Композиционный материал для замещения костных дефектов

Авторы патента:

Каракизов Амирхан Жагафарович (RU)

Степанов Александр Геннадьевич (RU)

Маркин Владимир Александрович (RU)

Хашукоев Адальби Заурбиевич (RU)

C12N5/0775 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

Владельцы патента RU 2685148:

Хашукоев Адальби Заурбиевич (RU)

Изобретение относится к области биохимии, в частности к композиционному материалу для замещения костных дефектов, состоящему из смеси гранулированного остеопластического материала Bio-Oss и мезенхимальных стволовых клеток пациента, имбибированных мезенхимальными стволовыми клетками, культивированными из прикрепленной десны пациента. Изобретение позволяет эффективно осуществлять восстановление архитектоники костной ткани, а также осуществлять полноценное (100%) заживление дефекта костной ткани челюсти диаметром более 5 мм и восстановление оптической плотности кости в срок на 3 месяца раньше по сравнению с естественным течением репаративного процесса (6 месяцев).

Изобретение относится к медицине, к области биотехнологии и может быть использовано с целью восполнения послеоперационных дефектов и переломах кости.

На сегодняшний день существует значительное количество материалов используемых для замещения костных дефектов как искусственного, так и животного происхождения.

Известен способ замещения костных дефектов путем помещения имплантата из пористого никелида титана или сплавов на его основе в зону костного дефекта, отличающийся тем, что перед введением имплантат обрабатывают гидроксилапатитом на глубину 10 мм при комнатной температуре, причем при установке имплантата в конгруэнтное костное ложе последнее обрабатывают гидроксиапатитом (Патент РФ №2066982 от 27.09.1996 г. ).

Из уровня техники известен способ замещения дефектов костей путем пластики с использованием аутогенного костно-хрящевого регенерата, выраженного с помощью деминерализованной костной аллоткани, отличающийся тем, что деминерализованную костную аллоткань подсаживают на фасцию или надкостницу, которые рассекают или перфорируют в нескольких местах соответственно зоне расположения деминерализованного трансплантата, выращенный аутогенный костно-хрящевой регенерат используют для замещения костных дефектов отдельно или же в комбинации с деминерализованными или недеминерализованными костными аллотрансплантатами (Патент РФ 2117453 от 20.08.2008).

К основным недостаткам указанных способов можно отнести использование остеокондуктивных синтетических или аллогенных остеонидуктивных материалов несоответствующих антигенной структурой индивидуальному организму. В настоящее время данный недостаток нивелируется использованием мезенхимальных стволовых клеток.

Выявлено, что мезенхимальные стволовые клетки обладают иммуномодулирующим эффектом, ингибируют пролиферацию Т-клеток и снижают вероятность возникновения и степень выраженности РТПХ при совместной трансплантации с гемопоэтическими стволовыми клетками. При этом они существенно ускоряют восстановление поврежденного гемопоэза. Полученные данные о том, что мезенхимальные стволовые клетки не содержат мембранных маркеров, характерных для гемопоэтических клеток, а также антигенов гистосовместимости позволяют рассматривать мезенхимальные стволовые клетки как кандидаты не только для аутологичной, но и для аллогенной клеточной терапии.

Результатом трансплантации больным мезенхимальных стволовых клеток костного мозга может быть восстановление популяции стромальных клеток в различных органах. Стромальные клетки являются источником важных цитокинов и ростовых факторов, которые способствуют активированию и нормализации иммунного ответа, сниженного в результате болезни, а также развитию регенеративных процессов в поврежденных тканях и органах.

