Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам



Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам
Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам
Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам
Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам
Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам
G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2688165:

Федеральное казенное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и предназначено для лабораторных или экспериментальных исследований при изучении антибиотикочувствительности холерных вибрионов. Для повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам используют средство, снижающее экспрессию генов к антибиотикорезитентности. В качестве экспрессирующего средства применяют диклофенак в количестве 500 мг/л. Использование изобретения позволяет повысить чувствительность холерных вибрионов к антибактериальным препаратам при их совместном применении с диклофенаком в отношении антибиотикорезистентных штаммов холерных вибрионов in vitro и vivo. 4 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии и может быть использовано в лабораторных или экспериментальных исследованиях при изучении антибиотикочувствительности холерных вибрионов.

В основе лечения холеры лежит патогенетическая терапия. Наряду с этим, использование антибактериальных препаратов позволяет сократить продолжительность заболевания, уменьшить объемы регидратационной терапии, предупредить формирование вибриононосительства. В инструктивно-методических документах (1-6) для лечения и профилактики холеры рекомендуется использовать фуразолидон, триметоприм / сульфаметоксазол, эритромицин, хлорамфеникол, фторхинолоны (ципрофлоксацин, офлоксацин, пефлоксацин, норфлоксацин, ломефлоксацин (с 18 лет)), тетрациклин и доксициклин (у лиц старше 8 лет), рифампицин, канамицин.

Однако, в настоящее время повсеместно распространены штаммы Vibrio cholerae, устойчивые к вышеперечисленным препаратам и обладающие множественной антибиотикорезистентностью. Последняя резко ограничивает выбор эффективных средств этиотропной терапии холеры и требует поиска веществ, повышающих антибиотикочувствительность возбудителя.

Известен способ преодоления лекарственной устойчивости бактерий (7), заключающийся в применении антибиотиков в комбинации с ингибиторами бактериальных ферментов: клавулановая кислота (клавуланат), сульбактам и тазобактам, на их основе созданы комбинированные препараты, содержащие аминопенициллиновый или цефалоспориновый антибиотик и один из ингибиторов бета-лактамаз (амоксициллин/клавуланат, ампициллин/ сульбактам, цефоперазон/ сульбактам, тикарциллин / клавуланат).

Недостатком данного способа является то, что указанные комбинации препаратов преодолевают резистентность микробов, обусловленную только выработкой бета-лактамаз.

Известен способ повышения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (8), основанный на воздействии препарата бактериального происхождения. В качестве активного вещества, оказывающего одновременно бактерицидное, противовоспалительное и

иммуностимулирующее действие, используют водный раствор пиластина. Однако использование пиластина может привести к развитию аллергических реакций.

Известен способ преодоления лекарственной устойчивости бактерий, включающий комбинированное применение двух антибиотиков с различным механизмом действия: пенициллина и стрептомицина, гентамицина и ампициллина (9).

Недостаток этого способа - ограниченный спектр активности данных комбинаций в отношении антибиотикорезистентных штаммов V. cholerae.

За прототип выбран способ повышения антибиотикочувствительности микроорганизмов, включающий комбинированное воздействие антибактериального препарата и нестероидного противовоспалительного средства диклофенака в субингибирующей концентрации (10)

Недостатком этого способа является использование диклофенака в концентрации 80 мг/л, что не обеспечивает статистически значимое повышение антибиотикочувствительности.

Техническим результатом предполагаемого изобретения является разработка нового эффективного способа, позволяющего повысить чувствительность холерных вибрионов к антибактериальным препаратам при их совместном применении с диклофенаком в отношении антибиотикорезистентных штаммов холерных вибрионов Эль Top in vitro и vivo.

Технический результат достигается за счет того, что в способе повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам, включающем использование препаратов снижающих экспрессию генов антибиотикорезитентности, в качестве экспрессирующего препарата, применяют диклофенак в количестве 500 мг/л, при этом исследования осуществляют in vivo и in vitro, причем в последнем случае используют метод серийных разведений и диско- диффузионный метод, а затем проводят оценку результатов исследований, соответствующую проведенным методам.

