Способ прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию у больных раком предстательной железы

Изобретение относится к области медицины, а именно - онкологии, и может быть использовано для прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию (АДТ) у больных раком предстательной железы (РПЖ). Способ включает исследование биологически активных молекул ткани опухоли с определением экспрессии AR, ERα, также учитывают возраст пациента, уровень тестостерона и простат-специфического антигена (ПСА) и рассчитывают значения дискриминантных функций Yl, Y2 по уравнениям: Y1=-33,37+1,0⋅Х1+0,01⋅Х2+0,01⋅Х3+1,08⋅Х4-0,0004 Х5 (раннее рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ в течение 12 месяцев), Y2=-59,27+1,75⋅Х1+0,03⋅Х2+0,23⋅Х3-4,02⋅Х4+0,007 Х5 (отсроченное рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ более 12 месяцев), где X1 - возраст пациента, годы, Х2 - экспрессия AR в опухоли, УЕ, Х3-экспрессия ERα в опухоли, УЕ, Х4 - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л, Х5 - содержание простат-специфического антигена (ПСА) в сыворотке крови, нг/мл. При Y1>Y2 - прогнозируют ответ на АДТ в сроки менее 12 месяцев от начала лечения, а при Y1<Y2 - более 12 месяцев от начала лечения. Использование изобретения позволяет прогнозировать сроки рецидивирования заболевания на фоне АДТ, прогнозировать ожидаемые эффекты лечения и оценить его эффективность, повысить точность и информативность диагностики. 4 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, онкологии, к способам прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию у больных раком предстательной железы и может быть использовано для определения тактики лечения пациентов с данной нозологией.

Рак предстательной железы (РПЖ) является одной из актуальных проблем современной онкологии. Это обусловлено высокими показателями прироста заболеваемости и отсутствием персонифицированных подходов к лечению, а соответственно, его недостаточной эффективностью. Согласно современным рекомендациям, андроген-депривационная терапия (АДТ) является стандартом в лечении пациентов с местно - распространенным и метастатическим РПЖ. Ответ опухоли на проводимую терапию регистрируется более чем у 90% пациентов. Однако длительность ответа при этом, составляет в среднем 12-36 мес, в дальнейшем наблюдается прогрессирование заболевания с развитием кастрационно-резистентной формы [1, 2].

На сегодняшний день рак предстательной железы представляет собой опухоль, использующую для своего развития различные механизмы. Андрогензависимый путь для данной патологии реализуется посредством активации андрогеновых рецепторов (AR) [3, 4], под воздействием дегидротестостерона и образующийся комплекс транслоцируется в ядро, взаимодействуя с ключевыми транскрипционными факторами и ДНК.

При андрогеннезависимом раке, в большей мере принимают участие ростовые и транскрипционные факторы [5]. Известно, что в ацинарных структурах нормальной ткани предстательной железы рецепторный статус характеризуется высоким содержанием AR и низким эстрогеновых рецепторов (ER). При развитии опухолевого процесса отмечается значимое увеличение экспрессии ER вместе с AR. Показано, что в процессах перехода простатической интраэпителиальной неоплазии в рак играют важную роль ERα и ERβ [6]. В настоящее время существует представление о наличии тонких взаимосвязей между AR и ER, что, в значительной мере, определяет развитие и прогрессирование РПЖ [7]. Считается, что ERα способны активировать пролиферацию опухолевых клеток при наличии мутации фосфатазы PTEN [8], стимулируя сигнальные пути AKT/m-TOR, МАРК. ERβ чаще рассматривается в качестве онкосупрессора [9, 10]. Таким образом, именно молекулярные характеристики опухоли и определяют ее биологическое поведение, ответ на терапию и исход заболевания.

В настоящее время предпринимаются попытки прогнозировать риск прогрессировала рака предстательной железы на фоне андроген-депривационной терапии.

Наиболее близким к заявляемому способу является метод прогнозирования развития ответа на андроген-депривационную терапию на основании анализа полиморфных вариантов гена HSD3B1 (1245А>С) в крови, который кодирует изоформу фермента, увеличивающего синтез дигидротестостерона из негонадных предшественников. Аллель HSD3B1 (1245С) связан с развитием резистентности к андроген-депривационной терапии (АДТ) у больных раком предстательной железы [11].

