Безыгольный инъектор и способ введения днк в целевую область инъекции с его применением

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к способу введения ДНК, содержащей участок, кодирующий опухолевый антиген, в организм живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора. Безыгольный инъектор выполнен с возможностью инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения инъекционной иглы. Инъектор включает в себя блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК. Инъектор имеет устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой. Устройство воспламенения содержит продукт горения, сжижаемый за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого является сниженным относительно количества, представленного до сжижения. Инъектор включает блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции. Инъектор содержит поршень и плунжер. Температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК в результате горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК. Техническим результатом является продуцирование антитела, вызывание продуцирования которого является благоприятным, и не продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, то есть, безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в целях селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора. 4 з.п. ф-лы, 6 ил.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к безыгольному инъектору и способ введения ДНК, основанному на его применении.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] В случае безыгольного инъектора, который выполняет инъекцию без применения какой-либо инъекционной иглы, иногда выбирают такую структуру, чтобы инъекционный компонент осуществлял выпуск в результате приложения давления к камере для размещения, в которой размещен инъекционный раствор, посредством сжатого газа или пружины. Например, в случае безыгольного инъектора, описанного в патентной литературе 1, выбрана следующая структура. А именно, на внутренней стороне основного блока инъектора формируют множество сопловых отверстий, и поршень, который приводят в действие для осуществления выпуска, приспособлен соответствующим образом для каждого из сопловых отверстий. На основании данной структуры предполагают реализовать однородное инъецирование в отношении цели путем одновременного впрыскивания инъекционного раствора через множество сопловых отверстий.

[0003] Кроме того, известна такая форма, в которой сжатый газ применяют в качестве источника энергии для выпуска инъекционного раствора посредством безыгольного инъектора. Например, в случае безыгольных инъекторов, описанных в патентной литературе 2 и 3, иллюстрируется такая форма со сжатием, в которой мгновенно выполняют сжатие в большой степени на начальной стадии выпуска, и затем сила сжатия постепенно уменьшается в течение от 40 до 50 мс.

[0004] С другой стороны, в патентной литературе 4 описан способ для вызывания иммунного ответа в отношении белкового антигена, предназначенного для вызывания in vivo, посредством применения безыгольного устройства для инъекций эмиссионного типа в целях введения ДНК, препарата ДНК и/или другого полинуклеотида для осуществления введения генетической вакцины, переноса генов и генной терапии. В частности, описан способ, в котором иммунный ответ в отношении полинуклеотидной вакцины вызывают в животном посредством применения безыгольного инъектора (производства BIOJECTOR (торговая марка)). Кроме того, в его типовом варианте осуществления описано, что когда ДНК-вакцину вводили в мускулы подопытного животного посредством применения безыгольного инъектора, наблюдался иммунный ответ, который был более значимым по сравнению со случаем применения оборудованного иглой инъектора.

[0005] Однако, при иммунном ответе в некоторых случаях продуцируется некоторое антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным. Неизвестны какие-либо ДНК или препараты ДНК, а также способы их введения в живой организм, при которых продуцируется антитело, вызывание продуцирования которого является благоприятным, тогда как антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, не продуцируется.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПАТЕНТНАЯ ЛИТЕРАТУРА

[0006] Патентная литература 1: выложенная заявка на патент Японии No. 2004-358234

Патентная литература 2: патент США No. 5399163

Патентная литература 3: публикация заявки на патент США No. 2005/0010168

Патентная литература 4: выложенная заявка на патент Японии No. 2002-511396 (PCT)

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ЗАДАЧИ, КОТОРЫЕ РЕШАЕТ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0007] Настоящее изобретение было сделано с учетом обстоятельств, описанных выше, и его целью является предоставление такого безыгольного инъектора, чтобы продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого является благоприятным, и не продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, то есть, безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в целях селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора.

СРЕДСТВА ДЛЯ РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ

[0008] В результате тщательных исследований изобретатели по настоящему изобретению обнаружили, что безыгольный инъектор, описанный ниже, может достичь приведенной выше цели в результате уделения вниманию характеристике продукта горения, создаваемого порошковым воспламенителем, а также давлению, прилагаемому к раствору ДНК посредством воспламенения, и температуре продукта горения, посредством применения устройства воспламенения, основанного на применении порошкового воспламенителя для безыгольного инъектора, в результате чего изобретатели выполнили настоящее изобретение. Настоящее изобретение включает в себя следующее.

[0009] <1> Безыгольный инъектор для инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения какой-либо инъекционной иглы, при этом безыгольный инъектор включает в себя:

блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК;

устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой, и продукт горения является сжижаемым за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения, или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого снижено относительно количества, представленного до сжижения; и

блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции, при этом:

температура предварительно заданного продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК.

<2> Безыгольный инъектор в соответствии с <1>, в котором температура продукта горения, обеспечиваемая в течение сжатия, изменяется до температуры близкой к комнатной температуре в пределах 10 мс после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска.

<3> Способ введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в организм живого млекопитающего (за исключением человека) посредством применения безыгольного инъектора, в соответствии с определенным в <1> или <2>.

<4> Способ по п. <3>, в котором ДНК находится в форме вакцины.

<5> Способ по п. <3> или <4>, в котором млекопитающее (за исключением человека) является мышью.

<6> Способ по любому из п. <3>-<5>, в котором антиген представляет собой антиген NY-ESO-1.

ПОЛЕЗНЫЙ ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0010] Согласно настоящему изобретению является возможным предоставление безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген для селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего, посредством применения безыгольного инъектора.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0011] На фиг. 1 показана схематическая структура инъектора согласно первому изобретению по настоящему изобретению.

На фиг. 2 показан график, иллюстрирующий зависимость силы выпуска раствора ДНК от времени в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 3A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между размером опухоли и числом дней, прошедших после трансплантации опухоли, в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 3B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между размером опухоли и числом дней, прошедших после трансплантации опухоли, в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 4A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 4B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 5A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 5B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 6A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

На фиг. 6B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и поглощением на 450 нм (OD450) в варианте осуществления второго изобретения по настоящему изобретению.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ДЛЯ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0012] Настоящее изобретение включает в себя первое изобретение, которое относится к изобретению безыгольного инъектора, и второе изобретение, которое относится к изобретению способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в организм живого млекопитающего (за исключением человека) посредством применения безыгольного инъектора.