Кроме того при методе серийных разведений готовят два ряда чашек с питательной средой Мюллера-Хинтона с двукратными разведениями выбранного антибиотика, а именно левомицетина, стрептомицина, фуразолидона - 1-2-4-8-16-32-64-128-256-512 мг/л среды; цефтриаксона - 0,5-1-2-4 мг/л среды; ципрофлоксацина - 0,0001-0,00025-0,0005-0,001-0,0025-0,005-0,01-0,025-0,05-0,1-0,25-0,5-1-2-4 мг/л среды, при этом во второй ряд чашек дополнительно вводят диклофенак в концентрации 500 мг/л, затем на все чаши засевают 0,05 мл исследуемого штамма V. cholerae из предварительно подготовленной бактериальной взвеси, содержащей 106 м.кл по оптическому стандарту мутности в количестве 5 ед., в качестве контроля используют среду Мюллера-Хинтона без антибиотика и диклофенака, посевы инкубируют при 37 С в течение 16-18 часов, учет результатов проводят по величине минимальной подавляющей концентрации (МПК), которая полностью подавляет рост культуры V. cholerae при обязательном росте бактерий на контрольных чашках, уменьшение значений МПК в присутствии диклофенака, в сравнении со значениями МПК этих препаратов без воздействия диклофенака, свидетельствует о его способности повышать чувствительность V. cholerae к антибиотикам.

При этом для диско-диффузионного метода готовят чашки с агаром Мюллера-Хинтона в два ряда, в один из которых добавляют 500 мг/л диклофенака, затем на поверхность агара засевают бактерии исследуемых штаммов V.cholerae из предварительно подготовленной суспензии, содержащей n×106 м.кл/мл посев производят в объеме 0,2-0,3 мл, равномерно распределяя шпателем, после впитывания суспензии в агар на его поверхность накладывают диски с отобранным антибиотиком, а на контрольные чашки с 500 мг/л диклофенака и без него диски не накладывают, посевы инкубируют в течение 16-18 часов при 37°C, оценку результатов проводят визуально по размеру зон подавления роста бактерий на среде, содержащей диклофенак или без него.

Для проведения in vivo белых мышей массой 18-20 г. заражают внутрибрюшинно взвесью 18 часовой агаровой культуры 37°С холерного вибриона в 0,3% агаризованном 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 108 м.кл в объеме 0,2 мл, лечение антибактериальными препаратами и диклофенаком начинают сразу после заражения и проводят по отдельности либо одновременно в течение 3-х дней (один раз в сутки) в дозах, соответствующих среднесуточным человекодозам, а именно диклофенаком в дозе 0,25 мг/мышь/сут, ципрофлоксацином - 2,0 мг/мышь/сут, стрептомицином - 2,0 мг/мышь/сут, цефтриаксоном 10,0 мг/мышь/сут, фуразолидоном - 4,0 мг/мышь/сут, левомицетином - 10,0 мг/мышь/сут, наблюдают животных в течение 10 суток, результаты оценивают по числу выживших животных, выраженному в процентах.

Предварительную подготовку при методе серийных разведений исследуемых штаммов проводят по следующей технологии: готовят бактериальную взвесь из 18 часовой агаровой культуры V. cholerae, выращенной на агаре Мартена при рН 7,6 затем готовят 1 млрд. взвесь по отраслевому стандарту мутности, для этого в стерильной бактериологической пробирке суспендируют культуру в 5 мл физиологического раствора.

Способ осуществляется следующим образом

В работе используют 4 штамма V. cholerae El Tor: 19191, 18826, 19242, 19667. Все штаммы получены из музея живых культур ФКУЗ Ростовского-на-Дону противочумного института Роспотребнадзора, где они хранятся в лиофилизированном состоянии.

Культуры выращивают на среде Мюллера-Хинтона (Himedia, Индия).

В исследовании использован диклофенак (производства ООО «Хемофарм», Россия).

Определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) диклофенака проводят методом двукратных серийных разведений этого препарата в плотной питательной среде (агар Мюллера-Хинтона). МПК определяют по минимальной концентрации вещества, подавляющей рост микробов.

За субингибирующую дозу принимают максимальную концентрацию диклофенака, не приводящую к подавлению роста бактерий исследуемых штаммов. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч. Учет результатов проводят при наличии роста культуры на контрольных чашках (без диклофенака).

