Способ оценки нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, путем определения циклооксигеназы-2 в гомогенате ворсинчатого хориона

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ оценки нарушений имплантации эмбриона на ранней стадии беременности до 12 недель, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, заключающийся в исследовании гомогената ворсинчатого хориона иммуноферментным методом, где в гомогенате ворсинчатого хориона определяют содержание СОХ-2 и при значении СОХ-2 более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона. Изобретение обеспечивает возможность установления фактора риска, угрожающего течению беременности, и ее прерывания на ранних сроках. 2 пр., 1 табл.

 

Область применения: изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований -патологической физиологии, и предназначено для оценки нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией.

Уровень техники

Нарушение процесса имплантации является одним из основных факторов развития ранних репродуктивных потерь. Вопросам этиологии, патогенеза, терапии и профилактики невынашивания беременности посвящено большое количество работ, тем не менее, продолжается изучение патогенетических механизмов этой патологии с целью разработки наиболее эффективных мер профилактики ранних репродуктивных потерь [4, 5]. По данным многих авторов, частота невынашивания беременности, не имеет тенденцию к снижению и составляет 10-25% от всех беременностей [6].

Показано, что в современных условиях одним из ведущих факторов нарушения имплантации эмбриона во время беременности является урогенитальная инфекция, в развитии которой особая роль отводится хламидиям, микоплазмам, уреаплазмам, цитомегаловирусу и вирусу простого герпеса [1]. Инфекция может оказывать прямое цитотоксическое действие на эмбрион за счет активации цитокинов и свободных радикалов на фоне повышенной продукции токсических веществ, вырабатываемых при разрушении микроорганизмов, и приводить к гибели эмбриона на любых стадиях гестации [7]. Нарушение развития эмбриона может вести к прерыванию беременности не только за счет прямого специфического воздействия инфекционных агентов, но и быть обусловленным персистенцией микроорганизмов и вирусов в эндометрии и плаценте.

Неблагоприятное влияние цитомегаловирусной инфекции на плаценту реализуется за счет активации медиаторов воспаления, что ведет к гибели клеток трофобласта, развитию плацентарной недостаточности и, как следствие, угрозы невынашивания беременности [11].

При наличии цитомегаловирусной инфекции возможно развитие бессимптомной инфекции без последствий для беременности. Однако в некоторых случаях наличие цитомегаловирусной инфекции повышает риск нарушения эмбриогенеза, внутриутробного поражения плода, спонтанного аборта и плацентарной недостаточности [2, 3].

Вышеизложенные данные о частоте невынашивания беременности и значении инфекционного фактора определяют необходимость разработки способов оценки нарушения имплантации эмбриона с целью определения факторов риска угрожающего течения беременности и ее прерывания на ранних сроках.

Изучение содержания циклооксигеназы 2 (СОХ-2) с целью диагностики осложнений беременности широко представлено в материалах исследований зарубежных авторов. При этом показано, что липидные медиаторы играют решающую роль в процессе родоразрешения, а липолитические ферменты фосфолипаза А2 и СОХ-2 являются ключевыми регуляторами синтеза данных соединений [9, 12].

Известны работы, в которых для прогноза плацентарных нарушений, используются уровни экспрессии СОХ-2 в плаценте и влияние на активность данного фермента липоевой кислоты [9], экспрессии СОХ-2, TNFα и индуцибельной NO-синтазы в плаценте при осложнении беременности преэклампсией [13], а также ядерного фактора NFkB, белков Р50, Р65 и СОХ-2 [18].

Вышеперечисленные факторы как изолировано, так и в сочетании друг с другом могут свидетельствовать о нарушении процессов формирования фетоплацентарного комплекса. В связи с этим, наибольшую диагностическую ценность имеют способы, позволяющие проводить оценку угрожающих состояний беременности, связанных с нарушением процесса имплантации эмбриона, в том числе инфекционного генеза.

Аналогами данного изобретения являются приведенные выше способы, основными недостатками которых является трудоемкость [18] и неспецифичность [9, 13], невозможность оценить риск нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией [16].

Указанные факторы могут быть устранены в заявленном способе.