[0013] <Первое изобретение>

Первое изобретение по настоящему изобретению заключается в безыгольном инъекторе для инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения какой-либо инъекционной иглы; безыгольный инъектор включает в себя блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК; устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения такой характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой, и продукт горения сжижается за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения, или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого снижено по сравнению с количеством, представленным до сжижения; и блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжимаемого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции; при этом температура продукта горения, которая обеспечивается в течение сжатия, изменяется до температуры близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс после того, как давление, которое прилагается к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК.

[0014] В инъекторе согласно первому изобретению по настоящему изобретению, термин "сторона переднего конца" означает сторону, на которой расположено выпускное отверстие для выпуска целевого вещества инъекции из инъектора, и термин "сторона ближнего конца" означает сторону, которая является противоположной стороне переднего конца. Эти термины не относятся к какому-либо заданному месту или какому-либо заданному положению в смысле какого-либо ограничения.

[0015] В инъекторе согласно первому изобретению по настоящему изобретению блок привода использует в качестве энергии выпуска энергию горения топлива или взрывчатого вещества, воспламеняемого устройством воспламенения. Следует отметить, что когда энергия горения топлива используется, например, в качестве энергии выпуска, топливо может представлять собой любое топливо из топлива, содержащего цирконий и перхлорат калия (ZPP), топлива, содержащего гидрид титана и перхлорат калия (THPP), топлива, содержащего титан и перхлорат калия (TiPP), топлива, содержащего алюминий и перхлорат калия (APP), топлива, содержащего алюминий и оксид висмута (ABO), топлива, содержащего алюминий и оксид молибдена (AMO), топлива, содержащего алюминий и оксид меди (ACO), и топлива, содержащего алюминий и оксид железа (AFO), или топлива, состоящего из комбинации множества указанных видов топлива. Характеристики этих видов топлива следующие. Продукт их горения не содержит газовый компонент при комнатной температуре, даже если продукт горения представляет собой газ в высокотемпературном состоянии. Таким образом, продукт горения сжижается непосредственно после воспламенения. Соответственно, может допускаться изменение температуры предварительно заданного продукта горения, которая обеспечивается в течение сжатия, до значения около комнатной температуры в течение короткого периода времени после того, как давление, которое прилагается к раствору ДНК в за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начального пикового давления выпуска, в течение процесса сжатия для выпуска раствора ДНК. Время (период времени) обычно находится в пределах 20 мс и, предпочтительно, в пределах 10 мс. В результате, как описано ниже, когда ДНК, содержащую участок, кодирующий антиген, вводят в живой организм, существует возможность селективного вызывания иммунного ответа. Кроме того, когда энергия, выработанная продуцирующим газ веществом, используется в качестве энергии выпуска, также существует возможность использования в качестве продуцирующего газ вещества одноосновного бездымного топлива, а также множества продуцирующих газ веществ, используемых в качестве генератора газа для воздушных подушек безопасности и генератора газа для натяжителя ремня безопасности.

[0016] Энергия выпуска, которая выдается блоком привода, передается через поршень на плунжер, и плунжер перемещается в камере загрузки. Соответственно, раствор ДНК, который размещен в камере загрузки, вытесняется вдоль канала, формируемого блоком горловины. Раствор ДНК в итоге выпускается из выпускного отверстия в целевую область инъекции.

[0017] В данном контексте, в случае инъектора согласно первому изобретению по настоящему изобретению, раствор ДНК не размещают в камере загрузки с самого начала. Раствор размещают путем засасывания раствора ДНК в камеру загрузки с помощью горловины, имеющей выпускное отверстие. Таким образом реализуют структуру, которой требуется операция загрузки для выполнения загрузки в камеру загрузки. Соответственно, существует возможность инъецирования произвольного требуемого раствора ДНК. Ввиду этого, в случае инъектора согласно первому изобретению по настоящему изобретению, шприцевой блок и основной блок инъектора соединены съемным образом.

[0018] Ниже будет приведено объяснение со ссылкой на чертеж инъектора 1 по первому варианту осуществления первого изобретения по настоящему изобретению. Структура или конструкция приведенного ниже варианта осуществления представлена в качестве примера, и первое изобретение по настоящему изобретению не ограничено структурой или конструкцией данного варианта осуществления. Следует отметить, что «сторона переднего конца» и «сторона ближнего конца» используются как термины для представления относительного взаимного расположения в продольном направлении инъектора 1. «Сторона переднего конца» представляет положение, которое отклонено в сторону переднего конца инъектора 1 в соответствии с описанным ниже, то есть, отклонено в направлении выпускного отверстия 31a. «Сторона ближнего конца» представляет направление, противоположное «стороне переднего конца» в продольном направлении инъектора 1, то есть, направление на стороне блока привода 7.

[0019](Структура инъектора 1)

На фиг. 1 показана схематическая структура инъектора 1, иллюстрирующая вид в сечении, также сделанном вдоль продольного направления инъектора 1. Инъектор 1 сформирован таким образом, что узел инъектора 10, который получают путем сборки как единого целого подузла, сформированного из шприцевого блока 3 и плунжера 4, и подузла, сформированного основным блоком инъектора 6, поршня 5 и блока привода 7, прикреплен к корпусу (корпусу инъектора) 2.

[0020] Как описано выше, узел инъектора 10 сформирован таким образом, что узел инъектора 10 может быть отсоединен от корпуса 2. Раствор ДНК загружают в камеру загрузки 32, которая размещена между шприцевым блоком 3 и плунжером 4, входящим в состав узла инъектора 10. Таким образом, узел инъектора 10 представляет собой блок, который используют однократно и выбрасывают каждый раз после выпуска раствора ДНК. С другой стороны, батарея 9, которая обеспечивает электропитанием воспламенитель 71, входящий в состав блока привода 7 узла инъектора 10, входит в состав части корпуса 2. Электропитание подается из батареи 9 через проводное соединение между электродом, размещенным на стороне корпуса 2, и электродом, размещенным на стороне блока привода 7 узла инъектора 10, в соответствии с операцией, выполняемой пользователем путем нажатия кнопки 8, размещенной на корпусе 2. Следует отметить, что как для электрода, размещенного на стороне корпуса 2, так и для электрода, размещенного на стороне блока привода 7 узла инъектора 10, форма и расположение обоих электродов спроектированы таким образом, чтобы оба электрода автоматически приводились в контакт друг с другом, когда узел инъектора 10 прикрепляют к корпусу 2. Кроме того, корпус 2 является блоком, который может быть использован многократно, при условии что электроэнергия, которая подается к блоку привода 7, сохраняется в батарее 9. Следует отметить, что касается корпуса 2, когда электроэнергия батареи 9 исчерпана, можно заменить только батарею 9, а корпус 2 можно продолжать использовать.