Известен способ пролиферации мезенхимальных стволовых клеток человека, предназначенных для реконструкции костных и хрящевых сегментов, например, в травматологической хирургии. В соответствии с этим патентом образец костного мозга человека промывают в физиологическом растворе с фосфатным буфером. Клетки с ядрами подсчитывают с использованием красителя и в среде F12, включающей 10% сыворотки и 1 нг/мг FGF -2, высевают на дно культурального сосуда в количестве 5×106 клеток в виде нефракционированного костного мозга на 10 кв.см сосуда для культуры ткани. Через 48 часов эту среду удаляют, клетки промывают в физиологическом растворе с фосфатным буфером и выдерживают 24-48 часов в среде F12 без каких-либо добавок. Для поддержания остеохондрогенного потенциала в мезенхимальных стволовых клетках и способствования пролиферации клеток в среду добавляют определенную смесь факторов (Патент РФ 2272839 от 27.03.2006).

Известен способ культивирования фибробластов для заместительной терапии, включающий выделение клеток и инкубирование в питательной среде, отличающийся тем, что выделение фибробластов осуществляют из биоптатов кожи человека путем ферментативной обработки в растворе DMEM/5% ЭБС/0,2% диспазы/0.1 мг/мл коллагеназы I типа при постоянном помешивании и пипетировании при температуре 37°С в течение 1,5 ч в стерильных условиях, полученную суспензию клеток центрифугируют 5 мин при 200 g, супернатант сливают, осевшие клетки ресуспендируют в среде DMEM/10% ЭБС/100 ед/мл пенициллина, 100 ед/мл стрептомицина, 100 ед/мл фунгизона и высевают на чашки, затем фибробласты переводят на длительное культивирование в среде с собственной сывороткой крови пациента: DMEM/10%ССКП/100 ед/мл стрептомицина, 100 ед/мл фунгизона или в терапевтической среде AIM-V, перед введением пациентам клетки несколько раз отмывают в буфере Krebs-Ring, обрабатывают раствором 0,25% трипсина/0,02% ЭДТА для снятия клеток с подложки, добавляют 1 мл Krebs-Ringer, центрифугируют 5 мин при 200 g, супернатант сливают, клетки ресуспендируют в новой порции раствора Krebs-Ringer для введения пациентам (Патент РФ 2320720 от 27.03.2008).

Известен способ культивирования мезенхимальных стволовых клеток (МСК) человека exvivo включает по меньшей мере два цикла культивирования ядросодержащих костномозговых клеток в ростовой среде до получения заданного количества мезенхимальных стволовых клеток. В процессе каждого цикла высевают выделенные клетки в соответствующий культуральный сосуд, регулярно определяют рН ростовой среды и заменяют ростовую среду, рН которой менее 6,0 или более 8,0, на ростовую среду, рН которой лежит в пределах от 6,0 до 8,0, при этом регулярно элиминируют клетки, не относящиеся к популяции мезенхимальных стволовых клеток. Процесс культивирования в каждом цикле ведут до образования сплошного монослоя популяции МСК, который извлекают из культурального сосуда путем его обработки 0,03-0,1%-ным раствором трипсина, а перед и после указанной обработки МСК отмывают в изотоническом растворе от следов ростовой среды и следов трипсина соответственно. Изобретение позволяет за достаточно короткий период (приблизительно 40 суток) вырастить из 0,5-1,0 мл пунктата костного мозга эффективную терапевтическую дозу МСК (по меньшей мере 5*107-108) (Патент РФ 2323252 от 27.04.2008).

Задачей изобретения является обеспечение процесса регенерации костной ткани в послеоперационных дефектах или переломах.

Техническим результатом изобретения является восстановление архитектоники костной ткани путем стимулирования регенерации костной ткани композицией с индивидуальными остеоиндуктивными и остеокондуктивными свойствами.

Технический результат достигается за счет того, что композиционный материал для замещения костных дефектов состоит из смеси гранулированного остеопластического материала Bio oss, который после стерильного измельчения при температуре жидкого азота и трехкратного отмыва забуферным физиологическим раствором, подвергается циклической тепловой обработке в термостате при температуре от 70 до 90 градусов Цельсия, три раза по 90 минут и мезенхимальных стволовых клеток пациента имбибированные мезенхимальными стволовыми клетками, культивированными из прикрепленной десны пациента.

