазол-4-сульфонамид	35,5%	66%
28	N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-3-сульфонамид	74%	-
30	5-Хлор-N-гидрокси-1,3-диметил-1H-пиразол-4-сульфонамид	27%	-
32	N-Гидроксипиридин-2-сульфонамид	71%	-
33	3-Бром-N-гидроксипиридин-2-сульфонамид	85,5%	-
34	4-N-Гидрокситиофен-2,4-дисульфонамид	100%	-
35	N-Гидрокси-4-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонамид	100%	-
36	N-Гидрокси-5-[5-(трифторметил)-1,2-оксазол-3-ил]тиофен-2-сульфонамид	51%	-
37	6-Хлор-N-гидрокси-7H,7aH-имидазо[2,1-b][1,3]тиазол-5-сульфонамид	51%	-
38	N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфонамид	25%	-
39	4-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид	60%	75%
40	N-Гидрокси-5-(1,3-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфонамид	50%	-
41	N-Гидрокси-2,5-диметилтиофен-3-сульфонамид	13%	-
42	Метил 5-(гидроксисульфамоил)-4-метилтиофен-2-карбоксилат	91%	-
43	5-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	82%	-
44	N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-3-ил)тиофен-2-сульфонамид	81%	-
45	5-Бром-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	76%	-
46	3,5-дибром-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	95%	-
47	5-Хлор-N-гидрокси-4-нитротиофен-2-сульфонамид	58%	70%
48	3-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	82%	-
49	N-Гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфонамид	42%	68%
50	5-Хлор-N-гидрокси-2,1,3-бензоксадиазол-4-сульфонамид	31%	-
51	4-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	96%	-
52	N-Гидрокси-3,4-диметоксибензол-1-сульфонамид	11%	-
53	N-Гидрокси-2,3,5,6-тетраметилбензол-1-сульфонамид	70%	-
54	N-Гидрокси-3,5-бис(трифторметил)бензол-1-сульфонамид	2%	-
55	Метил 4-хлор-3-(гидроксисульфамоил)бензоат	87%	-
56	2-Фтор-N-гидрокси-5-метилбензол-1-сульфонамид	72%	78%
58	2-Хлор-N-гидрокси-5-[4-(гидроксиимино)пиперидин-1-карбонил]бензол-1-сульфонамид	92%	-
59	4-Хлор-3-(гидроксисульфамоил)-N-(2-метоксиэтил)-N-метилбензамид	82%	-
60	2-Гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)бензойная кислота	9%	-
61	N-Гидрокси-4-метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-сульфонамид	11%	-
62	2-Хлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфонамид	28%	-
64	4-Хлор-2-гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)-N,N-диметилбензамид	36%	-
65	5-Хлор-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид	71%	-
66	2-Хлор-N,5-дигидроксибензол-1-сульфонамид	80%	-
67	5-Бром-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид	59%	-
68	2-Хлор-N-гидрокси-5-(метоксиметил)бензол-1-сульфонамид	86%	-
69	Метил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-2-карбоксилат	100%	-
70	N-Гидрокси-2,5-диметилфуран-3-сульфонамид	6%	-
72	2-(Этансульфонил)-N-гидроксибензол-1-сульфонамид	97%	-
73	N-Гидрокси-2-(пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфонамид	97%	-
74	4-Ацетил-N-гидрокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-6-сульфонамид	17%	-
75	Метил 5-(гидроксисульфамоил)-1-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат	4%	-
76	N-[5-(Гидроксисульфамоил)-1,3-тиазол-2-ил]ацетамид	76%	-
77	N-Гидрокси-2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфонамид	14%	-
78	Этил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-3-карбоксилат	86%	-
83	N-Гидроксифуран-2-сульфонамид	42%	86%
84	N-Гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфонамид	52%	67%
85	N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-3-сульфонамид	33,5%	-
87	3-Хлор-4-фтор-N-гидроксибензол-1-сульфонамид	53%	79%
88	1-N,3-N-Дигидроксибензол-1,3-дисульфонамид	53%	100%
90	5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид	90%	-
92	N-Гидрокси-3-(трифторметокси)бензол-1-сульфонамид	59%	-
93	N-Гидрокси-4-метансульфонилбензол-1-сульфонамид	86%	-

Для соединений формулы (99), определения осуществляли, как описано выше, за исключением того, что активированные ферментом образцы также получали следующим способом: (i) точно взвешивали 50 мг эстеразы печени свиньи (PLE, E3019-20KU, неочищенная, Sigma-Aldrich) в 20 мл сосуд для парофазного анализа; (ii) применяя автоматическую пипетку, добавляли 5 мл продутого аргоном безводного PBS, получая PLE исходный раствор; (iii) сосуд закрывали крышкой и встряхивали, обеспечивая полное растворение при внешнем осмотре; (iv) образцы доноров нитроксила получали, как описано выше, за исключением того, что 4,75 мл PBS добавляли вместо 5 мл; и (v) затем, применяя автоматическую пипетку, в 20 мл сосуды загружали 250 мкл PLE исходного раствора перед добавлением образца. Последовательность автоматического введения была следующей: копия 1 холостого раствора, копия 2 холостого раствора, копия 1 стандарта N₂O, копия 2 стандарта N₂O, копия 1 стандарта CXL-1020, копия 2 стандарта CXL-1020 2, копия 1 образца 1 (без PLE), копия 2 образца 1 (без PLE), копия 1 образца 1 (с PLE, копия 2 образца 1 (с PLE), копия 1 образца 2 (без PLE), копия 2 образца 2 (без PLE), копия 1 образца 2 (без PLE), копия 2 образца 2 (без PLE) и т.д., заканчиваясь копией стандарта N₂O и копией 4 стандарта N₂O.

Другой способ для определения относительных количеств N₂O, высвободившихся из соединений настоящего изобретения, является следующим. ГХ осуществляли на приборе Varian CP-3800, снабженном 1041 ручным инжектором, электронозахватным детектором и 25 м капиллярной колонкой с 5 Å молекулярными ситами. Азот 5.0 степени чистоты применяют и в качестве носителя (8 мл/мин) и в качестве вспомогательного газа (22 мл/мин). Термонагревательный элемент инжектора и термонагревательный элемент детектора поддерживали при 200°C и 300°C, соответственно. Все анализы на оксид одновалентного азота осуществляли с термонагревательным элементом колонки, поддерживаемым при постоянной температуре 150°C. Все введения газа осуществляли, применяя 100 мкл газонепроницаемый шприц с блокировкой образца. Образцы получали в 15 мл желтых сосудах для парофазного анализа с объемами, предварительно измеренными на однородность образцов (фактический объем сосуда изменялся в диапазоне 15,19-15,20 мл). В сосуды загружали 5 мл PBS, содержащего ангидрид диэтилентриаминпентауксусной кислоты (DTPA), продутый аргоном и герметично закрытый резиновой прокладкой. Сосуды уравновешивали в течение, по меньшей мере, 10 минут при 37°C в нагревателе сухого блока. 10 мМ исходный раствор AS получали в 10 мМ гидроксиде натрия, и растворы доноров нитроксила получали или в ацетонитриле или в метаноле и применяли непосредственно после получения. Из данных исходных растворов, 50 мкл вводили в отдельные термически уравновешанные сосуды для парофазного анализа, применяя 100 мкл газонепроницаемый шприц с блокировкой образца, получая конечные концентрации субстрата 0,1 мМ. Затем субстраты выдерживали в течение 90 минут или 360 минут. Затем равновесную паровую фазу (60 мкл) отбирали и вводили пять последовательных раз в ГХ прибор, применяя газонепроницаемый шприц с блокировкой образца. Данный способ повторяли для двух или более сосудов для донора.

5.2 Пример 2: стабильность in vitro доноров нитроксила в плазме

Определенные соединения из таблиц 1 и 2 и CXL-1020 испытывали на их стабильность в фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) и плазме. Система анализа содержала (i) PBS или плазму крыс, собак или людей (по меньшей мере, 3 донора, мужские особи, объединенная) при pH 7,4, и (ii) для испытаний, проводимых в плазме, антикоагулянт (гепарин натрия или цитрат натрия). Каждое испытуемое соединение (5 мкМ) выдерживали в PBS или плазме при 37°C на THERMOMIXER^® при встряхивании. Три образца (n=3) отбирали при каждом из семи моментов отбора проб: 0, 10, 30, 60, 90, 180 и 360 минут. Образцы сразу же смешивали с 3 объемами (т.е. 3 объемами PBS или плазмы) ацетонитрила, содержащего 1% муравьиную кислоту и внутренний стандарт, прекращая реакцию. AB SCIEX API 3000 LC-MS/MS анализ испытуемых соединений проводили без стандартной кривой. Периоды полувыведения (T_1/2) испытуемого соединения определяли из графиков остаточных величин в процентах, применяя отношение отклика детектора, выраженного в виде площади пиков. Определенные периоды полувыведения представлены в таблице 4. Для соединений, испытуемых несколько раз, величина, приведенная в таблице, представляет собой среднее повторяемых анализов.

Таблица 4 Периоды полувыведения (T1/2) доноров нитроксила
Соединение №	Соединение	T ½ (минут) PBS	T ½ (минут) крыса	T ½ (минут) собака	T ½ (минут) человек
CXL-1020	N-Гидрокси-2-метансульфонилбензол-1-сульфонамид	2			2
1	N-Гидрокси-5-метилфуран-2-сульфонамид	68	40	25	65
2	N-Гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфонамид	50	20	33	37
3	N-Гидрокси-5-метил-1,2-оксазол-4-сульфонамид	98	37	38	71
4	N-Гидрокси-1-бензофуран-7-сульфонамид	149
5	4-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид	136	104	28	24
7	N-Гидрокси-5-метил-2-(трифторметил) фуран-3-сульфонамид	224		56
8	N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-3-сульфонамид	42		27
9	1-Ацетил-5-бром-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид	2	>360
10	2-Хлор-N-гидрокси-5-(гидроксиметил) бензол-1-сульфонамид	5
11	1-Ацетил-5-хлор-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонамид	5	<5
12	4,5-Дихлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	20
13	N-Гидрокси-6-метокси-1-бензофуран-2-сульфонамид	42
14	2-Фтор-N-гидрокси-4-метилбензол-1-сульфонамид	75	13
15	N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-5-сульфонамид	63
16	N-Гидрокси-4-метансульфонилтиофен-2-сульфонамид	20
17	5-Бром-N-гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфонамид	59	>360
18	4-Хлор-N-гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфонамид	56	>360
19	N,N-диэтил-5-(гидроксисульфамоил)тиофен-2-карбоксамид	44
20	5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид	25	7
21	N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонамид	39	36
22	5-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид	33	23
23	N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-2-сульфонамид	66
24	N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-4-сульфонамид	37	14
25	N-Гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфонамид	86
26	N-Гидроксипиридин-3-сульфонамид	53	29		45
27	N-Гидрокси-3,5-диметил-1,2-оксазол-4-сульфонамид	225	75		99
28	N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-3-сульфонамид	136
30	5-Хлор-N-гидрокси-1,3-диметил-1H-пиразол-4-сульфонамид	385
31	N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-4-сульфонамид	745
32	N-Гидроксипиридин-2-сульфонамид	61	32
35	N-Гидрокси-4-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонамид	58	19
39	4-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид	30	29
47	5-Хлор-N-гидрокси-4-нитротиофен-2-сульфонамид	11	<5
49	N-Гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфонамид	87	13
51	4-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	15	7
56	2-Фтор-N-гидрокси-5-метилбензол-1-сульфонамид	34	8
83	N-Гидроксифуран-2-сульфонамид	37	43	38	16
84	N-Гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфонамид	125	65	55	60
85	N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-3-сульфонамид	59		72
86	5-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид	38		12	18
87	3-Хлор-4-фтор-N-гидроксибензол-1-сульфонамид	101	49	24
88	1-N,3-N-Дигидроксибензол-1,3-дисульфонамид	38		16
89	3-Бром-N-гидроксибензол-1-сульфонамид	76	38,4	34
90	5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфонамид	25,1	6,8	21
91	N-Гидрокси-3,5-диметил-1,2,-оксазол-4-сульфонамид	211	176	54,4
92	N-Гидрокси-3-(трифторметокси) бензол-1-сульфонамид	58	35	19	40
92	N-Гидрокси-3-(трифторметокси)бензол-1-сульфонамид	57,9	35,1	18,5
93	N-Гидрокси-4-метансульфонилбензол-1-сульфонамид	68	38		35
95	3,4-Дихлор-N-гидроксибензол-1-сульфонамид	>360	>360
95	3,4-Дихлор-N-гидроксибензол-1-сульфонамид	>360	>360

Для измерения периодов полувыведения соединения формулы (99), исходный раствор эстеразы печени свиньи (PLE) добавляли к PBS или плазме перед добавлением указанного соединения.

5.3 Пример 3: Гемодинамическая эффективность доноров нитроксила у здоровых собак и собак с сердечной недостаточностью (модель со стимуляцией тахикардии)

5.3.1 Материалы и способы

Эффекты на сердечно-сосудистую систему доноров нитроксила исследовали посредством анализа кривой давление-объем (PV) (петли) на бодрствующих, удерживаемых на ремне собаках породы бигль. Животных обеспечивали свободным доступом к питьевой воде и покупному корму для собак в стандартных лабораторных условиях. Флуоресцентное освещение обеспечивали автоматическим таймером в течение приблизительно 12 часов в день. В отдельных случаях, цикл ночи прерывали периодически из-за активностей, связанных с исследованием. Температуру и влажность контролировали и регистрировали ежедневно и поддерживали в максимальной возможной степени между 64°F и 84°F и 30% - 70%, соответственно. Собакам позволяли акклиматизироваться в течение, по меньшей мере, 1 недели перед хирургической операцией. После хирургической операции и восстановления, животным позволяли акклиматизироваться, удерживая на ремне в течение периода времени вплоть до 4,5 часов. Животных содержали натощак в течение ночи перед хирургической операцией.

Хирургический способ

Анестезия

Имплантируемый венозный катетер помещали в периферическую вену (например, краниальную) для введения анестезирующего средства. Общую анестезию вызывали внутривенно (болюс) бупренорфином (приблизительно 0,015 мг/кг), с последующим внутривенным болюсом пропофола (приблизительно 6 мг/кг). Кроме того, профилактический антибиотик (цефазолин 20-50 мг/кг внутривенно) вводили после стимуляции. Трахеальную интубационную трубку с надувной манжетой помещали и применяли для механического вентилирования легких 100% 0₂ аппаратом искусственной вентиляции легких животных с переключением по объему (приблизительно 12 вдохов/минута с дыхательным объемом приблизительно 12,5 мл/кг) для того, чтобы поддерживать PaCO₂ величины в физиологическом диапазоне. Анестезию поддерживали ингалируемым изофлураном (1% - 3%).

Сердечно-сосудистый прибор

После достижения стабильного (хирургического) уровня анестезии, проводили левостороннюю торакотомию (в строгих асептических условиях), и каждое животное снабжали на длительный срок кристаллами для ультразвуковой микрометрии, обеспечивая левовентрикулярные (LV) размеры/объем. Кроме того, заполненный жидкостью катетер и полупроводниковый монометр помещали в левый желудочек для контролирования давления. Заполненные жидкостью катетеры помещали в правый желудочек (RV) и аорту (Ao) для контролирования давления/введения испытуемого изделия. Гидравлический (In-Vivo Metrics) окклюдер помещали/прикрепляли вокруг нижней полой вены (IVC) для того, чтобы обеспечить ее контролируемое сужение для получения кривых LV давление-объем в процессе гетерометрической саморегуляции. Катетеры/проволоку асептически туннелировали и выводили наружу между лопатками. В процессе исследования, заполненные жидкостью катетеры регулярно (по меньшей мере, один раз в неделю) промывали блокирующим раствором для того, чтобы предотвратить тромбообразование и рост бактерий (2-3 мл тауролидин-цитратного раствора, TCS-04; Access Technologies).

Имплантация электрокардиостимулятора

После введения сердечно-сосудистого прибора, правую яремную вену аккуратно обнажали и канюлировали биполярным водителем ритма/катетером (CAPSUREFIX^® Novus; Medtronic). При флюороскопическом контроле, данный водитель ритма выдвигали нормоградно в правый желудочек и активно прикрепляли (ввинчивали) в апикальный эндокард. Проксимальный конец водителя прикрепляли к устройству, задающему ритм (Kappa 900; Medtronic). Впоследствии, электрокардиостимулятор помещали/закрепляли в подкожном кармане на шее.

Поскольку сердце обнажали торакотомией, биполярный электрод кардиостимулятора закрепляли в средней части сердечной мышцы правого желудочка. Данный водитель ритма туннелировали/выводили наружу между лопатками и применяли в сочетании с внешним генератором импульса/электрокардиостимулятором. Имплантированный эндокардиальный электрокардиостимулятор применяли в качестве дублера для внешнего/эпикардиального электрокардиостимулятора.

Восстановление

Перед закрытием грудной клетки после торакотомии, плевральную дренажную трубку помещали для отвода любой жидкости и/или газа, которые накопились в результате хирургической операции. Жидкость из трубки отсасывали дважды в день до того, как количество удаленной жидкости составляло меньше чем 35 мл на отсасывание в течение приблизительно 24 часового периода. Затем плевральную дренажную трубку удаляли.

Всем животным вводили профилактический антибиотик (цефазолин 20-50 мг/кг внутривенно) и обезболивающее средство (мелоксикам при приблизительно 0,2 мг/кг внутривенно). В случае необходимости, также вводили дополнительное обезболивающее средство, которое включало фентаниловый пластырь (25-50 мкг/час). Все хирургические разрезы закрывали слоями; подлежащую мускулатуру закрывали рассасывающимися нитями, и кожу закрывали скрепками.

После операции животным позволяли восстановиться в течение, по меньшей мере, 14 дней. Цефалексин (20-50 мг/кг) вводили перорально два раза в день в течение, по меньшей мере, 7 дней, и мелоксикам (0,1 мг/кг) вводили SID перорально или подкожно в течение, по меньшей мере, 2 дней после хирургической операции. В течение всей фазы восстановления, животных ежедневно наблюдали на стандартные признаки восстановления, и места разрезов наблюдали на любые признаки потенциальной инфекции. Животных, страдающих от боли, недомогания и/или инфекций, отправляли на осмотр лечащего ветеринара и руководителя исследования. Скобки для кожных разрезов не удаляли в течение, по меньшей мере, 7 дней после хирургической операции.

Стимуляция сердечной недостаточности

После восстановления от хирургической операции и/или достаточного периода выведения препарата из организма после дозирования донора нитроксила, животных подвергали 3-недельному протоколу искусственного ускорения сердечного ритма (210 м.д.), нацеленному на стимулирование дисфункции/ремоделирования левого желудочка, соответствующего синдрому сердечной недостаточности. Вкратце, посредством имплантированного электрокардиостимулятора/водителя ритма в правый желудочек, желудочек (желудочки) асинхронно и непрерывно стимулировали при 210 ударов в минуту (количество ударов в минуту). Ремоделирование левого желудочка (и стимуляцию сердечной недостаточности) подтверждали эхокардиографическими (например, фракция выброса EF снижалась от приблизительно 60% до значения приблизительно 35%, расширение левого желудочка LV) и нейрогуморальными (например, оценкой N-концевого мозгового натрийуретического пропептида (NT proBNP) до больше чем 1800 пМ/л относительно исходного значения приблизительно 300 пМ/л) изменениями после приблизительно 3 недельного стимулирования. Эхокардиографы и образцы крови отбирали в отсутствии стимулирования (в течение, по меньшей мере, 15 минут).

5.3.2 Результаты

Оценка гемодинамической эффективности

Животных (нормальных или с сердечной недостаточностью) исследовали в процессе лечения и плацебо (контроль) и донором нитроксила (или CXL-1020 или соединением формулы (1), (2) (83), (84) или (85)). При каждом периоде дозирования, удерживаемых на ремне животных в сознании непрерывно контролировали в течение вплоть до двух-трех часов. После гемодинамической стабилизации, начинали вливание среды. Вскоре после этого, первоначальную нагрузку на левый желудочек резко снижали посредством краткой окклюзии полой вены (посредством временного расширения сосудистого окклюдера) для того, чтобы получить набор кривых/петель давление-объем; проводили вплоть до трех окклюзий, обеспечивая гемодинамическое восстановление между испытаниями. Вливание среды продолжали, и через 30 минут собирали другой (исходный) набор гемодинамических данных. После сбора исходных гемодинамических данных, начинали вливание соединения, являющегося донором нитроксила, которое испытывают, и печатные гемодинамические/функциональные параметры получали/проводили при вплоть до четырех (4) моментов времени, выбранных из следующих: через 30, 60, 90, 120 и 180 минут после начала вливания среды/испытуемого соединения. Для группы, обрабатываемой плацебо, или группы для регулирования времени, каждому животному вводили раствор подходящего плацебо в течение вплоть до 180 минут. Во всех случаях, испытуемое соединение доставляли при постоянной скорости внутривенного вливания 1 мл/кг/час и сравнивали при молярном эквивалентном уровне дозы или приблизительно двух третьих молярного эквивалентного уровня дозы.

Полученные в результате данные по объему и давлению левого желудочка анализировали для того, чтобы получить отношения, представляющие сократительное и энергетическое состояние сердечной мышцы.

Регистрировали систолическое артериальное давление (SAP), диастолическое артериальное давление (DAP) и среднее артериальное давление (MAP). Механические и/или геометрические показатели для левого желудочка получали из давления (ESP, EDP, dP/dt макс/мин, константы времени расслабления-тау [на основе моноэкспоненциального уменьшения ненулевой асимптоты]) и объема (конечно-систолического объема (ESV), конечно-диастолического объема (EDV), сигнала ударного объема (SV)). Кроме того, следующие параметры получали из данных зависимости давление-объем для левого желудочка (PV петли), полученные в течение коротких периодов снижения предварительной нагрузки: область давление-объем (PVA) и систолическая работа (SW), соотношения конечно-систолического (ESPVR) и конечно-диастолического (EDPVR) давления и объема, и соотношения конечно-систолического давления и рабочего объема (артериальная эластичность (Ea)). Репрезентативные данные, полученные в результате исследований на нормальных собаках и собаках с сердечной недостаточностью, показаны в таблице 5 и таблице 6.

Репрезентативные данные для собак с сердечной недостаточностью также показаны на фигуре 1. Снижение SVR (системного сосудистого сопротивления) коррелирует с расширением кровеносных сосудов.

Таблица 5 Гемодинамические параметры для доноров нитроксила для здоровых собак
	Соединение
	Контроль	CXL-1020	(1)	(2)	(83)	(84)
Уровень дозы (мкмоль/ кг/мин)	0	100	50	100	65	77
Количество животных	3	6	8	4	4	4
HR	-2,21± 1,51	6,71± 4,72	-4±2	-6,17± 5,58	2,89± 2,94	4,31± 2,98
ESP	-1,8± 0,58	-17,79± 3,09	-18±2	-15,22± 2,39	-21,99± 3,32	-16,85± 2,33
EDV	2,62± 0,42	-20,51± 7,63	-6±2	-17,41± 1,58	-16,88± 1,69	-10,99± 2,33
Tau	11,14± 1,15	-6,58± 4,53	-6±1	-6,40± 7,11	-10,10± 1,56	-9,60± 6,06
SW	-2,80± 1,26	-13,96± 5,51	-11±4	-17,56± 2,66	-19,18± 6,70	-13,98± 1,14
ESPVR	-3,20± 1,15	28,25± 8,69	19±1	25,87± 5,04	29,33± 8,36	50,71± 8,14
PRSW	-0,78± 0,38	12,60± 2,96	12±1	12,88± 1,12	19,79± 3,39	17,70± 2,35
Сокращения: HR: Частота ударов сердца. Повышенная HR или в результате рефлекторной реакции на низкое кровяное давление или в результате первичного эффекта лекарственного средства на сердце является неблагоприятной. ESP: Конечно-систолическое давление - аналогично MAP ниже. EDP или LVEDP: Конечно-диастолическое давление (левовентрикулярное). Коррелирует с давлением в легочной артерии. Понижение указывает на ослабление легочной гиперемии (ключевая задача терапии острой сердечной недостаточности). Tau: коэффициент расслабления миокарда или расслабления сердца в диастоле. Снижение является положительным и указывает на улучшенные диастолические показатели. SW: систолическая работа. Мера того, как много работы осуществляет сердце для создания указанной степени прямотока. ESPVR: отношение конечно-систолического давления и объема. Мера инотропии/сокращаемости (ключевая задача терапии острой сердечной недостаточности). Повышение указывает на улучшенную работоспособность и эффективность сердца. PRSW: Отношение между затраченной на цикл сокращения работой и конечным диастолическим объемом цикла сердечных сокращений - аналогична ESPVR выше. SV: Рабочий объем. Количество крови, выбрасываемое из левого желудочка с каждым ударом сердца. Инотроп должен повышать его, давая идентичные условия загрузки. MAP или MBP: среднее артериальное давление или среднее кровяное давление. Небольшие снижения являются положительными и свидетельствуют о расширении кровеносных сосудов. EDV или LVEDV: конечно-диастолический объем (левый вентрикулярный). Показатель степени заполнения в диастоле. Снижение указывает на снижение объемной перегрузки.

Таблица 6 Гемодинамические параметры для доноров нитроксила для собак с сердечной недостаточностью
Соединение	Контроль	CXL-1020	(1)	(2)	(83)	(84)
Уровень дозы (мкмоль/ кг/мин)	0	100	75	100	65	77
Количество животных	3	6	6	4	4	4
ESP	3,89± 2,11	-14,78± 3,24	-17±1	-13,83± 3,30	-18,52± 2,59	-13,72± 2,83
HR	-5,08± 5,83	-0,23± 2,25	-6±2	-1,36± 2,06	0,05± 1,25	3,72± 2,45
EDV	0,86± 0,86	-12,03± 3,72	-9±2	-3,26± 1,05	-4,91± 0,57	-13,43± 4,63
SW	1,83± 1,87	-12,01± 4,24	10±5	-9,41± 2,84	-9,63± 1,70	-5,96± 1,58
Tau	4,05± 4,72	-17,27± 1,39	-16±4	-12,51± 2,72	-18,32± 3,06	15,61± 1,58
ESPVR	-3,14± 0,87	45,42± 16,48	29±1	22,84± 5,69	38,06± 8,79	51,01± 5,85
PRSW	-0,88± 0,68	21,97± 3,79	22±1	17,91± 1,47	14,90± 2,27	25,03± 2,52
	Сокращения: HR, частота ударов сердца; ESP, конечно-систолическое давление; EDV, конечно-диастолический объем; Tau, постоянная времени для релаксации; SW, систолическая работа; ESPVR, соотношение конечно-систолического давления и объема; PRSW, отношение между затраченной на цикл сокращения работой и конечным диастолическим объемом цикла сердечных сокращений.

