Способ регистрации изменения поверхностного заряда эритроцитов

Авторы патента:

Самоделкин Александр Геннадьевич (RU)

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2688178:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия (ФГБОУ ВО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения изменения поверхностного заряда эритроцитов у пациентов. Для этого отбирают образец крови у здоровых доноров и больных. После чего из крови выделяют эритроциты и проводят их инкубирование с катионным красителем. В качестве красителя используют акридиновый оранжевый. При этом краситель инкубируют с эритроцитами при 37°С в течение 30 минут. Определяют оптическую плотность раствора при 412 нм до и после инкубации с эритроцитами. Поверхностный заряд рассчитывают по количеству связанного красителя. Определяют изменение поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров. Изобретение позволяет определить изменение поверхностного заряда эритроцитов у пациентов. 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследований.

Известен способ определения поверхностного отрицательного заряда эритроцитов путем измерения их электрофоретической подвижности.

К недостаткам известного способа следует отнести сравнительную трудоемкость определения изменения поверхностного заряда эритроцитов, труднодоступность специальных приборов.

Известен также способ определения изменения поверхностного заряда эритроцитов (Шереметьев Ю.А., Макин Г.И., Суслов Ф.Ю. Способ регистрации изменения поверхностного заряда эритроцитов №2027188, 1995) путем их выделения из крови и регистрации агрегации, индуцированной лантаном.

В качестве прототипа выбран способ определения изменения поверхностного заряда эритроцитов, включающий забор крови, выделение эритроцитов из крови, и их инкубирование с катионным красителем - альциановым голубым, при этом краситель инкубируют с эритроцитами при 37°С в течение 30 минут, определяют оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами, а изменение поверхностного заряда рассчитывают по количеству связанного красителя эритроцитами больных по сравнению с эритроцитами здоровых доноров (Klinger М., Kramarz S., Wendycz D., Kopec W. Different erythrocyte and platelet surface electric charge in various types of glomerulonephritis. Nephrol. Dial.Transplant. 1997.12.707-712).

Принцип метода основан на том, что положительно заряженный краситель связывается с отрицательно заряженной поверхностью эритроцитов. Чем меньше связалось красителя с эритроцитами, тем ниже их отрицательный заряд.

Однако альциановый голубой является дорогим и дефицитным препаратом.

Известно, что другой положительно заряженный краситель акридиновый оранжевый используется для определения нуклеиновых кислот в различных клетках. При этом окрашивание акридиновым оранжевым клеток нельзя наблюдать в световом микроскопе. Для этого требуются специальные приборы (люминисцентный микроскоп).

Задача предлагаемого изобретения - использование нового, катионного красителя, обеспечивающего определение поверхностного заряда эритроцитов.

Технический результат - определение изменения поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови у здоровых доноров и больных, выделение эритроцитов из крови и их инкубируют с акридиновым оранжевым при 37°С в течение 30 минут, определяют оптическую плотность раствора при 412 нм до и после инкубации с эритроцитами, поверхностный заряд рассчитывают по количеству связанного красителя, определяют изменение поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты после забора крови трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCI, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов и инкубируют при 37°С в течение 30 минут. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Рассчитывают количество связанного красителя с анионными участками поверхности эритроцитов по формуле:

А(%)=100-(С⋅100)/В, где А - количество связанного эритроцитами красителя (%);

В - оптическая плотность исходного раствора (в ед. экстинкции); С - оптическая плотность раствора красителя после инкубации с эритроцитами (в ед. экстинкции). По разнице между количеством связанного красителя эритроцитами здорового донора и клетками больных судят об изменении поверхностного заряда эритроцитов.

Пример 1. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов здорового донора и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Количество связанного с эритроцитами акридинового оранжевого составило 61.5%.

Пример 2. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов больного болезнью Крона и инкубируют при 37°С в течение 30 мин. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Количество связанного с эритроцитами акридинового оранжевого составило 46.2%. Поверхностный заряд эритроцитов больного с болезнью Крона снижен на 15.3%.

Пример 3. К 2 мл 0.005% раствора акридинового оранжевого, приготовленного на забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, рН 7.4), добавляют 0.05 мл отмытых эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом и инкубируют при 37°С в течение 30 минут. После этого центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 минут и определяют при 412 нм оптическую плотность раствора до и после инкубации с эритроцитами. Количество связанного с эритроцитами акридинового оранжевого составило 51.7%. Поверхностный заряд эритроцитов больного неспецифическим язвенным колитом снижен на 9.8%.