[0021] Кроме того, любой дополнительный топливный компонент не обязательно размещают конкретно в основном блоке инъектора 6, показанном на фиг. 1. Однако, в целях настройки передачи или изменения давления, прилагаемого к инъецируемому раствору посредством поршня 5, продуцирующее газ вещество и т.п., которое продуцирует газ в результате горения посредством продукта горения, продуцируемого посредством воспламенения топлива в устройстве воспламенения 71, также может быть размещено в воспламенителе 71 или в сквозном отверстии в основном блоке инъектора 6. Структура, в которой продуцирующее газ вещество размещают в воспламенителе 71, находится в пределах ранее известной методики, в соответствии с изложенным, например, в международной публикации No. 01-031282 и выложенной заявке на патент Японии No. 2003-25950. Кроме того, пример продуцирующего газ вещества поясняется одноосновным бездымным топливом, состоящим на 98% по массе из нитроцеллюлозы, на 0,8% по массе из дифениламина и на 1,2% по массе из сульфата калия. Кроме того, также существует возможность использования множества продуцирующих газ веществ, используемых в качестве генератора газа для воздушных подушек безопасности и генератора газа для натяжителя ремня безопасности. Также существует возможность изменения времени завершения горения продуцирующего газ вещества путем настройки измерений, размера и формы, в частности, формы поверхности продуцирующего газ вещества, размещенного в сквозном отверстии. Соответственно, передача давления, которое будет приложено к инъекционному раствору, может представлять собой требуемую передачу, то есть, передачу, с помощью которой инъекционный раствор может быть должным образом доставлен к целевой области инъекции. В первом изобретении по настоящему изобретению продуцирующее газ вещество и т.п., которое используется опционально, также включено в блок привода 7.

[0022] <Второе изобретение>

Второе изобретение по настоящему изобретению относится к способу введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в организм живого млекопитающего (за исключением человека) посредством применения безыгольного инъектора по первому изобретению.

[0023](Антитело)

Как указано в описанных ниже примерах, когда выполняют способ введения, в результате продуцируется антитело, вызывание продуцирования которого является благоприятным, тогда как антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, не продуцируется. То есть, существует возможность селективного вызывания иммунного ответа. Тип, подтип и т.п., соответственно, антитела в соответствии с описанным выше специально не ограничены. Однако в данном случае объяснение будет сделано на примерах антитела IgG1 и антитела IgG2.

[0024] Известно, что Т-клетки-хелперы 0 типа (клетки Th0), которые представляют собой клетки-предшественники Т-клеток-хелперов, дифференцируются в Т-клетки-хелперы 1 типа (клетки Th1) или Т-клетки-хелперы 2 типа (клетки Th2), при этом клетки Th1 способствуют клеточному иммунитету, и клетки Th2 способствуют гуморальному иммунитету. Иммунная система устанавливается посредством равновесия между клетками Th1 и клетками Th2.

[0025] Клетки Th1 участвуют в активации цитотоксических Т-клеток (Т-клетки-киллеры, CTL), которые обеспечивают защиту от инфекций и оказывают иммунное воздействие на раковые клетки. Ввиду этого также разработана иммунотерапия против раковых клеток, в которой используются клетки Th1. Однако, когда имеется избыток клеток Th1 и имеется недостаток клеток Th2, возникает аутоиммунное заболевание, в котором также подвергаются атаке аутологичные клетки.

С другой стороны, клетки Th2 особенно влияют на B-клетки, которые продуцируют антитело. Клетки Th2 могут демонстрировать иммунный эффект в широком диапазоне в живом организме. Однако клетки Th2 также участвуют в аллергическом воспалении, и клетки Th2 секретируют различные интерлейкины. В результате B-клетки дифференцируются в клетки, продуцирующие антитело IgE, и/или B-клетки способствуют дегрануляции и активации эозинофилов. Известно, что B-клетки в результате вызывают аллергические заболевания, включая, например, атопическую бронхиальную астму и аллергический ринит. Ввиду этого является нежелательным, чтобы имелся недостаток клеток Th1 и избыток клеток Th2.

Как описано выше, в живом организме состояние, в котором одни из клеток Th1 и клеток Th2 являются преобладающими, не является благоприятным, и является благоприятным наличие равновесия. Однако в случае терапии рака является благоприятным, чтобы имелся избыток клеток Th1 и недостаток клеток Th2, как в случае терапии, разработанной в соответствии с описанным выше.

[0026] Избыток/недостаток можно определить путем измерения титров антител для антител, в процессе продуцирования которых специфично участвуют соответствующие клетки, до продуцирования антител. Типы антител, в продуцировании которых специфично участвуют соответствующие клетки, являются известными. Однако, например, известно, что клетки Th1 участвуют в продуцировании антитела IgG2 (которое может представлять собой, например, антитело IgG2a, принадлежащее к его подклассу), и клетки Th2 участвуют в продуцировании антитела IgG1. Таким образом, в терапии против рака, в которой является предпочтительным, чтобы имелся избыток клеток Th1 и недостаток клеток Th2, является предпочтительным детектирование антитела IgG2 и отсутствие детектирования антитела IgG1, или чтобы антитело IgG1 не присутствовало в эффективном количестве, даже если антитело IgG1 было детектировано.

[0027] Любой известный способ, который включает, например, способ ELISA, может служить примером способа для обнаружения антитела. Он будет кратко объяснен ниже. Сначала очищенный или частично очищенный антиген адсорбируют на твердофазной поверхности 96-луночного планшета для ELISA и т.п., при этом твердофазная поверхность, на которой не адсорбируется антиген, покрыта белком, не имеющим отношение к антигену, например, бычьим сывороточным альбумином (далее в настоящем описании обозначаемом "BSA"). После промывания поверхности, поверхность приводят в контакт с образцом, подвергаемым поэтапному разведению, в качестве первого антитела, и моноклональное антитело, содержащееся в образце, связывается с антигеном. Далее меченное ферментом антитело против антитела мыши добавляют в качестве второго антитела, с тем чтобы антитело связалось с антителом мыши. После промывки добавляют субстрат для фермента с целью измерения, например, изменения поглощающей способности, вызываемого формированием цвета, основанным на разложении субстрата. Таким образом вычисляют титр антитела.