Выделение мезенхимальных стволовых клеток из слизистой оболочки десны обеспечивает индивидуализацию остеоиндукции замещения дефекта челюсти.

Использование в процессе остеокондуктивного остеопластического материала Bio-oss обеспечивает восстановление архитектоники челюсти осуществляя профилактику патологических переломов.

В предлагаемом композиционном материале, в отличие от известных ранее, применяется препарат Bio oss органического происхождения, в котором из базового вещества - гидроксиапатита вымыт ранее считавшийся незаменимым и наиболее активным компонентом бета три кальций фосфат.

Композиционный материал для замещения костных дефектов получают следующим образом:

У пациента под инфильтрационной анестезией хирургическим скальпелем осуществляется забор поверхностного слоя слизистой оболочки прикрепленной десны. Полученный фрагмент помещается в 0,05% раствор коллагеназы 2-го типа на 16 часов в термостат при +37°С, с дальнейшим проведением пипетирования осадка и добавления полной питательной среды, состоящей из DMEM/F12 (Invitrogen, США), содержащей 10%) телячью фетальную сыворотку («HyCloneDefined», HyClone, США), инсулин 0,4 мкМ, 0,25 мг/л гентамицина.

Культивирование мезенхимальных стволовых клеток (МСК) осуществляется в стандартных условиях в CO2-инкубаторе с концентрацией CO2 5%, атмосферного воздуха 95% и с повышенной влажностью. Замену культуральной среды на свежую осуществляется каждые 72 часа. Пассирование клеток осуществляли следующим образом: после образования субконфлюэнтного монослоя (80-90% площади культурального пластика) клетки однократно отмывают раствором Версена, затем снимают с помощью раствора Версена с 0,25% трипсином, центрифугируют при 350g, убирают надосадок, осадок ресуспендируют в полной питательной среде и разливали в новую культуральную посуду. Стандартизованную дифференцировку МСК КМ осуществляли в соответствии с протоколами STEMPRO® MSC SFM; StemPro® AdipogenesisDifferentiationKit; StemPro® ChondrogenesisDifferentiationKit; StemPro® OsteogenesisDifferentiationKit.

Иммунофенотипирование осуществляли на проточном цитофлуориметре Gallios (БекманКультер, США). Анализ проводили при помощи ПО AN43172 SoftwareVersion.

Далее гранулы остеопластического материала Bio-oss (Щвецария) были, стерильно измельчены при температуре жидкого азота, после чего их отмывали 3 раза в забуференном физиологическом растворе (PBS) следующим образом:

- гранулы были разложены в одинаковом количестве в стерильные пробирки объемом 2 мл в 4 повторах;

- в каждую пробирку вводили 2 мл PBS и встряхивали на лабораторном шейкере (shaker) 60 сек, после чего давали материалу осесть и супернатант удаляли отсасыванием.

В применяемом композиционном материале, для усиления адгезивных и пролиферативных свойств применяется материал Bio oss, который после стерильного измельчения при температуре жидкого азота и трехкратного отмыва забуферным физиологическим раствором, подвергается циклической тепловой обработке в термостате при температуре от 70 до 90 градусов Цельсия, три раза по 90 минут.

К отмытому материалу добавили 1 мл питательной среды и помещали на 24 часа в CO2-инкубатор, к не промытому материалу также добавили среду на 24 часа для проверки стерильности.

Для проведения скрининга остеопластических материалов при исследовании пролиферационной активности применяли перевиваемую линию фибробластов 3T3/NIH, которая входит в список рекомендованных ГОСТ Р ИСО 10993.5-99.

В результате серии экспериментов in vitro нами доказано что, отмыв всех прочих остеопластических материалов, ухудшают адгезивные и пролиферативные свойства.

