Способ получения вещества, обладающего противогрибковой активностью



Владельцы патента RU 2691997:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения вещества, обладающего противогрибковой активностью. Способ получения вещества, обладающего противогрибковой активностью, представляющего собой 7-О-метилкемпферол, путем подготовки лекарственного растительного сырья - почек каштана конского обыкновенного (Aesculus hippocastanum L.), экстрагирования сырья органическими растворителями, упаривания и хроматографической очистки, при этом извлечение из воздушно-сухого растительного сырья проводят с использованием хлороформа в аппарате Сокслета в соотношении сырье : экстрагент 1:3, последующее выделение целевого вещества из сгущенного хлороформного извлечения осуществляют методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформа и этилового спирта в соотношении 99:1 объемом 1,5 л, а дальнейшую очистку целевого вещества осуществляют путем перекристаллизации упаренных под вакуумом элюатов, содержащих 7-О-метилкемпферол, смесью хлороформа и этилового спирта. Вышеописанный способ позволяет получить высокий выход вещества 7-О-метилкемпферола - 1,5% от массы исходного воздушно-сухого сырья. 1 ил.

 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности, к производству лекарственных средств в виде субстанций и индивидуальных биологически активных соединений и касается способа получения 7-О-метилкемпферола (рамноцитрина) из почек каштана конского обыкновенного (Aesculus hippocastanum L.).

В настоящее время в мировой практике применяются семена и листья каштана конского обыкновенного, однако перспективным видом лекарственного растительного сырья являются почки растения ввиду их богатого химического состава (1).

Известен способ выделения 7-О-метилкемпферола из сырья ретамы обыкновенной (Retama raetam (Forssk.) Webb & Berthel) (2). Согласно данной методике проводится: измельчение пробы воздушно-сухого сырья (4 кг) травы ретамы обыкновенной, экстрагирование теплым этанолом (80%) и отгонка растворителя с помощью роторного испарителя. Упаренный экстракт (398 г) подвергается хроматографическому исследованию и определению биологической активности. Экстракт хроматографируется на колонке (6×70 см) с силикагелем с использованием элюента состава бензол : этилацетат, 9:1 с получением 100 фракций. Фракция номер 93 очищается колоночной флэш-хроматографией на сефадексе с использованием абсолютного этанола в качестве элюента и получением на выходе целевого соединения 7-О-метилкемпферола в количестве 17 мг.

Данный метод взят нами в качестве прототипа. Недостатками этого метода являются низкий выход целевого вещества - 7-О-метилкемпферола (17 мг, что составляет 0,000425% от массы воздушно-сухого сырья), продолжительность и многостадийность хроматографической очистки с использованием различных сорбентов и элюента, представляющего собой смесь сложных систем растворителей.

Таким образом, технической задачей изобретения является обеспечение возможности повышения выхода целевого вещества (7-О-метилкемпферола) и подтверждение его противогрибковой активности.

Технический результат достигается тем, извлечение из воздушно-сухого растительного сырья проводят с использованием хлороформа в аппарате Сокслета в соотношении сырье : экстрагент 1:3, последующее выделение целевого вещества из сгущенного хлороформного извлечения осуществляют методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформа и этилового спирта в соотношении 99:1 объемом 1,5 л, а дальнейшую очистку целевого вещества осуществляют путем перекристаллизации упаренных под вакуумом элюатов, содержащих 7-О-метилкемпферол, смесью хлороформа и этилового спирта.

Способ реализуется следующим образом. Измельченные воздушно-сухие почки каштана конского обыкновенного (100,0 г) экстрагируют хлороформом в аппарате Сокслета в соотношении сырье : экстрагент 1:3 до полного истощения сырья. Хлороформное извлечение упаривают под вакуумом до густого остатка (около 100 мл), полученный упаренный экстракт смешивают с 50 г силикагеля (Silicagel L 100/160), высушивают и вносят на колонку (8×10 см), заполненную силикагелем в виде взвеси в хлороформе. Целевое вещество элюируют смесью хлороформ-этиловый спирт в соотношении 99:1 (1,5 л). Контроль за разделением веществ осуществляют хроматографированием на пластинках "Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ-254" в системе растворителей н-бутанол: уксусная кислота : вода 4:1:2. Содержащий 7-О-метилкемпферол элюат подвергают очистке методом перекристаллизации смесью хлороформа с этанолом. Полученный осадок представляет собой готовый продукт (7-О-метилкемпферол) с выходом 1,5% от массы воздушно-сухого сырья.