Результаты, например, на фигуре 1, показывают, что соединения формул (1), (2), (83), (84) и (85) обладают сравнимой гемодинамической активностью с CXL-1020 в моделях и нормальных собак и собак с сердечной недостаточностью.

5.4 Токсикологические исследования доноров нитроксила

5.4.1 Пример 4: In Vivo испытания CXL-1020

В процессе испытаний in vivo донора нитроксила CXL-1020 (N-гидрокси-2-метансульфонилбензол-1-сульфамида), 14-дневное испытание проводили для оценки переносимости собаками, обработанными непрерывным вливанием CXL-1020 при уровнях доз вплоть до 90 мкг/кг/мин. В данном первом исследовании обнаружили, что CXL-1020 переносился при введении при уровне дозы 60 мкг/кг/мин. Однако, неожиданно оказалось, что клинические патологические изменения, соответствующие процессу воспаления, что отражено в изменениях маркеров воспаления клинической патологии, наблюдали при уровне дозы 60 мкг/кг/мин. Для дополнительного исследования данного нежелательного побочного эффекта, начинали дополнительное 14-дневное испытание на собаках. Дополнительное исследование требовало прекращения уже через 4 дня из-за возникновения других нежелательных побочных эффектов: неожиданного возникновения заметного опухания и воспаления задних конечностей собак при хирургической имплантации инфузионных катетеров, что периодически препятствовало нормальному функционированию конечностей; нарушения окраски кожи в паховой области; сниженной активности; отсутствия аппетита; и в группе с наибольшим дозированием, кожу, холодную на ощупь.

Для определения причины воспаления и опухания задних конечностей, серию поисковых исследований с 72-часовым непрерывным вливанием проводили в течение следующих 6 месяцев. Результаты данных исследований показали, что CXL-1020 при введении в составе с pH 4 и 1:1 молярном соотношении CXL-1020:CAPTISOL^®, разбавленном в 5% растворе декстрозы в воде, вызывал клинические патологические изменения, соответствующие процессу воспаления при уровнях доз, больших чем или равных 0,03 мкг/кг/мин на собаках. Воспаление сосудов наблюдали вокруг места введения катетера в бедренную вену (15 см вверх от кончика катетера), у кончика катетера и вниз от кончика катетера. Первое место воспаления, место введения катетера, вызывало опухание и воспаление задних конечностей собак, наблюдаемые в рано прекращенном проспективном исследовании. Повышение pH инфузата с 4 до 6 снижало воспаление, улучшая профиль воспаления приблизительно в 3 раза (смотри фигуру 4). Однако заметные нежелательные побочные эффекты все еще присутствовали, когда CXL-1020 вводили собакам при уровнях доз, больших чем или равных 3 мкг/кг/мин.

Для того, чтобы избежать побочных эффектов, связанных с местом введения катетера, и оценки, является ли воспаление сосудов результатом конструкции имплантируемого катетера, проводили исследование с 24-часовым непрерывным вливанием собакам, применяя подкожный катетер, помещенный в периферическую (подкожную латеральную) вену. После 6 часового вливания, наблюдали заметную эдему в верхней части передних конечностей, вниз от кончика катетера. После 24 часового вливания обнаруживали клинические патологические изменения, аналогичные клиническим патологическим изменениям, наблюдаемым в предшествующих исследованиях, применяя имплантируемый центральный катетер. Также обнаруживали микроскопическую патологию, показывающую тяжелый тромбофлебит у кончика катетера и развивающуюся с градиентом снижения степени тяжести вниз от кончика катетера.

Для определения будет ли локальный флебит возникать у людей при более длительном дозировании, проводили более длительное исследование на здоровых добровольцах. Более длительное исследование включало исследование с увеличением дозы, в котором группе из 10 добровольцев последовательно вводили 24-часовым вливанием CXL-1020 при уровнях доз 10, 20, и 30 мкг/кг/мин с оценкой безопасности в каждой группе. Каждая группа состояла из 2 обработок плацебо и 8 активными соединениями с резервной парой 1 активного соединения и 1 плацебо, с последующей основной группой обработкой 1 плацебо и 7 активными соединениями. Вливание осуществляли через подкожный катетер, введенный в вену предплечья. Катетер переносили на противоположную руку после 12 часов вливания. Было обнаружено, что уровень дозы 10 мкг/кг/мин в течение 24 часов переносится хорошо. Во второй группе, которой вводили дозу 20 мкг/кг/мин в течение 24 часов, отсутствовали нежелательные результаты у 2 добровольцев, обрабатываемых плацебо, но имелись слабовыраженные признаки (или клинические признаки и/или изменения клинической патологии) у всех 8 субъектов, соответствующие флебиту места введения. На основе данных результатов, более длительное исследование безопасности останавливали.

Поисковые исследования продолжали для определения причины нежелательных побочных эффектов CXL-1020 при больших, но все еще клинически пригодных, дозах. Исследования, проводимые с побочным продуктом CXL-1020, молекулой, которая остается после выделения нитроксила, были отрицательными, показывая, что побочные эффекты CXL-1020 объясняются или исходным соединением, CXL-1020, или полученным из него HNO. Исследования проводили с альтернативными донорами нитроксила, которые являлись структурно неродственными CXL-1020, но обладали аналогичными периодами полувыведения для предоставления нитроксила (периоды полувыведения приблизительно 2 минут). Во всех случаях наблюдали локальные сосудистые побочные эффекты в районе кончика катетера. Данные результаты указывают на то, что воспаление вызвано нитроксилом, который быстро высвобождался из доноров нитроксила с коротким периодом полувыведения.

5.4.2 Пример 5: доноры нитроксила N-гидроксисульфамидного типа с более длительным периодом полувыведения обладают улучшенным токсикологическим профилем по сравнению с CXL-1020

Исследования проводили на мужских и женских особях собак породы бигль. Животных обеспечивали свободный доступ к питьевой воде и продажному корму для собак в стандартных лабораторных условиях. Животных содержали натощак перед отбором образцов крови, как указано протоколом исследования. Флуоресцентное освещение обеспечивали автоматическим таймером в течение приблизительно 12 часов в день. В отдельных случаях, цикл ночи прерывали периодически из-за активностей, связанных с исследованием. Температуру и влажность контролировали и регистрировали ежедневно и поддерживали в максимальной возможной степени между 64°F и 84°F и 30% - 70%, соответственно. Собакам позволяли акклиматизироваться в течение, по меньшей мере, 1 недели перед хирургической операцией. В течение данного периода, животных еженедельно взвешивали и наблюдали относительно общего состояния здоровья и любых признаков заболевания. Животным позволяли акклиматизироваться, надевая корсет, по меньшей мере, на три дня перед введением дозы.

Кроме того, животным также позволяли акклиматизироваться, надевая елизаветинский воротничок (e-воротничок) на период акклиматизации в корсете.

Хирургический способ и способ дозирования

Животным вводили катетер за день до введения дозы. Подкожный катетер помещали (применяя асептический способ и стерильные бинты) в подкожную латеральную вену конечности, дистальную к локтю. Животным позволяли свободно перемещаться в их клетках в процессе непрерывного вливания дозы. Для облегчения непрерывного вливания дозы, периферический катетер присоединяли к прослойке, находящейся ниже собачьего корсета, и затем присоединяли к прикрепленной системе для вливания. Для того чтобы препятствовать доступу/удалению животными помещенного периферически подкожного катетера, место введения катетера перевязывали, применяя ветеринарный бинт и e-воротничок помещали на животных на период обработки (т.е. период с введенным катетером). В течение периода предварительной обработки через венозный катетер осуществляли непрерывное вливание в количестве приблизительно 2-4 мл/ч 0,9% хлорида натрия для инъекции, USP (соляной раствор), поддерживая проходимость катетера. Перед введением дозы, систему для вливания предварительно заполняли (медленное болюсное вливание) соответствующим раствором для дозирования, обеспечивая начало дозирования, как только начинал работать насос для вливаний. Инфузионную систему соединяли с контейнером, содержащим контрольное или испытуемое соединение, и начинали вливание. Испытуемые композиции вводили непрерывным вливанием при заранее определенной постоянной скорости вливания (1 или 2 мл/кг/ч) в течение 24 часов и сравнивали с молярными эквивалентными уровнями дозы.

Клиническое наблюдение, клиническая патология и микроскопическая патология

Тщательный клинический осмотр каждого животного проводили дважды в день, и измерения температуры тела и образцы крови для клинической патологии отбирали у всех животных перед введением дозы и через 6 часов, 12 часов, 24 часа и 72 часа после начала вливания композиции. При завершении исследования, всех животных подвергали эвтаназии во время их запланированной некропсии и проводили полное исследование вскрытых трупов животных. Отобранные ткани собирали, фиксировали и хранили для предполагаемого будущего микроскопического исследования. Подкожную латеральную вену, содержащую катетер для вливания, разрезали интактной в сочетании с плечевой веной и исследовали по всей ее длине. Место кончика катетера помечали на нефиксированном образце. После фиксации, образец обрезали и обрабатывали на предметном стекле, обеспечивая поперечные гистологические срезы, представляющие кончик катетера и окружающие ткани, и проксимальные и дистальные к кончику катетера (т.е. 1 см дистальные кончику катетера, в районе кончика катетера, и 1, 5, 10, 15 и 20 см проксимальные кончику катетера). По сравнению с кончиком катетера, "проксимальный" определяли как более близкий к сердцу, и "дистальный" определяли как более удаленный от сердца.

Оценка безопасности

Клинические патологические изменения, соответствующие воспалительному синдрому, наблюдали при некоторых уровнях дозы соединений формул (1), (2) (83), (84), (85), (86) и CXL-1020. Каждое соединение формулировали с CAPTISOL^® (7% мас./об.) в стерильной воде при pH 4. Самыми чувствительными биомаркерами воспаления были: (1) количество лейкоцитов (WBC, полученное в виде (количество лейкоцитов)/мкл умножением величин в крайне правой части фигуры 2 на 103), (2) концентрация фибриногена (приведенная в сг/дл в крайне правой части фигуры 2) и (3) концентрация C-реактивного белка (CRP) (приведенная в мг/л в крайне правой части фигуры 2). Степень тяжести изменений зависела от вида соединений и уровня дозы, при которой вводили соединение (фигура 2). На фигуре 2, балл в диапазоне от 0 (низкая степень тяжести) до 2 (высокая степень тяжести) присваивали каждому из данных биомаркеров воспаления согласно крайне правой части на данной фигуре. Суммарный балл рассчитывали из суммы баллов данных маркеров. Получали NOAEL, определенную на основе данных маркеров клинической патологии и выраженную в виде молярных эквивалентных уровней доз (мкг/кг/мин) относительно CXL-1020 в таблице 7.

Таблица 7 Максимальная доза, не вызывающая обнаруживаемого вредного воздействия на здоровье человека (NOAEL), доноров нитроксила
Соединение	NOAEL (мкг/кг/мин) (фактическая)
N-Гидрокси-2-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (CXL-1020)	<0,03
N-Гидрокси-5-метилфуран-2-сульфонамид (1)	>20
N-Гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (2)	3
N-Гидроксифуран-2-сульфонамид (83)	3
N-Гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфонамид (84)	10
N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-3-сульфонамид (85)	3
5-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (86)	3

Для CXL-1020 наблюдали заметное повышение WBC, фибриногена и CRP, даже при концентрациях всего лишь 0,03 мкг/кг/мин. Все соединения с большими периодами полувыведения формул (1), (2) (83), (84), (85) и (86) имели NOAEL при дозах, существенно больших, чем доза для CXL-1020. Соединение формулы (1) имело самый подходящий токсикологический профиль, не показывая побочных эффектов при дозах, по меньшей мере, вплоть до 20 мкг/кг/мин. Это представляет собой более чем 660-кратное улучшение соединения формулы (1) по сравнению с CXL-1020.

В совокупности, полученные результаты указывают на то, что вливание CXL-1020 вызывает воспалительный синдром, который по существу снижается для доноров нитроксила настоящего изобретения с большим периодом полувыведения.

Полученные результаты указывают на то, что васкулярная токсичность, связанная с CXL-1020, у кончика катетера, вниз от кончика катетера и при определенных обстоятельствах, вверх от кончика катетера, являлась результатом локального воспаления, вызванного высвобождением нитроксила. Более того, предположили, что воспаление можно существенно уменьшить в данных областях, применяя доноры нитроксила с большим периодом полувыведения. Подтверждение этого получали оценкой доноров нитроксила посредством подробной гистопатологии сосудистой системы в месте введения в бедренную вену (15 см дистально к кончику катетера), вдоль следа катетера к кончику катетера и вниз от кончика на 20 см. Полученные результаты микроскопической патологии эдемы, кровоизлияния, васкулярного воспаления и периваскулярного воспаления определяли при конкретных уровнях доз доноров нитроксила.

Фигура 3 представляет собой "тепловую карту", показывающую суммарный балл полученных данных микроскопической патологии, в которой степень тяжести васкулярного воспаления, кровоизлияния, тромбов и васкулярной дегенерации/регенерации оценивали в баллах в срезах сосудистой системы, как описано выше.

Полученные данные по (1) эдеме, (2) васкулярному и периваскулярному воспалению и (3) кровоизлиянию оценивали в баллах (каждому приписывали величины, выбранную из: 0=в нормальных пределах; 1=минимальное; 2=мягкое; 3=умеренное; 4=тяжелое) в срезах сосуда, начинающегося 1 см дистально (вверх) от кончика катетера, направленного 20 см проксимально (вниз) от кончика катетера. Суммарный балл рассчитывали из суммы данных баллов полученных результатов. На фигуре 3 суммарный гистологический балл находился в диапазоне от 0-2 (низкая степень тяжести) до 11-12 (высокая степень тяжести). Наблюдали, что степень тяжести микроскопических изменений и расстояние от кончика катетера, на котором их обнаруживали, зависят от типа донора нитроксила и уровня дозы, при которой вводили донор нитроксила. Величины NOAEL, определенные на основе данных маркеров микроскопической патологии для серии доноров нитроксила, выраженные в молярных эквивалентных уровнях дозы мкг/кг/мин) относительно CXL-1020, приведены в таблице 8.

Таблица 8 Максимальная доза, не вызывающая обнаруживаемого вредного воздействия на здоровье человека (NOAEL), доноров нитроксила
Соединение	NOAEL (мкг/кг/мин) (молярный эквивалент CXL-1020)
N-Гидрокси-2-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (CXL-1020)	<3
N-Гидрокси-5-метилфуран-2-сульфонамид (1)	≥180
N-Гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (2)	≥180
N-Гидроксифуран-2-сульфонамид (83)	≥90
N-Гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфонамид (84)	≥60
N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-3-сульфонамид (85)	≥180
5-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (86)	≥180

Полученные результаты, представленные в таблице 8, показывают то, что доноры нитроксила с большим периодом полувыведения (например, соединения формул (83), (84), (85) и (86)) имеют по существу улучшенный токсикологический профиль по сравнению с CXL-1020. Профиль побочных эффектов при любой дозе снижался по степени тяжести в виде функции расстояния от кончика катетера, и степень тяжести васкулярных побочных эффектов снижалась со снижением дозы. Полученные результаты подтверждают больший резерв безопасности для соединений формул соединения формул (83), (84), (85) и (86), который можно перевести в по существу улучшенный терапевтический индекс на людях, и пригодность для внутривенного введения при терапевтически эффективных дозах и уровнях доз.

5.5 Пример 6: повышение pH улучшает токсикологический профиль

Три донора нитроксила (CXL-1020, соединение (2) и соединение (86)) формулировали при pH 4 и при pH 6 (в калийацетатном буфере), и оценивали токсикологические профили композиций. Для образцов при pH 4, композиции получали смешением 1:1 молярного соотношения донора нитроксила:CAPTISOL^®, лиофилизацией смеси, затем разбавлением лиофилизированной смеси в D5W. Для образцов при pH 6, композиции получали смешением 1:1 молярного соотношения донора нитроксила:CAPTISOL^®, лиофилизацией смеси, затем разбавлением лиофилизированной смеси в D5W с 5 мM фосфатом калия. Соединения вливали в количестве 3 мкг/кг/мин. Как показано на фигуре 4, повышение pH инсуфлята от приблизительно 4 до приблизительно 6 улучшало токсикологию данных трех соединений.

5.6 Оценка стабильности концентрата

5.6.1 Пример 7: соединение формулы (1)

Оценивали стабильность жидких концентратов соединений формулы (1) и CAPTISOL^®. Оценивали три концентрации соединения формулы (1): 21,2 мг/мл, 50 мг/мл и 100 мг/мл. Образцы получали с тремя целевыми концентрациями в четырех водных средах, содержащих различные проценты CAPTISOL^®, как приведено в таблице 9. Подходящие количества твердого вещества и среды смешивали и, после полного растворения, pH каждого образца доводили до 4,0 добавлением 1 N NaOH. Образцы получали в 1,5-мл масштабе. Аликвоты хранили при 2°C - 8°C и 25°C.

Таблица 9 Образцы, полученные для оценки стабильности концентратов соединений формулы (1)
Образец #	Концентрация соединения формулы (1) (мг/мл)	% CAPTISOL® (мас./об.)
C1	21,2	0
C2	30
C3	50	0
C4		10
C5		20
C6	30
C7	100	0
C8		10
C9		20
C10	30

После получения и после 1, 3, и 7 дней хранения, образцы удаляли из условий с соответствующей температурой и обращали внимание на их внешний вид. Образцы анализировали ВЭЖХ (XBridge Phenyl Column (Waters); детектор УФ поглощения при 272 нм; подвижная фаза пошаговый градиент водного ацетонитрила, содержащего 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты), и измеряли pH каждого образца. Результаты приведены в таблице 10 и таблице 11. Величины извлечения нормализовали к концентрациям, наблюдаемым сразу после получения концентрата (t=0). Полное извлечение (в пределах точности способа) достигали для всех образцов, хранимых при 2°C - 8°C в течение 7 дней, но не для всех образцов, хранимых при 25°C.

Соответственно, снижение pH и повышение интенсивности желтого цвета были менее четко выражены в замороженных образцах, чем в образцах, хранимых при температуре 25°C. Полное извлечение наблюдали через 7 дней для образцов с 21,2 и 50 мг/мл, полученных в 30% CAPTISOL^® и через 3 дня для образца с 100 мг/мл, полученного в той же среде. Извлечение, большее чем 90%, также наблюдали через три дня для образца с 50 мг/мл, полученного в 20% CAPTISOL^®. Стабильность была наибольшей при наименьших концентрациях, набольшем проценте CAPTISOL^® и наименьшей температуре.

Таблица 10 Внешний вид образцов для оценки стабильности концентратов
Образец #	% CAPTISOL® (мас./об.)	Концентрация соединения формулы (I) (мг/мл)	Температура хранения (°C)	Внешний вид
t=0	t=1 д	t=3 д	t=7 д
C1	0	21,2	2-8	A	A	A	A
25	A	B	C
C2	30	21,2	2-8	A	A	A	A
25	A	A	A
C3	0	50	2-8	B	B	B	B
25	B	C	D
C4	10	50	2-8	B	B	B	B
25	B	C	D
C5	20	50	2-8	B	B	B	B
25	B	B	C
C6	30	50	2-8	B	B	B	B
25	B	B	B
C7	0	100	2-8	B	B	B	B
25	C	D	D
C8	10	100	2-8	B	B	B	B
25	C	D	D
C9	20	100	2-8	B	B	B	B
25	C	D	D
C10	30	100	2-8	B	B	B	B
25	C	C	C
A=прозрачный, бесцветный B=прозрачный, очень бледно-желтый C=прозрачный, бледно-желтый D=прозрачный, желтый
Образец #	% CAPTISOL® (мас./об.)	Концентрация соединения формулы (1) (мг/мл)	Температура хранения (°C)	Извлечение относительно t0, %	pH
t=1 д	t=3 д	t=7 д	t=0	t=1 д	t=3 д	t=7 д
C1	0	21,2	2-8	101%	100%	99%	4,03	3,41	3,03	2,81
25	103%	82%	38%	3,50	1,73	1,29
C2	30	21,2	2-8	99%	101%	98%	4,02	3,93	3,82	3,72
25	100%	101%	98%	3,65	3,44	3,23
C3	0	50	2-8	100%	99%	99%	4,02	3,38	3,25	3,00
25	100%	79%	50%	2,93	1,38	1,13
C4	10	50	2-8	98%	96%	97%	4,00	3,35	3,29	3,22
25	99%	82%	55%	3,03	1,66	1,29
C5	20	50	2-8	99%	97%	97%	4,00	3,14	3,13	3,04
25	100%	92%	69%	2,87	2,05	1,42
C6	30	50	2-8	100%	100%	98%	3,98	3,61	3,61	3,40
25	100%	101%	98%	3,21	2,95	2,84
C7	0	100	2-8	100%	97%	98%	3,96	2,96	2,86	2,75
25	98%	70%	68%	2,13	1,14	1,07
C8	10	100	2-8	101%	100%	99%	4,02	2,51	2,41	2,18
25	91%	78%	71%	1,67	1,21	1,12
C9	20	100	2-8	99%	99%	99%	3,96	3,30	3,20	3,03
25	100%	84%	70%	2,57	1,42	1,14
C10	30	100	2-8	102%	102%	102%	3,99	3,39	3,27	3,11
25	103%	101%	80%	2,90	2,20	1,31

5.6.2 Пример 8: соединение формулы (2)

Стабильность при хранении жидкого концентрата соединений формулы (2) (30 мг/мл) в среде 30% CAPTISOL^® (мас./об.) при pH 4,0 оценивали при 4°C и 25°C в течение 7 дней, с моментами времени через 1, 3 и 7 дней. В каждый момент времени образцы оценивали на внешний вид, pH и концентрацию и чистоту по ВЭЖХ (XBridge Phenyl Column (Waters); детектор УФ поглощения при 272 нм; подвижная фаза пошаговый градиент водного ацетонитрила, содержащего 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты).

Отобранные среды, CAPTISOL^® (30% мас./об.) в воде с pH, доведенным до 4,0, получали точным взвешиванием 30 грамм CAPTISOL^® в 150 мл стакане и растворяли в 45 мл воды. pH доводили до pH 4,0 добавлением 0,1N HCl. Впоследствии, среду переносили в мерную колбу и доводили до 100 мл конечного объема добавлением воды. После выдерживания при температуре приблизительно 25°C в течение 30 минут, pH среды повторно доводили до pH 4,0 добавлением 0,1 N HCl. Среда образовывала прозрачный, бесцветный раствор.

Концентрированный раствор соединения формулы (2) получали следующим способом. Магнитную мешалку и 30 мл среды добавляли в 150 мл стакан. Приблизительно 1,8 г соединения формулы (2) распределяли и переносили в стакан при медленном умеренном перемешивании. После 45 минут перемешивания при температуре приблизительно 25°C (защищенный от света), концентрат образовывал прозрачный, бесцветный раствор с несколькими небольшими белыми комками соединения формулы (2), плавающими в растворе. Оставшиеся комки аккуратно измельчали, применяя шпатель. После дополнительных 45 минут перемешивания, концентрат образовывал прозрачный, бесцветный раствор без любых видимых твердых веществ. Затем, концентрат фильтровали (0,2 мкм) через 0,22 мкм PVDF шприцевой фильтр.

Для испытания t=0 часов, аликвоты распределяли в сосуды и анализировали ВЭЖХ (XBridge Phenyl Column (Waters); детектор УФ поглощения при 272 нм; подвижная фаза - пошаговый градиент водного ацетонитрила, содержащего 0,1% (об./об.) муравьиную кислоту) и определяли pH образца. Двенадцать аликвот 1 мл концентрата распределяли в микроцентрифужных пробирках для хранения при 4°C и 25°C. После приблизительно 24, 72 и 168 часов хранения, две аликвоты удаляли из каждых условий хранения и оценивали на внешний вид, pH и концентрацию и чистоту по ВЭЖХ. Все образцы представляли собой прозрачные, бесцветные растворы. pH образцов, хранящихся при 4°C и 25°C, снижался с 3,7 до 3,6 и 3,3, соответственно, в течение 7 дней. Обе среды сохраняли соединение формулы (2) при концентрации 30 мг/мл в течение 7 дней, как приведено в таблице 12. В таблице 12 термин "c/c" относится к прозрачному и бесцветному. Не наблюдали детектируемых количеств известного продукта разложения (соединения формулы (101)).

Таблица 12 Сводные данные наблюдаемых свойств раствора концентрата соединения формулы (2) в процессе хранения в течение 7 дней
Условия хранения	Параметр	Образец	Момент времени
0 ч	24 ч	72 ч	168 ч
4°C	Концентрация, мг/мл	1	30,3	30,6	29,6	29,7
	2		30,2	29,4	29,9
	pH	1	3,71	3,70	3,66	3,58
	2		3,70	3,66	3,61
	Внешний вид	1	c/c	c/c	c/c	c/c
	2		c/c	c/c	c/c
	Наблюдаемый продукт разложения, соединение формулы (101), мг/мл	1	нет	нет	нет	нет
2		нет	нет	нет
25°C	Концентрация, мг/мл	1	30,3	30,2	29,4	29,5
	2		30,2	29,8	29,4
	pH	1	3,71	3,47	3,34	3,32
	2		3,48	3,34	3,30
	Внешний вид	1	c/c	c/c	c/c	c/c
	2		c/c	c/c	c/c
	Наблюдаемый продукт разложения, соединение формулы (101), мг/мл	1	нет	нет	нет	нет
2		нет	нет	нет

5.7 Стабильность внутривенно дозируемых растворов

5.7.1 Пример 9: соединение формулы (1) - дозируемый раствор, хранимый при 25°C

Стабильность дозируемых растворов соединений формулы (1), полученных из CAPTISOL^® концентрата, разбавленного в имеющихся в продаже внутривенных разбавителях, оценивали при 25°C в течение 48 часов, с моментами времени анализа 0, 8, 12, 16, 24 и 48 часов после разбавления. Из-за требуемых моментов времени анализа, два исследования осуществляли с отдельными наборами дозируемых растворов. Первое (группа A) включало все моменты времени, за исключением 16 часов. Второе (группа B) включало анализ только через 0 и 16 часов. Концентраты, применяемые для получения двух наборов дозируемых растворов, получали из двух отдельных пробирок с одной партией лиофилизированного лекарственного продукта (24 мг/мл соединения формулы (1)/30% CAPTISOL^®).

