Двухуровневая микрогранулированная форма терапевтического пептида для перорального применения и способ ее получения

Группа изобретений относится к области фармакологии и включает в себя микрогранулированную форму терапевтического пептида и способ ее получения. Двухуровневая микрогранулированная форма терапевтического пептида для перорального применения состоит из носителей первого уровня - пористых кальций карбонатных ядер размером 1-5 мкм со средним размером пор 10-40 нм, имеющих однослойное альгинатное покрытие и содержащих на поверхности и в порах терапевтический пептид с высокой изоточкой в количестве 70-90 мкг/мг, расположенных в объеме носителя второго уровня - пористой альгинатно-кальциевой матрицы со средним размером пор 5-200 нм, содержащей ингибитор пептидаз - овомукоид и образующей целевые микрогранулы размером 800-900 мкм. При этом включение пептида и овомукоида в них составляет 8-35 мкг/мг и 80-100 мкг/мг, соответственно. Данная группа изобретений обеспечивает получение легко усвояемой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения с высоким и контролируемым содержанием целевого объекта с помощью менее энергозатратной, экологичной и с высоким выходом целевого продукта технологии. 2 н.п. ф-лы, 5 пр.

 

Область техники

Заявляемое изобретение относится к области химии высокомолекулярных соединений и фармакологии, конкретно к технологии получения средства пероральной доставки терапевтического пептида в микрогранулированной форме. Целевым объектом (ЦО) служат линейные ундекапептиды U2 и U5 с высокой изоточкой, которые обладают нейропротекторным действием, стимулируют когнитивные функции мозга.

Заявляемое изобретение может найти применение в фармакологии и медицине как замена инъекциям пептидов.

Уровень техники

Терапевтические пептиды применяют в качестве антибиотиков, противоопухолевых лекарств, гормонов, нейропептидов и иммуномодуляторов. Высокая эффективность, минимум побочных эффектов и возможность биотехнологического производства привлекает к пептидным лекарственным средствам все больший интерес.Пептидные лекарственные средства показаны чаще всего при хронических заболеваниях. До последнего времени инъекционный путь введения терапевтических пептидов оставался единственным вариантом. Это объясняется тем, что при пероральном приеме должны быть соблюдены определенные условия. Пероральные пептидные лекарственные формы должны быть защищены от воздействия кислой среды желудка и протеолитических ферментов желудка - пепсина и кишечника - трипсина, химотрипсина и др. Кроме того, пептидные молекулы имеют низкую проницаемость сквозь слизистую кишечника. Все эти факторы в сумме существенно понижают биодоступность пептидных молекул. В литературе описаны некоторые способы повышения биодоступности пептидных лекарств: физико-химическая модификация пептидов, использование мукоадгезивных полимеров, использование «усилителей адсорбции», введение ингибиторов пептидаз, и, наконец, использование различных систем доставки, в качестве которой и выступает предлагаемая двухуровневая композиция. Разработка пероральных форм повысит качество жизни больных и снимет проблемы с обеспечением стерильности парентеральных лекарственных средств.

Носителями для пероральной доставки пептидов могут служить пористые кальций карбонатные ядра (СаСО3). Одну из морфологических модификаций СаСО3 - сферический пористый ватерит - широко используют в качестве матрицы в системах доставки белков, нуклеиновых кислот, синтетических полимеров, клеток и пр. [Volodkin D. СаСО3 templated micro-beads and -capsules for bioapplications // Adv. Colloid Interface Sci., 207 (2014) 306-324]. В известном источнике пептиды не указаны. Причина, вероятно, заключается в том, что пептиды из-за своих малых размеров по сравнению с использованными объектами будут вымываться из пор ватерита при промывке известного средства доставки.

Известен способ получения микрокапсул - средств для доставки ЦО (белки, полисахариды), где носитель в процессе получения капсулы растворяют [Volodkin D.V., Petrov A.I., Prevot М., Sukhorukov G.B. Matrix polyelectrolyte microcapsules: new system for macromolecule encapsulation // Langmuir, 20 (2004) 3398-3406]. Матрицы из пористого СаСО3, насыщенные ЦО, включают в полимерную оболочку, состоящую из нескольких пар полиэлектролитных слоев, а затем растворяют матрицу хелатным агентом - этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА), получая полимерную микрокапсулу, содержащую ЦО. При формировании полиэлектролитной оболочки и растворении матрицы потери ЦО могут достигать 50-80%. Сведения о пептидах отсутствуют.