Способ реализуют путем совместного действия на штаммы V. cholerae, в том числе антибиотикоустойчивые, диклофенака в концентрации 500 мг/л и двукратных разведений антибактериальных препаратов.

Способ повышения чувствительности V. cholerae к антибактериальным препаратам реализуется по общепринятой методике определения чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций к антибактериальным препаратам методом серийных разведений в плотной питательной среде или диско-диффузионным методом в соответствии с МУК 4.2.2495-09 (11). Отличием является добавление в среды с антибактериальными препаратами раствора диклофенака до конечной концентрации 500 мг/л

В основу заявленного способа положено обнаружение повышения чувствительности к антибактериальным препаратам V. cholerae, в том числе антибиотикоустойчивых штаммов, при совместном действии антибиотика и диклофенака. Данный эффект связан со способностью диклофенака снижать экспрессию бактериальных генов антибиотикорезистентности (10).

1. Метод серийных разведений в плотной питательной среде.

1.1 Подготовка чашек Петри с питательной средой.

Для метода серийных разведений в плотной питательной среде готовят два ряда чашек с питательной средой Мюллера-Хинтона: 1-й ряд содержит двукратные разведения исследуемого антибиотика (левомицетина, стрептомицина, фуразолидона - 1-2-4-8-16-32-64-128-256-512 мг/л среды; цефтриаксона - 0,5-1-2-4 мг/л среды; ципрофлоксацина - 0,0001-0,00025-0,0005-0,001-0,0025-0,005-0,01-0,025-0,05-0,1-0,25-0,5-1-2-4 мг/л среды). Параллельно готовят такой же ряд чашек, но в среду дополнительно вводят диклофенак в концентрации 500 мг/л.

1.2 Подготовка культуры

Из 18 часовой агаровой культуры V. cholerae, выращенной на агаре Мартена (рН 7,6±0,1) либо щелочном агаре (рН 7,8±0,1), готовят 1 млрд. взвесь по отраслевому стандарту мутности ФГБУ «НЦЭСМП» (ОСО-42-28-86). Для этого в стерильной бактериологической пробирке суспендируют культуру в 5 мл физиологического раствора.

На чашки засевают по 0,05 мл (капля) исследуемого штамма из бактериальной взвеси, содержащей 106 м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 5 ед. либо используют для этого штамп-репликатор (при большом количестве исследуемых культур). В качестве контроля используют среду Мюллера-Хинтона (без антибиотика и диклофенака). Посевы инкубируют при 37°С в течение 16-18 ч. Результаты учитывают по величине МПК (минимальная подавляющая концентрация) при обязательном росте бактерий на контрольных чашках.

1.3 Учет результатов.

Результат учитывают по величине минимальной подавляющей концентрации (МПК) антибактериального препарата, которая полностью подавляет рост культуры V. cholerae. Уменьшение значений МПК антибактериальных препаратов в присутствии диклофенака, в сравнении со значениями МПК этих препаратов без воздействия диклофенака, свидетельствуют о его способности повышать чувствительность V. cholerae к антибиотикам.

2. Диско-диффузонный метод.

2.1 Подготовка сред.

Для диско-диффузионного метода готовят чашки с агаром Мюллера-Хинтона в два ряда, в один из которых добавляют 500 мг/л диклофенака,

2.2 Подготовка культуры.

Для определения уровня устойчивости исследуемого штамма Vibrio cholerae готовят суспензию, соответствующую n×109 м.кл./мл по оптическому стандарту мутности ФГБУ «НЦЭСМП» (ОСО-42-28-86). Из суспензии n×107 м.кл./мл производят посев в объеме 0,2-0,3 мл, равномерно распределяя шпателем. После впитывания суспензии в агар на его поверхность накладывают диски с левомицетином, цефтриаксоном, ципрофлоксацинолл, стрептомицином, фуразолидоном. На контрольные чашки с 500 мг/л диклофенака и без него диски не накладывают. Посевы инкубируют в течение 16-18 часов при 37°С, оценку результатов проводят визуально по размеру зон подавления роста бактерий на среде, содержащей диклофенак или без него.