Данный подход позволяет предполагать ожидаемый ответ на лечение и выделить пациентов, у которых возможно развитие ранней резистентности к АДТ. Однако исследование генетического полиморфизма HSD3B1 (1245А>С) не отражает биологические характеристики опухоли, так как свидетельствует только о риске развития резистентности к проводимому лечению. Также данный способ не позволяет прогнозировать продолжительность ответа на АДТ.

В связи с этим необходимо решение новой технической задачи, направленной на повышение информативности предсказания ожидаемого риска раннего прогрессирования рака предстательной железы на фоне АДТ. Для этого целесообразно исследовать показатели, характеризующие молекулярные особенности опухоли.

Новый технический результат - повышение точности и информативности способа. Для достижения нового технического результата в способе прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию (АДТ) у больных раком предстательной железы (РПЖ), путем исследования ткани опухоли, определяют экспрессии AR, ERα а так же учитывают возраст пациента, уровнь тестостерона и простат-специфического антигена (ПСА) крови, рассчитывают значения дискриминантных функций Yl, Y2 по уравнениям: Y1=-33,37+1,0⋅Х1+0,01⋅Х2+0,01⋅Х3+1,08⋅Х4-0,0004 Х5 (раннее рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ в течение 12 месяцев);

Y2=-59,27+1,75⋅Х1+0,03⋅Х2+0,23⋅Х3-4,02⋅Х4+0,007 Х5 (отсроченное рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ более 12 месяцев);

где X1 - возраст пациента, годы;

Х2 - экспрессия AR в опухоли, УЕ;

Х3 - экспрессия ERα в опухоли, УЕ;

Х4 - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л;

Х5 - содержание простат-специфического антигена (ПСА) в сыворотке крови, нг/мл;

и при Y1>Y2 - прогнозируют ответ на андроген-депривационную терапию в сроки менее 12 месяцев, а при Y1<Y2 в сроки более 12 месяцев от начала лечения.

Способ осуществляют следующим образом:

Для прогнозирования времени ответа на АДТ у пациентов с РПЖ выполняют следующие манипуляции: определяют уровень простат-специфического антигена (ПСА), тестостерона в сыворотке крови, в опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии, проводят определение экспрессии AR, ERα.

Для исследования экспрессии молекулярных показателей и выделения мРНК образцы тканей помещают в раствор RNAlater (Ambion, USA) и сохраняют при температуре -80°С (после 24-часовой инкубации при +4°С). РНК выделяют с помощью набора RNeasyminiKit, содержащего ДНК-азу I (Qiagen, Germany). Для оценки количества выделенной РНК на спектрофотометре NanoDrop-2000 (ThermoScientific, USA) оценивают концентрацию и чистоту выделения РНК. Концентрация РНК составляет от 80 до 250 нг/мкл, А260/А280=1.95-2.05; А260/А230=1.90-2.31. Целостность РНК оценивают при помощи капиллярного электрофореза на приборе TapeStation (AgilentTechnologies, USA) и набора R6K ScreenTape (AgilentTechnologies, USA). RIN составляет 5.6-7.8.

Уровень экспрессии генов оценивают при помощи количественной обратно-транскриптазной ПЦР в режиме реального времени (RT-qPCR) с использованием красителя SYBR Green на амплификаторе iCycler (Bio-Rad, USA). Для получения кДНК на матрице РНК проводят реакцию обратной транскрипции с помощью набора OTm-MuLV-RH (БиоЛабмикс, Россия) со случайными гексануклеотидными праймерами в соответствии с инструкцией к набору. ПЦР ставят в трех репликах в объеме 25 мкл, содержащем 12,5 МклБиоМастерHS-qPCRSYBRBlue (БиоЛабмикс, Россия), 300 нМ прямого и обратного праймеров и 50 нгкДНК. Двухшаговая программа амплификации включает 1 цикл - 94°С, 10 мин - предварительная денатурация; 40 циклов - 1 шаг 94°С, 10 сек и 2 шаг 20 сек - при температуре 60°С. Праймеры подбирают с использованием программы VectorNTI Advance 11.5 и базы данных NCBI (http://www.ncbi.nlm. nih.gov/nuccore) (таблица 2). В качестве референсного гена используют ген «домашнего хозяйства» фермента GAPDH (glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase), и уровень экспрессии каждого целевого гена нормализуют по отношению к экспрессии GAPDH.