Получение концентратов

Одну пробирку лиофилизированного лекарственного продукта (24 мг/мл соединения формулы (1)/30% CAPTISOL^®, pH 4) растворяли в 10 мл воды для инъекции (WFI), получая каждый концентрат (для дозирования раствора группе A и B). Измеряли величины pH полученных в результате растворов, и определяли, что он приблизительно равен 3,9 для обеих пробирок. Не проводили регулирование pH. Концентраты разбавляли и анализировали ВЭЖХ (XBridge Phenyl Column (Waters); детектор УФ поглощения при 272 нм; подвижная фаза - пошаговый градиент водного ацетонитрила, содержащего 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты), и определяли, что оба концентрата содержали 20-21 мг/мл соединения формулы (1), а не номинальную величину 24 мг/мл, якобы из-за вклада растворенных API и CAPTISOL в суммарный объем раствора.

Получение разбавителя

Имеющиеся в продаже растворы ацетата калия и фосфата калия выбирали для оценки. Ацетат калия покупали, и USP фосфатнокалиевый раствор получали согласно листку вкладыша Hospira для коммерческого продукта. Каждый раствор разбавляли до 10 мМ в 5% декстрозе (D5W) и 2,5% декстрозе (D2.5W). Имеющийся в продаже D5W 2-кратно разбавляли водой качества WFI, получая D2.5W раствор. Измеряли pH каждого концентрированного и разбавленного раствора; результаты представлены в таблице 13.

Таблица 13 Результаты измерения pH отобранных разбавителей
Разбавитель	Концентрация	pH
Ацетат	10 мМ в D2.5W	6,2
	10 мМ в D5W	6,0
Первоначальная (2 M)	6,7
Фосфат	10 мМ в D2.5W	6,8
	10 мМ в D5W	6,7
Первоначальная (3 M)	6,5

Получение раствора для дозирования

Концентрат соединения формулы (1) разбавляли волюмометрически в 5 мл масштабе в 10 мМ растворах разбавителя, получая концентрации 8, 1, и 0,1 мг/мл соединения формулы (1), как приведено в таблице 14. Каждый образец получали в двух экземплярах. Содержание декстрозы в 10% CAPTISOL растворе снижали, обеспечивая то, чтобы дозируемые растворы были по существу изотоничными. Каждый раствор хранили при 25°C.

Таблица 14 Получение дозируемых растворов для оценки стабильности
Соединение формулы (1) (мг/мл)	Разбавитель	Коэффициент разбавления	CAPTISOL® (% мас./об.)
8,0	10 мМ ацетат или фосфат в D2.5W	3	10%
1,0	10 мМ ацетат или фосфат в D5W	24	1,3%
0,1	240	0,1%

Анализ образцов

Образцы анализировали после получения и через 8, 12, 16, 24 и 48 часов хранения при 25°C. Обращали внимание на внешний вид каждого образца, измеряли pH, и каждый образец анализировали ВЭЖХ на концентрацию и присутствие основного продукта разложения, соединения формулы (100).

Результаты

Результаты оценки стабильности представлены в таблице 15, таблице 16 и таблице 17. В таблице 17, наличие пика, соответствующего продукту разложения (соединению формулы (100)), в образце обозначали "X".

Результаты, в общем, согласовывались для каждых двух экземпляров в паре и между соответствующими дозируемыми растворами, полученными в группах A и B. Различие в степени извлечения наблюдали между двумя экземплярами в моменты времени через 24 и 48 часа для образцов, полученных так, чтобы они содержали 0,1 мг/мл соединения формулы (1) в фосфате.

Полное извлечение (в пределах точности способа ВЭЖХ) и отсутствие пика детектируемого продукта разложения (соединения формулы (100)) сохранялись в течение 48 часов для образцов, полученных с 8 мг/мл соединения формулы (1) в разбавителях на основе ацетата и фосфата. Данные образцы фактически содержали приблизительно 7 мг/мл соединения формулы (1), соответствующие концентрации 20-21 мг/мл соединения формулы (1) в концентрате. В обоих разбавителях, стабильность была выше для образцов, полученных с 8 мг/мл соединения формулы (1), чем для образцов, полученных с меньшими концентрациями. Не желая быть связанными теорией, большую стабильность данных образцов по сравнению со стабильностью образцов, полученных с меньшими концентрациями соединения формулы (1), можно приписать большей концентрации CAPTISOL^® (10% в разбавленных растворах).

Все образцы оставались прозрачными и бесцветными в течение 48 часов хранения. pH всех образцов снижался со временем. Известный продукт разложения (соединение формулы (100)) наблюдали после получения (при t0) во всех образцах, полученных так, чтобы они содержали 0,1 мг/мл соединения формулы (1), и во все последующие моменты времени во всех образцах, полученных так, чтобы они содержали 0,1 мг/мл и 1 мг/мл соединения формулы (1).

В общем, стабильность снижалась со снижением концентрации соединения формулы (1). Не желая быть связанными теорией, пониженная стабильность была, вероятно, результатом меньшего процента CAPTISOL^® в дозируемых растворах. Первоначальная степень разложения (в пределах 16 часов) была аналогичной для образцов, полученных так, чтобы они содержали 0,1 мг/мл соединения формулы (1) в разбавителях на основе ацетата и фосфата. Однако, стабильность образцов, полученных так, чтобы они содержали 1 мг/мл, была существенно большей в ацетате, чем в фосфате.

Таблица 15 Результаты оценки стабильности дозируемых растворов при 25°C, процент извлечения
Дозируемый раствор	Копия	Разбавитель	Соединение формулы (1) мг/мл	Соединение формулы (1) мг/мл	Извлечение относительно t0
t0 (группа A)	t0 (группа B)	8 ч (A)	12 ч (A)	16 ч (B)	24 ч (A)	48 ч (A)
1	a	10 мМ ацетат в D2.5W	8,0	6,94	7,06	101%	102%	101%	102%	101%
b	6,95	7,06	101%	102%	101%	102%	103%
2	a	10 мМ ацетат в D5W	1,0	0,86	0,85	97%	97%	97%	94%	92%
b	0,87	0,84	98%	98%	98%	96%	95%
3	a	10 мМ ацетат в D5W	0,1	0,10	0,09	81%	78%	66%	67%	55%
b	0,10	0,09	80%	75%	68%	63%	51%
4	a	10 мМ фосфат в D2.5W	8,0	6,98	6,79	98%	99%	102%	99%	100%
b	7,00	6,93	99%	94%	100%	100%	100%
5	a	10 мМ фосфат в D5W	1,0	0,87	0,85	89%	86%	86%	78%	71%
b	0,88	0,85	90%	83%	82%	79%	72%
6	a	10 мМ фосфат в D5W	0,1	0,10	0,10	83%	78%	72%	62%	41%
b	0,10	0,10	79%	72%	68%	50%	32%

Таблица 16 Результаты оценки стабильности дозируемых растворов при 25°C, pH
Дозируемый раствор	Копия	Разбавитель	Соединение формулы (1) мг/мл	pH
t0 (группа A)	t0 (группа B)	8 ч (A)	12 ч (A)	16 ч (B)	24 ч (A)	48 ч (A)
1	a	10 мМ ацетат в D2.5W	8,0	5,6	5,5	5,4	5,4	5,4	5,4	5,3
b	5,6	5,5	5,5	5,4	5,4	5,3	5,3
2	a	10 мМ ацетат в D5W	1,0	5,7	5,7	5,6	5,7	5,5	5,5	5,3
b	5,9	5,7	5,7	5,8	5,5	5,5	5,4
3	a	10 мМ ацетат в D5W	0,1	6,1	5,9	5,9	5,9	5,4	5,7	5,7
b	5,8	5,9	5,9	5,9	5,3	5,7	5,5
4	a	10 мМ фосфат в D2.5W	8,0	6,3	6,1	5,9	5,9	5,6	5,5	5,0
b	6,3	6,2	5,9	5,8	5,6	5,5	4,7
5	a	10 мМ фосфат в D5W	1,0	6,5	6,6	6,3	6,4	6,2	6,1	5,8
b	6,6	6,5	6,3	6,4	6,1	6,3	6,0
6	a	10 мМ фосфат в D5W	0,1	6,8	6,7	6,6	6,6	6,3	6,5	6,4
b	6,8	6,8	6,5	6,5	6,2	6,5	6,4

Таблица 17 Результаты оценки стабильности дозируемых растворов при 25°C - оценка внешнего вида соединения формулы (100)
Дозируемый раствор	Копия	Разбавитель	Соединение формулы (1) мг/мл	Соединение формулы (100)
t0 (группа A)	t0 (группа B)	8 ч (A)	12 ч (A)	16 ч (B)	24 ч (A)	48 ч (A)
1	a	10 мМ ацетат в D2.5W	8,0
b
2	a	10 мМ ацетат в D5W	1,0			X	X	X	X	X
b			X	X	X	X	X
3	a	10 мМ ацетат в D5W	0,1	X	X	X	X	X	X	X
b	X	X	X	X	X	X	X
4	a	10 мМ фосфат в D2.5W	8,0
b
5	a	10 мМ фосфат в D5W	1,0			X	X	X	X	X
b			X	X	X	X	X
6	a	10 мМ фосфат в D5W	0,1	X	X	X	X	X	X	X
b	X	X	X	X	X	X	X

5.7.2 Пример 10: соединение формулы (1) - дозируемый раствор, хранящийся при 2°C - 8°C, с последующим хранением при 25°C

Стабильность дозируемых растворов соединения формулы (1), полученных из CAPTISOL® концентрата, разбавленного в имеющихся в продаже внутривенных разбавителяях, оценивали, как описано в примере 9. Растворы оценивали при 2°C - 8°C в течение 24 часов, с последующим хранением при 25°C в течение 48 часов. Как показано в таблице 18, степени извлечения соединения формулы (1) были обычно большими, чем для соответствующих образцов, хранящихся при 25°C для всех дозируемых растворов (смотри таблицу 16 из предыдущего примера), что указывает на повышенную стабильность дозируемых растворов, полученных и хранящихся при 2°C - 8°C перед хранением при температуре 25°C.

Таблица 18 Результаты оценки стабильности дозируемых растворов при 2°C - 8°C и 25°C, степень извлечения в процентах
Образец #	Разбавитель	Соединение формулы (1) мг/мл	Соединение формулы (1) мг/мл	Извлечение относительно t0
			t0 (group A)	t0 (group B)	24 ч (A)	24 ч (B)	32 ч (A)	36 ч (A)	40 ч (B)	48 ч (A)	72 ч (A)
2-8°C	2-8°C	2-8°C	2-8°C	8 ч при 25°C	12 ч при 25°C	16 ч при 25°C	24 ч при 25°C	48 ч при 25°C
1	10 мМ ацетат в D2.5W	8,0	7,13	6,91	99%	103%	101%	99%	103%	97%	99%
2	10 мМ ацетат в D5W	1,0	0,89	0,89	99%	100%	98%	98%	93%	95%	92%
3	10 мМ ацетат в D5W	0,1	0,10	0,10	97%	97%	92%	89%	67%	82%	73%
4	10 мМ фосфат в D2.5W	8,0	7,18	7,08	100%	102%	99%	99%	100%	97%	97%
5	10 мМ фосфат в D5W	1,0	0,89	0,88	99%	101%	95%	93%	90%	87%	81%
6	10 мМ фосфат в D5W	0,1	0,11	0,10	97%	97%	89%	86%	76%	76%	63%

5.7.3 Пример 11: соединение формулы (2) - дозируемый раствор, хранящийся при 25°C

Оценивали серию дозируемых растворов соединения формулы (2) для внутривенного введения. Выбранный концентрат соединения формулы (2), полученный при 30 мг/мл в среде 30% CAPTISOL^® при pH 4,0, оценивали при низкой, средней и высокой концентрациях (0,1, 1 и 5 мг/мл, соответственно) после разбавления в различных дозируемых растворах. Для разбавления соединения формулы (2) до 0,1 и 1 мг/мл оценивали три дозируемых раствора; 1) D5W, 2) D5W с 5 мМ K-фосфатом (pH=6), и 3) D5W с 20 мМ K-фосфатом (pH=6). Для поддержания изоосмолярности разбавленных растворов соединения формулы (2) до 5 мг/мл, концентрацию декстрозы в дозируемых растворах снижали до 2,5% (мас./об.). Таким образом, оцениваемые дозируемые растворы представляли собой; (1) D2,5 W, (2) D2.5W с 5 мМ K-фосфатом (pH=6) и (3) D2.5W с 20 мМ K-фосфатом (pH=6).

Предполагаемые дозируемые растворы оценивали на внешний вид, pH, осмолярность и концентрацию и чистоту ВЭЖХ (XBridge Phenyl Column (Waters); детектор УФ поглощения при 272 нм; подвижная фаза пошаговый градиент водного ацетонитрила, содержащего 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты) после приблизительно 0, 16, 24 и 48 часов хранения при 25°C. Все образцы представляли собой прозрачные, бесцветные растворы с единственным исключением 5 мг/мл соединения формулы (2) в D2.5W с 5 мМ фосфатом, который был прозрачным и светло-желтым после 48 часов при 25°C. Все растворы были изоосмотическими (290+/-50 мОсм/кг) с единственным исключением 1 мг/мл соединения формулы (2) в D5W с 20 мМ фосфатом, который имел осмолярность приблизительно 350 мОсм/кг. Кроме того, за исключением 5 мг/мл соединения формулы (2) в D2,5 W с 5 мМ фосфатом, все другие дозируемые растворы сохраняли соединение формулы (2) при целевых концентрациях 0,1, 1 и 5 мг/мл в течение 48 часов. Кроме того, известный продукт разложения, соединение формулы (101), образующийся при высвобождении активной группы HNO, наблюдали через 16 часов при 25°C в некоторых количествах по ВЭЖХ в дозируемых растворах, содержащих фосфатный буфер. Наблюдаемое количество соединения формулы (101) было порядка пределов обнаружения способа.

Стабильность дозируемых растворов с 5 мг/мл соединения формулы (2) дополнительно оценивали как функцию pH и буфера. Концентрированный раствор соединения формулы (2), полученный при 30 мг/мл в среде 30% CAPTISOL^® при pH 4,0, разбавляли до 5 мг/мл в четырех предполагаемых дозируемых растворах. Оценивали четыре дозируемых раствора: 1) D2.5W с 5 мМ K-фосфатом (pH=6,0), 2) D2.5W с 5 мМ K-цитратом (pH=6,0), 3) D2.5W с 5 мМ K-цитратом (pH=5,0) и 4) D2.5W с 5 мМ K-ацетатом (pH=5,0). Все дозируемые растворы соединения формулы (2) были изоосмотическими (290+/-50 мОсм/кг). После приблизительно 24 и 48 часов хранения при 25°C, дозируемые растворы оценивали на внешний вид, pH и концентрацию и чистоту ВЭЖХ. Нефосфатные дозируемые растворы были прозрачными, бесцветными и сохраняли соединение формулы (2) при целевой концентрации 5 мг/мл в течение 48 часов; что отвечало требованием скрининга дозируемого раствора, дозируемый раствор с 5 мг/мл соединения формулы (2) в D2,5 W с 5 мМ фосфатом (pH 6,0) был прозрачным, светло желтым только с 60% извлечением соединения формулы (2) через 48 часов. Кроме того, известный продукт разложения, соединение формулы (101), наблюдали в небольших количествах по ВЭЖХ во всех образцах, за исключением 5 мг/мл соединения формулы (2) в D2.5W, 5 мМ цитрат (pH 5,0).

После 7 дней хранения при 25°C нефосфатные дозируемые растворы были все еще прозрачными и бесцветными на внешний вид. Наименьшее повышение кислотности через 7 дней измеряли для дозируемого раствора с 5 мг/мл соединения формулы (2) в D2.5W, 5 мМ цитрат pH 6,0, тогда как дозируемый раствор D2.5W, 5 мM цитрат pH 5,0, имел наименьшее изменение pH в течение первоначальных 24-48 часов. Кроме того, после 14 дней хранения при 25°C образцы с дозируемым раствором, содержащим 5 мМ цитрат pH 6,0, все еще представляли собой прозрачные, бесцветные растворы, тогда как дозируемые растворы, содержащие или 5 мМ цитрат или 5 мМ ацетат при pH 5,0, представляли собой прозрачные, желтые растворы. Результаты приведены в таблице 19.

Таблица 19 Извлечение соединения формулы (2) из 5 мг/мл дозируемых растворов
Дозируемый раствор	Образец	Момент времени
0 ч	24 ч	48 ч
(1). D2.5W, 5 мМ фосфат, pH 6,0	1	101%	100%	60,7%
2	100%	100%	62,8%
(2). D2.5W, 5 мМ цитрат, pH 6,0	1	101%	98,6%	96,7%
2	101%	98,8%	96,5%
(3). D2.5W, 5 мМ цитрат, pH 5,0	1	101%	100%	99,1%
2	100%	102%	99,3%
(4). D2.5W, 5 мМ ацетат, pH 5,0	1	95,6%	95,4%	95,4%
2	96,0%	96,8%	94,8%

5.8 Пример 12: оценка соотношений CAPTISOL®/донор нитроксила

Соединение формулы (1) выбирали в качестве модельного донора нитроксила. Оценку стабильности проводили с растворами концентрата, содержащими молярные соотношения CAPTISOL^® (MW 2163 г/моль) к соединению формулы (1) (MW 177,18 г/моль), выбранные на основе запланированных токсикологических исследований. Оцениваемые концентраты представлены в таблице 20. Образцы концентратов получали смешением подходящих количеств твердого вещества и среды, и после полного растворения, pH каждого образца доводили до 4,0 добавлением 1 N NaOH. Образцы получали в 1,8-мл масштабе. Аликвоты каждого раствора хранили при 25°C.

Таблица 20 Результаты для оцениваемых образцов концентратов
Образец #	% CAPTISOL® (мас./об.)	Соединение формулы (1), мг/мл	Целевой pH	Молярное соотношение, CAPTISOL®:соединение формулы (1)
C11	10%	40	4,0	0,20
C12	20%	40	4,0	0,41
C13	30%	40	4,0	0,61

Каждый раствор концентрата дополнительно разбавляли во внутривенных разбавителях до наибольшей и наименьшей концентраций, которые предполагалось водить в процессе токсикологических исследований (8 мг/мл и 0,02 мг/мл соединения формулы (1), соответственно). Оцениваемые дозируемые растворы приведены в таблице 21. Среды выбирали так, чтобы получить вводимые составы, приблизительно изоосмотические человеческой крови (приблизительно 290 мОсм/кг воды). Разбавления проводили волюмометрически в 5-мл масштабе для образцов с наибольшей концентрацией в 125-мл масштабе для образцов с наименьшей концентрацией. Аликвоты каждого раствора хранили при 25°C.

Таблица 21 Результаты для оцениваемых дозируемых растворов
Образец #	Концентрат #	Среда	Соединение формулы (1), мг/мл	Коэффициент разбавления	Конечный % CAPTISOL® (приблизительно мас./об.)
D7	C11	D5W	8	5	2%
D8	C12	D5W	8	5	4%
D9	C13	D2,5W	8	5	6%
D10	C11	D5W	0,02	2000	,005%
D11	C12	D5W	0,02	2000	,010%
D12	C13	D5W	0,02	2000	,015%

После получения (t0) и после 1 дня (24 часов) и 2 дней (48 часов) хранения, образцы удаляли из места хранения и обращали внимание на их внешний вид. Все образцы концентратов оставались прозрачными и бледно-желтыми в течение 48 часов. Дозируемые растворы D7-D9 были прозрачными и очень бледными в каждый момент времени и дозируемые растворы D10-D12 оставались прозрачными и бесцветными. В каждый момент времени, образцы анализировали ВЭЖХ (XBridge Phenyl Column (Waters); детектор УФ поглощения при 272 нм; подвижная фаза - пошаговый градиент водного ацетонитрила, содержащего 0,1% (об./об.) муравьиной кислоты). Результаты ВЭЖХ анализа концентратов приведены в таблице 22. Результаты ВЭЖХ анализа дозируемых растворов приведены в таблице 23. Полное извлечение (в пределах точности способа) достигали в течение 48 часов для всех концентратов и дозируемых растворов. Основной продукт разложения соединения формулы (1) (т.е. соединение формулы (100)) наблюдали при низких концентрациях в дозируемых растворах, полученных при 0,02 мг/мл. Концентрация продукта разложения не повышалась со временем и не влияла на степень извлечения соединения формулы (1).

Таблица 22 Результаты ВЭЖХ анализа образцов концентратов
Образец #	% CAPTISOL® (мас./об.)	Соединение формулы (1), мг/мл	Извлечение относительно t0, %
t=0	t=1 д	t=2 д	t=1 д	t=2 д
C11	10	39,4	39,9	38,2	101%	97%
C12	20	40,9	39,9	40,6	97%	99%
C13	30	40,6	40,2	40,1	99%	99%

Таблица 23 Результаты ВЭЖХ анализа дозируемых растворов
Образец #	Концентрат #	Концентрация соединения формулы (1) мг/мл	Соединение формулы (1), мг/мл	Извлечение относительно t0, %
t=0	t=1 д	t=2 д	t=1 д	t=2 д
D7	C11	8,00	7,96	8,07	7,99	101%	100%
D8	C12	8,00	8,06	8,06	7,85	100%	97%
D9	C13	8,00	8,20	8,17	8,06	100%	98%
D10	C11	0,02	0,018	0,019	0,019	106%	105%
D11	C12	0,02	0,020	0,020	0,020	100%	100%
D12	C13	0,02	0,019	0,021	0,020	108%	105%

5.9 Получение соединений

Соединения, описанные в настоящем изобретении, можно получить согласно способам, описанным ниже, или способами, известными в данной области техники. Исходные соединения для реакций могут или иметься в продаже, или их можно получить известными способами или их очевидными модификациями. Например, некоторые из исходных соединений являются доступными из коммерческих источников, таких как Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Другие можно получить способами или их очевидными модификациями, описанными в стандартных ссылочных текстах, таких как March's Advanced Organic Chemistry (John Wiley and Sons) и Larock's Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers).

Пример 13: Получение N-гидрокси-5-метилфуран-2-сульфонамида (1)

К раствору гидроксиламина (0,92 мл 50% водного раствора; 13,8 ммоль) в THF (6 мл) и воде (2 мл), охлажденному до 0°C, добавляли 5-метилфуран-2-сульфонилхлорид (1 г, 5,5 ммоль) в виде раствора в THF (6 мл) по каплям так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, после чего ТСХ (1:1 гексан:этилацетат (H:EA)) показала по существу полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли дважды 50 мл дихлорметана (DCM), и органическую часть отделяли и промывали водой (10 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептан:EtOAc, с последующим растиранием с гептаном, получая заявленное в заголовке соединение в виде желтого твердого остатка (0,59 г, 61% выход). LC-MS t_R=0,91 мин; ¹H ЯМР (DMSO, 500 МГц) δ м.д. 9,82 (1H, д, J=3,1 Гц), 9,64 (1H, д, J=3,2 Гц), 7,10 (1H, д, J=3,4 Гц), 6,36 (1H, д, J=3,4 Гц), 2,36 (3H, с).

Пример 14: Получение N-гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфамида (2)

3-Метансульфонилбензол-1-сульфонилхлорид

Промежуточный 3-метансульфонилбензол-1-сульфонилхлорид получали согласно способам, описанным в Park et al, J. Med. Chem. 51(21):6902-6915 (2008). Конкретно, метилсульфонилбензол (110 г, 0,7 моль) нагревали в течение 18 часов при 90°C в хлорсульфокислоте (450 мл, 6,7 моль), после чего реакционную смесь охлаждали до температуры приблизительно 21°C перед медленным выливанием на дробленый лед. Полученную в результате суспензию дважды экстрагировали в EtOAc (2 л для каждой экстракции). Органические части объединяли и промывали соляным раствором (50 мл) перед сушкой над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая промежуточный сульфонилхлорид в виде грязно-белого твердого остатка (125 г, 75% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м.д. 8,61 (1H, т, J=1,7 Гц), 8,35-8,31 (2H, м), 7,90 (1H, т, J=7,9 Гц), 3,15 (3H, с).

N-Гидрокси-3-метансульфонилбензол-1-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (16 мл 50% водного раствора, 245 ммоль) в THF (150 мл) и воде (25 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 3-метансульфонилбензол-1-сульфонилхлорид (25 г, 98 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли DCM (250 мл), органическую часть отделяли и промывали дважды 50 мл воды. Водные экстракты объединяли и промывали дважды DCM (250 мл для каждой промывки). Все органические части объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде бежевого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан/EtOAc (1:1; об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде бежевого твердого остатка (14 г, 56% выход). LC-MS t_R=0,90 мин; масс-спектрометрия высокого разрешения (HRMS): теоретическая (C₇H₉NО₅S₂)=249,9844, измеренная=249,9833; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,85 (2H, кв, J=3,3 Гц), 8,31 (1H, т, J=1,6 Гц), 8,28 (1H, дт, J=7,8, 1,3 Гц), 8,14-8,19 (1H, м), 7,93 (1H, т, J=7,9 Гц), 3,32 (3H, с).

Пример 15: Получение N-гидрокси-5-метил-1,2-оксазол-4-сульфамида (3)

К раствору гидроксиламина (0,45 мл 50% водного раствора; 13,7 ммоль) в THF (6 мл) и воде (1 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями 5-метил-1,2-оксазол-4-сульфонилхлорид (1,0 г, 5,5 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (50 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (10 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт растирали с диэтиловым эфиром, получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,45 г, 46% выход). LC-MS t_R=0,66 мин; HRMS: теоретическая (C₄H₆N₂О₄S)=176,997, измеренная=176,9972; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,83 (1H, с), 9,68 (1H, уш.с), 8,77 (1H, с), 2,64 (3H, с).