Считая, что поверхность гранул с контролем (50 мкл суспензии Цитодекс №3) составляет 8 см², была рассчитана посевная концентрация клеток линии 3Т3, которая составила 30% от 100%) монослоя. Конечный объем среды после засева составил 1,5 мл на диаметр раневой поверхности 10 мм.

Изменение количества применяемого для лечения клеток в ту или другую сторону даже на 3 процента приводит к ингибирующему эффекту и останавливает как адгезию, так и рост и размножение клеток.

Пробирки с образцами материалов с клетками помещали в программируемый ротатор RM-1 (Elmi), скорость вращения 2 об/мин.

Культивирование продолжали в ротаторе, помещенном в термостат, в течение 96 часов при 37°С.

Следует отметить что в существующей лечебной практике дефекты с раневой поверхностью 5 мм и более полностью не восстанавливаются. В нашем случае при применении композиционного материала получено восстановление дефекта с раневой поверхностью диаметром 10 мм.

Полученная композиция готова к использованию.

Таким образом, благодаря полученному с учетом требований п.п. 1-4 композиционному материалу, впервые в мире удалось получить эффект полноценного (100%) заживления дефекта костной ткани челюсти диаметром более 5 мм и восстановление оптической плотности кости в срок на 3 месяца раньше по сравнению с естественным течением репаративного процесса (6 месяцев). В случае естественного репаративного процесса помимо длительных сроков заживления, заполнение дефекта осуществляется в объеме не более 70 процентов, что наряду с несостоятельностью костной ткани в месте дефекта является основной причиной осложнений при последующей имплантации (протезирования). Ниже приведены данные по плотности кости в единицах Хаунсфилда.

Срок 3 месяца, плотность кости при использовании композиционного материла с мезенхимальными стволовыми клетками из десны составляет (761.45. HU) по сравнению с контролем (566.23), в то время как плотность кости на 6 месяце составляет (851.21. HU). Сокращение сроков восстановления костной ткани крайне существенно, поскольку позволяет вдвое сократить срок перевода пациентов на полноценное питание и осуществить полноценное протезирование, в том числе установку дентальных имплантатов в восстановленную костную ткань.

Композиционный материал для замещения костных дефектов состоит из смеси гранулированного остеопластического материала Bio-Oss, который после стерильного измельчения при температуре жидкого азота и трехкратного отмыва забуферным физиологическим раствором подвергается циклической тепловой обработке в термостате при температуре от 70 до 90°С, три раза по 90 мин и мезенхимальных стволовых клеток пациента, имбибированных мезенхимальными стволовыми клетками, культивированными из прикрепленной десны пациента.

Похожие патенты:

Химерный антигенный рецептор // 2684713

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к химерным антигенным рецепторам (CAR), и может быть использовано в медицине для лечения заболевания плазматических клеток, которые характеризуются экспрессией антигена созревания B-клеток (BCMA) и рецептора трансмембранного активатора, модулятора кальция и активатора лиганда циклофилина (TACI).

Обогащенная питательная среда для выращивания клеток, извлеченных из ткани пуповины человека // 2684306

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой культуральную среду для выращивания субстратзависимых клеток, содержащую аминокислоты: L-аргинин; L-цистин; L-цистеин; L-глютамин; глицин; L-гистидин; L-изолейцин; L-лейцин; L-лизин; L-метионин; L-фенилаланин; L-серин; L-треонин; L-триптофан; L-тирозин; L-валин; L-аланин; L-аспарагин, L-аспарагиновая кислота; L-глютаминовая кислота; L-пролин и L-таурин; витамины: D-кальций пантотенат; холина хлорид; фолиевая кислота; I-инозитол; ниацинамид; пиридоксаль; рибофлавин; тиамин; d-биотин; пиридоксин и витамин B12 (цианокобаламин); соли: кальция хлорид; калия хлорид; магнезии сульфат; натрия хлорид и одну или несколько солей натрия фосфата; один или несколько дополнительных микроэлементов, сульфат меди и сульфат цинка, путресцин, стабилизатор и/или противовспенивающий агент, глюкозу или натрия пируват.