Определяют экспрессии AR, ERα, а так же учитывают возраст пациента, уровень тестостерона и простат-специфического антигена (ПСА) крови, рассчитывают значения дискриминантных функций Y1, Y2 по уравнениям:

Y1=-33,37+1,0⋅Х1+0,01⋅Х2+0,01⋅Х3+1,08⋅Х4-0,0004 Х5 (раннее рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ в течение 12 месяцев);

Y2=-59,27+1,75⋅Х1+0,03⋅Х2+0,23⋅Х3-4,02⋅Х4+0,007 X5 (отсроченное рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ более 12 месяцев);

где X1 - возраст пациента, годы;

Х2 - экспрессия AR в опухоли, УЕ;

Х3-экспрессия ERα в опухоли, УЕ;

Х4 - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л;

Х5 - содержание простат-специфического антигена (ПСА) в сыворотке крови, нг/мл;

и при Y1>Y2 - прогнозируют ответ на андроген-депривационную терапию в сроки менее 12 месяцев, а при Y1<Y2 в сроки более 12 месяцев от начала лечения.

Способ основан на результатах анализа данных лабораторных и клинических исследований. Информативность отобранных критериев подтверждают наличием связи экспрессии рецепторов андрогенов, эстрогенов с эффектом на андроген-депривационную терапию.

В исследование было включено 28 больных местно-распространенным и метастатическим раком предстательной железы. Всем пациентам было проведено комбинированное лечение, включающее в себя АДТ до достижения кастрационного уровня на тестостерона до 0,2 нмоль/л. В дальнейшем, при появлении у них признаков прогрессирования заболевания (рост ПСА более 4 нг/мл на фоне содержания тестостерона 0,2 нмоль/л) назначалась системная таксансодержащая полихимиотерапия. Основные клинико-морфологические параметры представлены в таблице 3. Отмечено, что пациенты в группах различались по возрасту, уровню тестостерона и содержанию ПСА. Так, больные с ответом на АДТ менее 12 месяцев и ранним рецидивированием были в 1,3 раза моложе, имели более высокий исходный уровень тестостерона (в 2 раза) и сниженное содержание ПСА (в 1,35 раза) по сравнению с больными, у которых наблюдался более длительный ответ на АДТ. При изучении молекулярных характеристик опухоли у пациентов с наличием эффекта на АДТ менее 12 месяцев выявлена высокая экспрессия AR и низкая экспрессия ERα (таблица 4).

Информативность полученных функций оценивали у 12 пациентов, не включенных в основную выборку, у которых в ткани опухоли исследовали биологически активные молекулы с определением экспрессии AR, ERα и с учетом возраста пациента, уровня тестостерона, ПСА и рассчитывают значения дискриминантных функций Y1, Y2. При Y1>Y2 прогнозируют ответ на андроген-депривационную терапию в сроки менее 12 месяцев от начала лечения, а при Y1<Y2 - ответ на АДТ составит более 12 месяцев от начала лечения. (Таблица 1).Чувствительность и специфичность полученной дискриминантной модели по оценке продолжительности эффекта на АДТ и прогнозирования раннего рецидивирования составила, соответственно, 99,5% и 91,7%, диагностическая точность -95,6%.

Таким образом, выявлена совокупность параметров, позволяющая прогнозировать сроки рецидивирования заболевания больных РПЖ на фоне АДТ. Показано, что высокая экспрессия AR на фоне низкой экспрессии ERα свойственна для пациентов, у которых эффективность АДТ продолжалась менее 12 месяцев, что характеризуется развитием прогрессированием заболевания. Выявленные факты позволяют рассматривать эти параметры в качестве дополнительных информативных маркеров, позволяющих прогнозировать ожидаемые эффекты лечения. Клинические примеры:

Пример 1.