[0028](Млекопитающее)

Млекопитающее конкретно не ограничивают. Однако, примером млекопитающего является, например, человек, мышь, крыса, морская свинка, хомяк, бык, козел, овца, обезьяна, собака и кошка. Предпочтительно, млекопитающее является человеком, мышью, крысой, быком, собакой или кошкой.

[0029](ДНК)

Не является необходимым, чтобы ДНК во втором изобретении по настоящему изобретению была зафиксирована или иммобилизована на коллоидном золоте, в отличие от обычного способа с применением генной пушки и биобаллистической пушки. Следовательно, подготовка является чрезвычайно легкой по сравнению с обычной методикой. Кроме того, ДНК может присутствовать, например, в стерильной воде и стерильном растворителе, а также в растворителе, который может быть использован для получения иммобилизующего ДНК раствора коллоидного золота, который используется в обычном способе с применением генной пушки и т.п., при условии что ДНК является стабильной и не прилагается вредного воздействия, такого как разрушение клеток, в которые ДНК должна быть введена. Кроме того, также не является необходимым наличие, например, эксципиента и адъюванта, в отличие от любых ДНК-вакцин.

[0030] Кроме того, для ДНК по второму изобретению по настоящему изобретению, ее форма специально не ограничена, при условии что ДНК сконструирована таким образом, что ДНК содержит участок, кодирующий антиген для продуцирования антитела в живом организме и ДНК может экспрессировать предварительно заданный антиген, когда ДНК вводят в живой организм (в клетки) млекопитающего.

Например, в качестве иллюстрации, ДНК может быть сконструирована в форме, в которой ДНК содержит экспрессионную кассету или экспрессионный вектор. Кроме того, например, ДНК может быть поставлена под управление промотора, который подходит для вводимой части и типа млекопитающего, в которого ДНК должна быть введена. Кроме того, также допускается содержание одного или более энхансеров в целях повышения экспрессии антигена.

[0031] Экспрессионный вектор конкретно не ограничен, при условии что предварительно заданный антиген экспрессируется, когда экспрессионный вектор вводят в живой организм (в клетки) млекопитающего. Например, иллюстрацией является плазмидный вектор pcDNA3.1(-) и т.п., который представляет собой экспрессионный вектор млекопитающих. Имеющиеся плазмидные векторы известны специалистам в данной области техники.

[0032] Далее может быть выполнено субклонирование для экспрессионного вектора и рекомбинантного вектора в соответствии с любым известным способом. В данной процедуре прокариотом-хозяином может являться, например, Escherichia coli, Bacillus subtilis и бактериальный штамм, принадлежащий к роду Pseudomonas. В этом случае в качестве промотора можно использовать триптофановый промотор, промотор PL, промотор lac и промотор tac. В качестве маркерного гена можно использовать, например, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Кроме того, способ для извлечения экспрессионного вектора из клеток хозяина также может соответствовать любому способу, известному в технике.

[0033] (Антиген)

ДНК по второму изобретению по настоящему изобретению содержит участок, кодирующий антиген для продуцирования антитела в живом организме, когда ДНК вводят в живой организм (в клетки) млекопитающего.

Антиген по второму изобретению по настоящему изобретению содержит белок, который содержит аминокислотную последовательность, в которой один или несколько, например, от 1 до 10 и, предпочтительно, от 1 до 5 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности антигена заменены, удалены, добавлены и/или вставлены, и которая является функционально эквивалентной антигену, то есть, белок, который обладает активностью антигена. Кроме того, допускается использование полной аминокислотной последовательности антигена. Однако, допускается использование части (в частности, эпитопа), которая, как известно, обладает антигенными свойствами. Таким образом, ДНК, описанная выше, также включает ДНК, которая содержит область, кодирующую белок в соответствии с описанным выше. Кроме того, также допускается использование последовательности оснований, не содержащей интроны, такой как кДНК.

Следует отметить, что является известным, что белок, который имеет аминокислотную последовательность, модифицированную посредством удаления, добавления и/или замены на любую другую аминокислоту, в отношении одного или множества аминокислотных остатков относительно определенной аминокислотной последовательности, сохраняет биологическую активность.

[0034] Антиген конкретно не ограничен, при условии что антитело против антигена продуцируется в живом организме млекопитающего, когда антиген вводят в форме ДНК в живой организм млекопитающего. Однако, антиген предпочтительно представляет собой опухолевый антиген.

В данном случае "опухолевый антиген" означает, что антиген появился недавно, например, не является антигеном гистосовместимости или специфичным для органа/ткани антигеном, полученным материнским клетками при раковом перерождении клеток, и антиген детектируется иммунологическим способом. Опухолевый антиген включает специфичный для опухоли антиген (антиген, который существует только в опухолевых клетках и не обнаруживается в других здоровых клетках) и ассоциированный с опухолью антиген (антиген, который существует в другом органе/ткани или здоровых клетках других типов/других линий, и/или который экспрессируется в процессе роста/дифференциации).

[0035] Тип опухолевого антигена по второму изобретению по настоящему изобретению конкретно не ограничен. Однако, опухолевый антиген предпочтительно представляет собой антиген NY-ESO-1.

ДНК, которая кодирует антиген NY-ESO-1, относится, например, к ДНК, которая кодирует аминокислотную последовательность человеческого антигена NY-ESO-1, в случае человеческого антигена NY-ESO-1. Кроме того, аналогично описанному выше, ДНК также включает ДНК, кодирующую белок, который содержит аминокислотную последовательность, в которой один или несколько, например, от 1 до 10 и, предпочтительно, от 1 до 5 аминокислотных остатков аминокислотной последовательности заменены, удалены, добавлены и/или вставлены, и которая является функционально эквивалентной человеческому антигену NY-ESO-1, состоящему из данной аминокислотной последовательности, то есть, белку, который обладает такой же активностью, как человеческий антиген NY-ESO-1.

Следует отметить, что антиген предпочтительно представляет собой антиген, происходящий из вида животных, в которой должна быть введена ДНК. Например, когда введение выполняется в человека, является предпочтительным использование человеческого антигена.

[0036] Путь введения ДНК конкретно не ограничен. Однако, является предпочтительным, чтобы путь введения являлся парентеральным. Примерами путей введения являются, например, внутривенный, внутриартериальный, подкожный, внутрикожный, внутримышечный или внутрибрюшинный путь. Предпочтительно, путь введения представляет собой подкожный путь.

