Способ прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у населения башкортостана

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане. Для этого выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, осуществляют генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20. При выявлении генотипов С/Т или Т/Т полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5 или генотипа С/С полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20 прогнозируют риск развития сахарного диабета 2 типа у обследуемого. Способ обеспечивает высокую точность прогнозирования за счет оценки полиморфизмов хемокинов – специфических маркеров воспаления, прогностически значимых в определении риска развития сахарного диабета 2 типа. 1 табл., 4 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа (СД2) у населения Республики Башкортостан.

СД2 представляет собой острую медико-социальную и экономическую проблему, обусловленную широкой распространенностью, развитием инвалидизирующих осложнений, а также большими финансовыми затратами на лечение.

В Республике Башкортостан на 1 января 2014 г. количество пациентов, состоящих на диспансерном учете по поводу сахарного диабета 2 типа (СД2), составило 86 74 человека, что почти на 12000 больше, чем в 2011 г. При этом примерно треть из них (29734 человека) - инвалиды, а средняя продолжительность жизни от начала заболевания составляет 9,75 лет.

СД2 возникает как итог взаимодействия множества генетических факторов с особенностями питания и двигательной активности индивидуума.

Самым эффективным и экономичным направлением в диабетологии считают профилактику заболевания. Первичная профилактика предполагает формирование групп риска СД2 с использованием молекулярно-генетических маркеров заболевания и меры предупреждения развития болезни. Применение разработанного способа обеспечит выявление лиц с высоким риском развития СД2 для того, чтобы осуществить мероприятия по профилактике развития данной патологии.

Известен способ прогнозирования риска развития сахарного диабета второго типа у больных гипертонической болезнью, характеризующийся тем, что осуществляют выделение ДНК и проводят анализ полиморфного варианта гена лимфотоксина α (+250G/A Ltα). В случае выявления аллеля +250G Ltα прогнозируют повышенный риск формирования сахарного диабета на фоне гипертонической болезни, при обнаружении генотипа +250АА Ltα прогнозируют низкий риск развития сахарного диабета второго типа у уроженцев Центрального Черноземья, больных гипертонической болезнью [патент RU 2521202, 2014 г.].

Недостатком метода является то, что метод может быть реализован только у уроженцев Центрального Черноземья, поскольку молекулярно-генетические маркеры предрасположенности к СД2 различаются в зависимости от структуры популяции.

Известен способ прогнозирования развития сахарного диабета второго типа у больных метаболическим синдромом, характеризующийся тем, что проводят определение содержания аспартатаминотрансферазы (x1), конечного систолического объема левого желудочка (x2), конечного диастолического объема левого желудочка (х3), содержания аланинаминотрансферазы (х4), систолического артериального давления (х5), размера левого предсердия (x6), содержания триглицеридов (х7), кортизола (х8), сахара в сыворотке крови через два часа после приема пищи (x9), возраста больного (х), индекса массы тела больного (х11), наличия или отсутствия у больного отягощенной наследственности по сахарному диабету второго типа (x12) с последующим расчетом стратификационного показателя риска G(x)=0,27⋅x1+0,28⋅x2+5,03⋅x3+0,25⋅x4+0,12⋅x5+1,93⋅x6-3,13⋅x7+0,28⋅x8+1,05⋅x9+0,17⋅x10+0,06⋅x11+0,59⋅x12. Если G(x) превышает 88,1, то риск развития сахарного диабета оценивают как высокий, в противном случае как незначительный [патент RU 2580632, 2016 г.].

Недостатками метода являются его трудоемкость, поскольку требуется проведение нескольких исследований (эхокардиографии, биохимического анализа крови, иммуноферментного анализа крови), а также необходимость знания обследуемого лица о его наследственности, что не всегда возможно. Кроме того, метод может быть использован только в группе лиц с метаболическим синдромом.