Пример 16: Получение N-гидрокси-1-бензофуран-7-сульфамида (4)

К раствору гидроксиламина (0,76 мл 50% водного раствора; 11,5 ммоль) в THF (12 мл) и воде (2 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями 1-бензофуран-7-сульфонилхлорид (1 г, 4,6 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут, после чего ТСХ (гептан:EtOAc) показывала по существу полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (25 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (10 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Растирание с гептаном давало заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,63 г, 64% выход). LC-MS t_R=1,32; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO) δ 9,75 (д, J=3,0 Гц, 1H), 9,66 (1H, д, J=3,1 Гц), 8,18 (1H, д, J=2,2 Гц), 8,01 (1H, д, J=6,8 Гц), 7,72 (1H, д, J=7,7 Гц), 7,45 (1H, т, J=7,7 Гц), 7,14 (1H, д, J=2,2 Гц).

Пример 17: Получение 4-(гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамида (5)

N-(Пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид

Раствор пропан-2-амина (9,7 мл, 112,6 ммоль) в DCM (150 мл) охлаждали до 0°C при перемешивании в атмосфере азота. Тиофен-2-карбонилхлорид (11,0 мл, 102,3 ммоль) добавляли по каплям, и затем добавляли этилдиизопропиламин (19,5 мл, 112,6 ммоль). Реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 21°C, и перемешивание продолжали в течение 18 часов, после чего реакционную смесь дополнительно разбавляли DCM (100 мл) и промывали 1M HCl раствором (2×50 мл), водой (1×50 мл), насыщенным раствором NaHCО₃ (1×25 мл) и соляным раствором (2×25 мл) перед тем, как органический слой сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид в виде белого твердого остатка (18,1 г, 99,2% выход). LC-MS t_R=1,43 мин; ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 7,54-7,46 (1H, м), 7,43 (1H, д, J=5,0 Гц), 7,04 (1H, т, J=4,3 Гц), 6,00 (1H, уш.с), 4,31-4,16 (1H, м, J=6,6 Гц), 1,24 (6H, д, J=6,7 Гц).

5-[(Пропан-2-ил)карбамоил]тиофен-3-сульфонилхлорид

Раствор N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамида (17,3 г, 102,3 ммоль) в хлорсульфокислоте (68,1 мл, 1023,2 ммоль) нагревали при 100°C в течение 2 часов, после чего раствор охлаждали до температуры приблизительно 21°C и аккуратно выливали на лед (500 мл). Водный раствор экстрагировали в DCM (2×250 мл), и объединенные органические части сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде смеси с 5-[(пропан-2-ил)карбамоил]тиофен-2-сульфонилхлоридом, который отделяли на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:EtOAc, получая продукт в виде белого твердого остатка (9,9 г, 36,1% выход). LC-MS t_R=1,85 мин; ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 8,33 (1H, д, J=1,4 Гц), 7,82 (1H, д, J=1,4 Гц), 6,24 (1H, д, J=6,5 Гц), 4,27 (1H, квд, J=6,6, 14,4 Гц), 1,30 (6H, д, J=6,7 Гц).

4-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид

К раствору гидроксиламина (6,1 мл 50% водного раствора; 95,3 ммоль) в THF (30 мл) и воде (10 мл), охлажденному до 0°C, добавляли 5-[(пропан-2-ил)карбамоил]тиофен-3-сульфонилхлорид (9,9 г, 36,9 ммоль) в виде раствора в THF (30 мл) по каплям так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (50 мл). Водный слой экстрагировали DCM (2×50 мл) и EtOAc (50 мл). Все органические части объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Растирание с гептаном:EtOAc давало заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (6,4 г, 65,4% выход). LC-MS t_R=1,22 мин; HRMS: теоретическая (C₈H₁₂N₂О₄S₂)=263,0160, измеренная=263,0164; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,69 (1H, д, J=3,2 Гц), 9,59 (1H, д, J=3,2 Гц), 8,61 (1H, д, J=7,6 Гц), 8,34 (1H, д, J=1,4 Гц), 8,10 (1H, д, J=1,1 Гц), 3,92-4,16 (1H, м), 1,15 (6H, д, J=6,6 Гц).

Пример 18: Получение N-гидрокси-1-бензофуран-3-сульфамида (6)

1-бензофуран-3-сульфонилхлорид

1-Бензофуран-3-сульфонилхлорид получали согласно способам, описанным в Park et al, Bioorg. Med. Chem. Letters 18(14): 3844-3847 (2008). Бензофуран (4,2 г, 35,6 ммоль) добавляли к раствору сульфурилхлорида (4,9 мл, 60,4 ммоль) в DMF (13 мл) при 0°C, и реакционную смесь нагревали при 85°C в течение 3 часов. После того как реакция по существу завершалась, как определено ТСХ (гептан:EtOAc), реакционную смесь охлаждали до температуры приблизительно 21°C и выливали на лед. Продукт экстрагировали EtOAc (2×50 мл) и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:EtOAc, получая сульфонилхлорид в виде желтого масла (0,27 г, 3,5% выход). LC-MS t_R=2,06 мин; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,93 (1H, с), 7,68-7,81 (1H, м), 7,54 (1H, дд, J=8,1, 0,9 Гц), 7,17-7,38 (2H, м).

N-Гидрокси-1-бензофуран-3-сульфамид

К раствору гидроксиламина (0,1 мл 50% водного раствора; 3,0 ммоль) в THF (1,25 мл) и воде (0,25 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями 1-бензофуран-3-сульфонилхлорид (0,26 г, 1,2 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (10 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (5 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:EtOAc, с последующим растиранием с гептаном/DCM, получая заявленное в заголовке соединение в виде желтого твердого остатка (0,03 г, 12% выход). LC-MS t_R=1,45; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,75 (2H, с), 8,68 (1H, с), 7,86 (1H, д, J=7,7 Гц), 7,76 (1H, д, J=8,2 Гц), 7,36-7,57 (2H, м).

Пример 19: Получение N-гидрокси-5-метил-2-(трифторметил)фуран-3-сульфамида (7)

К раствору гидроксиламина (0,66 мл 50% водного раствора; 10,1 ммоль) в THF (6 мл) и воде (1 мл), охлажденному до 0°C, добавляли 5-метил-2-(трифторметил)фуран-3-сульфонилхлорид (1 г, 4,0 ммоль) порциями так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, после чего LC-MS показало полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (25 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (10 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт растирали с гептаном, получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,7 г, 71% выход). LC-MS t_R=1,64 мин; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,81 (1H, д, J=3,3 Гц), 9,68 (1H, д, J=3,2 Гц), 7,37 (1H, с), 2,60 (3H, с).

Пример 20: Получение N-гидрокси-5-метансульфонилтиофен-3-сульфамида (8)

5-Метансульфонилтиофен-3-сульфонилхлорид и 5-метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорид

Раствор 2-метансульфонилтиофена (1,0 г, 6,2 ммоль) в хлорсульфокислоте (2,9 мл, 43,2 ммоль) нагревали при 90°C в течение 1 часа, после чего раствор охлаждали до температуры приблизительно 21°C и аккуратно выливали на лед (20 мл). Водный раствор экстрагировали в DCM (2×25 мл). Органические части объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая сульфонилхлорид в виде смеси с 5-метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлоридом. Смесь хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:EtOAc, только частично разделяя два изомера, и сульфонилхлорид применяли в следующей стадии (0,5 г, 31% выход в виде смеси 85:15 с другим изомером). LC-MS t_R=1,67 мин; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,99 (1H, д, J=1,6 Гц), 7,69 (1H, д, J=1,6 Гц), 3,36 (3H, с).

N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-3-сульфамид

К раствору гидроксиламина (0,3 мл 50% водного раствора; 4,8 ммоль) в THF (6 мл) и воде (1 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями смесь 5-метансульфонилтиофен-3-сульфонилхлорида и 5-метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорида (85:15 LC-MS) (0,5 г, 1,9 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (10 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (5 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт хроматографировали обращено-фазовой нейтральной препаративной ВЭЖХ, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (0,07 г, 14% выход). LC-MS t_R=0,94; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,85 (1H, д, J=2,8 Гц), 9,78 (1H, д, J=2,8 Гц), 8,65 (1H, д, J=1,6 Гц), 7,98 (1H, д, J=1,4 Гц), 3,46 (3H, с).

Пример 21: 1-Ацетил-5-бром-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид (9)

1-(5-Бром-2,3-дигидро-1H-индол-1-ил)этан-1-он

К раствору 5-бром-2,3-дигидро-1H-индола (1,5 г, 7,5 ммоль) в уксусной кислоте (12 мл) добавляли ацетилхлорид (3,57 г, 45,4 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 90°C до того, как потребление исходного соединения по существу завершалось (приблизительно 1 час), и растворители удаляли при пониженном давлении. Органическую часть разбавляли этилацетатом и промывали раствором бикарбоната натрия. Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде коричневого твердого остатка (1,76 г, 99,99% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,96 (1H, д, 8,7 Гц), 7,40 (1H, д, 0,8 Гц), 7,30 (1H, дд, 8,5, 2,0 Гц), 4,09 (2H, т, 8,6 Гц), 3,14 (2H, т, 8,5 Гц), 2,14 (3H, с).

1-Ацетил-5-бром-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид

1-(5-Бром-2,3-дигидро-1H-индол-1-ил)этан-1-он (1,2 г, 5,0 ммоль) и хлорсульфокислоту (3,5 г, 30 ммоль) нагревали в герметичной пробирке при 80°C в течение 18 часов. Реакцию прекращали выливанием на лед, и полученный в результате твердый остаток фильтровали и сушили при пониженном давлении, затем хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 40% гептан:этилацетат, получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,95 г, 56% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 8,60 (1H, с), 7,37 (1H, с), 4,09 (2H, т, 8,6 Гц), 3,11 (2H, т, 8,5 Гц), 2,14 (3H, с).

1-Ацетил-5-бром-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (1,6 мл, 3,7 ммоль, 50% водный), в THF (2,5 мл) и воде (0,5 мл) при -10°C добавляли порциями 1-ацетил-5-бром-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид (0,5 г, 1,48 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру -5°C. Перемешивание продолжали при низкой температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида. Добавляли диэтиловый эфир, и реакционную смесь промывали 10% раствором лимонной кислоты. Органические слои сушили над Na₂SО₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 1-ацетил-5-бром-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид в виде грязно-белого твердого остатка (0,32 г, 66% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,44-9,76 (2H, м), 8,72 (1H, с), 7,68 (1H, с), 4,16 (2H, т, 8,6 Гц), 3,22 (2H, т, 8,8 Гц), 2,17 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=332,9545; наблюдаемая [M-H]^-=332,9553.

Пример 22: 2-Хлор-N-гидрокси-5-(гидроксиметил)бензол-1-сульфамид (10)

2-Хлор-5-(гидроксиметил)анилин

К раствору 1-хлор-4-(гидроксиметил)-2-нитробензола (4,5 г, 24 ммоль) в EtOH (23 мл) и воде (4,5 мл) добавляли железо (3,45 г, 84 ммоль) и HCl (9 капель). Реакцию нагревали при 85°C в течение 4 часов. Охлажденную реакционную смесь фильтровали через целит, промывали EtOAc и концентрировали при пониженном давлении и применяли непосредственно в следующей стадии (3,5 г, 95% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ 7,09 (1H, д, 8,1 Гц), 6,76 (1H, д, 2,0 Гц), 6,47 (1H, дд, 8,1, 1,9 Гц), 5,10 (1H, т, 5,7 Гц), 4,34 (2H, д, 5,8 Гц).

2-Хлор-5-(гидроксиметил)бензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 2-хлор-5-(гидроксиметил)анилина (0,5 г, 3,1 ммоль) в уксусной кислоте (3,2 мл) и HCl (0,8 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями нитрит натрия (0,24 г, 3,5 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру <5°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Одновременно, CuCl₂-H₂О (0,5 г, 3,1 ммоль) суспендировали в AcOH:вода (3,2 мл, 1,6 мл) при 0°C и перемешивали при 0°C до того, как весь CuCl₂ был в растворе. Газообразный SO₂ конденсировали в пробирке при -78°C с помощью способа «холодного пальца» и добавляли диазосоединение и раствор CuCl₂, и реакцию нагревали до 0°C. Реакцию нагревали до температуры приблизительно 25°C в течение 2 часов. Реакцию прекращали добавлением ко льду и экстрагировали в DCM (2×10 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде желтого масла. Сульфонилхлорид хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя DCM, получая сульфонилхлорид в виде желтого масла (0,2 г, 26% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ 8,14 (1H, д, 1,2 Гц), 7,41-7,83 (2H, м), 4,79 (2H, с).

2-Хлор-N-гидрокси-5-(гидроксиметил)бензол-1-сульфамид

К раствору гидроксиламина (0,45 мл 50% водного раствора; 15,5 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) и воде (1 мл), охлажденному до -5°C, добавляли по каплям 2-хлор-5-(гидроксиметил)бензол-1-сульфонилхлорид (1,25 г, 5,1 ммоль) в виде раствора в тетрагидрофуране (2,5 мл) так, чтобы поддерживать температуру ниже 0°C. Реакционную смесь перемешивали до того, как ТСХ показала по существу полное потребление исходного соединения (приблизительно 30 минут). Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (50 мл), и органическую часть промывали водой (1 мл) перед отделением и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Растирание с н-пентаном давало N-гидрокси-5-метилфуран-2-сульфамид в виде грязно-белого твердого остатка (0,37 г, 30% выход). ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO) δ 9,74 (2H, кв, 3,0 Гц), 7,98 (1H, д, 1,4 Гц), 7,60 (2H, дт, 8,2, 5,0 Гц), 5,51 (1H, с), 4,57 (2H, с).

Пример 23: 1-ацетил-5-хлор-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид (11)

1-(5-Хлор-2,3-дигидро-1H-индол-1-ил)этан-1-он

К раствору 5-хлор-2,3-дигидро-1H-индола (6,0 г, 39 ммоль) в уксусной кислоте (60 мл) добавляли ацетилхлорид (18,4 г, 23 ммоль). Реакцию нагревали до 80°C до того как потребление исходного соединения по существу завершалось (приблизительно 1 час), и растворители удаляли при пониженном давлении. Органическую часть разбавляли этилацетатом (200 мл) и промывали раствором бикарбоната натрия (2×100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 1-(5-хлор-2,3-дигидро-1H-индол-1-ил)этан-1-он в виде коричневого твердого остатка (7,1 г, 93% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 8,00 (1H, д, 8,6 Гц), 7,28 (1H, с), 7,18 (12H, дд, 8,6, 2,0 Гц), 4,10 (2H, т, 8,6 Гц), 3,13 (2H, т, 8,6 Гц), 2,14 (3H, с).

1-Ацетил-5-хлор-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид

1-(5-хлор-2,3-дигидро-1H-индол-1-ил)этан-1-он (7 г, 36 ммоль) и хлорсульфокислоту (16,68 г, 143 ммоль) нагревали при 70°C в течение 18 часов. Реакцию прекращали добавлением ко льду, и полученный в результате твердый остаток экстрагировали в этилацетат (250 мл). Полученный в результате раствор промывали водой (2×100 мл), и органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая ацетил-5-хлор-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 40-50% этилацетат:гексан, получая 1-ацетил-5-хлор-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид в виде грязно-белого твердого остатка (7,2 г, 68,4% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d) δ 8,56 (1H, с), 7,19 (1H, с), 4,09 (2H, т, 8,6 Гц), 3,10 (2H, т, 8,5 Гц), 2,14 (3H, с).

1-Ацетил-5-хлор-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид

К раствору гидроксиламина (1,8 мл 50% водного раствора; 61,1 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл) и воде (5 мл), охлажденному до -5°C, добавляли по каплям 1-ацетил-5-хлор-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид (4,0 г, 13,6 ммоль) в виде раствора в тетрагидрофуране (10 мл) так, чтобы поддерживать температуру ниже 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут, и ТСХ показала по существу полное потребление исходного соединения. Реакционную смесь разбавляли водой (5 мл), и полученный в результате твердый остаток собирали в вакууме и промывали дополнительным количеством воды (2×10 мл) перед сушкой в вакууме, получая 1-ацетил-5-хлор-N-гидрокси-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид в виде белого твердого остатка (3,0 г, 76% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 9,65 (1H, с), 9,55 (1H, с), 8,72 (1H, с), 7,68 (1H, с), 4,15 (2H, т, 8,6 Гц), 3,22 (2H, т, 8,5 Гц), 2,17 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=289,005; наблюдаемая [M-H]^-=289,0059.

Пример 24: 4,5-дихлор-N-гидрокситиофен-2-сульфамид (12)

К раствору гидроксиламина (0,655 мл 50% водного раствора; 10,0 ммоль) в тетрагидрофуране (6 мл) и воде (1 мл), охлажденному до -5°C, добавляли по каплям 4,5-дихлортиофен-2-сульфонилхлорид (1,0 г, 4,0 ммоль) в виде раствора в тетрагидрофуране (1 мл) так, чтобы поддерживать температуру ниже 0°C. Реакционную смесь перемешивали до того, как ТСХ показала по существу полное потребление исходного соединения (приблизительно 10 минут). Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (20 мл), и органическую часть промывали раствором лимонной кислоты (2×1 мл) перед отделением и сушкой над сульфатом натрия, фильтрованием и концентрированием при пониженном давлении. Растирание с диэтиловым эфиром:гептаном давало 4,5-дихлор-N-гидрокситиофен-2-сульфамид белого твердого остатка (0,35 г, 38% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ 10,06 (1H, д, 2,9 Гц), 10,00 (1H, д, 2,7 Гц), 7,73 (1H, с); ожидаемая [M-H]^-=245,8853; наблюдаемая [M-H]^-=245,8845.

Пример 25: N-Гидрокси-6-метокси-1-бензофуран-2-сульфамид (13)

2-(2-Формил-5-метоксифенокси)уксусная кислота

Водный раствор гидроксида натрия (20 мл, 5,2 г, 131 ммоль) добавляли к смеси 2-гидрокси-4-метоксибензальдегида (10 г, 65 ммоль), хлоруксусной кислоты (6,2 г, 65 ммоль) и воды (80 мл). Смесь медленно перемешивали перед кипячением с обратным холодильником в течение 16 часов, после чего реакционную смесь охлаждали до температуры приблизительно 25°C, после чего реакционную смесь подкисляли концентрированной HCl до pH 3. Полученный в результате кислый раствор экстрагировали в этилацетат (3×50 мл) перед сушкой над сульфатом натрия и концентрированием при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде коричневого масла, которое применяли непосредственно в следующей стадии (11,5 г, 83% выход). LC-MS t=0,75 мин, [M+H]⁺=211,29.

6-Метокси-1-бензофуран

Ацетат натрия (21,0 г, 254 ммоль) добавляли к смеси 2-(2-формил-5-метоксифенокси)уксусной кислоты (11,4 г, 54 ммоль) в уксусном ангидриде (75 мл) и уксусной кислоте (75 мл), и реакцию нагревали при 140°C в течение 18 часов. Реакционную смесь охлаждали при температуре приблизительно 25°C перед добавлением воды (100 мл), и полученный в результате водный раствор экстрагировали этилацетатом (3×20 мл). Объединенные органические фазы промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (3×30 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая соединение в виде коричневого масла. Масло хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 0,5% этилацетата в гексане, получая бледно-желтое масло (1,6 г, 20%), которое подтверждали ¹H ЯМР. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,53 (1H, т, 3,3 Гц) 7,45 (1H, д, 8,5 Гц), 7,04 (1H, д, 2,0 Гц), 6,88 (1H, дд, 8,5, 2,3 Гц), 6,70 (1H, дд, 2,2, 0,9 Гц), 3,86 (3H, с).

6-Метокси-1-бензофуран-2-сульфонилхлорид

К раствору 6-метокси-1-бензофурана (1,6 г, 10,8 ммоль) в THF (20 мл) при -78°C добавляли по каплям н-BuLi (2,5 M раствор в гексане, 4,8 мл, 11,8 ммоль), и перемешивание продолжали при данной температуре в течение 1 часа. Газообразный диоксид серы барботировали через реакционную смесь, поддерживая температуру -50°C в течение 1 часа, и перемешивание продолжали при данной температуре в течение следующего 1 часа. К данному раствору добавляли N-хлорсукцинимид (2,2 г, 16 ммоль), и реакционную смесь нагревали от -20°C до температуры приблизительно 25°C в течение 18 часов. Реакцию прекращали водой (25 мл), и органические слои экстрагировали в этилацетат (2×20 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сульфонилхлорид хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 2% этилацетата в гексане, получая зеленый твердый остаток (0,8 г, 30% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,61 (1H, д, 8,8 Гц), 7,59 (1H, д, 0,9 Гц), 7,09 (1H, д, 2,1 Гц), 7,05 (1H, дд, 8,8, 2,2 Гц), 3,91 (с, 3H).

N-Гидрокси-6-метокси-1-бензофуран-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (1,6 мл 50% раствора, 33,0 ммоль) в THF (18 мл) добавляли раствор 6-метокси-1-бензофуран-2-сульфонилхлорида (2,3 г, 9,3 ммоль) в THF (6 мл) по каплям при 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут, и ТСХ показала по существу полное потребление исходного соединения. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (50 мл) и промывали водой (2×15 мл), сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая соединение, которое растирали, применяя 5% DCM пентан, получая требуемый продукт в виде грязно-белого твердого остатка (0,9 г, 40% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 10,13 (1H, д, 2,2 Гц), 9,80 (1H, д, 1,9 Гц), 7,69 (1H, д, 8,7 Гц), 7,63 (1H, д, 0,9 Гц), 7,32 (1H, д, 2,0 Гц), 7,03 (1H, дд, 8,7, 2,2 Гц), 3,85 (3H, с).

Пример 26: 2-Фтор-N-гидрокси-4-метилбензол-1-сульфамид (14)

К раствору гидроксиламина (1,5 мл 50% водного раствора; 23,9 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл) и воде (2 мл), охлажденному до -10°C, добавляли порциями 2-фтор-4-метилбензол-1-сульфонилхлорид (2,0 г, 9,6 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 0°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут, после чего LC-MS показала полное потребление исходного соединения. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (30 мл), и органическую часть промывали 10% раствором лимонной кислоты (10 мл) перед отделением и сушкой над сульфатом магния, фильтрованием и концентрированием при пониженном давлении. Растирание с гептаном:диэтиловым эфиром давало N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка (1,06 г, 58% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,67 (2H, с), 7,69 (1H, т, 7,8 Гц), 7,29 (1H, д, 11,5 Гц), 7,23 (1H, д, 8,0 Гц), 2,40 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=204,0131; наблюдаемая [M-H]^-=204,0175.

Пример 27: N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-5-сульфамид (15)

К раствору водного гидроксиламина (0,7 мл 50% раствора, 10,65 ммоль) в тетрагидрофуране (6 мл) и воде (1 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 2,1,3-бензотиадиазол-5-сульфонилхлорид (1,0 г, 4,3 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 мин), после чего реакционную смесь разбавляли этилацетатом (20 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×5 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде оранжевого твердого остатка, дополнительная промывка раствором бикарбоната натрия (10 мл) требовалась для удаления примесей сульфиновой кислоты. Растирание осуществляли, применяя гептан:DCM (9:1, об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде оранжевого твердого остатка (0,53 г, 54% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,94 (1H, д, 3,2 Гц), 9,84 (1H, д, 3,2 Гц), 8,62-8,53 (1H, м), 8,42-8,32 (1H, м), 8,04 (1H, дд, 9,2, 1,7 Гц).

Пример 28: N-гидрокси-4-метансульфонилтиофен-2-сульфамид (16)

3-(Метилсульфанил)тиофен

К раствору 3-бромтиофена (3,3 г, 0,02 моль) в гептане (30 мл) при -40°C добавляли по каплям раствор н-бутиллития (8,5 мл 2,5M раствора в гексане). Тетрагидрофуран (3 мл) добавляли в колбу, и 3-литиотиофен осаждался в виде белого твердого остатка, и реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 25°C. Метилдисульфид (1,97 мл, 0,02 моль) добавляли по каплям к полученному в результате раствору, и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при температуре приблизительно 25°C. Добавляли в колбу воду (10 мл), органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 3-(метилсульфанил)тиофен в виде бесцветного масла (2,6 г, 98% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 7,34 (1H, дд, J=5,0, 3,0 Гц), 7,01 (1H, дд, J=5,0, 1,3 Гц), 6,99 (1H, дд, J=3,0, 1,3 Гц), 2,49 (3H, с).

3-Метансульфонилтиофен

К раствору 3-(метилсульфанил)тиофена (2,6 г, 19,96 ммоль) в уксусной кислоте (20 мл) добавляли пероксид водорода (4,53 мл 30% водного раствора, 39,93 ммоль). Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 3 часов и охлаждали до температуры приблизительно 25°C в течение 18 часов перед удалением уксусной кислоты при пониженном давлении. Полученный в результате органический остаток растворяли в этилацетате (30 мл), и раствор промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия (2×10 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая желтое масло, которое затвердевало при стоянии, и его применяли непосредственно в следующей стадии (2,2 г, 67,9% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 8,11 (1H, дд, J=3,1, 1,2 Гц), 7,49 (1H, дд, J=5,1, 3,1 Гц), 7,43 (1H, дд, J=5,2, 1,3 Гц), 3,11 (3H, с).

4-Метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорид

Хлорсульфокислоту (8,11 мл, 0,12 моль) добавляли к 3-метансульфонилтиофену (2,2 г, 13,56 ммоль), и суспензию нагревали при 90°C в течение 1 часа. Раствор охлаждали до температуры приблизительно 25°C и выливали на лед (100 мл). Сульфонилхлорид экстрагировали в дихлорметан (3×50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде бежевого твердого остатка (3,16 г, 89% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 8,50 (1H, д, J=1,6 Гц), 8,17 (1H, д, J=1,6 Гц), 3,19 (3H, с).

N-Гидрокси-4-метансульфонилтиофен-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (2,03 мл 50% водного раствора, 30,68 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл) и воде (3 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 4-метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорид (3,2 г, 12,27 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ (приблизительно 15 мин), после чего реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (25 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя диэтиловый эфир, получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (1,34 г, 42,4% выход). LC-MS t_R=0,91 мин, [M-H]^-=256; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,02 (1H, д, J=3,0 Гц), 9,96 (1H, д, J=3,2 Гц), 8,73 (1H, д, J=l,6 Гц), 7,98 (1H, д, J=1,6 Гц), 3,33 (3H, с).