Больной К., 41 год, на фоне полного благополучия отметил дискомфорт в области промежности, эпизоды задержки мочеиспускания. Пациент обратился в НИИ онкологии г. Томска. При дообследовании выявлено повышение цифр ПСА крови до 44 нг/мл, по результатам остеосцинтиграфии (ОСГ) определялись множественные очаги деструкции костной ткани более вероятно метастатического характера. Данных за наличие висцеральных метастазов получено не было. Выполнена промежностная, мультифокальная биопсия предстательной железы под ТРУЗИ-контролем (взято по 6 фрагментов из каждой доли). Гистологическое исследование: в обеих долях предстательной железы определяется ацинарная аденокарцинома, Глисон 9 (4+5). Было проведено исследование опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии согласно предлагаемому способу с целью определения прогноза эффективности лечения РПЖ, результаты которого показали, что уровни экспрессии рецепторов AR и ERα: они составили 192 и 0,75 УЕ соответственно. При расчете дискриминантных функций выявлено, что Y1=14,5955 и Y2=-0,1211; Y1>Y2, что свидетельствует о возможном ранней резистентности к АДТ и рецидивирования рака предстательной железы, при котором ответ на лечение будет сохраняться не более 12 месяцев. Ответ опухоли на АДТ продолжался в течении 6 месяцев. Через 6 месяцев был отмечен рост ПСА крови на фоне проводимого лечения и кастрационных значений тестостерона. Прирост показателя фиксировался каждые 2 недели, среднее значение его составило 35,1 нг/мл. Таким образом, предлагаемый способ позволил с учетом признаков прогрессирования заболевания и формирования кастрационной резистентности своевременно перевести пациента через 6 месяцев на химиотерапию препаратами таксанового ряда.

Пример 2.

В НИИ онкологии г. Томска обратился пациент М, 60 лет с жалобами на боли в костях скелета, дискомфорт и болезненность в области промежности, эпизодическую задержку мочеиспускания. При дообследовании выявлено повышение цифр ПСА крови до 55 нг/мл, по результатам ОСГ определялись множественные очаги деструкции костной ткани, более вероятно метастатического характера. Данных за висцеральные метастазы получено не было. Выполнена промежностная мультифокальная биопсия предстательной железы под ТРУЗИ-контролем. Гистологическое исследование: в обеих долях предстательной железы определялась микроацинарная светлоклеточная аденокарцинома умеренной степени дифференцировки. Глисон 5 (3+2). Было проведено исследование опухолевой ткани, полученной при выполнении диагностической биопсии согласно предлагаемому способу с целью определения прогноза эффективности лечения РПЖ, результаты которого показали, что уровни экспрессии рецепторов AR, ERα, которые составили 51 и 68 УЕ соответственно. При расчете дискриминантных функций выявлено, что Y1=31,254 и Y2=50,421; YKY2, что свидетельствовало о возможном более длительном эффекте АДТ (отсроченная резистентность к АДТ и прогрессирование РПЖ в сроки более 12 месяцев от начала проведения терапии). Ответ опухоли на АДТ регистрировался на протяжении 25 месяцев. Однако, через 2 года был отмечен рост ПСА крови на фоне проводимого лечения и кастрационных значений тестостерона (0,25 нмоль/л). Прирост показателя фиксировался каждые 2 недели, среднее его значение составило 25,7 нг/мл. По данным ОСГ были зафиксированы признаки множественного очагового поражения скелета, что свидетельствует о прогрессировании процесса. Следовательно, предлагаемый способ позволил проводить АДТ в течении 25 месяцев до прогрессирования заболевания и формирования кастрационной резистентности с дальнейшим переводом пациента на химиотерапию препаратами таксанового ряда.

Таким образом, применение предлагаемого способа может быть использовано для оценки эффективности лечения РПЖ посредством прогнозирования времени ответа на андроген-депривационную терапию у пациентов с РПЖ.

Источники информации, принятые во внимание при составлении описания:

1. Маркова АС, Поликарпова СБ, Камолов БШ, Гриднева ЯВ, Калинин СА, Петерс MB, Матвеев ВБ. Факторы прогноза общей выживаемости больных метастатическим кастрационно-резистентным раком предстательной железы. // Онкоурология. 2015; 11(2): 77-84. [MarkovaA.S., PolikarpovaS.B., KamolovB.S., GridnevaY.V., Kalinin S.A., Peters M.V., Matveev V.B. Predictors of overall survival in patients with metastatic castration-resistant prostate cancer. Cancer Urology. 2015; 11 (2):77-84. (In Russ.) DOI: 10.17650/1726-9776-2015-11-2-77-84]

2. Amiya Y, Yamada Y, Sugiura M, Sasaki M, Shima T, Suzuki N, Nakatsu H, Murakami S, Shimazaki J. Treatment of locally advanced prostate cancer (Stage T3). Jpn J ClinOncol. 2017; 47(3):257-261. doi: 10.1093/jjco/hywl86.