Известен способ прогнозирования риска развития сахарного диабета 2 типа, заключающийся в том, что определяют клинико-анамнестические данные: ИМТ, ОТ, АГ, наличие сахарного диабета у близких родственников. Определяют лабораторные данные: ТГ, ХС ЛВП, показания САД и ДАД, уровень сахара в крови. Оценивают в баллах полученные данные и суммируют их. При сумме баллов ниже 8 судят о низкой степени риска развития СД 2 типа в ближайшие 10 лет. При сумме баллов более или равно 8 судят о высокой степени риска развития СД 2 типа [патент RU 2611900, 2017 г.].

Недостатками данного метода являются его трудоемкость, поскольку требуется определение нескольких лабораторных показателей (ТГ, ХС ЛВП, уровень сахара в крови), а также необходимость знания обследуемого лица о его наследственности, что не всегда возможно.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ прогнозирования риска развития СД2 у жителей Башкортостана, включающий определение аллельных вариант по полиморфному локусу rs7903146 гена транскрипционного фактора 7 TCF7L2 (англ. transcription factor 7-like 2). При наличии в генотипе аллеля Т прогнозируют повышенный риск развития СД2 [Авзалетдинова Д.Ш., Шарипова Л.Ф., Кочетова О.В. и др. «Анализ ассоциаций полиморфного маркера rs7903146 гена TCF7L2 с сахарным диабетом 2 типа в татарской этнической группе, проживающей в Башкортостане» // журнал «Сахарный диабет», 2016, Т. 19, №2, С. 119-124].

Недостатком метода является то, что описываемый маркер повышенного риска СД2 ассоциирован в количественном отношении лишь с небольшим риском развития заболевания (OR=1,61).

Большой интерес представляет изучение полиморфизмов специфических маркеров воспаления в жировой ткани - хемокинов, которые могут быть прогностически более значимыми в определении риска развития СД2.

Задачей изобретения стала разработка объективного, высокоинформативного способа прогнозирования развития СД2, позволяющего в количественном отношении оценить риск возникновения данного заболевания у лиц, проживающих в Башкортостане.

Технический результат при использовании изобретения - повышение точности прогноза.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане, включающем выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, в отличие от прототипа проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20 и при выявлении генотипов С/Т или Т/Т полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5, С/С полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20 прогнозируют риск развития сахарного диабета 2 типа у обследуемого.

Предлагаемый способ прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане, осуществляется следующим образом.

ДНК выделяют из лимфоцитов периферической крови. В качестве консерванта используют раствор следующего состава: 0,48% лимонной кислоты, 1,32% цитрата натрия, 1,47% глюкозы. При заборе крови к 1 мл консерванта добавляют 6 мл крови и хорошо перемешивают.

Для получения ДНК необходимой степени чистоты и достаточного молекулярного веса используется метод выделения ДНК из крови фенольно-хлороформной экстракцией, описанный Мэтью (Mathew С.С. The isolation of high molecular weight eukaryotic DNA // Methods in Molecular Biology / Ed. Walker J.M., N.Y., L.: Human Press. - 1984. - V. 2. - P. 31-34):

1. Кровь в пробирке с консервантом тщательно перемешивается и переливается в центрифужный стакан на 100 мл, туда же добавляют 50 мл охлажденного лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% раствор тритона Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трисHCl (рН 7,6).

2. Смесь центрифугируют 20 мин при 4000 об/мин.

3. Надосадочную жидкость сливают, к получившемуся осадку приливают 8 мл 25 мМ ЭДТА, рН 8,0, суспендируют.

4. К суспензии добавляют 0,8 мл 10% SDS и протеиназу К (концентрация - 10 мг/мл). Смесь для лизиса оставляют на ночь в термостате при температуре 38°С.

Экстракцию ДНК осуществляют в следующем порядке.

1. Для депротеинизации к лизату добавляют 0,5 мл 5М перхлората натрия и 8 мл фенола, насыщенного 1М трисHCl до рН 7,8.

2. Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин.

3. Отбирают водную фазу, содержащую ДНК, РНК и неденатурированные белки.

4. Отобранную фазу обрабатывают смесью фенол-хлороформа (1:1), а затем - хлороформом.

