Контейнер, предварительно заполненный ботулиновым токсином

Настоящее изобретение относится к предварительно заполненному стеклянному контейнеру, такому как предварительно заполненный стеклянный шприц, содержащему водную композицию ботулинового токсина. Описан предварительно заполненный стеклянный шприц, содержащий водную композицию ботулинового токсина, причем шприц содержит (a) цилиндр шприца, изготовленный из стекла, имеющий проксимальный конец, дистальный конец и проходящую между ними по существу цилиндрическую стенку, образующую просвет цилиндра, причем цилиндр шприца имеет дистально выступающую канюлю с проходящим через нее каналом для жидкости, сообщающимся с просветом цилиндра, при этом по существу цилиндрическая стенка имеет внутреннюю поверхность, необязательно покрытую барьерным слоем, (b) укупорочное устройство, имеющее выходную крепежную часть, которая герметично соединяется и закрывает дистальный открытый выходной конец шприца, при этом выходная крепежная часть изготовлена из эластомерного материала с необязательно нанесенным на поверхность покрытием, и (c) узел штока поршня, который проходит в проксимальный конец цилиндра шприца и включает уплотнитель поршня, находящийся в скользящем непроницаемом для жидкости соединении с цилиндрической стенкой просвета цилиндра, при этом уплотнитель поршня изготовлен из эластомерного материала с необязательно нанесенным по меньшей мере на участок уплотнителя поршня покрытием, контактирующий с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или инъекции, в котором эластомерный материал выходной крепежной части выбирают из изопренового каучука (IS), бутадиенового каучука (BR), бутилового каучука, галогенированных бутиловых каучуков, бутадиен-стирольного каучука и их смесей, и эластомерный материал уплотнителя поршня выбирают из изопренового каучука (IS), бутадиенового каучука (BR), бутилового каучука, галогенированных бутиловых каучуков, бутадиен-стирольного каучука и их смесей, и причем активность токсина не снижается более чем на 25% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного стеклянного шприца в течение 12 месяцев при 5°С, или 12 месяцев при 25°С, или 6 месяцев при 30°С. Технический результат - водная композиция ботулинового токсина в предварительно заполненном контейнере стабильна в течение длительного периода времени при температуре в диапазоне от низкой до температуры окружающей среды. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 ил.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к предварительно заполненному стеклянному контейнеру, такому как предварительно заполненный стеклянный шприц, содержащему водную композицию ботулинового токсина. Водная композиция ботулинового токсина в предварительно заполненном контейнере стабильна в течение длительного периода времени при температуре в диапазоне от низкой до температуры окружающей среды. Более того, настоящее изобретение относится к набору, содержащему контейнер, предварительно заполненный ботулиновым токсином, и к применению контейнера, предварительно заполненного ботулиновым токсином, в лечебной и косметической сферах применения.

Уровень техники

Стабильность фармацевтических продуктов особенно важна для обеспечения безопасного и эффективного использования в течение достаточно продолжительного периода времени. К сожалению, характеристики (безопасность, надежность и эффективность) большинства фармацевтических продуктов со временем ухудшаются. К причинам ухудшения свойств лекарственных средств относятся химическое разложение (например, гидролиз, окисление, восстановление или рацемизация), микробное загрязнение и другие механизмы (например, выпадение в осадок).

Белковые активные ингредиенты часто лабильны по своей природе и характеризуются нестабильностью. Это приводит к утрате биологической активности в процессе производства, восстановления и/или хранения содержащих белок фармацевтических композиций. Такие проблемы, наблюдаемые в случае белков, могут быть обусловлены химической нестабильностью, приводящей к образованию связей или расщеплению (например, гидролизу, окислению, рацемизации, β-элиминированию и дисульфидному обмену), и/или физической нестабильностью вторичной структуры или структур более высокого порядка в белках без модификации с разрывом ковалентных связей (например, денатурирование, адсорбция на поверхностях и нековалентное самоагрегирование).

Поскольку реакции разложения по существу быстрее всего протекают в водных растворах, а медленнее всего - в твердых дозированных формах, активные белковые ингредиенты часто готовят в виде лиофилизированных (т.е. сублимированных) продуктов. Однако перед использованием лиофилизированные продукты по существу необходимо восстанавливать в фармацевтически приемлемой жидкости (например, в физрастворе). Следовательно, лиофилизированные фармацевтические продукты считаются менее удобными по сравнению с другими дозированными формами. Кроме того, производство лиофилизированных продуктов обычно более затратно по времени и дорогостояще. Более того, в процессе восстановления возможен неправильный порядок действий, что приводит к неточному дозированию или проблемам со стерильностью. Все эти недостатки можно преодолеть путем использования предварительно заполненных шприцев. Следовательно, предварительно заполненные шприцы становятся все более популярными устройствами для доставки лекарственных средств.

Однако если в качестве активных ингредиентов используются белки, ограниченная стабильность белков часто не позволяет составителям композиций использовать формат предварительно заполненных шприцев. Это особенно характерно для очень разбавленных растворов ботулинового токсина (ботулиновый нейротоксин, BoNT). Такие растворы BoNT применяют при лечении широкого спектра изнуряющих нейромышечных заболеваний (например, шейной дистонии, блефароспазма, мышечной спастичности и гипергидроза), а также в косметической медицине (например, для лечения морщин на лице). Существует семь гомологичных серотипов (А-G) ботулинового токсина, которые продуцируются разными видами бактерий Clostridium, в частности С. botulinum, в виде комплекса, состоящего из нейротоксического полипептида и других (нетоксичных) клостридиальных белков (т.е. различных гемагглютининов и нетоксичного негемагглютинирующего белка). Нейротоксический полипептид имеет молекулярную массу приблизительно 150 кДа и активируется селективным протеолитическим расщеплением с получением активной двухцепочечной формы, состоящей из тяжелой цепи (НС; содержит домен транслокации и домен связывания с рецептором) и легкой цепи (LC; содержит каталитический домен), соединенных дисульфидной связью и нековалентными взаимодействиями.

Для ботулиновых токсинов характерна нестабильность, и, в частности, они очень нестабильны при щелочном рН и термолабильны. Кроме того, известно, что разведение изолированного токсинового комплекса от миллиграммовых количеств до гораздо более низких концентраций, используемых в растворах для инъекций (порядка нанограмм на миллилитр) связано с существенными трудностями вследствие быстрой потери специфической активности при таком большом разведении.

Следовательно, коммерческие препараты ботулинового токсина часто поставляются в виде полученного вакуумной сушкой или лиофилизированного материала. К примерам относят, в частности, Botox^® (онаботулинумтоксинА; Allergan, Inc.) и Dysport^® (абоботулинумтоксинА; Ipsen Ltd.), каждый из которых содержит комплекс токсина С. botulinum типа А. Другой пример представляет собой Xeomin^® (инкоботулинумтоксин; Merz Pharma GmbH & Co. KGaA), который содержит чистый нейротоксический компонент серотипа А (т.е. нейротоксический полипептид с молекулярной массой приблизительно 150 кДа), очищенный от всех других белков токсинового комплекса Clostridium botulinum (т.е. различных гемагглютининов и нетоксичного негемагглютинирующего белка).

Однако продукты с лиофилизированным токсином имеют ряд недостатков, включая необходимость восстановления перед использованием и сопутствующие проблемы со стерильностью. Кроме того, восстановленный раствор токсина часто используется в клинической практике не полностью, поскольку не каждому пациенту и не для каждого показания требуется одинаковая доза. Неиспользованное количество восстановленного раствора токсина можно хранить при пониженных температурах, но только в течение непродолжительного периода времени. Например, после разведения нормальным физраствором перед использованием Botox^® и Dysport^® рекомендуется использовать в течение 6 часов и 4 часов соответственно. Аналогично на вкладыше в упаковке Xeomin^® указано, что после хранения в течение более 24 часов восстановленный раствор Xeomin^® не следует использовать, а необходимо утилизировать.

Для повышения стабильности токсина в данной области часто применяют стабилизирующие белки, такие как человеческий сывороточный альбумин (HSA). Другие стратегии стабилизации связаны с использованием небелковых стабилизаторов, например ПАВ, поливинилпирролидона (ПВП), дисахаридов, многоатомных спиртов и т.п. Кроме того, в публикации WO 00/15245 было описано, что жидкая композиция высококонцентрированного ботулинового токсина типа В (приблизительно 2500 ЕД/мл) стабильна до 30 месяцев при хранении в стеклянных флаконах при 5°С. Однако для такой продолжительной стабильности требуется буферизация рН композиции до кислого рН от 5 до 6, что приводит к болям при инъекции. В других известных подходах повышения стабильности токсина добавляют различные небелковые вспомогательные вещества, которые, однако, являются неподходящими или нежелательными для использования у человека (см., например, WO 01/58472, WO 2006/005910 и WO 2007/041664).

Таким образом, по-прежнему отсутствует пригодная для инъекций форма ботулинового токсина, которая является не только стабильной в течение длительного периода, чтобы обеспечивать достаточно длительный срок хранения, но и удобной и простой в использовании, уменьшает медицинские ошибки и сводит к минимуму риск загрязнения.

Раскрытие изобретения

В свете вышеизложенного целью настоящего изобретения является получение медицинской дозированной формы для введения ботулинового токсина, которая имеет длительный срок хранения и является удобной, безопасной и простой в применении.

Изложенная выше цель достигается путем получения контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы), предварительно заполненного ботулиновым токсином, который характеризуется превосходной долгосрочной стабильностью жидкой композиции ботулинового токсина в контейнере.

В первом аспекте в настоящем изобретении предложен предварительно заполненный стеклянный контейнер (например, шприц, флакон, карпула или ампула), содержащий водную композицию ботулинового токсина, причем активность токсина снижается не более чем на 25%, предпочтительно не более чем на 20%, относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) в течение (а) 12 месяцев при 5°С, (b) 12 месяцев при 25°С или (с) 6 месяцев при 30°С.

