Кормовая добавка для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода salmonella у сельскохозяйственной птицы и способ ее применения
Владельцы патента RU 2694256:
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии твердого тела и механохимии Сибирского отделения Российской академии наук (ИХТТМ СО РАН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Сибирский федеральный научный центр агробиотехнологий Российской академии наук (СФНЦА РАН) (RU)
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности, к ветеринарной микробиологии и представляет собой средство для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы, включающее маннанолигосахариды, водорастворимые белки дрожжевой биомассы, водорастворимые глюкосахариды дрожжевой биомассы, фермент с β-глюканазной активностью, отличающееся тем, что дополнительно содержит кормовой мел и воду, причем средство вводят в количестве 2,0-2,4% к массе корма, один раз в день, в течение 28-30 дней. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы, снижение уровня бактериальной обсемененности тушек у сельскохозяйственной птицы и обладает выраженной сорбционной активностью в отношении микроорганизмов рода Salmonella в 2,5 раза выше препарата по прототипу. 4 табл., 2 пр.
Кормовая добавка для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы и способ ее применения
Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к ветеринарной микробиологии, а именно к применению кормовой добавки для профилактики и борьбы с бактерионосительством возбудителя сальмонеллезной инфекции у птицы.
Кормовые добавки - это любые добавки к рациону вводимые в установленном порядке, определенном процентном соотношении, регулирующие количество и соотношение в нем питательных и биологически активных веществ, с целью получения сбалансированного продукта для конкретного возраста и вида сельскохозяйственных животных и птиц, а также обеспечивающие здоровье и наивысшую продуктивность животных и птиц.
Больше всего кормовых добавок потребляется в птицеводческой отрасли.
К кормовым добавкам относятся протеиновые, минеральные, витаминные, ароматические, вкусовые добавки, кормовые антибиотики, ферментные препараты и др. В качестве протеиновых добавок используют кормовые дрожжи, которые содержат в 1 кг 1,1-1,2 к. ед., 40-60% сырого протеина, который по своей биологической ценности приближается к белкам животного происхождения. Однако протеин дрожжей содержит большое количество нуклеиновых кислот, избыток которых приводит к повышению уровня мочевой кислоты в крови, развитию подагры, особенно у птицы. Поэтому норма ввода кормовых дрожжей в комбикорма не должна превышать 7%.
Известен способ профилактики и лечения сальмонеллеза животных с использованием биопрепарата на основе бактериофагов (см. патент РФ №2232808 от 11.10.2002 г., МПК A61K 31/517, A61K 9/00, A61K 9/48). Сущность способа заключается в введении животным и птице биопрепарата содержащего штаммы бактериофагов взятые в эффективных дозах.
Однако бактериофаги специфичны и действуют строго на определенный вид и серотип сальмонелл, поэтому их очень трудно подбирать и если нужного вида бактерии в организме не оказывается, бактериофаг находится в организме около 2-6 дней, а затем разрушается. Так же бактериофаги могут подвергаться мутации и оказывать негативное воздействие на микробиот кишечника птицы. Так же бактериофаги могут переносить от одной бактерии к другой участки ее генома - а значит, и патогенность, устойчивость к антибиотикам и пр.
Наиболее близким решением, принятым за прототип, является профилактический антибактериальный препарат и способ его получения (см. П РФ №2406516 от 20.12.2010 г.).
Сущность способа заключается во введении в организм животного и птицы препарата, включающего в себя биологически доступные маннанопротеины, водорастворимые маннанопротеины клеточной стенки, водорастворимые белки и глюкосахариды дрожжевой биомассы, ферментативный комплекс.
Однако препарат имеет достаточно низкую антибактериальную активность по отношению к микроорганизмам рода Salmonella.
Также, введение в корм птицы таблетированной формы препарата затрудняет его дозирование на голову и скармливание большому поголовью птицы. Кроме того, нет данных о применении этого препарата для кур.
Задачей изобретения является расширение арсенала кормовых добавок и способов профилактика бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы.
Поставленная задача решается тем, что кормовая добавка для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы, включающая маннанолигосахариды, водорастворимые белки дрожжевой биомассы, водорастворимые глюкосахариды дрожжевой биомассы, фермент с β-глюканазной активностью, согласно изобретению, дополнительно содержит кормовой мел, при следующем соотношении ингредиентов, масс. %:
| маннанолигосахариды - | 2-4 |
| водорастворимые белки дрожжевой биомассы - | 30-35 |
| водорастворимые глюкосахариды дрожжевой биомассы - | 17-20 |
| фермент с β-глюканазной активностью - | 3-9 |
| кормовой мел - | 25-30 |
| вода - | остальное |
Поставленная задача решается также тем, что в способе профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы, включающем введение кормовой добавки в основной рацион, согласно изобретению, добавку вводят в количестве 2,0-2,4% к массе корма, один раз в день, в течение 28-30 дней.
Способ осуществляется следующим образом.
1. Способ получения кормовой добавки.