3. Wang Y, Kreisberg JI, Ghosh PM. Cross-talk between the androgen receptor and the phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathway in prostate cancer. CurrCancerDrugTargets. 2007 Sep; 7(6):591-604. Review.

4. AV, Moul J, Carroll PR, Sun L, Lubeck D, Chen MH. Prostate specific antigen doubling time as a surrogate end point for prostate cancer specific mortality following radical prostatectomy or radiation therapy. J Urol. 2004; 172(5 Pt 2):42-46.

5. Lonergan PE, Tindall DJ. Androgen receptor signaling in prostate cancer development and progression. J Carcinog. 2011;10:20. doi: 10.4103/1477-3163.83937. Epub 2011 Aug 23.

6. Al-MaghrabiJA, HassanTM, Abdel-MeguidTA, MosliHA. Original article Expression of Estrogen Alpha and Beta Receptors in Prostate Cancer and Hyperplasia: Immunohistochemical Analysis African Journal of Urology 1110-5704 Vol. 16, No. 3, 2010 79 79-87

7. Karamouzis MV, Papavassiliou KA, Adamopoulos C, Papavassiliou AG. Targeting Androgen/Estrogen Receptors Crosstalk in Cancer. Trends Cancer. 2016 Jan; 2(1):35-48. doi: 10.1016/j.trecan.2015.12.001. Epub 2015 Dec 31. Review

8. Takizawa I, Lawrence MG, Balanathan P, Rebello R, Pearson HB, Garg E, Pedersen J, Pouliot N, Nadon R, Watt MJ, Taylor RA, Humbert P, Topisirovic I, Larsson O, Risbridger GP, Furic L. Estrogen receptor alpha drives proliferation in PTEN-deficient prostate carcinoma by stimulating survival signaling, MYC expression and altering glucose sensitivity. Oncotarget. 2015 Jan 20; 6(2):604-16.

9. Ahmad N, Kumar R. Steroid hormone receptors in cancer development: A target for cancer therapeutics.Cancer Letters. 2011; 300:1-9.

10. Nelson AW, Tilley WD, Neal DE, Carroll JS. Estrogen receptor beta in prostate cancer: friend or foe? EndocrRelat Cancer. 2014; 21 (4):T219-34. doi: 10.1530/ERC-13-0508.

11. Hearn JWD, AbuAli G, Reichard CA, Reddy CA, Magi-Galluzzi C, Chang KH, Carlson R, Rangel L, Reagan K, Davis BJ, Karnes RJ, Kohli M, Tindall D, Klein EA, Sharifi N. HSD3B1 and resistance to androgen-deprivation therapy in prostate cancer: a retrospective, multicohort study. LancetOncol. 2016 Oct; 17(10):1435-1444. doi: 10.1016/S1470-2045(16)30227-3.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Таблица 1. Показатели, включенные в дискриминантную модель прогнозирования раннего рецидивирования больных раком предстательной железы на фоне андроген-депривационной терапии

Таблица 2. Последовательность праймеров проб исследованных генов.

Примечание: NM - номер последовательности РНК в NCBI Nucleotide Database (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore); F - прямой праймер; R - обратный праймер

Таблица 3. Клинико-морфологические характеристики пациентов с РПЖ в зависимости от эффекта АДТ

Примечание: * - значимость различий, р<0,05;

Таблица 4. Экспрессия AR, ERα, ERβ у пациентов с РПЖ в зависимости от эффекта АДТ Примечание: * - значимость различий, р<0,05;

Примечание: * - значимость различий, р<0,05;

Примечание: * - значимость различий, р<0,05;

Способ прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию (АДТ) у больных раком предстательной железы (РПЖ), путем исследования ткани опухоли, отличающийся тем, что исследуют биологически активные молекулы с определением экспрессии AR, ERα и с учитывают возраст пациента, уровень тестостерона и простат-специфического антигена (ПСА) и рассчитывают значения дискриминантных функций Y1, Y2 по уравнениям:

Y1=-33,37+1,0⋅Х1+0,01⋅Х2+0,01⋅Х3+1,08⋅Х4-0,0004 Х5 (раннее рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ в течение 12 месяцев);

Y2=-59,27+1,75⋅Х1+0,03⋅Х2+0,23⋅Х3-4,02⋅Х4+0,007 Х5 (отсроченное рецидивирование РПЖ с эффектом АДТ более 12 месяцев);