Известны попытки формирования пероральных систем доставки инсулина, когда матрицу не растворяют, а сохраняют в виде ядра капсулы. Так, в работе [Liu D., Jiang G., Y W. et.al. Oral delivery of insulin using СаСО3-based composite nanocarriers with hyaluronic acid coatings // Materials Letters, 2016. DOI:10.1016/j.matlet.2016.10.117] описаны микрокапсулы, где ядром служит пористый СаСО3, оболочка - из гиалуроновой кислоты. В основе защиты от агрессивной желудочной и кишечной среды в данном случае выступает мукоадгезия. Система демонстрирует биологическую активность включенного инсулина. Недостатком известного способа является значительное вымывание инсулина на стадии промывки ядер перед покрытием оболочкой. Сведения о пептидах отсутствуют.

Известен разработанный соавторами заявляемого изобретения способ формирования пероральных систем доставки терапевтического белка супероксиддисмутазы [Sudareva N., Suvorov О., Saprykina N. et.al. Alginate-containing systems for oral delivery of superoxide dismutase. Comparision of various configuration and their properties // Journal of Microencapsulation, 33 (2016) 487-496; патент РФ №2583923], основанный на использовании пористых кальций карбонатных ядер с введенными в них с использованием стандартной методики соосаждения ЦО. В часть ядер, не содержащих ЦО, введен ингибитор пептидаз - вомукоид (ОМ). Указанные ядра с ЦО и ОМ объединяют и, в свою очередь, включают в полимерные альгинатные оболочки, формируемые с помощью осадительной ванны. Известные микрокапсулы получают без растворения СаСО3 ядер. Система демонстрирует биологическую активность включенного ЦО. Известный способ имеет общий недостаток с предыдущим аналогом, связанный с вымыванием ЦО при промывке ядер. Оба указанных аналога не испытывались на пептиды, т.к. существует устойчивое мнение, что они из-за меньших размеров будут плохо удерживаться в порах, а также будут вымываться из ядер еще значительнее.

Известен разработанный ранее авторами заявляемого изобретения способ получения двухуровневой композиции для перорального использования инкапсулированного терапевтического пептида, заключающийся в следующем: пептидом U2 с помощью центрифугирования суспензии, содержащей ЦО и ликоподий, насыщается оболочка ликоподия (спор плауна Lycopodium Clavatum) - первый уровень двухуровневой системы доставки (ядро), далее осуществляется ее включение во вторичную оболочку -альгинатную микрокапсулу, формируемую методом ионотропной сшивки и содержащую ингибитор пептидаз - овомукоид (ОМ). При этом обеспечивается раздельное введение пептида и ингибитора пептидаз. [Патент РФ 2601898. Приоритет: 10.11.2016. Сударева

H. Н., Суворова О.М., Вилесов А.Д. и др. Способ получения микрокапсулированной формы терапевтического пептида для перорального применения.]. Оболочка ликоподия хорошо удерживает ЦО (оболочки содержат до 60 мкг/г, микрогранула - до 30 мкг/мг пептида). Однако существенным недостатком известной пероральной лекарственной формы является то, что размеры носителей первого уровня - оболочек ликоподия -значительно больше размеров СаСО3 ядер (25 мкм по сравнению с 3-5 мкм), что может затруднить усвоение лекарственной формы в кишечном тракте.

Анализ известных аналогов свидетельствует о том, что проблема создания эффективных и доступных микрокапсулированных форм терапевтического пептида для перорального применения остается актуальной.

Раскрытие изобретения

Задачей заявляемого изобретения является создание легко усвояемого средства пероральной доставки терапевтического пептида с высоким содержанием пептида. Указанное средство должно обладать устойчивостью к воздействию кислой среды желудка и с пролонгированным выделением пептида в щелочную среду кишечника при защите пептида от кишечных пептидаз.

Эта задача решается заявляемой группой из двух изобретений, объединенных единым изобретательским замыслом создания двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения и способа ее получения.