5. Препараты осаждают двумя объемами 96% этанола.

6. Образовавшийся осадок ДНК растворяют в 1,5 мл деионизированной Н2O; раствор хранят при -20°С.

В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для ПЦР для амплификации нужных фрагментов гена СС-хемокина 5 CCL5 (англ. gene of chemokine С-С motif ligand 5) и гена СС-хемокина 20 CCL20 (англ. gene of chemokine С-С motif ligand 20). Специфические последовательности олигонуклеотидных праймеров и условия ПЦР-анализа полиморфных локусов подбирались с помощью приложений PrimerSelect5.05 и MapDraw из пакета программ DNAStarlnc (1993-2002) и электронных баз данных (http://www.dnastar.com/t-sub-products-lasergene-primerselect.aspx, www.snipper.chip.org. http://www.ncbi.nlm.nih.gov).

Состав реакционной смеси для ПЦР был следующим: 0,1-1 мкг геномной ДНК, 0,25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата (Promega, USA) помещали в 25 мкл однократного буфера для ПЦР следующего состава: 67 mM Tris-HCl, рН 8,8, 6,7 mM MgCl2, 16,6 mM (NH4)2SO4, 0,01% Tween-20. В полученную смесь добавляют 5 единиц термофильной ДНК-полимеразы и 20-30 мкл минерального масла. Режим амплификации: 30 циклов со следующими параметрами: 94°С - 60 секунд, 55°С - 60 секунд, 72°С - 60 секунд. После 30-го цикла проводили инкубацию при 72°С в течение 5 мин.

Нуклеотидные замены G>A в положении -471 гена CCL5 и Т>С в положении -786 гена CCL20 выявляют при помощи рестрикционного анализа. Для этого 7 мкл амплификата смешивают с 5 ед. эндонуклеазы рестрикции RsaI, смесь выдерживают при 37°С в течение 10-12 часов в термостате. Затем проводят электрофорез в вертикальном 7% ПААГ. В качестве электролита для электрофореза применяют 1X боратный буфер (0,089 М трис HCl рН 7,8; 0,089 М борная кислота, 0,002 М ЭДТА с рН 8,0).

Перед нанесением на вертикальный электрофорез пробы смешивают в соотношении 1:5 с краской, содержащей 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленцианола, 15% фикола. Электрофорез проводят при постоянном напряжении 10 вольт/см после 15-минутного преэлектрофореза. Детекцию результатов проводят путем окрашивания ПААГ бромистым этидием в течение 10 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на гельдокументирующей системе Mega-Bioprint 1100 Vilber Lourmat. Генотипы типируются по критерию присутствия или отсутствия сайта рестрикции и соответствующего фрагмента на электрофорезе.

При наличии фрагментов размером 180, 26 пар нуклеотидов (пн) идентифицируется гомозиготный генотип 7Т, при наличии фрагментов размером 206, 180 и 26 пн идентифицируется гетерозиготный генотип СТ rs2107538 CCL5.

При наличии фрагментов размером 129, 85 пар нуклеотидов (пн) идентифицируется гомозиготный генотип TТ, при наличии фрагментов размером 214, 129 и 85 пн идентифицируется гетерозиготный генотип СТ rs6749704 CCL20.

Нами были исследованы образцы ДНК у 440 больных СД2. Контрольная группа включала 500 здоровых добровольных доноров без клинических и лабораторных признаков сахарного диабета и имеющих неотягощенный семейный анамнез по сахарному диабету.

В группе больных СД2 по сравнению со здоровыми лицами установлена достоверно более высокая частота встречаемости 3 генотипов (таблица). Таким образом, повышенный генетический риск СД2 у населения Башкортостана ассоциирован с генотипами С/Т и Т/Т полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5, генотипом С/С полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20.