где X1 - возраст пациента, годы;

Х2 - экспрессия AR в опухоли, УЕ;

Х3 - экспрессия ERα в опухоли, УЕ;

Х4 - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмоль/л;

Х5 - содержание простат-специфического антигена (ПСА) в сыворотке крови, нг/мл;

и при Y1>Y2 - прогнозируют ответ на андрогендепривационную терапию в сроки менее 12 месяцев от начала лечения, а при Y1<Y2 - более 12 месяцев от начала лечения.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения изменения поверхностного заряда эритроцитов у пациентов.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования тяжелого течения диабетической полинейропатии (ДПН) и развития синдрома диабетической стопы (СДС).

Способ относится к клинической медицине, а именно - к стоматологии и клинической лабораторной диагностике. Способ оценки степени тяжести хронического генерализованного пародонтита основан на цитологическом исследовании буккального (щечного) эпителия, при котором производится подсчет числа буккальных эпителиоцитов с конденсированным хроматином.

Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики инфекционного мононуклеоза Эпштейна-Барр-вирусной этиологии, острого бактериального тонзиллита и острого вирусного гепатита «В» у взрослых.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, акушерству, и может быть использовано в лабораторной диагностике для выбора тактики ведения беременности и снижения риска развития внутриутробной инфекции новорожденного.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов, включающий проведение у больного конфокальной лазерной сканирующей микроскопии наиболее инфильтрированного участка кожи, выявление патоморфологических признаков и балльную оценку их степени выраженности, характеризующийся тем, что определяют F – суммарный диагностический индикатор указанных патоморфологических признаков по формуле , где p1 – эпидермальная деструкция (от 0 до 3 баллов); р2 – микроабсцессы Потрие (от 0 до 1 балла); р3 – присутствие атипичных лимфоцитов в эпидермисе (от 0 до 3 баллов); р4 – присутствие атипичных лимфоцитов в дермо-эпидермальном соединении (от 0 до 3 баллов); р5 – потеря контура сосочков (от 0 до 3 баллов); р6 – присутствие атипичных лимфоцитов в дерме (от 0 до 3 баллов); и при значении F<5,8 диагностируют хронический дерматоз, при значении 5,9≤F≤6,8 – диагноз не уточнен, а при значении F≥6,9 – грибовидный микоз.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов, включающий проведение у больного конфокальной лазерной сканирующей микроскопии наиболее инфильтрированного участка кожи, выявление патоморфологических признаков и балльную оценку их степени выраженности, характеризующийся тем, что определяют F – суммарный диагностический индикатор указанных патоморфологических признаков по формуле , где p1 – эпидермальная деструкция (от 0 до 3 баллов); р2 – микроабсцессы Потрие (от 0 до 1 балла); р3 – присутствие атипичных лимфоцитов в эпидермисе (от 0 до 3 баллов); р4 – присутствие атипичных лимфоцитов в дермо-эпидермальном соединении (от 0 до 3 баллов); р5 – потеря контура сосочков (от 0 до 3 баллов); р6 – присутствие атипичных лимфоцитов в дерме (от 0 до 3 баллов); и при значении F<5,8 диагностируют хронический дерматоз, при значении 5,9≤F≤6,8 – диагноз не уточнен, а при значении F≥6,9 – грибовидный микоз.

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и гистологии, и может быть использовано для хранения биопсийно-операционного материала щитовидной железы.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при выявлении протективного действия микроорганизмов на молекулу гемоглобина. Для этого исследуемую культуру микроорганизмов выращивают в жидкой питательной среде, отделяют супернатант от микробных клеток центрифугированием, параллельно с опытной пробой готовят контрольную пробу из жидкой питательной среды.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при выявлении протективного действия микроорганизмов на молекулу гемоглобина. Для этого исследуемую культуру микроорганизмов выращивают в жидкой питательной среде, отделяют супернатант от микробных клеток центрифугированием, параллельно с опытной пробой готовят контрольную пробу из жидкой питательной среды.

