Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот



Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот
Средства для ингибирования фермента тирозил-днк-фосфодиэстеразы 1 на основе желчных кислот

Владельцы патента RU 2689335:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук (ИХБФМ СО РАН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Новосибирский институт органической химии им. Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук (НИОХ СО РАН) (RU)

Изобретение относится к применению соединения, представляющего собой производные желчных кислот общей формулы I, в которой R1 представляет -ОН, -ОАс, O-СН3; R2 представляет -Н, -ОН, -ОАс; R3=-Н, -ОН, -ОАс, -O-СН3; R4 представляет адамантил, -фенил, необязательно замещенный бромом, -метилом; -пиридинил, -(CH2)2-R5, где R5=фенил, замещенный двумя трет-бутильными группами, или индол, в качестве ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека (Tdp1). Технический результат: предложено применение соединений формулы I в качестве эффективного ингибитора фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека, которые можно использовать для разработки новых эффективных противораковых средств. 2 ил., 1 табл., 24 пр.

 

Изобретение относится к молекулярной биологии, биохимии и медицине, конкретно к применению соединений, представляющим собой производные желчных кислот общей формулы I, включая пространственные изомеры, в том числе оптически-активные формы:

где, R1=-ОН, -ОАс, O-СН3; R2=-Н, -ОН, -ОАс; R3=-Н, -ОН, -ОАс, -O-СН3;

R4 = адамантил; -фенил, не обязательно замещенный бромом, -метилом; -пиридинил, -(CH2)2-R5, где R5 = фенил, замещенный двумя трет-бутильными группами, или индол, в качестве ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека (Tdp1).

Системы репарации ДНК, ответственные за исправления повреждений и разрывов в молекулах ДНК, играют важнейшую роль в поддержании целостности генома. Однако, повышенная активность подобных систем создает значительные проблемы при лечении целого ряда иммунных, нейродегенеративных и, особенно, опухолевых заболеваний [Lu JYD, et all., 2017, Dexheimer TS, et al., 2008., Laev S, el al., 2016]. Цитотоксические эффекты химио- и радиотерапии, которые используются в клинической практике при лечении злокачественных опухолевых заболеваний, основаны на способности данных методов генерировать повреждения ДНК. Способность опухолевых клеток опознавать повреждения ДНК и запускать механизм репарации может приводить к возникновению резистентности к тем или иным препаратам противораковой терапии. Ингибирование ферментов системы репарации ДНК может повысить эффективность использования уже применяющихся в практике противоопухолевых препаратов [Al Abo М, et al., 2017.] Поэтому поиск ингибиторов ферментов системы репарации ДНК является одним из востребованных направлений исследований в медицинской химии. [Huang Shar-yin N. et al. 2011, Beretta GL, et al., 2010, Geenen JJJ., et al. 2017]

В последние годы [Beretta GL, et al., 2010, Jun J.H. et al. 2018] ведутся активные поиски ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 (Tdp1, фермент класса фосфодиэстераз, расщепляющих фосфодиэфирные связи [Interthal, 2001]), который рассматривается как перспективный фермент-мишень при создании лекарственных препаратов для лечения онкологических и нейродегенеративных заболеваний [Cortes Ledesma, 2009, Dexheimer TS, et al., 2008].

Tdp1, в частности, играет важную роль в удалении повреждений ДНК, создаваемых топоизомеразой 1 (Top1) в присутствии ингибиторов Top1 (например, камптотецина и его производных, используемых в клинике), и некоторыми другими противоопухолевыми препаратами [см. обзоры Laev, 2016; Pommier, 2010; Pommier, 2006].

Нормальный ферментативный цикл Top1 включает в себя реакции «разрезания» и «сшивки» одной из цепей ДНК. Первоначально, остаток тирозина-723 активного центра фермента Top1 образует переходный ковалентный комплекс с 3'-фосфатом основания ДНК, который приводит к образованию одноцепочечного разрыва и снятию локального напряжения в спирали благодаря вращению «разрезанной» цепи вокруг интактной. Затем целостность ДНК восстанавливается за счет обратной реакции. В нормальных условиях скорость реакции «сшивки» значительно выше, чем скорость расщепления ДНК, однако ингибиторы Top1, такие как камптотецин и его производные, существенно замедляют скорость обратной реакции. Невозможность восстановить структуру ДНК приводит к образованию одноцепочечных разрывов, которые могут превратиться в более токсичные двухцепочечные. [Nguyen ТХ, et al., 2012, Dexheimer TS, et al., 2008].

Tdp1 катализирует гидролиз аддуктов ДНК, ковалентно связанных с 3'-фосфатом ДНК, включая пептиды Top1, комплексы Top1-ингибитор, а также 3'-фосфогликоляты и другие. Кроме того, Tdp1 способна отщеплять 5'-аддукты ДНК [Borda, 2015]. В результате, Tdp1 противостоит не только препаратам, направленным на ингибирование Top1 (камптотецины, инденоизохинолины), но также блеомицину, ингибиторам топоизомеразы II (Тор2) (этопозид, доксорубицин) и ДНК-алкилирующими агентами. Предполагается, что именно Tdp1 ответственна за лекарственную устойчивость некоторых видов рака [Dexheimer, 2008; Beretta, 2010]. Эта гипотеза подтверждается рядом исследований, например, известно, что мыши, нокаутные по Tdp1, гиперчувствительны к камптотецину [El-Khamisy, 2009; Das, 2009; Katyal, 2007; Hirano, 2007]. И, наоборот, в клетках с повышенным уровнем экспрессии Tdp1 камптотецин и этопозид вызывают меньше повреждений ДНК [Barthelmes, 2004; Nivens, 2004]. Также показано, что подавление активности Tdp1 делает опухолевые клетки гиперчувствительными к противораковым препаратам с другими механизмами действия: темозоломиду (метилирование пуринов) [Alagoz, 2014], метилметансульфонату (образование апуриновых/апиримидиновых сайтов), блеомицину (одноцепочечные/двухцепочечные разрывы с 3'-фосфогликолятами), перекиси водорода и ионизирующему излучению (разрывы и др. виды повреждений) [Murai, 2012].

В литературе описано немного ингибиторов Tdp1, большинство из них обладает умеренным ингибирующим действием [Antony, 2007; Nguyen, 2012; Dexheimer, 2008; Zakharenko, 2015, Zakharenko, 2016; Jun J.H. et al., 2018].

Наиболее близким к заявляемому средству - прототипом - является соединение II (NSC 88915), конъюгат дезоксикортикостерона и 4-бромбензолсульфокислоты [Dexheimer T.S. et al., 2009; Nguyen T.X et al. 2012], с достаточно высокими ингибирующими характеристиками в отношении Tdp1 (IC50 7.7 мкМ). Изучение зависимости «структура-активность» показало, что оба структурных фрагмента соединения II являются важными элементами, обуславливающими высокую ингибирующую активность указанного соединения [Dexheimer T.S. et al., 2009]. Однако, в результате исследований был выявлен ряд существенных недостатков соединения II, таких как низкая биодоступность, высокая цитотоксичность и воздействие на нежелательные мишени, связанные, по всей видимости, с гормональной природой стероидного фрагмента.

Задачей изобретения является создание более эффективного ингибитора Tdp1 нового структурного типа.

Поставленная техническая задача решается применением соединений, представляющих амиды желчных кислот, в том числе с дополнительной модификацией функциональных групп стероидного остова, общей формулы I, у которых выявлена биологическая активность, заключающаяся в подавлении активности Tdp1.

Для получения соединений общей формулы I в качестве исходных соединений использовались доступные желчные кислоты: дезоксихолевая кислота (III-(ДХ)) (R2=H, R3=αOH), хенодезоксихолевая кислота (III-(ХДХ)) (R2=αOH, R3=H), и урсодезоксихолевая кислота (III-(УДХ)) (R2=βOH, R3=H).

Схема синтеза соединения общей формулы I приведена на Фиг. 1.

На первом этапе может осуществляться модификация гидроксильных групп стероидного остова: взаимодействие с уксусным ангидридом в уксусной кислоте приводит к образованию диацетоксипроизводных общей формулы IV, а с йодистым метилом с присутствии гидрида натрия - диметоксипроизводного (соединение V-в). Формирование амидной группы может быть осуществлено через промежуточное образование хлорангидрида, взаимодействием карбоксильной группы с хлористым оксалилом, и последующим взаимодействием с соответствующим амином, например, триптамином (соединения с индексом 1), 4-(2-аминоэтил)-2,6-ди-t-бутилфенолом (индекс 2), 1-аминоадамантаном (индекс 3), анилином (индекс 4), n-броманилином (индекс 5), n-метиланилином (индекс 6) и м-аминопиридином (индекс 7). Получение амидных производных желчных кислот (соединения с индексом б), содержащих в стероидном остове гидроксильные группы, осуществляли взаимодействием диацетоксиамидов (соединения с индексом а) с гидроксидом калия в метаноле.

Результаты тестирования соединений формулы I на способность ингибировать фермент Tdp1 приведены в таблице.

Показано, что амидные производные, имеющие дополнительную модификацию гидроксильных групп стероидного остова (ацетоксигруппы (соединения с индексом а) и метоксигруппы (соединения с индексом в)), проявляют более выраженную активность в отношении ингибирования фермента Tdp1 по сравнению с их аналогами, имеющими не замещенную гидроксигруппу (соединения с индексом б).