Заявляемая двухуровневая микрогранулированная форма терапевтического пептида для перорального применения характеризуется следующей совокупностью существенных признаков:

1 Двухуровневая микрогранулированная форма терапевтического пептида для перорального применения, характеризующаяся тем, что она состоит из носителей первого уровня - пористых кальций карбонатных ядер размером 1-5 мкм и со средним размером пор 10-40 нм, имеющих однослойное альгинатное покрытие и содержащих на поверхности и в порах терапевтический пептид с высокой изоточкой в количестве 70-90 мкг/мг, расположенных в объеме носителя второго уровня - пористой альгинатно-кальциевой матрицы со средним размером пор 5-200 нм, содержащей ингибитор пептидаз - овомукоид и образующей целевые микрогранулы размером 800-900 мкм, при этом включение пептида и овомукоида в них составляет 8-35 мкг/мг и 80-100 мкг/мг, соответственно.

Совокупность существенных признаков заявляемой двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения обеспечивает получение технического результата - легко усвояемого носителя пептида улучшенного качества: с увеличенным содержанием пептида в ядре и микрогрануле, с улучшенным его удержанием в микрогрануле, в том числе в агрессивной среде, с уменьшенным размером ядра по сравнению с оболочками спор ликоподия, что способствует его усвояемости в кишечном тракте, с пролонгированным выделением пептида и обеспечения его защиты от пептидаз.

Заявляемый двухуровневая микрогранулированная форма терапевтического пептида для перорального применения отличается тем, что это микрогранула, а не микрокапсула, составом и размерами носителя первого уровня - ядер, наличием у них предварительно нанесенного альгинатного покрытия, количественным содержанием пептида.

Анализ известного уровня техники не позволил обнаружить решение, полностью совпадающее по совокупности существенных признаков с заявляемым, что может указывать на новизну двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения.

Только совокупность существенных признаков заявляемой двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения позволяет достичь указанного технического результата. Неожиданным явился факт, что удастся удержать пептид количественно в кальций карбонатных ядрах, т.к. малые размеры пептида априори указывали на то, что это невозможно. Предыдущая попытка авторов заявляемого изобретения была связана с введением в указанные ядра более крупного объекта - терапевтического белка, и оказалась удачной. Вариант с пептидом не рассматривался, т.к. существует устойчивое мнение о вымывании из ядер более мелких объектов, чем белки. Решение пришло случайно, когда были использованы ядра с предварительным альгинатным покрытием, полученные для сравнительных контрольных опытов. Это позволяет утверждать о соответствии заявляемой двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида условию охраноспособности «изобретательский уровень» («неочевидность»).

Заявляемый способ получения двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения характеризуется следующей совокупностью существенных признаков:

1 (2). Способ получения двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения, заключающийся в том, что сначала получают носитель пептида первого уровня методом соосаждения, для чего равные объемы 0,33-1 М растворов Na2CO3 и СаСl2×2Н2O сливают и перемешивают в течение 30 с, дают суспензии созреть в течение 15 мин, полученные кальций карбонатные ядра на фильтре Шотта промывают 6-кратным объемом воды, отфильтровывают, затем промывают ацетоном и сушат при Т=40-50°С; перед введением пептида полученные пористые кальций карбонатные ядра размером 1-5 мкм предварительно обрабатывают водным раствором альгината натрия с концентрацией 0,05-0,1% с получением на них однослойного альгинатного покрытия, затем вводят терапевтический пептид с высокой изоточкой в обработанные альгинатом ядра, для чего смешивают 0,1-0,2% водную суспензию ядер и водный раствор пептида с концентрацией 0,5-1 мг/мл и проводят центрифугирование при скорости вращения 7-8⋅103 об/мин в течение 30 мин, осадок из ядер с пептидом отфильтровывают и сушат при комнатной температуре; далее носители пептида первого уровня включают в объем носителя второго уровня - альгинатно-кальциевую матрицу, сформированную методом ионотропной сшивки, для чего дисперсию ядер с пептидом концентрацией 20-200 мг/мл в 2-4%-ном водном растворе альгината натрия, содержащего 5-10 мг/мл ингибитора пептидаз - овомукоида, вводят при перемешивании по каплям в осадительную ванну, содержащую 0,5-2% раствор хлористого кальция в 0,2-0,5% растворе хитозана в 1% уксусной кислоте, рН 5-6, полученный осадок фильтруют на воронке Бюхнера, промывают водой и сушат целевые микрогранулы при комнатной температуре.

Совокупность существенных признаков заявляемого способа обеспечивает получение технического результата - получение легко усвояемой микрокапсулированной формы терапевтического пептида для перорального применения с высоким и контролируемым содержанием ЦО с помощью эффективной (менее энергозатратной, экологичной и с высоким выходом целевого продукта) технологии.