Техническим результатом, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является оценка нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией.

Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией и состоявшимся выкидышем на первом триместре беременности, определяют в гомогенате ворсинчатого хориона содержание СОХ-2 и при значении СОХ-2 более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается проводить оценку нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, по уровню СОХ-2 в гомогенате ворсинчатого хориона. Ранее совокупность указанных признаков в оценке нарушения имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, не использовалась.

Как показывают исследования, персистенция цитомегаловирусной инфекции в период беременности обусловливает мощную и длительную активацию процессов перекисного окисления липидов с угнетением антирадикальной защиты. Персистирующие антигены цитомегаловируса, медиаторы воспаления (TNFα, IL-1, INFγ), метаболиты перекисного окисления липидов усиливают активность фермента фосфолипазы А2 и, тем самым, интенсифицируют каскад преобразований арахидоновой кислоты, с образованием метаболически активных простагландинов Е и F, которые играют важную роль в развитии беременности, являясь активаторами родов. Равномерное соотношение концентраций этих двух простагландинов сдерживают сокращение матки, предотвращая выкидыши на ранних сроках гестации [8].

Биологические эффекты простагландинов регулируются СОХ-2 - ферментом, обеспечивающим синтез простаноидов, а также соответствующими рецепторами, с которыми простаноиды взаимодействуют. Фермент СОХ-2 синтезируется в различных тканях, в том числе и в плаценте. Результаты исследований показали, что увеличение экспрессии СОХ-2 в плаценте играет важную роль в развитии плацентарных нарушений, при патологическом течении беременности [16], путем уменьшения плацентарного кровотока [13].

Плацента человека, эмбриональные мембраны и децидуальная ткань продуцируют простагландины на протяжении всей беременности, увеличиваясь к моменту родов [12]. Так, например, простагландин Е2, синтезированный в амнионе и высвобожденный в амниотическую жидкость, может влиять на физиологию плода, путем ингибирования дыхания плода [17].

В литературе имеются данные, указывающие на потенциальные связи окислительного стресса и индукции СОХ-2 в плаценте, что приводит к избыточному синтезу простагландинов [14, 19]. Индукция СОХ-2 связана с окислительным стрессом за счет активации р38МАРК и NF-kB семейства транскрипционных факторов [15]. Простагландин, синтезируемый в плаценте в ответ на окислительный стресс, высвобождается в кровоток матери и индуцирует процесс родов, путем увеличения сократительной способности матки [10]. Следовательно, СОХ-2, через синтез простагландинов, влияет на регуляцию важнейших физиологических процессов во время беременности.

Вместе с тем, анализ современной литературы показал, что данных о влиянии цитомегаловирусной инфекции на индукцию липолитического фермента СОХ-2, приводящей к повышению продукции простагландинов и нарушению имплантации эмбриона нет.

Вышеизложенное явилось основанием к исследованию в гомогенате ворсинчатого хориона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, показателя СОХ-2 для оценки нарушения имплантации эмбриона.

Способ осуществляют следующим образом.

У беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией и состоявшимся выкидышем на первом триместре беременности исследуют ворсинчатый хорион, полученный после выскабливания стенок полости матки. Определение уровня СОХ-2 проводят методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем «Assay Desings, СОХ-2» (США). Учет реакции проводят на иммуноферментном анализаторе Stat Fax-2100 (США) согласно протоколам для постановки иммуноферментного анализа фирмы-производителя в гомогенате ворсинчатого хориона.

При значении СОХ-2 более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомеговирусной инфекцией.

Использование способа позволяет оценить нарушение имплантации эмбриона при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, и дает возможность определить причину плацентарных нарушений за счет исследования одного биологического образца - ворсинчатого хориона с использованием одного метода исследования - иммуноферментного анализа.

Отличительными признаками данного способа являются: ранние сроки беременности до 12 недель, установлены диагностические величины СОХ-2, при значении более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона.

Сущность заявляемого способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Беременная С., 24 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Поступила с болями внизу живота и кровянистыми выделениями из половых путей. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений.

Проведено исследование крови на ЦМВ, УЗИ органов малого таза.