Стабильность водной композиции ботулинового токсина в предварительно заполненном контейнере (например, шприце, флаконе, карпуле или ампуле) с точки зрения количества невидимых частиц, размер которых более или равен 10 мкм, также является превосходной и, как правило, составляет менее 1000/мл в процессе хранения в течение 6-24 месяцев (например, 6, 9, 12, 15, 18 или 24 месяцев) при 2-30°С (например, при 5°С, 25°С или 30°С). Более того, водная композиция ботулинового токсина демонстрирует прекрасную стабильность по рН, на что указывает значение рН, которое по существу не растет и не снижается более чем на 10% относительно исходного значения рН в процессе хранения предварительно заполненного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) в течение 6-24 месяцев (например, 6, 9, 12, 15, 18 или 24 месяцев) при 2-30°С (например, при 5°С, 25°С или 30°С).

В другом аспекте в настоящем изобретении предложен набор, содержащий предварительно заполненный стеклянный контейнер (например, шприц, флакон, карпулу или ампулу) в соответствии с первым аспектом изобретения и необязательно инструкции по использованию указанного предварительно заполненного стеклянного контейнера.

В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предложен предварительно заполненный стеклянный контейнер (например, шприц, флакон, карпула или ампула) в соответствии с первым аспектом настоящего изобретения для использования в терапии. Например, предварительно заполненный стеклянный контейнер (например, шприц, флакон, карпула или ампула) можно использовать для лечения заболевания или состояния, вызванного или связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез у пациента, включая, без ограничений, дистонию, спастичность, паратонию, дискинезию, очаговый спазм, страбизм, тремор, тик, мигрень, сиалорею и гипергидроз.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению предварительно заполненного стеклянного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) в соответствии с первым аспектом изобретения в косметических процедурах, например, для лечения морщин на коже или асимметрий лица, например межбровной складки, гусиных лапок, морщин верхней части лица и полос платизмы.

В еще одном аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения заболевания или состояния, вызванного или связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез у пациента, причем способ включает местное введение эффективного количества ботулинового токсина в мышцу или экзокринную железу пациента с использованием предварительно заполненного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) в соответствии с первым аспектом изобретения.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу косметической обработки кожи, например, для лечения морщин на коже и лицевых асимметрий, причем способ включает местное введение эффективного количества ботулинового токсина пациенту путем внутридермальной, субдермальной или подкожной инъекции с использованием предварительно заполненного стеклянного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) в соответствии с первым аспектом настоящего изобретения.

В прилагаемых зависимых пунктах формулы изобретения представлены дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения. Настоящее изобретение можно лучше понять, обратившись к приведенному ниже подробному описанию изобретения, примерам и прилагаемым чертежам.

Краткое описание чертежей

На ФИГ. 1 представлена стабильность жидкой композиции ботулинового токсина в конфигурациях А, В, G и Н предварительно заполненных шприцев при 5°С в зависимости от времени. Конфигурация А: (•), конфигурация В: (), конфигурация Н: (), конфигурация G: ().

На ФИГ. 2 представлена стабильность жидкой композиции ботулинового токсина в конфигурациях А, В, G и Н предварительно заполненных шприцев при 25°С в зависимости от времени. Конфигурация А: (•), конфигурация В: (), конфигурация Н: (), конфигурация G: ().

На ФИГ. 3 представлена стабильность жидкой композиции ботулинового токсина в конфигурациях А, В, G и Н предварительно заполненных шприцев при 30°С в зависимости от времени. Конфигурация А: (•), конфигурация В: (), конфигурация Н: (), конфигурация G: ().

Осуществление изобретения

Настоящее изобретение основано на неожиданном открытии того, что жидкая композиция ботулинового токсина в стеклянном контейнере (например, в форме шприца, флакона, карпулы или ампулы) является стабильной после хранения в течение продолжительного периода времени при пониженной температуре (например, 2-8°С) и даже при температуре окружающей среды (например, 20-30°С, в частности, 25°С). Следовательно, преимущество заключается в том, что контейнер настоящего изобретения, предварительно заполненный ботулиновым токсином, имеет увеличенный срок хранения.

Более того, высокая стабильность при длительном хранении обеспечивает переносимость прерываний холодовой цепочки и может упрощать процедуру утверждения и/или коммерциализации во всех климатических зонах, включая страны с жарким климатом. Кроме того, предварительно заполненный стеклянный контейнер настоящего изобретения, в частности, в формате шприца, обеспечивает несколько дополнительных преимуществ по сравнению с другими формами введения, например простоту и удобство использования, сниженный риск медицинских ошибок, высокую точность дозирования, низкий риск загрязнения, повышенную гарантию стерильности и/или высокую безопасность введения.

При использовании в настоящем документе термин «предварительно заполненный контейнер» означает любое устройство, имеющее частично или полностью закрытое пространство, которое герметизировано или может быть герметизировано и которое можно использовать для заключения в него, хранения и/или транспортировки жидких композиций. «Предварительно заполненный контейнер» в контексте настоящего изобретения представляет собой предпочтительно закрытый (или герметизированный) контейнер, частично или преимущественно изготовленный из стекла, включая, например, контейнеры в форме (i) шприца, (ii) флакона, (iii) карпулы или (iv) ампулы.

Предварительно заполненные шприцы и карпулы имеют два отверстия, которые герметизируют для предотвращения утечки содержимого (например, водных композиций). В случае предварительно заполненного шприца проксимальный конец герметизируют уплотнителем поршня, а дистальный конец герметизируют укупорочным устройством, как более подробно описано ниже в настоящем документе. В случае стеклянной карпулы, которая обычно представляет собой стеклянный цилиндр, стерильно заполненный лекарственной композицией, проксимальный конец обычно герметизируют каучуковым уплотнителем. На этот каучуковый уплотнитель можно нажимать как на поршень в цилиндре с помощью штока карпульного шприца. Дистальный конец обычно герметизирован прокалываемой мембраной. Прокалываемую мембрану прорывают для инъекции.

В контексте настоящего изобретения «флакон» представляет собой сосуд, который обычно имеет трубчатую форму или бутылкообразную форму с горлышком и подходит для содержания, хранения и/или транспортировки лекарственных композиций. Единственное отверстие герметизируют при помощи различных систем закрытия флакона. Например, флаконы можно закрывать винтовой крышкой (завинчивающиеся флаконы), пробкой из коры, пластика или резины (флаконы с входной кромкой или закатываемые флаконы) и другими системами закрытия, такими как откидные или защелкивающиеся крышки. В контексте настоящего изобретения «флакон» предпочтительно означает стеклянный сосуд, имеющий отверстие, герметизируемое системой закрытия флакона.

Ниже представлено более подробное описание настоящего изобретения. Хотя в подробном описании изобретения используется термин «предварительно заполненный шприц», «предварительно заполненный стеклянный шприц», «шприц» или «стеклянный шприц», следует отметить, что это не означает ограничения изобретения (стеклянным) шприцем в качестве конкретного варианта осуществления (стеклянного) контейнера. Фактически при отсутствии иных указаний любая приведенная в настоящем документе ссылка на «предварительно заполненный шприц», «предварительно заполненный стеклянный шприц», «шприц», «стеклянный шприц» и т.п. должна пониматься как ссылка на «контейнер» или «стеклянный контейнер» и его описание и также включает или описывает «флакон» или «стеклянный флакон», «карпулу» или «стеклянную карпулу» или «ампулу» или «стеклянную ампулу».

В первом аспекте настоящее изобретение относится к предварительно заполненному стеклянному шприцу, содержащему ботулиновый токсин в водной композиции, причем активность токсина не снижается более чем на 25% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение (а) 12 месяцев при стандартных температурах в холодильнике (т.е. 2-8°С, например, 5°С), (b) 12 месяцев при 25°С или (с) 6 месяцев при 30°С. Предпочтительно активность токсина не снижается более чем на 20% или 15% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение (а) 12 месяцев при 2-8°С (например, 5°С), (b) 12 месяцев при 25°С или (с) 6 месяцев при 30°С. Более предпочтительно активность токсина не снижается более чем на 20% или 15% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение (а) 6 месяцев при 2-8°С (например, 5°С), (b) 6 месяцев при 25°С или (с) 3 месяцев при 30°С. Особенно предпочтительно активность токсина не снижается более чем на 10% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение (а) 3-6 месяцев при 2-8°С (например, 5°С) или (b) 3-6 месяцев при 25°С. Особенно предпочтительно активность токсина не снижается более чем на 5% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение (а) 3-6 месяцев при 2-8°С (например, 5°С) или (b) 3-6 месяцев при 25°С.

Неожиданно было обнаружено, что водная композиция ботулинового токсина в предварительно заполненном шприце также стабильна при еще более длительных сроках хранения, до 24 месяцев или даже более. Например, после хранения в течение периода времени до 24 месяцев (например, 15, 18 или 24 месяца) при 2-8°С (например, 5°С) или 25°С активность токсина предпочтительно снижается не более чем на 30% или 25%, более предпочтительно не более чем на 20%, в частности не более чем на 15%, особенно предпочтительно не более чем на 10%, а наиболее предпочтительно не более чем на 5% относительно исходной активности токсина.

В частности, активность токсина предпочтительно не снижается более чем на 25%, 20%, 15%, 10% или 5% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение 24 месяцев при 2-8°. После хранения предварительно заполненного шприца при 2-8° в течение 18 месяцев активность токсина предпочтительно не снижается более чем на 25%, 20%, 15%, 10% или 5% относительно исходной активности токсина. Более того, активность токсина предпочтительно не снижается более чем на 35%, 30%, 25%, 20% или 15% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного шприца в течение 24 месяцев при 25°С. После хранения предварительно заполненного шприца при 25°С в течение 18 месяцев активность токсина предпочтительно не снижается более чем на 30%, 25%, 20%, 15% или 10% относительно исходной активности токсина.

В контексте настоящего изобретения термин «активность токсина» должен означать биологическую активность ботулинового токсина. «Биологическая активность» может означать (а) связывание с рецептором, (b) интернализацию, (с) транслокацию через эндосомальную мембрану в цитозоль и/или (d) эндопротеолитическое расщепление белков, участвующих в слиянии с мембраной синаптического пузырька. Например, любой LC-домен (легкой цепи), проявляющий протеолитическую активность более 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% и до 100% соответствующей активности LC-домена дикого типа в анализе SNAP-25, можно считать «биологически активным» или «проявляющим протеолитическую активность» в рамках объема настоящего изобретения. Более того, любой НС-домен (тяжелой цепи), способный связываться с клеточным рецептором НС-домена, в частности со своим природным рецептором НС-домена, и способный перемещать присоединенный к нему LC-домен, считается «биологически активным».