Способ определения изменения поверхностного заряда эритроцитов, включающий забор крови у здоровых доноров и больных, выделение эритроцитов из крови и их инкубирование с катионным красителем, отличающийся тем, что в качестве красителя используют акридиновый оранжевый, при этом краситель инкубируют с эритроцитами при 37°С в течение 30 минут, определяют оптическую плотность раствора при 412 нм до и после инкубации с эритроцитами, поверхностный заряд рассчитывают по количеству связанного красителя, определяют изменение поверхностного заряда эритроцитов у больных по сравнению с эритроцитами, взятыми у здоровых доноров.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования тяжелого течения диабетической полинейропатии (ДПН) и развития синдрома диабетической стопы (СДС).

Способ оценки степени тяжести хронического генерализованного пародонтита // 2687746

Способ относится к клинической медицине, а именно - к стоматологии и клинической лабораторной диагностике. Способ оценки степени тяжести хронического генерализованного пародонтита основан на цитологическом исследовании буккального (щечного) эпителия, при котором производится подсчет числа буккальных эпителиоцитов с конденсированным хроматином.

Способ дифференциальной диагностики инфекционного мононуклеоза эпштейна-барр-вирусной этиологии, острого бактериального тонзиллита и острого вирусного гепатита "в" у взрослых // 2687563

Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики инфекционного мононуклеоза Эпштейна-Барр-вирусной этиологии, острого бактериального тонзиллита и острого вирусного гепатита «В» у взрослых.

Способ определения степени риска внутриутробной инфекции плода у женщин, перенесших грипп a(h1n1) в период беременности // 2687486

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, акушерству, и может быть использовано в лабораторной диагностике для выбора тактики ведения беременности и снижения риска развития внутриутробной инфекции новорожденного.

Способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов // 2687274

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов, включающий проведение у больного конфокальной лазерной сканирующей микроскопии наиболее инфильтрированного участка кожи, выявление патоморфологических признаков и балльную оценку их степени выраженности, характеризующийся тем, что определяют F – суммарный диагностический индикатор указанных патоморфологических признаков по формуле , где p1 – эпидермальная деструкция (от 0 до 3 баллов); р2 – микроабсцессы Потрие (от 0 до 1 балла); р3 – присутствие атипичных лимфоцитов в эпидермисе (от 0 до 3 баллов); р4 – присутствие атипичных лимфоцитов в дермо-эпидермальном соединении (от 0 до 3 баллов); р5 – потеря контура сосочков (от 0 до 3 баллов); р6 – присутствие атипичных лимфоцитов в дерме (от 0 до 3 баллов); и при значении F<5,8 диагностируют хронический дерматоз, при значении 5,9≤F≤6,8 – диагноз не уточнен, а при значении F≥6,9 – грибовидный микоз.

Способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов // 2687274

Способ хранения биопсийно-операционного материала щитовидной железы // 2687251

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и гистологии, и может быть использовано для хранения биопсийно-операционного материала щитовидной железы.

Способ выявления у микроорганизмов протективного действия на молекулу гемоглобина // 2687061

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при выявлении протективного действия микроорганизмов на молекулу гемоглобина. Для этого исследуемую культуру микроорганизмов выращивают в жидкой питательной среде, отделяют супернатант от микробных клеток центрифугированием, параллельно с опытной пробой готовят контрольную пробу из жидкой питательной среды.

Способ выявления у микроорганизмов протективного действия на молекулу гемоглобина // 2687061

Способ определения нифедипина в биологическом материале // 2686741

Изобретение относится к биологии и токсикологической химии. Способ определения нифедипина в биологическом материале заключается в том, что биологический объект измельчают, двукратно по 30 минут обрабатывают порциями органического изолирующего агента, которым является ацетон, полученные органические извлечения объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют в токе воздуха, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°С до полного удаления растворителя, остаток растворяют в смеси растворителей ацетон-вода в отношении 7:3 по объему, хроматографируют в макроколонке с сорбентом «Силасорб С-18» 30 μ, элюируя смесью растворителей ацетон-вода в отношении 7:3 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют, остаток растворяют в смеси растворителей ацетонитрил-фосфатный буферный раствор с рН 9 в отношении 5:5 по объему и проводят определение методом ВЭЖХ с применением подвижной фазы ацетонитрил-фосфатный буферный раствор с рН 9 в отношении 5:5 по объему, подаваемой со скоростью 1000 мкл/мин, и УФ-детектора, регистрирующего оптическую плотность при 250 нм.