Заявляемый способ отличается использованием кальций карбонатных ядер определенного размера и пористости вместо оболочек спор ликоподия, не отличающихся однородностью, что позволяет прогнозировать и контролировать уровень насыщения ядер ЦО и воспроизводимость формы гранул. Дополнительно проводится предварительная альгинатная обработка ядер с получением их альгинатного покрытия. Увеличен выход ЦО. Упрощение заявляемой технологии связано с сокращением процедур и времени проведения процесса по сравнению со способом-аналогом с оболочками ликоподия. Способ-аналог характеризуется сложной обработкой спор ликоподия концентрированными кислотами и щелочью для освобождения оболочек.

Анализ известного уровня техники не позволил обнаружить решение, полностью совпадающее по совокупности существенных признаков с заявляемым, что может указывать на его новизну.

Только совокупность существенных признаков заявляемого способа позволяет достичь указанного технического результата. Совершенно неожиданным оказался сам факт получения легко усвояемой микрогранулированной пероральной формы терапевтического пептида с использованием носителей - кальций карбонатных ядер. Ранее кальций карбонатные ядра не рассматривались в качестве носителей пептидов из-за малого размера пептида по сравнению с размерами пор указанных ядер, следовательно, низкого включения пептида в носитель, в том числе и из-за опасности вымывания пептида в процессе получения микрогранул. Это позволяет утверждать о соответствии заявляемого способа условию охраноспособности «изобретательский уровень» («неочевидность»).

Исходя из сказанного выше, можно утверждать, что группа заявляемых изобретений в целом обладает новизной и неочевидностью.

Предлагаемая группа изобретений позволяет решить задачу создания легко усвояемого средства пероральной доставки терапевтического пептида в микрогранулированной форме с высоким содержанием пептида в ядре, обладающем устойчивостью к воздействию кислой среды желудка и с пролонгированным выделением пептида в щелочную среду кишечника при одновременной защите пептида от кишечных пептидаз.

Для подтверждения соответствия заявляемой группы изобретений требованию «промышленная применимость» приводим примеры конкретной реализации. Исходные вещества и реактивы:

Терапевтические пептиды U2 и U5 с высокой изоточкой (9 у U2 и 9,6 у U5), содержащие 11 и 7 аминокислот, соответственно (синтезированы в ГосНИИ ОЧБ, Россия), овомукоид (ОМ) (Реахим, Россия), Nа2СО3, СаСl2×2Н2O и безводный СаCl2 - все puriss р.а (Sigma-Aldrich), Na2HPO4, NaH2PO4 - чда (Реахим Россия), кислота уксусная, чда (Вектон, Россия), вода деионизованная extra pure reagent grade III (Acros Organics), альгинат Na низковязкий медицинский (Архангельский водорослевый комбинат), хитозан средней вязкости (Sigma Aldrich).

Пример 1.

В качестве носителей первого уровня использовали пористые кальций карбонатные (СаСО3) ядра, которые получали методом соосаждения, приведенном в работе [D.V. Volodkin, A.I. Petrov, М. Prevot, G.B. Sukhorukov. Matrix polyelectrolyte microcapsules: new system for macromolecule encapsulation, Langmuir, 20 (2004) 3398-3406]. Равные объемы 0,33 M растворов Nа2СО3 и СаСl2×2Н2O сливали и перемешивали в течение 30 с.Суспензия созревала в течение 15 мин, затем ядра на фильтре Шотта №16 промывали 6-кратным объемом воды, отфильтровывали, затем промывали ацетоном и сушили в термостате при Т=40-50°С.Размеры кальций карбонатных ядер составляли 3-5 мкм.

Для получения кальций карбонатных ядер с размерами 1-3 мкм использовали 1 М растворы солей.

Средний размер пор ядер 10-40 нм.

Предварительная альгинатная обработка ядер:

Кальций карбонатные ядра размером 3-5 мкм или 1-3 мкм предварительно обрабатывают водным раствором альгината натрия с концентрацией 0,1%. Получали ядра с альгинатньгм однослойным покрытием.

Затем вводили терапевтический пептид с высокой изоточкой U2 в обработанные альгинатом ядра размером 3-5 мкм, для чего смешивали 0,2%-ную водную суспензию ядер и водный раствор пептида с концентрацией 1 мг/мл и проводили центрифугирование при скорости вращения 710 об/мин в течение 30 мин, осадок из ядер с пептидом отфильтровывали и сушили при комнатной температуре. Включение пептида U2 в кальций карбонатные ядра составляло 90 мкг/мг.

