Способ оценки повреждающего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание миристиновой кислоты в крови пуповины новорожденных от матерей, перенесших в третьем триместре реактивацию цитомегаловирусной инфекции

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2687971:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для оценки угрозы развития гипоксии новорожденных при реактивации цитомегаловирусной инфекции у матери в третьем триместре. Сущность изобретения состоит в том, что в крови пуповины новорожденных определяют титр антител класса G к цитомегаловирусу, определяют в мембране эритроцитов содержание миристиновой кислоты газохроматографическим методом и определяют микровязкость липидного бислоя в мембране эритроцитов методом латеральной диффузии флуоресцентного гидрофобного зонда пирена. При росте титра антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, увеличении в мембране эритроцитов крови пуповины содержания миристиновой кислоты до 1,64±0,007%, повышении микровязкости липидного бислоя при снижении коэффициента эксимеризации пирена до 0,48±0,004 Fэ/Fм, оценивают угрозу развития гипоксии новорожденного ребенка.

Область применения: изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для оценки угрозы развития гипоксии новорожденных при реактивации цитомегаловирусной инфекции у матери в третьем триместре.

Уровень техники

Основными структурными компонентами клеток наряду с белками являются фосфолипиды и входящие в их состав жирные кислоты, которые обеспечивают целостность морфологической структуры эритроцита и прочно удерживаются эритроцитарной мембраной. Однако, даже незначительные структурные перераспределения, приводящие к ассиметрии мембранных фосфолипидов клетками, в значительной степени могут сказаться на нарушении функций биомембран, ее проницаемости, пластичности, вязкоэластических свойствах, что влечет за собой снижение стабильности мембран клеток крови и тканей [5, 6].

Текучесть или микровязкость является интегральным показателем, зависящим от нескольких компонентов: ненасыщенности липидов, содержания холестерина в мембране, фосфолипидного состава и количества белка введенного в мембрану [1, 2]. Важное значение в изменении структурно-функциональных свойств мембраны эритроцитов придают увеличению количества сфингомиелина и насыщенных жирных кислот.

Чрезмерное накопление миристиновой кислоты приводит к уплотнению липидного бислоя мембран эритроцитов, что отражается на функциональных свойствах мембраны, а именно относительной микровязкости [3, 4].

В результате увеличения микровязкости мембран, эритроциты утрачивают эластичность, теряют способность к изменению формы, необходимой для прохождения по микрососудам, что приводит к усиленному их разрушению в сосудистом русле, создавая, тем самым, условия для развития гипоксии.

Известны способы прогнозирования гипоксии плода по определению в венозной крови беременных в третьем триместре и перед родами свободных аминокислот [10], содержания молекул средней массы в биосубстратах (сыворотка крови и моча) при нормальной и осложненной беременности у женщин и новорожденных [9], уровня содержания провоспалительных цитокинов: фактора некроза опухолей α и интерлейкина-4 в сыворотке крови у беременных в третьем триместре [11], по изучению жирно-кислотного состава конденсата выдыхаемого воздуха у беременных женщин [12], концентрации фактора некроза опухолей α в сыворотке крови и мембране эритроцитов полиненасыщенных жирных кислот [7, 8].

Основным недостатком данных способов является:

- не применимы для оценки угрозы развития гипоксии новорожденных при реактивации цитомегаловирусной инфекции у матери в третьем триместре.

Указанный недостаток может быть устранен в заявленном способе.

Техническим результатом, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является повышение точности оценки развития гипоксии новорожденных при реактивации цитомегаловирусной инфекции у матери в третьем триместре.

Осуществление изобретения

Исследована кровь пуповины 25 новорожденных от женщин с реактивацией цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности и 20 новорожденных от женщин с латентным течением цитомегаловирусной инфекции в период беременности. Симптоматически цитомегаловирусная инфекция у беременных в третьем триместре беременности проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - реактивация хронической цитомегаловирусной инфекции - устанавливали при комплексном исследовании периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса, уровня антител иммуноглобулина класса М или четырехкратного и более нарастания титра антител иммуноглобулина класса G в парных сыворотках в динамике через 10 дней, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводили с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2013 г и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №226.

Определение типоспецифических антител иммуноглобулинов класса М и G к цитомегаловирусу, индекса авидности осуществляли методами иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК ЦМВ методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

Содержание миристиновой кислоты в мембране эритроцитов крови пуповины у новорожденных определяли методом газожидкостной хроматографии. Кровь забирали из артерии пуповины в стандартную пробирку с антикоагулянтом.

Липиды из крови пуповины экстрагировали по методу Folch [14] смесью хлороформ - метанол (2:1). Полученный экстракт упаривали в токе воздуха досуха. К экстракту липидов добавляли порциями 5 мл ацетона и оставляли на ночь при t 3-5°С. Полученный осадок центрифугировали и проводили метилирование жирных кислот [13].

