Фармацевтическая комбинация, содержащая силибин

Настоящее изобретение относится к фармацевтической комбинации для лечения неалкогольной жировой дистрофии печени. Описана фармацевтическая комбинация для лечения неалкогольной жировой дистрофии печени, которая предусматривает фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр, где фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр предназначены для помещения в одну и ту же упаковку после упаковывания по отдельности в единичных дозах, и они предназначены для совместного применения в соответствующих дозах. Технический результат – эффективное лечение неалкогольной жировой дистрофии печени. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 7 табл.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к области лекарственных препаратов для применения в медицине, и в частности к фармацевтической комбинации, которая содержит силибин, для лечения болезни печени.

Уровень техники

В 1960-1980-х годах фармацевты Западной Германии во главе с Г. Вагнером выделили активный ингредиент из плода расторопши пятнистой (Silybum marianum) из семейства Compositae, названный силимарином, который представляет собой новый класc флавоноидов с заместителями С-9, то есть флавонолигнаны, конденсированные с дигидрофлавонолом и производным фенилпропаноида. Силибин (силибинин) является одним из основных составляющих компонентов силимарина. Фармакологические и токсикологические исследования показали, что силибин оказывает защитное и стабилизирующее действие на мембрану гепатоцитов, способствуя восстановлению гепатоцитов и улучшая функцию печени. Силибин характеризуется разными уровнями защитного и лечебного эффектов в отношении разных типов повреждения печени, вызываемых «печеночными ядами», такими как тетрахлорид углерода, тиоацетамид, гидроксихолин, фаллоидин, мукронатин и т. д. Также силибин может использоваться для лечения острого и хронического гепатита, цирроза печени на ранней стадии, жировой дистрофии печени, токсической или медикаментозной гепатопатии.

Силибин плохо растворяется в воде и стандартных органических растворителях, плохо всасывается при пероральном применении, что является причиной его низкой биологической доступности и, таким образом, оказывает отрицательное влияние на его клиническую эффективность. Для улучшения его биологической доступности отечественные и иностранные фармацевты провели значительный объем работ. Способами улучшения всасывания плохо растворимых лекарственных средств обычно являются сверхтонкий помол, высаливание и добавление совместного растворителя и т.д. На протяжении последних лет исследования показали, что растворение и биологическая доступность в значительной степени улучшаются при использовании способов составления с включением соединения циклодекстрина, составления в твердую дисперсию, в синтетический фосфолипидный комплекс и составление в разные лекарственные формы.

С позиции твердого препарата фосфолипидный комплекс является более специфической твердой дисперсией, которая имеет постоянную точку плавления, представляющей собой молекулярное соединение (комплекс) с более стабильными химическими свойствами, и отличается от соединения лекарственного средства и фосфолипида, при этом такие соединения варьируются по типам фосфолипидов и соотношениям лекарственного средства и фосфолипида, а молекула фосфолипида может быть связана с разным количеством молекул лекарственного средства. На основе спектроскопических характеристик комплекса сделали заключение, что это лекарственное средство характеризуется сильным взаимодействием с полярными группами фосфолипида, что подавляет свободное вращение одиночных цепей в молекуле, тогда как две длинных цепи жирных кислот фосфолипида не принимают участия в реакции с образованием комплекса и могут сдвигать и обертывать полярные части фосфолипида с образованием липофильной поверхности, вследствие чего этот комплекс демонстрирует высокую растворимость в липидах. Этот комплекс изменяет физико-химические свойства лекарственного средства, и таким образом повышается растворимость лекарственных средств в липидах и уменьшается растворимость лекарственных средств в воде, что способствует связыванию молекул лекарственного средства с мембранами клеток с улучшением всасывания и повышением биологической доступности лекарственного средства.

Чай пуэр является уникальным и известным чаем из провинции Юньнань. Эта местность характеризуется умеренным климатом, обильными осадками и сильными туманами. Провинция Юньнань является местом выращивания крупнолистового чая пуэр, который классифицируют на две группы по его переработке: неферментированный чай пуэр, полученный путем прямой переработки в конечный продукт, и ферментированный чай пуэр, полученный путем переработки после искусственно ускоренной ферментации, при этом его классифицируют на рассыпной чай и прессованный чай; также в настоящее время для конечного продукта используют процесс естественного созревания, вследствие чего его уникальные качества улучшаются.

Чай пуэр представляет собой единственный постферментированный чай, в котором вещества, вредные для человеческого организма, такие как теофиллин, полифенолы чая, разрушаются в ходе длительного процесса ферментации, поэтому данный продукт мягкий, не оказывает стимулирующего действия на организм, а также может активизировать метаболизм, ускорять пищеварение и расщепление жиров и токсинов в организме. При проблемах в современном обществе, связанных с ожирением и высокими уровнями триглицеридов, чай пуэр может смягчать отрицательные последствия за счет выведения токсинов, придания чувства насыщения, оказания противовоспалительного эффекта, снижения уровня холестерина, выведения жиров и снижения избыточной массы тела. Современные технологии демонстрируют, что чай пуэр может корригировать инсулинорезистентность, регулировать уровни липидов и лептина в крови и т. д., и может блокировать накопление жира клетками паренхимы печени, которое до некоторой степени обусловлено инсулинорезистентностью.