Способ получения панкреатических эндокринных клеток (варианты) и способ увеличения выхода бета-клеток // 2684215

Изобретение относится к области клеточной биологии и биотехнологии, а именно к получению клеток, экспрессирующих маркеры, характерные для панкреатических эндокринных клеток и увеличению выхода β-клеток.

Иммортализованный макрофаг // 2683544

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен иммортализованный альвеолярный макрофаг свиней (PAM) для репликации вируса PRRS.

Способ использования хондральных клеток для скринирования веществ, обладающих противовоспалительной активностью // 2683277

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Раскрыт способ скрининга веществ, обладающих противовоспалительной активностью, включающий смешивание исследуемого вещества с фиксированным количеством человеческого ФНО-альфа и добавление этой смеси к культуре клеток хондрального ряда с последующим измерением экспрессии биологического маркера.

Способ поддержания функционального состояния цирротически измененной печени у пациентов в листе ожидания трансплантации органа // 2682874

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, и может быть использовано для поддержания функционального состояния цирротически измененной печени у пациентов в листе ожидания трансплантации органа.

Вакцинная композиция против злокачественной опухоли // 2682726

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению противоопухолевых пептидных вакцин, и может быть использовано в медицине для лечения или профилактики злокачественных опухолей, сопровождающихся повышенной экспрессией гена WT1.

Способ определения степени раздражающего действия дезинфекционных средств на кожу человека // 2681874

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ определения степени раздражающего действия дезинфекционных средств на кожу человека, заключающийся в том, что культуру клеток Chang conjunctiva рассеивают на 96-луночную панель по 100 мкл в каждую лунку в концентрации 1×105 клеток/мл в питательной среде Игла-MEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой (ЭТС).

Биореактор для культивирования мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток // 2681678

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен биореактор для культивирования мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК).

Гены рецепторов антигенспецифичных хелперных т-клеток // 2680588

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к полинуклеотидам, которые кодируют CDR3 в генах TCR-[альфа] и TCR-[бета] цепей CD4+ хелперных Т-клеток, которые специфичны к хелперному пептиду WT1322, и может быть использовано в медицине для индукции иммунного ответа против WT1322-экспрессирующей злокачественной опухоли.

Способы инактивации вирусов и бактерий в клеточной культуральной среде // 2685203

Изобретение относится к области биохимии и биотехнологии. Предложен способ уменьшения преципитации в клеточной культуральной среде, содержащей кальций и фосфат, в то время как среда сохраняет пригодность для культивирования клеток, причем указанный способ включает регулировку рН, ограничение общего количества кальция и/или ограничение общего количества фосфата в клеточной культуральной среде до проведения кратковременной высокотемпературной (HTST) обработки так, что подавляется формирование комплексов, состоящих из кальция и фосфата, таким образом, что образование преципитата и отложение преципитата понижается и/или минимизируется. 33 з.п. ф-лы, 16 ил., 5 табл., 5 пр.

Способ подготовки аутологичных моноцитов человека для терапии ожоговых ран // 2685472

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к подготовке аутологичных моноцитов человека для терапии ожоговых ран. Способ включает выделение моноцитов венозной крови методами градиентного центрифугирования (на градиенте фиколла и двойном градиенте перколла). Затем осуществляют стимулирование 100 мкМ негидролизуемого аналога аденозина 5’-N-этилкарбоксамидоаденозном в присутствии 20 нг/мл IL-4 и 20 нг/мл GM-CSF, культивирование в течение 72 ч в CO2-инкубаторе во влажной атмосфере 5% CO2 при +37°C, после чего замораживают в бессывороточной среде Bambanker с последующим хранением 24 ч при температуре -80˚С и далее в жидком азоте при -196°С. Изобретение позволяет расширить арсенал средств. 5 ил., 1 пр.