Статистическую обработку полученных результатов проводят с использованием парного t-критерия Стьюдента для зависимых совокупностей (12).

Варианты примеров, проведенных in vitro и in vivo подтверждающих возможность использования диклофенака для повышения

чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам. Пример 1.

Изучены значения МПК антибактериальных препаратов в присутствии диклофенака (500 мг/л) и без него в отношении 4 клинических изолятов V. cholerae El Tor: 19191, 18826, 19242, 19667, полученных из музея живых культур ФКУЗ Ростовского-на-Дону противочумного института Роспотребнадзора.

Таким образом, в присутствии диклофенака в отношении штаммов V. cholerae El Tor наблюдают снижение значений МПК в 2-4 раза левомицетина, ципрофлоксацина, фуразолидона, триметоприма/ сульфаметоксазола.

Пример 2.

Проверяют действие диклофенака на антибиотикочувствительность штаммов V. cholerae El Tor 18826, 19667, 19242, 19191 диско-диффузионным методом (таблица 2).

Результаты учитывают по увеличению диаметров зон задержки роста V. cholerae вокруг дисков с антибиотиками на среде с диклофенаком (500 мг/л) в сравнении с диаметрами зон задержки роста вокруг таких же дисков с антибиотиками на среде, не содержащей диклофенак. Достоверность различий полученных результатов определяют с использованием парного t-критерия Стьюдента для зависимых совокупностей (12).

В сравнении с диаметрами зон задержки роста вокруг дисков с антибиотиками (левомицетином, цефтриаксоном, ципрофлоксацином, стрептомицином, фуразолидоном) на среде без диклофенака (500 мг/л), наблюдается достоверное увеличение диаметров зон задержки роста вокруг дисков с этими же антибиотиками в отношении всех изученных штаммов V. cholerae El Tor (18826, 19667, 19242, 19191) на среде, содержащей диклофенак (500 мг/л).

Пример 3.

Для сравнительной оценки эффективности антибактериальных препаратов, действующих самостоятельно, а так же совестно с диклофенаком, в опытах in vivo используют модель генерализованной формы холеры у беспородных белых мышей массой 18-20 г, которых заражают с помощью шприца внутрибрюшинно взвесью 18-часовой агаровой культуры (37°С) холерного вибриона в 0,3% агаризованном 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 108 м.к. в объеме 0,2 мл. Диклофенак и антибиотики вводят перорально каплями (0.05 мл), для этого таблетки растирают в ступке и смешивают с растительным маслом до требуемой концентрации. Препараты вводимые внутримышечно разводят физ. раствором до требуемой концентрации (см. таблицу 3).

Для исследования проводят три схемы лечения:

1) применяют диклофенак в дозе 0,25 мг/мышь/сут

2) антибиотик в расчетной дозе (см.таблицу 3).

3) -антибиотик плюс диклофенак (в тех же дозах).

Лечение антибактериальными препаратами и диклофенаком по отдельности либо одновременно антибактериальными препаратами и диклофенаком начинают сразу после заражения и проводят в течение 3-х дней, один раз в сутки, в дозах, рассчитанных по формуле J.E. Paget, J.M. Barnes (13), исходя из среднесуточных человекодоз:

где,

Дч(мг) - суточная доза для человека в мг;

Дм (мг/мышь) - суточная доза для мышей в мг/мышь;

50 - количество мышиных доз на 1 кг массы тела животного;

70 - масса тела человека;

Км - коэффициент для мышей (=3);

Кч - коэффициент для человека (=37).

Проводят не менее двух опытов при числе животных в группе не менее 10. Наблюдают за животными в течение 10 дней. Осуществляют бактериологический контроль заражения и эффективности лечения. Опыт учитывают по числу выживших животных, выраженному в процентах, при 100% гибели контрольных (нелеченых) животных. Для статистической обработки данных по сравнительному изучению эффективности антибактериальных препаратов использовали таблицы А.Я. Боярского (1955), вычисляя доверительный интервал I95 для р=0,05 для группы белых мышей не менее 20 для каждого препарата [14].