Аналогично проводили введение пептида в ядра размером 1-3 мкм. Включение пептида U2 в кальций карбонатные ядра составляло 90 мкг/мг.

Далее полученные ядра с пептидом использовали для получения альгинатных микрогранул (АМГ).

Второй уровень - формирование АМГ, содержащих ядра с U2, проводили методом ионотропной сшивки. Дисперсию ядер (с концентрацией ядер - 200 мг/мл) в 4%-ном растворе альгината натрия вводили при перемешивании по каплям в осадительную ванну, содержащую 2%-ный раствор СаСl2 в 0,5%-ном растворе хитозана в 1%-ной уксусной кислоте, рН осадительной ванны доводили до 5. При попадании в ванну альгинат натрия в составе капли пространственно сшивается двухвалентными ионами кальция, образуя прочную эластичную АМГ, внутри которой заключены карбонатные ядра с пептидом. Затем АМГ фильтровали, промывали водой и сушили при комнатной температуре. Размер пор матрицы АМГ 5-200 нм. Размеры АМГ составляют 800-900 мкм. Включение U2 в предлагаемые системы составляет 35 мкг/мг.

Пример 2.

Проводили в условиях примера 1. На втором уровне - формирования АМГ - с целью защиты пептида U2 от кишечных пептидаз в суспензию СаСО3 ядер в раствор альгината добавляли ингибитор пептидаз овомукоид в концентрации 10 мг/мл. Остальные процедуры повторяли согласно примеру 1. Размер пор матрицы АМГ 5-200 нм. Включение U2 и ОМ в предлагаемые системы составляет 35 мкг/мг и 100 мкг/мг, соответственно. Размеры ОМГ 800-900 мкм. Массовое соотношение пептида и ингибитора эквимолекулярное. Для обеспечения эффективного введения микрогранул с U2 через внутрижелудочный зонд крысам в экспериментах In Vivo АМГ фракционировали с использованием сита (ячейки 250 мкм). Полученные АМГ являются основным компонентом пероральной системы доставки препарата U2 пролонгированного действия.

Пример 3.

Проводили в условиях примера 2, при этом для получения однослойного альгинатного покрытия ядра обрабатывают водным раствором альгината натрия с концентрацией 0,05%, при введении пептида U2 использовали 0,1%-ную водную суспензию ядер и водный раствор пептида с концентрацией 0,5 мг/мл и проводили центрифугирование при скорости вращения 8-103 об/мин. Включение пептида U2 в кальций карбонатные ядра составляло 70 мкг/мг.Формирование АМГ: использовали дисперсию ядер с пептидом с концентрацией 20 мг/мл в 2%-ном водном растворе альгината натрия, содержащего 5 мг/мл ОМ, в составе осадительной ванны использовали 0,5%-ный раствор хлористого кальция и 0,2%-ный раствор хитозана, РН=6. Размер пор матрицы АМГ 5-200 нм. Размеры АМГ составляют 800-900 мкм. Включение U2 в предлагаемые системы составляет 8 мкг/мг, ОМ - 80 мкг/мг.

Пример 4.

Проводили в условиях примера 2, с использованием пептида U5 вместо пептида U2. Размеры АМГ составляют 800-900 мкм. Включение U5 в предлагаемые системы составляет 25 мкг/мг, ОМ - 100 мкг/мг.

Пример 5.

Проведен в условиях примера 1 без предварительной альгинатной обработки ядер. Ядра содержат до 25 мкг/мг пептида U2 (для сравнения: обработанные ядра с однослойным альгинатным покрытием - 70-90 мкг/мг). Микрогранулы не получали из-за нецелесообразности (малое содержание пептида).

Определение эффективности микрогранул, полученных согласно примерам 1-4, в экспериментах In Vivo,:

Методика определения пептида - конкурентный иммуноферментный анализ с использованием стандартного набора реактивов (Phoenix Pharmaceuticals). В ходе экспериментов In Vivo (отборе пробы крови из хвостовой вены крысы) пробоподготовку образцов проводили следующим образом: после фильтрации на планшете С-18 (Waters) с целью удаления белкового компонента связавшийся компонент (пептидный материал) промывали водой и элюировали ацетонитрилом. Полученный элюат высушивали на концентраторе (Eppendorf), ресуспендировали до требуемого объема и определяли содержание U2 или U5 согласно стандартной методике.