Пример 29: 5-Бром-N-гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфамид (17)

К раствору водного гидроксиламина (2,89 мл 50% раствора, 43,78 ммоль) в тетрагидрофуране (30 мл) и воде (5 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 5-бром-2-метоксибензол-1-сульфонилхлорид (5 г, 17,51 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (50 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан:DCM (1:1, об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (2,94 г, 60% выход). LC-MS t_R=1,66 мин, [M-H]^-=281; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,68 (с, 1H), 9,39-9,17 (м, 1H), 7,85 (дд, J=8,9, 2,6 Гц, 1H), 7,80 (д, J=2,5 Гц, 1H), 7,24 (д, J=8,9 Гц, 1H), 3,90 (с, 3H).

Пример 30: 4-Хлор-N-гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфамид (18)

К раствору водного гидроксиламина (3,45 мл 50% раствора, 52,28 ммоль) в тетрагидрофуране (30 мл) и воде (5 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 4-хлор-2,5-диметилбензол-1-сульфонилхлорид (5 г, 20,91 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (50 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан:DCM (1:1, об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (3,26 г, 66% выход). LC-MS t_R=1,86 мин, [M-H]^-=234; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,59 (с, 2H), 7,78 (с, 1H), 7,52 (с, 1H), 2,55 (с, 3H), 2,36 (с, 3H).

Пример 31: N,N-диэтил-5-(гидроксисульфамоил)тиофен-2-карбоксамид (19)

N,N-диэтилтиофен-2-карбоксамид

К раствору диэтиламина (4,9 г, 68,2 ммоль) в DCM (100 мл) последовательно добавляли триэтиламин (6,9 г, 68,2 ммоль) и тиофен-2-карбонилхлорид (10 г, 68,2 ммоль), и полученный в результате раствор перемешивали в течение 8 часов при температуре приблизительно 25°C. Реакционную смесь разбавляли DCM (50 мл) и промывали водой (2×50 мл), и органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая продукт в виде коричневой жидкости (11,0 г, 87% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,42 (1H, дд, 5,0, 1,1 Гц), 7,32 (1H, дд, 3,7, 1,1 Гц), 7,04 (1H, дд, 5,0, 3,6 Гц), 3,54 (4H, кв, 7,1 Гц), 1,26 (6H, т, 7,1 Гц).

5-(Диэтилкарбамоил)тиофен-2-сульфонилхлорид

К охлажденному на льду раствору N,N-диэтилтиофен-2-карбоксамида (15,0 г, 81,8 ммоль) добавляли по каплям хлорсульфокислоту (38,2 г, 327 ммоль), и полученный в результате раствор перемешивали при 0°C в течение 30 минут перед нагреванием при 80°C в течение 12 часов. Реакционную смесь прекращали добавлением ко льду, и полученный в результате кислый раствор экстрагировали в DCM (20 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая сульфонилхлорид в виде смеси изомеров. Требуемое соединение получали хроматографированием на колонке с силикагелем, элюируя 18% EtOAc:гексан (1,9 г, 8% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,79 (1H, д, 4,1 Гц), 7,28 (1H, т, 3,6 Гц), 3,53 (4H, кв, 7,1 Гц), 1,28 (6H, т, 7,1 Гц).

N,N-диэтил-5-(гидроксисульфамоил)тиофен-2-карбоксамид

Раствор 5-(диэтилкарбамоил)тиофен-2-сульфонилхлорида (1,8 г, 6,3 ммоль) в THF (20 мл) добавляли к раствору водного гидроксиламина (0,5 г, 15,8 ммоль) в воде (5 мл) и THF (20 мл), поддерживая температуру -10°C - -5°C. Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 40 минут, после чего наблюдали, что реакция по существу завершилась по ТСХ. Реакционную смесь выливали в этилацетат (50 мл) и промывали водой (20 мл). Органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (1,9 г). Требуемый N-гидроксисульфамид выделяли растиранием с DCM:н-пентаном (2:8; об.:об.), получая белый твердый остаток (1,0 г, 56% выход). ¹H ЯМР (360 МГц, DMSO-d₆) δ 9,90 (1H, д, 3,2 Гц) 9,85 (1H, д, 3,2 Гц) 7,59 (1H, д, 4,1 Гц) 7,45 (1H, д, 4,1 Гц) 3,45 (4H, кв, 6,8 Гц) 1,16 (6H, т, 6,4 Гц); ожидаемая [M-H]^-=277,0317; наблюдаемая [M-H]^-=277,0316.

Пример 32: 5-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфамид (20)

К раствору водного гидроксиламина (1,5 мл 50% раствора, 23,9 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) и воде (2 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли раствор 5-фтор-2-метилбензол-1-сульфонилхлорида (2,0 г, 9,6 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 10 минут), после чего реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (30 мл), и органическую часть отделяли и промывали 1M раствором лимонной кислоты (10 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка (0,64 г, 32,1% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,77 (1H, м), 9,72 (1H, м), 7,59 (1H, дд, 8,7, 2,0 Гц), 7,49 (1H, м), 7,46 (1H, м), 2,58 (1H, д, 0,8 Гц); ожидаемая [M-H]^-=204,0131; наблюдаемая [M-H]^-=204,0129.

Пример 33: N-Гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфамид (21)

4-[(Тиофен-2-ил)карбонил]морфолин

К раствору морфолина (3,3 мл, 37 ммоль) и диизопропилэтиламина (6,5 мл, 37 ммоль) в дихлорметане (50 мл), охлажденному до 0°C, добавляли по каплям тиофен-2-карбонилхлорид (5 г, 34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов при температуре приблизительно 25°C перед прекращением добавлением 1N раствора HCl (20 мл). Органическую часть промывали водой (10 мл) и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение (7,01 г, 65% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,76 (1H, дд, 5,0, 1,1 Гц), 7,42 (1H, дд, 3,7, 1,2 Гц), 7,12 (1H, дд, 4,9, 3,7 Гц), 3,53-3,71 (8H, м).

5-[(Морфолин-4-ил)карбонил]тиофен-2-сульфонилхлорид

Хлорсульфокислоту (45,57 мл, 684,4 ммоль) добавляли к 4-[(тиофен-2-ил)карбонил]морфолину (13,5 г, 68,44 ммоль), и суспензию нагревали при 100°C в течение 2 часов. Раствор охлаждали до температуры приблизительно 25°C и выливали на лед (500 мл). Сульфонилхлорид экстрагировали в дихлорметан (3×100 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде смеси изомеров (16,5 г), которые разделяли колонкой с силикагелем, элюируя 0-50% градиентом этилацетат:гептан (4,15 г, 20,5% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,19 (1H, д, J=3,7 Гц), 7,07 (1H, д, J=3,8 Гц), 3,62 (8H, с). Другой изомер, (5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-3-сульфонилхлорид), выделяли для применения в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (1,4 г, 6,5% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 8,35 (1H, д, J=1,4 Гц), 7,63 (1H, д, J=1,3 Гц), 3,78 (8H, с).

N-Гидрокси-5-[(морфолин-4-ил)карбонил]тиофен-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (1,12 мл 50% раствора, 16,91 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл) и воде (2 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли раствор 5-[(морфолин)-4-ил)карбонил]тиофен-2-сульфонилхлорида (2 г, 6,76 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 10 мин), после чего реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (30 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (0,24 г, 12,4% выход). LC-MS t_R=1,11 мин, [M+H]⁺=293; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,90 (1H, с), 9,85 (1H, с), 7,60 (1H, д, J=3,9 Гц), 7,48 (1H, д, J=3,9 Гц), 3,63 (8H, с).

Пример 34: 5-(гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид (22)

N-(Пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид

К раствору изопропиламина (3,2 мл, 37 ммоль) и диизопропилэтиламина (5,3 мл, 37 ммоль) в дихлорметане (50 мл), охлажденному до 0°C, добавляли по каплям тиофен-2-карбонилхлорид (5 г, 34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов при температуре приблизительно 25°C перед прекращением добавлением 1N раствора HCl. Органическую часть промывали водой и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение (5,78 г, 99% выход).

5-[(Пропан-2-ил)карбамоил]тиофен-2-сульфонилхлорид

Хлорсульфокислоту (23 мл, 337 ммоль) добавляли к N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамиду (5,7 г, 33,7 ммоль), и суспензию нагревали при 100°C в течение 90 минут. Раствор охлаждали до температуры приблизительно 25°C и выливали на лед (300 мл). Сульфонилхлорид экстрагировали в дихлорметан (3×100 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде смеси изомеров которые разделяли колонкой с силикагелем, элюируя градиентом 0-30% этилацетат:гептан (1,6 г, 17,7% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,97 (1H, д, 6,7 Гц), 7,30 (1H, д, 3,8 Гц), 6,83 (1H, д, 3,8 Гц), 3,71-3,82 (1H, м), 0,90 (6H, д, 6,7 Гц). Другой изомер, (5-[(пропан-2-ил)карбамоил]тиофен-3-сульфонилхлорид), выделяли в данном получении и применяли для получения соответствующего N-гидроксисульфамида (2,3 г, 25,5% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 8,36 (1H, д, 7,8 Гц), 7,91 (1H, д, 1,2 Гц), 7,64 (1H, д, 1,2 Гц), 4,01 (1H, септ, 6,8 Гц), 1,13 (6H, д, 6,6 Гц).

5-(Гидроксисульфамоил)-N-(пропан-2-ил)тиофен-2-карбоксамид

К раствору водного гидроксиламина (0,99 мл 50% раствора, 15 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) и воде (1,6 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли порциями 5-[(пропан-2-ил)карбамоил]тиофен-2-сульфонилхлорид (1,6 г, 5,98 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 10 мин), после чего реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (30 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка (0,7 г, 44% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d_d) δ м.д. 9,86 (1H, уш.с), 9,80 (1H, с), 8,57 (1H, д, 7,8 Гц), 7,81 (1H, д, 4,0 Гц), 7,63 (1H, д, 4,1 Гц), 3,95-4,21 (1H, м), 1,16 (6H, д, 6,6 Гц); ожидаемая [M-H]^-=263,0160; наблюдаемая [M-H]^-=263,0161.

Пример 35: N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-2-сульфамид (23)

5-Метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорид

Хлорсульфокислоту (14,4 мл, 215 ммоль) добавляли к 2-метансульфонилтиофену (5,0 г, 30,8 ммоль), и реакцию нагревали при 90°C в течение 1 часа. Полученный в результате окрашенный раствор выливали на лед, и органическую часть экстрагировали в DCM (2×30 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемый сульфонилхлорид в виде смеси с побочным 2,4 изомером, и смесь применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (4,6 г, 26% выход). LC-MS t_R=1,92 мин; [M-Cl+OH+H]⁺=240,80; ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ 7,57 (1H, д, 3,8 Гц), 7,18 (1H, д, 3,8 Гц), 3,31 (3H, с).

N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (1,6 мл 50% водного раствора, 24 ммоль) в THF (10 мл) и воде (2 мл) при -10°C добавляли порциями 5-метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорид (1,3 г, 4,8 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру -5°C. Перемешивание продолжали при низкой температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида. Добавляли DCM (20 мл), и реакцию промывали водой (5 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемый N-гидроксисульфамид в виде смеси с побочным 2,4 изомером в виде грязно-белого твердого остатка. Разделение двух изомеров осуществляли кислой обращено-фазовой ВЭЖХ, получая требуемый 2,5-изомер (0,5 г, 41% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 10,09 (2H, с), 7,91 (1H, д, 4,0 Гц), 7,75 (1H, д, 4,0 Гц), 3,48 (с, 3H).

Пример 36: N-Гидрокси-2,1,3-бензотиадиазол-4-сульфамид (24)

К раствору водного гидроксиламина (0,7 мл 50% раствора, 10,65 ммоль) в тетрагидрофуране (6 мл) и воде (1 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 2,1,3-бензотиадиазол-4-сульфонилхлорид (1,0 г, 4,3 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×5 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде желтого твердого остатка, который растирали с гептаном и сушили при пониженном давлении (0,59 г, 59,9% выход). LC-MS t_R=1,26 мин, [M-H]^-=230; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,73 (с, 2H), 8,45 (дд, J=8,8, 0,9 Гц, 1H), 8,28 (дд, J=7,0, 0,9 Гц, 1H), 7,92 (дд, J=8,8, 7,1 Гц, 1H); ожидаемая [M-H]^-=229,9694; наблюдаемая [M-H]^-=229,9687.

Пример 37: N-Гидрокси-2-метоксибензол-1-сульфамид (25)

К раствору гидроксиламина HCl (1,31 г, 18,9 ммоль) в воде (1,6 мл), охлажденному до 0°C, добавляли раствор карбоната калия (2,62 г, 18,9 ммоль) в воде (2,4 мл) по каплям, поддерживая внутреннюю температуру реакции между 5°C и 15°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут, после чего добавляли тетрагидрофуран (8 мл) и метанол (2,0 мл). Добавляли порциями 2-метоксибензол-1-сульфонилхлорид (1,96 г, 9,48 ммоль), поддерживая температуру ниже 15°C, и реакционную смесь перемешивали при 5°C до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ. Полученную в результате суспензию концентрировали при пониженном давлении, удаляя любые летучие компоненты, и водную суспензию экстрагировали диэтиловым эфиром (2×50 мл). Органическую часть сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка (0,4 г, 21% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,53 (1H, д, J=3,4 Гц), 8,99 (1H, д, J-3,4 Гц), 7,76 (1H, дд, J=7,8, 1,7 Гц), 7,62-7,67 (1H, м), 7,23 (1H, д, J=8,3 Гц), 7,11 (1H, т, J=7,6 Гц), 3,89 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=202,0174; наблюдаемая [M-H]^-=202,0155.

Пример 38: N-Гидроксипиридин-3-сульфамид (26)

К раствору водного гидроксиламина (11,07 мл 50% раствора, 167,5 ммоль) в тетрагидрофуране (40 мл), охлажденному до -15°C, медленно добавляли суспензию пиридин-3-сульфонилхлорида (11,9 г, 67 ммоль) в THF (30 мл), и температуру поддерживали ниже 2°C - 3°C в процессе добавления, и перемешивание продолжали в течение дополнительных 10 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Добавляли дихлорметан (50 мл) и воду (25 мл), и смесь встряхивали, два слоя разделяли, и водный слой дополнительно экстрагировали дихлорметаном (1×50 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом магния и концентрировали, получая твердый остаток, который был нерастворимым в дихлорметане, и растирали с дихлорметаном:гептаном (1:1 об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (3,47 г, 29,7% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,85 (1H, д, J=2,8 Гц), 9,80 (1H, с), 8,95 (1H, д, J=2,2 Гц), 8,87 (1H, дд, J=4,8, 1,5 Гц), 8,20 (1H, дт, J=8,0, 1,9 Гц), 7,69 (1H, дд, J=8,0, 4,9 Гц), ожидаемая [M+H]⁺=175,0177; наблюдаемая [M+H]⁺=175,0172.

Пример 39: N-гидрокси-3,5-диметил-1,2-оксазол-4-сульфамид (27)

К раствору водного гидроксиламина (22,79 мл 50% раствора, 0,35 моль) в тетрагидрофуране (160 мл) и воде (27 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли порциями диметил-1,2-оксазол-4-сульфонилхлорид (27 г, 138,02 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 10 мин), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (250 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×30 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (16,16 г, 60,9% выход). LC-MS t_R=1,08 мин, [M+H]⁺=193; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,79 (д, J=2,8 Гц, 1H), 9,64 (д, J=2,8 Гц, 1H), 2,60 (с, 3H), 2,35 (с, 3H).

Пример 40: N-гидрокси-5-(морфолин-4-карбонил)тиофен-3-сульфамид (28)

5-(Морфолин-4-карбонил)тиофен-3-сульфонилхлорид

К 4-(тиофен-2-карбонил)морфолину (15 г, 76,04 ммоль) добавляли по каплям хлорсульфокислоту (35,44 г, 304,18 ммоль) при -5 - 0° C в атмосфере азота. Температуру поддерживали равной 0°C в течение 30 минут перед перемешиванием при температуре приблизительно 25°C в течение 1 часа. Не наблюдали протекания реакции, и температуру повышали до 80°C на следующие 12 часов. Полученную в результате суспензию выливали в ледяную воду (500 мл) и экстрагировали в дихлорметан (30 мл) перед сушкой над сульфатом натрия и концентрированием при пониженном давлении, получая соединение в виде смеси изомеров. Сульфонилхлорид хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя EtOAc:гексан (30% EtOAc), получая заявленное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (3,0 г, 13,34% выход). LC-MS t_R=1,18 мин, [M+H]⁺=293; ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,35 (д, J=1,3 Гц, 1H), 7,62 (д, J=1,4 Гц, 1H), 4,12 (д, J=7,1 Гц, 1H), 3,78 (с, 8H), 2,09 (с, 1H), 2,05 (с, 1H), 1,26 (т, J=7,1 Гц, 1H).

Пример 41: 1-N-гидрокси-2-N-(пропан-2-ил)бензол-1,2-дисульфамид (29)

2-Фтор-N-(пропан-2-ил)бензол-1-сульфамид

Раствор 2-фторбензолсульфонилхлорида (3,6 мл, 27,4 ммоль) в DCM (50 мл) охлаждали до 0°C и добавляли пропан-2-амин (3,5 мл, 41,2 ммоль), с последующим добавлением пиридина (3,3 мл, 41,2 ммоль). Реакцию нагревали до температуры приблизительно 25°C, и перемешивание продолжали в течение 1 часа. Реакцию прекращали добавлением 1M раствора гидроксида натрия (10 мл), и полученную в результате органическую часть промывали водой (10 мл), 1M водной HCl (10 мл) и соляным раствором (10 мл) перед сушкой над сульфатом магния, фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая масло, которое затвердевало при стоянии (4,95 г, 83% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ 7,91 (1H, тд, 7,6, 1,8 Гц), 7,64-7,48 (1H, м), 7,26 (2H, м), 4,65 (1H, д, 6,5 Гц), 3,63-3,40 (1H, м, 6,7 Гц), 1,10 (6H, д, 6,5 Гц).

2-(Бензилсульфанил)-N-(пропан-2-ил)бензол-1-сульфамид

К раствору фенилметантиола (648 мкл, 5,52 ммоль) в DMSO (8 мл) добавляли NaOH (0,28 г, 6,9 ммоль), и реакцию перемешивали в течение 20 минут (до растворения гранул NaOH). Добавляли 2-фтор-N-(пропан-2-ил)бензол-1-сульфамид (645 мкл, 4,6 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 75°C в течение 18 часов. Реакцию охлаждали до температуры приблизительно 25°C и добавляли воду (1 мл). Реакцию впоследствии подкисляли концентрированной HCl перед экстракцией органической части в этилацетат (2×10 мл). Объединенные органические слои промывали водой (5 мл) и соляным раствором (5 мл) перед сушкой над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая масло, которое хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя градиентом 7-50% этилацетат:гептан, получая требуемое соединение в виде желтого масла, которое затвердевало при стоянии и впоследствии растирали с гептаном, получая грязно-белый твердый остаток (1,1 г, 71% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ 8,14-8,00 (1H, м), 7,45-7,23 (8H, м), 5,35 (1H, д, 7,2 Гц), 4,24 (2H, с), 3,37 (1H, септ, 6,6 Гц), 0,98 (6H, д, 6,5 Гц).

2-[(Пропан-2-ил)сульфамоил]бензол-1-сульфонилхлорид

Раствор 2-(бензилсульфанил)-N-(пропан-2-ил)бензол-1-сульфамида (1,5 г, 4,67 ммоль) в ацетонитриле (46 мл), уксусной кислоте (1,8 мл) и воде (1,2 мл) охлаждали до 0°C (внешняя температура) и добавляли одной порцией 1,3-дихлор-5,5-диметилимидазолидин-2,4-дион (1,84 г, 9,33 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа при 0°C. Реакционную смесь разбавляли DCM (50 мл), и органическую часть промывали водным насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и соляным раствором (20 мл) перед сушкой над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая бесцветное масло, которое хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя градиентом 5-40% гептан:EtOAc, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (0,8 г, 52% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ 8,36 (2H, дт, 7,9, 1,5 Гц), 7,95-7,77 (2H, м), 5,50 (1H, д, 7,3 Гц), 3,66-3,42 (1H, м), 1,06 (6H, д, 6,6 Гц).

1-N-Гидрокси-2-N-(пропан-2-ил)бензол-1,2-дисульфамид

К раствору водного гидроксиламина (0,8 мл 50% раствора, 11,7 ммоль) добавляли THF (6 мл) и воду (1,5 мл), и раствор охлаждали до -10°C. К данному охлажденному раствору добавляли по каплям раствор 2-[(пропан-2-ил)сульфамоил]бензол-1-сульфонилхлорида (1,4 г, 4,7 ммоль) в THF (3 мл), поддерживая температуру ниже 2-3°C в процессе добавления. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 10 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (10 мл) и промывали водой (2 мл). Водный слой дополнительно экстрагировали в DCM (10 мл), и органические слои объединяли и сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая масло. Данное масло растворяли в минимальном количестве DCM, и затем добавляли гептан, после чего выпадал белый твердый осадок. Выпавший осадок собирали фильтрованием, промывали с гептаном и сушили при пониженном давлении, получая 1-N-гидрокси-2-N-(пропан-2-ил)бензол-1,2-дисульфамид в виде белого твердого остатка (0,6 г, 42% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ 10,06 (1H, д, 3,4 Гц), 9,09 (1H, д, 3,5 Гц), 8,25-8,08 (2H, м), 8,01-7,78 (2H, м), 7,02 (1H, д, 7,5 Гц), 3,41 (1H, дд, 13,5, 6,8 Гц), 0,98 (6H, д, 6,5 Гц).

Пример 42: 5-Хлор-N-гидрокси-1,3-диметил-1H-пиразол-4-сульфамид (30)

К раствору водного гидроксиламина (1,4 мл 50% раствора, 0,02 моль) в тетрагидрофуране (12 мл) и воде (2 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 5-хлор-1,3-диметил-1H-пиразол-4-сульфонилхлорид (2 г, 8,7 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×5 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Твердый остаток выделяли растиранием с гептаном:диэтиловым эфиром (1:1 об.:об.), получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка (1,16 г, 58% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,56 (1H, д, 2,1 Гц), 9,39 (1H, д, 2,3 Гц), 3,77 (3H, с), 2,30 (3H, с), ожидаемая [M-H]^-=223,9897; наблюдаемая [M-H]^-=223,9893.

Пример 43: N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-4-сульфамид (31)

К раствору водного гидроксиламина (0,91 мл 50% раствора, 13,84 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл) и воде (1 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 1-метил-1H-пиразол-4-сульфонилхлорид (1 г, 5,54 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (10 мл), с последующими 200 мл из-за низкой растворимости, и органическую часть отделяли, промывали водой (2×5 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка (641 мг, 65% выход). LC-MS t_R=0,38 мин, [M+H]⁺=179; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,52 (с, 1H), 9,26 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 7,72 (с, 1H), 3,89 (с, 3H).

Пример 44: N-Гидроксипиридин-2-сульфамид (32)

Раствор карбоната калия (6,2 г, 45,0 ммоль) в воде (4,8 мл) добавляли по каплям к раствору гидрохлорида гидроксиламина (3,11 г, 45,0 ммоль) в воде (7,2 мл) при 0°C, поддерживая внутреннюю температуру реакции между 5°C и 15°C. Добавляли тетрагидрофуран (24 мл) и метанол (6 мл), с последующим добавлением порциями пиридин-2-сульфонилхлорида (4,0 г, 21,5 ммоль), поддерживая температуру ниже 15°C, и реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ. Полученную в результате суспензию концентрировали, удаляя любые летучие компоненты, и водную суспензию разбавляли диэтиловым эфиром (50 мл), и реакционную смесь промывали водой (10 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Перекристаллизацию требуемого соединения осуществляли из диэтилового эфира, получая требуемый продукт в виде белого твердого остатка (1,2 г, 31% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,98 (1H, д, 2,9 Гц), 9,60 (1H, д, 2,9 Гц), 8,78 (1H, ддд, 4,6, 1,7, 1,0 Гц), 8,10 (1H, дд, 7,6, 1,7 Гц), 8,01 (1H, дт, 7,8, 1,0 Гц), 7,71 (1H, ддд, 7,6, 4,6, 1,2 Гц); ожидаемая [M-H]^-=173,0021; наблюдаемая [M-H]^-=173,0001.

Пример 45: 3-Бром-N-гидроксипиридин-2-сульфамид (33)

3-Бром-2-меркаптопиридин

К раствору 2-хлор-3-бромпиридина (0,5 г, 2,5 ммоль) в этаноле (5 мл) и воде (1 мл) в пробирке высокого давления добавляли гидросульфид натрия (0,73 г, 13 ммоль). Реакцию нагревали при 140°C в течение 18 часов, после чего исходного соединения не оставалось. Продукт растворяли в этилацетате (10 мл) и промывали 10% раствором карбоната калия (5 мл). Полученный в результате водный экстракт подкисляли до pH 5 6N хлористоводородной кислотой и экстрагировали этилацетатом (2×25 мл). Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении (0,41 г, 84% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 8,05 (1H, дд, 7,5, 1,6 Гц), 7,75 (1H, д, 5,1 Гц), 6,66 (1H, дд, 7,6, 6,1 Гц).

3-Бромпиридин-2-сульфонилхлорид

К раствору 2-меркапто-3-бромпиридина (5,3 г, 27,5 ммоль) в концентрированной хлористоводородной кислоте (20 мл), охлажденному до 0°C, добавляли газообразный хлор при постоянной скорости до того, как достигали по существу полного насыщения. После завершения реакции сульфонилхлорид добавляли к ледяной воде, и полученную в результате водную фазу экстрагировали дихлорметаном (3×100 мл). Объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Сульфонилхлорид применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида.