Количество вводимой ДНК отличается в зависимости, например, от типа и степени заболевания, различий в поле, возрасте, массе тела млекопитающего, а также от маршрута введения. Однако количество вводимой ДНК конкретно не ограничено, при условии что демонстрируется эффект по второму изобретению по настоящему изобретению. Количество вводимой ДНК обычно составляет от 0,001 мкг до 1000 мг, предпочтительно, от 0,01 мкг до 10 мг, и, более предпочтительно, от 0,1 мкг до 100 мкг за однократное введение.

ДНК также может использоваться в комбинации с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. ДНК могут вводить одновременно с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. Альтернативно, ДНК могут вводить через некоторый промежуток времени. Однако, любой порядок введения может применяться без возникновения проблем.

[0037] (ДНК-вакцина)

ДНК по второму изобретению по настоящему изобретению может иметь форму вакцины, то есть, ДНК-вакцины, в результате соответствующего применения известного способа для формирования вакцины.

В данном случае ДНК может быть смешана, например, с носителем, использование которого допускается для формирования фармацевтической композиции (например, изотонический раствор, содержащий физиологический раствор, глюкозу и другое вспомогательное вещество, в качестве которого можно указать, например, D-сорбитол, D-маннозу, D-маннитол и хлорид натрия, и подходящее вспомогательное вещество для растворения, например, спирт, в частности, этанол, многоатомный спирт, например, пропиленгликоль и полиэтиленгликоль, и неионное поверхностно-активное вещество, например, полисорбат 80 (TM) и HCO-50 могут быть указаны в качестве примеров, но не ограничены указанным), подходящим эксципиентом и адъювантом, с тем чтобы из ДНК можно было сформировать фармацевтическую композицию, готовую к применению.

[0038] Кроме того, ДНК-вакцина может содержать фармацевтически приемлемый носитель для приготовления эксципиента или носитель, использование которого допускается для формирования фармацевтической композиции. Также допускается содержание биологически совместимого материала, включая, например, силикон, коллаген и желатин. Кроме того, также допускается использование эмульсии, содержащей различные адъюванты. Известно множество адъювантов, и специалисты в данной области техники могут легко выбрать подходящий. Кроме ТОО, в дополнение к адъюванту, описанному выше, также допускается содержание одной или двух, или более добавок для фармацевтической композиции, выбранных, например, из разбавителя, отдушки, антисептика или консерванта, эксципиента, измельчителя, смазывающего вещества, связывающего вещества, эмульгатора и пластификатора.

[0039] Количество вводимой ДНК отличается в зависимости, например, от типа и степени заболевания, различий в поле, возрасте, массе тела млекопитающего, а также от маршрута введения. Однако количество вводимой ДНК конкретно не ограничено, при условии что демонстрируется эффект по второму изобретению по настоящему изобретению. Количество вводимой ДНК обычно составляет от 0,001 мкг до 1000 мг, предпочтительно, от 0,01 мкг до 10 мг, и, более предпочтительно, от 0,1 мкг до 100 мкг за однократное введение.

[0040] ДНК-вакцина также может использоваться в комбинации с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. ДНК-вакцину могут вводить одновременно с другими медикаментами или лекарственными препаратами и т.п. Альтернативно, ДНК-вакцину могут вводить через некоторый промежуток времени. Однако, любой порядок введения может применяться без возникновения проблем.

ПРИМЕРЫ

[0041] Ниже настоящее изобретение будет объяснено более конкретно в отношении примеров. Однако настоящее изобретение не ограничено примерами, описанными ниже, без отклонения от его сущности и существенных характеристик.

[0042] (Продуцирование плазмидной ДНК)

кДНК человеческого гена NY-ESO-1 была куплена у Origene (Cat#: SC303002), и последовательность гена была субклонирована в pcDNA3.1(-) (Life Technologies) в соответствии с известным способом.

[0043] (Опухолевые клетки)

Клетки CT26, которые стабильно экспрессировали человеческий белок NY-ESO-1, были использованы в качестве опухолевых клеток для трансплантации опухоли, описанной ниже.

Клетки были приготовлены в соответствии со следующей процедурой. Культивированный штамм клеток колоректального рака мыши CT26 промывали PBS, после чего проводили отшелушивание с использованием PBS, содержащего 0,5% трипсина, и восстанавливали с использованием среды RPMI1640, содержащей 10% FBS. После центрифугирования (1200 об/мин, 5 минут, 4°C) супернатант удаляли. Клетки дважды промывали средой OPTI-MEM и культивировали в течение ночи в среде. На следующий день плазмиду со встроенным человеческим геном NY-ESO-1 вводили путем использования реагента для трансфекции Lipofectamine 2000 (Life Technologies), после чего проводили культивирование. Клетки CT26 с введенным геном отшелушивали и восстанавливали посредством обработки трипсином. Клетки культивировали в течение 10 дней в среде RPMI1640, содержащей 10% FBS, содержащий 350 мкг/мл G418, и затем выполняли моноклонирование посредством предельного разведения. Устойчивые клетки CT26, стабильно экспрессирующие человеческий белок NY-ESO-1, культивировали в среде RPMI1640, содержащей 10% FBS.

[0044] [Пример 1] (Оценка силы выпуска безыгольного инъектора)

35 мкл раствора ДНК (растворитель: PBS, конечная концентрация: 1 мкг/мкл) загружали в безыгольный инъектор, показанный на фиг. 1 (диаметр горловины: диаметр 0,1 мм) для оценки давления (силы выпуска) в инъекторе с момента сжатия раствора ДНК, производимого за счет горения порошкового воспламенителя, до состояния, представленного после выпуска. 35 мг топлива (ZPP), содержащего цирконий и перхлорат калия, использовали в качестве топлива.

Силу выпуска измеряли посредством приведенного ниже способа, аналогичного способу измерения, описанному в выложенной заявке на патент Японии No. 2005-21640. То есть, силу выпуска прилагали рассредоточенным образом к диафрагме датчика нагрузки, расположенного в направлении хода потока относительно горловины. Выход из датчика нагрузки дискретизировали или собирали с помощью устройства сбора и отображения данных через усилитель обнаружения, и выходные данные отображали и сохраняли в качестве величины силы выпуска (N) с течением времени.