Для количественной оценки относительного риска развития заболевания для каждого из вышеуказанных генетических маркеров мы вычислили показатель соотношения шансов (odds ratio - OR). Для этого мы использовали формулу, предложенную Бландом (Bland, J.M. The odds ratio / J.M. Bland, D.G. Altaian // Br. Med. J. - 2000. - Vol. 320. - P. 1468):

OR=(a×d)/(b×c),

где a - число лиц с наличием, b - с отсутствием маркера (аллеля или генотипа) среди больных; c и d - число лиц соответственно с наличием и отсутствием маркера среди здоровых. Повышенный риск развития СД2 констатируют при OR более 1,0.

Приводим пример конкретного расчета. В группе больных СД2 идентифицировано 74 человека, имеющих генотип С/С по полиморфному локусу CCL20 rs6749704, т.е. а=74. У 366 больных СД2 генотип С/С не идентифицирован, поэтому b=366. В выборке здоровых выявлено 34 человека с генотипом С/С, следовательно, с=34. В контрольной группе генотип С/С не обнаружен у 466 человек, это значит, что d=466. Подставив эти значения в вышеприведенную формулу, получим:

OR=(74×466)/(366×34)=34484/12 444=2,77.

Следовательно, у лиц, имеющих генотип С/С, риск развития СД2 повышен в 2,77 раз по сравнению с лицами, обладающими другим генотипом по полиморфному локусу CCL20 rs6749704. Вычисленные по результатам исследования показатели OR в дальнейшем используются в ходе разработки генетического паспорта пациента. Полученные в нашем исследовании показатели OR при наличии рисковых генотипов по локусам CCL5 rs2107538 и CCL20 rs 6749704 представлены в таблице.

Изобретение иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент К., 45 лет, болен СД2 в течение 3 лет, принимает пероральные сахароснижающие препараты. Обратился по вопросу определения генетического риска развития СД2 у своего сына 14 лет.

Результаты генотипирования: для выявления генотипов по полиморфным локусам CCL5 rs2107538 и CCL20 rs6749704 у сына пациента К. было взято 4 мл венозной крови с последующим выделением ДНК методом фенольно-хлороформной экстракции и амплификацией фрагментов генов CCL5 и CCL20 в реакционной смеси, содержащей 0,1-1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0,25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После амплификации провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250-300 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе.

При исследовании полиморфного локуса CCL20 rs6749704 был выявлен генотип С/С, при котором показатель соотношения шансов развития СД2 составляет 2,77 (таблица).

Вывод: учитывая высокий генетический риск СД2 у сына пациента, родителям были предложены превентивные мероприятия, включающие коррекцию массы тела ребенка, расширение его двигательной активности, ежегодный контроль гликемии. Данные рекомендации не были выполнены, сын пациента продолжал набирать массу тела. При обследовании через два года у него был диагностирован сахарный диабет 2 типа.

Пример 2. Пациентке М., 36 лет, имеющей факторы риска СД2 (в анамнезе рождение ребенка с массой тела 4,3 кг; ожирение 2 ст.), было предложено проведение молекулярно-генетического исследования для определения риска развития СД2.

Результаты генотипирования: для выявления генотипов по полиморфным локусам CCL5 rs2107538 и CCL20 rs6749704 у пациентки М. было взято 4 мл венозной крови с последующим выделением ДНК методом фенольно-хлороформной экстракции и амплификацией фрагментов генов CCL5, CCL20 в реакционной смеси, содержащей 0,1-1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0,25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После амплификации провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250-300 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе.

При исследовании полиморфного локуса CCL5 rs2107538 был выявлен генотип Т/Т, при котором показатель соотношения шансов развития СД2 составляет 2,05 (таблица).

Вывод: учитывая высокий генетический риск СД2 у пациентки М., ей были предложены превентивные мероприятия, включающие коррекцию массы тела, в том числе с использованием медикаментозных препаратов, расширение двигательной активности, ежегодный контроль гликемии. Превентивные мероприятия не проводились. В возрасте 39 лет, во время второй беременности, у пациентки развился манифестный сахарный диабет, после родов реклассифицированный в сахарный диабет 2 типа.