Биологическая активность выражается в мышиных единицах (MU). При использовании в настоящем документе 1 MU представляет собой такое количество нейротоксического компонента, которое убивает 50% указанной популяции мышей после внутрибрюшинной инъекции, т.е. мышиная внутрибрюшинная доза LD₅₀, измеренная по способу Schantz и Kauter (Schantz and Kauter, J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1978, 61:96-99). Термины «MU» и «единица», или «ЕД», в настоящем документе используются на взаимозаменяемой основе.

К подходящим анализам для оценки биологической активности относится мышиный гемидиафрагмальный анализ (МНА), описанный в Pearce et al. (Toxicol. Appl. Pharmacol. 128:69-77, 1994), гемидиафрагмальный анализ (HDA) в соответствии с et al. (Experimental Neurology 147:96-102, 1997), мышиный диафрагмальный анализ (MDA) в соответствии с Dressier et al. (Mov. Disord. 20:1617-1619, 2005), протеазный анализ SNAP-25 (например, анализ GFP-SNAP25 с высвобождением флуоресценции, описанный в публикации WO 2006/020748, или усовершенствованный эндопептидазой иммуноанализ SNAP25, описанный в публикации Jones et al., 2008, J. Immunol. Methods 329:92-101), электрохемилюминисцентный (ECL) сэндвич-ИФА, описанный в публикации WO 2009/114748, и клеточные анализы, например, описанные в публикациях WO 2009/114748, WO 2004/029576, WO 2013/049508 и, в частности, в WO 2014/207109.

При использовании в настоящем документе термин «исходная активность токсина», или «исходная эффективность», по существу означает активность ботулинового токсина в начале периода хранения, т.е. после производства конечного стерилизованного шприца, предварительно заполненного ботулиновым токсином, в частности сразу после производства или в течение одного или двух дней после производства. Кроме того, термин «после хранения» при использовании в настоящем документе должен означать «после хранения в течение определенного периода времени». Кроме того, термин «в процессе хранения» по существу означает «в течение всего периода хранения».

Более того, водная композиция ботулинового токсина является высокостабильной в плане количества невидимых частиц. «Невидимая частица» в контексте настоящего изобретения обычно представляет собой частицу диаметром менее 100 мкм. В частности, число (или количество) частиц, размер которых более или равен 10 мкм, в водной композиции ботулинового токсина, как правило, составляет менее 1000/мл, предпочтительно менее 600/мл, а более предпочтительно менее 200/мл в процессе хранения в течение 6-24 месяцев (например, 6, 9, 12, 15, 18 или 24 месяцев) при 2-30°С (например, при 5°С, 25°С или 30°С).

Измерения количества частиц можно проводить разными способами, такими как визуализация микропотока (MFI), резонансное измерение масс (RMM) и анализ с отслеживанием наночастиц (NTА). Измерения частиц обычно проводят в соответствии Фармакопеей США (USP) <788>. В контексте настоящего изобретения предпочтительно использование визуализации микропотока. Этот способ измерения можно выполнить, например, с использованием системы анализа частиц DPA-5200 (ProteinSimple, г. Санта-Клара, штат Калифорния, США), оснащенной покрытой силаном проточной ячейкой 100 мкм. Как правило, образцы анализируют без разведения.

Альтернативно для определения количества частиц можно использовать резонансное измерение масс (RMM), например, с применением метрологической системы для частиц ARCHIMEDES (Affinity Biosensors, г. Санта-Барбара, штат Калифорния, США), оснащенной микросенсором (диапазон размеров 0,3-4 мкм), откалиброванным по полистироловым стандартам 1 мкм. Все образцы обычно анализируют без разведения. Результаты можно анализировать с использованием программного обеспечения ParticleLab (v1.8.570) с шагом размерного бина 10 нм. В качестве еще одного варианта определения количества частиц можно использовать анализ с отслеживанием наночастиц (NTA), например, с применением системы NanoSight LM20 (NanoSight, г. Эймсбери, Великобритания). Все образцы обычно измеряют без разведения. Движения частиц в образцах можно записывать на видео в течение 60 секунд при температуре окружающей среды и анализировать с использованием подходящего программного обеспечения (например, программного обеспечения NTA 2.3).

Более того, водная композиция ботулинового токсина демонстрирует высокую стабильность рН в том смысле, что значение рН является по существу стабильным в процессе хранения предварительно заполненного шприца. Предпочтительно значение рН не увеличивается и не уменьшается более чем на 10%, 8% или 6% относительно исходного значения рН после хранения предварительно заполненного шприца в течение 6-24 месяцев (например, 6, 9, 12, 15, 18 или 24 месяцев) при 2-30°С (например, при 5°С, 25°С или 30°С), например, в течение 18 месяцев при 25°С или в течение 24 месяцев при 25°С. Значение рН можно измерить по стандартизованному способу тестирования Фармакопеи США <791>, в котором описаны измерения рН для множества фармацевтических продуктов. Можно использовать любой подходящий измеритель рН, например измеритель рН Lab 870 производства Schott Instruments.

При использовании в настоящем документе термин «предварительно заполненный шприц» означает шприц, заполненный лекарственной композицией (т.е. водной композицией ботулинового токсина) перед отправкой конечному пользователю, который будет вводить лекарственное средство пациенту. Предварительно заполненный шприц обычно имеет вмещающий лекарственное средство контейнер, образующий часть корпуса шприца (т.е. цилиндра шприца), поршень для герметизации проксимального отверстия шприца и выталкивания лекарственного средства и герметизирующее устройство (например, колпачок-наконечник или колпачок иглы) на выходном конце шприца (например, открытом конце канюли шприца или предварительно установленной иглы (канюли)) для герметизации дистального выходного отверстия. Термин «предварительно заполненный стеклянный шприц» при использовании в настоящем документе означает предварительно заполненный шприц, у которого по меньшей мере цилиндр изготовлен из стекла.

В контексте настоящего изобретения предварительно заполненный шприц представляет собой предпочтительно шприц с люэровским наконечником для надевания или люэровским наконечником для навинчивания, оснащенным колпачком-наконечником (если отсутствует предварительно установленная игла) или колпачком для иглы (если имеется предварительно установленная игла). В контексте настоящего изобретения «шприц с люэровским наконечником для надевания» представляет собой шприц, позволяющий надавливанием надеть иглу на наконечник, а «шприц с люэровским наконечником для навинчивания» представляет собой шприц, на котором иглу можно навинтить и зафиксировать на месте. Это обеспечивает надежное соединение и предотвращает случайное отсоединение игл для инъекции жидкостей.

Предварительно заполненный шприц в соответствии с настоящим изобретением является по существу стерилизованным и, следовательно, готовым к применению. Кроме того, предварительно заполненный шприц, описанный в настоящем документе, обычно предназначен для однократного применения и должен быть одноразовым. Перед стерилизацией шприц, а более конкретно внутреннюю поверхность стеклянного цилиндра шприца, обычно покрывают смазкой для облегчения скольжения уплотнителя поршня и выталкивания содержимого шприца. К подходящим способам стерилизации относятся, без ограничений, гамма-излучение, обработка этиленоксидом (ЕТО) и влажный нагрев (например, автоклавирование).

В соответствии с настоящим изобретением водная композиция ботулинового токсина в предварительно заполненном шприце содержит ботулиновый токсин в концентрации, например, от 1 ЕД/мл до 3000 ЕД/мл, от 10 ЕД/мл до 1000 ЕД/мл. Предпочтительно ботулиновый токсин присутствует в концентрации от приблизительно 10 ЕД/мл до 400 ЕД/мл, более предпочтительно от приблизительно 25 ЕД/мл до 200 ЕД/мл, а наиболее предпочтительно от приблизительно 40 ЕД/мл до 150 ЕД/мл (например, 50 ЕД/мл, 75 ЕД/мл или 100 ЕД/мл).

Термин «ботулиновый токсин» при использовании в настоящем документе в широком смысле относится к любой форме и типу ботулинового токсина. В частности, ботулиновый токсин можно выбирать из ботулинового токсина типа А, В, C1, D, Е, F, G или их смесей. В контексте настоящего изобретения ботулиновый токсин предпочтительно относится к серотипу А, В или С1, в частности к серотипу А.

Более того, термин «ботулиновый токсин» при использовании в настоящем документе должен включать как комплекс ботулинового токсина (токсиновый комплекс), так и нейротоксический компонент комплекса ботулинового токсина. При использовании в настоящем документе термин «комплекс ботулинового токсина», или «токсиновый комплекс», означает имеющий высокую молекулярную массу комплекс, содержащий нейротоксический компонент массой приблизительно 150 кДа и, кроме того, нетоксичные белки Clostridium botulinum, включая гемагглютининовые и негемагглютининовые белки. Комплекс ботулинового токсина серотипа А доступен в продаже, например, под марками Botox^® (Allergan, Inc.) или Dysport (Ipsen, Ltd.).

Термин «нейротоксический компонент» при использовании в настоящем документе относится к нейротоксическому полипептиду из токсинового комплекса (полипептид 150 кДа) без каких-либо связанных нетоксических белков. Например, чистый нейротоксический компонент доступен в продаже под торговыми наименованиями Xeomin^® и Bocouture^® (Merz Pharmaceuticals GmbH). В контексте настоящего изобретения ботулиновый токсин предпочтительно представляет собой нейротоксический компонент комплекса ботулинового токсина, например, серотипа А, В, С1, в частности комплекса ботулинового токсина серотипа А. Иными словами, водная композиция ботулинового токсина, содержащаяся в предварительно заполненном стеклянном шприце, предпочтительно содержит (только) указанный нейротоксический компонент и не содержит каких-либо других белков токсинового комплекса Clostridium botulinum.