Технический результат: найден новый класс эффективных ингибиторов Tdp1 с хорошими ингибирующими характеристиками (IC50 для одноцепочечной ДНК от 0.1 до 7 мкМ).

Соединения общей формулы I, после проведения углубленных фармакологических исследований, могут использоваться для дальнейшей разработки новых высокоэффективных противораковых средств.

Поскольку ингибиторы ферментов репарации ДНК используются в "коктейлях" с известными противоопухолевыми препаратами, обладающими очень высокой цитотоксичностью, важно, чтобы применение новых соединений в лекарственных формах не приводило бы к дополнительной токсической нагрузке на организм. Анализ цитотоксичности предлагаемых соединений проводили на линиях клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 и карциномы прямой кишки человека НСТ-116. Индуцированную соединениями клеточную гибель оценивали с помощью стандартного МТТ-теста [Mosmann, 1983]. В качестве контроля использовали клетки, которые выращивали в присутствии 1% DMSO.

Токсичность испытанных соединений (I-а1(УДХ), I-а4(ДХ), I-а5(ДХ)) отсутствовала или была незначительна во всем диапазоне изученных концентраций (до 100 мкМ) (см. рисунок). Во всех случаях не была достигнута концентрация, соответствующая гибели 50% клеток.

Влияние предлагаемых соединений на выживаемость клеток линий MCF-7 (А) и НСТ-116 (Б), приведено на фиг. 2.

Таким образом, предлагаемые соединения, являющиеся низкотоксичными эффективными ингибиторами тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1, можно рассматривать как перспективные агенты для комбинированной химиотерапии онкологических заболеваний.

Ниже приводятся конкретные примеры реализации заявляемого технического решения.

Пример 1. Синтез 3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-овой кислоты (IV-а(ДХ))

Дезоксихолевую кислоту (III-(ДХ)) (25.0 г, 63.8 ммоль) кипятили в АсОН (200 мл) несколько дней (до полной этерификации 3-ОН-группы и 90% этерификации 12-ОН-группы; ход реакции контролировали 1Н ЯМР). Добавили в реакционную смесь бензол (80 мл) и отогнали азеотроп бензол-вода с использованием насадки Дина-Старка. Затем в добавили в реакционную смесь Ac2O (4 мл) и перемешивали при комнатной температуре до полной конверсии. Реакционную смесь разбавили водой (70 мл) и выдержали 8 часов при 50°С (для разложения смешанного ангидрида уксусной и дезоксихолевой кислот), охладили до комнатной температуры и вылили в воду, далее экстрагировали смесью CH2Cl2 - t-BuOMe. Органическую фазу промыли насыщенными водными растворами NaHCO3 и NaCl (нас), сушили над безводным MgSO4. Удалили растворитель на роторном испарителе, получили сырой продукт в виде желтой аморфной массы (33.3 г). Сырой продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили IV-а(ДХ) (28.7 г, выход 95%) в виде белого твердого аморфного вещества. Т. пл 71.1°C (разложение; лит. 92-93°C [ Cano L.P., et al., Steroids, 2013, 78, 982-986]).

1H ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=11.18 (ш.с, 1H, ОН), 5.04 (с, 1Н, Н-12), 4.66 (м, 1Н, Н-3), 2.35 (м, 1H, Н-23), 2.20 (м, 1H, Н-23'), 2.07 (с, 3H, CH3-28), 1.99 (с, 3H, CH3-26), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.78 (д, 3H, J=6.2, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=179.98 (с, С-24), 170.54 (с, С-25), 170.41 (с, С-27), 75.76 (д, С-12), 74.09 (д, С-3), 49.27 (д, С-14), 47.40 (д, С-17), 44.85 (с, С-13), 41.65 (д, С-5), 35.50 (д, С-8), 34.54 (т, С-1), 34.48 (д, С-20), 34.23 (д, С-9). 33.87 (с, С-10), 32.08 (т, С-4), 30.80 (т, С-23), 30.42 (т, С-22), 27.17 (т, С-16), 26.72 (т, С-6), 26.46 (т, С-2), 25.70 (т, С-7), 25.48 (т, С-11), 23.26 (т, С-15), 22.92 (к, С-19), 21.33 (к, С-26), 21.24 (к, С-28), 17.33 (к, С-21), 12.26 (к, С-18).

Пример 2. Синтез 3α,7α-диацетокси-5β-холан-24-овой кислоты (IV-а(ХДХ))

К раствору хенодезоксихолевой кислоты (III-(ХДХ)) (1 г, 2.55 ммоль) и DMAP (0.03 г, 0.255 ммоль) в CH2Cl2 (15 мл) по каплям прибавили смесь Ac2O (0.6 мл, 6.4 ммоль) и NEt3 (0.9 мл, 6.4 ммоль) при комнатной температуре и перемешивании. Ход реакции контролировали ТСХ и ЯМР 1Н. По окончании реакции в реакционную смесь добавили Et2O и промыли последовательно водой, 5%-ным водным раствором HCl, насыщенными растворами NaHCO3 и NaCl. Органическую фазу сушили над безводным MgSO4 и удалили растворитель на роторном испарителе. Получили сырой продукт IV-а(ХДХ) - стеклообразное (аморфное) желтоватое вещество, который использовали в следующих превращениях без дополнительной очистки. Выход количественный (1.27 г).

1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=4.81 (м, 1Н, Н-7), 4.51 (м, 1Н, Н-3), 2.42 (м, 1H, Н-23), 2.30 (м, 1H, Н-23'), 2.15 (с, 3H, CH3-28), 1.98 (с, 3H, CH3-26), 0.86 (с, 3H, CH3-19), 0.58 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3,100 МГц): δ=178.17 (с, С-24), 170.41 (с, С-25), 170.19 (с, С-27), 73.90 (д, С-3), 70.95 (д, С-7), 55.41 (д, С-17), 50.12 (д, С-14), 42.45 (с, С-13), 40.67 (д, С-5), 39.20 (т, С-12), 37.61 (д, С-8), 34.81, 34.62, 34.52, 34.34, 33.78, 31.92, 31.03, 29.87, 27.76, 26.51, 23.26, 22.42, 21.33 (к, С-19), 21.22 (к, С-26), 20.37 (к, С-28), 18.00 (к, С-21), 11.44 (к, С-18).

Пример 3. Синтез 3α,7β-диацетокси-5β-холан-24-овая кислота (IV-а(УДХ))

Аналогично примеру 2 из урсодезоксихолевой кислоты (III-(УДХ)) (1 г, 2.55 ммоль), DMAP (0.03 г, 0.255 ммоль) и Ac2O (0.6 мл, 6.4 ммоль) и NEt3 (0.9 мл, 6.4 ммоль) в CH2Cl2

(15 мл) получили IV-a (УДХ) с количественным выходом (1.43 г), который использовали в следующих превращениях без дополнительной очистки.

1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=4.70 (м, 1H, Н-7), 4.60 (м, 1Н, Н-3), 1.96 (с, 3H, CH3-28), 1.92 (с, 3H, CH3-26), 0.91 (с, 3H, CH3-19), 0.87 (д, 3H, J=6.3, CH3-21), 0.62 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 100 МГц): δ=179.24 (с, С-24), 170.42 (с, С-25), 170.42 (с, С-27), 73.35 (д, С-7), 73.35 (д, С-3), 54.97, 54.76, 43.36, 41.79, 39.71, 39.66, 39.12, 34.96, 34.75, 34.26, 33.74, 32.62, 30.74, 30.51, 28.19, 26.14, 25.36, 23.00 (к, С-19), 21.60 (к, С-26), 21.17 (к, С-28), 20.97 (т, С-11), 18.13 (к, С-21), 11.86 (к, С-18).

Пример 4. Синтез N-(2'-(1H-индол-2-ил)-этил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а1(ДХ))

а) Раствор IV-а(ДХ) (0.45 г, 0.95 ммоль) в сухом CH2Cl2 (10 мл) охладили в бане со льдом до 0-5°C, добавили к нему оксалилхлорид (0.49 мл, 5.7 ммоль) и 3 капли ДМФА. Перемешивали 3 часа при охлаждении. В реакционную смесь добавили бензол (5 мл×2 раза) и концентрировали на ротационном испарителе для удаления растворителя и избытка хлористого оксалила. К реакционной смеси добавили CH2Cl2 (10 мл),