Из таблицы 3 видно, что при лечении животных только диклофенаком в дозе 0,25 мг/мышь/сут, либо только ципрофлоксацином - 2,0 мг/мышь/сут, или стрептомицином - 2,0 мг/мышь/сут, или цефтриаксоном 10,0 мг/мышь/сут, или фуразолидоном - 4,0 мг/мышь/сут, или левомицетином - 10,0 мг/мышь/сут, их выживаемость составила 50% и менее. При одновременном использовании таких же доз ципрофлоксацина, стрептомицина, цефтриаксона, фуразолидона, левомицетина и диклофенака, процент выживших белых мышей составил 80-100%, что свидетельствует о повышении эффективности антибактериальных препаратов при совместном действии с диклофенаком.

Использование предполагаемого изобретения позволяет при совместном действии антибиотика и диклофенака, повышать эффективность антибактериальных препаратов за счет повышения их чувствительности в отношении антибиотикорезистентных штаммов холерных вибрионов Эль Тор в опытах in vitro и in vivo.

Источники информации

1. Организация и проведение первичных противоэпидемических мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания инфекционными болезнями, вызывающими чрезвычайные ситуации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения. МУК 3.4.2552-09.

2. Стандарт специализированной медицинской помощи детям при холере легкой степени тяжести. Приложение к приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 9 ноября 2012 г. N 809н.

3. Стандарт специализированной медицинской помощи детям при холере средней степени тяжести. Приложение к приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 9 ноября 2012 г. N 808н.

4. Стандарт специализированной медицинской помощи детям при холере тяжелой степени тяжести. Приложение к приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 9 ноября 2012 г. N 810н.

5. Клинические рекомендации (протокол лечения) оказания медицинской помощи детям, больным холерой ФГБУ НИИДИ ФМБА России. Утверждено на заседании Профильной комиссии 9 октября 2015 г.

6. Клинический протокол диагностики и лечения. Холера. Одобрено Объединенной комиссией по качеству медицинских услуг Министерства здравоохранения и социального развития Республики Казахстан от «16» августа 2016 года. Протокол №9.

7. Friese S. Prophylaxin in gynaecological surgery: a prospective randomized comparision between single dose profilaxis with amoxicillin clavulanate and the combination of cefuroxime and metronidazole. // Antimicrob. Chemother. - 1989. - V.24, Suppl. В. - P. 213-6.

8. Патент RU на изобретение №2052198. Анисимова Т.И., Попова А.Е., Наумов А.В., Шведун Г.П., Майскова Т.С., Попов В.И., Никитина Г.А., Кривошеев В.А. Способ повышения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.

9. Навашин С.М. и Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. Справочник., 4-е изд., перераб. и доп., М., Медицина, 2002, 496 с.

10. Riordan J.Т., Dupre J M., Cantore-Matyi S.A., Kumar-Singh A., Song Y., Zaman Sh., Horan S., Helal N.S., Nagarajan V., Elasri M.O., Wilkinson B.J., Gustafson J.E. Alterations in the transcriptome and antibiotic susceptibility of Staphylococcus aureus grown in the presence of diclofenac // Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2011; 10: 30.

11. Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чума, сибирская язва, холера, туляремия, бруцеллез, сап, мелиоидоз) к антибактериальным препаратам МУК 4.2.2495-09. - М., 2009. - 59 с.

12. http://www.medstatistic.ru/calculators/calcpars.html

13. Paget J.E., Barnes Y.M. Toxicity tests // Evaluation of drug activities pharmacometric. - London, 1964. - Vol.1. - P. 135-167.

14. Боярский А.Я. Статистические методы в экспериментальных медицинских исследованиях. - М.: Медицина, 1955. - 262 с.