Кроме того, предполагается, что настоящее изобретение охватывает все изоформы, гомологи, ортологи и паралоги ботулинового токсина, демонстрирующие идентичность последовательности по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90% и до 60%, до 70%, до 80%, до 90%, до 100% с ботулиновым токсином дикого типа, например ботулиновым токсином дикого типа А или нейротоксическим компонентом ботулинового токсина серотипа А1, внесенным в базу данных GenBank под номером доступа ААА23262. Идентичность последовательности можно вычислить при помощи любого алгоритма, подходящего для получения надежных результатов, например алгоритма FASTA (W.R. Pearson & D.J. Lipman PNAS (1988) 85:2444-2448). Идентичность последовательности можно вычислить путем сравнения двух полипептидов или двух доменов, таких как два LC-домена или их фрагменты.

Модифицированные или рекомбинантные ботулиновые токсины также входят в объем настоящего изобретения. Для подходящих мутантов дана ссылка на документы WO 2006/027207, WO 2009/015840, WO 2006/114308, WO 2007/104567, WO 2010/022979, WO 2011/000929 и WO 2013/068476, все из которых включены в настоящий документ путем ссылки. Кроме того, настоящее изобретение также относится к ботулиновым токсинам, подвергнутым химической модификации, например пегилированию, гликозилированию, сульфатированию, фосфорилированию или любой другой модификации, в частности, одной или более поверхностных или подвергающихся действию растворителя аминокислот. Модифицированные формы, рекомбинантные формы, изоформы, гомологи, ортологи, паралоги и мутанты, подходящие для использования в настоящем изобретении, являются биологически активными, т.е. способны перемещаться в нейроны и расщеплять белки комплекса SNARE (например, VAMP/синтаксин, синаптобревин и SNAP-25), обеспечивая ингибирующие ацетилхолин эффекты, например эффекты мышечного паралича.

В контексте настоящего изобретения водная композиция ботулинового токсина может содержать различные другие фармацевтически приемлемые вещества, например соли (например, хлорид натрия), стабилизирующие белки (например, альбумин, желатин), сахара (например, глюкозу, фруктозу, галактозу, трегалозу, сахарозу и мальтозу), углеводные полимеры (например, гиалуроновую кислоту или поливинилпирролидон (ПВП)), многоатомные спирты (например, глицерин и сахарные спирты, такие как маннит, инозит, лактит, изомальт, ксилит, эритрит, сорбит), аминокислоты, витамины (например, витамин С), цинк, магний, анестезирующие агенты (например, местные анестезирующие агенты, такие как лидокаин), ПАВ, регуляторы тоничности и т.п. Термин «фармацевтически приемлемый» при использовании в настоящем документе означает те соединения или вещества, которые подходят для введения в контакт с тканями млекопитающих, особенно людей.

Термин «содержит» при использовании в настоящем документе должен включать как неограничивающий термин «включает», так и ограничивающий термин «состоит (из)». Термин «изготовлен из» при использовании в настоящем документе должен в широком смысле означать «произведен из», в частности «в основном произведен из», и по существу означает «содержащий» (с указанием на то, что другие вещества или материалы могут быть включены в некоторых количествах). Также он может означать «состоящий из».

Предпочтительно рН водной композиции ботулинового токсина в предварительно заполненном шприце в процессе хранения составляет 6,0-7,5, 6,5-7,5, 6,1-7,3, 6,2-7,2, 6,3-7,1 и 6,5-7,0. Преимущество рН в диапазоне 6,1-7,3 заключается в том, что инъекции таких нейтральных или лишь слабокислых растворов являются гораздо менее болезненными, чем инъекции кислых растворов.

Термин «водная композиция», или «водная композиция ботулинового токсина», при использовании в настоящем документе не ограничен конкретной реализацией и может относиться к водной суспензии, водной дисперсии, водной эмульсии, а предпочтительно представляет собой водный раствор.

Предпочтительно водная композиция ботулинового токсина не содержит буферного вещества, например фосфатного буфера, фосфатно-цитратного буфера, лактатного буфера, ацетатного буфера и т.п. Термин «буфер» при использовании в настоящем документе означает фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, которое стабилизирует рН фармацевтического препарата. Кроме того, водная композиция ботулинового токсина может не содержать аминокислот (например, метионина), и/или ПАВ (например, полисорбатов, таких как полисорбат 80), и/или белков животного происхождения (например, человеческого сывороточного альбумина (HSA) или бычьего сывороточного альбумина (BSA)).

Предпочтительная водная композиция ботулинового токсина для использования в настоящем изобретении содержит воду, ботулиновый токсин (например, нейротоксический компонент ботулинового токсина, предпочтительно типа А) в концентрации, например, от 10 до 150 ЕД/мл, соль (например, хлорид натрия) в концентрации, например, от 0,5% до 1,5% вес./об., сахар (например, моно- или дисахарид, такой как глюкоза, фруктоза, галактоза, трегалоза, сахароза и мальтоза) в концентрации, например, от 0,1% до 2% вес./об., и стабилизирующий белок (например, альбумин) в концентрации, например, от 0,01% до 4% вес./об., от 0,1% до 3% вес./об. или от 0,1% до 1% вес./об.

Другая предпочтительная водная композиция ботулинового токсина для использования в настоящем документе по существу состоит из воды, ботулинового токсина (например, нейротоксического компонента ботулинового токсина типа А), хлорида натрия, сахарозы и альбумина (например, человеческого сывороточного альбумина; HSA). Концентрации упомянутых компонентов могут находиться в следующих диапазонах: от 10 до 200 ЕД/мл или от 30 до 125 ЕД/мл (ботулиновый токсин), от 0,5% до 1,5% вес./об. или от 0,7% до 1,1% вес./об. (хлорид натрия), от 0,1% до 2% вес./об. или от 0,2% до 1% вес./об. (сахароза), от 0,01% до 1% вес./об., от 0,05% до 0,5% вес./об., от 0,1% до 3% вес./об. или от 0,5% до 1,5% вес./об. (HSA). Дополнительная предпочтительная композиция ботулинового токсина для использования в настоящем изобретении представляет собой раствор Xeomin^®, например, разведенный физиологическим раствором (0,9% хлорид натрия), который содержит от 20 до 150 ЕД/мл нейротоксического компонента ботулинового токсина типа А.

Термин «по существу состоит из» при использовании в настоящем документе должен означать, что вещества, не входящие в указанный перечень, содержатся лишь в следовых количествах, например, неизбежные примеси, содержащиеся в компонентах, использованных при приготовлении водной композиции ботулинового токсина, и небольшие количества примесей, входящие в изолированный ботулиновый токсин (например, нейротоксический компонент ботулинового токсина типа А) вследствие процедуры очистки (например, очень небольшие остаточные количества буферов, хелатирующих агентов и т.п.).

В соответствии с настоящим изобретением конфигурация предварительно заполненного шприца не имеет конкретных ограничений и обычно включает цилиндр для приема жидкости, который после заполнения разъемно закрывают укупорочным устройством для герметичного закрытия дистального конца шприца (например, при помощи «колпачка» (или «колпачка-наконечника»), который перед использованием снимают и меняют на иглу, или средство герметизации имеет вид колпачка для иглы в случае шприца со съемной или несъемной иглой), а с проксимального конца закрывают поршнем или другим средством, обеспечивающим непроницаемое для жидкости соединение с внутренней стенкой цилиндра. Для использования предварительно заполненного шприца колпачок-наконечник, колпачок для иглы или иное укупорочное устройство удаляют, при необходимости присоединяют иглу (если она отсутствует), а наконечник или головку поршня продвигают внутрь цилиндра, выполняя инъекцию содержимого цилиндра в тело пациента.

Предварительно заполненный стеклянный шприц в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно содержит:

(a) цилиндр шприца, изготовленный из стекла, имеющий проксимальный конец, дистальный конец и проходящую между ними по существу цилиндрическую стенку, образующую просвет цилиндра, причем цилиндр шприца имеет дистально выступающий наконечник с проходящим через него каналом для жидкости, сообщающимся с просветом цилиндра, при этом по существу цилиндрическая стенка имеет внутреннюю поверхность, необязательно покрытую барьерным слоем,

(b) укупорочное устройство, имеющее выходную крепежную часть, которая герметично соединяется и закрывает дистальный открытый выходной конец шприца, при этом выходная крепежная часть изготовлена из эластомерного материала с необязательно нанесенным на поверхность покрытием, и

(c) узел штока поршня, который проходит в проксимальный конец цилиндра шприца и включает уплотнитель поршня, находящийся в скользящем непроницаемом для жидкости соединении с цилиндрической стенкой просвета цилиндра, при этом уплотнитель поршня изготовлен из эластомерного материала с необязательно нанесенным по меньшей мере на участок уплотнителя поршня покрытием, контактирующий с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или инъекции.

По существу основные системы закрытия контейнеров, включая такие компоненты, как цилиндры шприцев, герметизирующие устройства (например, колпачки-наконечники или колпачки для иглы) и поршни, потенциально могут взаимодействовать с лекарственной композицией в предварительно заполненном шприце. Это может приводить к высвобождению из материалов шприца продуктов экстракции/выщелачивания, которые контактируют с водной композицией ботулинового токсина. Продукты экстракции/выщелачивания могут загрязнять водную композицию ботулинового токсина и снижать стабильность или активность ботулинового токсина. Следовательно, материалы для предварительно заполненного шприца по существу выбирают так, чтобы свести к минимуму или ограничить количество продуктов экстракции и выщелачивания.

При использовании в настоящем документе термины «продукт(-ы) экстракции» и «продукт(-ы) выщелачивания» означают химические вещества, которые могут высвобождаться из контейнера или компонента материала предварительно заполненного шприца и/или мигрировали из материалов шприца в водную композицию ботулинового токсина при нормальных условиях использования или хранения. Способы идентификации продуктов экстракции/выщелачивания известны в данной области и основаны на рекомендованных промышленных практиках и инструкциях Международной конференции по гармонизации (ICH) (см. инструкцию FDA - Container Closure Systems for Packaging Human Drugs and Biologies), и к ним относятся, например, жидкостная хроматография/масс-спектрометрия (ЖХ/МС), газовая хроматография/масс-спектрофотометрия (ГХ/МС), спектроскопия с индуктивно-связанной плазмой (ICP) и инфракрасная (ИК) спектроскопия.