На фиг. 2 показан график, иллюстрирующий зависимость силы выпуска раствора ДНК от времени. Было обнаружено, что давление возвращалось к давлению, обеспеченному до сжатия, в течение чрезвычайно короткого периода времени после того, как давление, которое было приложено к раствору ДНК, достигало начальной пиковой силы выпуска.

[0045] (Противоопухолевый тест)

[Пример 2-1 (безыгольный инъектор)] 35 мкл раствора ДНК (растворитель: PBS, конечная концентрация: 1 мкг/мкл) загружали в безыгольный инъектор, использованный в описанном выше примере 1, и инъекцию выполняли в побритую правую заднюю часть самки мыши BALB/c (возраст 8 недель, Japan SLC). День первого введения обозначался как день 0, и второе введение выполняли на 8 день.

[0046] На 16 день клетки штамма клеток колоректального рака мыши CT26, в которые был стабильно внедрен ген NY-EXO-1, культивируемые в кювете T75 (Nunc), промывали PBS. После этого клетки отшелушивали с использованием PBS, содержащего 0,5% трипсина, и восстанавливали с использованием 8 мл среды RPMI1640, содержащей 10% FBS. После центрифугирования (1200 об/мин, 5 минут, 4°C) супернатант удаляли. Клетки дважды промывали средой RPMI1640, и клетки ресуспендировали в среде RPMI1640 в концентрации 1×106 клеток/100 мкл. Подкожную трансплантацию выполняли в количестве 100 мкл/субъект в побритую правую часть живота самки мыши BALB/c.

[0047] После трансплантации размер трансплантированной опухоли (длинный диаметр (большая ось) и короткий диаметр (малая ось)) измеряли с течением времени с помощью электронного штангенциркуля. Следует отметить, что в примере 2-1 эксперимент проводили независимо для шести субъектов.

[0048] [Сравнительный пример 2-1 (инъецирование с применением иглы)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 2-1, за исключением того, что для инъекции применяли оборудованный иглой инъектор. Следует отметить, что в сравнительном примере 2-1 эксперимент проводили независимо для пяти субъектов.

[0049] [Сравнительный пример 2-2 (обычная генная пушка)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 2-1, за исключением того, что для инъекции применяли генную пушку (Helios Gene Gun System (Bio-Rad)). Следует отметить, что давление газа в течение инъецирования составляло от 2413 до 2758 килопаскалей (кПа). Плазмидную ДНК вводили в количестве 1 мкг/мышь в форме, покрытой 1 мкм частицами золота (Bio-Rad). Кроме того, в сравнительном примере 2-2 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.

[0050] [Сравнительный пример 2-3 (контроль)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 2-1, за исключением того, что инъекцию не выполняли. Следует отметить, что в сравнительном примере 2-3 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.

[0051] На фиг. 3A показаны графики, иллюстрирующие зависимость измеренного изменения размера опухоли от времени в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 3B показан график, иллюстрирующий изменение среднего значения размера опухоли в соответствующих примерах.

Согласно результатам, было обнаружено, что в случае безыгольного инъецирования увеличение опухоли не становилось меньшим по сравнению с применением обычной генной пушки, но увеличение опухоли становилось значительно меньшим по сравнению с контрольной группой и инъекцией с использованием иглы.

[0052] (Измерение титра антител, тест 1)

[Пример 3-1 (безыгольная инъекция)] 35 мкл раствора ДНК (растворитель: PBS, конечная концентрация: 1 мкг/мкл) загружали в безыгольный инъектор, использованный в описанном выше примере 1, и инъекцию выполняли в побритую правую заднюю часть самки мыши BALB/c (возраст 8 недель, Japan SLC). День первого введения обозначался как день 0, и второе введение выполняли на 8 день.

[0046] На 16 день у мыши собирали кровь и размещали стационарно на ночь при 4°C. После этого выполняли центрифугирование (10000 об/мин, 5 минут) для разделения и получения сыворотки.

[0054] Титр антител для антитела против человеческого NY-ESO-1 (pan-IgG), присутствовавшего в полученной сыворотке, измеряли посредством метода ELISA. Следует отметить, что в примере 3-1 эксперимент проводили независимо для шести субъектов.

Концентрацию белка NY-ESO-1 (Origene, Cat# TP313318) доводили до 0,4 нг/мл, и белок NY-ESO-1 добавляли в 96-луночный планшет с плоским дном MaxiSorp (Nunc) в количестве 50 мкл/лунку и размещали стационарно на ночь при 4°C. Раствор антитела удаляли посредством декантации, после чего выполняли промывание четыре раза отмывочным буфером (PBS, содержащий 0,05% твин 20). Блокирующий буфер (PBS, содержащий 1% BSA) добавляли в количестве, составляющем 200 мкл/лунку, и смесь размещали стационарно на 1 час при комнатной температуре. Образец сыворотки поэтапно разводили в блокирующем буфере. Блокирующий буфер удаляли посредством декантации, и разведенную сыворотку или блокирующий буфер (пустая лунка) добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку, после чего размещали стационарно на 2 часа при комнатной температуре. Разведенную сыворотку удаляли посредством декантации, после чего выполняли промывание четыре раза отмывочным буфером. HRP-меченное антитело против мышиного IgG разводили в 5000 раз в блокирующем буфере, который добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку, и смесь размещали стационарно на 1 час при комнатной температуре. Раствор антитела удаляли посредством декантации, после чего выполняли промывание четыре раза отмывочным буфером. После полного удаления отмывочного буфера раствор TMB добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку. После стационарного размещения на 3 минуты при комнатной температуре, 0,18 M серной кислоты добавляли в количестве, составляющем 100 мкл/лунку, в целях измерения поглощающей способности на 450 нм посредством считывателя микропланшетов модели 680 (Bio-rad). Численное значение, которое получали путем вычитания значения для пустой лунки из значения для каждой из лунок, использовали в качестве значения для каждой из лунок при выполнении анализа данных. Для каждого образца приготовляли дубликат.

[0055] [Сравнительный пример 3-1 (инъецирование с применением иглы)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что для инъекции применяли оборудованный иглой инъектор. Следует отметить, что в сравнительном примере 3-1 эксперимент проводили независимо для пяти субъектов.

[0056] [Сравнительный пример 3-2 (обычная генная пушка)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что для инъекции применяли генную пушку (Helios Gene Gun System (Bio-Rad)). Следует отметить, что давление газа в течение инъецирования составляло от 2413 до 2758 килопаскалей (кПа). Плазмидную ДНК вводили в количестве 1 мкг/мышь в форме, покрытой 1 мкм частицами золота (Bio-Rad). Кроме того, в сравнительном примере 3-2 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.