Полученный метиловый эфир миристиновой кислоты анализировали на газовом хроматографе «Кристалл 2000м» (Россия) с пламенно-ионизационным детектором. Обсчет и идентификацию пиков выполняли с помощью программно-аппаратного комплекса «Хроматэк Аналитик 2,5» по временам удерживания с использованием стандартов фирмы «Supelco» (США). Количественный расчет хроматограмм проводили методом внутренней нормализации путем определения площадей пиков анализируемых компонентов и их доли (в относительных %) в общей сумме площадей пиков метилированых продуктов высших жирных кислот.

Измерение микровязкости мембран эритроцитов проводили методом латеральной диффузии гидрофобного флуоресцентного зонда пирена [1]. Определение микровязкости основано на образовании эксимеров (активных димеров) пирена в липидном окружении. Флуоресценцию пирена измеряли на спектрофлюориметре «Hitachi». Для определения микровязкости липидного бислоя находили интенсивность флуоресценции или свечение пирена при длине волны возбуждения 334 нм, длина волны мономеров 395 нм, длина волны эксимеров 470 нм. Оценка микровязкости основана на вычислении коэффициента эксимеризации пирена (К_экс.=F₄₇₀/F₃₉₅), который равен отношению интенсивности флуоресценции эксимеров к интенсивности флуоресценции мономеров. Коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от микровязкости.

ОБследование новорожденных от женщин с реактивацией цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности при выявлении титра антител иммуноглобулина класса G к цитомегаловирусу 1:1600 показали повышение содержания миристиновой кислоты в мембране эритроцитов крови пуповины до 1,64±0,007% (контроль - 1,24±0,008%), увеличение микровязкости липидного бислоя и снижение коэффициента эксимеризации пирена до 0,48±0,004 Fэ/Fм (контроль - 0,76±0,005 Fэ/Fм), что создает угрозу развития гипоксии новорожденного ребенка.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается диагностировать угрозу развития гипоксии новорожденного ребенка по уровню антител иммуноглобулина класса G в сыворотке крови пуповины, содержанию миристиновой кислоты и микровязкости липидного бислоя в мембране эритроцитов. Ранее совокупность указанных признаков в оценке угрозы развития гипоксии у новорожденного ребенка при реактивации цитомегаловирусной инфекции у женщин в третьем триместре беременности не использовалась.

Сущность заявленного способа поясняется следующим примером.

Пример. Больная С. Возраст 22 года. Реактивация хронической цитомегаловирусной инфекции с титром антител иммуноглобулина класса G к цитомегаловирусу 1:1600 на 34 неделе беременности.

После родов произведен забор крови из артерии пуповины новорожденного ребенка. По заявленному способу содержание миристиновой кислоты в мембране эритроцитов крови пуповины новорожденного составило 1,32%, коэффициент эксимеризации пирена - 0,51 Fэ/Fм.

Следовательно, можно констатировать, что ребенок, родившейся от больной С., находится в группе риска по развитию гипоксии.

Используемые источники

1. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М.: Наука, 1989. С. 191-206.

2. Ишутина Н.А. Зависимость микровязкости мембран эритроцитов от фосфолипидного состава при беременности, осложненной герпес-вирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2008. №28. С. 25-28.

3. Ишутина Н.А., Луценко М.Т., Дорофиенко Н.Н. Миристиновая, пальмитиновая и стеариновая жирные кислоты в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2017. №63. С. 47-52.

4. Лескова Г.Ф. Особенности воздействия перфторана на структурно-метаболические нарушения в печени при экспериментальном атеросклерозе // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т. 136, №10. С. 386-389.

5. Пат. 2390020 РФ Способ определения уплотненных белково-липидных участков в мембранах эритроцитов различной степени зрелости с помощью компьютерной программы Biovision / М.Т. Луценко; опубл. 20.02.2010

6. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина Н.А. Кислородтранспортная функция крови у беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2012. №6. С. 66-72.

7. Пат. 2513456 РФ Способ диагностики стабильности эритроцитов у беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции / М.Т. Луценко, И.А. Андриевская, Н.А. Ишутина; опубл. 20.04.2014.

8. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Ишутина Н.А., Мироненко А.Г. Механизмы формирования гипоксии плода в период беременности и нарушения кровоснабжения плода при цитомегаловирусной инфекции // Вестник Российской Академии медицинских наук. 2015. №1. С. 106-112.

9. Пат. 2148256 РФ Способ доклинического прогнозирования плацентарной недостаточности / И.В. Смиренина, Т.Ю. Пестрикова; опубл. 27.04.2000.