Способ прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию у больных раком предстательной железы // 2688181

Изобретение относится к области медицины, а именно - онкологии, и может быть использовано для прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию (АДТ) у больных раком предстательной железы (РПЖ). Способ включает исследование биологически активных молекул ткани опухоли с определением экспрессии AR, ERα, также учитывают возраст пациента, уровень тестостерона и простат-специфического антигена (ПСА) и рассчитывают значения дискриминантных функций Yl, Y2 по уравнениям: Y1=-33,37+1,0⋅Х1+0,01⋅Х2+0,01⋅Х3+1,08⋅Х4-0,0004 Х5 (раннее рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ в течение 12 месяцев), Y2=-59,27+1,75⋅Х1+0,03⋅Х2+0,23⋅Х3-4,02⋅Х4+0,007 Х5 (отсроченное рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ более 12 месяцев), где X1 - возраст пациента, годы, Х2 - экспрессия AR в опухоли, УЕ, Х3-экспрессия ERα в опухоли, УЕ, Х4 - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л, Х5 - содержание простат-специфического антигена (ПСА) в сыворотке крови, нг/мл. При Y1>Y2 - прогнозируют ответ на АДТ в сроки менее 12 месяцев от начала лечения, а при Y1<Y2 - более 12 месяцев от начала лечения. Использование изобретения позволяет прогнозировать сроки рецидивирования заболевания на фоне АДТ, прогнозировать ожидаемые эффекты лечения и оценить его эффективность, повысить точность и информативность диагностики. 4 табл., 2 пр.

Способ определения производных катехоламинов в моче // 2688184

Изобретение относится к способу определения производных катехоламинов в биологической жидкости (моче), который может найти применение в клинической диагностике. Способ определения производных катехоламинов в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии отличается тем, что пробоподготовку образца осуществляют, пропуская образец исследуемой мочи через патрон для твердофазной экстракции ISOLUTE SCX, добавляют раствор 9-флуоренил-метоксикарбонил хлорида и выдерживают 20 минут при комнатной температуре, а затем смывают 5% раствором ацетата аммония в метаноле, далее полученный раствор анализируют УВЭЖХ, в качестве элюента используют двухкомпонентную систему, ацетонитрил: 0,1% муравьиная кислота, при скорости потока 0.45 мл/мин. Детектирование производных катехоламинов проводят с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра с нагреваемым источником электрораспылительной ионизации. Изобретение обеспечивает упрощение способа, сокращение времени анализа и снижение трудоемкости без потери в эффективности и селективности. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у населения башкортостана // 2688208

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане. Для этого выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, осуществляют генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20. При выявлении генотипов С/Т или Т/Т полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5 или генотипа С/С полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20 прогнозируют риск развития сахарного диабета 2 типа у обследуемого. Способ обеспечивает высокую точность прогнозирования за счет оценки полиморфизмов хемокинов – специфических маркеров воспаления, прогностически значимых в определении риска развития сахарного диабета 2 типа. 1 табл., 4 пр.

Системы и способы кодирования калибровки биосенсора // 2688222

Группа изобретений относится к биосенсорам для определения концентрации аналита в пробе жидкости. Тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости содержит: сенсорную пластинку, включающую в себя зону приема жидкости и область вставки в порт; один или более контактов сенсора, расположенных в области вставки в порт; первый ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию калибровки, расположенную в первой зоне области вставки в порт; и второй ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию синхронизации, расположенную во второй зоне области вставки в порт, причем вторая зона отличается от первой зоны, так что один или более контактов сенсора расположены между первой зоной и второй зоной. При этом кодовая комбинация синхронизации соответствует кодовой комбинации калибровки таким образом, что кодовая комбинация синхронизации обеспечивает синхронизацию кодовой комбинации калибровки во время вставки области вставки в порт в приемный порт измерителя аналита, и причем один или несколько контактов сенсора выполнены с возможностью обеспечивать передачу электрических сигналов при вставке области вставки в порт в приемный порт измерителя аналита. Также раскрывается тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости, биосенсоркая система для определения концентрации аналита в биологической жидкости, а также способ определения концентрации аналита в биологической жидкости. Группа изобретений обеспечивает повышение точности и прецизионности измерений концентрации аналитов. 4 н. и 24 з.п. ф-лы, 10 ил.

Способ прогнозирования лимфогенного метастазирования при аденокарциноме толстого кишечника // 2688678

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования лимфогенного метастазирования при аденокарциноме толстого кишечника. Исследуют ткани опухоли, проводят иммуногистохимическое исследование с антителами: Rb pAb to Beclin 1 (ab62472, Abeam), Rb Anti-mTOR PAb (El8590, Bioscience), p53 Protein (Clone DO-7, monoclonal mouse, RTU, Dako), Ki67 Antigen (Clone MIB-1, monoclonal mouse, RTU, Dako), Bcl2 Oncoprotein (Clone 124, monoclonal mouse, RTU, Dako). Исследуют экспрессию указанных маркеров в опухолевой ткани по следующим параметрам: процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией белка beclin 1, процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией белка m-TOR, наличие экспрессии белка р53 в ткани опухоли, характер экспрессии белка р53 в ткани опухоли, наличие экспрессии ki67 в клетках воспалительного инфильтрата, наличие экспрессии bcl2 в клетках воспалительного инфильтрата и рассчитывают риск развития лимфогенных метастазов. Способ позволяет повысить эффективность раннего определения риска лимфогенного метастазирования. 2 пр.