б) Полученный раствор хлорангидрида по каплям при интенсивном перемешивании добавили к раствору триптамина (0.3 г, 1.9 ммоль) и NEt3 (0.39 мл, 2.8 ммоль) в CH2Cl3 (10 мл). Реакционную смесь перемешивали 18 часов при комнатной температуре, ход реакции контролировали ТСХ. Растворитель удалили, добавили 50 мл AcOEt и воду, органическую фазу отделили, водную фазу экстрагировали AcOEt (2×30 мл). Объединенную органическую фазу промыли 5%-ным раствором HCl, затем раствором NaHCO3 и раствором NaCl (нас.), сушили над безводным MgSO4. Масса сырого продукта - 0.58 г, выход количественный. Сырой продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом AcOEt (0-10%)), получили 2 фракции различной чистоты массами 0.29 г (97% чистоты по ВЭЖХ) и 0.23 г (94% чистоты) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 90%. Тпл 99.2°C [разложение]. Эл. анал. вычислено для C38H54N2O5: С, 73.75; Н, 8.80; N, 4.53; О, 12.93; найдено С, 73.37; Н, 8.68; N, 4.18. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=8.63 (шс, 1Н, NH-1'), 7.55 (д, 1Н, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.33 (д, 1H, J8',7'=8.0, Н-8'), 7.15 (дд, 1H, J7',6'=7.2, Н-7'), 7.06 (дд, 1H, J6',5'=7.4, Н-6'), 6.97 (с, 1Н, Н-2'), 5.60 (м, 1H, C(O)NH), 5.05 (с, 1H, Н-12(β)), 4.67 (м, 1H, Н-3(β)), 3.54 (м, 2Н, CH2-11'), 2.92 (м, 2Н, CH2-10'), 2.06 (с, 3H, CH3-26), 2.01 (с, 3H, CH3-28), 0.88 (с, 3H, CH3-18), 0.71 (д, 3H, J21,20=6.4, CH3-21), 0.67 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.30 (с, С-24), 170.44 (с, С-25), 170.37 (с, С-27), 136.32 (с, С-9'), 127.25 (с, С-4'), 122.03 (д, С-2'), 121.90 (д, С-7'), 119.32 (д, С-5'), 118.55 (д, С-6'), 112.86 (с, С-3'), 111.16 (д, С-8'), 75.80 (д, С-12), 74.08 (д, С-3), 49.28, 47.64, 44.89, 41.70, 39.67 (т, С-11'), 35.54, 34.67, 34.59, 34.28, 33.90, 33.55, 32.14, 31.47, 27.18, 26.75, 26.50, 25.73, 25.52, 25.19 (т, С-10'), 23.28, 22.92 (к, CH3-С(O)O), 21.32 (к, С-19), 21.25 (к, CH3-С(O)O), 17.49 (к, С-21), 12.29 (к, С-18).

Пример 5. Синтез N-(2'-(1H-индол-2-ил)-этил)-3α,7α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а1(ХДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ХДХ) (1.2 г, 2.5 ммоль), оксалилхлорида (1.3 мл, 15 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (10 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с триптамином (0.8 г, 5.0 ммоль) и NEt3 (7.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.4 г, выход 89%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-1%)), получили I-а1(ХДХ) 1.1 г (60% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 70%. Тпл 98.7°C [разложение]. Эл. анал. вычислено для C38H54N2O5: С, 73.75; Н, 8.80; N, 4.53; О, 12.93; найдено С, 73.54; Н, 8.63; N, 4.55. 1H ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.47 (шс, 1Н, NH-1'), 7.56 (д, 1Н, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.34 (д, 1H, J8',7'=8.1, Н-8'), 7.17 (дд, 1Н, J7',6'=7.6, Н-7'), 7.09 (дд, 1Н, J6',5'=7.4, Н-6'), 6.99 (с, 1H, Н-2'), 5.67 (с, 1Н, C(O)NH), 4.84 (с, 1Н, Н-7(β)), 4.55 (м, 1H, Н-3(β)), 3.56 (д, 2Н, J=5.8, CH2-11'), 2.94 (м, 2Н, CH2-10'), 2.02 (с, 3H, CH3-26), 2.01 (с, 3H, CH3-28), 0.89 (с, 3H, CH3-18), 0.86 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.59 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.49 (с, С-24), 170.54 (с, С-25), 170.37 (с, С-27), 136.25 (с, С-9'), 127.16 (с, С-4'), 121.94 (д, С-2'), 121.89 (д, С-7'), 119.19 (д, С-5'), 118.47 (д, С-6'), 112.66 (с, С-3'), 111.16 (д, С-8'), 74.02 (д, С-3), 71.09 (д, С-7), 55.54 (д, С-17), 50.16 (д, С-14), 42.47 (с, С-13), 40.72 (д, С-5), 39.63, 39.26, 37.66 (д, С-8), 35.22, 34.68, 34.58, 34.41, 33.83, 33.40, 31.56, 31.12, 27.86, 26.58, 25.13 (т, С-10'), 23.35, 22.49, 21.46, 21.33, 20.43, 18.17 (к, С-21), 11.51 (к, С-18).

Пример 6. Синтез N-(2'-(1H-индол-2-ил)-этил)-3α,7β-диацетокси-5β-холан-24-амид (I-а1(УДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(УДХ) (1.2 г, 2.5 ммоль), оксалилхлорида (1.3 мл, 15 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (10 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с триптамином (0.8 г, 5.0 ммоль) и NEt3 (7.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.52 г, выход

97%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-1%)), получили 2 фракции I-а1(УДХ) различной чистоты массами 0.2 г (>99% чистоты по ВЭЖХ) и 1.05 г (97.5% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 80%. Тпл 107.6°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C38H54N2O5: С, 73.75; Н, 8.80; N, 4.53; О, 12.93; найдено С, 73.68; Н, 8.76; N, 4.31. 1Н ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.36 (шс, 1H, NH-1'), 7.57 (д, 1Н, J5',6'=7.7, Н-5'), 7.35 (д, 1H, J8',7'=8.0, Н-8'), 7.18 (дд, 1H, J7',6'=7.4, Н-7'), 7.09 (дд, 1H, J6',5'=7.4, Н-6'), 7.00 (шс, 1Н, Н-2'), 5.65 (м, 1H, C(O)NH), 4.73 (с, 1H, Н-7(α)), 4.63 (м, 1Н, Н-3(β)), 3.57 (м, 2Н, CH2-11'), 2.95 (м, 2Н, CH2-10'), 2.00 (с, 3H, CH3-26), 1.96 (с, 3H, CH3-28), 0.93 (с, 3H, CH3-18), 0.85 (д, 3H, J21,20=6.2, CH3-21), 0.62 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.46 (с, С-24), 170.52 (с, С-25), 170.44 (с, С-27), 136.25 (с, С-9'), 127.15 (с, С-4'), 121.93 (д, С-2'), 121.93 (д, С-7'), 119.12 (д, С-5'), 118.44 (д, С-6'), 112.60 (с, С-3'), 111.16 (д, С-8'), 73.40 (д, С-7), 73.40 (д, С-3), 54.95, 54.75, 43.32, 41.79, 39.70, 39.66, 39.61, 39.12, 35.10, 34.26, 33.74, 33.39, 32.65, 32.65, 31.54, 28.22, 26.15, 25.38, 25.15 (т, С-10'), 23.00, 21.66, 21.21, 20.96, 18.25 (к, С-21), 11.86 (к, С-18).

Пример 7. Синтез N-(2''-(3',5'-ди-трет-бутил-4'-гидроксифенил)этил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а2(ДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (0.20 г, 0.42 ммоль), оксалилхлорида (0.22 мл, 2.5 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (10 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с 4-(2-аминоэтил)-2,6-ди-трет-бутилфенолом (0.11 г, 0.44 ммоль) и NEt3 (0.66 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл). Масса сырого продукта 0.29 г. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.85 г I-а2(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 28%. Тпл 98.7°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C44H69NO6: С, 74.64; Н, 9.82; N, 1.98; О, 13.56; найдено С, 74.38; Н, 9.86; N, 2.11. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=6.94 (с, 2Н, Н-2', Н-6'), 5.48 (м, 1H, NH), 5.09 (с, 1Н, ОН), 5.04 (с, 1Н, Н-12(β)), 4.67 (м, 1Н, Н-3(β)), 3.43 (м, 2Н, CH2-16'), 2.69 (м, 2Н, CH2-15'), 2.06 (с, 3H, CH3-26), 2.00 (с, 3H, CH3-28), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.77 (д, 3H, J21,20=6.1, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=173.03 (с, С-24), 170.40 (с, С-25), 170.30 (с, С-27), 152.21 (с, С-4'), 135.94 (с, С-3'), 135.94 (с, С-5'), 129.31 (с, С-1'), 125.18 (д, С-2'), 125.18 (д, С-6'), 75.77 (д, С-12), 74.04 (д, С-3), 49.26, 47.58, 44.86, 41.67, 40.79, 35.52, 35.49, 34.74, 34.57, 34.24, 34.14, 33.88, 33.59, 32.11, 31.53, 30.17 (к, C(CH3)3), 27.25, 26.73, 26.48, 25.70, 25.49, 23.26, 22.92 (к, С-19), 21.31 (к, CH3-С(O)O), 21.23 (к, CH3-С(О)О), 17.49 (к, С-21), 12.28 (к, С-18).