Внутреннюю поверхность стеклянного цилиндра обычно покрывают слоем смазки (в настоящем документе он также на взаимозаменяемой основе обозначен термином «барьерный слой», или «барьерное покрытие»). Слой смазки должен не только обеспечивать высокую смазываемость, которая позволяет поршню легко скользить по цилиндру, но он также должен быть совместим с водной композицией ботулинового токсина и обеспечивать срок его хранения. В контексте настоящего изобретения слой смазки может представлять собой слой не содержащей силикона смазки или слой силиконовой смазки.

Аналогично внутренняя поверхность стеклянной емкости, которая является частью флакона, внутренняя поверхность стеклянного цилиндра карпулы, внутренняя поверхность стеклянной ампулы могут быть необязательно покрыты барьерным слоем, и в частности не содержащим силикона слоем или силиконовым слоем. Таким образом, все приведенные ниже комментарии в отношении не содержащего силикона слоя смазки и слоя силиконовой смазки стеклянного шприца в равной мере применимы к не содержащему силикона слою и силиконовому слою соответственно стеклянного флакона, стеклянной карпулы и стеклянной ампулы.

Подходящий не содержащий силикона слой смазки представляет собой, например, слой фторполимера (например, такие фторполимерные (фторуглеродные) слои, как слои из этилентетрафторэтилена (ETFE) и слои на основе перфторполиэфира (PFPE) (например, TriboGlide^®)), а также покрытия из диоксида кремния, наносимые на стекло методом плазмохимического газофазного осаждения (ПХГФО).

Не содержащий силикона слой смазки можно получить известным в данной области способом, например путем напыления на стеклянные цилиндры шприцев перфторполиэфирного масла для получения тонкого слоя смазки на внутренней поверхности шприца, с последующим воздействием на внутренние полости отведенным потоком плазмы инертного газа (например, аргона или гелия). Плазменная обработка приводит к сшиванию перфторполиэфира, в результате чего покрытие иммобилизуется и снижается его склонность к смещению с целевой поверхности, следствием чего является меньшее количество частиц, способных повлиять на стабильность/эффективность лекарственного средства ботулинового токсина. Пример производственного процесса описан в публикации WO 2014/014641 А1, содержание которой включено в настоящий документ путем ссылки. Кроме того, не содержащее силикона барьерное покрытие, особенно подходящее для использования в настоящем изобретении, известно в данной области под названием TriboGlide^®, перфторполиэфирное покрытие, сшитое посредством плазменной обработки.

Слой силиконовой смазки, подходящий для использования в настоящем изобретении, можно получить способом силиконизации, который выбирают, без ограничений, из способов на основе силиконового масла (например, силиконизации напылением или силиконизации горячей сушкой), и способами осаждения из паровой фазы (например, плазмохимическим газофазным осаждением (ПХГФО)). Предпочтительно слой силиконовой смазки формируют путем силиконизации напылением или более предпочтительно силиконизации горячей сушкой.

В способе силиконизации напылением силиконовое масло (например, DOW CORNING^® 360 с вязкостью 0,001 м²/с (1000 сСт)) распыляют в шприце (т.е. в цилиндре), например, с помощью плавающей или стационарной форсунки, с получением тонкого слоя силиконового масла. Хотя силиконовое масло является прекрасной смазкой, излишки силиконового масла могут приводить к образованию нежелательных видимых или невидимых невооруженным глазом частиц силиконового масла. В частности, в случае лекарственных средств на белковой основе эти частицы силиконового масла могут вступать в нежелательные взаимодействия с белковыми лекарственными средствами. Например, считается, что невидимые частицы силиконового масла способствуют агрегации белков. Следовательно, процессы силиконизации способом горячей сушки, которые приводят к образованию меньшего числа видимых и невидимых частиц силиконового масла, особенно предпочтительны для использования в настоящем изобретении. Такой процесс включает нанесение силиконового масла в виде эмульсии (например, эмульсии для силиконизации DOW CORNING^® 365), которую затем спекают со стеклянной поверхностью при определенной температуре в течение определенного периода времени.

Конструкция цилиндра шприца не имеет конкретных ограничений и обычно имеет внутренний диаметр, рассчитанный на определенный объем заполнения, например 0,5 см³, 1,0 см³, 1,5 см³ или 2,0 см³. Обычно цилиндр шприца имеет градуировочные отметки, показывающие объем жидкости в шприце. Кроме того, цилиндр шприца может иметь фланцеобразный соединитель. Конструкция фланца может быть, например, совместима со стандартом ISO 11040. Фланцеобразный соединитель может быть дополнительно совместим с рукояткой, присутствие которой не является обязательным. Кроме того, в случае шприца с люэровским разъемом для навинчивания шприц может быть оснащен люэровским адаптером для навинчивания, например, из поликарбоната.

Канюля шприца обычно выполнена как единое целое с цилиндром шприца. Канюлю формируют со встроенным каналом, проходящим в осевом направлении через канюлю и сообщающимся с камерой для подачи содержимого цилиндра шприца. Канюля может по существу иметь форму усеченного конуса, сходящегося от дистального выходного конца цилиндра шприца к выходному концу канюли. Альтернативно канюлю можно охарактеризовать как расходящуюся (т.е. расширяющуюся от меньшего диаметра к большему). Кроме того, канюля обычно расположена по центру по отношению к корпусу шприца (концентрическая канюля шприца), но также может быть расположена со смещением к краю корпуса (эксцентрическая канюля шприца).

«Укупорочное устройство» в контексте настоящего изобретения в широком смысле означает любое средство закрытия и герметизации открытого выходного конца шприца. В контексте настоящего изобретения термин «открытый выходной конец» означает любой дистальный открытый конец шприца, находящийся в жидкостном сообщении с просветом цилиндра. Укупорочное устройство обычно имеет канал с закрытым концом и открытым концом, размеры которого позволяют вводить в него и эффективно герметизировать открытый выходной конец шприца для предотвращения утечки.

В случае предварительно заполненных шприцев без предварительно установленных игл укупорочное устройство представляет собой средство укупорки, обычно называемое «колпачком-наконечником». Колпачок-наконечник образует непроницаемое для жидкости соединение с канюлей шприца, эффективно закрывая цилиндр шприца и предотвращая утечку содержимого цилиндра шприца. Колпачок-наконечник обычно разъемно соединен с канюлей шприца или с люэровской манжетой. Люэровская манжета окружает верхнюю часть цилиндра шприца (например, канюлю шприца). Предпочтительно люэровская манжета имеет внутреннюю резьбу, а колпачок-наконечник имеет внешнюю резьбу, соответствующую указанной внутренней резьбе указанной люэровской манжеты, для соединения колпачка-наконечника с цилиндром шприца. Люэровская манжета обычно представляет собой отдельно сформованную люэровскую манжету, которая устанавливается непосредственно на канюлю цилиндра шприца, например, соединением с защелкой или прессовой посадкой. Перед использованием наконечник можно снять и после этого канюлю иглы (или иглу/игольный узел) можно надежно соединить с канюлей шприца.

Если предварительно заполненный шприц имеет съемную или несъемную (постоянную) канюлю (также называемую «иглой» или «узлом иглы»), проходящую от канюли шприца для подачи водной композиции ботулинового токсина из указанного шприца, то укупорочное устройство может называться «колпачком для иглы». Указанный колпачок для иглы по существу имеет канал с закрытым концом и открытым концом, размеры которого позволяют вводить в него и соединять с канюлей (иглой), установленной на канюле шприца. Как правило, (заостренный) конец канюли проникает в закрытый конец канала в колпачке для иглы для герметизации открытого конца канюли.

Укупорочное устройство (например, колпачок-наконечник или колпачок для иглы) может представлять собой единый элемент, и он обычно изготовлен из гибкого и/или упругого полимерного материала (например, эластомера), по меньшей мере часть которого входит в контакт с дистальным отверстием шприца (называемого «выходной крепежной частью») и герметизирует его. Альтернативно укупорочное устройство может иметь внешний колпачок, изготовленный из жесткого пластикового материала, соединенный с гибким и/или упругим внутренним колпачком, изготовленным из гибкого и упругого полимерного материала (например, эластомера), причем по меньшей мере часть внутреннего колпачка входит в контакт с дистальным отверстием шприца (называемого «выходной крепежной частью») и герметизирует его.

С учетом того факта, что выходная крепежная часть контактирует с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или использования, ее предпочтительно изготавливают из материала, имеющего пониженный потенциал образования нежелательных продуктов экстракции/выщелачивания. С этой целью на выходной крепежной части может присутствовать покрытие, повышающее совместимость с водной композицией ботулинового токсина.

К подходящим гибким и/или упругим материалам укупорочного устройства, в частности выходной крепежной части, относятся эластомеры, которые не взаимодействуют с водной композицией ботулинового токсина и обеспечивают долгосрочное хранение. В частности, для той части герметизирующего устройства, которая контактирует с водной композицией ботулинового токсина, т.е. выходной крепежной части, должны быть характерны низкие уровни образования продуктов экстракции/выщелачивания в ходе длительного хранения водной композиции ботулинового токсина. При использовании в настоящем документе термин «эластомерный» или «эластомерный материал» главным образом означает поперечно-сшитые термоотверждаемые резиноподобные полимеры, которые деформируются легче пластиков, но которые утверждены для использования с жидкостями фармацевтического класса и слабо подвержены выщелачиванию или миграции газов.

Предпочтительно эластомерный материал выбирают из изопренового каучука (IS), бутадиенового каучука (полибутадиена, BR), бутилового каучука (сополимер изобутилена и изопрена, IIR), галогенированного бутилового каучука (например, хлорбутилового каучука, CIIR, и бромбутилового каучука, BIIR), бутадиен-стирольного каучука (сополимера стирола и бутадиена, SBR) и их смесей. Предпочтительно эластомерный материал представляет собой бутадиен-стирольный каучук, бутиловый каучук, смесь изопренового каучука и галогенированного (например, бром- или хлор-) бутилового каучука, галогенированный бутиловый каучук, в частности бромбутиловый каучук или хлорбутиловый каучук, или их смеси. Эластомерный материал также может быть армирован инертным материалом. Кроме того, он может быть отвержден (например, органическим пероксидом, фенольными смолами и т.п.).