1. Способ повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам, включающий использование средств снижающих экспрессию генов к антибиотикорезитентности, отличающийся тем, что в качестве экспрессирующего средства, применяют диклофенак в количестве 500 мг/л, при этом исследования осуществляют in vivo и in vitro, причем в последнем случае используют метод серийных разведений и диско-диффузионный метод, а затем проводят оценку результатов исследований, соответствующую проведенным методам.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при методе серийных разведений готовят два ряда чашек с питательной средой Мюллера-Хинтона с двукратными разведениями выбранного антибиотика, а именно левомицетина, стрептомицина, фуразолидона - 1-2-4-8-16-32-64-128-256-512 мг/л среды; цефтриаксона - 0,5-1-2-4 мг/л среды; ципрофлоксацина - 0,0001-0,00025-0,0005-0,001-0,0025-0,005-0,01-0,025-0,05-0,1-0,25-0,5-1-2-4 мг/л среды, при этом во второй ряд чашек дополнительно вводят диклофенак в концентрации 500 мг/л, затем на все чаши засевают 0,05 мл исследуемого штамма V.cholerae из предварительно подготовленной бактериальной взвеси, содержащей 106 м.кл по оптическому стандарту мутности в количестве 5 ед., в качестве контроля используют среду Мюллера-Хинтона без антибиотика и диклофенака, посевы инкубируют при 37°С в течение 16-18 часов, учет результатов проводят по величине минимальной подавляющей концентрации (МПК), которая полностью подавляет рост культуры V. cholerae при обязательном росте бактерий на контрольных чашках, уменьшение значений МПК в присутствии диклофенака, в сравнении со значениями МПК этих препаратов без воздействия диклофенака, свидетельствует о его способности повышать чувствительность V.cholerae к антибиотикам.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для диско-диффузионного метода готовят чашки с агаром Мюллера-Хинтона в два ряда, в один из которых добавляют 500 мг/л диклофенака, затем на поверхность агара засевают бактерии исследуемых штаммов V.cholerae из предварительно подготовленной суспензии, содержащей n×1O7 м.кл/мл посев производят в объеме 0,2-0,3 мл, равномерно распределяя шпателем, после впитывания суспензии в агар на его поверхность накладывают диски с отобранным антибиотиком, а на контрольные чашки с 500 мг/л диклофенака и без него диски не накладывают, посевы инкубируют в течение 16-18 часов при 37°С, оценку результатов проводят визуально по размеру зон подавления роста бактерий на среде, содержащей диклофенак или без него.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для проведения in vivo белых мышей массой 18-20 г. заражают внутрибрюшинно взвесью 18 часовой агаровой культуры 37°С холерного вибриона в 0,3% агаризованном 0,9% растворе хлорида натрия в дозе 108 м.кл в объеме 0,2 мл, лечение антибактериальными препаратами и диклофенаком начинают сразу после заражения и проводят по отдельности либо одновременно в течение 3-х дней, дин раз в сутки, в дозах соответствующих среднесуточным человекодозам, а именно диклофенаком в дозе 0,25 мг/ мышь/ сут, ципрофлоксацином - 2,0 мг/ мышь/ сут, стрептомицином - 2,0 мг/ мышь/ сут, цефтриаксоном 10,0 мг/ мышь/ сут, фуразолидоном - 4,0 мг/ мышь/ сут, левомицетином - 10,0 мг/ мышь/ сут, наблюдают животных в течение 10 суток, результаты оценивают по числу выживших животных, выраженному в процентах.

5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что предварительную подготовку исследуемых штаммов проводят по следующей технологии: из 18 часовой агаровой культуры V. cholerae, выращенной на агаре Мартена при рН 7,6 готовят 1 млрд. взвесь по отраслевому стандарту мутности, для этого в стерильной бактериологической пробирке суспендируют культуру в 5 мл физиологического раствора.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для оценки угрозы развития гипоксии новорожденных при реактивации цитомегаловирусной инфекции у матери в третьем триместре.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано в медицине и диагностике состояний у млекопитающего, характеризующихся гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано в медицине и диагностике состояний у млекопитающего, характеризующихся гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1.

Изобретение относится к портативным измерителям концентрации аналита в крови с использованием тест-полоски. Измеритель аналита содержит: отверстие порта для полоски, выполненное с возможностью принимать тест-полоску, причем указанное отверстие проходит до соединителя порта для полоски, который содержит: первый контакт для обнаружения цифрового сигнала обнаружения полоски, когда тест-полоску вставляют в отверстие порта для полоски; и второй контакт для обнаружения цифрового сигнала обнаружения образца, когда образец наносят на вставленную тест-полоску, а также -дисплей, и цепь управления, электрически соединенную с первым и вторым контактами.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, функциональной диагностике, сосудистой хирургии, и может быть использовано при проведении диагностики степени тяжести ишемического процесса центральной гемодинамической системы (ЦГС).