Предлагаемый способ поясняется следующим примером.

Воздушно-сухие почки каштана конского обыкновенного (100,0 г) измельчают, экстрагируют хлороформом в аппарате Сокслета в соотношении 3:1 к массе воздушно-сырья до полного истощения сырья. Хлороформное извлечение упаривают под вакуумом до густого остатка (около 100 мл), полученный упаренный экстракт смешивают с 50 г силикагеля (Silicagel L 100/160), высушивают и вносят на колонку (8×10 см), заполненную силикагелем в виде взвеси в хлороформе. Целевое вещество элюируют смесью хлороформ-этиловый спирт в соотношении 99:1 (1,5 л). Контроль за разделением веществ осуществляют хроматографированием на пластинках "Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ-254" в системе растворителей н-бутанол : уксусная кислота : вода 4:1:2. Элюат подвергают очистке методом перекристаллизации смесью хлороформа с этанолом. Полученный осадок представляет собой готовый продукт (7-О-метилкемпферол) с выходом 1,5 г, что составляет 1,5% от массы воздушно-сухого сырья.

Химическая структура 7-О-метилкемпферола представлена в Приложении 1 на фигуре 1.

Спектральные и физико-химические свойства 7-О-метилкемпферола. Желтый кристаллический порошок состава С16Н12О6 (молекулярная масса 300 а.е.м.) с т.пл. 226-228°С; УФ- спектр: λmaxEtOH - 272 и 334 нм.

1Н-ЯМР спектр (300 МГц, ДМСО-d6, δ, м.д., J/Гц): 12,48. (с, 1Н, 5-ОН), 10.12 (с, 1Н, 41-ОН), 9.50 (с, 1Н, 3-ОН), 8.07 (д, 2Н, 9 Гц, H-21,61), 6.95 (д, 2Н, 9 Гц, Н-31,51), 6.75 (д, 1Н, 2.5 Гц, Н-8), 6.34 (д, 1Н, 2.5 Гц, Н-6), 3.87 (с, 3Н, СН3О).

13С-ЯМР спектр (50 МГц, ДМСО-d6, δС, м.д.): С-4 (176,01), С-2 (164,89), С-7 (160,36), С-41 (159,31, С-5 (156,09), С-9 (136,95), С-21 (130,18), С-61 (129,56), С-11 (121,57), С-31 (115,64), С-51 (115,44), СН3О (55,99).

Масс-спектр спектр (ESI-MS, 180°С, m/z): М+ 301 (300+Н), М+ 339 (300+K).

7-О-метилкемпферол, полученный разработанным способом, исследовали на наличие противомикробной активности.

Наличие противомикробной активности определяли на лабораторных штаммах Candida albicans (СР. Robin). Определение минимальной ингибирующей концентрации проводили методом двойных серийных разведений в бульоне в соответствии с МУ 4.2.1890-04 (3). Учет результатов анализа осуществляли через 48-72 часа после инкубации при температуре 37°С. При этом проводили визуальнуя оценку задержки роста. Из лунок с видимой задержкой роста осуществляли высев на питательные среды (5% кровяной агар-агар), через 24 часа отсутствие роста оценивали как фунгицидный эффект, а появление видимого роста, но с его задержкой - как фунгистатический.

Результаты исследования показали выраженную противогрибковую активность. Вплоть до разведения 1:256 включительно наблюдается фунгицидное действие, при дальнейшем разведении рост культуры возобновляется.

Таким образом, предлагаемый способ получения 7-О-метилкемпферола (рамноцитрина) из почек каштана конского обыкновенного методом колоночной хроматографии разработан впервые для данного вида сырья и обладает следующими преимуществами:

1. Разработанный способ позволяет получать более высокий выход вещества 7-О-метилкемпферола - 1,5% вместо 0,000425% у прототипа, то есть в 3500 раз выше по сравнению с прототипом.

2. Разработанный способ менее трудоемок, поскольку включает однократную хроматографическую очистку на силикагеле с использованием элюента, представляющего собой смесь двух растворителей (хлороформ и этиловый спирт) вместо двухкратной хроматографической очистки в прототипе с использованием различных сорбентов и элюента, представляющего собой смесь сложных систем растворителей. Следовательно, заявленный способ включает 5 стадий в отличие от прототипа, в котором реализуется выделение целевого вещества в 8 этапов.

3. Целевой продукт (7-О-метилкемпферол), полученный разработанным способом, обладает выраженной противогрибковой активностью.