Подходящие покрытия, которые могут необязательно присутствовать на эластомерном материале, изготовлены из материала, который не вступает в нежелательное взаимодействие с водной композицией ботулинового токсина и для которого характерны низкие уровни выделения продуктов экстракции/выщелачивания. Предпочтительным примером такого покрытия является покрытие, изготовленное из фторполимера, т.е. фторуглеродное покрытие. К другим покрытиям, подходящим для использования в настоящем изобретении, относятся, например, полипропилен, полиэтилен, парилен (например, парилен N, парилен С и парилен НТ) и поперечно-сшитый силикон (например, покрытие В2 (Daikyo Seiko) или XSi™ (Becton Dickinson)).

К фторполимерным продуктам относятся, без ограничений, фторированные этиленпропиленовые сополимеры (например, сополимер тетрафторэтилена и гексафторпропилена (FEP)), фторированные этиленэтиленовые сополимеры (например, сополимер этилена и тетрафторэтилена (ETFE), например, FluroTec^®), PVA (сополимер тетрафторэтилена (TFE) и перфторпропилвиниловый эфир (PPVE)), сополимеры тетрафторэтилена и перфторэтилена, поливинилиденфторид (PVDF), поливинилфторид (PVF), политетрафторэтилен (PTFE) и их смеси. Предпочтительно покрытие изготовлено из ETFE и, в частности, представляет собой покрытие FluroTec^®.

В случае карпулы настоящего изобретения дистальный конец герметизируют прокалываемой мембраной. Прокалываемая мембрана может быть образована из тонкой резины или силикона, тонкого пластика/полимера, пленки, например Mylar, полиолефина, такого как полиэтилен или полипропилен, металлической фольги, такой как алюминиевая фольга, и т.п. Мембрана может иметь толщину от приблизительно 0,001 до 2,0 мм, обычно от 0,002 мм до 0,65 мм. Кроме того, мембрана может быть изготовлена из эластомерного материала и необязательно может иметь покрытие, описанное выше применительно к укупорочному устройству предварительно заполненного стеклянного шприца.

В случае флакона настоящего изобретения система закрытия флакона (например, колпачок), в особенности те части системы закрытия флакона, которые входят в контакт или потенциально могут входить в контакт с флаконом и/или герметизируют его (например, септа), могут быть изготовлены из эластомерного материала, в частности термопластичного эластомерного материала, более конкретно стиролового блок-сополимерного термопластического эластомера, или эластомерного материала, описанного выше применительно к укупорочному устройству предварительно заполненного стеклянного шприца настоящего изобретения. Другим подходящим материалом является силиконовый материал. Кроме того, указанные материалы могут иметь необязательное покрытие, в частности фторполимерное покрытие, описанное выше применительно к укупорочному устройству предварительно заполненного стеклянного шприца.

В соответствии с настоящим изобретением предварительно заполненный шприц обычно включает узел штока поршня, который проходит в проксимальный конец цилиндра шприца. Узел штока поршня может включать шток (также называемый толкателем) с уплотнителем поршня на конце (также называемым «поршнем»), который находится в скользящем непроницаемом для жидкости соединении с цилиндрической стенкой просвета цилиндра. Поршень образует проксимальное герметичное соединение, и за счет динамической герметизации осуществляется выталкивание жидкой композиции ботулинового токсина. Уплотнитель поршня контактирует с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или введения. Следовательно, уплотнитель поршня должен быть совместим с водной композицией ботулинового токсина и не нарушать ее долгосрочную стабильность. В частности, уплотнитель поршня должен быть предпочтительно выполнен с возможностью сводить к минимуму количество продуктов экстракции/выщелачивания при длительном хранении.

В контексте настоящего изобретения уплотнитель поршня предпочтительно изготовлен из эластомерного материала с необязательно нанесенным на по меньшей мере часть уплотнителя поршня покрытием, которое контактирует с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или использования. К подходящим эластомерным материалам уплотнителя поршня относятся, без ограничений, изопреновый каучук (IS), бутадиеновый каучук (полибутадиен, BR), бутиловый каучук (сополимер изобутилена и изопрена, IIR), галогенированный бутиловый каучук (например, хлорбутиловый каучук, CIIR; и бромбутиловый каучук, BIIR), бутадиен-стирольный каучук (сополимер стирола и бутадиена, SBR) и их смеси. Предпочтительно материал уплотнителя поршня представляет собой бутиловый каучук, или галогенированный бутиловый каучук, или их смеси, более предпочтительно бромбутиловый каучук или хлорбутиловый каучук, а наиболее предпочтительно бутиловый каучук. Эластомерный материал также может быть армирован инертным материалом. Кроме того, он может быть отвержден (например, органическим пероксидом, фенольными смолами и т.п.).

Предпочтительно уплотнитель поршня содержит покрытие, выполняющее роль барьерной пленки. Покрытие обычно наносят на по меньшей мере герметизирующие поверхности, включая часть поверхности уплотнителя поршня, обращенную к просвету цилиндра и контактирующую с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или использования. Это покрытие сводит к минимуму взаимодействие между поршнем и жидкой композицией ботулинового токсина и обеспечивает хорошие смазочные свойства.

Подходящие покрытия уплотнителя поршня по существу изготовлены из материала, который не вступает в нежелательные взаимодействия с водной композицией ботулинового токсина и для которого характерны низкие уровни продуктов экстракции/выщелачивания. К таким покрытиям относятся, без ограничений, полипропилен, полиэтилен, парилен (например, парилен N, парилен С и парилен НТ), поперечно-сшитый силикон и предпочтительно фторполимерные покрытия. К примерам подходящих поперечно-сшитых силиконовых покрытий относятся покрытие В2 (Daikyo Seiko) или XSi™ (Becton Dickinson).

К фторполимерным продуктам относятся, без ограничений, фторированные этиленпропиленовые сополимеры (например, сополимер тетрафторэтилена и гексафторпропилена (FEP)), фторированные этиленэтиленовые сополимеры (например, сополимер этилена и тетрафторэтилена (ETFE), например, FluroTec^®), PVA (сополимер тетрафторэтилена (TFE) и перфторпропилвиниловый эфир (PPVE)), сополимеры тетрафторэтилена и перфторэтилена, поливинилиденфторид (PVDF), поливинилфторид (PVF), политетрафторэтилен (PTFE) и их смеси. Предпочтительно покрытие изготовлено из ETFE и, в частности, представляет собой покрытие FluroTec^®.

Конструкция уплотнителя поршня не имеет конкретных ограничений, и он может представлять собой вложенный или инкапсулированный уплотнитель. Кроме того, соединение со штоком может содержать резьбу, чтобы шток можно было установить после стерилизации. Альтернативно соединение со штоком может быть выполнено в виде конструкции с защелкиванием. Шток, как и уплотнитель поршня, по существу выполнен с возможностью выдерживать стерилизацию, но не имеет каких-либо иных ограничений. Как правило, шток изготовлен из пластикового материала, такого как этиленвинилацетатный сополимер (EVA) или полипропилен.

Каучуковый уплотнитель карпулы настоящего изобретения может быть изготовлен из тех же эластомерных материалов, которые описаны выше применительно к уплотнителю поршня стеклянного шприца. Кроме того, каучуковый уплотнитель карпулы может иметь такое же необязательное покрытие, которое описано выше применительно к покрытию на уплотнителе поршня. Дополнительно покрытие может быть нанесено по меньшей мере на ту часть каучукового уплотнителя, которая контактирует с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или использования.

Предварительно заполненный шприц настоящего изобретения соответствует промышленному стандарту в отношении продуктов экстракции, которые, например, определяются тестом на пенообразование, исследованием рН, тестом на соединения, восстанавливающие перманганат калия, тестом УФ-спектра и тестом на остаток после выпаривания согласно Фармакопее Японии, №61, Test Methods for Plastic Containers (2001). Кроме того, предварительно заполненный шприц и соответствующий компонент до и после стерилизации удовлетворяют стандартам Фармакопеи Японии, 14-е издание, №59, Test for Rubber Closure for Aqueous Infusions.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к набору, содержащему предварительно заполненный стеклянный контейнер (например, шприц, флакон, карпулу или ампулу) в соответствии с настоящим изобретением и необязательно инструкции по использованию указанного предварительно заполненного стеклянного контейнера.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к предварительно заполненному стеклянному шприцу в соответствии с настоящим изобретением для применения в терапии. В частности, предварительно заполненный стеклянный контейнер (например, шприц, флакон, карпула или ампула) в соответствии с настоящим изобретением можно использовать для лечения заболевания или состояния, которое вызвано или связано с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез у пациента.

В контексте настоящего изобретения в том случае, если контейнер не является шприцем (например, флакон, карпула или ампула), содержимое этих контейнеров «нешприцевого типа» (т.е. водную композицию ботулинового токсина) по существу вводят в намеченный целевой участок с использованием подходящего устройства для инъекций (например, шприца) таким же образом, как описано в настоящем документе применительно к предварительно заполненному стеклянному шприцу. Карпулы вставляют в карпульное инъекционное устройство, как известно специалистам в данной области. Содержимым флаконов и ампул по существу асептически заполняют шприц, а затем вводят путем инъекции в целевой участок с использованием подходящего устройства для инъекций (например, шприца) таким же образом, как описано в настоящем документе применительно к предварительно заполненному стеклянному шприцу.

Термин «гиперактивная холинергическая иннервация» при использовании в настоящем документе относится к синапсу, который характеризуется необычно высоким выбросом ацетилхолина в синаптическую щель. Термин «необычно высокий» означает увеличение, например, до 25%, до 50% или более относительно эталонной активности, которое можно получить, например, путем сравнения выброса с выбросом в синапсе того же типа, но без нахождения в гиперактивном состоянии, причем показателем гиперактивного состояния может быть мышечная дистония. «До 25%» означает, например, от приблизительно 1% до приблизительно 25%. Способы выполнения необходимых измерений известны в данной области.