Изобретение относится к области лабораторной диагностики, медицинской иммунологии и микробиологии и предназначено для определения общей антимикробной активности и совокупной активности антимикробных пептидов (АМП) в клинических образцах сыворотки крови.

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и предназначено для прогнозирования течения репаративного процесса лапаротомной раны при механической желтухе неопухолевого происхождения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к психиатрии, и представляет собой способ прогнозирования течения шизофрении у мужчин с приступообразными эндогенными психозами, манифестирующими в возрасте от 18 до 25 лет, включающий оценку уровня функционирования больного в период, предшествующий началу заболевания, по шкале преморбидного функционирования (PAS), отличающийся тем, что при оценке преморбидного функционирования (PAS) в диапазоне от 0,23 до 0,5 баллов и выше у больного отбирают биологический материал, выделяют из него ДНК, определяют варианты полиморфных локусов 5-HTTLPR гена переносчика серотонина, Val66Met гена нейротрофического фактора головного мозга (BDNF), Т102С гена рецептора серотонина типа 2А (5-HTR2A) и по комбинации вариантов генов прогнозируют течение шизофрении, при этом при наличии в комбинации варианта LL (5-HTTLPR), или Met (Val66Met), или СС (Т102С) прогнозируют неблагоприятное, а при наличии комбинации SValValT - благоприятное течение шизофрении.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу изготовления эритроцитарного диагностикума для диагностики пуллороза-тифа птиц. Способ включает получение бактериальной массы Salmonella gallinarum pullorum, выделение из нее антигенной фракции, Обработку бактериальной массы поверхностно-активным веществом с добавлением соды или щелочи в дистиллированной воде при 93-96°C с дальнейшей сенсебилизацией формалинизированных эритроцитов, их очисткой и получением целевого продукта в виде 10%-ной суспензии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии и профилактической медицине и раскрывает cпособ определения предрасположенности к развитию осложнений заболеваний сердечно-сосудистой системы при экстремальных изменениях климатических условий.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и диетологии, и касается коррекции пресаркопении или саркопении у пациента с адекватным уровнем потребления основных нутриентов, получающего лечение программным гемодиализом.

Изобретение относится к биохимии и медицине и представляет собой способ профилактики или лечения инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, включающий введение субъекту, имеющему или обладающему риском наличия инфекции, связанной с вирусом гриппа A H7N9, терапевтически эффективного количества антитела, при этом антитело включает три гипервариабельных участка тяжелой цепи (HVR-H1, HVR-H2 и HVR-H3) и три гипервариабельных участка легкой цепи (HVR-L1, HVR-L2 и HVR-L3), при этом (a) HVR-H1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56; (b) HVR-H2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57; (c) HVR-H3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58; (d) HVR-L1 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59; (e) HVR-L2 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60; и (f) HVR-L3 включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61.
Описан способ получения гранул с энтеросолюбильным покрытием, содержащих ингибитор протонного насоса с бензимидазоловой структурой, выбранный из омепразола, эзомепразола, ланзопразола, пантопразола и рабепразола, и используемых для приготовления фармацевтических композиций из множества частиц для перорального введения.

Изобретение относится к медицине, в частности к пролипосомной фармацевтической депо-композиции, способу ее получения, пролипосомному неводному базовому составу, способу его получения, а также наборам для введения гидрофобного активного фармацевтического ингредиента.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для увеличения скорости метаболизма алкоголя в организме человека, содержащую L-аргинин, L-глутаминовую кислоту, L-тирозин, L-фенилаланин, витамин В1, витамин В2, витамин В3, витамин В5, витамин В6, витамин В7, витамин В9, витамин В12, холин, инозит, пара-аминобензойную кислоту, экстракт корня женьшеня, натрий, хлорид, калий, кальций, магний, цинк, железо, марганец, фосфор, витамин D, витамин С, причем компоненты в композиции находятся в определенных соотношениях на 100 г композиции.