3-Бром-N-гидроксипиридин-2-сульфамид

Раствор карбоната калия (3,21 г, 23,3 ммоль) в воде (3,6 мл) добавляли по каплям к раствору гидрохлорида гидроксиламина (1,61 г, 23,3 ммоль) в воде (2,4 мл) при 0°C, поддерживая внутреннюю температуру реакции между 5°C и 15°C. Добавляли тетрагидрофуран (12 мл) и метанол (3 мл), с последующим добавлением порциями 3-бромпиридин-2-сульфонилхлорида (3,0 г, 11,65 ммоль), поддерживая температуру ниже 15°C, и реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ. Полученную в результате суспензию концентрировали, удаляя любые летучие компоненты, и водную суспензию разбавляли диэтиловым эфиром (50 мл), и реакцию промывали водой (10 мл). Водную часть экстрагировали диэтиловым эфиром (2×15 мл), и объединенные органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. N-Гидроксисульфамид хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя градиентом гептан:этилацетат, получая требуемый продукт в виде белого твердого остатка (0,4 г, 5% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,34 (1H, д, 2,9 Гц), 9,62 (1H, д, 2,9 Гц), 8,71 (1H, дд, 4,5, 1,3 Гц), 8,37 (1H, дд, 8,2, 1,3 Гц), 7,62 (1H, дд, 8,1, 4,4 Гц); ожидаемая [M-H]^-=250,9126; наблюдаемая [M-H]^-=250,9135.

Пример 46: 4-N-Гидрокситиофен-2,4-дисульфамид (34)

4-N-Гидрокситиофен-2,4-дисульфамид получали из 5-сульфамоилтиофен-3-сульфонилхлорида (1 г, 3,8 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,25 г, 26 5 выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ 10,05 (с, 2H), 9,99 (с, 1H), 9,80 (с, 1H), 8,60 (1H, д, J 1,5 Гц), 7,83 (1H, д, 1,5 Гц).

Пример 47: N-Гидрокси-4-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфамид (35)

К раствору водного гидроксиламина (0,3 мл 50% раствора, 4,2 ммоль) добавляли THF (3 мл) и воде (0,5 мл), и раствор охлаждали до -10°C. К данному охлажденному раствору добавляли порциями 4-(морфолин-4-карбонил)тиофен-2-сульфонилхлорид (0,5 г, 1,7 ммоль), поддерживая температуру ниже 2-3°C в процессе добавления. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 10 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (10 мл) и промывали водой (2 мл). Водный слой дополнительно экстрагировали в DCM (10 мл), и органические слои объединяли и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соединение растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,2 г, 40% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,88 (1H, д, 2,9 Гц), 9,80 (1H, д, 2,9 Гц), 8,22 (1H, с), 7,67 (1H, с), 3,44-3,71 (8H, м); ожидаемая [M-H]^-=291,0109; наблюдаемая [M-H]^-=291,0110.

Пример 48: N-Гидрокси-5-[5-(трифторметил)-1,2-оксазол-3-ил]тиофен-2-сульфамид (36)

N-Гидрокси-5-[5-(трифторметил)-1,2-оксазол-3-ил]тиофен-2-сульфамид получали из 5-[5-(трифторметил)-1,2-оксазол-3-ил]тиофен-2-сульфонилхлорида (1 г, 3,2 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,7 г, 71% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,98 (1H, с), 9,95 (1H, уш.с), 8,17 (1H, с), 7,93 (1H, д, 4,0 Гц), 7,78 (1H, д, 3,8 Гц); ожидаемая [M-H]^-=312,9565; наблюдаемая [M-H]^"-=312,9564.

Пример 49: 6-Хлор-N-гидрокси-7H,7aH-имидазо[2,1-b][1,3]тиазол-5-сульфонамид (37)

6-Хлор-N-гидрокси-7H,7aH-имидазо[2,1-b][1,3]тиазол-5-сульфамид получали из 6-хлор-7H,7aH-имидазо[2,l-b][1,3]тиазол-5-сульфонилхлорида (0,1 г, 0,4 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,03 г, 30% выход), ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,02 (1H, уш.с), 9,84 (1H, с), 7,88 (1H, д, 4,6 Гц), 7,61 (1H, д, 4,4 Гц).

Пример 50: N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфамид (38)

N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфамид получали из 5-(1,2-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфонилхлорида (5,0 г, 20 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (2,6 г, 53% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,96 (1H, с), 9,92 (1H, уш.с), 8,74 (1H, с), 7,79 (1H, д, 3,8 Гц), 7,73 (1H, д, 4,0 Гц), 7,13 (1H, с); ожидаемая [M-H]^-=244,9691; наблюдаемая [M-H]^-=244,9702.

Пример 51: 4-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфамид (39)

4-Фтор-N-гидрокси-2-метилбензол-1-сульфамид получали из 4-фтор-2-метилбензол-1-сульфонилхлорида (1,0 г, 4,8 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,65 г, 65% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,60 (1H, с), 9,59 (1H, с), 7,89 (1H, дд, 8,7, 6,0 Гц), 7,28-7,33 (1H, м), 7,26 (1H, т, 8,5 Гц), 2,60 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=204,0131; наблюдаемая [M-H]^-=204,0138.

Пример 52: N-Гидрокси-5-(1,3-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфамид (40)

N-Гидрокси-5-(1,3-оксазол-5-ил)тиофен-2-сульфамид получали из 5-(1,3-оксазол-5-ил)-2-тиофенсульфонилхлорида согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,02 г, 1%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,91 (1H, с), 9,82 (1H, уш.с), 8,51 (1H, с), 7,77 (1H, с), 7,66 (1H, д, 3,7 Гц), 7,56 (1H, д, 3,5 Гц).

Пример 53: N-Гидрокси-2,5-диметилтиофен-3-сульфамид (41)

N-Гидрокси-2,5-диметилтиофен-3-сульфамид получали из 2,5-диметил-3-тиофенсульфонилхлорида (2,0 г, 9,5 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде желтого твердого остатка (0,5 г, 25%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,53 (1H, д, 3,1 Гц), 9,39 (1H, д, 3,1 Гц), 6,89 (1H, с), 2,57 (3H, с), 2,38 (3H, с); ожидаемая [M+H]⁺=208,0102; наблюдаемая [M+H]⁺=208,0374.

Пример 54: метил 5-(гидроксисульфамоил)-4-метилтиофен-2-карбоксилат (42)

Метил 5-(гидроксисульфамоил)-4-метилтиофен-2-карбоксилат получали из метил 5-(хлорсульфонил)-4-метил-2-тиофенкарбоксилата (2,0 г, 7,9 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром:гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,96 г, 49%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 9,91 (1H, с), 9,89 (1H, уш.с), 7,74 (1H, с), 3,85 (3H, с), 2,44 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=249,9844; наблюдаемая [M-H]^-=249,9832.

Пример 55: 5-(бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфамид (43)

5-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфамид получали из 5- (бензолсульфонил)тиофен-2-сульфонилхлорида (2,5 г, 7,7 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя градиентом гептан:этилацетат, с последующим растиранием с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (1,0 г, 40% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,12 (1H, д, 2,9 Гц), 10,05 (1H, д, 2,9 Гц), 8,06 (2H, д, 8,2 Гц), 7,94 (1H, д, 4,0 Гц), 7,77 (1H, д, 7,3 Гц), 7,64-7,73 (3H, м); ожидаемая [M-H]^-=317,9565; наблюдаемая [M-H]^-=317,9550.

Пример 56: N-гидрокси-5-(1,2-оксазол-3-ил)тиофен-2-сульфамид (44)

N-Гидрокси-5-(1,2-оксазол-3-ил)тиофен-2-сульфамид получали из 5-(1,2-оксазол-3-ил)тиофен-2-сульфонилхлорида (0,25 г, 1,0 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,18 г, 71% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,95 (1H, д, 2,4 Гц), 9,91 (1H, д, 2,7 Гц), 8,75 (1H, с), 7,79 (1H, д, 4,0 Гц), 7,73 (1H, д, 3,8 Гц), 7,14 (1H, с); ожидаемая [M-H]^-=244,9691; наблюдаемая [M-H]^-=244,9693.

Пример 57: 5-Бром-N-гидрокситиофен-2-сульфамид (45)

5-Бром-N-гидрокситиофен-2-сульфамид получали из 5-бромтиофенсульфонилхлорида (2,0 г, 7,6 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (1,2 г, 60%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,88 (1H, с), 9,80 (1H, уш.с), 7,49 (1H, д, 4,0 Гц), 7,40 (1H, д, 3,9 Гц); ожидаемая [M-H]^-=255,8738; наблюдаемая [M-H]^-=255,8727.

Пример 58: 3,5-дибром-N-гидрокситиофен-2-сульфонамид (46)

3,5-дибромтиофен-2-сульфонилхлорид

К раствору 2,4-дибромтиофена (2,0 г, 8,2 ммоль) в DCM (10 мл), охлажденному до 0°C, добавляли по каплям хлорсульфокислоту (2,9 г, 24 ммоль). Перемешивание продолжали в течение дополнительных 3 часов, после чего реакционную смесь добавляли ко льду, и органическую часть экстрагировали в DCM (3×50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемый сульфонилхлорид, который применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамид (1,8 г, 63% выход); ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,15 (1H, с).

3,5-дибром-N-гидрокситиофен-2-сульфамид

3,5-дибром-N-гидрокситиофен-2-сульфамид получали из 3,5-дибромтиофен-2-сульфонилхлорида (1,8 г, 5,2 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:этилацетатом (1:1 об.:об.), с последующим растиранием с диэтиловым эфиром:гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,7 г, 40% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,02 (1H, д, 2,9 Гц), 9,93 (1H, д, 2,9 Гц), 7,59 (1H, с); ожидаемая [M-H]^-=333,7843; наблюдаемая [M-H]^-=333,7949.

Пример 59: 5-Хлор-N-гидрокси-4-нитротиофен-2-сульфамид (47)

5-Хлор-N-гидрокси-4-нитротиофен-2-сульфамид получали из 5-хлор-4-нитротиофен-2-сульфонилхлорида (2,0 г, 7,6 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:этилацетатом (1:7 об.:об.), получая требуемое соединение в виде оранжевого твердого остатка (0,95 г, 48% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,19 (1H, д, 3,6 Гц), 8,05 (1H, с); ожидаемая [M-H]^-=256,9094; наблюдаемая [M-H]^-=256,9087.

Пример 60: 3-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфамид (48)

3-Хлор-тиофен-2-сульфонилхлорид

К раствору 3-хлортиофена (20 г, 0,17 моль) в DCM (40 мл), охлажденному до 0°C, добавляли хлорсульфокислоту (34 мл, 0,51 моль), и перемешивание продолжали в течение 2 часов; после чего реакционную смесь выливали на лед, и полученный в результате раствор экстрагировали в DCM (3×50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение, которое применяли непосредственно в следующей стадии (3,5 г, 20%). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 7,75 (1H, д, 5,3 Гц), 7,15 (1H, д, 5,3 Гц).

3-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфамид

3-Хлор-N-гидрокситиофен-2-сульфамид получали из 3-хлортиофен-2-сульфонилхлорида (3,0 г, 13,8 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и перекристаллизовывали из смеси 5% этилацетат:гептан, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (1,39 г, 46% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,95 (1H, c), 9,90 (1H, уш.с), 8,16 (1H, д, 5,4 Гц), 7,35 (1H, д, 5,2 Гц); ожидаемая [M-H]^-=211,9243; наблюдаемая [M-H]^-=211,9241.

Пример 61: N-Гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфамид (49)

N-Гидрокси-2,5-диметилбензол-1-сульфамид получали из 2,5-диметилбензол-1-сульфонилхлорида (1,0 г, 4,9 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,6 г, 60% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,48-9,54 (2H, м), 7,66 (1H, д, 1,2 Гц), 7,34-7,40 (1H, м), 7,25-7,31 (1H, м), 2,54 (3H, с), 2,34 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=200,0381; наблюдаемая [M-H]^-=200,0382.

Пример 62: 5-Хлор-N-гидрокси-2,1,3-бензоксадиазол-4-сульфамид (50)

5-Хлор-N-гидрокси-2,1,3-бензоксадиазол-4-сульфамид получали из 5-хлор-2,1,3-бензоксадиазол-4-сульфонилхлорида (1 г, 3,9 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептаном:этилацетатом (1:1 об.:об.), получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,04 г, 5% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,19 (1H, д, 2,9 Гц), 9,95 (1H, д, 2,9 Гц), 8,45 (1H, д, 9,4 Гц), 7,82 (1H, д, 9,4 Гц).

Пример 63: 4-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфамид (51)

4-(Бензолсульфонил)-N-гидрокситиофен-2-сульфамид получали из 4-(бензолсульфонил)тиофен-2-сульфонилхлорида (1,0 г, 3,1 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 30% этилацетат:гептан, получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,51 г, 51% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,05 (1H, уш.с), 9,44 (1H, с), 8,84 (1H, с), 8,09 (1H, м), 8,00 (1H, м), 7,87 (1H, м), 7,71 (3H, м); ожидаемая [M-H]^-=317,9565; наблюдаемая [M-H]^-=317,9602.

Пример 64: N-гидрокси-3,4-диметоксибензол-1-сульфамид (52)

N-Гидрокси-3,4-диметоксибензол-1-сульфамид получали из 3,4-диметоксибензол-1-сульфонилхлорида (2 г, 8,46 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром:гептаном (0,3 г, 15% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,48 (1H, д, 3,5 Гц), 9,40 (1H, д, 3,5 Гц), 7,42 (1H, дд, 8,4 Гц, 2,1 Гц), 7,33 (1H, д, 2,0 Гц), 7,16 (1H, д, 8,5 Гц), 3,85 (1H, с), 3,81 (1H, с); ожидаемая [M-H]^-=232,028; наблюдаемая [M-H]^-=232,0285.

Пример 65: N-Гидрокси-2,3_,5,6-тетраметилбензол-1-сульфамид (53)

N-Гидрокси-2,3,5,6-тетраметилбензол-1-сульфамид получали из 2,3,5,6-тетраметилбензол-1-сульфонилхлорида (2 г, 8,6 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,7 г, 34% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,52 (1H, уш. с), 9,36 (1H, с), 7,30 (1H, с), 2,50 (6H, с), 2,27 (6H, с); ожидаемая [M-H]^-=228,0694; наблюдаемая [M-H]^-=228,074.

Пример 66: N-Гидрокси-3,5-бис(трифторметил)бензол-1-сульфамид (54)

N-Гидрокси-3,5-бис(трифторметил)бензол-1-сульфамид получали из 3,5-бис(трифторметил)бензол-1-сульфонилхлорида согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром:гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,48 г, 24% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,99 (2H, с), 8,58 (1H, с), 8,37 (2H, с); ожидаемая [M-H]^-=307,9816; наблюдаемая [M-H]^-=307,9823.

Пример 67: Метил 4-хлор-3-(гидроксисульфамоил)бензоат (55)

Метил 4-хлор-3-(хлорсульфонил)бензоат

К 4-хлор-3-(хлорсульфонил)бензоилхлориду (2 г, 7,3 ммоль) добавляли при перемешивании MeOH (20 мл). Через 10 минут реакцию концентрировали при пониженном давлении и применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (1,9 г, 96% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ 8,79 (1H, д, J=2,0 Гц), 8,30 (1H, дд, 8,3, 2,0=Гц), 7,74 (1H, д, 8,3 Гц), 3,99 (3H, с).

Метил 4-хлор-3-(гидроксисульфамоил)бензоат

Метил 4-хлор-3-(гидроксисульфамоил)бензоат получали из метил 4-хлор-3-(хлорсульфонил)бензоата (0,7 г, 2,6 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,3 г, 45% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,05 (1H, уш.с), 9,90 (1H, с), 8,50 (1H, д, 2,1 Гц), 8,18 (1H, дд, 8,4, 2,1 Гц), 7,85 (1H, д, 8,2 Гц), 3,90 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=263,9733; наблюдаемая [M-H]^-=263,973.

Пример 68: 2-Фтор-N-гидрокси-5-метилбензол-1-сульфамид (56)

2-Фтор-N-гидрокси-5-метилбензол-1-сульфамид получали из 2-фтор-5-метилбензол-1-сульфонилхлорида (1 г, 4,8 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,19 г, 20% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,71 (2H, с), 7,61 (1H, дд, 6,6, 1,7 Гц), 7,54 (1H, дт, 8,2, 2,3 Гц), 7,33 (1H, дд, 10,0, 8,6 Гц), 2,36 (3H, с); ожидаемая [M-H]^-=204,0131; наблюдаемая [M-H]^-=204,0121.

Пример 69: 4-Хлор-N-(3-хлорпропил)-3-(гидроксисульфамоил)бензамид (57)

2-Хлор-5-[(3-хлорпропил)карбамоил]бензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 4-хлор-3-(хлорсульфонил)бензоилхлорида (1,5 г, 5,51 ммоль) в хлорбензоле (20 мл) добавляли гидрохлорид азетидина (0,54 г, 5,79 ммоль), и реакцию нагревали при 130°C в течение 18 часов, после чего LC-MS показало отсутствие исходного соединения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растирали, применяя диэтиловый эфир, получая требуемый продукт в виде грязно-белого твердого остатка, который применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (1 г, 55% выход).

4-Хлор-N-(3-хлорпропил)-3-(гидроксисульфамоил)бензамид

4-Хлор-N-(3-хлорпропил)-3-(гидроксисульфамоил)бензамид получали из 2-хлор-5-[(3-хлорпропил)карбамоил]бензол-1-сульфонилхлорида (1 г, 3,4 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,13 г, 14% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,88 (1H, д, 2,7 Гц), 9,81 (1H, д, 2,9 Гц), 8,86 (1H, т, 5,4 Гц), 8,45 (1H, д, 2,0 Гц), 8,11 (1H, дд, 8,4, 2,0 Гц), 7,81 (1H, д, 8,4 Гц), 3,70 (2H, т, 6,5 Гц), 3,40 (2H, кв, 6,5 Гц), 1,91-2,06 (2H, м).

Пример 70: 2-Хлор-N-гидрокси-5-[4-(гидроксиимино)пиперидин-1-карбонил]бензол-1-сульфамид (58)

2-Хлор-5-(4-оксопиперидин-1-карбонил)бензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 4-хлор-3-(хлорсульфонил)бензоилхлорида (1,0 г, 3,7 ммоль) в хлорбензоле (15 мл) добавляли гидрохлорид 4-пиперидинона (0,59 г, 3,9 ммоль), и реакцию нагревали при 130°C в течение 18 часов, после чего LC-MS показала отсутствие исходного соединения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растворяли в DCM (50 мл), промывали водой (2×10 мл) перед сушкой над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая продукт, который растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,27 г, 22% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 6 м.д. 7,96 (1H, д, 1,6 Гц), 7,51-7,40 (2H, м), 3,74-3,56 (4H, м) 2,55-2,27 (4H, м).

2-Хлор-N-гидрокси-5-[4-(гидроксиимино)пиперидин-1-карбонил]бензол-1-сульфамид

2-Хлор-N-гидрокси-5-[4-(гидроксиимино)пиперидин-1-карбонил]бензол-1-сульфамид получали из 2-хлор-5-(4-оксопиперидин-1-карбонил)бензол-1-сульфонилхлорида (0,27 г, 0,82 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном:диэтиловый эфир, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,05 г, 16% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,98 (1H, м), 9,86 (1H, м), 7,95 (1H, м), 7,71 (2H, м), 3,59 (2H, м), 3,29 (2H, м), 3,16 (2H, м), 2,95 (2H, м).

Пример 71: 4-Хлор-3-(гидроксисульфамоил)-N-(2-метоксиэтил)-N-метилбензамид (59)

2-Хлор-5-[(2-метоксиэтил)(метил)карбамоил]бензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 4-хлор-3-(хлорсульфонил)бензоилхлорида (2,0 г, 3,7 ммоль) в хлорбензоле (25 мл) добавляли гидрохлорид 2-(метоксиэтил)метиламина (0,48 г, 3,9 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 130°C в течение 18 часов, после чего LC-MS показала отсутствие исходного соединения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (2 г, 75% выход).

4-Хлор-3-(гидроксисульфамоил)-N-(2-метоксиэтил)-N-метилбензамид

4-Хлор-3-(гидроксисульфамоил)-N-(2-метоксиэтил)-N-метилбензамид получали из 2-хлор-5-[(2-метоксиэтил)(метил)карбамоил]бензол-1-сульфонилхлорида (2 г, 6,1 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, с последующей колонкой с силикагелем, элюируя этилацетатом:гептаном (1:1 об.:об.), получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,17 г, 9% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,98 (1H, м), 9,86 (1H, м), 7,95 (1H, м), 7,71 (2H, м), 3,59 (2H, м), 3,29 (2H, м), 3,16 (2H, м), 2,95 (3H, м).

Пример 72: 2-Гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)бензойная кислота (60)

2-Гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)бензойную кислоту получали из 5-(хлорсульфонил)-2-гидроксибензойной кислоты (1 г, 4,2 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и выделяли в виде белого твердого остатка (0,4 г, 41% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,75 (1H, уш.с), 10,66 (1H, с), 9,39 (1H, д, 2,1 Гц), 9,04 (1H, дд, 8,8, 2,2 Гц), 8,31 (1H, д, 5,0 Гц); ожидаемая [M-H]^-=231,9916; наблюдаемая [M-H]^-=231,9907.

Пример 73: N-гидрокси-4-метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-сульфамид (61)

N-Гидрокси-4-метил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-7-сульфамид получали из 4-метил-3,4-дигидро-2H-l,4-бензоксазин-7-сульфонилхлорида (0,9 г, 3,8 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном:этилацетатом, получая требуемый продукт в виде грязно-белого твердого остатка (0,35 г, 38% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,40 (1H, уш.с), 9,32 (1H, с), 7,00-7,12 (2H, м), 6,83 (1H, д, 8,9 Гц), 4,20-4,36 (2H, м), 3,24-3,35 (2H, м), 2,87 (3H, с); ожидаемая [M+H]⁺=245,0595; наблюдаемая [M+H]⁺=245,0589.

Пример 74: 2-Хлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфамид (62)

2-Хлор-4-гидроксибензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 2-хлор-4-гидроксианилина (5,0 г, 35 ммоль) в уксусной кислоте (30 мл) и HCl (7 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями нитрит натрия (2,65 г, 38,5 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру <5°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Одновременно, CuCl₂-H₂О (5,98 г, 34,8 ммоль) суспендировали в AcOH:вода (20 мл:10 мл) при 0°C и перемешивали при 0°C до того, как весь CuCl₂ был в растворе. Газообразный SО₂ конденсировали в колбе при -78°C посредством способа «холодного пальца» и добавляли диазосоединение и раствор CuCl₂, и реакционную смесь нагревали до 0°C. Реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 25°C в течение 18 часов, и реакцию прекращали добавлением ко льду и экстрагировали в диэтиловый эфир (3×100 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде желтого масла, которое применяли непосредственно в следующей стадии.

2-Хлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфамид

2-Хлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфамид получали из 2-хлор-4-гидроксибензол-1-сульфонилхлорида согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 1% MeOH:DCM, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,3 г, 15% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,93 (1H, с), 9,58 (1H, д, 3,0 Гц), 9,42 (1H, д, 3,0 Гц), 7,80 (1H, д, 8,7 Гц), 6,97 (1H, д, 2,4 Гц), 6,89 (1H, дд, 8,7, 2,4 Гц); ожидаемая [M-H]^-=221:9628; наблюдаемая [M-H]^-=221,9621.

Пример 75: 3,5-дихлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфамид (63)

3,5-Дихлор-N,4-дигидроксибензол-1-сульфамид получали из 3,5-дихлор-4-гидроксибензол-1-сульфонилхлорида (1 г, 3,8 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,05 г, 5% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,60 (1H, уш.с), 9,43 (1H, с), 7,64 (2H, с).

Пример 76: 4-хлор-2-гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)-N,N-диметилбензамид (64)

2-Хлор-5-(диметилкарбамоил)-4-гидроксибензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 5-(хлорсульфонил)-2-гидроксибензойной кислоты (1 г, 4,2 ммоль) в толуоле (20 мл) добавляли тионилхлорид (0,62 мл, 8,4 ммоль), и реакцию кипятили с обратным холодильником в течение 1 часа или до того как по ТСХ отсутствовало исходное соединение. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и применяли непосредственно в получении амида (1 г, 82% выход). К раствору 4-хлор-5-(хлорсульфонил)-2-гидроксибензоилхлорида (1 г, 3,5 ммоль) в хлорбензоле (25 мл) добавляли гидрохлорид диметиламина (0,31 г, 3,9 ммоль), и реакцию нагревали при 130°C в течение 18 часов, после чего LC-MS показала отсутствие исходного соединения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (2,9 г, количественный выход); LC-MS t_R=1,75 мин, [M+H]⁺=264.

4-Хлор-2-гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)-N,N-диметилбензамид

4-Хлор-2-гидрокси-5-(гидроксисульфамоил)-N,N-диметилбензамид получали из 2-Хлор-5-(диметилкарбамоил)-4-гидроксибензол-1-сульфонилхлорида (2,9 г, 9,7 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 10% MeOH в DCM, с последующим растиранием с DCM, получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,38 г, 13% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 11,42 (1H, уш.с), 9,67 (1H, д, 2,7 Гц), 9,60 (1H, д, 2,9 Гц), 7,68 (1H, с), 7,06 (1H, с), 2,96 (3H, уш.с), 2,81 (3H, уш.с); ожидаемая [M-H]^-=292,9999; наблюдаемая [M-H]^-=293,0003.

Пример 77: 5-Хлор-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид (65)

5-Хлор-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол

К раствору 5-хлор-2,3-дигидро-1H-индола (3,0 г, 19,5 ммоль) в DMF (60 мл) добавляли диметилкарбонат (5,27 г, 58,6 ммоль) и карбонат калия (1,35 г, 9,75 ммоль). Реакцию кипятили с обратным холодильником в течение 18 часов, после чего по LC-MS исходное соединение отсутствовало. Реакционную смесь охлаждали до температуры приблизительно 25°C, и продукт выделяли экстракцией в диэтиловый эфир (250 мл). Органическую часть промывали водой (2×100 мл), и органические слои сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (2,4 г, 71% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,67 (1H, уш.с), 7,27 (1H, с), 7,20 (1H, д, 8,7 Гц), 3,97 (2H, т, 8,7 Гц), 3,74 (3H, уш.с), 3,09 (2H, т, 8,7 Гц).