10. Пат. 2334985 РФ Способ прогнозирования развития внутриутробной гипоксии плода / А.Э. Тарханова, Л.А. Ковальчук, В.Н. Прохоров; опубл. 27.09.2008.

11. Пат. 24575 Республика Казахстан Способ диагностики внутриутробной гипоксии плода / Ж.А. Утешева, Н.М. Мамедова, Л.С. Дзоз, Н.В. Кравцова; опубл. 15.09.2011.

12. Пат. 2131126 РФ Способ пренатальной диагностики хронической гипоксии плода / Б.С. Хышиктуев, Н.А. Хышиктуева, В.Н. Иванов; опубл. 27.05.1999.

13. Carren J.P., Dubacy J.P-J. Adaptation of a micro-seale metod to the micro-seale for fatty acid methyl trausestenif: cation of biological lipid extracts // Chromatography. 1978. Vol. 151. P. 384-390.

14. Folch J., Lees M., Sloane G.H. A simple metod for the isolation and purification of total lipids from animals tissues // J. Biol. Chem. 1957.Vol. 226. P. 497-509.

Способ оценки угрозы развития гипоксии новорожденных при реактивации цитомегаловирусной инфекции у матери в третьем триместре, характеризующийся тем, что в пуповинной крови новорожденных определяют титр антител класса G к цитомегаловирусу, определяют в мембране эритроцитов содержание миристиновой кислоты газохроматографическим методом и определяют микровязкость липидного бислоя в мембране эритроцитов методом латеральной диффузии флуоресцентного гидрофобного зонда пирена и при росте титра антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, увеличении содержания миристиновой кислоты в мембране эритроцитов крови пуповины новорожденного до 1,64±0,007% и повышении микровязкости липидного бислоя при снижении коэффициента эксимеризации пирена до 0,48±0,004 Fэ/Fм оценивают угрозу развития гипоксии новорожденного ребенка.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано в медицине и диагностике состояний у млекопитающего, характеризующихся гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1.

Новые иммунотерапевтические молекулы и их применения // 2687164

Цифровое обнаружение образца в измерителе аналита // 2686463

Изобретение относится к портативным измерителям концентрации аналита в крови с использованием тест-полоски. Измеритель аналита содержит: отверстие порта для полоски, выполненное с возможностью принимать тест-полоску, причем указанное отверстие проходит до соединителя порта для полоски, который содержит: первый контакт для обнаружения цифрового сигнала обнаружения полоски, когда тест-полоску вставляют в отверстие порта для полоски; и второй контакт для обнаружения цифрового сигнала обнаружения образца, когда образец наносят на вставленную тест-полоску, а также -дисплей, и цепь управления, электрически соединенную с первым и вторым контактами.

Способ оценки степени тяжести ишемического процесса центральной гемодинамической системы // 2686420

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, функциональной диагностике, сосудистой хирургии, и может быть использовано при проведении диагностики степени тяжести ишемического процесса центральной гемодинамической системы (ЦГС).

Способ определения противомикробной активности цельной сыворотки и фракции её антимикробных пептидов // 2686337

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии и предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови.

Способ прогнозирования течения процесса заживления лапаротомной раны при механической желтухе неопухолевого происхождения // 2685717

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и предназначено для прогнозирования течения репаративного процесса лапаротомной раны при механической желтухе неопухолевого происхождения.

Способ прогнозирования течения шизофрении у мужчин с приступообразными эндогенными психозами, манифестирующими в возрасте от 18 до 25 лет // 2685549

Изобретение относится к области медицины, а именно к психиатрии, и представляет собой способ прогнозирования течения шизофрении у мужчин с приступообразными эндогенными психозами, манифестирующими в возрасте от 18 до 25 лет, включающий оценку уровня функционирования больного в период, предшествующий началу заболевания, по шкале преморбидного функционирования (PAS), отличающийся тем, что при оценке преморбидного функционирования (PAS) в диапазоне от 0,23 до 0,5 баллов и выше у больного отбирают биологический материал, выделяют из него ДНК, определяют варианты полиморфных локусов 5-HTTLPR гена переносчика серотонина, Val66Met гена нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), Т102С гена рецептора серотонина типа 2А (5-HTR2A) и по комбинации вариантов генов прогнозируют течение шизофрении, при этом при наличии в комбинации варианта LL (5-HTTLPR), или Met (Val66Met), или СС (Т102С) прогнозируют неблагоприятное, а при наличии комбинации SValValT - благоприятное течение шизофрении.

Способ изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики поллуроза-тифа птиц // 2685413

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии.