По ИФА выявлены антитела IgM к ЦМВ, титр антител IgG - 1600, индекс авидности - 86%.

По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 6 недель 4 дня. Сердцебиение определяется. Гипертонус по задней стенки матки. Внутренний зев сомкнут. Ниже плодного яйца гематома небольших размеров (отслойка ворсинчатого хориона).

Диагноз: Беременность 6-7 недель. Угрожающий самопроизвольный выкидыш. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, стадия обострения.

На третий день стационарного лечения усилились боли внизу живота и кровянистые выделения из половых путей. Выставлен диагноз самопроизвольный выкидыш в ходу при сроке 7 недель беременности. Проведено выскабливание стенок полости матки.

По заявленному способу в гомогенате ворсинчатого хориона определено содержание СОХ-2 - 17,12 нг/мл.

Заключение: Нарушение имплантации эмбриона.

Пример 2. Беременная Л., 22 г., поступила в гинекологическое отделение Городской клинической больницы (г. Благовещенск) для проведения медицинского аборта. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений.

Проведено обследование крови на ЦМВ, УЗИ органов малого таза.

По ИФА титр антител IgG ЦМВ - 1:800, индекс авидности - 95%.

По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 3 дня. Сердцебиение определяется. Внутренний зев сомкнут.

Диагноз: Беременность 7-8 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.

При сроке 7 недель беременности проведен медицинский аборт.

По заявленному способу в гомогенате хориона определено содержание СОХ-2 - 10,34 нг/мл.

Заключение: Физиологическое течение беременности. Угроза нарушения имплантации эмбриона отсутствует.

Указанным способом обследованы 55 беременных женщин с цитомегаловирусной инфекцией и состоявшимся выкидышем на сроке до 12 недель беременности. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Преимущества заявляемого способа:

1. Высокая точность - 87%, чувствительность - 67% и специфичность - 95%.

2. Хорошая воспроизводимость метода.

3. Простота, доступность и экономичность выполнения методики.

4. Простота в интерпретации результатов обследования.

Литература

1. Боровкова Л.В., Колобова С.О. Современный взгляд на проблему невынашивания беременности инфекционного генеза // Консилиум. 2016. №3(146). С. 19-24.

2. Долгушина Н.В., Макацария А.Д. Вирусные инфекции у беременных. М.: Триада-Х, 2009. 35 с.

3. Короткова Н.А., Прилепская В.Н. Цитомегаловирусная инфекция и беременность (предгравидарная подготовка и терапия) // Эффективная фармакотерапия. 2016. №22. С. 28-32.

4. Серов В.Н., Сидельникова В.М., Агаджанова А.А., Тетруашвили Н.К. Плацентарная недостаточность в клинике невынашивания беременности // Русский медицинский журнал. 2003, T. 11, №6, С. 88-93.

5. Сидельникова В.М. Актуальные проблемы невынашивания беременности. Москва, 1999. 138 с.

6. Тетруашвили Н.К. Привычное невынашивание // Клинические рекомендации. М., 2008.

7. Тихомиров А.Л., Лубнин Д.М. Привычное невынашивание беременности: причины, диагностика и современные подходы к терапии // Фармакинетика. 2004. №1. С. 28-39.

8. Функция простагландинов в организме человека / электронный ресурс https://gormonys.ru/other/prostaglandiny.html /дата обращения: 15.01.2018.

9. Bennett P.R., Henderson D.J., Moore G.E. Changes in expression of the cyclooxygenase gene in human fetal membranes and placenta with labor // Am. J. obstet.Gynecol. 1992; 167(1): 212-6.

10. Burdon C, Mann C, Cindrova-Davies Т., Ferguson-Smith A.C., Burton G.J. Oxidative stress and the induction of cyclooxygenase enzymes and apoptosis in the murine placenta // Placenta. 2007; 28(7): 724-733.

11. Chou D., Ma Y., Zhang J. Cytomegalovirus infection of trophoblast cell elicits an inflammatory response: a possible mechanism of placental dusfunction // Am. J. Obstet. Gynecol. 2006; 194(2): 534-541.