Пример 3. Пациент А., 38 лет, проходил медицинский осмотр на работе. При исследовании глюкозы капиллярной крови натощак была выявлена гипергликемия 5,8 ммоль/л. Пациент был направлен к врачу-эндокринологу для дальнейшего обследования. При проведении перорального глюкозотолерантного теста с 75 грамм глюкозы диагностирована нарушенная толерантность к углеводам. Пациенту было предложено проведение молекулярно-генетического исследования для определения риска развития СД2.

Результаты генотипирования: для выявления генотипов по полиморфным локусам CCL5 rs2107538 и CCL20 rs6749704 у пациента А. было взято 4 мл венозной крови с последующим выделением ДНК методом фенольно-хлороформной экстракции и амплификацией фрагментов генов CCL5, CCL20 в реакционной смеси, содержащей 0,1-1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0,25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После амплификации провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250-300 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе.

При исследовании полиморфного локуса CCL5 rs2107538 был выявлен генотип С/Т, при котором показатель соотношения шансов развития СД2 составляет 1,65 (таблица).

Вывод: учитывая повышенный генетический риск СД2 у пациента А., ему были предложены превентивные мероприятия, включающие использование медикаментозных препаратов, расширение двигательной активности, ежегодный контроль гликемии. Превентивные мероприятия не проводились. Во время следующего ежегодного медосмотра был диагностирован сахарный диабет 2 типа.

Пример 4. Пациент Р., 45 лет, находился в хирургическом отделении по поводу плановой холецистэктомии. В послеоперационном периоде выявлена гипергликемия в венозной крови натощак 7,2 ммоль/л, подтвержденная повторным исследованием (7,4 ммоль/л). Учитывая трудность дифференциальной диагностики между транзиторной гипергликемией в послеоперационном периоде и впервые выявленным сахарным диабетом, пациенту было предложено проведение молекулярно-генетического исследования для определения риска развития СД2.

Результаты генотипирования: для выявления генотипов по полиморфным локусам CCL5 rs2107538 и CCL20 rs6749704 у пациента Р. было взято 4 мл венозной крови с последующим выделением ДНК методом фенольно-хлороформной экстракции и амплификацией фрагментов генов CCL5, CCL20 в реакционной смеси, содержащей 0,1-1 мкг геномной ДНК, 1 ед. Taq-полимеразы, 0,25 мкМ каждого олигопраймера, 250 мкМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата в 25 мкл однократного буфера для ПЦР. После амплификации провели электрофорез фрагментов при постоянном напряжении 250-300 вольт после 15-минутного преэлектрофореза. После окончания электрофореза гель окрасили раствором бромистого этидия в течение 10 минут и анализировали при ультрафиолетовом освещении на трансиллюминаторе.

При исследовании полиморфного локуса CCL5 rs2107538 был выявлен генотип пониженного риска С/С (показатель соотношения шансов развития СД2 составляет 0,48), а при исследовании полиморфного локуса CCL20 rs6749704 был выявлен нейтральный генотип С/Т (таблица).

Прогноз в отношении развития СД2 благоприятный. Гипергликемия в послеоперационном периоде была расценена как транзиторная. В дальнейшем пациент к врачу-эндокринологу не обращался.

Примечание: * - различия между сравниваемыми группами статистически значимые при Р<0,05; Р - уровень статистической значимости; жирным шрифтом выделены маркеры повышенного риска сахарного диабета 2 типа.

Способ прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане, включающий выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК, отличающийся тем, что проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20 и при выявлении генотипов С/Т или Т/Т полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5 или генотипа С/С полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20 прогнозируют риск развития сахарного диабета 2 типа у обследуемого.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу определения производных катехоламинов в биологической жидкости (моче), который может найти применение в клинической диагностике. Способ определения производных катехоламинов в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии отличается тем, что пробоподготовку образца осуществляют, пропуская образец исследуемой мочи через патрон для твердофазной экстракции ISOLUTE SCX, добавляют раствор 9-флуоренил-метоксикарбонил хлорида и выдерживают 20 минут при комнатной температуре, а затем смывают 5% раствором ацетата аммония в метаноле, далее полученный раствор анализируют УВЭЖХ, в качестве элюента используют двухкомпонентную систему, ацетонитрил: 0,1% муравьиная кислота, при скорости потока 0.45 мл/мин.