В контексте настоящего изобретения к заболеваниям или состояниям, вызванным или связанным с гиперактивной холинергической иннервацией мышц, относятся, без ограничений, дистонии (например, блефароспазм, спастическая кривошея, дистония конечностей и специфичные для определенного вида деятельности дистонии, например, графоспазм), спастичности (например, постинсультная спастичность, спастичность, вызванная церебральным параличом), паратония, дискинезии (например, отсроченная дискинезия), очаговые спазмы (например, гемифасциальный спазм), (детский) церебральный паралич (например, спастический, дискинезический или атаксический церебральный паралич), страбизм, боль (например, невропатическая боль), заживление ран, треморы, тики и мигрень.

Контейнер настоящего изобретения (например, шприц, флакон, карпула или ампула), предварительно заполненный ботулиновым токсином, особенно полезен при лечении мышечной дистонии. К примерам дистоний относятся, без ограничений, дистонии, которые выбирают из группы, состоящей из (1) черепной дистонии, включая блефароспазм и оромандибулярную дистонию открыточелюстного или закрыточелюстного типа, (2) цервикальной дистонии, включая антеколлис, ретроколлис, латероколлис и тортиколлис, (3) глоточной дистонии, (4) гортанной дистонии, включая спастическую дисфонию, (5) дистонии конечностей, включая дистонию верхних конечностей, например дистонии, специфичные для определенных видов деятельности (например, графоспазм), дистонию нижних конечностей, аксиальную дистонию, сегментную дистонию, и (6) других дистоний.

«Гиперактивная экзокринная железа», лечение которой осуществляется в контексте настоящего изобретения, не имеет конкретных ограничений, и подразумевается любая экзокринная железа с гиперактивностью. Таким образом, предусматривается, что настоящее изобретение можно применять в лечении, затрагивающем любые железы, упомянутые в публикации Sobotta, Johannes, Atlas der Anatomie des Menschen. 22. Auflage. Band 1 und 2, Urban & Fischer, 2005, которая включена в настоящий документ путем ссылки. Предпочтительно гиперактивная железа представляет собой автономную экзокринную железу. Композицию ботулинового токсина предпочтительно вводят в гиперактивную экзокринную железу или поблизости от нее.

В контексте настоящего изобретения гиперактивную экзокринную железу можно выбирать из группы, состоящей из потовой железы, слезной железы, слюнной железы и слизистой железы. Альтернативно гиперактивная железа также может быть связана с заболеванием или состоянием, которое выбирают из группы, состоящей из синдрома Фрей, синдрома крокодиловых слез, подмышечного гипергидроза, ладонного гипергидроза, подошвенного гипергидроза, гипергидроза головы и шеи, гипергидроза тела, ринореи или относительно повышенного слюноотделения у пациентов с инсультом, болезнью Паркинсона и боковым амиотрофическим склерозом. В частности, заболевание или состояние, вызванное или связанное с гиперактивной холинергической иннервацией экзокринных желез, может включать слюнотечение изо рта (усиленное слюноотделение, сиалорею) и чрезмерное потоотделение (гипергидроз).

Введение не ограничено какой-либо конкретной схемой, режимом, формой, дозой или интервалом введения. Как известно специалистам в данной области, вводимое количество или доза ботулинового токсина зависит от режима введения, типа заболевания, веса пациента, возраста, пола, состояния здоровья, а также от того, какие целевые ткани выбирают для введения. Композицию ботулинового токсина обычно вводят местно, например, путем подкожной или внутримышечной инъекции в целевые ткани (например, мышцы, кожу, экзокринные железы) или поблизости от них.

Кроме того, для разных мышц, в зависимости от их размера, по существу требуются разные дозы. Подходящая доза может находиться в диапазоне от 10 до 2000 ЕД, предпочтительно от 50 до 500 ЕД, а более предпочтительно от 100 до 350 ЕД ботулинового токсина. Для лечения экзокринных желез доза обычно находится в диапазоне от 10 до 500 ЕД, предпочтительно от 20 до 200 ЕД, а более предпочтительно от 30 до 100 ЕД. Такие суммарные количества можно вводить в один день или на следующий день лечения. Например, в первый сеанс лечения можно вводить первую часть дозы. Оставшуюся часть суммарной дозы можно вводить в течение одного или более сеансов лечения. Кроме того, частота введения не имеет конкретных ограничений, и подходящие интервалы введения могут составлять три месяца или менее (например, 4 или 8 недель) или более трех месяцев.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению предварительно заполненного стеклянного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) настоящего изобретения для косметических целей, например для лечения лицевых асимметрий, морщин и складок на коже (например, лицевых складок и лицевых морщин), например морщин верхней части лица, полос платизмы, межбровных складок, носогубных складок, складок на подбородке, морщин марионетки, щечных коммиссур, околоротовых морщин, гусиных лапок и линий подбородка. Предпочтительно контейнер настоящего изобретения (например, шприц, флакон, карпулу или ампулу), предварительно заполненный ботулиновым токсином, используют для инъекций в межбровные складки, горизонтальные лобные складки, гусиные лапки, околоротовые складки, тревожные морщины, двойной подбородок и/или полосы платизмы.

Количества ботулинового токсина, вводимые в косметических целях, обычно находятся в диапазоне от 1 до 5 ЕД, от 5 до 10 ЕД, от 10 до 20 ЕД или от 20 до 50 ЕД. Эти суммарные количества можно вводить в один день или на последующий день лечения. Например, в первый сеанс лечения можно вводить первую часть дозы. Эта первая часть предпочтительно представляет собой субоптимальную часть, т.е. часть, полностью не устраняющую морщины или кожные складки. Оставшуюся часть суммарной дозы можно вводить в течение одного или более сеансов лечения.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, вызванного или связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез у пациента, причем способ включает местное введение эффективного количества ботулинового токсина в мышцу или экзокринную железу пациента с использованием предварительно заполненного стеклянного контейнера (например, шприца, флакона, карпулы или ампулы) в соответствии с первым аспектом изобретения.

Термин «эффективное количество» при использовании в настоящем документе означает количество ботулинового токсина, достаточное для получения благоприятного или желательного терапевтического, косметического или анестезирующего результата. В настоящем контексте термин «местное введение» при использовании в настоящем изобретении относится предпочтительно к подкожной и внутримышечной инъекции в целевые ткани (например, мышцы, кожу, экзокринные железы) или поблизости от них. Термин «пациент» при использовании в настоящем документе по существу относится к человеку, имеющему заболевание или состояние, вызванное или связанное с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез, или к человеку, нуждающемуся в косметическом или анестезирующем воздействии. При использовании в настоящем документе термин «пациент» может применяться на взаимозаменяемой основе с термином «субъект» или «индивид».

Введение не ограничено какой-либо конкретной схемой, режимом, формой, дозой или интервалом введения. При использовании в настоящем документе термин «в мышцу или экзокринную железу» означает, что ботулиновый токсин может вводиться в одну или более мышц или экзокринных желез или поблизости от них. Обычно ботулиновый токсин вводят путем местной внутримышечной инъекции. В отношении дополнительных деталей, относящихся к введению (например, схеме, режиму, форме, дозировке и интервалу) и к заболеванию или состоянию, лечение которых осуществляется, применяются те же комментарии, которые изложены выше в отношении использования предварительно заполненного стеклянного контейнера (например, предварительно заполненного ботулиновым токсином шприца) для косметических и терапевтических сфер применения.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу косметической обработки кожи, например, для лечения морщин на коже и лицевых асимметрий, причем способ включает местное введение эффективного количества ботулинового токсина пациенту путем внутридермальной, субдермальной или подкожной инъекции с использованием предварительно заполненного стеклянного шприца в соответствии с первым аспектом настоящего изобретения.

Этот дополнительный аспект тесно связан с другими описанными выше аспектами настоящего изобретения, и, следовательно, к нему, при отсутствии иных указаний, в равной мере применимы все приведенные выше комментарии, определения и объяснения, относящиеся к этим другим аспектам.

Настоящее изобретение будет дополнительно проиллюстрировано ниже с помощью следующих не имеющих ограничительного характера примеров.

ПРИМЕРЫ

В приведенных ниже примерах показана превосходная долгосрочная стабильность водной композиции ботулинового токсина в разных предварительно заполненных шприцевых системах (ниже обозначены как «конфигурации») в соответствии с настоящим изобретением.

Результаты, полученные для разных конфигураций шприцев, неожиданно показали, что, против ожидания и распространенного в данной области техники представления, водная композиция ботулинового токсина, хранящаяся в предварительно заполненной шприцевой системе, является стабильной в течение длительного периода времени (например, до 18 месяцев) при стандартной температуре холодильника (2-8°С) и даже является стабильной при хранении в течение приблизительно 9 месяцев при повышенной температуре 25°С. Кроме того, экстраполяция измеренных данных по стабильности показывает, что шприц, предварительно заполненный ботулиновым токсином, при 2-8°С позволяет обеспечить срок хранения приблизительно 24 месяца или даже более.

В целом, полученные результаты показывают, что ботулиновый токсин можно с удобством применять посредством предварительно заполненных шприцев. Это важный вклад в сферу управления широким спектром областей применения ботулинового токсина по лечебным и косметическим показаниям, поскольку шприцы, предварительно заполненные ботулиновым токсином, являются более безопасными и удобными в применении для медицинских работников и пациентов по сравнению с традиционными лиофилизированными препаратами ботулинового токсина и обеспечивают гибкость и превосходный срок хранения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Жидкую композицию ботулинового токсина, использованную в приведенных ниже примерах, готовили, растворяя 1,0 мг человеческого альбумина, 4,7 мг сахарозы и инкоботулинумтоксин А в 0,9% физрастворе до концентрации 50 ЕД/мл.

Затем раствор ботулинового токсина заливали в стеклянный цилиндр шприца, предварительно соединенный с укупорочной системой люэровского типа с навинчиванием (Luer-Lock), содержащей адаптер Luer-Lock и колпачок-наконечник, который после установки входил в контакт с отверстием дистальной канюли шприца и герметизировал цилиндр шприца. Уплотнитель поршня вставляли в проксимальный концевой участок цилиндра, закрывая проксимальное отверстие. Полученный предварительно заполненный шприц хранили при температуре приблизительно 5°С, 25°С и 30°С.