Разработанный способ может применяться в химико-фармацевтической промышленности для получения субстанций для производства лекарственных препаратов с противогрибковым действием.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ:

1. Куцик, Р.В. Каштан конский (Aesculus hippocastanum L.). Аналитический обзор / Р.В. Куцик, Б.М. Зузук, В.В. Дьячок // Провизор. - 2002. - №4. - С. 12-18.

2. Albalawi, М. A. D. Isolation of Rhamnocitrin Insezcticide from Retamaraetam via Shephadex LH-20 / M. A. D. Albalawi // IOSR Journal of Applied Chemistry. - 2016. - Vol. 9. - p. 70-74.

3. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания. МУК 4.2.1890-04 // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2004. - Т. 6, №4. - С. 306-359.

Способ получения вещества, обладающего противогрибковой активностью, путем подготовки лекарственного растительного сырья - почек каштана конского обыкновенного (Aesculus hippocastanum L.), экстрагирования сырья органическими растворителями, упаривания и хроматографической очистки, отличающийся тем, что извлечение из воздушно-сухого растительного сырья проводят с использованием хлороформа в аппарате Сокслета в соотношении сырье : экстрагент 1:3, последующее выделение целевого вещества из сгущенного хлороформного извлечения осуществляют методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформа и этилового спирта в соотношении 99:1 объемом 1,5 л, а дальнейшую очистку целевого вещества осуществляют путем перекристаллизации упаренных под вакуумом элюатов, содержащих 7-О-метилкемпферол, смесью хлороформа и этилового спирта.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к получению сурфактанта из легких крупного рогатого скота. Для этого легкие крупного рогатого скота, освобождают от бронхов, разрезают на куски размером 30×30×30 мм, измельчают на роторно-статорном дезинтеграторе, полученный экстракт центрифугируют на проточной центрифуге при низких оборотах, после чего надосадочную жидкость выдерживают при +4°С в течение часа и повторно центрифугируют на проточной центрифуге при 22000-250000g, осадок ресуспендируют в воде, еще раз центрифугируют при 10000-15000g и осадок экстрагируют смесями хлороформа и метанола в системе хлороформ-метанол-вода 1:2:0.8.
Изобретение относится к лесохимической промышленности и может быть использовано для переработки осиновой коры с получением биологически активных кормовых добавок для животноводства.

Изобретение относится к устройствам для проведения процессов экстракции в системе жидкость - твердое тело применительно к экстракции из растительного сырья. Установка содержит вертикальный цилиндрический корпус, снабженный коаксиально установленными питающей и циркуляционной трубами.

Изобретение относится к устройствам для проведения процессов экстракции в системе жидкость - твердое тело применительно к экстракции из растительного сырья. Установка содержит вертикальный цилиндрический корпус, снабженный коаксиально установленными питающей и циркуляционной трубами.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, обладающего актопротекторным и антиоксидантным действием. Способ получения средства, обладающего актопротекторным и антиоксидантным действием, представляющего собой густой экстракт из свежих плодов тыквы обыкновенной, в котором свежие плоды тыквы обыкновенной очищают от мягкой коры и семян, измельчают до кашицеобразного состояния, затем три раза последовательно экстрагируют 40% этиловым спиртом при соотношении фаз сырье-экстрагент 1:10 на кипящей водяной бане с обратным холодильником каждый раз по 60 минут, все три порции вытяжек объединяют, сгущают при температуре 40°С и разрежении 0,4 ат, досушивают при температуре 40-50°С и разрежении 0,2-0,3 ат в вакуум-сушильном шкафу до остаточной влажности не более 25%.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к стабильной настойке из личинок трутней, а также способу ее получения. Способ получения настойки из трутневого расплода заключается в том, что проводят экстрагирование измельченных (гомогенизированных) трутневых личинок 40% этиловым спиртом, гомогенат настаивают, затем полученный экстракт сливают, после слива экстракта к обработанному гомогенату добавляют свежий 70% этиловый спирт, проводят настаивание при периодическом перемешивании, весь экстракт сливают.
Изобретение направлено на создание составов Sn-117m высокой чистоты и способов их приготовления. Способ очистки состава Sn-117m с высокой удельной активностью, который включает в себя экстракцию иодидного комплекса Sn-117m органическим растворителем из кислотного водного раствора кадмия, содержащим растворенную облученную мишень кадмия, кислоту и источник иодида.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения воспалительных заболеваний верхних и нижних дыхательных путей. Средство для лечения воспалительных заболеваний верхних и нижних дыхательных путей, представляющее собой сухой экстракт нанопорошка коры осины (Populus tremula L.), с размерами нанопорошка 50-150 нм, содержащее в качестве биологически активных веществ: салицина 3,8-5,5% мас., арабиногалактанов 4,2-10,1% мас., полифенолов 3,9-7,2% мас.