Изобретение относится к области медицины, а именно - онкологии, и может быть использовано для прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию (АДТ) у больных раком предстательной железы (РПЖ).
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения изменения поверхностного заряда эритроцитов у пациентов.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования тяжелого течения диабетической полинейропатии (ДПН) и развития синдрома диабетической стопы (СДС).

Способ относится к клинической медицине, а именно - к стоматологии и клинической лабораторной диагностике. Способ оценки степени тяжести хронического генерализованного пародонтита основан на цитологическом исследовании буккального (щечного) эпителия, при котором производится подсчет числа буккальных эпителиоцитов с конденсированным хроматином.

Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики инфекционного мононуклеоза Эпштейна-Барр-вирусной этиологии, острого бактериального тонзиллита и острого вирусного гепатита «В» у взрослых.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, акушерству, и может быть использовано в лабораторной диагностике для выбора тактики ведения беременности и снижения риска развития внутриутробной инфекции новорожденного.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов, включающий проведение у больного конфокальной лазерной сканирующей микроскопии наиболее инфильтрированного участка кожи, выявление патоморфологических признаков и балльную оценку их степени выраженности, характеризующийся тем, что определяют F – суммарный диагностический индикатор указанных патоморфологических признаков по формуле , где p1 – эпидермальная деструкция (от 0 до 3 баллов); р2 – микроабсцессы Потрие (от 0 до 1 балла); р3 – присутствие атипичных лимфоцитов в эпидермисе (от 0 до 3 баллов); р4 – присутствие атипичных лимфоцитов в дермо-эпидермальном соединении (от 0 до 3 баллов); р5 – потеря контура сосочков (от 0 до 3 баллов); р6 – присутствие атипичных лимфоцитов в дерме (от 0 до 3 баллов); и при значении F<5,8 диагностируют хронический дерматоз, при значении 5,9≤F≤6,8 – диагноз не уточнен, а при значении F≥6,9 – грибовидный микоз.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ дифференциальной диагностики грибовидного микоза от хронических дерматозов, включающий проведение у больного конфокальной лазерной сканирующей микроскопии наиболее инфильтрированного участка кожи, выявление патоморфологических признаков и балльную оценку их степени выраженности, характеризующийся тем, что определяют F – суммарный диагностический индикатор указанных патоморфологических признаков по формуле , где p1 – эпидермальная деструкция (от 0 до 3 баллов); р2 – микроабсцессы Потрие (от 0 до 1 балла); р3 – присутствие атипичных лимфоцитов в эпидермисе (от 0 до 3 баллов); р4 – присутствие атипичных лимфоцитов в дермо-эпидермальном соединении (от 0 до 3 баллов); р5 – потеря контура сосочков (от 0 до 3 баллов); р6 – присутствие атипичных лимфоцитов в дерме (от 0 до 3 баллов); и при значении F<5,8 диагностируют хронический дерматоз, при значении 5,9≤F≤6,8 – диагноз не уточнен, а при значении F≥6,9 – грибовидный микоз.

Изобретение относится к медицине, а именно к патологической анатомии и гистологии, и может быть использовано для хранения биопсийно-операционного материала щитовидной железы.

