Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе консервированной крови



Владельцы патента RU 2689334:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе (ЛКФ) консервированной крови заключается в том, что у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей аутокрови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе (КП) добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы (ОП) добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных (с/я) нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК); при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может найти применение в онкологической, гематологической, хирургической практике и криомедицине с целью определения персонифицированного (соотносящегося с конкретным человеком) криопротектора для живых клеток по содержанию лейкоцитарной кислой фасфатазы (ЛКФ)* (* ЛКФ включает ряд изоферментов, которые ускоряют распад органических эфиров фосфорной кислоты в кислой среде.) консервированной крови и предупреждения развития посттрансфузионных осложнений протекторного генеза. Для осуществления способа у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей ауто-крови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе (КП) добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы (ОП) добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей (ПБЖ) из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси 10 мин, промывают в проточной воде 1-2 мин и высушивают, готовят рабочий раствор с рН 5,2-5,4; инкубируют в рабочем растворе вертикально в термостате при температуре плюс 37°С 2-3 часа, стекла промывают в проточной воде, высушивают, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса**, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных (с/я) нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК) по Кэплоу Л. (1955) в модификации Астальди и Верга (1957)** (** Определение уровня ЛКФ в крови имеет важное значение для диагностики состояния здоровья (Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. 3-е изд., перераб. и доп. - Учеб. лит. Для студентов мед. вузов. - М.: Медицина, 1998. - С. 704).); при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. Способ прост и доступен врачу по цитохимическим методам диагностики.

Уровень техники.

В современной клинической медицине постгрансфузионные реакции и осложнения рассматривают как один из универсальных механизмов патогенеза различных заболеваний, характеризующихся накоплением в тканях организма избытка токсических продуктов клеточного реагирования, маркерами которых служат качественные и полуколичественные характеристики определенных цитохимических ферментативных реакций в лейкоцитах крови до и после смешивания с криопротекторами. Эти процессы могут развиваться как по типу яркой реакции «на кончике иглы», так и скрытно развивающихся симптомов посттрансфузионных осложнений (Цитохимия замороженной клетки / Обозная Э.И., Пушкарь Н.С., Маркова О.П., Панков Е.Я.- Киев: Наук. Думка, 1981. - 176 с). Поэтому возникает проблема раннего выявления маркеров вредного влияния токсичных криопротекторов на организм пациентов для эффективного предупреждения посттрансфузионных осложнений протекторного генеза.

Известные методы биологического и биохимического исследования сыворотки крови (определение концентрации молекул средней массы, продуктов перекисного окисления липидов, билирубина и т.д.) имеют ряд недостатков:

- необходимость вводить криопротектор или гемоконсервант на его основе в периферическую вену больного, то есть производить инвазивную манипуляцию, которая может быть сопряжена с техническими трудностями, осложнениями технического характера или непереносимостью субъектом лекарственного препарата;

- необходимость использования лабораторных технологий и специальной биохимической лаборатории, оснащенной сложным оборудованием и реактивами, что делает анализы не всегда доступными и дорогими как для лечебно-профилактических учреждений, так и для пациентов.

Эти недостатки ограничивают количество и частоту необходимых исследований.

На основании предложенных в литературе лабораторных модификаций для оценки полноценности ядерных клеток крови на этапах низкотемпературного консервирования и прогнозирования предполагаемых результатов криогемотрансфузионной терапии широко используются технологии качественной и полуколичественной оценки цитохимических показателей активаторов жизненно важных клеточных ферментов в периферической крови доноров или больных (Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. 3-е изд., перераб. и доп. - Учеб. лит. Для студентов мед. вузов. - М.: Медицина, 1998. - С. 704).

Исследованиями в уровне техники не обнаружено источников информации, раскрывающих способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе (ЛКФ) консервированной крови.

Целью изобретения является создание такого цитохимического способа, который бы позволял определить in vitro для конкретного пациента качественный криопротектор или гемоконсервант на его основе на этапе, предшествующем плановой трансфзии криоконсервированного компонента ауто-крови.

Раскрытие изобретения.

Техническим результатом изобретения является доступность, простота определения персонифицированного качественного криопротектора на доклиническом этапе криогемотрансфузионной терапии.