5-Хлор-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид

5-Хлор-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол (0,6 г, 3,6 ммоль) и хлорсульфокислоту (1,7 г, 14,3 ммоль) нагревали в герметичной пробирке при 70°C в течение 18 часов. Реакцию прекращали выливанием на лед, и полученный в результате твердый остаток сушили при пониженном давлении, затем хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 20% гептан:этилацетат, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (0,37 г, 38% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 8,23 (1H, уш.с), 7,19 (1H, с), 3,97 (2H, т, 8,7 Гц), 3,75 (3H, с), 3,07 (2H, т, 8,6 Гц).

5-Хлор-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид

5-Хлор-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид получали из 5-хлор-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорида (0,35 г, 1,3 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,19 г, 55% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,54-9,72 (2H, м), 8,33 (1H, уш.с), 7,51 (1H, с), 4,03 (2H, т, 8,8 Гц), 3,76 (3H, с), 3,18 (2H, т, 8,5 Гц).

Пример 78: 2-Хлор-N,5-дигидроксибензол-1-сульфамид (66)

2-Хлор-N,5-дигидроксибензол-1-сульфамид получали из 2-хлор-5-гидроксибензол-1-сульфонилхлорида (2,32 г, 10 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали нейтральной обращено-фазовой препаративной ВЭЖХ, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,05 г, 3% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,74 (2H, с), 7,31-7,53 (2H, м), 7,04 (1H, д, 8,7, 2,9 Гц).

Пример 79: 5-Бром-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид (67)

5-Бром-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол

5-Бром-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол получали, применяя способ, описанный для получения 5-хлор-1-метил-2,3-дигидро-1H-индола (1,1 г, 54% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,60 (1H, уш.с), 7,40 (1H, д, 0,9 Гц), 7,28-7,37 (1H, м), 3,96 (2H, т, 8,7 Гц), 3,74 (3H, с), 3,10 (2H, т, 8,7 Гц).

5-Бром-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид

5-Бром-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорид получали, применяя способ, описанный для получения 5-хлор-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорида (0,29 г, 34% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 8,30 (1H, уш.с), 7,37 (1H, с), 3,96 (2H, т, 8,7 Гц), 3,74 (3H, уш.с), 3,07 (2H, т, 8,7 Гц).

5-Бром-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид

5-Бром-N-гидрокси-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфамид получали из бром-1-метил-2,3-дигидро-1H-индол-6-сульфонилхлорида (0,29 г, 0,94 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,24 г, 82% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,54-9,74 (2H, м), 8,38 (1H, уш.с), 7,68 (1H, с), 4,02 (2H, т, 8,7 Гц), 3,76 (3H, с), 3,18 (2H, т, 8,6 Гц).

Пример 80: 2-Хлор-N-гидрокси-5-(метоксиметил)бензол-1-сульфамид (68)

1-Хлор-4-(метоксиметил)-2-нитробензол

1-Хлор-4-(метоксиметил)-2-нитробензол получали согласно способу, описанному в Buenzli et al., J. Amer. Chem. Soc. 120:12274-12288 (1998). К раствору KOH (5,98 г, 106 ммоль) в DMSO (50 мл) добавляли 4-хлор-3-нитробензиловый спирт (5,0 г, 26,6 ммоль) и метилйодид (4 мл, 64 ммоль). Перемешивание продолжали в течение 1 часа, после чего добавляли воду (60 мл), и реакционную смесь экстрагировали в DCM (3×50 мл), промывали водой и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении (4,7 г, 88% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 7,86 (1H, д, 1,4 Гц), 7,40-7,61 (2H, м), 4,49 (2H, с), 3,44 (3H, с).

2-Хлор-5-(метоксиметил)бензол-1-сульфонилхлорид

К раствору 1-хлор-4-(метоксиметил)-2-нитробензола (2,7 г, 13,4 ммоль) в EtOH (14 мл) и воде (2 мл) добавляли железо (1,94 г, 34,8 ммоль) и HCl (5 капель). Реакцию нагревали при 80°C в течение 1 часа. Охлажденную реакционную смесь фильтровали через целит, промывали EtOAc (50 мл) и концентрировали при пониженном давлении и применяли непосредственно в следующей стадии. К раствору 2-хлор-5-(метоксиметил)анилина (4,19 г, 24,5 ммоль) в уксусной кислоте (25 мл) и HCl (6 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями нитрит натрия (1,85 г, 26,9 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру <5°C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Одновременно, CuCl₂-H₂О (4,16 г, 24,5 ммоль) суспендировали в AcOH:вода (25 мл:10 мл) при 0°C и перемешивали при 0°C до того, как весь CuCl₂ был в растворе. Газообразный SO₂ конденсировали в колбе при -78°C посредством способа «холодного пальца» и добавляли диазосоединение и раствор CuCl₂, и реакцию нагревали до 0°C. Реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 25°C в течение 2 часов. Реакцию прекращали добавлением ко льду и экстрагировали в DCM (3×50 мл). Органические слои сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленное в заголовке соединение в виде желтого масла (5,1 г, 81% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,82 (1H, д, 2,0 Гц), 7,30-7,48 (2H, м), 4,38 (2H, с), 3,27 (3H, с).

2-Хлор-N-гидрокси-5-(метоксиметил)бензол-1-сульфамид

1-Хлор-4-(метоксиметил)-2-нитробензол получали из 2-хлор-5-(метоксиметил) бензол-1-сульфонилхлорида (1 г, 3,9 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов (0,55 г, 56% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,69-9,89 (2H, м), 7,93 (1H, д, 1,7 Гц), 7,68 (1H, д, 8,1 Гц), 7,60 (1H, дд, 8,2, 2,0 Гц), 4,49 (2H, с), 3,33 (3H, с); ожидаемая [M-H]^~=249,9941; наблюдаемая [M-H]=249,9945.

Пример 81: метил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-2-карбоксилат (69)

Метил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-2-карбоксилат получали из метил 5-(хлорсульфонил)фуран-2-карбоксилата (1,0 г, 4,5 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептан:этилацетат (4:1 об.:об.), с последующим растиранием с гептаном, получая требуемое соединение в виде желтого твердого остатка (0,46 г, 47% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,28 (1H, д, 2,8 Гц), 9,89 (1H, д, 2,8 Гц), 7,48 (1H, д, 3,8 Гц), 7,36 (1H, д, 3,6 Гц), 3,87 (3H, с).

Пример 82: N-гидрокси-2,5-диметилфуран-3-сульфамид (70)

N-Гидрокси-2,5-диметилфуран-3-сульфамид получали из 2,5-диметилфуран-3-сульфонилхлорида (0,5 г, 2,6 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с DCM:гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,34 г, 69% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 6,65 (1H, д, 3,7 Гц), 6,20 (1H, с), 6,13 (1H, с), 2,54 (3H, с), 2,28 (3H, с).

Пример 83: N-гидрокси-8-оксатрицикло[7,4,0,0]тридека-1(9),2(7),3,5,10,12-гексаен-4-сульфонамид (71)

N-Гидрокси-8-оксатрицикло[7,4,0,0]тридека-1(9),2(7),3,5,10,12-гексаен-4-сульфамид получали из 8-оксатрицикло[7,4,0,0²,⁷]тридека-1(9),2,4,6,10,12-гексаен-4-сульфонилхлорида (1,0 г, 3,75 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,46 г, 48% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,66 (1H, д, 3,3 Гц), 9,62 (1H, д, 3,3 Гц), 8,67 (1H, д, 1,7 Гц), 8,35 (1H, д, 7,7 Гц), 7,93-8,02 (2H, м), 7,80 (1H, д, 8,4 Гц), 7,58-7,65 (1H, м), 7,49 (1H, т, 7,5 Гц).

Пример 84: 2-(Этансульфонил)-N-гидроксибензол-1-сульфамид (72)

1-Хлор-2-(этилсульфанил)бензол

К раствору метоксида натрия (5,6 г, 103,7 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляли 2-хлорбензол-1-тиол (10,0 г, 69,1 ммоль) в MeOH (50 мл). Реакцию охлаждали до 0°C, и добавляли по каплям раствор йодэтана (5,8 мл, 72,6 ммоль) в MeOH (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов при температуре приблизительно 25°C, после чего LC-MS показала отсутствие исходного соединения. Растворитель удаляли, и реакцию гасили добавлением воды (100 мл). Органические слои экстрагировали в DCM (3×200 мл), объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде прозрачного масла (11,5 г, 96% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 7,36 (1H, дд, 7,9, 1,2 Гц), 7,28-7,19 (2H, м), 7,13-7,07 (1H, м), 2,97 (2H, кв, 7,4 Гц), 1,37 (3H, т, 7,4 Гц).

1-Хлор-2-(этансульфонил)бензол

Раствор 1-хлор-2-(этилсульфанил)бензола (11,5 г, 66,6 ммоль) в DCM (230 мл) добавляли в течение 1 часа при 0-5°C к раствору 10% серной кислоты (345 мл) с одновременным добавлением порциями твердого перманганата калия (35,8 г, 0,23 моль). Полученную в результате реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 25°C и перемешивание продолжали в течение 1 часа, после чего LC-MS показала, что реакция завершилась. Бисульфит натрия (65 г) медленно добавляли к реакционной смеси до того, как исчезал цвет реакционной смеси, и наблюдали прозрачный, бесцветный раствор, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали в DCM (3×100 мл), и объединенную органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде прозрачного, бесцветного масла, которое применяли непосредственно в следующей стадии (14,0 г, 99,99% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 8,13 (1H, дд, 8,0, 1,1 Гц), 7,62-7,54 (2H, м), 7,48 (1H, ддд, 8,6, 6,6, 2,1 Гц), 3,44 (2H, кв, 7,5 Гц), 1,27 (3H, т, 7,5 Гц).

1-(Бензилсульфанил)-2-(этансульфонил)бензол

К раствору 1-хлор-2-(этансульфонил)бензола (14,0 г, 68,4 ммоль) в DMSO (70 мл) добавляли (бензилсульфанил)метаимидамид HCl (14,56 г, 71,8 ммоль), и реакционную смесь охлаждали до 10°C. Добавляли к реакционной смеси NaOH (6,84 г, 171,0 ммоль), и реакцию нагревали при 75°C в течение 18 часов и охлаждали до температуры приблизительно 25°C, перемешивание продолжали в течение дополнительных 72 часов. Реакцию прекращали добавлением воды (50 мл), и полученный в результате водный раствор экстрагировали в DCM (4×100 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая продукт в виде желтого масла, которое хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя градиентом 50-100% DCM ацетат:гептан, получая требуемое соединение в виде желтого масла (3,25 г, 16% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 8,06-8,00 (1H, м), 7,54-7,45 (2H, м), 7,35 (1H, ддд, 8,5, 6,8, 1,9 Гц), 7,32-7,21 (5H, м), 4,23 (2H, с), 3,37 (2H, д, 7,4 Гц), 1,11 (3H, т, 7,4 Гц).

2-(Этансульфонил)бензол-1-сульфонилхлорид

Газообразный хлор барботировали через раствор 1-(бензилсульфанил)-2-(этансульфонил)бензола (3,25 г, 11,1 ммоль) в уксусной кислоте (110 мл) и воде (10 мл), поддерживая внутреннюю температуру <10°C в течение 1 часа. После завершения добавления газообразного хлора, сульфонилхлорид экстрагировали в DCM (100 мл) и промывали водой (100 мл) и 2,5% мас.:об. NaOH раствором (50 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате твердый остаток растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (2,7 г, 89% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 8,44 (1H, дд, 7,8, 1,3 Гц), 8,40 (1H, дд, 7,7, 1,4 Гц), 7,97 (2H, дтд, 22,4, 7,6, 1,3 Гц), 3,61 (2H, кв, 7,5 Гц), 1,36 (3H, т, 7,5 Гц).

2-(Этансульфонил)-N-гидроксибензол-1-сульфамид

2-(Этансульфонил)-N-гидроксибензол-1-сульфамид получали из 2-(этансульфонил)бензол-1-сульфонилхлорида (1,0 г, 3,7 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,8 г, 83% выход). ¹H ЯМР (DMSO, 500 МГц) δ м.д. 10,12 (1H, д, 3,5 Гц), 8,96 (1H, д, 3,5 Гц), 8,26-8,19 (2H, м), 8,08-7,99 (2H, м), 3,65 (2H, кв, 7,4 Гц), 1,17 (3H, т, 7,4 Гц).

Пример 85: N-Гидрокси-2-(пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфамид (73)

1-Хлор-2-(пропан-2-илсульфанил)бензол

К раствору метоксида натрия (5,6 г, 103,7 ммоль) в MeOH (100 мл) добавляли 2-хлорбензол-1-тиол (10,0 г, 69,1 ммоль) в MeOH (50 мл). Реакцию охлаждали до 0°C и добавляли по каплям раствор 2-йодпропана (7,26 мл, 72,6 ммоль) в MeOH (50 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов при температуре приблизительно 25°C, после чего LC-MS показало все еще присутствие исходного соединения. Добавляли дополнительную порцию 2-йодпропана (3 мл, 30 ммоль) и метоксида натрия (3 г, 29 ммоль), и перемешивание продолжали в течение следующих 18 часов до того, как полное потребление исходного соединения наблюдали по LC-MS. Растворитель удаляли, и реакцию гасили добавлением воды (100 мл). Органические слои экстрагировали в DCM (3×200 мл), объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде бесцветного масла (12,8 г, 99% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 7,39 (2H, д, 7,9 Гц), 7,21 (1H, тд, 7,6, 1,4 Гц), 7,14 (1H, тд, 7,7, 1,6 Гц), 3,50 (1H, гепт, 6,7 Гц), 1,34 (6H, д, 6,7 Гц).

1-Хлор-2-(пропан-2-сульфонил)бензол

Раствор 1-хлор-2-(пропан-2-илсульфанил)бензола (12,8 г, 68,3 ммоль) в DCM (230 мл) добавляли в течение 1 часа при 0-5°C к раствору 10% серной кислоты (380 мл) с одновременным добавлением порциями твердого перманганата калия (36,7 г, 0,23 моль). Полученную в результате реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 25°C, и перемешивание продолжали в течение 1 часа после чего, LC-MS показала, что реакция завершилась. Бисульфит натрия (60 г) медленно добавляли к реакционной смеси до того как исчезал цвет реакционной смеси, и наблюдали прозрачный бесцветный раствор, и органическую фазу отделяли. Водную фазу экстрагировали в DCM (3×100 мл), и объединенную органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде прозрачного бесцветного масла (13,7 г, 92% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 250 МГц) δ м.д. 8,17-8,06 (1H, м), 7,62-7,52 (2H, м), 7,46 (1H, ддд, 8,7, 5,5, 3,2 Гц), 3,80 (1H, гепт, 6,9 Гц), 1,32 (6H, дд, 6,9, 0,9 Гц).

1-(Бензилсульфанил)-2-(пропан-2-сульфонил)бензол

К раствору 1-хлор-2-(пропан-2-сульфонил)бензола (13,7 г, 62,6 ммоль) в DMSO (70 мл) добавляли (бензилсульфанил)метанимидамид HCl (13,3 г, 65,8 ммоль), и реакционную смесь охлаждали до 10°C. Добавляли к реакционной смеси NaOH (6,3 г, 156,6 ммоль), и реакцию нагревали при 75°C в течение 18 часов. Реакцию прекращали добавлением воды (50 мл), и полученный в результате водный раствор экстрагировали в DCM (4×100 мл). Объединенные органические слои промывали соляным раствором (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая продукт в виде желтого масла, которое хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 50-100% градиентом DCM ацетат:гептан, получая требуемое соединение в виде желтого масла (4,7 г, 20% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 8,03-7,98 (1H, м), 7,50-7,45 (2H, м), 7,36-7,21 (6H, м), 4,23 (2H, с), 3,82 (1H, дт, 13,7, 6,9 Гц), 1,19 (6H, д, 6,9 Гц).

2-(Пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфонилхлорид

Газообразный хлор барботировали через раствор 1-(бензилсульфанил)-2-(пропан-2-сульфонил)бензола (4,1 г, 13,4 ммоль) в уксусной кислоте (140 мл) и воде (12 мл), поддерживая внутреннюю температуру <10°C в течение 1 часа. После завершения добавления газообразного хлора, сульфонилхлорид экстрагировали в DCM (100 мл) и промывали водой (100 мл) и 2,5% мас.:об. NaOH раствором (50 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный в результате твердый остаток растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (2,9 г, 77% выход). ¹H ЯМР (CDCl₃, 500 МГц) δ м.д. 8,42 (1H, дд, 7,8, 1,4 Гц), 8,34 (1H, дд, 7,6, 1,6 Гц), 7,93 (2H, дтд, 20,1, 7,5, 1,4 Гц), 4,05 (1H, гепт, 6,8 Гц), 1,35 (6H, д, 6,9 Гц).

N-Гидрокси-2-(пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфамид

N-Гидрокси-2-(пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфамид получали из 2-(пропан-2-сульфонил)бензол-1-сульфонилхлорида (1,0 г, 3,5 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,84 г, 85% выход). ¹H ЯМР (DMSO, 500 МГц) δ м.д. 10,11 (1H, д, 3,5 Гц), 8,93 (1H, д, 3,5 Гц), 8,26-8,22 (1H, м), 8,22-8,17 (1H, м), 8,06-7,99 (2H, м), 4,09 (1H, гепт, 6,9 Гц), 1,22 (6H, д, 6,8 Гц).

Пример 86: 4-Ацетил-N-гидрокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-6-сульфамид (74)

4-Ацетил-N-гидрокси-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-6-сульфамид получали из 4-ацетил-3,4-дигидро-2H-1,4-бензоксазин-6-сульфонилхлорида (0,72 г, 2,6 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,70 г, 59% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,50 (1H, уш.с), 9,43 (1H, уш.с), 7,47 (1H, д, 8,4 Гц), 7,09 (1H, д, 8,5 Гц), 4,36 (2H, т, 4,3 Гц), 3,89 (2H, т, 4,4 Гц), 2,27 (3H, с).

Пример 87: Метил 5-(гидроксисульфамоил)-1-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат (75)

Метил 5-(гидроксисульфамоил)-1-метил-1H-пиррол-2-карбоксилат получали из метил 5-(хлорсульфонил)-1-метил-1H-пиррол-2-карбоксилата (0,46 г, 1,9 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,09 г, 19% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,47 (1H, д, 3,3 Гц), 9,21 (1H, д, 3,5 Гц), 7,70 (1H, д, 1,6 Гц), 7,06 (1H, д, 1,9 Гц), 3,91 (3H, с), 3,78 (3H, с).

Пример 88: N-[5-(Гидроксисульфамоил)-1,3-тиазол-2-ил]ацетамид (76)

N-[5-(Гидроксисульфамоил)-1,3-тиазол-2-ил]ацетамид получали из 2-(ацетиламино)-1,3-тиазол-5-сульфонилхлорида (0,28 г, 1,3 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с диэтиловым эфиром, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,12 г, 42% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,80 (1H, д, 3,2 Гц), 9,65 (1H, д, 3,3 Гц), 7,94 (1H, с), 2,20 (3H, с).

Пример 89: N-Гидрокси-2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфамид (77)

4-(2,5-диметилфуран-3-карбонил)морфолин

К раствору изопропилэтиламина (3,8 мл, 21,5 ммоль) и морфолина (1,79 г, 20,5 ммоль) в DCM (30 мл), охлажденному до 0°C, добавляли 2,5-диметил-фуран-3-карбонилхлорид (3,1 г, 19,6 ммоль), и полученный в результате раствор нагревали при температуре приблизительно 25°C в течение 6 часов. Реакцию прекращали добавлением 1N HCl (20 мл), и органическую часть экстрагировали в DCM (50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде коричневого масла (4,41 г, количественный выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 6,09 (1H, с), 3,40-3,63 (8H, м), 2,25 (3H, с), 2,21 (3H, с).

2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфонилхлорид

4-(2,5-диметилфуран-3-карбонил)морфолин (2,0 г, 9,6 ммоль) добавляли к хлорсульфокислоте (6,4 мл, 95 ммоль), и реакционную смесь нагревали при 90°C в течение 1 часа, после чего LC-MS показала полное потребление исходного соединения. Коричневый раствор выливали на лед, и органическую часть экстрагировали в DCM (2×50 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде коричневого твердого остатка, который применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (2,29 г, 78% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 3,03-3,85 (8H, м), 2,31 (3H, с), 2,07 (3H, с).

N-Гидрокси-2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфамид

N-Гидрокси-2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфамид получали из 2,5-диметил-4-(морфолин-4-карбонил)фуран-3-сульфонилхлорида (2,3 г, 7,4 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с DCM, получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (1,3 г, 56% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,71 (1H, д, 3,5 Гц), 8,64 (1H, д, 3,6 Гц), 3,62-3,78 (2H, м), 3,42-3,62 (4H, м), 3,36-3,42 (2H, м), 2,47 (3H, с), 2,22 (3H, с).

Пример 90: Этил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-3-карбоксилат (78)

Этил 5-(гидроксисульфамоил)фуран-3-карбоксилат получали из этил 5-(хлорсульфонил)фуран-3-карбоксилата (0,3 г, 1,4 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с гептаном, получая требуемое соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,2 г, 60% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,14 (1H, уш.с), 9,88 (1H, с), 8,76 (1H, д, 0,8 Гц), 7,38 (1H, д, 0,8 Гц), 4,28 (2H, кв, 7,1 Гц), 1,21-1,35 (3H, т, 7,1 Гц).

Пример 91: 5-Хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилат (79)

[(трет-Бутокси)карбонил]аминооксан-4-карбоксилат

К раствору тетрагидро-2H-пиран-4-карбоновой кислоты (5,0 г, 38,42 ммоль) в DCM (200 мл) добавляли EDCI (5,96 г, 38,42 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C в течение 10 минут и добавляли BOC гидроксиламин (5,12 г, 38,42 ммоль), и перемешивание продолжали в течение 18 часов. Реакционную смесь разбавляли DCM (50 мл) и промывали водой (2×20 мл) и соляным раствором (1×20 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрированный, получая [(трет-бутокси)карбонил]аминооксан-4-карбоксилат в виде светло-оранжевого масла (6,93 г, 74% выход). ¹H ЯМР (250 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 8,00 (1H, уш.с), 3,98 (2H, тд, 3,7, 11,7 Гц), 3,60-3,32 (2H, м), 2,86-2,64 (1H, м), 1,79 (4H, с), 1,48 (9H, с).

N-[(трет-Бутокси)карбонил]-5-хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилат

К раствору [(трет-бутокси)карбонил]аминооксан-4-карбоксилата (2 г, 8,15 ммоль) в DCM (100 мл) добавляли 5-хлортиофен-2-сульфонилхлорид (1,09 мл, 8,15 ммоль) и триэтиламин (1,7 мл, 12,23 ммоль), с последующим добавлением DMAP (149 мг, 1,22 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C в течение 1 часа, и затем добавляли воду (10 мл). Смесь встряхивали, 2 слоя разделяли, и органический слой промывали водной 0,1M HCl (1×10 мл), водой (1×10 мл) и соляным раствором (1×10 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая масло. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептан:EtOAc 30%-40%, получая N-[(трет-бутокси)карбонил]-5-хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилат (0,92 г, 27% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 7,65 (1H, д, 4,3 Гц), 7,00 (1H, д, 4,1 Гц), 4,01 (2H, тд, 3,6, 11,7 Гц), 3,55-3,46 (2H, м), 2,84 (1H, тт, 5,1, 9,8 Гц), 2,00-1,87 (4H, м), 1,49 (9H, с).

5-Хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилат

К раствору N-[(трет-бутокси)карбонил]5-хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилата (0,86 г, 2,0 ммоль) в DCM (8 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (2,24 мл, 30,3 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C в течение 1 часа. Растворители упаривали, получая желтое масло, которое хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептан:EtOAc 20%-50%, получая 5-хлортиофен-2-сульфамидооксан-4-карбоксилат в виде белого твердого остатка (0,53 г, 80% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 11,52 (1H, уш.с), 7,68 (1H, д, 4,1 Гц), 7,39 (1H, д, 4,1 Гц), 3,80 (2H, тд, 3,5, 11,3 Гц), 3,41-3,30 (2H, м), 2,78 (1H, тт, 4,1, 11,1 Гц), 1,73 (2H, дд, 2,1, 12,8 Гц), 1,62-1,49 (2H, м).

Пример 92: N-Гидрокси-2-(оксан-4-илметансульфонил)бензол-1-сульфамид (80)

4-[(2-Фторбензолсульфонил)метил]оксан

К раствору 4-(йодметил)оксана (1,0 г, 4,4 ммоль) и 2-фторбензол-1-тиола (0,57 г, 4,4 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли карбонат калия (0,79 г, 5,7 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C в течение 18 часов. Реакцию прекращали добавлением воды (20 мл), и органическую часть экстрагировали в DCM (50 мл). Органические слои промывали водой (10 мл) перед сушкой над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 100-70% гептан:этилацетат, получая требуемое соединение в виде прозрачного, бесцветного масла (0,9 г, 92% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 7,37 (1H, тд, 7,6, 1,7 Гц), 7,18-7,25 (1H, м), 6,99-7,17 (2H, м), 3,85-4,04 (2H, м), 3,35 (2H, тд, 11,8, 2,0 Гц), 2,84 (2H, д, 6,9 Гц), 1,77-1,87 (2H, м), 1,65-1,77 (1H, м), 1,36 (2H, квд, 12,3, 4,4 Гц).

4-{[2-(Бензилсульфанил)бензолсульфонил]метил}оксан

К раствору 4-[(2-фторбензолсульфонил)метил]оксана (1,0 г, 3,9 ммоль) в DMSO (20 мл) добавляли гидрохлорид бензилкарбамимидотиоата (0,84 г, 4,2 ммоль), и смесь охлаждали в процессе добавления NaOH (0,4 г, 9,8 ммоль) так, чтобы поддерживать внутреннюю температуру ниже 15°C-20°C. Реакционную смесь нагревали при 75°C в течение 2 часов, после чего LC-MS показало полное потребление исходного соединения. Реакцию охлаждали до температуры приблизительно 25°C и прекращали добавлением 2N раствора HCl (5 мл). Образовавшуюся эмульсию экстрагировали этилацетатом (2×50 мл), и полученный в результате органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Масло хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 20-40% гептан:этилацетат, получая требуемое соединение в виде желтого масла (1,2 г, 87% выход), ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 7,78-7,95 (2H, м), 7,67 (1H, тд, 7,7, 1,5 Гц), 7,14-7,49 (6H, м), 4,40 (2H, с), 3,71 (2H, дт, 9,7, 1,9 Гц), 3,30 (2H, д, 6,4 Гц), 3,17 (2H, тд, 11,6, 2,1 Гц), 1,79-1,97 (1H, м), 1,48 (2H, дд, 13,0, 1,9 Гц), 1,06-1,30 (2H, м).