Изобретение относится к газохроматографическим методам анализа нефтерастворимых малолетучих полярных соединений и может быть использовано в нефтяной и других отраслях промышленности для их количественного определения.

Изобретение относится к способу изготовления коллагенового остеопластического материала из костной ткани, заключающемуся в том, что после механической очистки и фрагментации материал отмывают нагретым до 45-50°С физраствором в течение 30 мин, выполняют обработку раствором 3% пероксида водорода в воде в виде 3 циклов по 10 минут с отмывкой физраствором при 45-50°С, а вместо обработки папаином выполняют обработку раствором 0.1-0.5% липазы в забуференном физиологическом растворе при рН 8.0 в течение 2 суток, затем промывают физиологическим раствором, обрабатывают смесью хлороформа с водой (1:1) в течение 1-3 суток с периодической заменой смеси по мере ее помутнения, отмывают хлороформ раствором 20-30% этанола в воде в течение 6-12 часов, а затем физиологическим раствором при пятикратной смене растворов, выполняют деминерализацию материала раствором 0.6 М соляной кислоты в воде в течение 0,25-1 часа при температуре 4-6°С в условиях перемешивания и смене раствора на свежий каждые 15 мин, затем обрабатывают раствором 5% тиосульфата натрия в воде в течение 3 ч, промывают 10-кратной сменой дистиллированной воды, и нормализуют в забуференном физиологическом растворе рН7.4 в течение 7 суток при комнатной температуре и при смене раствора на свежий 3 раза в сутки, причем соотношение объемов костной ткани и смесей или растворов для обработки или отмывки составляет 1:4-1:6, обработку и отмывку выполняют в условиях перемешивания при 40-50°С, если не указана другая температура, а деминерализацию выполняют при периодическом вакуумировании до 10-30 мм рт.ст.

Изобретение относится к соединению общей формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 выбирается независимо и представляет собой Н, галоген; R2 выбирается независимо и представляет собой Н, галоген; R3 выбирается независимо и представляет собой Н, галоген; Х выбирается независимо и представляет собой ОН, галоген, 6-членный гетeрoциклил, содержащий 2 атома N, необязательно содержащий заместитель R4; R4 выбирается независимо и представляет собой –C1-6-алкил, -C1-6–алкил-OH, 4-гидрокси-фенил, -COCH3-, -COO-tBu или представляет собой заместитель со следующей структурной формулой (а) или (б), причем волнистой линией показано место присоединения заместителя к фрагменту Х, R5 выбирается независимо и представляет собой Н или фенил, замещенный атомом галогена.

Настоящее изобретение относится к солям ацетату, L-глутамату, цитрату или фумарату N-(2-аминоэтил)амид амфотерицина В формулы I ,которые могут быть использованы в медицине.

Изобретение относится к производным индазола, имеющим структуру формулы I, или к его фармацевтически приемлемым солям, в которой R1 и R2 имеют значения, указанные в формуле изобретения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к новым пептидам, обладающим биоцидными, в частности антибактериальными, противогрибковыми и противовирусными, свойствами и препаратам на их основе.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и медицине и представляет собой способ очищения пораженных ногтевых пластин от роговых масс при онихомикозе, включающий предварительную их обработку раствором 0,01%-мирамистина, далее раствором ацетилсалициловой кислоты, приготовленным путем помещения в мерный градуированный стакан 10 мл воды, нагретой до температуры не менее 100°С, в которую опускают 5 таблеток аспирина, каждая из которых содержит 0,5 г ацетилсалициловой кислоты, затем полученную смесь размешивают в течение 1 минуты, добиваясь однородной консистенции, и наносят, слегка втирая, на фронтально-дистальную часть пораженных ногтевых пластин и кожу боковых околоногтевых валиков в течение 5-10 минут в зависимости от числа пораженных ногтей, далее мягкой полировочной пилочкой очищают ногтевую пластину, после чего марлевой салфеткой, смоченной 0,01%-раствором мирамистина, повторно обрабатывают ногти, процедуру повторяют 1 раз в день ежедневно на протяжении 3-6 месяцев с учетом объема и глубины поражения.

