Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии



Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии
Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии

Владельцы патента RU 2687493:

Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Настоящее изобретение относится к способу определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающему изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, отличающийся тем, что хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл. Технический результат – эффективное разделение цефотаксима с примесными соединениями пробы и обеспечение большого удержания цефотаксима, что повышает чувствительность и разрешающую способность метода, уменьшение расхода подвижной фазы, что повышает экономическую эффективность анализа. 2 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в контрольно-аналитических, клинических лабораториях для определения концентрации цефотаксима, для стандартизации и контроля качества лекарственных средств, для определения антибиотиков в образцах биологического происхождения с целью изучения фармакокинетики, лекарственного мониторинга для регулирования введения оптимальных доз антибиотиков при лечении различных инфекционных заболеваний.

Для определения цефотаксима используют масс-спектрометрию, диффузию в агар, высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ), а также потенциометрические методы с применением ионоселективных электродов с различными видами электродно-активных соединений [1].

Для качественного и количественного анализа антибиотиков в фармацевтических формах и биологических жидкостях наиболее перспективным является использование высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенно-фазном режиме. Метод отличается селективностью, точностью и воспроизводимостью, а также высоким уровнем автоматизации.

Известно использование ультрафиолетовой спектрофотометрии для количественного определения цефалоспоринов в биологических средах. Способ заключается в снятии спектров поглощения антибиотика в пробе после удаления из нее твердых элементов и осаждения белков. К недостаткам данного способа можно отнести низкие показатели специфичности и чувствительности (2 мкг/мл) [2].

Известен способ определения цефотаксима методом ультрафиолетовой спектрофотометрии для количественного определения цефалоспоринов в биосредах. Предложенный метод основан на свойстве азотсодержащих органических соединений образовывать окрашенные соединения с солями переходных металлов в водных растворах. Основными недостатками этого способа являются трудоемкая пробоподготовка, низкая специфичность и визуальный учет результата исследования, что может существенно снизить воспроизводимость результатов. Кроме того, для образцов с концентрацией аналита менее 10 мкг/мл применяется дополнительная стадия концентрирования пробы, что еще сильнее затрудняет ход анализа [3].

Наиболее близким к заявляемому изобретению является методика определения цефотаксима натрия методом ВЭЖХ в изократическом режиме с использованием хроматографической колонки размером 250×4 мм, заполненной сорбентом С8 с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония (рН=6,8) с ацетонитрилом в соотношении 85:15. Недостатками метода являются небольшая чувствительность и низкое удерживание цефотаксима в данных хроматографических условиях. Кроме того, низкая буферная емкость раствора ацетата аммония при рН=6,80 может приводить к уширенным и ассиметричным пикам, что существенно осложняет проведение количественного анализа [4].

Целью предлагаемого изобретения является разработка способа определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Технический результат достигается с помощью способа определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, в котором изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, при этом хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.

Сущность способа определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, при этом хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.

Использование в качестве неподвижной фазы хроматографической колонки размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм, позволяет получить эффективное разделение цефотаксима с примесными соединениями пробы. Меньший внутренний диаметр колонки позволяет уменьшить расход подвижной фазы с сохранением эффективности, а большая гидрофобность сорбента С18 по сравнению с С8 обеспечивает большее удерживание цефотаксима, что повышает разрешающую способность метода.

Применения в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10 позволяет достигнуть высокой симметрии и остроты пиков за счет высокой буферной емкости аммоний-ацетатного буфера при рН=4,70.

Заявляемый способ обладает следующими отличительными от прототипа признаками:

- Высокая чувствительность метода (предел обнаружения 27 нг/мл);

- Повышенная экономическая эффективность анализа: расход подвижной фазы и ацетонитрила ниже в 2 и 1,5 раза соответственно.

На фиг. 1, дан способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, калибровочная кривая цефотаксима.

На фиг. 2, дан способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, хроматограмма цефотаксима.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследуемый образец растворяется в смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, фильтруется через 0,2 мкм фильтр и анализируется на приборе «Ultimate 3000» Dionex с ультрафиолетовым детектором при длине волны 252 нм, хроматографической колонкой размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм. Режим элюирования изократический, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, температура термостата колонки 25°С, объем вводимой пробы 10 мкл. Проводится не менее пяти измерений для каждого раствора.

Концентрацию цефотаксима в препаратах определяли с использованием предварительно построенной калибровочной кривой зависимости площади пика аналита от концентрации (фиг. 1).

Возможность практического применения заявленного способа подтверждается примером его конкретного выполнения с использованием совокупности заявляемых признаков.

Пример 1.

200 мкл плазмы крови смешивается с 800 мкл смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, фильтруется через 0,2 мкм фильтр и анализируется на приборе «Ultimate 3000» Dionex с ультрафиолетовым детектором при длине волны 252 нм, хроматографической колонкой размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18 с размером частиц 5 мкм. Режим элюирования изократический, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония (рН=4,70) с ацетонитрилом в соотношении 90:10, температура термостата колонки 25°С, объем вводимой пробы 10 мкл. Проводится не менее пяти измерений для каждого раствора.

На представленной хроматограмме образца предел обнаружения цефотаксима составляет 27 нг/мл, время удерживания 9,92±0,12 мин (фиг. 2.).

Используемая литература

1. Кулапина, Е.Г. Современные методы определения антибиотиков в биологических и лекарственных средах / Е.Г. Кулапина, О.В. Баринова, О.И. Кулапина, И.А. Утц, СВ. Снесарев // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. - Т. 54. - №9-10. - С. 53-60.