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для лечения артрита. Для этого вводят композицию с замедленным высвобождением, включающую липидную массу, содержащую смесь первого фосфолипида, второго фосфолипида и холестерина, в которой первый фосфолипид DOPC, РОРС, SPC или EPC, второй фосфолипид PEG-DSPE или DOPG и холестерин присутствует в количестве от 10 до 33 мол.% относительно липидной массы; и одно или несколько терапевтических средств для лечения артрита, при этом композиция с замедленным высвобождением является вводимой внутрисуставно.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии. Для лечения патологии суммарной слезопродукции у пациентов, страдающих ревматоидным артритом, проводят базовую терапию ревматоидного артрита с определением суммарной слезопродукции, используя пробу Ширмера.

Изобретение относится к покрытой кишечнорастворимым покрытием таблетке для высвобождения лекарственного средства в нижних отделах желудочно-кишечного тракта. Таблетка содержит (А) сердцевину, содержащую лекарственный ингредиент и обладающую массой 1000 мг или более; (В) покрывающий слой, содержащий водорастворимый полимер, формируемый на поверхности сердцевины; (С) слой с кишечнорастворимым покрытием, который растворяется при pH 7 или более и который формируют на поверхности покрывающего слоя, где суммарное содержание количества полимера в покрывающем слое (В) и количество полимера в покрывающем слое (С) составляет от 10 до 18 мг/см2, количество полимера в покрывающем слое (В) составляет от 8 до 12 мг/см2 и количество полимера в кишечнорастворимом слое (С) составляет от 3 до 6 мг/см2, где водорастворимым полимером являются простые водорастворимые эфиры целлюлозы, полиэтиленгликоль, желатин, соли альгиновой кислоты, декстрин и водорастворимые производные поливинилового спирта и их смесь, где лекарственное средство представляет собой терапевтическое средство от заболевания толстой кишки.
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции и ее применению для лечения боли в суставах, мышцах, сухожилиях или связках и воспаления ревматического или травматического происхождения в форме стабильного водного раствора для инъекций, содержащей натриевую соль диклофенака и тиоколхикозид в качестве активных ингредиентов и трет-бутилгидроксианизол в качестве стабилизатора.

Изобретение относится к соединению общей формулы (I): где R1 представляет собой C1-6алкильную группу, C1-6алкоксиC1-6алкильную группу, C3-6циклоалкильную группу или C3-6циклоалкилC1-6алкильную группу, R2 представляет собой атом водорода или группу галогенов, R3 представляет собой атом водорода, группу галогенов, галогенC1-6алкильную группу, галогенC1-6алкоксигруппу, насыщенную C1-5циклическую аминогруппу, C1-6диалкиламиногруппу, C3-6циклоалкилC1-6алкоксигруппу или C1-6алкоксигруппу, A представляет собой C3-6циклоалкильное кольцо, X представляет собой CH или N, Y представляет собой CH или N, Z представляет собой CH или N и n равен целому числу, выбранному из 1, 2, 3 и 4, или его фармацевтически приемлемой соли или гидрату соединения или его фармацевтически приемлемой соли, которые применяют для предупреждения или лечения гиперфосфатемии.
Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой способ обесцвечивания волос с последующим окрашиванием, по которому предварительно обрабатывают волосы теплой водой комфортной температуры для раскрытия чешуек волос и пропитки волос; затем наносят обесцвечивающую пасту по всей длине влажных волос, при этом при нанесении обесцвечивающей пасты волосы должны быть всегда пропитаны теплой водой; периодически прочесывают волосы расческой, выдерживают обесцвечивающую пасту на пропитанных водой волосах до достижения желаемого фона осветления, после чего волосы моют и окрашивают.

Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской микробиологии, и предназначено для лабораторных или экспериментальных исследований при изучении антибиотикочувствительности холерных вибрионов. Для повышения чувствительности холерных вибрионов к антибактериальным препаратам используют средство, снижающее экспрессию генов к антибиотикорезитентности. В качестве экспрессирующего средства применяют диклофенак в количестве 500 мгл. Использование изобретения позволяет повысить чувствительность холерных вибрионов к антибактериальным препаратам при их совместном применении с диклофенаком в отношении антибиотикорезистентных штаммов холерных вибрионов in vitro и vivo. 4 з.п. ф-лы, 3 табл., 3 пр.

Наверх