Для приготовления кормовой добавки была использована дрожжевая биомасса, которая подвергалась ферментативной обработке (П РФ №2406516 от 20.12.2010 г.).
Полученные в результате ферментации ингридиенты (маннанолигосахариды, водорастворимые белки дрожжевой биомассы, водорастворимые глюкосахариды дрожжевой биомассы, фермент с β-глюканазной активностью) представляли слегка увлажненную массу, которую соединяют с наполнителем - кормовым мелом. Полученную смесь нагревали до 40-60°С в течении 10-13 часов, затем подвергали механической активации в активаторах планетарного или вибрационного типов, или роликовых мельницах, обеспечивающих ускорение мелющих тел 60-400 м/с и время пребывания в зоне обработки 0,5-10 минут. Наполнитель адсорбирует лишнюю влагу, что уменьшает время сушки и способствует равномерному распределению ингредиентов, позволяет существенно снизить себестоимость готовой продукции и улучшить ее качество за счет отсутствия в нем реактивных примесей, а также способствует выведению токсинов из организма.
2. Определение количественного состава ингредиентов кормовой добавки.
Для определения оптимального количества мела в кормовой добавке были сформированы 4 группы цыплят в возрасте от 5 до 10 суток, которым вводили кормовую добавку с различным содержанием мела (таблица 1).
Из таблицы видно, что наибольшая поедаемость корма с кормовой добавкой отмечали во 2 группе, где содержание мела составляла 25-30% в составе добавки. Меньшее количество мела (10-15%) значительно снижает поедаемость корма с кормовой добавкой на 20-30%. Добавление большего количества мела (3 группа) не целесообразно, так как птице необходимо определенное количество мела в сутки.
Далее проводили исследования, где учитывали затраты времени и электроэнергии на приготовление добавки. Мел является хорошим адсорбентом влаги, комкуется и легко рассыпается при незначительном высыхании. Для подготовки сушки использовали кормовую добавку с различным процентным содержанием в ней мела. Сравнение проводили с процессом сушки ферментативной дрожжевой биомассой. Сушку проводили в сушильном шкафу при температуре 40-60 С, учет вели по затратам времени и электроэнергии. Так, по затратам времени и электрической энергии на сушку установлено: на ферментированную дрожжевую массу затрачено 25-30 часов (22,5-27 кВт), на смесь кормовой добавки с мелом при следующих соотношениях, масс %: 10-15 - 24-25 часов (21,6-22,5 кВт), 25-30 - (9-11,7 кВт) и 30-35 - (9-10,8 кВт). Таким образом, за счет ввода мела в кормовую добавку в количестве 25-30% идет снижение времени сушки и затрат энергии, которые находятся в прямой зависимости от количества введенного мела.
Предлагаемой кормовой добавке присвоено название «Мосовет».
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Для определения эффективности полученной кормовой добавки «Мосовет», провели опыт по изучению влияния кормовой добавки на уровень бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella. Для опыта были использованы суточные цыплята яичного направления, из которых по принципу аналогов сформировали 6 групп (n=15). Цыплятам 1-4 опытных групп в рацион вводили кормовую добавку в различных концентрациях. Цыплятам 5 опытной группы в рацион вводили профилактический антибактериальный препарат (П РФ №2406516 от 20.12.2010 г.). Цыплята шестой группы служили контролем (таблица 2). 
Для моделирования заражения сальмонеллезом, цыплятам опытных и контрольной групп один раз в день, орально вводили суточные культуры Salmonella enterica и Salmonella infantis по следующей схеме:
с 1 по 7 день - 50 тыс. КОЕ/голову;
с 8 по 14 день - 100 тыс. КОЕ/голову;
с 15 по 21 день - 150 тыс. КОЕ/голову;
с 22 по 28 день - 200 тыс. КОЕ/голову.
Введение осуществляли с помощью автоматических дозаторов.
Для определения общей обсемененности организма цыплят микроорганизмами рода Salmonella, на 30 день опыта производили патологоанатомическое вскрытие и отбор проб внутренних органов: печени, грудных мышц, содержимого тонкого и толстого отделов кишечника.
Выделение сальмонелл производили по следующей схеме:
- пробы из внутренних органов и содержимого кишечника внесили в пробирку с МПБ (5 мл.) и помещали в термостат на 24 часа при Т=37°С;
- на вторые сутки производили пересев на среду накопления Раппопорта-Вассилиадиса (RVS-бульон), путем внесения в пробирку Эппендорфа со средой 0,2 мл. МПБ. Посевы инкубировали 48 часов при Т=37°С;
- со среды Раппапорта-Вассилиадиса производили пересев на висмут-сульфит агар (ВСА), для окончательного выделения из патологического материала микроорганизмов рода Salmonella. Посевы инкубировали 24 часа при Т=37°С.
Окончательную дифференциацию сальмонелл проводили путем определения биохимических свойств выделенных изолятов при помощи коммерческого набора ПБДЭ и постановкой реакции агглютинации (РА) с комплексной сальмонеллезной сывороткой на О-антиген.