Средние значения концентрации пептида U2 (по отношению к фоновому значению) в крови крыс через 1 ч и 2 ч после внутрижелудочного введения микрогранул U2, изготовленных согласно примеру 1 (без овомукоида) и примеру 2 (с овомукоидом) в дозе 9 мкг/особь, выше по сравнению с микрокапсулами с оболочками ликоподия на 20-30%.

При введении АМГ, полученных согласно примерам 1 и 2, в дозе 9 мкг U2 в 3% крахмальном геле на особь относительное превышение уровня пептида наблюдалось уже через 15 мин. ОМ способствует сохранению пептида в желудочно-кишечном тракте. В случае использования заявляемого изобретения наблюдается существенное пролонгирование действия пептидов в крови (2 ч), учитывая то, что пептиды имеют непродолжительный период полувыведения (около 6 мин). Все это свидетельствует о лучшей усвояемости пептида по сравнению с аналогами.

Аналогичные результаты получены для пептида U5.

Реализация изобретения не исчерпывается приведенными примерами.

Процесс изготовления предложенной двухуровневой композиции экологически безвреден и пожаробезопасен, он проводится с применением водных растворов. Заявляемый способ проще, чем в случае с ликоподием. Методика приготовления оболочек спор ликоподия трудоемка.

Получен препарат, обладающий следующими положительными

характеристиками: пероральная форма приема терапевтического пептида U2 или U5 намного удобнее, чем его парентеральная форма, для пациента и для персонала. При производстве пероральных форм требования к стерильности производства менее жесткие, чем при производстве парентеральных форм. Микрогранулы содержат больше пептида, чем микрокапсулы у аналогов. В целом состав микрогранулы способствует улучшению усвояемости пептида.

В ходе прохождения желудочно-кишечного тракта пероральная микрогранулированная форма U2 защищает терапевтический пептид в кислой желудочной среде, содержащей протеазные ферменты, и обеспечивает его постепенное высвобождение в среду кишечника. Добавление ингибитора кишечных пептидаз овомукоида во внешнюю альгинатную оболочку защищает U2 в процессе его высвобождения в кишечник. Обладающие мукоадгезивными свойствами альгинат и хитозан, входящие в состав внешней оболочки микрогранулы, увеличивают длительность пребывания композиции у мукозальной поверхности, увеличивая вероятность проникновения U2 в кровеносные сосуды и пролонгируя его действие, что позволяет сократить количество приемов лекарственного средства.

1. Двухуровневая микрогранулированная форма терапевтического пептида для перорального применения, характеризующаяся тем, что она состоит из носителей первого уровня - пористых кальций карбонатных ядер размером 1-5 мкм и со средним размером пор 10-40 нм, имеющих однослойное альгинатное покрытие и содержащих на поверхности и в порах терапевтический пептид с высокой изоточкой в количестве 70-90 мкг/мг, расположенных в объеме носителя второго уровня - пористой альгинатно-кальциевой матрицы со средним размером пор 5-200 нм, содержащей ингибитор пептидаз - овомукоид и образующей целевые микрогранулы размером 800-900 мкм, при этом включение пептида и овомукоида в них составляет 8-35 мкг/мг и 80-100 мкг/мг, соответственно.