Способ определения предрасположенности к развитию осложнений заболеваний сердечно-сосудистой системы при экстремальных изменениях климатических условий // 2684286

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии и профилактической медицине и раскрывает cпособ определения предрасположенности к развитию осложнений заболеваний сердечно-сосудистой системы при экстремальных изменениях климатических условий.

Способ очистки рекомбинантного тканевого активатора плазминогена для медицинского применения // 2683950

Изобретение относится к медицине и касается способа хроматографической очистки тканевого активатора плазминогена, где проводят цинк-хелатную хроматографию на металлхелатном сорбенте с метакрилатной матрицей, затем аффинную хроматографию на пептидном аффинном сорбенте Capture Select tPA и затем переводят тканевой активатор плазминогена в финальный буферный раствор путем хроматографии на сильном катионообменном сорбенте, с повышением содержания хлорида натрия и аргинина в промывочных буферных растворах.

Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам // 2688165

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и предназначено для лабораторных или экспериментальных исследований при изучении антибиотикочувствительности холерных вибрионов. Для повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам используют средство, снижающее экспрессию генов к антибиотикорезитентности. В качестве экспрессирующего средства применяют диклофенак в количестве 500 мг/л. Использование изобретения позволяет повысить чувствительность холерных вибрионов к антибактериальным препаратам при их совместном применении с диклофенаком в отношении антибиотикорезистентных штаммов холерных вибрионов in vitro и vivo. 4 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

Способ выявления мутаций гена gjb2, обуславливающих аутосомно-рецессивную глухоту 1а типа // 2688180

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и оториноларингологии, и предназначено для выявления мутаций гена GJB2, обуславливающих аутосомно-рецессивную глухоту 1А типа. Предложен способ, включающий детекцию трех наиболее распространенных в Якутии мутаций c.-23+1G>A, с.35delG и c.109G>A с использованием праймеров и с последующим проведением анализа полиморфизма длин рестрикционных фрагментов с использованием эндонуклеаз AsuHPI, Bsc4I, HindII. Изобретение обеспечивает быстрое и точное выявление GJB2-мутаций, ответственных за 98% всех патогенных вариантов, обуславливающих аутосомно-рецессивную глухоту 1А типа в Якутии. 6 ил., 1 табл.

Способ выявления мутаций гена gjb2, обуславливающих аутосомно-рецессивную глухоту 1а типа // 2688180

Способ определения производных катехоламинов в моче // 2688184

Изобретение относится к способу определения производных катехоламинов в биологической жидкости (моче), который может найти применение в клинической диагностике. Способ определения производных катехоламинов в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии отличается тем, что пробоподготовку образца осуществляют, пропуская образец исследуемой мочи через патрон для твердофазной экстракции ISOLUTE SCX, добавляют раствор 9-флуоренил-метоксикарбонил хлорида и выдерживают 20 минут при комнатной температуре, а затем смывают 5% раствором ацетата аммония в метаноле, далее полученный раствор анализируют УВЭЖХ, в качестве элюента используют двухкомпонентную систему, ацетонитрил: 0,1% муравьиная кислота, при скорости потока 0.45 мл/мин. Детектирование производных катехоламинов проводят с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра с нагреваемым источником электрораспылительной ионизации. Изобретение обеспечивает упрощение способа, сокращение времени анализа и снижение трудоемкости без потери в эффективности и селективности. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ выявления риска нарушения функционального состояния щитовидной железы у коренного и местного населения арктической зоны российской федерации // 2688207

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ выявления риска нарушения функционального состояния щитовидной железы у коренного малочисленного народа - коми и ненцев и местного европеоидного населения - русских, проживающих в Арктической зоне Российской Федерации, в период увеличения продолжительности светового дня, а именно с февраля по апрель, включающий определение в крови обследуемых людей зрелого возраста, а именно мужчин в возрасте от 22 до 60 лет и женщин в возрасте от 21 до 55 лет содержания тиреотропного гормона (ТТГ), свободного тироксина (сТ4) и свободного трийодтиронина (сТ3) и расчет, на основании полученных данных, интегрального тиреоидного индекса (ИТИ) по формуле ИТИ=(сТ3+сТ4)/ТТГ и, при выявлении отклонения, у коренных малочисленных народов - коми и ненцев ИТИ от значений 6,3-13,0, а у местного европеоидного населения – русских, проживающих в данной зоне, не менее чем в 3 поколениях, ИТИ от значений 8,9-19,6 свидетельствует о риске возникновения нарушений функционального состояния щитовидной железы. Изобретение обеспечивает своевременное выявление и правильную интерпретация полученных данных в зависимости от возрастной и этнической принадлежности обследуемых лиц, что способствует сохранению здоровья трудоспособного населения Арктической зоны Российской Федерации.