Полученные данные обрабатывались программой «Free-matrix».
Результаты опыта приведены в таблице 3.
Таблица 3
Как видно из представленных данных, у цыплят опытных групп к 30-ому дню уровень контаминации внутренних органов и тканей микроорганизмами рода Salmonella был ниже аналогичного показателей контрольной группы в несколько раз.
Анализ полученных данных позволяет проследить выраженную зависимость между дозой кормовой добавки вводимой в корм и уровнем бактерионосительства сальмонелл. У цыплят получавших «Мосовет» в дозах от 0,5 до 1,4% от массы корма (1-я, 2-я опытные группы) наблюдается незначительное снижение уровня бактерионосительства по сравнению с показателями контрольной группы.
Максимально хорошие результаты наблюдались в группах, получавшей кормовую добавку в дозе 2,0-2,4 и 3,0-3,4% от массы корма (3 и 4 группы).
Так у цыплят 3 и 4 опытных групп, Salmonella из печени выделялась в 5 и 4,67% проб соответственно, в то время как в 5 опытной и контрольной группах данный показатель составил 70,36 и 86,67% соответственно. В содержимом толстого кишечника цыплят 3 и 4 опытных группах Salmonella присутствовала в 15,0 и 15,57% проб соответственно, при показателе контрольной группы - 93,34% и 5 опытной группы - 62,34. Аналогичный уровень контаминации микроорганизмами рода Salmonella наблюдался и в пробах мышц (3-4-опытные группы - 15,0 и 14,83% соответственно, 5 группа -65,88%, контрольная группа - 93,34%,).
Таким образом, максимально хорошие результаты наблюдались в группах, получавших «Мосовет» в дозе 2,0-2,4% и 3,0-3,4% от массы корма (3 и 4 группы). Показатели 3 и 4 опытных групп примерно одинаковые и давать кормовую добавку в большей дозе (3,0-3,4%) не целесообразно.
Исходя из полученных данных, можно сделать вывод о том, что применение в рационе новорожденным цыплятам кормовую добавку «Мосовет» один раз в сутки в дозе 2,0-2,4% от массы корма, позволяет снизить уровень бактериальной обсемененности тушек птиц эпидемиологически значимыми штаммами микроорганизмов рода Salmonella на 76,6% по сравнению с контролем и 48,56% по сравнению с профилактическим антибактериальным препаратом.
Пример 2. Для изучения сорбционной активности кормовой добавки «Мосовет» в отношении музейных штаммов и полевых изолятов микроорганизмов рода Salmonella в опыте in vitro использовали музейные штаммы и полевые изоляты микроорганизмов рода Salmonella выделенные из патологического материала от больных животных и птицы. В качестве препарата сравнения был антибактериальный препарат по прототипу.
Навески кормовой добавки помещали в стерильные пробирки с 10 мл физиологического раствора (0,9% р-р NaCl), в которые затем вносили 100 мкл. микробной взвеси тестовых микроорганизмов в концентрации 1 млрд. КОЕ/мл. Через 1 час производили посев надосадочной жидкости на чашки Петри с общими и селективными питательными средами. Посевы инкубировали в термостате 24 часа, при Т=37°С. Учет результатов производили путем подсчета выросших на поверхности среды колоний и сравнения с результатами контрольных посевов. Результаты опыта представлены в таблице 4.
Кормовая добавка «Мосовет», обладает выраженной сорбционной активностью в отношении микроорганизмов рода Salmonella. При этом данный показатель варьирует в зависимости от вида сальмонелл от 98% (Salmonella pullorum), до 29,42% - в отношении Salmonella infantis. В среднем сорбционная активность «Мосовет» составила 63,98%, что практически в 2,5 раза выше аналогичного показателя антибактериального препарата по прототипу. Сорбционная активность антибактериального препарата по прототипу в отношении микроорганизмов рода Salmonella в среднем составила 26,1%.
Таким образом, кормовая добавка «Мосовет» обладает выраженной сорбционной активностью в отношении микроорганизмов рода Salmonella, что в 2,5 раза выше аналогичного показателя антибактериального препарата по прототипу и может быть использовано для профилактики заболеваний вызываемых данными микроорганизмами у сельскохозяйственных животных и птицы.
Средство для профилактики бактерионосительства микроорганизмов рода Salmonella у сельскохозяйственной птицы, включающее маннанолигосахариды, водорастворимые белки дрожжевой биомассы, водорастворимые глюкосахариды дрожжевой биомассы, фермент с β-глюканазной активностью, отличающееся тем, что дополнительно содержит кормовой мел и воду, при следующем соотношении ингредиентов, масс. %:
маннанолигосахариды 2-4
водорастворимые белки
дрожжевой биомассы 30-35
водорастворимые глюкосахариды
дрожжевой биомассы 17-20
фермент с β-глюканазной активностью 3-9
кормовой мел 25-30
вода остальное,
которое вводят в количестве 2,0-2,4% к массе корма, один раз в день,
в течение 28-30 дней.