Технический результат в заявляемом способе определения персонифицированного качественного криопротектора осуществляется по содержанию ЛКФ в консервированной ауто-крови с помощью методики азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса и И.М. Буйкиса.

Новым в предлагаемом способе является то, что определение персонифицированного криопротектора проводят путем сравнительных исследований СЦК ОП на ЛКФ с 15% Гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина (ГМБТОЭМ), 3,3% Глицерола (Гл), 10% Диметилсульфоксид (ДМСО), гемоконсервантом Тромбокриодмац (ТКД) или комбинированным гемоконсервантом на основе Инфукола, содержащего гидроксиэтилкрахмал (ГЭК), и 8% Диметилацетамид (ДМАЦ), со значениями СЦК КП. Пригодным к использованию (ПКИ) из числа тестируемых определяют криопротектор, у которого значения СЦК для с/я нейтрофилов и лимфоцитов ОП совпадают таковыми КП. Способ прост и доступен врачу клинической лабораторной диагностики.

Необходимое оборудование:

1. Предметные стекла,

2. Пробирки для крови на 20 мл с винтовой герметичной пробкой.

3. Световой микроскоп с проходящим светом,

4. Набор тест-доз различных криопротекторов или гемоконсервантов на их основе, разрешенных к клиническому применению МЗ России,

5. Система счетверенных контейнеров с интегрированным лейкоцитарным фильтром для получения лейкофильтрованных компонентов крови Leukotrap WB с пробоотборником для лабораторных исследований,

6. Набор реагентов для цитохимического определения ЛКФ.

Заявляемый способ осуществляют следующим образом. У пациента натощак до начала внутривенных трансфузий криоконсервированных компонентов крови (криогемотрансфузионной терапии) готовят в пробирках «линейку» с тест-дозами 15% ГМБТОЭМ, 3,3% глицерола, гемоконсерванта ТКД, 10% ДМСО или комбинированного гемоконсерванта на основе Инфукола, содержащего гидроксиэтилкрахмал (ГЭК), и 8% Диметилацетамида (ДМАЦ) по 1,5 мл в каждой; в пробоотборник эксфузируют 25 мл ауто-крови без консерванта, стабилизируют раствором цитрата натрия, эксфузат фасуют с помощью дозаторной пипетки в 6 меченных маркером пробирок по 4,0 мл в каждую; в пробирку №1 вносят 0,25 мл тест-дозы 15% ГМБТОЭМ, в пробирку №2 - 0,25 мл тест-дозы 3,3% Гл, в пробирку №3 - 0,25 мл тест-дозы ТКД, в пробирку №4 - 0,25 мл 10% ДМСО, в пробирку №5 - 0,25 мл гемоконсерванта на основе 55% ДМАЦ +5% ГЭК, в пробирку №6 с контрольной пробой крови (КП) криопротекторы не вносят; ПБЖ в пробирках №№1 - 6 герметизируют винтовыми пробками, перемешивают на шейкере при температуре плюс 37°С в течение 2-3 ч; капли приготовленных биологических жидкостей (ПБЖ) из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла с помощью дозаторных пипеток, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси 10 мин, промывают в проточной воде 1-2 мин и высушивают, готовят рабочий раствор с рН 5,2-5,4; инкубируют в рабочем растворе вертикально в термостате при температуре плюс 37°С 2-3 часа, стекла промывают в проточной воде, высушивают, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса**, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных (с/я) нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК) по Кэплоу Л. (1955) в модификации Астальди и Верга (1957)**; при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. Необходимое оборудование: чистые обезжиренные предметные стекла, пробирки для крови на 5 и 20 мл с винтовой герметичной пробкой, световой микроскоп с проходящим светом, набор тест-доз из различных криопротекторов или гемоконсервантов, разрешенных к клиническому применению МЗ России, набор реагентов для цитохимического определения КФ в лейкоцитах in vitro диагностики фирмы Диахим-ЦитоСтейн-ПАС (Россия).

В качестве иллюстрации работоспособности заявляемого способа отбора качественного криопротектора по содержанию показателей СЦК ЛКФ в ауто-крови приводим 3 примера (Табл. 1), которые подтверждают практическое применение данного способа.

Примечание: жирным шрифтом обозначены оптимальные значения СЦК ОП и СЦК КП.