12. Phillips R.J., Fortier M.A., Lopez Bernal A. Prostaglandin pathway gene expression in human placenta, amnion and choriodecidua is differentially affected by preterm and term labour and by uterine inflammation // BMC Pregnancy Childbirth. 2014; 22(14): 241.

13. Goksu Erol A.Y., Nazli M., Yildiz S.E. Expression levels of cyclooxygenase-2, tumor necrosis factor-a and inducible NO synthase in placental tissue of normal and preeclamptic pregnancies // J. Matern Fetal Neonatal Med. 2012; 25(6): 826-830.

14. Malek A., Sager R., Schneider H. Effect of hypoxia, oxidative stress and lipopolysaccharides on the release of prostaglandins and cytokines from human term placental explants // Placenta. 2001; 22 (Suppl. A): S45-S50.

15. Newton R., Kuitert L.M., Bergmann M., Adcock I.M., Barnes P.J. Evidence for involvement of NF-kappaB in the transcriptional control of COX-2 gene expression by IL-lbeta // Biochem Biophys Res Commun. 1997; 237: 28-32.

16. Okawara M., Seki H., Matsuoka K., Hashimoto F., Hayashi H., Takeda S. Examination of the expression of cyclooxygenase-2 in placenta villi from sufferers of pregnancy induced hypertension // Biol. Pharm. Bull. 2009; 32(12): 2053-2056.

17. Sorokin Y, Hallak M, Klein O, Kalderon I, Abramovici H. Effects of induction of labor with prostaglandin E2 on fetal breathing and body movements: controlled, randomized, double-blind study // Obstet Gynecol. 1992; 80:788-791.

18. Xu Y., Khipp G.T., Cook T.J. Expression of cyclooxygenase isoforms in developing rat placenta, human term placenta, and BeWo human trophoblast model // Mol. Pharm. 2005.2(6): 481-490.

19. White V. Oxidative stress and altered prostanoid production in the placenta of streptozotocin - induced diabetic rat // Reprod Fertil Dev. 2002; 14: 117-123.

Способ оценки нарушений имплантации эмбриона на ранней стадии беременности до 12 недель, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, заключающийся в исследовании гомогената ворсинчатого хориона иммуноферментным методом, где в гомогенате ворсинчатого хориона определяют содержание СОХ-2 и при значении СОХ-2 более 16,85 нг/мл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии, и может быть использовано для прогнозирования развития осложнения при черепно-мозговой травме у пострадавших в экстремальных условиях Арктики.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ обнаружения генетических факторов (генов), определяющих функционирование ДНК-структур клетки - теломер, обуславливающих, в свою очередь, продолжительность жизни клетки эукариот.

Группа изобретений относится к медицине и касается иммобилизованного белкового материала, содержащего носитель и по меньшей мере один белок, иммобилизованный на носителе.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа повышения специфического захвата нейротоксического полипептида клетками, включающего инкубацию с нейротоксическим полипептидом клеток, восприимчивых к интоксикации нейротоксином, в течение времени и в условиях, которые позволяют нейротоксическому полипептиду проявить свою биологическую активность, причем инкубация включает по меньшей мере два из следующих этапов: (i) K+-опосредованную деполяризацию клеток, (ii) уменьшенное время воздействия нейротоксического полипептида, составляющее по меньшей мере 24 часа и меньше 96 часов, и/или (iii) встряхивание клеток во время воздействия нейротоксического полипептида, что приводит к повышению специфического захвата нейротоксического полипептида указанными клетками, причем специфический захват нейротоксического полипептида в клетку повышен по меньшей мере в 1,5 раза по сравнению со способом с применением условий культивирования клеток, которые не включают (i), (ii) и/или (iii).