Пример 8. Синтез N-(1'-адамантил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а3(ДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (0.6 г, 1.3 ммоль), оксалилхлорида (0.6 мл, 7.6 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (15 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с адамантиламином (0.26 г, 1.4 ммоль) и NEt3 (2.1 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 0.73 г. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 0.36 г I-а3(ДХ) в виде белого аморфного твердого вещества. Выход 47%. Тпл 120.7°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C38H59NO5: С, 74.84; Н, 9.75; N, 2.30; О, 13.12; найдено С, 74.76; Н, 9.83; N, 2.41. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=5.07 (с, 1H, Н-12(β)), 5.03 (дд, 1Н, J=5.0, NH), 4.66 (м, 1H, Н-3(β)), 2.05 (с, 3H, CH3-26), 2.02 (шс, 3H, Н-3', Н-5', Н-8'), 1.99 (с, 3H, CH3-28), 1.94 (с, 6Н, CH2-2', CH2-6', CH2-9'), 1.63 (м, 6Н, CH2-4', CH2-7', CH2-10'), 0.86 (с, 3H, CH3-19), 0.76 (д, 3H, J21,20=6.5, CH3-21), 0.68 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=172.31 (с, С-24), 170.39 (с, С-25), 170.31 (с, С-27), 75.80 (д, С-12), 74.04 (д, С-3), 51.56, 49.27, 47.67, 44.87, 41.68, 41.55 (т, С-2', С-6', С-9'), 36.22 (т, С-4', С-7', С-10'), 35.53, 34.64, 34.57, 34.53, 34.25, 33.88, 32.11, 31.49, 29.29 (д, С-3', С-5', С-8'), 27.22, 26.74, 26.47, 25.71, 25.49, 23.28, 22.91 (к, С-19), 21.30 (к, CH3-С(O)O), 21.23 (к, CH3-С(O)O), 17.53 (к, С-21), 12.29 (к, С-18).

Пример 9. Синтез N-фенил-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а4(ДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (2.0 г, 4.2 ммоль), оксалилхлорида (2.1 мл, 25.2 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (40 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с анилином (0.86 г, 9.2 ммоль) и NEt3 (14 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл). Масса сырого продукта 2.0 г, выход 87%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 3 фракции I-а4(ДХ) различной чистоты массами 0.07 г (98.3% чистоты по ВЭЖХ), 1.4 г (98.9% чистоты по ВЭЖХ) и 0.26 г (97.7% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 75%. Тпл 97.5°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H49NO5: С, 74.01; Н, 8.95; N, 2.54; О, 14.50; найдено С, 73.91; Н, 8.88; N, 2.78. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=7.48 (д, 2Н, J=7.9, Н-2', Н-6'), 7.38 (с, 1H, NH), 7.27 (дд, 2Н, J=J=7.9, Н-3', Н-5'), 7.06 (дд, 1H, J=7.4, Н-4'), 5.06 (с, 1H, Н-12(β)), 4.67 (м, 1H, Н-3(β)), 2.38 (м, 1H, Н-23), 2.19 (м, 1Н, Н-23'), 2.08 (с, 3H, CH3-26), 2.00 (с, 3H, CH3-28), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.81 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.50 (с, С-24), 170.48 (с, С-25), 170.42 (с, С-27), 137.89 (с, С-1'), 128.82 (д, С-3'), 128.82 (д, С-5'), 123.97 (д, С-4'), 119.59 (д, С-2'), 119.59 (д, С-6'), 75.83 (д, С-12), 74.08 (д, С-3), 49.27, 47.71, 44.89, 41.66, 35.51, 34.74, 34.56, 34.24, 33.88, 32.10, 31.33, 27.26, 26.73, 26.48, 25.71, 25.51, 23.29, 22.92 (к, С-19), 21.34 (к, CH3-С(O)O), 21.28 (к, CH3-С(О)О), 17.52 (к, С-21), 12.33(к, С-18).

Пример 10. Синтез N-(4'-бромфенил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амид (I-а5(ДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (2.0 г, 4.2 ммоль), оксалилхлорида (2.1 мл, 25.2 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (20 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с n-броманилином (1.6 г, 9.3 ммоль) и NEt3 (14 ммоль) в CH2Cl2 (20 мл). Масса сырого продукта 2.45 г, выход 92%. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом AcOEt (0-3%)), получили 2 фракции I-а5(ДХ) различной чистоты массами 0.63 г (98.6% чистоты по ВЭЖХ) и 1.41 г (98.2% чистоты по ВЭЖХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 77%. Тпл 109:3°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H48BrNO5: С, 64.75; Н, 7.67; Br, 12.67; N, 2.22; О, 12.68; найдено С, 65.10; Н, 7.75; Br, 13.00; N, 2.35. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=7.43 (с, 1H, NH), 7.38 (м, 4Н, Н-2', Н-3', Н-5', Н-6'), 5.03 (с, 1H, Н-12(β)), 4.67 (м, 1Н, Н-3(β)), 2.37 (м, 1Н, Н-23), 2.18 (м, 1Н, Н-23'), 2.07 (с, 3H, CH3-26), 2.01 (с, 3H, CH3-28), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.80 (д, 3H, J21,20=6.4, CH3-21), 0.69 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.55 (с, С-24), 170.51 (с, С-25), 170.44 (с, С-27), 136.96 (с, С-1'), 131.76 (д, С-3'), 131.76 (д, С-5'), 121.15 (д, С-2'), 121.15 (д, С-6'), 116.49 (с, С-4'), 75.82 (д, С-12), 74.08 (д, С-3), 49.27, 47.70, 44.90, 41.65, 35.50, 34.72, 34.56, 34.53, 34.24, 33.88, 32.10, 31.23, 27.25, 26.72, 26.48, 25.70, 25.52, 23.28, 22.93 (к, С-19), 21.36 (к, CH3-С(О)О), 21.30 (к, CH3-С(О)О), 17.53 (к, С-21), 12.33 (к, С-18).

Пример 11. Синтез N-(n-толил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а6(ДХ)) Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (1.0 г, 2.1 ммоль), оксалилхлорида (1.1 мл, 12.6 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (20 мл). Аналогично примеру 4

(пункт б) провели реакцию с n-толуидином (0.25 г, 2.3 ммоль) и NEt3 (3.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.2 г, выход количественный. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 1.0 г I-а6(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 84%. Тпл 94.8°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C35H51NO5: С, 74.30; Н, 9.09; N, 2.48; О, 14.14; найдено С, 74.00; Н, 8.72; N, 2.50. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=7.65 (с, 1H, NH), 7.35 (д, 2Н, J=8.4, Н-2', Н-6'), 7.05 (д, 2Н, J=8.3, Н-3', Н-5'), 5.04 (с, 1H, Н-12(β)), 4.65 (м, 1H, Н-3(β)), 2.34 (м, 1Н, Н-23), 2.25 (с, 3H, CH3-7'), 2.15 (м, 1Н, Н-23'), 2.05 (с, 3H, CH3-26), 1.99 (с, 3H, CH3-28), 0.85 (с, 3H, CH3-19), 0.78 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.67 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.49 (с, С-24), 170.43 (с, С-25), 170.36 (с, С-27), 135.39 (с, С-1'), 133.40 (с, С-4'), 129.18 (д, С-3'), 129.18 (д, С-5'), 119.70 (д, С-2'), 119.70 (д, С-6'), 75.79 (д, С-12), 74.02 (д, С-3), 49.21, 47.67, 44.81, 41.59, 35.44, 34.69, 34.49, 34.38, 34.17, 33.81, 32.04, 31.33, 27.18, 26.66, 26.42, 25.64, 25.44, 23.22, 22.86 (к, С-19), 21.27 (к, CH3-С(О)О), 21.21 (к, CH3-С(О)О), 20.64 (к, CH3-7'), 17.45 (к, С-21), 12.25 (к, С-18).

Пример 12. Синтез N-(пиридин-3'-ил)-3α,12α-диацетокси-5β-холан-24-амида (I-а7(ДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из IV-а(ДХ) (1.0 г, 2.1 ммоль), оксалилхлорида (1.1 мл, 12.6 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (20 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с пиридин-3-амином (0.22 г, 2.3 ммоль) и NEt3 (3.5 ммоль) в CH2Cl2 (10 мл). Масса сырого продукта 1.34 г, выход количественный. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-5%)), получили 0.72 г I-а7(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 62%. Тпл 161.2-161.7°C. Эл. ан. вычислено для C33H48N2O5: С, 71.71; Н, 8.75; N, 5.07; О, 14.47; найдено С, 71.47; Н, 8.52; N, 5.16. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=8.54 (д, 1H, J=2.3, Н-2'), 8.30 (д, 1Н, J=4.6, Н-4'), 8.23 (с, 1H, NH), 8.20 (д, 1Н, J=8.6, Н-6'), 7.26 (дд, 1Н, J=J=4.1, H-5'), 5.07 (с, 1H, H-12(β)), 4.68 (м, 1H, H-3(β)), 2.44 (м, 1H, H-23), 2.25 (м, 1H, H-23'), 2.09 (с, 3H, CH3-26), 2.02 (с, 3H, CH3-28), 0.89 (с, 3H, CH3-19), 0.80 (д, 3H, J21,20=5.8, CH3-21), 0.70 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=172.30 (с, С-24), 170.53 (с, С-25), 170.50 (с, С-27), 144.68 (д, С-4'), 140.71 (д, С-6'), 135.07 (с, С-3'), 127.06 (д, С-2'), 123.64 (д, С-5'), 75.80 (д, С-12), 74.07 (д, С-3), 49.22, 47.65, 44.86, 41.60, 35.45, 34.71, 34.28, 34.20, 33.85, 32.06, 31.16, 29.53, 27.23, 26.68, 26.45, 25.67, 25.50, 23.26, 22.91 (к, С-19), 21.36 (к, CH3-С(O)O), 21.30 (к, CH3-С(O)O), 17.49 (к, С-21), 12.30 (к, С-18).