Неалкогольная жировая дистрофия печени (NAFLD) представляет собой повреждение печение, индуцированное метаболическим стрессом, которое тесно связано с инсулинорезистентностью и генетической предрасположенностью, при этом патологические изменения при ней аналогичны изменениям при алкогольной жировой дистрофии печени. NAFLD представляет собой клинико-патологический синдром, который характеризуется гепатоцеллюлярным стеатозом и отложением жира в печеночных долях, но без указания о злоупотреблении алкоголем в анамнезе. NAFLD демонстрирует разные степени повреждения печени, от простой жировой дистрофии при отсутствии воспаления до тяжелой воспалительной реакции в виде сильного фиброза и даже цирроза, при этом преимущественно выделяют 3 типа: простую жировую дистрофию печени, стеатогепатит, жировой цирроз.

Лечение неалкогольной жировой дистрофии печени:

1. Предупреждение возникновения первичного заболевания или связанных с ним факторов риска. 2. Основное лечение: планирование подходящего потребления калорий и рациона, умеренные занятия физическими упражнениями в аэробном режиме, корригирование неправильного образа жизни и вредных привычек. 3. Исключение усугубления повреждения печени: предупреждение резкого снижения массы тела, злоупотребления лекарственными средствами и других факторов, которые могут индуцировать обострение болезни печени. 4. Снижение массы тела: требуется для всех пациентов с NAFLD, у которых имеется избыточная масса тела, висцеральное ожирение и быстрый набор массы за короткий период времени, с изменением образа жизни для контроля массы тела и уменьшения окружности талии. Основное лечение в течение 6 месяцев, снижение массы тела <0,45 кг за месяц или индекс массы тела (BMI) >27 кг/м² в сочетании с отклонением от нормы более чем двух из таких показателей, как уровень липидов в крови, уровень глюкозы в крови, кровяное давления и другие, можно рассматривать как показание к добавлению сибутрамина или орлистата и других лекарственных средств для лечения ожирения, при этом снижение массы тела за неделю не должно превышать 1,2 кг (для детей не превышать 0,5 кг за неделю); а BMI 40 кг/м² или BMI >35 кг/м² в сочетании с синдромом апноэ во время сна и другими заболеваниями, связанными с ожирением, можно рассматривать как показание для процедуры шунтирования проксимальной части желудка для похудения (II-1, II-2, II-3, III). 5. Лекарственное средство, повышающее чувствительность к инсулину: в сочетании с диабетом 2-го типа, нарушенной толерантностью к глюкозе, повышенным уровнем глюкозы в плазме крови натощак и висцеральным ожирением можно рассматривать как показание к применению метформина и тиазолидиндионов с целью корригирования инсулинорезистентности и контроля уровня глюкозы в крови (II-1, II-2, II-3). 6. Гиполипидемические средства: дислипидемия в течение основного лечения и (или) применение лекарственных средств для снижения массы тела и гипогликемических фармацевтических средств на протяжении более 3-6 месяцев, что по-прежнему сочетается с гиперлипидемией или гиперлипидемией с более чем 2 факторами риска, следует рассматривать как показание к добавлению фибратов, статинов или пробукола и других гиполипидемических лекарственных средств (II-1, II-2, II-3). 7. Лекарственные средства для лечения болезни печени: при NAFLD, ассоциированной с нарушением функции печени, метаболический синдром, неэффективность 3-6-месячного основного лечения и биопсия печени, демонстрирующая NASH и постепенное прогрессирование заболевания, можно использовать вспомогательное медикаментозное лечение заболевания печени с использованием антиоксидантных, противовоспалительных, противофиброзных и родственных им лекарственных средств (II-1, II-2, II-3, III), таких как полиенфосфатидилхолин, витамин Е, силимарин и урсодезоксихолевая кислота, которые могут быть рационально подобраны в соответствии с эффективностью лекарственных средств, активностью заболевания и стадией заболевания, но при этом нельзя одновременно применять много лекарственных средств. 8. Пересадка печени: перед трансплантацией печени необходимо провести проверку в отношении наличия, главным образом, болезни печени в терминальной стадии, связанной с NASH, и криптогенного цирроза печени, а также метаболического состояния (III). BMI >40 кг/м² является противопоказанием к пересадке печени (III).

Вышеуказанные виды лечения не использовали в сочетании, как например, комбинацию гипогликемических средств и средств для лечения болезней печени, или комбинацию гиполипидемических средств и средств для лечения болезней печени. Как правило, согласно фармацевтическим спецификациям прием лекарственных средств одновременно с употреблением чая запрещен. В результате проведения исследований авторы настоящего изобретения установили, что препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид не только можно принимать совместно с раствором чая пуэр, но и при этом он оказывает синергический эффект при лечении неалкогольной жировой дистрофии печени.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение предусматривает фармацевтическую комбинацию.

Настоящее изобретение дополнительно предусматривает применение данной фармацевтической комбинации.

Настоящее изобретение осуществляют с помощью следующих технических решений.

Фармацевтическая комбинация включает комплекс силибин-фосфолипид и чай пуэр.