2. Патент РФ №2445624. Опубликован 20.03.2012 Бюл. №8.

3. Патент РФ №2567335. Опубликован 10.11.2015 Бюл. №31.

4. Lalitha, N. Development and validation of RP-HPLC method for estimation of cefotaxime sodium in marketed formulations / N. Lalitha, P.S. Pai // J. Basic Clin. Pharm. - 2009. - Vol.1. - P. 26-28.

Способ определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, отличающийся тем, что хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН=4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способам количественного определения полисорбата-80 в растворах терапевтических белков и к способам быстрой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии, а именно к способам определения 2-диметиламино-1,3-бис-(фенилсульфонилтио)пропана в биологическом материале.

Изобретение относится к исследованию или анализу материалов с использованием хроматографии. Способ одновременного определения примесей этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), диметилсульфоксида (ДМСО) и N-этилмалеимида (ЭТМ) в фармацевтических субстанциях методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии включает определение ЭДТА, ДМСО и ЭТМ во время одного анализа, с использованием хроматографической колонки длиной не более 150 мм, заполненной носителем с зернением не более 5 мкм, используя раствор кислоты ортофосфорной 10-30 мМ (рН 1,9-2,26) с градиентом органического растворителя от 0 до 100%, при температуре колонки 25-45°С, достигается предел детектирования для ЭДТА - от 4,14 до 8,0 нг, ДМСО - от 0,8 до 3,0 нг, ЭТМ - 0,04 до 1 нг и предел количественного определения ЭДТА - от 12,9 до 30 нг, ДМСО - от 2,66 до 10 нг, ЭТМ - от 0,13 до 3 нг.

Предлагаемое изобретение относится к аналитической химии, может быть использовано в качестве стандартного теста при сертификации качества биологических добавок, поступающих в продажу через розничную аптечную сеть и специализированные магазины продуктов для здорового образа жизни, и позволяет упростить способ определения селеноорганических соединений и обеспечить возможность непосредственного определения микроколичеств общего селена в анализируемых объектах.

Изобретение относится к аналитическому приборостроению и может быть использовано в жидкостной хроматографии. .

Изобретение относится к области аналитического приборостроения, в частности к конструкциям пламенно-фотометрических детекторов для газовой хроматографии. .

Изобретение относится к области аналитического приборостроения, в частности к конструкциям детекторов для газовой хроматографии. .

Изобретение относится к области аналитического приборостроения, в частности к способам пламенно-фотометрического детектирования в газовой хроматографии. .

Изобретение относится к области аналитического приборостроения, в частности к конструкциям пламенно-фотометрических детекторов для газовой хроматографии. .

Изобретение относится к области аналитического приборостроения и найдет применение в приборах капиллярного электрофореза и хроматографах при проведении высокочувствительного детектирования компонентов проб, движущихся в капилляре.

Настоящее изобретение относится к способу стабилизации жирных кислот, присутствующих в образце, таком как биологические жидкости (например, кровь, слюна, грудное молоко, моча, сперма, плазма и сыворотка крови), причем способ предусматривает нанесение жирных кислот или образца, содержащего жирные кислоты, на твердый носитель, который содержит твердую подложку, по меньшей мере одно хелатообразующее средство и по меньшей мере один антиоксидант, где твердая подложка содержит менее 2 мкг/см2 примесей, где примеси представляют собой одно или более соединений, выбранных из группы, состоящей из насыщенных жирных кислот, сложных эфиров насыщенных жирных кислот, смоляных кислот и сложных эфиров смоляных кислот.

Изобретение относится к системе уплотнения рабочего материала для колонок. .

Изобретение относится к неподвижным жидким фазам, которые используются для хроматографического разделения смесей органических веществ. .

Изобретение относится к области охраны окружающей среды и может быть использовано для осуществления контроля над процессом миграции потенциальных загрязнителей в районах захоронения промышленных отходов.

Изобретение относится к способу регенерации хроматографических колонок для ВЭЖХ СО2 в сверхкритическом состоянии с целью восстановления их эффективности, утраченной в процессе эксплуатации.

Изобретение относится к аналитическому приборостроению и может быть использовано для быстрого получения эффективных и стабильных колонок для работы в жидкостной хроматографии.

Изобретение относится к аналитической химии, конкретно к неподвижным фазам для разделения веществ методом капиллярной газовой хроматографии, и может быть использовано в анализе полярных сорбатов различных классов.
Изобретение относится к области экологической и аналитической химии, в частности к способу определения загрязнения воды бензинами. .

Настоящее изобретение относится к способу определения цефотаксима методом обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающему изократический режим элюирования с использованием хроматографической колонки, заполненной сорбентом с размером частиц 5 мкм, в качестве подвижной фазы используют смесь раствора ацетата аммония с ацетонитрилом, отличающийся тем, что хроматографическое разделение производится на колонке размером 250×3 мм, заполненной сорбентом С18, с использованием в качестве подвижной фазы смеси 0,02 М раствора ацетата аммония рН4,7 с ацетонитрилом в соотношении 90:10 с применением ультрафиолетового детектора при длине волны 252 нм и объеме вводимой пробы 10 мкл. Технический результат – эффективное разделение цефотаксима с примесными соединениями пробы и обеспечение большого удержания цефотаксима, что повышает чувствительность и разрешающую способность метода, уменьшение расхода подвижной фазы, что повышает экономическую эффективность анализа. 2 ил., 1 пр.

Наверх