Пример 13. Синтез N-(2-(1Н-индол-2-ил)этил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида I-б1(ДХ)

К раствору I-а1(ДХ) (0.52 мг, 0.84 ммоль) в МеОН (10 мл) по каплям прибавили раствор KOH (0.6 г, 10.7 ммоль) в МеОН (8 мл), кипятили 20 часов, ход реакции контролировали ТСХ. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, добавили AcOEt. Промыли органический слой 5%-ным раствором HCl, затем насыщенными водными растворами NaHCO3 и NaCl, сушили над безводным MgSO4. Масса сырого продукта 0.35 г (выход 77%). Продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом МеОН (0-8%)), получили 2 фракции I-б1 (ДХ) массой 0.07 г (>98% чистоты по ВЭЖХ), и 0.13 г (<98% чистоты по ВЭЖХ). Суммарный выход составил 44%.

1H ЯМР (CDCl3, 300 МГЦ): δ=8.63 (шс, 1H, NH-1'), 7.56 (д, 1H, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.36 (д, 1H, J8',7'=8.2, Н-8'), 7.17 (м, 1Н, Н-7'), 7.08 (м 1H, Н-6'), 7.00 (шс, 1Н, Н-2'), 5.81 (шс, 1H, C(O)NH), 3.90 (с, 1H, Н-12(β)), 3.55 (м, 3Н: Н-3(β), CH2-11'), 2.93 (м, 2Н, CH2-10'), 0.89 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.87 (с, 3H, CH3-18), 0.61 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=173.70 (с, С-24), 136.32 (с, С-9'), 127.23 (с, С-4'), 122.11 (д, С-2'), 121.93 (д, С-7'), 119.23 (д, С-5'), 118.54 (д, С-6'), 112.74 (с, С-3'), 111.27 (д, С-8'), 73.03 (д, С-12), 71.59 (д, С-3), 48.10, 46.91, 46.32, 41.91, 39.60 (т, С-11'), 36.21, 35.83, 35.08, 33.96, 33.50, 33.33, 31.54, 30.26, 28.47, 27.34, 26.98, 25.98, 25.17 (т, С-10'), 23.51, 22.99 (к, С-19), 17.27 (к, С-21), 12.61 (к, С-18).

Пример 14. Синтез N-(2-(1Н-индол-2-ил)этил)-3α,7α-дигидрокси-5β-холан-24-амида I-б1 (ХДХ)

Аналогично примеру 13 из I-а1(ХДХ) (0.69 г, 1.1 ммоль) и KOH (0.38 г, 6.8 ммоль) в МеОН (25 мл) получили 0.55 г сырого продукта (выход 92%). Продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом МеОН (0-5%)), получили I-б1 (ХДХ) массой 0.22 г (95% чистоты по ВЭЖХ), суммарный выход составил 37%.

1Н ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.73 (шс, 1Н, NH-1'), 7.55 (д, 1Н, J5',6'=7.8, Н-5'), 7.35 (д, 1Н, J8',7'=7.8, Н-8'), 7.16 (дд, 1H, J7',6'=7.0, J7',8'=7.8, Н-7'), 7.08 (дд, 1H, J6',5'=7.8, Н-6'), 7.00 (шс, 1Н, Н-2'), 5.80 (шс, 1H, C(O)NH), 3.80 (шс, 1Н, Н-7(β)), 3.56 (м, 2Н, CH2-11'), 3.43 (м, 1H, Н-3(β)), 2.93 (м, 2Н, CH2-10'), 0.86 (с, 3H, CH3-18), 0.59 (д, 3H, CH3-21), 0.59 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, 125 МГц): δ=173.82 (с, С-24), 136.32 (с, С-9'), 127.17 (с, С-4'), 122.12 (д, С-2'), 121.85 (д, С-7'), 119.15 (д, С-5'), 118.48 (д, С-6'), 112.55 (с, С-3'), 111.27 (д, С-8'), 71.79 (д, С-3), 68.33 (д, С-7), 55.50 (д, С-17), 50.20 (д, С-14), 42.44 (с, С-13), 41.29, 39.56, 39.49, 39.43, 39.18, 35.27, 35.15, 34.85, 33.31, 32.65, 31.65, 30.86, 30.39, 28.03, 25.14, 23.49, 22.64 (к, С-19), 20.41, 18.22 (к, С-21), 11.60 (к, С-18).

Пример 15. Синтез N-(2-(1H-индол-2-ил)этил)-3α,7β-дигидрокси-5β-холан-24-амида I-б1(УДХ)

Аналогично примеру 13 из I-a1 (УДХ) (0.69 г, 1.1 ммоль) и KOH (0.38 г, 6.8 ммоль) в МеОН (25 мл) получили 0.55 г сырого продукта (выход 92%). Продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CH2Cl2 с градиентом МеОН (0-5%)), получили I-б1 (УДХ) массой 0.22 г (95% чистоты по ВЭЖХ), суммарный выход составил 37%. Тпл 114.9°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H50N2O3: С, 76.36; Н, 9.42; N, 5.24; О, 8.98; найдено С, 76.43; Н, 9.64; N, 4.89. 1Н ЯМР (CDCl3, 500 МГц): δ=8.96 (шс, 1H, NH-1'), 7.53 (д, 1H, J5',6'=7.5, Н-5'), 7.33 (д, 1H, J8',7'=8.1, Н-8'), 7.13 (м, 1H, Н-7'), 7.05 (м, 1H, Н-6'), 6.97 (шс, 1Н, Н-2'), 5.97 (м, 1Н, C(O)NH), 3.49 (м, 4Н: Н-3(β), Н-7(α), CH2-11'), 2.91 (м, 2Н, CH2-10'), 0.87 (с, 3H, CH3-18), 0.82 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.58 (с, 3H, CH3-19). 13С ЯМР (CDCl3, CD3OD, 125 МГц): δ=174.00 (с, С-24), 136.17 (с, С-9'), 127.06 (с, С-4'), 121.98 (д, С-2'), 121.73 (д, С-7'), 119.00 (д, С-5'), 118.35 (д, С-6'), 112.25 (с, С-3'), 111.17 (д, С-8'), 71.00 (д, С-3), 70.95 (д, С-7), 55.49, 54.60, 43.46, 43.33, 42.20, 39.88, 39.49, 39.00, 36.85, 36.65, 35.17, 34.69, 33.82, 33.32, 31.68, 29.85, 28.40, 25.01, 23.17 (к, С-19), 20.94, 18.21 (к, С-21), 11.87 (к, С-18).

Пример 16. Синтез N-(1`-адамантил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б3(ДХ)

Аналогично примеру 13 из I-а3(ДХ) (0.2 г, 0.3 ммоль) и KOH (0.2 г, 3.6 ммоль) в МеОН (5 мл) получили 0.17 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-5%)), получили 0.12 г I-б3(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 71%. Тпл 300.8°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C34H55NO3: С, 77.66; Н, 10.54; N, 2.66; О, 9.13; найдено С, 77.92; Н, 10.29; N, 2.79. 1Н ЯМР (CDCl3, CD3OD, 400 МГц): δ=3.79

(с, 1H, Н-12(β)), 3.38 (м, 1Н, Н3(β)), 1.90 (шс, 3H, Н-3', Н-5', Н-8'), 1.82 (с, 6Н, CH2-2', CH2-6', CH2-9'), 1.51 (с, 6Н, CH2-4', CH2-7', CH2-10'), 0.81 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.74 (с, 3H, CH3-19), 0.51 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, CD3OD, 100 МГц): δ=173.90 (с, С-24), 72.67 (д, С-12), 71.00 (д, С-3), 51.41, 47.64, 46.39, 46.01, 41.72, 40.95 (т, С-2', С-6', С-9'), 35.91 (т, С-4', С-7', С-10'), 35.57, 35.54, 34.97, 34.89, 34.74, 33.12, 31.45, 29.38, 29.01 (д, С-3', С-5', С-8'), 28.09, 27.19, 26.74, 25.80, 23.34, 22.64 (к, С-19), 16.66 (к, С-21), 12.23 (к, С-18).

Пример 17. Синтез N-фенил-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б4(ДХ))

Аналогично примеру 14 из I-а4 (ДХ) (0.4 г, 0.7 ммоль) и NaOMe (0.2 г, 3.7 ммоль) в МеОН (10 мл) получили 0.43 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.23 г I-б4(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 68%. Тпл 214.2-216.3°C. Эл. ан. вычислено для C30H45NO3: С, 77.04; Н, 9.70; N, 2.99; О, 10.26; найдено С, 77.32; Н, 9.39; N, 3.12. 1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=8.00 (с, 1H, NH), 7.53 (д, 2Н, J=7.7, Н-2', Н-6'), 7.25 (дд, 2Н, J=J=7.8, Н-3', Н-5'), 7.04 (дд, 1Н, J=7.3, Н-4'), 3.97 (с, 1H, Н-12(β)), 3.56 (м, 1Н, Н-3(β)), 2.38 (м, 1Н, Н-23), 2.22 (м, 1H, Н-23'), 0.95 (д, 3H, J21,20=6.0, CH3-21), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.64 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 100 МГц): δ=172.38 (с, С-24), 138.21 (с, С-1'), 128.74 (д, С-3'), 128.74 (д, С-5'), 123.75 (д, С-4'), 119.55 (д, С-2'), 119.55 (д, С-6'), 73.10 (д, С-12), 71.67 (д, С-3), 47.66, 46.41, 46.20, 42.00, 36.19, 35.91, 35.21, 35.03, 34.09, 33.62, 33.45, 30.97, 30.67, 28.15, 27.50, 27.19, 26.09, 23.65, 23.02 (к, С-19), 17.34 (к, С-21), 12.48 (к, С-18).