В фармацевтической комбинации комплекс силибин-фосфолипид может быть составлен в фармацевтический препарат, а чай пуэр может быть составлен в продукт на основе чая; также они могут быть составлены вместе с получением комбинированной фармацевтической композиции.

Предпочтительно в фармацевтической комбинации по настоящему изобретению комплекс силибин-фосфолипид составлен в фармацевтический препарат, а чай пуэр составлен в продукт на основе чая пуэр, где фармацевтический препарат и продукт на основе чая пуэр помещены в одну и ту же упаковку после упаковывания по отдельности в единичных дозах, и они принимаются совместно при применении в соответствующих дозах.

Согласно настоящему изобретению при приеме совместно фармацевтического препарата на основе комплекса силибин-фосфолипид и чая пуэр/продукта на основе чая пуэр соотношение по массе принимаемого комплекса силибин-фосфолипид и принимаемого чая пуэр/продукта на основе чая пуэр составляет (0,5-2,5):(0,3-10), предпочтительно (1-2): (0,6-5), а более предпочтительно соотношение по массе составляет (1-1,3):1.

В фармацевтической комбинации по настоящему изобретению препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид представляет собой фармацевтический препарат в единичной дозе, который можно принимать совместно и который получен с использованием комплекса силибин-фосфолипид в качестве активного фармацевтического ингредиента. Предпочтительно лекарственная форма представляет собой что-либо из микропилюли, капсулы, мягкой капсулы, гранулы и таблетки, а наиболее предпочтительно представляет собой капсулу. Предпочтительно капсулу с препаратом на основе комплекса силибин-фосфолипид получают в соответствии с патентом (номер публикации CN100594898).

Упомянутое выше соотношение по массе представляет собой соотношение по массе активного ингредиента фармацевтического препарата, то есть комплекса силибин-фосфолипид, и массы чая пуэр/продукта на основе чая пуэр.

В препарате содержание комплекса силибин-фосфолипид составляет 10-60% от общей массы препарата на основе комплекса силибин-фосфолипид, предпочтительно 30-50% и более предпочтительно 40%. Комплекс силибин-фосфолипид образован силибином и фосфолипидом при соотношении по массе 1:1-4, и предпочтительно 7:13.

И силибин, и фосфолипид, входящие в состав комплекса силибин-фосфолипид фармацевтической комбинации по настоящему изобретению, относятся к предшествующему уровню техники и являются доступными на рынке.

С целью лучшего проявления эффективности настоящего изобретения силибин по настоящему изобретению предпочтительно получают путем растворения силимарина в 80% этаноле, фильтрования и трехкратного промывания осадка 95% этанолом с последующим сбором осадка. Осадок растворяют в безводном этаноле, фильтруют и в фильтрат добавляют некоторое количество воды для отделения осадка, при этом осадок собирают путем фильтрации, высушивают при пониженном давлении, измельчают в порошок и перемешивают.

Фосфолипид представляет собой фосфолипид или лецитин, предпочтительно соевый фосфолипид, который главным образом имеет в составе фосфатидилхолин.

В фармацевтической комбинации по настоящему изобретению чай пуэр представлен главным образом продуктом на основе чая пуэр, как например, одним из эссенции чая пуэр, листьев чая пуэр, экстракта чая пуэр, пасты из чая пуэр, напитка на основе чая пуэр и пакетика с чаем пуэр, а предпочтительно эссенции чая пуэр или экстракта чая пуэр. Все препараты на основе эссенции чая пуэр, листьев чая пуэр, экстракта чая пуэр, пасты из чая пуэр, напитка на основе чая пуэр и пакетика с чаем пуэр получают при помощи стандартного способа, известного в данной области. Указанная эссенция чая пуэр представляет собой исключительно природную и высокоактивную эссенцию чая пуэр, полученную посредством идеальной комбинации экологически чистого выращивания и биотехнологических методик, при этом эссенция чая пуэр богата полифенолами, пигментами чая, полисахаридами чая и кофеином. Эссенция чая пуэр является коммерчески доступной, предпочтительно под названием «эссенция чая пуэр DEEPURE®». Ее получают в соответствии со способами, изложенными в патентах (публикации №№ CN101961061 A, CN 101961061 B, CN 101961425 A, CN 101961425 B, CN 101961060 A, CN 101961059 A и CN 101961059 B).

Например, указанную эссенцию чая пуэр получают следующим образом:

стадия 1: листья чая пуэр отваривают в 6-12-кратном объеме воды 2-4 раза, каждый раз по 0,5-2 часа; раствор экстракта фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении и при температуре ≤70°С до соотношения массы чайных листьев : объема концентрата = 1:2-1:3;

стадия 2: концентрат центрифугируют с помощью центрифуги, центрифугат концентрируют при пониженном давлении до плотности 1,1-1,25 при 45-65°С, концентрированную пасту подвергают высушиванию распылением или высушиванию под воздействием микроволнового излучения с получением конечного продукта.