Химерный антигенный рецептор // 2685479

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложен химерный антигенный рецептор (CAR), который содержит дисиалоганглиозид (GD2)-связывающий домен. Кроме того, представлены нуклеиновая кислота, кодирующая CAR по изобретению; вектор экспрессии; Т-клетки и способ получения Т-клетки. Также описаны фармацевтическая композиция, способ лечения злокачественной опухоли и применение T-клетки в получении лекарственного средства для лечения злокачественной опухоли. Предложенный CAR обеспечивает увеличенное продуцирование INF-γ, пролиферацию CAR-T-клеток и уничтожение клеток нейробластомы по сравнению с CAR на основе антитела 14g2a. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии. 9 н. и 17 з.п. ф-лы, 15 ил., 10 пр.

Белки, связывающие десмоглеин 2 (dsg2), и их применение // 2685876

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению рекомбинантных полипептидов аденовируса, и может быть использовано в медицине для увеличения эффективности терапевтического лечения солидной опухоли, экспрессирующей десмоглеин 2 (DSG2). Рекомбинантным путем получают полипептид фибриллы аденовируса типа В 2/3 (АВВ-2/3), содержащий мотив центрального домена полипептида фибриллы АВВ-2/3, головной домен полипептида фибриллы АВВ-2/3, функционально связанный и расположенный в направлении С-конца по отношению к указанному мотиву центрального домена полипептида фибриллы АВВ-2/3, и домен димеризации, полученный не из вируса АВВ-2/3, расположенный в направлении N-конца по отношению к указанному мотиву центрального домена полипептида фибриллы АВВ-2/3. На основе мультимеров указанного полипептида получают конъюгат с цитотоксическим соединением. Изобретение позволяет получить рекомбинантный полипептид с увеличенным связыванием с DSG2 по сравнению с аденовирусом типа В 2/3 дикого типа. 7 н. и 11 з.п. ф-лы, 13 ил., 2 табл., 1 пр.

Способ получения популяции клеток, экспрессирующих mafa (варианты) // 2687378

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к получению популяции клеток, экспрессирующих MAFA. Способ включает дифференцировку клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии сформированной эндодермы, полученные из плюрипотентных стволовых клеток, которые представляют собой плюрипотентные стволовые клетки человека не эмбрионального происхождения, клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток H1, клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток H7, клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток H9, или клетки из линии человеческих эмбриональных стволовых клеток SA002, в клетки человека, экспрессирующие маркеры, характерные для линии панкреатической эндодермы. Затем осуществляют дифференцировку клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатической эндодермы, в клетки человека, экспрессирующие маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток, которые экспрессируют по меньшей мере один из NGN3, NEUROD, ISL1, PDX1, NKX6.1, PAX4 и PTF1-альфа; и обработку клеток человека, экспрессирующих маркеры, характерные для линии панкреатических эндокринных клеток, с ингибитором киназы, выбранным из группы, состоящей из алстерпауллона 2-цианоэтила; SU9516; алстерпауллона; Cdk1/2-ингибитора III; ингибитора казеинкиназы I; Akt-ингибитора IV; EGFR-ингибитора; MEK1/2-ингибитора; стауроспорин N-бензоил-, PKR-ингибитора и ингибитора IV тирозинкиназы рецептора PDGF. Изобретение позволяет расширить арсенал средств. 2 н. и 19 з.п. ф-лы, 16 ил., 7 табл., 9 пр.