[0057] [Сравнительный пример 3-3 (контроль)] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что инъекцию не выполняли. Следует отметить, что в сравнительном примере 3-3 эксперимент проводили независимо для четырех субъектов.

[0058] На фиг. 4A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и значением OD450 в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 4B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и средним значением OD450 в соответствующих примерах.

Согласно результатам было обнаружено, что в случае безыгольного инъецирования не наблюдался высокий титр антител по сравнению с применением обычной генной пушки, но наблюдался титр антител, который был значительно выше титров в случаях контрольной группы и инъецирования с применением иглы.

[0059] (Измерение титра антител, тест 2)

[Пример 4-1, сравнительные примеры 4-1-4-3] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого антитела NY-ESO-1 (IgG1), которое было указано в примере 4-1 (безыгольная инъекция).

Аналогично, эксперименты проводили таким же образом, как в сравнительном примере 3-1, сравнительном примере 3-2 и сравнительном примере 3-3, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого антитела NY-ESO-1 (IgG1), которое было указано в сравнительном примере 4-1 (инъекция с применением иглы), сравнительном примере 4-2 (обычная генная пушка) и сравнительном примере 4-3 (контроль), соответственно.

[0060] На фиг. 5A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и значением OD450 в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 5B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и средним значением OD450 в соответствующих примерах.

Согласно результатам, было обнаружено, что в случае применения обычной генной пушки наблюдался высокий титр антител, при этом высокий титр антител не наблюдался в случае безыгольного инъецирования, так же как и в случае контрольной группы.

[0061] (Измерение титра антител, тест 3)

[Пример 5-1, сравнительные примеры 5-1-5-3] Эксперимент проводили таким же образом, как в примере 3-1, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого NY-ESO-1 (IgG2a), которое было указано в примере 5-1 (безыгольная инъекция).

Аналогично, эксперименты проводили таким же образом, как в сравнительном примере 3-1, сравнительном примере 3-2 и сравнительном примере 3-3, за исключением того, что антитело, которое измеряли с помощью анализа ELISA, представляло собой антитело против человеческого антитела NY-ESO-1 (IgG2a), которое было указано в примере 5-1 (инъекция с применением иглы), сравнительном примере 5-2 (обычная генная пушка) и сравнительном примере 5-3 (контроль), соответственно.

[0062] На фиг. 6A показаны графики, иллюстрирующие взаимосвязь между степенью разведения и значением OD450 в отношении соответствующих субъектов в соответствующих примерах. Кроме того, на фиг. 6B показан график, иллюстрирующий взаимосвязь между степенью разведения и средним значением OD450 в соответствующих примерах.

Согласно результатам, было обнаружено, что в случае безыгольного инъецирования не наблюдался какой-либо высокий титр антител по сравнению с применением обычной генной пушки, но наблюдался титр антител, который был значительно выше титров, полученных в случаях контрольной группы и инъецирования с применением иглы.

СПИСОК ЦИФРОВЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

[0063] 1: инъектор, 2: корпус, 3: шприцевой блок, 4: плунжер, 5: поршень, 6: основной блок инъектора, 7: блок привода, 8: кнопка, 9: батарея, 10: узел инъектора, 31: блок горловины, 31a: выпускное отверстие, 32: загрузочная камера, 71: воспламенитель.

1. Способ введения ДНК, содержащей участок, кодирующий опухолевый антиген, в организм живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора,

где безыгольный инъектор выполнен с возможностью инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения инъекционной иглы, при этом безыгольный инъектор включает в себя:

блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК;

устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой, и продукт горения является сжижаемым за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения, или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого является сниженным относительно количества, представленного до сжижения;

блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции;

поршень и

плунжер, при этом:

температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК в результате горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК.

2. Способ по п. 1, в котором температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 10 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК за счет горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска.

3. Способ по п. 1 или 2, в котором ДНК находится в форме вакцины.

4. Способ по п. 1 или 2, в котором млекопитающее представляет собой мышь.

5. Способ по п. 1 или 2, в котором опухолевый антиген представляет собой антиген NY-ESO-1.



 

Похожие патенты:
Шприц-туба // 2392009
Изобретение относится к шприц-устройствам и может быть использовано в медицинской, хозяйственно-бытовой, технической, оборонной и строительно-ремонтной областях. .

Изобретение относится к одноразовым, заранее заполненным безыгольным шприцам, работающим с использованием газогенератора, которые применяют для введения внутрикожных, подкожных и внутримышечных инъекций жидкого активного начала для лечебных целей в медицине и ветеринарии.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к иммуномодулирующей композиции для лечения состояния, отличающегося гиперчувствительностью к Ara h 1 и/или Ara h 2.

Изобретение относится к области биохимии. Описан способ лечения рака у субъекта, включающий введение субъекту еженедельной дозы антисмыслового соединения, комплементарного нуклеиновой кислоте, кодирующей STAT3 человека.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая в себя аптамер, связывающийся с FGF2; комплекс для связывания аптамера с FGF2; лекарственные средства для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом; заболевания костей и суставов; боли; способ лечения или профилактики вышеперечисленных заболеваний, применение вышеуказанного аптамера или комплекса в получении лекарственного средства для лечения или профилактики вышеперечисленных заболеваний.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для лечения кератоконуса и других дегенеративных заболеваний роговицы. Лекарственное средство для лечения кератоконуса и других дегенеративных заболеваний роговицы содержит в качестве активного компонента, обеспечивающего терапевтическое сшивание, эффективное количество первичного или вторичного амина с функциональными группами в виде соли или в составе комплексного соединения переходного металла или их смеси.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии. Предложено применение молекулы нуклеиновой кислоты, способной к связыванию с SDF-1 и блокированию взаимодействия между SDF-1 и рецептором SDF-1 CXCR7.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу уменьшения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких или подавления увеличения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких (варианты) и к композиции для уменьшения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких или подавления увеличения продуцирующих внеклеточный матрикс клеток в легких.