Пример 18. Синтез N-(4'-бромфенил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б5 (ДХ))

Аналогично примеру 14 из I-а5 (ДХ) (0.39 г, 0.62 ммоль) и NaOMe (0.20 г, 3.7 ммоль) в МеОН (10 мл) получили 0.7 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.25 г I-б5 (ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 74%. Тпл 229.4°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C30H44BrNO3: С, 65.92; Н, 8.11; Br, 14.62; N, 2.56; О, 8.78; найдено С, 65.57; Н, 7.90; Br, 14.62; N, 2.63. 1Н ЯМР (CDCl3, CD3OD, 400 МГц): δ=9.00 (с, 1Н, NH), 7.38 (д, 2Н, J=7.8, Н-2', Н-6'), 7.29 (д, 2Н, J=7.8, Н-3', Н-5'), 3.86 (с, 1H, Н-12(β)), 3.47 (м, 1Н, Н-3(β)), 2.29 (м, 1H, Н-23), 2.15 (м, 1Н, Н-23'), 0.90 (д, 3H, J21,20=5.7, CH3-21), 0.81 (с, 3H, CH3-19), 0.57 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, CD3OD, 100 МГц): δ=173.09 (с, С-24), 137.37 (с, С-1'), 131.42 (д, С-3'), 131.42 (д, С-5'), 121.14 (д, С-2'), 121.14 (д, С-6'), 115.99 (с, С-4'), 72.88 (д, С-12), 71.19 (д, С-3), 47.77, 46.23, 46.11, 41.77, 35.78, 35.65, 35.00, 34.97, 33.85, 33.29, 33.25, 31.10, 29.60, 28.20, 37.25, 26.85, 25.91, 23.45, 22.79 (к, С-19), 16.88 (к, С-21), 12.37 (к, С-18).

Пример 19. Синтез N-(4'-метилбензил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (I-б6(ДХ))

Аналогично примеру 14 из I-а6(ДХ) (0.23 г, 0.4 ммоль) и KOH (0.35 г, 6.2 ммоль) в МеОН (10 мл) получили 0.19 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3), получили 0.12 г I-б6 (ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 63%. Тпл 117.5°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C31H47NO3: С, 77.29; Н, 9.83; N, 2.91; О, 9.96; найдено С, 77.60; Н, 9.74; N, 2.99. 1Н ЯМР (CDCl3, 300 МГц): δ=7.89 (с, 1Н, NH), 7.40 (д, 2Н, J=8.2, Н-2', Н-6'), 7.05 (д, 2Н, J=8.1, Н-3', Н-5'), 3.96 (с, 1Н, Н-12(β)), 3.57 (м, 1H, Н-3(β)), 2.90 (шс, 2Н, ОН), 2.26 (с, 3H, CH3-7'), 0.96 (д, 3H, J21,20=6.3, CH3-21), 0.87 (с, 3H, CH3-19), 0.64 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 75 МГц): δ=172.18 (с, С-24), 135.61 (с, С-1'), 133.34 (д, С-4'), 129.23 (д, С-3'), 129.23 (д, С-5'), 119.70 (д, С-2'), 119.70 (д, С-6'), 73.13 (д, С-12), 71.65 (д, С-3), 47.80, 46.40, 46.37, 41.96, 36.19, 35.89, 35.18, 35.02, 34.05, 33.67, 33.43, 31.11, 30.43, 28.25, 27.46, 27.11, 26.07, 23.63, 22.99 (к, С-19), 20.71 (к, CH3-7'), 17.34 (к, С-21), 12.53 (к, С-18).

Пример 20. Синтез N-(пиридин-3'-ил)-3α,12α-дигидрокси-5β-холан-24-амида (1-б7(ДХ))

Аналогично примеру 14 из I-а7 (ДХ) (0.59 г, 1.1 ммоль) и KOH (0.48 г, 8.6 ммоль) в МеОН (20 мл) получили 0.44 г сырого продукта. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-5%)), получили 0.22 г I-б7(ДХ) в виде белого твердого аморфного вещества. Выход 44%. Тпл 114.6°C [разложение]. Эл. ан. вычислено для C29H44N2O3: С, 74.32; Н, 9.46; N, 5.98; О, 10.24; найдено С, 73.98; Н, 9.44; N, 5.70. 1Н ЯМР (CDCl3, МеОН, 400 МГц): δ=9.53 (с, 1H, NH), 8.45 (с, 1Н, Н-2'), 8.24 (д, 1H, J=7.9, Н-4'), 8.14 (д, 1H, J=4.2, Н-6'), 7.23 (м, 1H, Н-5'), 3.88 (с, 1H, Н-12(β)), 3.48 (м, 1H, Н-3(β)), 2.36 (м, 1Н, Н-23), 2.22 (м, 1Н, Н-23'), 0.93 (д, 3H, J21,20=5.8, CH3-21), 0.82 (с, 3H, CH3-19), 0.59 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, МеОН, 100 МГц): δ=173.77 (с, С-24), 143.07 (д, С-4'), 139.74 (д, С-6'), 135.97 (с, С-3'), 127.69 (д, С-2'), 123.87 (д, С-5'), 72.91 (д, С-12), 71.19 (д, С-3), 47.84, 46.20, 46.14, 41.79, 35.77, 35.68, 35.00, 34.98, 33.88, 33.27, 33.10, 31.04, 29.62, 28.24, 27.28, 26.85, 25.93, 23.48, 22.82 (к, С-19), 16.89 (к, С-21), 12.41 (к, С-18).

Пример 21. Синтез 3α,12α-диметокси-5β-холан-24-овой кислоты (V-в (ДХ))

К раствору ДХК (0.5 г, 1.3 ммоль) в сухом ТГФ (15 мл) прибавили NaH (0.75 г, 31.2 ммоль (57-63% в масле)) перемешивали 10 минут при комнатной температуре, затем к смеси прибавили MeI (0.6 мл, 9.6 ммоль). Реакционную смесь выдержали сутки при 40°C. В реакционную смесь добавили МеОН (5 мл) и 5%-ный раствор HCl, затем экстрагировали смесью CH2Cl2-t-BuOMe. Органическую фазу промыли насыщенными водными растворами Na2S2O3 и NaCl, сушили над безводным MgSO4. Растворитель удалили на роторном испарителе, сырой продукт получили в виде аморфной массы. Сырой продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-2%)), получили 0.41 г V-в (ДХ) (выход 76%) в виде белого твердого вещества. Тпл 180.6-182.2°C. Эл. ан. вычислено для C31H47NO3: С, 74.24; Н, 10.54; О, 15.21; найдено С, 74.42; Н, 10.27, О, 15.21. 1Н ЯМР (CDCl3, 400 МГц): δ=3.34 (с, 1Н, Н-12), 3.31 (с, 3H, CH3-26), 3.21 (с, 3H, CH3-25), 3.12 (м, 1Н, Н-3), 2.37 (м, 1H, Н-23), 2.23 (м, 1H, Н-23'), 0.87 (с, 6Н, CH3-21, CH3-19), 0.62 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 100 МГц): δ=180.19 (с, С-24), 82.07 (д, С-12), 80.38 (д, С-3), 55.48 (к, CH3-26), 55.30 (к, CH3-25), 48.66, 46.26, 46.17, 41.91, 35.85, 35.14, 34.88, 34.31, 33.35, 32.35, 30.89, 30.55, 27.22, 27.16, 26.16, 26.58, 25.94, 23.51, 23.13 (к, С-19), 21.78, 17.18 (к, С-21), 12.57 (к, С-18).