Способ морфологического определения срока беременности // 2688693

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для определения срока физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре. Для этого фрагменты соскоба из полости матки фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. Полученные препараты помещают на предметный столик светового микроскопа и отбирают участки, содержащие компактный слой гравидарного эндометрия. С помощью видеокамеры, установленной на световом микроскопе, видимое поле зрения выводят на экран компьютера. Затем морфометрически определяют площади 30 или более децидуальных клеток и площади их ядер в 3-х или более полях зрения одного или нескольких препаратов. Далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле: X=К+К1 × ср.Sкл - К2 × ср.Sя, где X - срок беременности в акушерских неделях; К - коэффициент равный 3,414; К1 - коэффициент равный 0,019; cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм; К2 - коэффициент равный 0,008; ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм. Изобретение обеспечивает достоверность и объективность морфологического заключения о сроке физиологически протекавшей беременности в первом триместре в акушерских неделях. 1 табл., 2 пр.

Способ подготовки образцов костной ткани человека для исследования методом растровой электронной микроскопии // 2688944

Изобретение относится к способу подготовки образцов поствитальной или пострезекционной костной ткани человека для исследования методом растровой электронной микроскопии. Способ характеризуется тем, что образцы вырезают абразивным кругом из костной заготовки, охлажденной жидким азотом, на 5 мин помещают в ультразвуковой диспергатор с ацетоном, далее погружают в заливочную эпоксидную смолу, сушат в вакууматоре в течение 24 ч при 60°C, после высушивания шлифуют шлифовальной бумагой вначале с дисперсностью 800, затем с дисперсностью 1200, далее полируют на сукне с алмазной пастой с зернистостью порошка в пасте 6 мкм и на заключительном этапе подготовки напыляют наночастицами углерода. Достигаемый при этом технический результат заключается в получении высокой контрастности исследуемой поверхности образцов костной ткани человека как материала для исследования в растровом электронном микроскопе, без использования токсичных реагентов при простоте исполнения и снижении материальных, трудовых и временных затрат. 4 ил.

Способ прогнозирования неразвивающейся беременности // 2689165

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности. Способ прогнозирования неразвивающейся беременности включает выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала на сроке 6-10 недель беременности, проведение обратной транскрипции с получением кДНК, определение экспрессии TLR2, TLR10 и IDO с помощью количественной полимеразной цепной реакции, оценку возраста начала менархе и прогноз вероятности развития неразвивающейся беременности на основании уравнений, полученных по результатам дискриминантного анализа: где x1 – уровень экспрессии мРНК TLR2 (отн.ед.), x2 - уровень экспрессии мРНК TLR10 (отн.ед.), x3 - уровень экспрессии мРНК IDO (отн.ед.), х4 – возраст менархе, при этом, если y1 больше y2, прогнозируют высокий риск развития неразвивающейся беременности, и если y1 меньше y2, то прогнозируют нормальное течение беременности. 3 табл.

Способ исследования архитектоники структурных элементов органов у мелких животных // 2689171

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для исследования архитектоники структурных элементов глазного яблока у эмбрионов кур. Для этого глазное яблоко эмбриона фиксируют в 10% растворе формалина. Затем получают тонкие, не более 10 мкм гистологические срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином. Приклеивают срезы к предметным стеклам и заключают под покровное стекло. После чего полученные препараты подвергают микрофотографированию на 10, 15 и 20 день эмбрионального развития. Для этого зеркальный цифровой фотоаппарат закрепляют на штативе. Производят съемку и снимки обрабатывают через фоторедактирующие программы. Изобретение позволяет определить архитектонические изменения в органах мелких животных и у эмбрионов в различных возрастных периодах. 2 ил.

Способ определения оптимального криопротектора по цитохимическому показателю содержания сукцинатдегидрогеназы в лейкоцитах ауто-крови // 2689328

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения оптимального криопротектора по цитохимическому показателю содержания сукцинатдегидрогеназы в лейкоцитах аутокрови заключается в том, что у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба крови (КП) не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП), капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, из них делают тонкие мазки, высушивают на воздухе, готовят препараты по методике Нахласа в модификации Р.П. Нарциссова, лейкоциты микроскопируют в проходящем свете, проводят сравнительное исследование среднего цитохимического коэффициента (СЦК) сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов с гранулами синего цвета СДГ ОП и КП; при равности значений СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодный к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 3 пр., 1 табл.