Предпочтительно данные стадии осуществляют следующим образом:

стадия 1: листья чая пуэр отваривают в 6-12-кратном объеме бурно кипящей воды 3 раза, каждый раз по 0,5-2 часа; раствор экстракта фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении и при температуре ≤70°С до соотношения массы чайных листьев : объема концентрата = 1:2-1:3;

стадия 2: концентрат центрифугируют с помощью трехколонной центрифуги периодического действия, полученный центрифугат центрифугируют на центрифуге с трубчатым ротором, а затем центрифугат концентрируют при пониженном давлении до плотности 1,1-1,25 при 45-65°С, концентрированную пасту подвергают высушиванию распылением или высушиванию под воздействием микроволнового излучения с получением конечного продукта;

при этом параметры для центрифуги с трубчатым ротором следующие: скорость центрифугирования: 15000-19000 об./мин; параметры высушивания распылением: температура на входе: 140-190°С, температура на выходе: 75-95°С.

Наиболее предпочтительно эти стадии осуществляют следующим образом:

листья чая пуэр отваривают в бурно кипящей воде 3 раза, первый раз кипятят в течение 1,5 ч, добавляют 10 объемов воды; второй раз кипятят в течение 1,5 ч, добавляют 8 объемов воды; третий раз кипятят в течение 1 ч, добавляют 8 объемов воды, раствор экстракта фильтруют и фильтрат концентрируют при пониженном давлении и при температуре ≤70°С до соотношения массы чайных листьев : объема концентрата = 1:2-1:3, с помощью трехколонной центрифуги периодического действия, полученный центрифугат центрифугируют на центрифуге с трубчатым ротором, а затем центрифугат концентрируют при пониженном давлении до плотности 1,1-1,25 при 45-65°С, концентрированную пасту подвергают высушиванию распылением или высушиванию под воздействием микроволнового излучения с получением конечного продукта;

при этом параметры для центрифуги с трубчатым ротором следующие: скорость центрифугирования: 15000-19000 об./мин; параметры высушивания распылением: температура на входе: 140-190°С, температура на выходе: 75-95°С.

Фармацевтическую комбинацию по настоящему изобретению можно применять с помощью следующего способа: комплекс силибин-фосфолипид или препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид принимают с раствором чая пуэр.

Фармацевтическую комбинацию по настоящему изобретению можно применять согласно способу, предусматривающему следующее: растворение чего-либо из эссенции чая пуэр, пасты из чая пуэр, напитка на основе чая пуэр или настаивание листьев чая пуэр и пакетика с чаем пуэр в подходящим количестве воды, и прием пациентом препарата на основе комплекса силибин-фосфолипид с раствором чая пуэр.

Способ приема по настоящему изобретению преодолевает технические недостатки предшествующего уровня техники, заключавшиеся в невозможности одновременного приема чая и лекарственного средства, поскольку лечебный эффект лекарственного мог уменьшиться. Настоящее изобретение обеспечивает не только преодоление технических недостатков, но и также в соответствии с ним установили, что одновременный прием чая и лекарственного средства может оказывать лучшие лечебные эффекты.

Чай пуэр может корригировать инсулинорезистентность, регулировать уровни липидов и лептина в крови и оказывать другие эффекты, он может блокировать накопление жира в клетках паренхимы печени, которое до некоторой степени обусловлено инсулинорезистентностью, в сочетании с высокой способностью силибина к захвату свободных радикалов и к предупреждению оксидативного стресса, при этом оба данных компонента предпочтительно обладают лечебно-профилактическим эффектом в отношении NAFLD (неалкогольной жировой дистрофии печени).

Далее в данном документе описаны благоприятные эффекты комбинированного применения по настоящему изобретению с использованием экспериментальных данных.

Экспериментальные примеры

1. Экспериментальные животные

60 мышей класса SPF (свободных от патогенной микрофлоры) и самцов 6-недельного возраста С57 BL/6J, дефицитных по лептину (ob/ob), 10 мышей класса SPF и 6-недельных самцов С57 BL/6J (ob/m), предоставленных Beijing Huafukang Bioscience Co., Inc., содержали в барьерном отделении для животных центра фармакологических и токсикологических исследований института Tasly при температуре 20°C - 25°C, относительной влажности 60%, по 5 мышей в каждой клетке, при освещении продолжительностью 12 часов, при регулярном и достаточном кормлении, причем мышам ob/ob скармливали рацион с высоким содержанием жиров (HFD, D12492), мышам C57 BL/6J скармливали стандартный рацион, при этом оба типа рационов были предоставлены компанией Beijing Huafukang Bioscience Co., Inc., и со свободным доступом к воде, ежедневной заменой подстилки.

2. Тестируемые вещества

Комплекс силибин-фосфолипид, предоставленный компанией Tasly Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии 500902031 (полученный в соответствии с вариантом осуществления 1); эссенцию чая пуэр, коричневый порошок, предоставленный компанией Tasly Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии Z001 PE(2014)C06(H) для защиты от света хранили при комнатной температуре в шкафу для образцов в комнате для испытаний Института фармакологии.