Суспендирование и кластеризация плюрипотентных клеток человека с целью их дифференцировки в панкреатические эндокринные клетки // 2687379

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к дифференцировке клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток в клетки дефинитивной энтодермы. Способ включает получение клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток из плюрипотентных стволовых клеток, выращенных на плоской прикрепленной культуре, сформированного из скопления клеток или не выделенного из суспензий отдельных клеток, причем плюрипотентные стволовые клетки представляют собой плюрипотентные стволовые клетки неэмбрионального происхождения, индуцибельные плюрипотентные клетки, репрограмированные плюрипотентные клетки, клетки, выделенные из соматических клеток взрослого человека, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки, клетки, полученные из амниотической жидкости человека, человеческие партеноты или клетки из линий эмбриональных стволовых клеток человека H1, H7, H9 или SA002. Затем осуществляют перемещение клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток из плоской прикрепленной культуры в динамичную суспензионную культуру без диссоциации клеточного кластера в отдельные клетки и культивирование клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток в динамической суспензионной культуре в культуральной среде, дополненной (i) 14-проп-2-ен-1-ил-3,5,7,14,17,23,27-гептаазатетрацикло[19.3.1.1~2,6-~.1~8,12.~]гептакоза-1(25),2(27),3,5,8(26),9,11,21,23-нонаен-16-оном и GDF8 или (ii) WNT3A и активином А или обработку клеточного кластера плюрипотентных стволовых клеток в динамической суспензионной культуре указанными веществами. Изобретение позволяет успешно дифференцировать клеточный кластер плюрипотентных стволовых клеток в клетки дефинитивной энтодермы. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 138 ил., 19 табл., 16 пр.

Способ улучшения сбора гемопоэтических клеток при их культивировании на стромальных слоях путем предварительной магнетизации последних // 2688321

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению репрезентативных популяций гемопоэтических клеток и набору для их получения. Способ включает культивирование гемопоэтических клеток на магнитных стромальных слоях, полученных путем инкубации стромальных клеток с магнитными наночастицами или магнитными липосомами с последующей обработкой клеток митомицином С или облучением рентгеновским или гамма излучением для остановки их деления, при сборе гемопоэтических клеток проводят диссоциацию культуры путем обработки трипсином, коллагеназой, или другим протеолитическим ферментом, или интенсивным перемешиванием культуры, а очистку клеточных препаратов проводят путем удаления магнитной стромы на магните. Изобретение позволяет увеличить общее количество собираемых после культивирования гемопоэтических клеток. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 10 ил., 2 табл., 9 пр.

Способ получения монослойной перевиваемой линии клеток почки восточноазиатской лесной мыши apodemus peninsulae для репродукции вируса клещевого энцефалита и производства вирусного антигена для вакцин и диагностических препаратов // 2688327

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения монослойной перевиваемой линии клеток почки восточноазиатской лесной мыши Apodemus peninsulae для репродукции вируса клещевого энцефалита и производства вирусного антигена для вакцин и диагностических препаратов, включающий гомогенизацию почки восточноазиатской лесной мыши Apodemus peninsulae, затем суспендирование в 5 мл раствора трипсина (0,167%) в фосфатно-солевом буфере (рН 7,4) и инкубирование суспензии при 37°С в течение 1 часа, после чего суспензию центрифугируют при 1200g, удаляют супернатант и ресуспендируют осадок в 5 мл среды RPMI1640 с добавлением 20% эмбриональной телячьей сыворотки, 100 ед./мл пенициллина, 100 м кг/мл стрептомицина и 2 мМ L-глутамина, затем первичные культуры клеток инкубируют при 37°С в атмосфере 5% СО2 до формирования монослоя. Изобретение может быть использовано для производства вакцин и диагностических препаратов, а также для выделения, накопления и изучения ВКЭ. 4 ил., 4 пр.

Способ in vitro пролиферации стволовых клеток и применение устройства для усиления пролиферации стволовых клеток in vitro // 2688444

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к in vitro пролиферации стволовых клеток, полученных из подкожной жировой ткани, и применению устройства для генерирования переменного тока для усиления пролиферации стволовых клеток in vitro. Способ включает стадию обработки культуры стволовых клеток с использованием переменного тока, имеющего частоту в диапазоне от 0,4 до 0,6 МГц. Изобретение позволяет осуществить пролиферацию стволовых клеток, полученных из подкожной жировой ткани. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 6 ил., 7 пр.