Изобретение относится к способу определения производных катехоламинов в биологической жидкости (моче), который может найти применение в клинической диагностике. Способ определения производных катехоламинов в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии отличается тем, что пробоподготовку образца осуществляют, пропуская образец исследуемой мочи через патрон для твердофазной экстракции ISOLUTE SCX, добавляют раствор 9-флуоренил-метоксикарбонил хлорида и выдерживают 20 минут при комнатной температуре, а затем смывают 5% раствором ацетата аммония в метаноле, далее полученный раствор анализируют УВЭЖХ, в качестве элюента используют двухкомпонентную систему, ацетонитрил: 0,1% муравьиная кислота, при скорости потока 0.45 мл/мин. Детектирование производных катехоламинов проводят с использованием тройного квадрупольного масс-спектрометра с нагреваемым источником электрораспылительной ионизации. Изобретение обеспечивает упрощение способа, сокращение времени анализа и снижение трудоемкости без потери в эффективности и селективности. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане. Для этого выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, осуществляют генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20. При выявлении генотипов С/Т или Т/Т полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5 или генотипа С/С полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20 прогнозируют риск развития сахарного диабета 2 типа у обследуемого. Способ обеспечивает высокую точность прогнозирования за счет оценки полиморфизмов хемокинов – специфических маркеров воспаления, прогностически значимых в определении риска развития сахарного диабета 2 типа. 1 табл., 4 пр.