3. Экспериментальный способ

3.1 Экспериментальный подбор доз и разделение на группы

Суточная доза основного продукта для человека (NAFLMED basic) составляла 3 г комплекса силибин-фосфолипид (включая 420 мг силибина и 780 мг фосфолипида) + 1,2 г эссенции чая пуэр. Доза комплекса силибин-фосфолипид составляла 3 г, и при пересчете доза для мыши составляла 3 г/60*12,3 = 0,62 г/кг; доза эссенции чая пуэр для человека составляла 1,2 г; а в группе с высокой дозой она составляла 2,4 г; при пересчете доза для мыши составляла 1,2 г/60*12,3 = 0,25 г/кг и 2,4 г/60*12,3=0,50 г/кг. Экспериментальный подбор вводимых доз и разделение на группы показаны в таблице 1.

Таблица 1. Экспериментальный подбор вводимых доз и разделение на группы

3.2 Введение тестируемых веществ

После 1-недельного периода кормления с целью адаптации 60 мышей ob/ob 6-недельного возраста случайным образом разделяли на 6 групп, по 10 мышей в каждой группе. Еще 10 мышей C57BL/6J 6-недельного возраста составляли нормальную группу (таблица 1). Нормальной группе мышей скармливали стандартный рацион, а мышам модельной группы и группы с введением препарата скармливали рацион с высоким содержанием жиров (HFD, D12492). Кроме того, мышам в разных группах введения лекарственных средств давали соответствующие дозы лекарственных средств (таблица 1), содержащих фармацевтически совместимые комплекс силибин-фосфолипид и экстракт чая пуэр, путем внутрижелудочного введения, а нормальной группе и модельной группе давали такое же количество дистиллированной воды, путем внутрижелудочного введения на протяжении 6 недель.

Мыши имели свободный доступ к рациону и воде на протяжении эксперимента, при этом каждую неделю их взвешивали и дозы корригировали в соответствии с массой тела. После последнего введения мышей подвергали голоданию на протяжении 12 часов, но сохраняли доступ к воде, измеряли массу тела, извлекали глазные яблоки мышей для забора крови, а затем их убивали путем перелома шеи и быстро отбирали печень, промывали ее физиологическим раствором, промокали фильтровальной бумагой и после взвешивания хранили в морозильной камере при -20°C.

3.3 Определение показателей и способы

3.3.1 Общее наблюдение

Показатели массы тела мышей в каждой группе измеряли еженедельно в ходе эксперимента.

3.3.2 Расчет печеночного индекса и общая оценка морфологии печени

После окончания эксперимента печень взвешивали и рассчитывали печеночный индекс, печеночный индекс (%) = масса сырой печени/масса тела*100%.

3.3.3 Определение биохимических показателей сыворотки крови

Кровь отбирали у всех мышей путем извлечения глазных яблок и центрифугировали при 3000 об./мин. в течение 15 минут, сыворотку крови отделяли и переносили в пробирки эппендорф и хранили в морозилке при -20°C для последующего использования. Содержание глютамино-щавелевоуксусной трансаминазы (AST), глутамат-пируватной трансаминазы (ALT), триглицерида (TG), общего холестерина (TC), холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-C), холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C) и уровня глюкозы (GLU) в сыворотке крови измеряли с помощью автоматического биохимического анализатора 7020.

3.3.4 Индекс инсулинорезистентности

Уровень инсулина натощак (FINS) в сыворотке крови определяли с использованием набора для ИФА и индекс инсулинорезистентности рассчитывали по следующей формуле.

Homa-IR (индекс инсулинорезистентности)=

3.3.5 Гистопатологическое исследование печени

Замороженные срезы получали из замороженной ткани печени, и степень стеатоза печени определяли путем окрашивания масляным красным (oil red O). Стадии процесса окрашивания c использованием масляного красного O: получали замороженные срезы → промывали достаточным объемом дистиллированной воды → окрашивали разведенным раствором масляного красного O в темноте на протяжении 10-15 минут → удаляли 6 мл насыщенного раствора масляного красного O, добавляли 4 мл дистиллированной воды, оставляли на 5-10 минут и удаляли с помощью фильтровальной бумаги для последующего использования → просветляли ткани в 60% этаноле → промывали водой →ядра клеток окрашивали гематоксилином → промывали водой → покрывали нейтральной средой для микроскопии → проводили микроскопическое исследование.

3.4 Обработка данных

Для анализа использовали статистическое программное обеспечение SPSS 15.0, при этом данные выражали в виде среднего значения ± стандартное отклонение, а t-критерий использовали для анализа присутствия или отсутствия различия между двумя группами до и после обработки, причем различие является статистически значимым при P<0,05.

4. Результаты экспериментов

4.1 Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении массы тела

Массу тела мышей в каждой группе измеряли еженедельно в ходе эксперимента и изучали эффекты каждого тестируемого вещества в отношении массы тела мышей с неалкогольной жировой дистрофией печени. Как показано в таблице 2, масса тела мышей в нормальной группе увеличивалась медленно, а масса тела мышей в модельной группе увеличивалась быстрее. После 6 недель введения, за исключением группы с назначением комплекса силибин-фосфолипид, в остальных группы прибавка в массе тела мышей подавлялась в различной степени (P＜0,01), при этом значимое различие между группами отсутствовало.