Стабильность раствора ботулинового токсина определяли исходно и после хранения в течение одного месяца, трех месяцев, шести месяцев и девяти месяцев, измеряя эффективность оставшегося токсина, значение рН и концентрацию невидимых частиц.

Эффективность определяли при помощи гемидиафрагмального анализа. Анализ проводили, используя мышиный нервно-мышечный препарат, который инкубировали в ванночке для органов, содержащей 4 мл среды. Мышцу присоединяли к динамометрическому датчику и электрически стимулировали через диафрагмальный нерв с получением изометрической силы сокращения, которая оставалась постоянной в течение более 180 мин, если токсин не добавляли. При добавлении токсина в ванночку для органов амплитуда сокращения стимулированной через нерв мышцы постепенно падала. Амплитуду сокращения диафрагмы отслеживали в зависимости от времени. В качестве показаний регистрировали время, за которое достигалась половинная величина от исходной силы сокращения, которое обозначали как время паралича. Время паралича пропорционально количеству активного токсина, добавляемого к препарату.

Измерения рН проводили в соответствии со стандартизованным методом тестирования Фармакопеи США, USP <791>, в котором описаны измерения рН для многих фармацевтических продуктов, с использованием измерителя рН (Lab 870, Schott Instruments).

Измерения частиц проводили методом визуализации микропотока. Измерения методом визуализации микропотока выполняли с использованием системы анализа частиц DPA-5200 (ProteinSimple, г. Санта-Клара, штат Калифорния, США), оснащенной покрытой силаном проточной ячейкой 100 мкм. Образцы анализировали без разведения. При выполнении измерений использовали программное обеспечение MFI View System Software (MVSS) версии 2-R2-6.1.20.1915, а при анализе образцов использовали программное обеспечение MFI View Analysis Suite (MVAS) версии 1.3.0.1007.

Исследовали четыре разных предварительно заполненных шприцевых системы (или «конфигурации шприцев»), которые отличались друг от друга цилиндром шприца, колпачком-наконечником и/или уплотнителем поршня, и данные представлены в таблице 1.

1 = Gerresheimer.

2 = Becton, Dickinson and Company.

3 = Использование Dow Corning^® 365, эмульсии Dimethicone NF.

4 = TELC (укупорка люэровского разъема с контролем первого вскрытия).

5 = PRTC (пластиковый жесткий колпачок-наконечник).

6 = SCF (стерильный, чистый и готовый к заполнению).

7 = BSCF (инкапсулированный, стерильный, чистый, готовый к заполнению; с использованием инкапсулированных поршней (BSCF)).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Результаты измерения стабильности для конфигураций А, В, G и Н представлены в таблице 2 ниже.

* = Исходная абсолютная активность токсина в единицах находится в диапазоне от 51 ЕД до 56 ЕД.

Вышеуказанные данные по стабильности, а также экстраполяция до времени хранения 24 месяца графически представлены на ФИГ. 1 (стабильность при 2-8°С), ФИГ. 2 (стабильность при 25°С) и ФИГ. 3 (стабильность при 30°С). Как можно видеть из таблицы 2 и ФИГ. 1-3, максимальная измеренная потеря биологической активности составляет всего 12%, 20% и 20% для температурных условий 2-8°С (до 18 месяцев), 25°С (до 12 месяцев) и 30°С (до 6 месяцев) соответственно. Экстраполяции показывают, что потеря биологической активности после времени хранения 24 месяца составляет менее 5% при 2-8°С для всех конфигураций А, В, G и Н и менее 10% при 25°С для конфигурации В.

Кроме того, измерения рН показали, что значение рН оставалось исключительно стабильным в течение периода до 18 месяцев. Не было отмечено каких-либо тенденций в сторону увеличения или уменьшения, и все измеренные значения рН оставались в пределах ±0,5 исходного рН (см. таблицу 3).

*Н/о = не обнаружено.

Более того, измерения частиц методом визуализации микропотока не выявили существенного увеличения количества частиц (см. таблицу 4).

Как можно видеть из таблицы 4, количество частиц остается намного ниже 1000/мл, а в большинстве случаев - даже ниже 200/мл. Аналогичным образом, измерения частиц способом резонансного измерения масс (с использованием метрологической системы для частиц ARCHIMEDES; Affinity Biosensors, г. Санта-Барбара, штат Калифорния, США) и анализа с отслеживанием наночастиц (с использованием системы NanoSight LM20; NanoSight, г. Эймсбери, Великобритания) не выявили значимого количества частиц.

В заключение, представленные выше результаты показывают, что жидкие композиции ботулинового токсина в предварительно заполненных шприцах стабильны в течение длительного периода времени при температурах 2-8°С и даже при температурах окружающей среды (например, от 25°С до 30°С). С учетом того факта, что для ботулиновых токсинов характерна нестабильность, особенно при низких концентрациях токсина, это открытие оказалось неожиданным. В частности, известно, что ботулиновые токсины являются высоколабильными и очень нестабильными при щелочном рН. Следовательно, принимая во внимание лабильный характер ботулиновых токсинов, открытие того, что ботулиновый токсин в водном растворе является высокостабильным при хранении в предварительно заполненных шприцах, было весьма неожиданным.

Таким образом, шприц в соответствии с настоящим изобретением, предварительно заполненный ботулиновым токсином, обеспечивает существенные преимущества по сравнению с другими способами доставки ботулинового токсина, включая повышение удобства и простоты обращения, снижение медицинских ошибок, повышение точности дозирования, сведение к минимуму риска загрязнения, повышенную гарантию стерильности и повышение безопасности при введении.

1. Предварительно заполненный стеклянный шприц, содержащий водную композицию ботулинового токсина, причем шприц содержит

(a) цилиндр шприца, изготовленный из стекла, имеющий проксимальный конец, дистальный конец и проходящую между ними по существу цилиндрическую стенку, образующую просвет цилиндра, причем цилиндр шприца имеет дистально выступающую канюлю с проходящим через нее каналом для жидкости, сообщающимся с просветом цилиндра, при этом по существу цилиндрическая стенка имеет внутреннюю поверхность, необязательно покрытую барьерным слоем,

(b) укупорочное устройство, имеющее выходную крепежную часть, которая герметично соединяется и закрывает дистальный открытый выходной конец шприца, при этом выходная крепежная часть изготовлена из эластомерного материала с необязательно нанесенным на поверхность покрытием, и

(c) узел штока поршня, который проходит в проксимальный конец цилиндра шприца и включает уплотнитель поршня, находящийся в скользящем непроницаемом для жидкости соединении с цилиндрической стенкой просвета цилиндра, при этом уплотнитель поршня изготовлен из эластомерного материала с необязательно нанесенным по меньшей мере на участок уплотнителя поршня покрытием, контактирующий с водной композицией ботулинового токсина в процессе хранения и/или инъекции,

в котором эластомерный материал выходной крепежной части выбирают из изопренового каучука (IS), бутадиенового каучука (BR), бутилового каучука, галогенированных бутиловых каучуков, бутадиен-стирольного каучука и их смесей, и

эластомерный материал уплотнителя поршня выбирают из изопренового каучука (IS), бутадиенового каучука (BR), бутилового каучука, галогенированных бутиловых каучуков, бутадиен-стирольного каучука и их смесей, и

причем активность токсина не снижается более чем на 25% относительно исходной активности токсина после хранения предварительно заполненного стеклянного шприца в течение 12 месяцев при 5°С, или 12 месяцев при 25°С, или 6 месяцев при 30°С.

2. Предварительно заполненный стеклянный шприц по п. 1, в котором количество невидимых частиц, размер которых более или равен 10 мкм, составляет менее 1000/мл в процессе хранения от 6 до 24 месяцев при температуре от 2°С до 30°С.

3. Предварительно заполненный стеклянный шприц по п. 1 или п. 2, в котором значение рН не увеличивается и не уменьшается более чем на 10% относительно исходного значения рН после хранения предварительно заполненного стеклянного шприца в течение 6-12 месяцев при 5°С, или 25°С, или 30°С или в котором рН водной композиции ботулинового токсина в процессе хранения поддерживается в диапазоне 6,0-7,5.

4. Предварительно заполненный стеклянный шприц по любому из пп. 1-3, в котором ботулиновый токсин присутствует в водной композиции в концентрации от 10 ЕД/мл до 1000 ЕД/мл.

5. Предварительно заполненный стеклянный шприц по любому из пп. 1-4, в котором водная композиция ботулинового токсина в предварительно заполненном стеклянном шприце не содержит буфера.

6. Предварительно заполненный стеклянный шприц по п. 1, в котором необязательное покрытие на выходной крепежной части и/или уплотнителе поршня представляет собой поперечно-сшитое силиконовое покрытие или фторполимерное покрытие.

7. Предварительно заполненный стеклянный шприц по п. 1 или п.2, в котором барьерный слой цилиндра шприца представляет собой не содержащий силикона слой или силиконовый слой.

8. Набор, содержащий предварительно заполненный стеклянный шприц по любому из пп. 1-7 и необязательно инструкции по применению указанного предварительно заполненного стеклянного шприца.

9. Применение предварительно заполненного стеклянного шприца по любому из пп. 1-7 в терапии при лечении заболевания или состояния, вызванного или связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез у пациента, включая дистонию, спастичность, паратонию, дискинезию, очаговый спазм, страбизм, тремор, тик, мигрень, сиалорею и гипергидроз.

10. Применение предварительно заполненного стеклянного шприца по любому из пп. 1-7 для косметического применения.

11. Применение п. 10, в котором косметическое применение представляет собой коррекцию морщин на коже или лицевых асимметрий.

12. Способ лечения заболевания или состояния, вызванного или связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез у пациента, причем способ включает местное введение эффективного количества ботулинового токсина в мышцу или экзокринную железу пациента путем инъекции с использованием предварительно заполненного стеклянного шприца по любому из пп. 1-7.

13. Способ косметической обработки кожи, который включает местное введение эффективного количества ботулинового токсина пациенту путем внутридермальной, субдермальной или подкожной инъекции с использованием предварительно заполненного стеклянного шприца по любому из пп. 1-7.

14. Способ по п. 13, в котором косметическую обработку кожи проводят для коррекции морщин на коже или лицевых асимметрий.