Пример №1. По результатам исследований ауто-крови пациента П-ва признан оптимальным и ПКИ комбинированный криопротектор на основе 55% ДМАЦ и 5% ГЭК, у которого значения СЦК КФ для лейкоцитов совпадают с таковыми КП (соответственно, 0,61 и 1,72).

Пример №2. Результаты исследования крови донора Н-н показывают, что оптимальным и ПКИ является комбинированный криопротектор, содержащий 55% ДМАЦ + 5% ГЭК, у которого СЦК для с/я нейтрофилов и лимфоцитов аналогичен СЦК КЩ соответственно, 0,69 и 0,98).

Пример №3. Результаты исследования крови донора С-ва показывают, что из числа исследованных тест-доз криопротекторов ПКИ является 10% ДМСО, у которого СЦК для с/я нейтрофилов и лимфоцитов аналогичен СЦК КП (соответственно, 0,81 и 1,39). Представленные примеры иллюстрируют применимость предлагаемого способа определения персонифицированного криопротектора по содержанию ЛКФ в консервированной ауто-крови пациента. Способ дешев и может быть внедрен в практику центра, использующего трансфузии криоконсервированных компонентов крови.

Таким образом, благодаря использованию более чувствительного способа определения персонифицированного криопротектора по содержанию ЛКФ в ауто-крови удается оценить эффективность и снизить риски планируемой криогемотрансфузионной терапии протекторного генеза.

Предлагаемое изобретение отвечает критериям «новизна» и «изобретательский уровень», так как проведенные патентно-информационные исследования не выявили источников патентной и научно-технической литературы, которые бы порочили новизну предлагаемого способа, равно как и известных способов с существенными признаками предлагаемого технического решения. Техническим результатом использования является возможность проведения индивидуального скрининга криопротекторов на доклиническом этапе их применения.

Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе (ЛКФ) консервированной крови, заключающийся в том, что у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей аутокрови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе (КП) добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы (ОП) добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10% спирт-формалиновой смеси, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных (с/я) нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента (СЦК) по Кэплоу Л. (1955) в модификации Астальди и Верга (1957); при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения оптимального криопротектора по цитохимическому показателю содержания сукцинатдегидрогеназы в лейкоцитах аутокрови заключается в том, что у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба крови (КП) не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП), капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, из них делают тонкие мазки, высушивают на воздухе, готовят препараты по методике Нахласа в модификации Р.П.

Изобретение относится к медицине, а именно к морфологии, и может быть использовано для исследования архитектоники структурных элементов глазного яблока у эмбрионов кур.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности. Способ прогнозирования неразвивающейся беременности включает выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала на сроке 6-10 недель беременности, проведение обратной транскрипции с получением кДНК, определение экспрессии TLR2, TLR10 и IDO с помощью количественной полимеразной цепной реакции, оценку возраста начала менархе и прогноз вероятности развития неразвивающейся беременности на основании уравнений, полученных по результатам дискриминантного анализа: где x1 – уровень экспрессии мРНК TLR2 (отн.ед.), x2 - уровень экспрессии мРНК TLR10 (отн.ед.), x3 - уровень экспрессии мРНК IDO (отн.ед.), х4 – возраст менархе, при этом, если y1 больше y2, прогнозируют высокий риск развития неразвивающейся беременности, и если y1 меньше y2, то прогнозируют нормальное течение беременности.

Изобретение относится к способу подготовки образцов поствитальной или пострезекционной костной ткани человека для исследования методом растровой электронной микроскопии.

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, и может быть использовано для определения срока физиологически протекавшей беременности у женщин в I триместре.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования лимфогенного метастазирования при аденокарциноме толстого кишечника. Исследуют ткани опухоли, проводят иммуногистохимическое исследование с антителами: Rb pAb to Beclin 1 (ab62472, Abeam), Rb Anti-mTOR PAb (El8590, Bioscience), p53 Protein (Clone DO-7, monoclonal mouse, RTU, Dako), Ki67 Antigen (Clone MIB-1, monoclonal mouse, RTU, Dako), Bcl2 Oncoprotein (Clone 124, monoclonal mouse, RTU, Dako).