Таблица 2. Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении массы тела мышей (г, n=10, ±S)

4.2 Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении печеночного индекса

Как показано в таблице 3, масса тела, масса сырой печени и печеночный индекс мышей в модельной группе значимо увеличивались (P<0,01) по сравнению с таковыми у мышей в нормальной группе, при этом каждое тестируемое вещество может значимо уменьшать массу сырой печени и печеночный индекс у мышей (P<0,01).

Таблица 3. Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении печеночного индекса у мышей

4.3 Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении уровня глюкозы в крови

В ходе экспериментов влияние лекарственных средств на уровень глюкозы в крови у мышей с неалкогольной жировой дистрофией печение проверяли каждую неделю в каждой группе. Как показано в таблице 4, на протяжении периода введения уровень глюкозы в крови у мышей модельной группы значимо выше, чем у мышей нормальной группы (p<0,01). После 6 недель введения, за исключением группы с введением комплекса силибин-фосфолипид, в других группах введения уровень глюкозы в крови у мышей снижался в различной степени (P<0,01). Значимое различие среди групп отсутствовало.

Таблица 4. Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении уровня глюкозы в крови у мышей (г, n=10, ±S)

4.4 Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении уровня липидов в крови и показателей функции печени

Как показано в таблице 5, по сравнению с нормальной группой уровни сывороточных TC, LDL, ALT и AST в мышиной модели неалкогольной жировой дистрофии значимо повышены (P<0,05); в группе с низкой дозой комплекса силибин-фосфолипид и экстракта чая пуэр значимого улучшения в отношении патологически повышенных показателей (P>0,05) не наблюдалось; в группе высокой дозы экстракта чая пуэр могли снижаться уровни TC и LDL-C (P<0,05), но значимое улучшение в уровнях ALT и AST (P>0,05) не наблюдалось; в группах и высокой, и низкой дозы комплекса силибин-фосфолипид и экстракта чая пуэр могли значимо снижаться TC, LDL-C, ALT (P<0,05), при этом данный эффект превосходил эффект, наблюдаемый при использовании этих двух компонентов по отдельности.

Результаты биохимического анализа крови свидетельствуют о том, что тенденция к изменчивости сывороточных TG и HDL-C в животной модели не соответствовали таковой у людей, и в последующих экспериментах акцент главным образом был сделан на четырех биохимических показателях: сывороточные TC, LDL, ALT и AST.

Таблица 5. Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении уровня липидов в крови и показателей функции печени у мышей

4.5 Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении индексов инсулинорезистентности

Как показано в таблице 6, индексы инсулинорезистентности значимо увеличены в мышиной модели неалкогольной жировой дистрофии печени по сравнению с нормальной группой (P<0,01); значимое улучшение в отношении индексов инсулинорезистентности при использовании только комплекса силибин-фосфолипид отсутствовало (P>0,05); композиции на основе экстракта чая пуэр и фармацеветически совместимых экстракта чая пуэр и комплекса силибин-фосфолипид могли значимо снижать индексы инсулинорезистентности (P<0,05), при этом данный эффект превосходил эффект, наблюдаемый при использовании только комплекса силибин-фосфолипид.

Таблица 6. Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении индексов инсулинорезистентности у мышей

4.6 Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении патологического состояния печени у мышей

Окрашивание с помощью масляного красного O: при исследовании с помощью световой микроскопии замороженных срезов из тканей печени, окрашенных масляным красным О, в соответствии с размером и количеством красных частиц в гепатоцитах патологическое состояние печени классифицировали на легкий, умеренный и тяжелый типы. Легкий означает, что 1/3-2/3 красных гранул выявляют на единицу площади под световым микроскопом, что оценивают в 1 балл; умеренный означает, что более 2/3 гепатоцитов содержат красные частицы, что оценивают в 2 балла; тяжелый означает, что практически все гепатоциты содержат красные частицы, что оценивают в 3 балла; отсутствие стеатоза оценивают в 0 баллов.

Как показано в таблице 7, стеатоз наблюдается практически во всех гепатоцитах тканей печени модельной группы и показатели патологического состояния печени значимо увеличены по сравнению с таковыми нормальной группы (P<0,01); при этом отсутствовало значимое улучшение показателей патологического состояния печени при использовании комплекса силибин-фосфолипид или чая пуэр по отдельности (P>0,05); комбинированное использование данных двух компонентов может значимо улучшать течение стеатоза печени, снижать показатели патологического состояния (P<0,05), причем данный эффект превосходит эффект, наблюдаемый при использовании этих двух компонентов по отдельности.

Таблица 7. Эффекты каждого тестируемого вещества в отношении патологического состояния печени у мышей

5. Выводы, полученные на основе экспериментов

Вышеприведенные результаты экспериментов демонстрируют, что масса тела, печеночный индекс, уровни липидов в крови, ALT, AST и индекс инсулинорезистентности значимо увеличены у мышей модельной группы с неалкогольной жировой дистрофией печени по сравнению с мышами контрольной группы, и в тканях печени наблюдался тяжелый стеатоз. Чай пуэр может корригировать инсулинорезистентность, регулировать уровни липидов крови в сочетании с высокой способностью силибина к захвату свободных радикалов и к предупреждению оксидативного стресса, при этом использование в комбинации данных двух средств значимо улучшало течение стеатоза печени, и этот эффект был выражен лучше, чем эффект при их использовании по отдельности, то есть они обладают синергическим эффектом.