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования риска развития псориаза 2 типа у женщин в постменопаузе, характеризующийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень фолликулостимулирующего гормона методом иммунофлуоресценции и рассчитывают коэффициент прогноза риска развития псориаза 2 типа по формуле К=у×100%, где К - коэффициент прогноза риска развития псориаза 2 типа,у=ехр(-7,5+(0,17)*ФСГ)/(1+ехр(-7,5+(0,17)*ФСГ)), где у - коэффициент множественной регрессии, ФСГ - концентрация фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови в мМе/мл, при этом если K≥60%, то прогноз риска развития псориаза 2 типа у женщин в постменопаузе высокий, а если K<60%, то прогноз риска развития псориаза 2 типа низкий.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно для изучения различных биомолекул методом люминесцентной визуализации клеток и их компонент. Для этого используют флуоресцентный оптический ДНК сенсор, состоящий из подложки и адсорбированной на ней тонкой пленки комплекса ДНК-люминофор.
Изобретение относится к области медицины, а именно клинической иммунологии, и может найти применение для оценки эффективности назначаемой общепринятой терапии заместительными внутривенными иммуноглобулинами согласно стандартным режимам у больных с общевариабельной иммунной недостаточностью (ОВИН).

Группа изобретений относится к области биотехнологии и предназначена для исследования ферментативной активности ботулинического нейротоксина. Предложена репортерная конструкция, которая содержит участок заякоривания в мембране, сайт расщепления и репортерную область, содержащую два идентичных репортерных пептида.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска плохого ответа опухоли на неоадъювантную химиотерапию (НАХТ) у пациенток с инвазивной карциномой молочной железы, отличающийся тем, что рассчитывают значение параметра Y в уравнении регрессии по формуле Y=-4,88+10*X1-32,36*X2+6,81*X3+38,28*X4, где X1 – степень злокачественности: Х1=1 при низкой, X1=2 при умеренной, Х1=3 при высокой степени злокачественности; Х2 – состояние менструальной функции пациентки: Х2=1 при сохранении менструальной функции, Х2=2 при менопаузе; Х3 – пороговое значение циркулирующих опухолевых клеток (ЦОК) без признаков эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) до начала лечения: Х3=0 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin- менее 0,19 кл./мкл, Х3=1 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin- более или равно 0,19 кл./мкл; Х4 – пороговое значение ЦОК с признаком EMT до начала лечения: Х4=0 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+ менее 0,24 кл./мкл, Х4=1 при содержании клеток с фенотипом EpCam+CD45-CD44-CD24-Ncadherin+ более или равно 0,24 кл./мкл; далее значение вероятности риска плохого ответа на неоадъювантную химиотерапию Р определяют по формуле Р=eY/(1+eY), где е – математическая константа, равная 2,72, и при вероятности Р≥0,5 определяется высокий, а при вероятности Р<0,5 – низкий риск плохого ответа на неоадъювантную химиотерапию.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и ветеринарии и предназначено для дифференциальной диагностики случной болезни и сурры лошадей. Для этого сначала из крови больных лошадей или из крови мышей и кроликов, которым трехкратно вводили трипаносомный антиген с адьювантом (гидроокись алюминия) и которых тотально обескровливали на 25-30 день, получают высокоактивные и высокоспецифичные ДНК-содержащие антигены Т. evansi и Т. equiperdum, которые лиофилизируют, а затем используют при постановке полимеразной цепной реакции с праймерами к гену RoTat1.2 VSG, гену субъединицы 5 NADH дегидрогеназы (nad5) с последующим электрофоретическим определением размера амплифицируемого фрагмента нуклеотидной последовательности. При наличии на электрофореграмме фрагмента длиной 410 н.п. диагностируют наличие в образцах ДНК-содержащих антигенов ДНК Т. evansi, а при наличии фрагмента длиной 724 н.п. диагностируют наличие в образцах ДНК-содержащих антигенов ДНК Т. equiperdum соответственно. Способ позволяет достоверно дифференцировать трипаносомы видов Т. evansi и Т. equiperdum. 6 ил.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ оценки нарушений имплантации эмбриона на ранней стадии беременности до 12 недель, осложненной цитомегаловирусной инфекцией, заключающийся в исследовании гомогената ворсинчатого хориона иммуноферментным методом, где в гомогенате ворсинчатого хориона определяют содержание СОХ-2 и при значении СОХ-2 более 16,85 нгмл делают заключение о нарушении имплантации эмбриона. Изобретение обеспечивает возможность установления фактора риска, угрожающего течению беременности, и ее прерывания на ранних сроках. 2 пр., 1 табл.

Наверх