Группа изобретений относится к биосенсорам для определения концентрации аналита в пробе жидкости. Тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости содержит: сенсорную пластинку, включающую в себя зону приема жидкости и область вставки в порт; один или более контактов сенсора, расположенных в области вставки в порт; первый ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию калибровки, расположенную в первой зоне области вставки в порт; и второй ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию синхронизации, расположенную во второй зоне области вставки в порт, причем вторая зона отличается от первой зоны, так что один или более контактов сенсора расположены между первой зоной и второй зоной. При этом кодовая комбинация синхронизации соответствует кодовой комбинации калибровки таким образом, что кодовая комбинация синхронизации обеспечивает синхронизацию кодовой комбинации калибровки во время вставки области вставки в порт в приемный порт измерителя аналита, и причем один или несколько контактов сенсора выполнены с возможностью обеспечивать передачу электрических сигналов при вставке области вставки в порт в приемный порт измерителя аналита. Также раскрывается тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости, биосенсоркая система для определения концентрации аналита в биологической жидкости, а также способ определения концентрации аналита в биологической жидкости. Группа изобретений обеспечивает повышение точности и прецизионности измерений концентрации аналитов. 4 н. и 24 з.п. ф-лы, 10 ил.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования лимфогенного метастазирования при аденокарциноме толстого кишечника. Исследуют ткани опухоли, проводят иммуногистохимическое исследование с антителами: Rb pAb to Beclin 1 (ab62472, Abeam), Rb Anti-mTOR PAb (El8590, Bioscience), p53 Protein (Clone DO-7, monoclonal mouse, RTU, Dako), Ki67 Antigen (Clone MIB-1, monoclonal mouse, RTU, Dako), Bcl2 Oncoprotein (Clone 124, monoclonal mouse, RTU, Dako). Исследуют экспрессию указанных маркеров в опухолевой ткани по следующим параметрам: процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией белка beclin 1, процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией белка m-TOR, наличие экспрессии белка р53 в ткани опухоли, характер экспрессии белка р53 в ткани опухоли, наличие экспрессии ki67 в клетках воспалительного инфильтрата, наличие экспрессии bcl2 в клетках воспалительного инфильтрата и рассчитывают риск развития лимфогенных метастазов. Способ позволяет повысить эффективность раннего определения риска лимфогенного метастазирования. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для определения срока физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре. Для этого фрагменты соскоба из полости матки фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. Полученные препараты помещают на предметный столик светового микроскопа и отбирают участки, содержащие компактный слой гравидарного эндометрия. С помощью видеокамеры, установленной на световом микроскопе, видимое поле зрения выводят на экран компьютера. Затем морфометрически определяют площади 30 или более децидуальных клеток и площади их ядер в 3-х или более полях зрения одного или нескольких препаратов. Далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле: X=К+К1 × ср.Sкл - К2 × ср.Sя, где X - срок беременности в акушерских неделях; К - коэффициент равный 3,414; К1 - коэффициент равный 0,019; cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм; К2 - коэффициент равный 0,008; ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм. Изобретение обеспечивает достоверность и объективность морфологического заключения о сроке физиологически протекавшей беременности в первом триместре в акушерских неделях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способу подготовки образцов поствитальной или пострезекционной костной ткани человека для исследования методом растровой электронной микроскопии. Способ характеризуется тем, что образцы вырезают абразивным кругом из костной заготовки, охлажденной жидким азотом, на 5 мин помещают в ультразвуковой диспергатор с ацетоном, далее погружают в заливочную эпоксидную смолу, сушат в вакууматоре в течение 24 ч при 60°C, после высушивания шлифуют шлифовальной бумагой вначале с дисперсностью 800, затем с дисперсностью 1200, далее полируют на сукне с алмазной пастой с зернистостью порошка в пасте 6 мкм и на заключительном этапе подготовки напыляют наночастицами углерода. Достигаемый при этом технический результат заключается в получении высокой контрастности исследуемой поверхности образцов костной ткани человека как материала для исследования в растровом электронном микроскопе, без использования токсичных реагентов при простоте исполнения и снижении материальных, трудовых и временных затрат. 4 ил.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности. Способ прогнозирования неразвивающейся беременности включает выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала на сроке 6-10 недель беременности, проведение обратной транскрипции с получением кДНК, определение экспрессии TLR2, TLR10 и IDO с помощью количественной полимеразной цепной реакции, оценку возраста начала менархе и прогноз вероятности развития неразвивающейся беременности на основании уравнений, полученных по результатам дискриминантного анализа: где x1 – уровень экспрессии мРНК TLR2 (отн.ед.), x2 - уровень экспрессии мРНК TLR10 (отн.ед.), x3 - уровень экспрессии мРНК IDO (отн.ед.), х4 – возраст менархе, при этом, если y1 больше y2, прогнозируют высокий риск развития неразвивающейся беременности, и если y1 меньше y2, то прогнозируют нормальное течение беременности. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для исследования архитектоники структурных элементов глазного яблока у эмбрионов кур. Для этого глазное яблоко эмбриона фиксируют в 10% растворе формалина. Затем получают тонкие, не более 10 мкм гистологические срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином. Приклеивают срезы к предметным стеклам и заключают под покровное стекло. После чего полученные препараты подвергают микрофотографированию на 10, 15 и 20 день эмбрионального развития. Для этого зеркальный цифровой фотоаппарат закрепляют на штативе. Производят съемку и снимки обрабатывают через фоторедактирующие программы. Изобретение позволяет определить архитектонические изменения в органах мелких животных и у эмбрионов в различных возрастных периодах. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения оптимального криопротектора по цитохимическому показателю содержания сукцинатдегидрогеназы в лейкоцитах аутокрови заключается в том, что у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба крови (КП) не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП), капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, из них делают тонкие мазки, высушивают на воздухе, готовят препараты по методике Нахласа в модификации Р.П. Нарциссова, лейкоциты микроскопируют в проходящем свете, проводят сравнительное исследование среднего цитохимического коэффициента (СЦК) сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов с гранулами синего цвета СДГ ОП и КП; при равности значений СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодный к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 3 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе (ЛКФ) консервированной крови заключается в том, что у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей аутокрови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе (КП) добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы (ОП) добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных (с/я) нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК); при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно - онкологии, и может быть использовано для прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию у больных раком предстательной железы. Способ включает исследование биологически активных молекул ткани опухоли с определением экспрессии AR, ERα, также учитывают возраст пациента, уровень тестостерона и простат-специфического антигена и рассчитывают значения дискриминантных функций Yl, Y2 по уравнениям: Y1-33,37+1,0⋅Х1+0,01⋅Х2+0,01⋅Х3+1,08⋅Х4-0,0004 Х5, Y2-59,27+1,75⋅Х1+0,03⋅Х2+0,23⋅Х3-4,02⋅Х4+0,007 Х5, где X1 - возраст пациента, годы, Х2 - экспрессия AR в опухоли, УЕ, Х3-экспрессия ERα в опухоли, УЕ, Х4 - содержание тестостерона в сыворотке крови, нмольл, Х5 - содержание простат-специфического антигена в сыворотке крови, нгмл. При Y1>Y2 - прогнозируют ответ на АДТ в сроки менее 12 месяцев от начала лечения, а при Y1<Y2 - более 12 месяцев от начала лечения. Использование изобретения позволяет прогнозировать сроки рецидивирования заболевания на фоне АДТ, прогнозировать ожидаемые эффекты лечения и оценить его эффективность, повысить точность и информативность диагностики. 4 табл., 2 пр.

Наверх