Группа изобретений относится к биосенсорам для определения концентрации аналита в пробе жидкости. Тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости содержит: сенсорную пластинку, включающую в себя зону приема жидкости и область вставки в порт; один или более контактов сенсора, расположенных в области вставки в порт; первый ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию калибровки, расположенную в первой зоне области вставки в порт; и второй ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию синхронизации, расположенную во второй зоне области вставки в порт, причем вторая зона отличается от первой зоны, так что один или более контактов сенсора расположены между первой зоной и второй зоной. При этом кодовая комбинация синхронизации соответствует кодовой комбинации калибровки таким образом, что кодовая комбинация синхронизации обеспечивает синхронизацию кодовой комбинации калибровки во время вставки области вставки в порт в приемный порт измерителя аналита, и причем один или несколько контактов сенсора выполнены с возможностью обеспечивать передачу электрических сигналов при вставке области вставки в порт в приемный порт измерителя аналита. Также раскрывается тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости, биосенсоркая система для определения концентрации аналита в биологической жидкости, а также способ определения концентрации аналита в биологической жидкости. Группа изобретений обеспечивает повышение точности и прецизионности измерений концентрации аналитов. 4 н. и 24 з.п. ф-лы, 10 ил.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования лимфогенного метастазирования при аденокарциноме толстого кишечника. Исследуют ткани опухоли, проводят иммуногистохимическое исследование с антителами: Rb pAb to Beclin 1 (ab62472, Abeam), Rb Anti-mTOR PAb (El8590, Bioscience), p53 Protein (Clone DO-7, monoclonal mouse, RTU, Dako), Ki67 Antigen (Clone MIB-1, monoclonal mouse, RTU, Dako), Bcl2 Oncoprotein (Clone 124, monoclonal mouse, RTU, Dako). Исследуют экспрессию указанных маркеров в опухолевой ткани по следующим параметрам: процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией белка beclin 1, процент опухолевых клеток с позитивной экспрессией белка m-TOR, наличие экспрессии белка р53 в ткани опухоли, характер экспрессии белка р53 в ткани опухоли, наличие экспрессии ki67 в клетках воспалительного инфильтрата, наличие экспрессии bcl2 в клетках воспалительного инфильтрата и рассчитывают риск развития лимфогенных метастазов. Способ позволяет повысить эффективность раннего определения риска лимфогенного метастазирования. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для определения срока физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре. Для этого фрагменты соскоба из полости матки фиксируют в нейтральном 10% формалине в течение 24-48 часов при комнатной температуре. Далее обезвоживают в спиртах восходящей концентрации, заливают в парафин с последующим приготовлением срезов толщиной 4-5 мкм, которые помещают на предметное стекло и окрашивают гематоксилином и эозином. Полученные препараты помещают на предметный столик светового микроскопа и отбирают участки, содержащие компактный слой гравидарного эндометрия. С помощью видеокамеры, установленной на световом микроскопе, видимое поле зрения выводят на экран компьютера. Затем морфометрически определяют площади 30 или более децидуальных клеток и площади их ядер в 3-х или более полях зрения одного или нескольких препаратов. Далее определяют средние значения площади клетки и площади ядра и рассчитывают дискриминантную функцию (X) по формуле: X=К+К1 × ср.Sкл - К2 × ср.Sя, где X - срок беременности в акушерских неделях; К - коэффициент равный 3,414; К1 - коэффициент равный 0,019; cp.Sкл - средняя площадь клетки в мкм; К2 - коэффициент равный 0,008; ср.Sя - средняя площадь ядра в мкм. Изобретение обеспечивает достоверность и объективность морфологического заключения о сроке физиологически протекавшей беременности в первом триместре в акушерских неделях. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способу подготовки образцов поствитальной или пострезекционной костной ткани человека для исследования методом растровой электронной микроскопии. Способ характеризуется тем, что образцы вырезают абразивным кругом из костной заготовки, охлажденной жидким азотом, на 5 мин помещают в ультразвуковой диспергатор с ацетоном, далее погружают в заливочную эпоксидную смолу, сушат в вакууматоре в течение 24 ч при 60°C, после высушивания шлифуют шлифовальной бумагой вначале с дисперсностью 800, затем с дисперсностью 1200, далее полируют на сукне с алмазной пастой с зернистостью порошка в пасте 6 мкм и на заключительном этапе подготовки напыляют наночастицами углерода. Достигаемый при этом технический результат заключается в получении высокой контрастности исследуемой поверхности образцов костной ткани человека как материала для исследования в растровом электронном микроскопе, без использования токсичных реагентов при простоте исполнения и снижении материальных, трудовых и временных затрат. 