Группа изобретений относится к биосенсорам для определения концентрации аналита в пробе жидкости. Тестовый сенсор для определения концентрации аналита в биологической жидкости содержит: сенсорную пластинку, включающую в себя зону приема жидкости и область вставки в порт; один или более контактов сенсора, расположенных в области вставки в порт; первый ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию калибровки, расположенную в первой зоне области вставки в порт; и второй ряд оптически прозрачных и непрозрачных позиций, образующих кодовую комбинацию синхронизации, расположенную во второй зоне области вставки в порт, причем вторая зона отличается от первой зоны, так что один или более контактов сенсора расположены между первой зоной и второй зоной.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования развития сахарного диабета 2 типа у лиц, проживающих в Башкортостане. Для этого выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, осуществляют генотипирование методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и проводят амплификацию участка rs2107538 гена хемокина CCL5 и участка rs6749704 гена хемокина CCL20.

Изобретение относится к способу определения производных катехоламинов в биологической жидкости (моче), который может найти применение в клинической диагностике. Способ определения производных катехоламинов в моче методом высокоэффективной жидкостной хроматографии отличается тем, что пробоподготовку образца осуществляют, пропуская образец исследуемой мочи через патрон для твердофазной экстракции ISOLUTE SCX, добавляют раствор 9-флуоренил-метоксикарбонил хлорида и выдерживают 20 минут при комнатной температуре, а затем смывают 5% раствором ацетата аммония в метаноле, далее полученный раствор анализируют УВЭЖХ, в качестве элюента используют двухкомпонентную систему, ацетонитрил: 0,1% муравьиная кислота, при скорости потока 0.45 мл/мин.

Изобретение относится к области медицины, а именно - онкологии, и может быть использовано для прогнозирования сроков ответа на андроген-депривационную терапию (АДТ) у больных раком предстательной железы (РПЖ).

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения оптимального криопротектора по цитохимическому показателю содержания сукцинатдегидрогеназы в лейкоцитах аутокрови заключается в том, что у больного до начала криогемотрансфузионной терапии получают порцию венозной крови, делят на равные части в пробирки, в одной из которых контрольная проба крови (КП) не содержит криопротектора, в другие добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов - опытные пробы (ОП), капли ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, из них делают тонкие мазки, высушивают на воздухе, готовят препараты по методике Нахласа в модификации Р.П.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования неразвивающейся беременности. Способ прогнозирования неразвивающейся беременности включает выделение РНК из эпителиальных клеток цервикального канала на сроке 6-10 недель беременности, проведение обратной транскрипции с получением кДНК, определение экспрессии TLR2, TLR10 и IDO с помощью количественной полимеразной цепной реакции, оценку возраста начала менархе и прогноз вероятности развития неразвивающейся беременности на основании уравнений, полученных по результатам дискриминантного анализа: где x1 – уровень экспрессии мРНК TLR2 (отн.ед.), x2 - уровень экспрессии мРНК TLR10 (отн.ед.), x3 - уровень экспрессии мРНК IDO (отн.ед.), х4 – возраст менархе, при этом, если y1 больше y2, прогнозируют высокий риск развития неразвивающейся беременности, и если y1 меньше y2, то прогнозируют нормальное течение беременности.

Группа изобретений относится к области диагностики в ветеринарии, в частности, к тесту для обнаружения антител против CSFV. Раскрыт способ обнаружения антител против вируса классической чумы свиней (CSFV) дикого типа в тестируемом образце, где указанный образец также может содержать антитела против мутантного эпитопа TAVSPTTLR из CSFV E2, где способ включает стадию совместной инкубации указанного тестового образца с иммобилизованным носителем, который содержит эпитоп TAVSPTTLR из CSFV E2 и с носителем, который содержит мутантный эпитоп TAVSPTTLR из CSFV E2.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения сроков годности натуральных рыбных консервов. Для этого натуральные рыбные консервы хранят при температуре 30-55°С, периодически определяя по балльной системе органолептические показатели, кислотное число жира и содержание амино-аммиачного азота.