Пример 22. Синтез N-(4'-бромфенил)-3α,12α-диметокси-5β-холан-24-амида (V-в5(ДХ))

Аналогично примеру 4 (пункт а) из V-в(ДХ) (0.5 г, 1.2 ммоль), оксалилхлорида (0.5 мл, 5.9 ммоль) получили раствор хлорангидрида в CH2Cl2 (15 мл). Аналогично примеру 4 (пункт б) провели реакцию с n-броманилином (0.23 г, 1.3 ммоль) и NEt3 (2.1 ммоль) в CH2Cl2 (5 мл). Масса сырого продукта 0.67 г. Полученный продукт очистили колоночной хроматографией (SiO2, CHCl3 с градиентом МеОН (0-1%), затем SiO2, н-гексан - AcOEt (2:15, об./об.), получили 0.54 г V-в5(ДХ) в виде белого твердого вещества. Выход 79%. Тпл 168.9-170.4°C. Эл. ан. вычислено для C32H48BrNO3: С, 66.88; Н, 8.42; Br, 13.91; N, 2.44; О, 8.35; найдено С, 67.25; Н, 8.38; Br, 14.28; N, 2.52. 1Н ЯМР (CDCl3, 600 МГц): δ=7.41 (м, 1H, NH), 7.39 (м, 4Н, Н-2', Н-3', Н-5', Н-6'), 3.35 (с, 1Н, Н-12(β)), 3.32 (с, 3H, CH3-26), 3.21 (с, 3H, CH3-25), 3.13 (м, 1H, Н-3(β)), 2.38 (м, 1H, Н-23), 2.22 (м, 1Н, Н-23'), 0.90 (д, 3H, J21,20=6.2, CH3-21), 0.88 (с, 3H, CH3-19), 0.63 (с, 3H, CH3-18). 13С ЯМР (CDCl3, 150 МГц): δ=171.92 (с, С-24), 137.03 (с, С-1'), 131.75 (д, С-3'), 131.75 (д, С-5'), 121.18 (д, С-2'), 121.18 (д, С-6'), 116.41 (с, С-4'), 82.07 (д, С-12), 80.36 (д, С-3), 55.47 (к, CH3-25), 55.41 (к, CH3-26), 48.74, 46.19, 46.12, 41.90, 35.84, 35.15, 34.88, 34.32, 34.13, 33.38, 32.44, 31.27, 27.32, 27.15, 26.68, 25.94, 23.50, 23.14 (к, С-19), 21.77, 17.37 (к, С-21), 12.59 (к, С-18).

Пример 23. Исследование влияния предлагаемых соединений на способность ингибировать Tdp1.

Рекомбинантная тирозил-ДНК-фосфодиэстераза 1 человека (КФ 3.1.4.-) была экспрессирована в системе Escherichia coli (плазмида рЕТ 16B-Tdp1 любезно предоставлена доктором Кальдекотт К.У., Университет Сассекса, Великобритания) и выделена как описано [Interthal, 2001].

В качестве тест-системы для определения ингибирующих свойств предлагаемых соединений использована реакция удаления тушителя флуоресценции Black Hole Quencher 1 (BHQ1) с 3'-конца олигонуклеотида, катализируемая Tdp1. На 5'-конце олигонуклеотида находится (5,6)-FAM - флуорофор, интенсивность флуоресценции которого возрастает при удалении тушителя. Для измерения флуоресценции использовался флуориметр POLARstar OPTIMA производства BMG LABTECH.

Реакционные смеси объемом 200 мкл содержали буфер (50 мМ Tris-HCl, рН 8.0; 50 мМ NaCl; 7 мМ меркаптоэтанол), 50 нМ олигонуклеотид и различные концентрации ингибиторов. Реакция запускалась добавлением Tdp1 до конечной концентрации 1.3 нМ. Измерения проводились в линейном диапазоне зависимости скорости реакции от времени (до 8 минут) через каждые 55 секунд. Влияние предлагаемых соединений оценивали по величине IC50 (концентрация ингибитора, при которой активность фермента снижена наполовину). Обсчет значений IC50 проводился с помощью программы MARS Data Analisys 2.0 (BMG LABTECH).

Величины IC50 для изученных соединений приведены в таблице.

Пример 24. Цитотоксичность предлагаемых соединений.

Анализ цитотоксичности предлагаемых соединений проводили на линиях клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF-7 и карциномы прямой кишки человека НСТ-116. Индуцированную соединениями клеточную гибель оценивали с помощью стандартного МТТ-теста [Mosmann, 1983] путем колориметрического измерения количества формазана, конвертированного из 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил-2Н-тетразолия бромида (МТТ) клетками, подвергшимися воздействию соединений. Клетки выращивали в среде IMDM, с 40 мкг/мл гентамицина, 100 ед/мл пенициллина, 0,1 мг/мл стрептомицина и 0,25 мкг/мл амфотерицина и в присутствии 10% эмбриональной бычьей сыворотки производства фирмы "Биолот" в атмосфере с 5% CO2. После формирования 50% монослоя в культуральную среду добавляли исследуемые препараты (объем добавляемых реагентов составляет 1/100 общего объема культуральной среды, объем DMSO 1% от конечного объема) и следили за ростом клеточной культуры в течение 3 сут. В качестве контроля использовали клетки, которые выращивали в присутствии 1% DMSO.

Токсичность соединений отсутствовала или была незначительна во всем диапазоне изученных концентраций (до 100 мкМ).

Использованная литература:

- Al Abo М, et al., Mol. Cancer Ter.2017 doi:10.1158/1535-7163.MCT-17-0110

- Alagoz M, et al., Nucleic Acids Res., 2014, 42(5):3089-103. doi: 10.1093/nar/gkt1260

- Antony, S et al., Nucleic Acids Res. 2007, 35, 4474-4484.

- Barthelmes HU, et al., J Biol Chem. 2004, 279, 55618-25565.

- Beretta GL, et al., Curr. Med. Chem. 2010, 17, 1500-1508.

- Borda MA et al., Mutat Res. 2015, 781, 37-48.

- Cortes Ledesma F, et al., Nature, 2009, 461, 674-678.

- Das BB, et al., The EMBO Journal., 2009, 28, 3667-3680.

- Dexheimer TS, et al., Anticancer Agents Med Chem. 2008, 8, 381-389.

- Dexheimer T.S. et al., J. Med. Chem. 2009, 52, 7122-7131

- El-Khamisy SF, et al., DNA Repair (Amst)., 2009, 8 760-766.

- Geenen JJJ, Clin Pharmacokinet. 2017 Oct 23. doi: 10.1007/s40262-017-0587-4. [Epub ahead of print] Review.

- Jun J.H. et al. European Journal of Pharmaceutical Sciences 2018 (111) 337-348

- Hirano R, et al., EMBO J., 2007, 26, 4732-1743.

- Huang Shar-yin N. et al., Expert Opin Ther Pat. 2011 Sep; 21(9): 1285-1292.

- Interthal H, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2001, 98, 12009-12014.

- Katyal S, et al., EMBO J., 2007, 26, 4720-1731.

- Laev S, et al., Bioorg. Med. Chem., 2016, 24, 5017-5027.

- Lu JYD, et al., PeerJ. 2017, 5:e3933. doi: 10.7717/peerj.3933

- Murai J, et al., J Biol Chem. 2012, 287, 12848-12857.

- Nguyen TX, et al., J. Med. Chem., 2012, 55, 4457-4478.

- Nivens MC, et al., Cancer Chemother Pharmacol., 2004, 53, 107-115.

- Cano L.P., et al., Steroids, 2013, 78, 982-986.

- Pommier Y. Nat. Rev. Cancer, 2006, 6, 789-802.

- Pommier Y, et al. Chem Biol., 2010, 17, 421-433.

- Zakharenko A, et al., Bioorg. Med. Chem., 2015, 23, 2044-2052.

- Zakharenko A, et al., J. Nat. Prod, 2016, 79, 2961-2967.

Применение соединения, представляющего собой производные желчных кислот общей формулы I

где R1=-ОН, -ОАс, O-СН3; R2=-Н, -ОН, -ОАс; R3 = -Н, -ОН, -ОАс, -O-СН3; R4=адамантил, -фенил, необязательно замещенный бромом, -метилом; -пиридинил, -(CH2)2-R5, где R5=фенил, замещенный двумя трет-бутильными группами, или индол, в качестве ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека (Tdp1).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединению, выбранному из группы, включающей соединения 2-8, 2-7, 3-6, 3-5, 4-12, 4-11, 8-8, 8-7, 11-16, 11-15, где абсолютная стереохимическая конфигурация соединения такая, как показано в структурных формулах, и к его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к гиодезоксихолату натрия в полиморфной форме FII, имеющему спектр дифракции рентгеновских лучей на порошке, имеющий следующие пики ± 0,20 градуса (2 тета): 6,94; 9,84; 13,92; 20,13; 23,30.

Изобретение относится к соединению формулы (I-a1) или его фармацевтически приемлемой соли. В формуле (I-a1) Z представляет собой группу формул (iv) (iv); L3 представляет собой C1-C6алкилен; R3b представляет собой водород; R3a представляет собой C1-C6алкил; -OR3b находится в бета-положении и R3a находится в альфа-положении; каждый из R2, R11a и R11b представляет собой водород; R6a представляет собой водород; Y представляет собой -O-; RZ5 представляет собой водород; каждый из RZ6 независимо представляет собой водород или C1-C6алкил.

Изобретение относится к соединению формулы (I-g) или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 выбирают из (C1-C4 алкил)-O, спирооксирана, циано, =O, нитро, (C1-C4 алкил)C(O) и HO(C1-C4 алкил)C(O); R2 является H; R3 является H; Rb означает метил; R8 является H; - - - означает необязательную дополнительную C-C связь, дающую C=C связь между C16-C17, при условии, что, если присутствует, R1 не является =O или спирооксираном.