2. Способ получения двухуровневой микрогранулированной формы терапевтического пептида для перорального применения, заключающийся в том, что сначала получают носитель пептида первого уровня методом соосаждения, для чего равные объемы 0,33-1 М растворов Na2СО3 и СаСl2 × 2 Н2O сливают и перемешивают в течение 30 с, дают суспензии созреть в течение 15 мин, полученные кальций карбонатные ядра на фильтре Шотта промывают 6-кратным объемом воды, отфильтровывают, затем промывают ацетоном и сушат при Т=40-50°С; перед введением пептида полученные пористые кальций карбонатные ядра размером 1-5 мкм предварительно обрабатывают водным раствором альгината натрия с концентрацией 0,05-0,1% с получением на них однослойного альгинатного покрытия, затем вводят терапевтический пептид с высокой изоточкой в обработанные альгинатом ядра, для чего смешивают 0,1-0,2% водную суспензию ядер и водный раствор пептида с концентрацией 0,5-1 мг/мл и проводят центрифугирование при скорости вращения 7-8⋅103 об/мин в течение 30 мин, осадок из ядер с пептидом отфильтровывают и сушат при комнатной температуре; далее носители пептида первого уровня включают в объем носителя второго уровня - альгинатно-кальциевую матрицу, сформированную методом ионотропной сшивки, для чего дисперсию ядер с пептидом с концентрацией 20-200 мг/мл в 2-4%-ном водном растворе альгината натрия, содержащего 5-10 мг/мл ингибитора пептидаз - овомукоида, вводят при перемешивании по каплям в осадительную ванну, содержащую 0,5-2% раствор хлористого кальция в 0,2-0,5% растворе хитозана в 1% уксусной кислоте, рН 5-6, полученный осадок фильтруют на воронке Бюхнера, промывают водой и сушат целевые микрогранулы при комнатной температуре.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к композициям для лечения симптома, связанного с менопаузой, и для лечения симптома, связанного с остеопорозом. При этом композиции содержат эффективную дозировку твердой дисперсии оспемифена, где указанная твердая дисперсия содержит оспемифен и гидрофильный носитель, выбранный из группы, состоящей из коповидона, поливинилпирролидина, сополимера поливинилпирролидина и винилацетата, гидроксипропилметилцеллюлозы, гипромеллозы ацетата сукцината, сополимера метакриловой кислоты, гидроксипропилцеллюлозы, привитого сополимера поливинилкапролактам/поливинилацетат/полиэтиленгликоль, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы и их смесей.

Настоящее изобретение относится к композициям для лечения симптома, связанного с менопаузой, и для лечения симптома, связанного с остеопорозом. При этом композиции содержат эффективную дозировку твердой дисперсии оспемифена, где указанная твердая дисперсия содержит оспемифен и гидрофильный носитель, выбранный из группы, состоящей из коповидона, поливинилпирролидина, сополимера поливинилпирролидина и винилацетата, гидроксипропилметилцеллюлозы, гипромеллозы ацетата сукцината, сополимера метакриловой кислоты, гидроксипропилцеллюлозы, привитого сополимера поливинилкапролактам/поливинилацетат/полиэтиленгликоль, фталата гидроксипропилметилцеллюлозы и их смесей.

Группа изобретений относится к лекарственным средствам местного применения для моно- и комплексной терапии заболеваний глаз, сопровождающихся окислительным стрессом.

Изобретение относится к области медицины и касается способа получения ингаляционной формы инсулина, подходящей для легочной доставки, который включает в себя: растворение сырьевого инсулина в кислом растворе с получением раствора инсулина; титрование раствора инсулина буферным раствором с получением суспензии, содержащей тонкодисперсные частицы инсулина; и стабилизацию тонкодисперсных частиц инсулина.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения порошкообразного сорбента на основе гидрогеля метилкремниевой кислоты. Способ получения порошкообразного сорбента на основе гидрогеля метилкремниевой кислоты, заключается в том, что гидрогель метилкремниевой кислоты подвергают дополнительной термической обработке с последующей механической обработкой на измельчителе, в результате получается порошкообразный сорбент, содержащий частицы с размерами от 10 до 200 мкм, обеспечивающие насыпную плотность не менее 0,319 г/мл, при определенных условиях.

Изобретение относится к способу получения твердой формы соединения гадобената димеглюмина указанной ниже формулы, которая может найти применение для приготовления инъекционных контрастных препаратов в области диагностической визуализации.

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики, в частности к пористым биополимерным микросферам для применения в качестве носителя для положительно заряженных терапевтических белков.

Группа изобретений относится к медицине. Имплантат для регенерации костной ткани состоит из композитных микрочастиц, характеризующихся пористой структурой с размером пор от 10 до 85 мкм, содержанием фиброина шелка от 65 до 75 мас.%, содержанием желатина от 25 до 35 мас.%, а также показателем модуля Юнга на сжатие в дегидратированном состоянии 83±1 МПа, во влажном - 590±60 кПа.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая моноклональное антитело, которое связывается с белком SEZ6 человека, нуклеиновую кислоту, кодирующую тяжелую цепь вышеуказанного антитела, вектор, содержащий вышеуказанную нуклеиновую кислоту, нуклеиновую кислоту, кодирующую легкую цепь вышеуказанного антитела, вектор, содержащий вышеуказанную нуклеиновую кислоту, клетку-хозяин, конъюгат «антитело-лекарственное средство», фармацевтическую композицию для лечения SEZ6-связанного расстройства, применение вышеуказанного антитела или конъюгата для получения лекарственного средства для лечения злокачественного новообразования, способ лечения злокачественного новообразования, способ снижения количества инициирующих злокачественное новообразования клеток у пациента, набор для лечения злокачественного новообразования, набор для уменьшения количества инициирующих злокачественных новообразований клеток.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой лекарственное средство для лечения заболеваний, связанных с желчным пузырем и желчными протоками, содержащее активные вещества 250-500 мг урсодезоксихолевой кислоты (УДХК) и 200-600 мг гимекромона, макрогола цетостеарат и вспомогательные вещества.