Подробное описание изобретения

Далее подробное описание настоящего изобретения будет описано более подробно со ссылкой на варианты осуществления, чтобы более четко описать преимущества и признаки настоящего изобретения. Однако эти варианты осуществления являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Специалистам в данной области техники будет понятно, что различные модификации и замены могут быть сделаны в элементах и формах настоящего изобретения без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения, но такие модификации и замены подпадают под объем настоящего изобретения. Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируется следующими конкретными вариантами осуществления, однако они не предназначены для ограничения настоящего изобретения.

Вариант осуществления 1. Получение комплекса силибин-фосфолипид

В 7200 мл безводного этанола добавляли 420 г силибина и 780 г соевого фосфолипида от Granulesten; раствор осветляли путем нагревания с обратным холодильником, концентрировали при пониженном давлении при 60°C до вязкой консистенции с получением комплекса силибин-фосфолипид.

Вариант осуществления 2. Получение комплекса силибин-фосфолипид

В 10500 мл безводного этанола добавляли 1050 г силибина и 1050 г соевого фосфолипида от Granulesten; раствор осветляли путем нагревания с обратным холодильником, концентрировали при пониженном давлении при 40°C до вязкой консистенции с получением комплекса силибин-фосфолипид.

Вариант осуществления 3. Получение комплекса силибин-фосфолипид

В 86100 мл безводного этанола добавляли 3500 г силибина и 14000 г соевого фосфолипида от Granulesten; раствор осветляли путем нагревания с обратным холодильником, концентрировали при пониженном давлении при 80°C до вязкой консистенции с получением комплекса силибин-фосфолипид.

Вариант осуществления 4. Получение комплекса силибин-фосфолипид

В 20500 мл безводного этанола добавляли 350 г силибина и 1400 г соевого фосфолипида от Granulesten; раствор осветляли путем нагревания с обратным холодильником, концентрировали при пониженном давлении при 50°C до вязкой консистенции с получением комплекса силибин-фосфолипид.

Вариант осуществления 5. Получение комплекса силибин-фосфолипид

В 10500 мл безводного этанола добавляли 350 г силибина и 650 г соевого фосфолипида от Granulesten; раствор осветляли путем нагревания с обратным холодильником, концентрировали при пониженном давлении при 60°C до вязкой консистенции с получением комплекса силибин-фосфолипид.

Вариант осуществления 6. Получение комплекса силибин-фосфолипид

В 6000 мл безводного этанола добавляли 350 г силибина и 650 г соевого фосфолипида от Granulesten; раствор осветляли путем нагревания с обратным холодильником, концентрировали при пониженном давлении при 60°C до вязкой консистенции с получением комплекса силибин-фосфолипид.

Вариант осуществления 7. Получение комплекса силибин-фосфолипид

Отбирали комплекс силибин-фосфолипид, полученный согласно варианту осуществления 1, добавляли в него 1200 г лактозы, 450 г тальковой пудры и 150 г натриевой соли карбоксиметилкрахмала (CMS) и при 65°C проводили грануляцию распылением, высушивание, а затем измельчали в порошок для наполнения капсул, которым затем наполняли капсулы № 000 с получением 4000 капсул по 0,75 г в каждой.

Вариант осуществления 8. Получение комплекса силибин-фосфолипид

Отбирали комплекс силибин-фосфолипид, полученный согласно любому из вариантов осуществления 2-6, добавляли в него 70000 г лактозы, 40000 г тальковой пудры и 65000 г натриевой соли карбоксиметилкрахмала (CMS) и при 50°C проводили грануляцию распылением, высушивание, а затем измельчали в порошок для наполнения капсул.

Вариант осуществления 9. Получение комплекса силибин-фосфолипид

Отбирали комплекс силибин-фосфолипид, полученный согласно любому из вариантов осуществления 1-6, добавляли в него 1000 г лактозы, 375 г тальковой пудры и 125 г натриевой соли карбоксиметилкрахмала (CMS) и при 75°C проводили грануляцию распылением, высушивание, а затем измельчали в порошок для наполнения капсул.

Вариант осуществления 10. Получение таблеток, содержащих комплекс силибин-фосфолипид

Отбирали комплекс силибин-фосфолипид, полученный согласно варианту осуществления 1, добавляли в него 1050 г микрокристаллической целлюлозы, 300 г крахмала, 200 г аэросила, 150 г тальковой пудры и 100 г стеарата магния, а затем ингредиенты равномерно перемешивали с последующим прессованием с получением 4000 таблеток.

Вариант осуществления 11. Получение мягких капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид

Отбирали 100 г желатина, 30 г глицерина и 130 г воды, в желатин добавляли соответствующее количество воды для обеспечения его набухания с получением раствора желатина. Отбирали 600 г комплекса силибин-фосфолипид, полученного согласно варианту осуществления 1, и смешивали его с 2400 г пищевого растительного масла, и в достаточной степени его перемешивали с получением масляного раствора; помешали полученный раствор желатина в резервуар для хранения с температурой, установленной на 60°C, помещали масляный раствор в резервуар для хранения жидкого фармацевтического средства, и предпочтительно температура жидкого парафина составляла 10-17°C. Для получения мягких капсул проводили наполнение капсул, сушку, шлифовку и упаковку капсул, при этом температура окружающей среды составляла 10-20°C, а температура каплепадения 40-50°C.