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для предотвращения или лечения местной микробной инфекции у субъекта. Используют терапевтически эффективное количество композиции, содержащей полиэфирный ионофор, выбранный из наразина, салиномицина, лазалоцида, моненсина, семдурамицина, мадурамицина и лаидломицина, или его терапевтически приемлемую соль, и хелатирующий агент.

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической фармакологии, и предназначено для получения комбинированных антигрибковых средств. Антигрибковая композиция эвтектического типа содержит бинарную эвтектическую комбинацию, отвечающую составу двойной эвтектики ±2% мол., выбранную из: Клотримазол:Тербинафин 71:29% мол., Клотримазол:Нифуратель 78:22% мол., Клотримазол:Флуконазол 44:56% мол., Кетоконазол:Флуконазол 34:66% мол., Кетоконазол:Тербинафин 70:30% мол., Итраконазол:Кетоконазол 36:64% мол., Итраконазол:Клотримазол 35:65% мол., Итраконазол:Флуконазол 20:80% мол., Итраконазол:Тербинафин 72:28% мол., Итраконазол:Нифуратель 64:36% мол., Флуконазол:Тербинафин 60:40% мол., Итраконазол:Диклофенак 40:60% мол., Клотримазол:Диклофенак 50:50% мол., Флуконазол:Диклофенак 54:46% мол., Клотримазол:Нитроксолин 62:38% мол., Клотримазол:Анестезин 31:69% мол., Клотримазол:Тинидазол 46:54% мол., Флуконазол:Тинидазол 42:58% мол.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему противомикробным и антимикотическим действием. Средство, обладающее противомикробным и антимикотическим действием, содержащее извлеченные перколяцией из воздушно-высушенных плодов шиповника и рябины обыкновенной 1:1 компоненты - органические кислоты, дубильные вещества, кислота аскорбиновая, 40-70% раствор этанола, при определенном их соотношении.

Группа изобретений относится к ветеринарии и предназначена для лечения заболеваний кишечника у птиц и свиней. Используется композиция, содержащая смектитовую глину; дрожжи, дрожжевой маннан, олигосахарид дрожжевого маннана, дрожжевой бета-глюкан или компонент дрожжевой клеточной стенки и глутамат.

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии, и предназначено для лечения бактериальных и грибковых инфекций. В качестве антибактериальных и фунгицидных средств применяют замещенные аминобензопентатиепины общей формулы 1 ,где R=СН3 (Ia), R=CF3 (Ib).

Группа изобретений относится к нанесению макияжа на кератиновые материалы. Композиция для нанесения макияжа на кератиновые материалы содержит неводную среду, содержащую по меньшей мере одно масло на углеводородной основе; частицы поверхностно-стабилизированного полимера, который представляет собой гомополимер C1-C4 алкил(мет)акрилата или сополимер C1-C4 алкил(мет)акрилатов, который содержит кислотный мономер с этиленовыми ненасыщенными связями или его ангидрид, выбранный из (мет)акриловой кислоты, малеиновой кислоты и малеинового ангидрида; стабилизатор представляет собой гомополимер изоборнил(мет)акрилата или статистический сополимер изоборнил(мет)акрилата и C1-C4 алкил(мет)акрилата, присутствующих в массовом соотношении изоборнил(мет)акрилат/C1-C4 алкил(мет)акрилат более 4; где указанные частицы и стабилизатор содержатся в дисперсии; и гидрофобный пленкообразующий полимер, выбранный из этиленовых блок-сополимеров и смол на углеводородной основе и их смесей.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения вещества, обладающего противогрибковой активностью. Способ получения вещества, обладающего противогрибковой активностью, представляющего собой 7-О-метилкемпферол, путем подготовки лекарственного растительного сырья - почек каштана конского обыкновенного, экстрагирования сырья органическими растворителями, упаривания и хроматографической очистки, при этом извлечение из воздушно-сухого растительного сырья проводят с использованием хлороформа в аппарате Сокслета в соотношении сырье : экстрагент 1:3, последующее выделение целевого вещества из сгущенного хлороформного извлечения осуществляют методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь хлороформа и этилового спирта в соотношении 99:1 объемом 1,5 л, а дальнейшую очистку целевого вещества осуществляют путем перекристаллизации упаренных под вакуумом элюатов, содержащих 7-О-метилкемпферол, смесью хлороформа и этилового спирта. Вышеописанный способ позволяет получить высокий выход вещества 7-О-метилкемпферола - 1,5 от массы исходного воздушно-сухого сырья. 1 ил.

Наверх