2-(Оксан-4-илметансульфонил)бензол-1-сульфонилхлорид

Газообразный хлор барботировали через раствор 4-{[2-(бензилсульфанил)бензолсульфонил]метил}оксана (1 г, 2,8 ммоль) в уксусной кислоте (35 мл) и воде (3 мл), поддерживая внутреннюю температуру <10°C в течение 1 часа. После завершения добавления газообразного хлора, сульфонилхлорид экстрагировали в DCM (150 мл) и промывали водой (150 мл) и 2,5% мас.:об. NaOH раствором (50 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 80% этилацетат:гептан, получая требуемое соединение в виде масла, которое применяли непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (0,9 г, 96% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, хлороформ-d) δ м.д. 8,40 (2H, ддд, 7,6, 5,9, 1,4 Гц), 7,88-8,05 (2H, м), 3,87-4,03 (2H, м), 3,38-3,51 (3H, м), 2,99 (1H, уш.с), 2,41-2,64 (1H, м), 1,80-1,91 (2H, м), 1,43-1,63 (2H, м).

N-Гидрокси-2-(оксан-4-илметансульфонил)бензол-1-сульфамид

N-Гидрокси-2-(оксан-4-илметансульфонил)бензол-1-сульфамид получали из 2-(оксан-4-илметансульфонил)бензол-1-сульфонилхлорида (0,72 г, 2,1 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гептан:этилацетат (1:1 об.:об.), получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,37 г, 52% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 10,11 (1H, д, 3,5 Гц), 8,98 (1H, д, 3,5 Гц), 8,23-8,28 (1H, м), 8,17-8,22 (1H, м), 7,99-8,04 (2H, м), 3,74-3,81 (2H, м), 3,62 (2H, д, 6,5 Гц), 3,29 (2H, тд, 11,6, 2,0 Гц), 2,11-2,23 (1H, м), 1,66 (2H, дд, 13,1, 1,9 Гц), 1,28-1,40 (2H, м).

Пример 93: N-гидрокси-3-метил-1-бензофуран-2-сульфамид (81)

Этил 2-(2-ацетилфенокси)ацетат

К раствору 1-(2-гидроксифенил)этан-1-она (7,5 г, 0,06 моль) в диметилформамиде (75 мл) добавляли карбонат калия (22,8 г, 0,17 моль) при температуре приблизительно 25°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 10 минут перед добавлением этилбромацетата (9,2 мл, 0,08 моль), и перемешивание продолжали в течение следующих 5 часов при температуре приблизительно 25°C. После завершения реакции, наблюдаемого по ТСХ, реакционную смесь разбавляли этилацетатом (150 мл) и водой (150 мл), органическую часть отделяли, и водную часть дополнительно экстрагировали этилацетатом (2×150 мл). Объединенные органические слои промывали водой (2×150 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая O-алкилированный продукт в виде бесцветного масла. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 5-8% этилацетат:гексан, получая этил 2-(2-ацетилфенокси)ацетат в виде грязно-белого твердого остатка (10,5 г, 86% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м.д. 7,78-7,74 (1H, м), 7,47-7,41 (1H, м), 7,08-7,02 (1H, м), 6,85-6,80 (1H, м), 4,72 (2H, с), 4,28 (2H, кв, 7,1 Гц), 2,72 (3H, с), 1,30 (3H, т, 7,1 Гц).

2-(2-Ацетилфенокси)уксусная кислота

К раствору этил 2-(2-ацетилфенокси)ацетата (8 г, 0,04 моль) в этаноле:воде (80 мл:8 мл) добавляли гидрат гидроксида лития (1:1:1) (4,5 г, 0,11 моль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25°C в течение 18 часов и после завершения реакции (наблюдаемого по ТСХ), реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Продукт растворяли в воде (350 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (2×150 мл). Затем, водный экстракт подкисляли, применяя 1N HCl (pH приблизительно 2-3) при 0°C и экстрагировали в дихлорметан (4×300 мл). Объединенные органические слои промывали водой (150 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая кислый продукт в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание с пентаном давало продукт в виде грязно-белого твердого остатка (6,7 г, 95,8% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ м.д. 13,16 (1H, с), 7,60-7,55 (1H, м), 7,54-7,49 (1H, м), 7,12-7,07 (1H, м), 7,07-7,02 (1H, м), 4,85 (2H, с), 2,62 (3H, с).

3-Метил-1-бензофуран

К раствору 2-(2-ацетилфенокси)уксусной кислоты (8 г, 0,041 моль) в уксусном ангидриде (48 мл) добавляли ацетат натрия (20,3 г, 0,25 моль) при температуре приблизительно 25°C. Реакционную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником (140°C) в течение 18 часов. После завершения реакции (наблюдаемого по ТСХ), реакционную смесь выливали в ледяную воду (400 мл) и экстрагировали в этилацетат (3×400 мл). Объединенный органический слой промывали водой (400 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая циклизованный продукт в виде красного масла, которое хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя гексан, получая циклизованное соединение в виде бесцветной жидкости (2,6 г, 48% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м.д. 7,55-7,51 (1H, м), 7,48-7,44 (1H, м), 7,42-7,39 (1H, м), 7,32-7,27 (1H, м), 7,27-7,22 (1H, м), 2,26 (3H, д, 1,3 Гц).

3-Метил-1-бензофуран-2-сульфонилхлорид

К раствору 3-метил-1-бензофурана (2,6 г, 17,7 ммоль) в диэтиловом эфире (50 мл), охлажденному до -78°C, добавляли по каплям н-BuLi (8,7 мл 2,5M раствора в гексане, 21,64 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 часа перед барботированием газообразного SО₂ через реакционную смесь, и перемешивание продолжали при -50°C в течение дополнительного 1 часа. Реакционную смесь нагревали до -20°C, и добавляли порциями NCS (3,42 г, 25,58 ммоль), и перемешивание продолжали в течение 18 часов при температуре приблизительно 25°C. После того как наблюдали по существу полное потребление исходного соединения по ТСХ, добавляли воду (40 мл), и органическую часть экстрагировали в этилацетат (3×20 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт хроматографировали на колонке с силикагелем, элюируя 0,5% этилацетата в гексане, получая требуемое соединение в виде желтого твердого остатка (2,5 г, 55% выход). ¹H ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ м.д. 7,72 (1H, дд, 7,9, 0,9 Гц), 7,64-7,58 (2H, м), 7,43 (1H, дд, 8,1, 4,2 Гц), 2,65 (3H, с).

N-Гидрокси-3-метил-1-бензофуран-2-сульфамид

N-Гидрокси-3-метил-1-бензофуран-2-сульфамид получали из 3-метил-1-бензофуран-2-сульфонилхлорида (1,5 г, 6,5 ммоль) согласно описанным в настоящем изобретении способам для получения N-гидроксисульфамидов и растирали с 5% DCM:пентан, получая требуемое соединение в виде белого твердого остатка (0,74 г, 50% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ м.д. 10,11 (1H, д, 3,0 Гц), 9,79 (1H, д, 3,0 Гц), 7,81 (1H, ддд, 7,9, 1,1, 0,7 Гц), 7,70-7,66 (1H, м), 7,55 (1H, ддд, 8,4, 7,2, 1,3 Гц), 7,41 (1H, тд, 7,6, 0,9 Гц), 2,50 (3H, с).

Пример 94: N-Гидрокси-5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфамид (82)

5-(Пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфонилхлорид

Комплекс триоксида серы и пиридина (2,66 г, 16,74 ммоль) и 1,2 дихлорэтан (20 мл) нагревали с (фуран-2-карбонил)пиперидином (2 г, 11,16 ммоль) в герметичной пробирке при 140°C в течение 22 часов, после чего реакционную смесь охлаждали до температуры приблизительно 25°C, и смесь концентрировали при пониженном давлении, получая суспензию. Остаток обрабатывали раствором карбоната натрия (1,7 г, 16,74 ммоль) в воде (20 мл), и полученную в результате смесь упаривали досуха. Твердый остаток перемешивали с дихлорметаном (20 мл) перед кипячением с обратным холодильником в этаноле (10 мл) в течение 30 минут, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая 1,2 г натриевой соли. Натриевую соль растворяли в метаноле (10 мл), и полученный в результате раствор обрабатывали активированным углем и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении, получая 5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфокислоту в виде натриевой соли (950 мг). Натриевую соль смешивали с дихлорметаном (10 мл) при 0°C и медленно добавляли к оксихлориду фосфора (2 мл). Затем, добавляли порциями к реакционной смеси при 0° C пентахлорид фосфора (2,32 г, 16,74 ммоль), и реакционную смесь нагревали до температуры приблизительно 25°C и перемешивали в течение следующих 2 часов при данной температуре. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (30 мл) и водой (20 мл), и органическую часть отделяли и сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая 5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфонилхлорид (0,6 г, 19% выход).

N-Гидрокси-5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (0,3 мл 50% водного раствора, 4,95 ммоль) в тетрагидрофуране (7 мл) и воде (3 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли раствор 5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфонилхлорида (550 мг, 1,98 ммоль) в THF (3 мл), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ (приблизительно 30 мин), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидрокси-5-(пиперидин-1-карбонил)фуран-2-сульфамид в виде желтого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя DCM:пентан (1:1 об.:об.), с последующим растиранием с дихлорметаном (2×1 мл), получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (0,3 г, 55% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO) δ м.д. 10,13 (с, 9,84 (с, 1H), 7,31 (д, 1H), 7,09 (д, 1H), 3,58 (с, 4H), 1,74-1,45 (м, 6H).

Пример 95: N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-2-сульфамид (83)

5-Метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорид

2-Метансульфонилтиофен (5 г, 30,82 ммоль) добавляли к хлорсульфокислоте (14,37 мл, 215,74 ммоль), и полученный в результате раствор нагревали при 90°C в течение 1 часа, после чего раствор охлаждали до температуры приблизительно 25°C перед выливанием на лед (250 мл). Полученную в результате суспензию экстрагировали дихлорметаном (3×100 мл), и объединенную органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая требуемое соединение в виде бежевого твердого остатка, который существовал в виде смеси с соответствующим 1,4 изомером, и его применяли как есть непосредственно в получении соответствующего N-гидроксисульфамида (4,6 г, 39% выход в виде смеси 1:1 с 2,4 изомером). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 7,59 (д, J=3,8 Гц, 1H), 7,20 (д, J=3,8 Гц, 1H), 3,33 (с, 3H).

N-Гидрокси-5-метансульфонилтиофен-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (158 мл 50% раствора, 23,97 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) и воде (2,5 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли смесь 1:1 5-метансульфонилтиофен-2-сульфонилхлорида и 5-метансульфонилтиофен-3-сульфонилхлорида (2,5 г, 9,58 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×5 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде смеси 1:1 с соответствующим 2,4 изомером в качестве побочного продукта. Затем, соединение хроматографировали кислой ВЭЖХ, что полностью разделяло 2 изомера (0,58 г, 46% выход). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) заявленного в заголовке соединения: δ 10,09 (с, 2H), 7,91 (д, J=4,0 Гц, 1H), 7,75 (д, J=4,0 Гц, 1H), 3,48 (с, 3H). 1H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) 2,4 изомера: ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,84 (с, 1H), 9,77 (с, 1H), 8,65 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,99 (д, J=1,6 Гц, 1H), 3,46 (с, 4H).

Пример 96: Получение N-гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфамида (84)

5-Метилтиофен-2-сульфонилхлорид

5-Метилтиофен-2-сульфонилхлорид получали согласно способам, описанным в Sone et al, Bull. Chem. Soc. Japan 58:1063-1064 (1985). Свежеперегнанный сульфурилхлорид (74,9 мл, 0,93 моль) добавляли по каплям при перемешивании к охлажденному на льду DMF (71,5 мл, 0,93 моль), поддерживая температуру ниже 25°C. Гигроскопический комплекс, который образовывался через 10 минут, выдерживали при данной температуре в течение дополнительных 30 минут. Добавляли к комплексу 2-метилтиофен (70 г, 0,71 моль), и смесь нагревали при 98°C в течение 1 часа. Вязкую коричневую смесь охлаждали, выливали в ледяную воду и экстрагировали в диэтиловый эфир (2×1 л). Органический слой промывали последовательно водой (500 мл), 5% NaHCО₃ раствором (200 мл) и водой (500 мл) перед сушкой над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая сульфонилхлорид в виде темно-коричневой жидкости. Сульфонилхлорид хроматографировали КХ, элюируя 0-30% EtOAc:гептан (110 г, 78% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м.д. 7,69 (1H, д, J=3,9 Гц), 6,88-6,83 (1H, м), 2,60 (3H, д, J=0,8 Гц).

N-Гидрокси-5-метилтиофен-2-сульфамид

К раствору водного гидроксиламина (8,4 мл 50% водного раствора, 50,9 ммоль) в THF (60 мл) и воде (10 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 5-метилтиофен-2-сульфонилхлорид (10 г, 50,9 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли DCM (100 мл), и органическую часть отделяли и промывали водой (2×25 мл). Водные экстракты объединяли и промывали DCM (2×75 мл). Все органические части объединяли, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде бежевого твердого остатка. Растирание с гептаном давало заявленное в заголовке соединение в виде бежевого твердого остатка (6,1 г, 61,8% выход). LC-MS t_R=1,1 мин; HRMS: теоретическая (C₅H₇NО₃S₂)=191,9789, измеренная=191,9781; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,71 (1H, д, J=3,3 Гц), 9,58 (1H, д, J=3,5 Гц), 7,46 (1H, д, J=3,8 Гц), 6,95 (1H, дд, J=3,7, 1,0 Гц), 2,53 (3H, с).

Пример 97: N-Гидрокси-1-метил-1H-пиразол-3-сульфамид (85)

К раствору водного гидроксиламина (7,32 мл 50% раствора, 110,73 ммоль) в тетрагидрофуране (48 мл) и воде (8 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 1-метил-1H-пиразол-3-сульфонилхлорид (8 г, 44,29 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по ТСХ по существу полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (50 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×10 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан:DCM (1:1, об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (4,3 г, 55% выход). LC-MS t_R=0,41 мин, [M+H]⁺=179. ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,62 (д, J=3,2 Гц, 1H), 9,51 (д, J=3,2 Гц, 1H), 7,89 (д, J=2,3 Гц, 1H), 6,68 (д, J=2,3 Гц, 1H), 3,93 (с, 3H).

Пример 98: Получение 3-хлор-4-фтор-N-гидроксибензол-1-сульфамида (87)

К раствору гидроксиламина (1,3 мл 50% водного раствора; 21,8 ммоль) в THF (12 мл) и воде (2 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями 3-хлор-4-фторбензол-1-сульфонилхлорид (2 г, 8,7 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли диэтиловым эфиром (2×50 мл), и органическую часть отделяли и промывали 5% раствором лимонной кислоты (10 мл) и водой (10 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт растирали с диэтиловым эфиром:гептаном, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (1,14 г, 58% выход). LC-MS t_R=1,54 мин; HRMS: теоретическая (C₆H₅ClFNO₃S)=223,9584, измеренная=223,963; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,79 (1H, д, 3,2 Гц), 9,73 (1H, д, 3,2, Гц), 7,98 (1H, дд, 6,87 Гц, 2,29, Гц), 7,85 (1H, м).

Пример 99: 1-N,3-N-дигидроксибензол-1,3-дисульфамид (88)

К раствору водного гидроксиламина (2,4 мл 50% раствора, 36,35 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл) и воде (2 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли бензол-1,3-дисульфонилдихлорид (2 г, 7,27 ммоль), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ (приблизительно 5 минут), после чего реакционную смесь разбавляли этилацетатом (25 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×10 мл) и хлоридом аммония (25 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (0,567 г, 29% выход). Концентрирование до 1/3 объема фильтрата давало вторую порцию N-гидроксисульфамида (0,327 г, 17% выход) LC-MS t_R=0,87 мин; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ 9,88 (с, 2H), 9,82 (с, 2H), 8,28 (т, J=1,7 Гц, 1H), 8,14 (дд, J=7,9, 1,8 Гц, 2H), 7,91 (t, J=7,9 Гц, 1H).

Пример 100: 3-Бром-N-гидроксибензол-1-сульфамид (89)

К раствору гидроксиламина HCl (1,62 г, 23,48 ммоль) в воде (2,4 мл), охлажденному до 0°C, добавляли по каплям раствор карбоната калия (3,24 г, 23,48 ммоль) в воде (3,6 мл), поддерживая внутреннюю температуру реакции между 5°C и 15°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 15 минут, после чего добавляли тетрагидрофуран (12 мл) и метанол (3,0 мл). Добавляли порциями 3-бромбензолсульфонилхлорид (3,0 г, 11,74 ммоль), поддерживая температуру ниже 15°C, и затем реакционную смесь перемешивали при температуре приблизительно 25 °C до того, как наблюдали по существу полное потребление сульфонилхлорида по ТСХ. Полученную в результате суспензию концентрировали при пониженном давлении, удаляя любые летучие компоненты, и водную суспензию экстрагировали диэтиловым эфиром (2×50 мл). Органическую часть сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфамид в виде белого твердого остатка (1,8 г, 61% выход). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,75 (1H, д, J=8,1 Гц), 9,77 (1H, с), 7,92 (1H, д, J=8,1 Гц), 7,95 (1H, т, J=1,7 Гц), 7,84 (1H, д, J=7,8 Гц), 7,60 (1H, т, J=7,9 Гц); ожидаемая [M-H]^-=249,9174; наблюдаемая [M-H]^-=249,9163.

Пример 101: Получение N-гидрокси-3-(трифторметокси)бензол-1-сульфамида (92)

К раствору гидроксиламина (6,4 мл 50% водного раствора; 95,9 ммоль) в THF (60 мл) и воде (10 мл), охлажденному до 0°C, добавляли порциями 3-(трифторметокси)бензол-1-сульфонилхлорид (10 г, 38,4 ммоль) так, чтобы поддерживать температуру ниже 10°C. Реакционную смесь перемешивали в течение 20 минут, после чего LC-MS показала полное потребление сульфонилхлорида. Реакционную смесь разбавляли DCM (2×50 мл), и органическую часть отделяли и промывали раствором хлорида аммония (10 мл) и водой (10 мл). Органическую часть сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Продукт растирали с гептаном, получая заявленное в заголовке соединение в виде белого твердого остатка (6,77 г, 66,6% выход). LC-MS t_R=1,67 мин; HRMS: теоретическая (C₇H₆F₃NО₄S)=255,9891, измеренная=255,9903; ¹H ЯМР (250 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,82 (2H, с), 7,89 (1H, дт, J=7,3, 1,7 Гц), 7,84-7,70 (3H, м).

Пример 102: N-Гидрокси-4-метансульфонилбензол-1-сульфонамид (93)

К раствору водного гидроксиламина (6,48 мл 50% раствора, 98,15 ммоль) в тетрагидрофуране (60 мл) и воде (10 мл), охлажденному до -5°C, медленно добавляли 4-метансульфонилбензол-1-сульфонилхлорид (10 г, 39,26 ммоль) в виде суспензии в тетрагидрофуране (20 мл), поддерживая температуру реакции меньшей чем 10°C. Реакцию поддерживали при данной температуре до того, как наблюдали по LC-MS полное потребление сульфонилхлорида (приблизительно 10 мин), после чего реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (150 мл), и органическую часть отделяли, промывали водой (2×25 мл), сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении, получая N-гидроксисульфонамид в виде грязно-белого твердого остатка. Растирание осуществляли, применяя гептан:DCM (9:1 об.:об.), получая заявленное в заголовке соединение в виде грязно-белого твердого остатка (5,46 г, 55,4% выход). LC-MS t_R=0,89 мин, [M-H]^-=250; ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м.д. 9,89 (1H, д, J=2,4 Гц), 9,85 (1H, д, J=2,4 Гц), 8,19 (2H, д, J=8,4 Гц), 8,08 (2H, д, J=8,4 Гц), 3,32 (3H, с).

Специалистам в данной области техники ясно, что конкретные варианты осуществления описанного предмета могут относиться к одному или более из указанных выше и ниже вариантов осуществления.

Тогда как настоящее изобретение описано довольно подробно посредством иллюстрации и примера для целей упрощения понимания, специалистам в данной области техники ясно, что можно осуществлять различные изменения и можно заменять на эквиваленты, не выходя за пределы объема и сущности настоящего изобретения. Следовательно, описание и примеры не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения.

Все ссылки, публикации, патенты и патентные заявки, описанные в настоящем изобретении, включены в настоящее изобретение посредством ссылки во всей своей полноте.

1 Способ лечения сердечной недостаточности, включающий введение человеческмоу пациенту композиции донора нитроксила, причем указанная композиция содержит соединение формулы (1):

(1)

и циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

2. Способ лечения сердечной недостаточности, включающий введение человеческмоу пациенту композиции донора нитроксила, причем указанная композиция содержит соединение формулы (2):

(2)

и циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

3. Способ по п.1 или 2, где циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

4. Способ по п.1 или 2, где циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

5. Способ по п.1 или 2, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

6. Способ по п.1 или 2, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

7. Способ по п.1 или 2, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

8. Способ по п.1 или 2, где композиция является пригодной для парентерального введения.

9. Способ по п.8, где композиция является пригодной для внутривенного введения.

10. Способ по п.8, где композицию формулируют при pH от приблизительно 4 до приблизительно 6.

11. Способ по п.8, где композицию формулируют при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6.

12. Способ по п.8, где композицию формулируют при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6.

13. Способ по п.1 или 2, где сердечная недостаточность представляет собой острую декомпенсированную сердечную недостаточность.

14. Способ лечения сердечной недостаточности, включающий введение человеческому пациенту композиции донора нитроксила, содержащей соединение формулы (1):

(1)

где указанную композицию вводят парентерально при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6,5.

15. Способ лечения сердечной недостаточности, включающий введение человеческому пациенту композиции донора нитроксила, содержащей соединение формулы (2):

(2)

где указанную композицию вводят парентерально при pH от приблизительно 5 до приблизительно 6,5.

16. Способ по п.14 или 15, где композицию вводят внутривенно.

17. Способ по п.14 или 15, где композицию вводят при pH от приблизительно 5,5 до приблизительно 6.

18. Способ по п.14 или 15, где композицию вводят при pH приблизительно 6.

19. Способ по п.14 или 15, где композиция дополнительно содержит стабилизирующий агент.

20. Способ по п.19, где стабилизирующий агент представляет собой циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

21. Способ по п.20, где циклодекстрин представляет собой β-циклодекстрин.

22. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила, содержащая соединение формулы (1):

(1),

и водный буфер, где композиция имеет pH от приблизительно 5 до приблизительно 6,5.

23. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила, содержащая соединение формулы (2):

(2)

и водный буфер, где композиция имеет pH от приблизительно 5 до приблизительно 6,5.

24. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.22 или 23, где водный буфер обеспечивает pH композиции от приблизительно 5,5 до приблизительно 6,2.

25. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.22 или 23, где водный буфер обеспечивает pH композиции приблизительно 6.

26. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.22 или 23, где буфер представляет собой фосфатный или ацетатный буфер.

27. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.26, где буфер представляет собой калийфосфатный буфер.

28. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.26, где буфер представляет собой калийацетатный буфер.

29. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.22 или 23, дополнительно содержащая стабилизирующий агент.

30. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.29, где стабилизирующий агент представляет собой циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

31. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.30, где циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

32. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.30, где циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

33. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.30, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

34. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.30, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

35. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.30, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

36. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила, содержащая (i) соединение формулы (1):

(1)

и (ii) циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

37. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила, содержащая (i) соединение формулы (2):

(2)

и (ii) циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке.

38. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.36 или 37, где циклодекстрин представляет собой сульфо-н-бутилэфирное производное β-циклодекстрина, содержащее шесть или семь сульфо-н-бутилэфирных групп на молекулу циклодекстрина.

39. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.36 или 37, где циклодекстрин представляет собой CAPTISOL^®.

40. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.36 или 37, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

41. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.36 или 37, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

42. Фармацевтическая композиция, являющаяся донором нитроксила по п.36 или 37, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

43. Смесь, являющаяся донором нитроксила, содержащая соединение формулы (1):

(1)

и циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке, где молярное соотношение между соединением формулы (1) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

44. Смесь, являющаяся донором нитроксила, содержащая соединение формулы (2):

(2)

и циклодекстрин или циклодекстрин, химически модифицированный получением производных по любой комбинации из трех имеющихся гидроксильных групп в каждом его глюкопиранозном остатке, где молярное соотношение между соединением формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,02:1 до приблизительно 2:1.

45. Смесь, являющаяся донором нитроксила, по п.43 или 44, которая получена лиофилизацией.

46. Смесь, являющаяся донором нитроксила, по п.43 или 44, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,05:1 до приблизительно 1,5:1.

47. Смесь, являющаяся донором нитроксила, по п.46, где молярное соотношение между соединением формулы (1) или формулы (2) и циклодекстрином, присутствующим в композиции, составляет от приблизительно 0,5:1 до приблизительно 1:1.

48. Смесь, являющаяся донором нитроксила, по п.43 или 44, дополнительно содержащая буферный агент.

49. Смесь, являющаяся донором нитроксила, по п.48, где буферный агент представляет собой ацетат калия.

50. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 22, 23, 36 или 37 для получения лекарственного средства, пригодного для лечения сердечно-сосудистого заболевания, чувствительного к нитроксильной терапии.

51. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 22, 23, 36 или 37 для получения лекарственного средства, пригодного для лечения сердечной недостаточности.

52. Применение фармацевтической композиции по любому из пп. 22, 23, 36 или 37 для получения лекарственного средства, пригодного для лечения острой декомпенсированной сердечной недостаточности.

53. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 22, 23, 36 или 37 для лечения сердечной недостаточности.

54. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 22, 23, 36 или 37 для лечения острой декомпенсированной сердечной недостаточности.