Штамм лактобактерий enterococcus mundtii вкпм в-12673 - продуцент молочной кислоты и антибиотических веществ
Владельцы патента RU 2689688:
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Горский государственный аграрный университет" (RU)
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus mundtii К-ф (37), обладающий способностью продуцировать молочную кислоту и антибиотические вещества, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером В-12673. Штамм бактерий Enterococcus mundtii В-12673 может быть использован для производства пробиотических продуктов. 1 ил.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности может быть использовано в пищевой промышленности.
Известен штамм Enterococcus mundtii ВКПМ В-11828 (патент №2599430 от 2016 г.), полученный на доступных питательных средах и применяемый в качестве бактериальной закваски при приготовлении молочнокислых продуктов, характеризуемый высокой скоростью сквашивания молока.
Однако данный штамм обладает более низкой антагонистической активностью, по сравнению с предлагаемым штаммом.
Техническое решение - выделение высокопродуктивного нового местного штамма лактобактерий путем селекции.
Технический результат - получение чистой культуры молочнокислого микроорганизма Enterococcus mundtii, обладающего высокими технологическими и антагонистическими свойствами.
Для достижения данной цели использован штамм лактобактерий Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673, выделенный с поверхности травы клевера лугового из высокогорья над селением Кобань в РСО-Алания путем многократных перевивок на питательных средах.
Идентификацию штамма проводили по методике Банниковой Л.А. и методом ПЦР-диагностики.
Этапы и результаты генетических исследований.
а) Секвенирование участков последовательности, кодирующей ген 16S рРНК.
б) Анализ последовательностей гена, кодирующего 16S рРНК, построение деревьев родства.
Первичный скрининг по базе данных GenBank и RDP-II показал, что исследуемый штамм принадлежит к следующим систематическим группам Bacteria; Firmicutes; Bacilli; Lactobacillales; Enterococcaceae; Enterococcus.
По данным анализа было построено филогенетическое дерево с гомологичными штаммами.
По результатам проведенного анализа секвенсов вариабельных участков генов, кодирующих 16S рРНК и анализа филогенетического родства, построенного с использованием типовых штаммов близкородственных бактерий тестируемый штамм наиболее близок к виду Enterococcus mundtii (99%) и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ГосНИИГенетика под номером В-12673.
Свойства штамма Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673:
- грамположительные неподвижные кокки, расположенные попарно и короткими цепочками;
- эндоспоры не образуются.
- на поверхности агаризованного гидролизата молока и MRS-arapa через 24 часа при температуре 37°С образует точечные колонии.
- скорость сквашивания молока - 8-9 часов.
- предел кислотообразования - 97°Т.
- продукты, синтезируемый штаммом - молочная кислота и антибиотические вещества.
- диаметр зоны подавления роста Staphylococcus aureus - 26 мм;
- диаметр зоны подавления роста Escherichia coli - 29 мм.
Определение антибиотической активности штамма Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673 проводили на плотной питательной среде (МПА) методом диффузии в агар.
Способ, условия и состав сред для длительного хранения штамма - лиофилизация; хранение при температуре 4-6°С; питательные среды: MRS; Rogosa et. al.; молоко с мелом; молоко с дрожжевым автолизатом, глюкозой, лакмусом, печеночным экстрактом и СаСО3.
Способ, условия и состав сред для размножения штамма - при температуре 37°С - среды: MRS; обезжиренное молоко, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара.
Оптимальные условия и состав среды для ферментации - температура 37°С; среды: MRS, несоленая подсырная молочная сыворотка с содержанием не менее 4,0% сахара; молоко сельскохозяйственных животных.
Предлагаемый новый штамм Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673, выделенный с поверхности клевера лугового, произрастающего в высокогорье над селением Кобань в РСО-Алания, хорошо приспособлен к местным условиям. Неприхотлив в культивировании и хранении, обладает низкой предельной кислотностью и средней скоростью свертывания молока, что позволяет повысить экономическую эффективность при производстве (за счет увеличения срока годности готовой продукции).
Штамм проявляет высокую антагонистическую способность по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре.
Предлагаемый новый штамм лактобактерий Enterococcus mundtii ВКПМ В-12673 обладает высокой биологической активностью и является основой для получения пробиотической закваски.
Штамм лактобактерий ВКПМ В-12673 - продуцент молочной кислоты, антибиотических веществ - бактериоцинов и компонент закваски для производства пробиотических продуктов.