Изобретение относится к биохимии. Описано двухцепочечное средство для РНКи для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), содержащее смысловую цепь, комплементарную антисмысловой цепи, где указанная антисмысловая цепь содержит последовательность, комплементарный нуклеотидам 504-526 гена транстиретина (TTR) (SEQ ID NO:1), где смысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, а антисмысловая цепь имеет длину 23 нуклеотида.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для клеточно-опосредованной генной терапии ишемического инсульта. Терапевтическую эффективную дозу генетического материала, состоящего из гена сосудистого эндотелиального фактора роста VEGF, гена глиального нейротрофического фактора GDNF и гена нейрональной молекулы адгезии NCAM, непосредственно вводят путем интратекальной инъекции в течение 4-х часов после наступления ишемического инсульта головного мозга.

Данное изобретение относится к биотехнологии. Предложен олигонуклеотид для обеспечения пропуска двух или более экзонов пре-мРНК дистрофина.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ производства липоплекса, содержащего смесь липидов, состоящую из диолеилфосфатидилэтаноламина (DOPE), фосфатидилхолина и катионного липида, и молекулы РНКи, включающий стадии растворения диолеилфосфатидилэтаноламина (DOPE), фосфатидилхолина и катионного липида в этаноле, где фосфатидилхолин представляет собой 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DOPC), пальмитоилолеоилфосфатидилхолин (POPC) или 1,2-диэйкозеноил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DEPC), и где катионный липид представляет собой O,O'-дитетрадеканоил-N-(α-триметиламмониоацетил)диэтаноламина хлорид (DC-6-14); добавления раствора этанола, полученного на предыдущей стадии, по каплям к раствору молекул РНКи в воде при перемешивании; и лиофилизации раствора.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения респираторных заболеваний поросят. Способ для профилактики и лечения респираторных заболеваний поросят включает применение биологически активной композиции.

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано для обеззараживания инкубационных яиц кур. Обработку яиц осуществляют спиртовой настойкой прополиса, из которой готовят рабочий раствор в соотношении компонентов: 1 часть настойки прополиса на 10 частей воды.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой водную бактерицидную композицию, имеющую pH от 1 до 5, содержащую от 0,05 до 5% по массе муравьиной кислоты, от 0,05 до 5% по массе молочной кислоты, от 0 до 5% по массе одного или более неионных поверхностно-активных веществ, где неионное поверхностно-активное вещество представляет собой этоксилат спирта, и от 0,1 до 5% по массе одного или более анионных поверхностно-активных веществ, где анионное поверхностно-активное вещество представляет собой α-олефин сульфонат и лаурилсульфат натрия, который содержится в количестве от 0 до 0,3% по массе; композицию бактерицидного концентрата, при разбавлении одной массовой части которого от 1 до 100 массовыми частями воды получают композицию водного раствора.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой биотрансплантат для лечения дисплазии суставов, характеризующийся тем, что он содержит мезенхимальные стволовые клетки (МСК) из аутологичного материала, отличающийся тем, что содержит от 5 млн.

Группа изобретений относится к устройствам для инъекции газов в глаз животного. Ручное устройство для инъекции газов содержит корпус шприца с выпускным устройством, поршень, установленный с возможностью перемещения в корпусе шприца и ограничения, совместно с корпусом шприца, первой камеры в корпусе шприца, измерительное устройство, выполненное по меньшей мере частично в корпусе шприца с возможностью управления объемом по меньшей мере первой камеры при подаче в первую камеру первой текучей среды.
Изобретение относится к ветеринарной серпентологии и охотхозяйству, в частности к способу дегельминтизации змей (отряд чешуйчатые) как промежуточных хозяев паразитарных заболеваний.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к устройству и способу лечения мастита и стимуляции лактации коров. Устройство содержит кожух с массажными пластинами, съемную платформу с отверстиями, которая снабжена эластичным элементом, установленным с возможностью взаимодействия с массажными пластинами, шарнирно закрепленными на упомянутой платформе, вакуумпровод и пульсатор.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к средствам и способам лечения гнойно-некротических заболеваний копытец у крупного рогатого скота. Способ включает удаление некротизированных тканей, высушивание поверхности дефекта, нанесение лекарственного средства, наложение повязки.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к способу лечения хронического воспаления предстательной железы у собак. Способ лечения хронического простатита у собак включает введение антибактериального препарата, причем антибактериальный препарат вводят один раз в день и в качестве антибактериального препарата используют 10% раствор ципрофлоксацина из расчета 5 мг/кг, в терапевтической дозе внутримышечно в заднебедренную группу мышц, при этом осуществляют введение никотиновой кислоты за 15 минут до наступления терапевтической концентрации антибактериального препарата в крови животного в заднебедренную группу мышц в эритемной дозе 0,15 мг/кг.

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к способу введения ДНК, содержащей участок, кодирующий опухолевый антиген, в организм живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора. Безыгольный инъектор выполнен с возможностью инъекции раствора ДНК в целевую область инъекции без применения инъекционной иглы. Инъектор включает в себя блок размещения, выполненный с возможностью размещения в нем раствора ДНК. Инъектор имеет устройство воспламенения, содержащее порошковый воспламенитель, выполненный с возможностью обеспечения характеристики давления, обеспечивающей выработку плазмы во время горения сразу же после воспламенения с последующим обеспечением понижения создаваемого давления, когда температура становится комнатной температурой. Устройство воспламенения содержит продукт горения, сжижаемый за счет отсутствия содержания газового компонента в продукте горения или за счет содержания некоторого газового компонента в продукте горения, количество которого является сниженным относительно количества, представленного до сжижения. Инъектор включает блок горловины, имеющий выпускное отверстие, выполненное с возможностью прохождения через него раствора ДНК, сжатого за счет горения порошкового воспламенителя в устройстве воспламенения, так что обеспечен выпуск раствора ДНК в целевую область инъекции. Инъектор содержит поршень и плунжер. Температура продукта горения, обеспечиваемая во время сжатия, изменяется до температуры, близкой к комнатной температуре в пределах 20 мс, после того, как давление, прилагаемое к раствору ДНК в результате горения порошкового воспламенителя, достигает начальной пиковой силы выпуска во время процесса сжатия для выпуска раствора ДНК. Техническим результатом является продуцирование антитела, вызывание продуцирования которого является благоприятным, и не продуцировать антитело, вызывание продуцирования которого не является благоприятным, то есть, безыгольного инъектора, который может селективно вызывать иммунный ответ, и способа введения ДНК, содержащей участок, кодирующий антиген, в целях селективного продуцирования антитела в организме живого млекопитающего посредством применения безыгольного инъектора. 4 з.п. ф-лы, 6 ил.

Наверх