Вариант осуществления 12. Получение микропилюль, содержащих комплекс силибин-фосфолипид

Отбирали 500 г комплекса силибин-фосфолипид и 4500 г полиэтиленгликоля 6000, добавляли в тонкоизмельченный порошок фармацевтического средства после расплавления и равномерно перемешивали; температуру поддерживали на уровне приблизительно 80°C; подавали смесь в метилсиликоновое масло с использованием капельницы с внутренним диаметром в 3,3 мм и внешним диаметром в 5,1 мм при cкорости капельного выливания 60-70 капель/мин; микропилюли собирали, остатки охлаждающей жидкости поглощали при помощи фильтровальной бумаги с получением микропилюль.

Вариант осуществления 13. Получение комбинированного препарата

1,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 7, помещали вместе с 0,6 г эссенции чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 14. Получение комбинированного препарата

1,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 7, помещали вместе с 0,9 г эссенции чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 15. Получение комбинированного препарата

0,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 7, помещали вместе с 10 г чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 16. Получение комбинированного препарата

2,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 7, помещали вместе с 5 г чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 17. Получение комбинированного препарата

1,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 8, помещали вместе с 0,6 г эссенции чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 18. Получение комбинированного препарата

1,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 8, помещали вместе с пакетиком, содержащим 5 г чая пуэр, в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 19. Получение комбинированного препарата

1,5 г капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 9, помещали вместе с пакетиком, содержащим 5 г чая пуэр, в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 20. Получение комбинированного препарата

1,5 г мягких капсул, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 11, помещали вместе с 0,6 г экстракта чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 21. Получение комбинированного препарата

1,5 г таблеток, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 10, помещали вместе с 0,6 г экстракта чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

Вариант осуществления 22. Получение комбинированного препарата

1,5 г микропилюль, содержащих комплекс силибин-фосфолипид, полученных согласно варианту осуществления 12, помещали вместе с 0,6 г экстракта чая пуэр в упаковку для лекарственного препарата и получали единичную дозу.

1. Фармацевтическая комбинация для лечения неалкогольной жировой дистрофии печени, отличающаяся тем, что она предусматривает фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр, где фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр предназначены для помещения в одну и ту же упаковку после упаковывания по отдельности в единичных дозах, и они предназначены для совместного применения в соответствующих дозах.

2. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр предназначены для совместного применения и соотношение по массе принимаемого комплекса силибин-фосфолипид и принимаемого чая пуэр/продукта на основе чая пуэр составляет 0,5-2,5:0,3-10.

3. Фармацевтическая комбинация по п. 2, отличающаяся тем, что фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр предназначены для совместного применения и соотношение по массе принимаемого комплекса силибин-фосфолипид и принимаемого чая пуэр/продукта на основе чая пуэр составляет 1-2:0,6-5.

4. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид и чай пуэр/продукт на основе чая пуэр предназначены для совместного применения и соотношение по массе принимаемого комплекса силибин-фосфолипид и принимаемого чая пуэр/продукта на основе чая пуэр составляет (1-1,3):1.

5. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что в фармацевтическом препарате на основе комплекса силибин-фосфолипид весовое соотношение комплекса силибин-фосфолипид к фармацевтическому препарату на основе комплекса силибин-фосфолипид составляет 10-60:100.

6. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что в фармацевтическом препарате на основе комплекса силибин-фосфолипид весовое соотношение комплекса силибин-фосфолипид к фармацевтическому препарату на основе комплекса силибин-фосфолипид составляет 30-50:100.

7. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что в фармацевтическом препарате на основе комплекса силибин-фосфолипид весовое соотношение комплекса силибин-фосфолипид к фармацевтическому препарату на основе комплекса силибин-фосфолипид составляет 40:100.

8. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что соотношение по массе силибина и фосфолипида в комплексе силибин-фосфолипид составляет 1:1-4, предпочтительно 7:13.

9. Фармацевтическая комбинация по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что фармацевтический препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид представляет собой что-либо из микропилюли, капсулы, мягкой капсулы, гранулы и таблетки, а предпочтительно представляет собой капсулу.

10. Фармацевтическая комбинация по любому из пп. 1-4, отличающаяся тем, что чай пуэр представляет собой листья чая пуэр или пакетик с чаем пуэр; продукт на основе чая пуэр представляет собой что-либо из эссенции чая пуэр, пасты из чая пуэр, экстракта чая пуэр и напитка на основе чая пуэр; предпочтительно представляет собой эссенцию чая пуэр или экстракт чая пуэр.

11. Фармацевтическая комбинация по п. 1, отличающаяся тем, что препарат на основе комплекса силибин-фосфолипид предназначен для совместного применения с раствором чая пуэр.

12. Применение фармацевтической комбинации по п. 1 в получении лекарственных средств для лечения неалкогольной жировой дистрофии печени.