Изобретение относится к исследованию низкотемпературных свойств нефтепродуктов путем пропускания через них ультразвуковых волн и может быть использовано для экспрессного контроля температуры застывания и текучести в аналитических лабораториях нефтехимических предприятий, университетов и научно-исследовательских центров.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, стоматологии и клинической лабораторной диагностике. Способ оценки эффективности лечения у больных с изолированной формой акантолитической пузырчатки полости рта включает исследование ротовой жидкости, в которой на 14 день лечения определяют концентрацию интерлейкина-4 (ИЛ-4), интерлейкина-6 (ИЛ-6) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) и при значениях ИЛ-4 46 пг/мл и выше, ИЛ-6 1,5 пг/мл и ниже, ИЛ-1β 85 пг/мл и ниже эффективность лечения оценивают как низкую, а при значениях ИЛ-4 43 пг/мл и ниже, ИЛ-6 2,0 пг/мл и выше, ИЛ-1β 89,0 пг/мл и выше эффективность лечения оценивают как высокую.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, стоматологии и клинической лабораторной диагностике. Способ прогнозирования характера течения акантолитической пузырчатки у больных с изолированной формой пузырчатки полости рта включает определение в ротовой жидкости содержания интерлейкина-4 (ИЛ-4), интерлейкина-6 (ИЛ-6) и интерлейкина-1β (ИЛ-1β) и при значениях ИЛ-6 1,9 пг/мл и ниже, ИЛ-1β 87 пг/мл и ниже, а ИЛ-4 46 пг/мл и выше прогнозируют вероятность перехода в тяжелую форму заболевания.

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и оториноларингологии, и предназначено для выявления мутаций гена GJB2, обуславливающих аутосомно-рецессивную глухоту 1А типа.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкогинекологии, и предназначено для неинвазивной диагностики серозных пограничных цистаденом и высокой степени злокачественности цистаденокарцином яичников.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для оценки эффективности лечения лепры на основе идентификации жизнеспособных Mycobacterium leprae. Из биоптатов и скарификатов кожи выделяют ДНК/РНК.
Изобретение относится к биотехнологии, гистологии и может быть использовано для количественного определения коллагена в ткани. Способ определения количества коллагена в ткани заключается в многократной гомогенизации материала, полученного путем замораживания, лиофильного высушивания, измельчения предварительно взвешенного кусочка ткани, с последующим ресуспендированием материала с помощью дозатора и центрифугированием, далее подготовленный материал замораживают при -80°С и лиофильно высушивают, полученный безводный материал взвешивают, определяют массу материала m1, разводят материал в 900 мкл буферного раствора с рН 7,0 и добавляют 100 мкл раствора коллализина, который заранее приготовляют путем растворения содержимого одной ампулы коллализина, содержащей коллагеназу в виде лиофилизата в количестве 1000 КЕ, в 2 мл буферного раствора с рН 7,0, пробирку с содержимым перемешивают в течение 2 часов, три раза проводят цикл гомогенизации, центрифугирования при 13400 оборотов в минуту и ресуспендирования материала, материал замораживают при -80°С, лиофильно высушивают и взвешивают, определяют массу материала m2, по разнице масс m1-m2 определяют массу коллагена.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике. Способ определения персонифицированного криопротектора по лейкоцитарной кислой фосфатазе консервированной крови заключается в том, что у пациента до начала компонентной трансфузионной терапии эксфузируют порцию свежей аутокрови, стабилизируют раствором цитрата натрия, делят в пробирки на равные части, в контрольной пробе добавки криопротекторов исключают, в опытные пробы добавляют по одной равной дозе тестируемых криопротекторов, перемешивают при плюс 37°С в течение 4 ч, капли приготовленных биологических жидкостей из ОП и КП наносят в объеме 4 мкл на предметные стекла, делают 2-3 мазка, высушивают на воздухе, фиксируют в 10 спирт-формалиновой смеси, лейкоциты окрашивают на кислую фосфатазу по методике азосочетания Берстона в модификации Ю.Ф. Руденса, И.М. Буйкиса, микроскопируют в проходящем свете, производят подсчет содержания ЛКФ в сегментоядерных нейтрофилах и лимфоцитах с подсчетом среднего цитохимического коэффициента ; при совпадении значений показателей СЦК ОП и СЦК КП тестируемый криопротектор оценивают как оптимальный для конкретного больного и пригодным к использованию; при значениях СЦК ОП, отличных от СЦК КП, делают заключение как о непригодном к использованию криопротекторе. 1 табл., 3 пр.

Наверх