4 ил.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности. Способ прогнозирования неразвивающейся беременности включает выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала на сроке 6-10 недель беременности, проведение обратной транскрипции с получением кДНК, определение экспрессии TLR2, TLR10 и IDO с помощью количественной полимеразной цепной реакции, оценку возраста начала менархе и прогноз вероятности развития неразвивающейся беременности на основании уравнений, полученных по результатам дискриминантного анализа: где x1 – уровень экспрессии мРНК TLR2 (отн.ед.), x2 - уровень экспрессии мРНК TLR10 (отн.ед.), x3 - уровень экспрессии мРНК IDO (отн.ед.), х4 – возраст менархе, при этом, если y1 больше y2, прогнозируют высокий риск развития неразвивающейся беременности, и если y1 меньше y2, то прогнозируют нормальное течение беременности. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для исследования архитектоники структурных элементов глазного яблока у эмбрионов кур. Для этого глазное яблоко эмбриона фиксируют в 10% растворе формалина. Затем получают тонкие, не более 10 мкм гистологические срезы, которые окрашивают гематоксилин-эозином. Приклеивают срезы к предметным стеклам и заключают под покровное стекло. После чего полученные препараты подвергают микрофотографированию на 10, 15 и 20 день эмбрионального развития. Для этого зеркальный цифровой фотоаппарат закрепляют на штативе. Производят съемку и снимки обрабатывают через фоторедактирующие программы. Изобретение позволяет определить архитектонические изменения в органах мелких животных и у эмбрионов в различных возрастных периодах. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения оптимального криопротектора по цитохимическому показателю содержания сукцинатдегидрогеназы в лейкоцитах аутокрови заключается в том, что у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба крови (КП) не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП), капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, из них делают тонкие мазки, высушивают на воздухе, готовят препараты по методике Нахласа в модификации Р.П. Нарциссова, лейкоциты микроскопируют в проходящем свете, проводят сравнительное исследование среднего цитохимического коэффициента (СЦК) сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов с гранулами синего цвета СДГ ОП и КП; при равности значений СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодный к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 3 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе (ЛКФ) консервированной крови заключается в том, что у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей аутокрови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе (КП) добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы (ОП) добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных (с/я) нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК); при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии, гистологии и может быть использовано для количественного определения коллагена в ткани. Способ определения количества коллагена в ткани заключается в многократной гомогенизации материала, полученного путем замораживания, лиофильного высушивания, измельчения предварительно взвешенного кусочка ткани, с последующим ресуспендированием материала с помощью дозатора и центрифугированием, далее подготовленный материал замораживают при -80°С и лиофильно высушивают, полученный безводный материал взвешивают, определяют массу материала m1, разводят материал в 900 мкл буферного раствора с рН 7,0 и добавляют 100 мкл раствора коллализина, который заранее приготовляют путем растворения содержимого одной ампулы коллализина, содержащей коллагеназу в виде лиофилизата в количестве 1000 КЕ, в 2 мл буферного раствора с рН 7,0, пробирку с содержимым перемешивают в течение 2 часов, три раза проводят цикл гомогенизации, центрифугирования при 13400 оборотов в минуту и ресуспендирования материала, материал замораживают при -80°С, лиофильно высушивают и взвешивают, определяют массу материала m2, по разнице масс m1-m2 определяют массу коллагена.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане. Для этого выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, осуществляют генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20. При выявлении генотипов СТ или ТТ полиморфного локуса rs2107538 гена CCL5 или генотипа СС полиморфного локуса rs6749704 гена CCL20 прогнозируют риск развития сахарного диабета 2 типа у обследуемого. Способ обеспечивает высокую точность прогнозирования за счет оценки полиморфизмов хемокинов – специфических маркеров воспаления, прогностически значимых в определении риска развития сахарного диабета 2 типа. 1 табл., 4 пр.

Наверх