Группа изобретений относится к медицине. Имплантат для регенерации костной ткани состоит из композитных микрочастиц, характеризующихся пористой структурой с размером пор от 10 до 85 мкм, содержанием фиброина шелка от 65 до 75 мас.%, содержанием желатина от 25 до 35 мас.%, а также показателем модуля Юнга на сжатие в дегидратированном состоянии 83±1 МПа, во влажном - 590±60 кПа.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и гастроэнтерологии и может быть использовано для лечения язвенной болезни желудка. Для этого применяют средство, представляющее собой пептидный комплекс, экстрагированный из лиофильно высушенного гомогената тканей свиных почек методом уксуснокислой экстракции.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения фармацевтического препарата глатирамера ацетата и маннита в подходящем контейнере, содержащий этапы: (i) получения водного фармацевтического раствора глатирамера ацетата и маннита; (ii) фильтрации данного водного фармацевтического раствора при температуре, составляющей от выше 0°C до 17,5°C, для получения фильтрата; и (iii) заполнения подходящего контейнера фильтратом, полученным после осуществления этапа (ii), для того чтобы таким образом получить фармацевтический препарат глатирамера ацетата и маннита в подходящем контейнере.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантному связывающему HER2 белку, содержащему по меньшей мере первую и вторую области анкириновых повторов, каждая из которых связывает внеклеточную область HER2.

Группа изобретений относится к медицине, в частности к способу предупреждения и/или уменьшения тяжести сепсиса, ассоциированного с S. aureus, и к способу предупреждения и/или уменьшения тяжести пневмонии, ассоциированной с S.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет способ терапии коров, больных маститом, включающий поочередное введения лимфотропно, через одну иглу лекарственных препаратов.
Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой гемостатический раствор, содержащий водную основу и активное вещество, которое представляет собой сульфатированный полисахарид каппа-каррагинана в объеме на 1 литр водного раствора 0,1-3,0 масс.

Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии и биохимии, и предназначено для получения антимикробных пептидов. Для получения антимикробных пептидов из тромбоцитов курицы домашней осуществляют следующие сбор свежей крови кур в пластиковые контейнеры с добавлением 3,8% раствора цитрата натрия (рН 3,5).

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарному акушерству, и представляет собой способ лечения эндометрита у коров, включающий использование озонированной аутокрови, отличающийся тем, что в качестве иммуномодулирующего и этиотропного средства внутримышечно инфузируют озонированную аутокровь четырехкратно в возрастающих- понижающихся дозах 50, 75, 100, 75 мл с интервалом 48 часов, которую, после получения из вены, готовят путем смешивания в шприце с 15 мг лимоннокислого натрия и 10 мг озона в соотношении 1:1 в течение 25 с, а внутриматочно вводят Эндометрамаг К в количестве 100,0 мл с интервалом 48 часов до выздоровления.

Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарии, медицине и представляет собой способ получения полиэлектролитных микрокапсул с пептидами из эмбриональных тканей птиц, характеризующийся тем, что готовят и первоначально смешивают в соотношении 1:5:1 растворы поликатиона каррагинана с концетрацией 8,0-12,0 мг/мл в буферном растворе с рН 4.7-4.8, пептидов с концетрацией 3,5-4,5 мг/мл и полианиона хитозана с концетрацией 8,0-12,0 мг/мл в буферном растворе с рН 4.7-4.8 с последующим поочередным добавлением растворов полиэлектролитов в соотношении 1:1 до достижения прочного полиэлектролитного комплекса, который перемешивают 30 минут, центрифугируют при 400-500 об/мин 10-15 мин с последующим удалением супернатанта, промывают осадок 0,5 М раствором хлорида натрия и хранят полученные микрокапсулы в виде суспензии или в лиофильно высушенном состоянии при плюс 2-4°C.
Наверх