Изобретение относится к способу лечения или предупреждения, подавления или ослабления диабета типа 2 и/или заболеваний, расстройств и состояний, представляющих собой низкую толерантность к глюкозе, резистентность к инсулину и/или гипергликемию, связанные с диабетом типа 2 у субъекта, нуждающегося в этом, включающему введение указанному субъекту терапевтически или профилактически эффективного количества соединения формулы IIIg или его фармацевтически приемлемых солей и/или стереоизомеров, предпочтительно соединений формул IIIi1 и IIIi2: IIIg в которых R1 означает Н, -ORa; R2 означает Н или галоген; R4, R5, независимо друг от друга, означают Н, -ORa, где Ra представляет собой Н; R2’ означает Н; L означает С(1-6)алкил с линейной или разветвленной цепью; X означает -COORс; Rc означает H или С(1-6)алкил; m означает от 0 до 5.

Изобретение относится к способу выделения фитостеринов из таллового пека, который заключается в омылении таллового пека щелочью в многоатомном спирте, экстракции из щелочно-спиртового раствора неомыленных веществ с помощью углеводородного растворителя с последующим удалением растворителя путем перегонки, концентрировании фитостеринов, при этом в качестве углеводородного растворителя используют смесь парафиновых углеводородов с числом углеродных атомов от 8 до 17, после проведения экстракции из экстрактного раствора выделяют бетулин путем кристаллизации при температуре от 50 до 83°C, а фитостерины в последующем концентрируют путем ректификации.

Изобретение относится к соединению Оху133, имеющему формулу I, .Изобретение также относится к биоактивной композиции, к способам лечения и к способу индукции остеобластической дифференцировки и/или ингибирования дифференцировки адипоцитов мезенхимальных стволовых клеток млекопитающих.

Изобретение относится к соединению формулы (I), имеющему основную структуру 7 бета-гидроксихолестерола в которой А представляет собой группу -(R1)n, в которой R1 представляет собой аминокислотный остаток глицина или аланина, присоединенный его С-концом, и n=1 или 2, причем R1 являются одинаковыми или разными и N-конец указанной аминокислоты замещен группой -C(O)-R2, в которой R2 представляет собой бензилоксигруппу, или группу -(R1)n, в которой R1 представляет собой остаток аминокислоты глицина или аланина, n=1 или 2 и N-конец указанной аминокислоты замещен бензилоксикарбонилом; или группу -C(O)-R6, в которой R6 представляет собой пятичленный гетероцикл, включающий 2 гетероатома кислорода, незамещенный или замещенный по меньшей мере одним неразветвленным или разветвленным C1-С6алкилом; В представляет собой группу -C(O)-R7, в которой R7 представляет собой C1-С6алкил, неразветвленный или разветвленный; или R7 представляет собой OR8, где R8 означает C1-С6алкил, неразветвленный или разветвленный.

Изобретение относится к способу получения воска и стеринов из морской звезды Patiria pectinifera. Способ включает экстракцию сырья 96% раствором этилового спирта, процедуру повторяют трижды, объединенные экстракты упаривают, затем полученный концентрат разбавляют дистиллированной водой до содержания этилового спирта 20-30%, далее полученный раствор фильтруют и пропускают через колонку с DEAE-целлюлозой, уравновешенную 30% раствором этилового спирта, посторонние примеси отмывают градиентом этилового спирта (40→55%), а фракцию, содержащую воск и стерины, элюируют с сорбента градиентом этилового спирта (65→96%); затем элюат упаривают, концентрированный остаток растворяют в 96% этиловом спирте, фильтруют, далее полученный раствор вымораживают при температуре -18 - -20°C в течение 24 ч; затем выпавший осадок центрифугируют, промывают холодным 96% этиловым спиртом, высушивают на воздухе; затем полученный белый порошок, содержащий суммарную фракцию воска и стеринов, наносят на хроматографическую колонку с силикагелем и элюируют воск гексаном, далее элюат упаривают в вакууме и сушат, затем элюируют стерины градиентом гексан → ацетон, элюат упаривают в вакууме и сушат.

Изобретение относится к биохимии. Описан способ стимулирования естественной защиты и индуцирования устойчивости к болезни, вызываемой Candidatus Liberibacter asiaticus, у цитрусовых растений (Huanglongbing), характеризующийся нанесением на растения соединения брассиностероида.

Изобретение относится к соединению, имеющему структуру формулы (I), в которой X представляет собой О, R1 представляет собой атом водорода; R2 представляет собой атом водорода; R3 представляет собой атом водорода; R4 представляет собой атом водорода; R5 представляет собой N-имидазолильную группу; R6 представляет собой гидроксильную группу; R7 представляет собой радикал формулы CnFmHo, где n равен 2, 3, 4, 5 или 6, причем m≥1 и m+o=2n+1.

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В формуле (I) представляет собой простую или двойную связь; R1 представляет собой C1-6 алкил, необязательно замещенный С1-6 алкокси или одной-двумя галогеновыми группами; R2 представляет собой водород, незамещенный C1-6 алкил или -ORA2, где RA2 представляет собой незамещенный C1-6 алкил; R3a представляет собой водород и R3b представляет собой водород; каждый из R4a и R4b в каждом случае независимо представляют собой водород или галоген, при условии, что если между C5 и C6 представляет собой простую связь, тогда водород в положении C5 и заместитель R4a, каждый независимо, представлен в альфа- или бета-конфигурации, и R4b отсутствует; каждый из R5, R6 и R7 в каждом случае независимо представляют собой водород, галоген, -NO2, -CN, -C(=O)RGA, -C(=O)ORGA, -SRGA, -S(=O)RGA, -S(=O)2RGA, -S(=O)2ORGA или C1-6 алкил, необязательно замещенный галогеном; RGA в каждом случае независимо представляет собой незамещенный C1-6 алкил; и где по меньшей мере один из R5, R6 и R7 независимо представляет собой галоген, -NO2, -CN, -C(=O)RGA, -C(=O)ORGA, -SRGA, -S(O)RGA, -S(=O)2RGA, -S(=O)2ORGA или C1-6 алкил, необязательно замещенный галогеном, где RGA представляет собой незамещенный C1-2 алкил.

Изобретение описывает соединения-пролекарства, имеющие общую структуру: Активный агент - (кислота)-(линкер) - SO2NR1R2: где R1 представляет собой Н, С1-С12алкил или С1-С12алкилС6-С10арил; hAr представляет собой С6-С10арил или 5-7-членное моноциклическое гетероциклическое кольцо или 7-10-членное бициклическое гетероциклическое кольцо, содержащее 1-4 гетероатома, выбранных из N, О и S; R2 представляет собой Н или С1-С12алкил; R1 и R2 могут быть объединены с образованием 3-7-членного кольца, содержащего до одного гетероатома; каждый R3 и R4 независимо представляет собой Н или С1-С12алкил; X и Y представляют собой Н; Z представляет собой О; и активный агент представляет собой андроген, эстроген или прогестин.

Изобретение относится к бифункциональным соединениям, которые могут найти применение в качестве модуляторов мишеневого убиквитинирования, особенно ингибиторов различных полипептидов и других белков, которые деградируются и/или иным образом ингибируются бифункциональными соединениями в соответствии с настоящим изобретением.

Изобретение относится к ингибитору активности 17α-гидроксилазы-17,20-лиазы (CYP17A1), подавляющему рост клеток карциномы простаты, представляющему собой производное прегн-17(20)-ена общей формулы (I), где R - 4',5'-дигидро-1',3'-оксазол-2'-ил- (Ia), либо бензо-[d]-оксазол-2'-ил- (Ib) Технический результат: ингибитор активности CYP17A1 общей формулы (I) может применяться при лечении рака простаты.

Изобретение относится к соединениям формулы (I), обладающим свойствами антипрогестинов, и способу лечения рака молочной железы с применением этих соединений. В общей формуле (I) X представляет собой О; R1, R2, R3 и R4 представляют собой атом водорода; R5 представляет собой радикал Y, Y представляет собой ацетил, С3-циклоалкил или пиридинил; R6 представляет собой -ОН; и R7 представляет собой радикал формулы CnFmHo, где n равно 3, m равно 2 или 3, о равно 2 или 3 и m плюс о равно 5.

Изобретение относится к производным оксима холест-4-ен-3-она формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям и оптическим изомерам, их применению в качестве цитопротекторных лекарственных средств, а также к фармацевтической композиции на их основе.

Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к N-[3-оксо-лупано-28-ил]-пиперидину формулы (1) обладающему комплексной активностью - противоопухолевой, антиметастатической, противовоспалительной и цитопротекторной.

Изобретение относится к А-секотритерпеноидам общей формулы I. Технический результат: получены новые А-секотритерпеноиды, проявляющие цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток линий НСТ 116 (колоректальная карцинома), MS (меланома), RD ТЕ32 (рабдомиосаркома).

Изобретение относится к применению соединения, представляющего собой производные желчных кислот общей формулы I, в которой R1 представляет -ОН, -ОАс, O-СН3; R2 представляет -Н, -ОН, -ОАс; R3-Н, -ОН, -ОАс, -O-СН3; R4 представляет адамантил, -фенил, необязательно замещенный бромом, -метилом; -пиридинил, -2-R5, где R5фенил, замещенный двумя трет-бутильными группами, или индол, в качестве ингибиторов фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека. Технический результат: предложено применение соединений формулы I в качестве эффективного ингибитора фермента тирозил-ДНК-фосфодиэстеразы 1 человека, которые можно использовать для разработки новых эффективных противораковых средств. 2 ил., 1 табл., 24 пр.

Наверх