Способ определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы и композиция для его осуществления

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы. Для этого используют композицию для окрашивания гистологических препаратов опухолевой ткани молочной железы при определении метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы, которая содержит водные растворы толуидинового синего, альцианового синего и реактив Шиффа, содержащий фуксинсернистую кислоту. Концентрации толуидинового синего, альцианового синего и фуксинсернистой кислоты находятся в композиции в соотношении 1/5/1. Также предложен способ определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы. Группа изобретений позволяет определить метастатический потенциал инвазивного протокового рака молочной железы. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине.

Ниже описаны известные средства и способы для выявления метастазирующих опухолей.

1. Позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), а также позитронно-эмиссионная томография, совмещенная с компьютерной томографией (ПЭТ-КТ). В основе этих методов лежит возможность при помощи специального детектирующего оборудования (ПЭТ-сканера) отслеживать распределение в организме биологически активных соединений, меченных позитрон-излучающими радиоизотопами. Потенциал ПЭТ в значительной степени определяется арсеналом доступных меченых соединений радиофармпрепаратов (РФП).

В онкологической практике ПЭТ позволяет выявлять опухолевые очаги, в том числе метастатические, и количественно оценивать их активность (Труфанов Г.Е. Совмещенная позитронно-эмиссионная и компьютерная томография (ПЭТ-КТ) в онкологии / Г.Е. Труфанов, В.В. Рязанов, Н.М. Дергунова и др. - М: ЭЛБИ-СПб, 2005 - С. 126.; Bitencourt AGV, Andrade WP, da Cunha RR, Conrado JLFA, Lima ENP, Barbosa PNVP, Chojniak R. Detection of distant metastases in patients with locally advanced breast cancer: role of 18F-fluorodeoxyglucose positron emission tomography/computed tomography and conventional imaging with computed tomography scans // Radiol Bras. 2017 Jul-Aug; 50(4):211-215. doi: 10.1590/0100-3984.2015-0232; Yoo J, Kim BS, Chung J, Yoon HJ. Percentage change of primary tumor on 18F-FDG PET/CT as a prognostic factor for invasive ductal breast cancer with axillary lymph node metastasis: Comparison with MRI // Medicine (Baltimore). 2017 Aug; 96(31):e7657. doi: 10.1097/MD.0000000000007657.)

Метод ПЭТ позволяет изучать на молекулярном уровне биохимические процессы организма в томографическом режиме. Специфичность ПЭТ заключается в возможности визуализации жизнеспособной опухолевой ткани и оценки ее биологической активности по степени интенсивности накопления в тканях метаболического радиофармпрепарата.

При этом наибольшее распространение в онкологической практике получили ПЭТ-сканирование с использованием фтороксиглюкозы (индикатор-фтор 18) (Bitencourt AGV, Andrade WP, da Cunha RR, Conrado JLFA, Lima ENP, Barbosa PNVP, Chojniak R. Detection of distant metastases in patients with locally advanced breast cancer: role of ¹⁸F-fluorodeoxyglucose positron emission tomography/computed tomography and conventional imaging with computed tomography scans // Radiol Bras. 2017 Jul-Aug; 50(4):211-215. doi: 10.1590/0100-3984.2015-0232; Vinh-Hung V, Everaert H, Farid K, Djassemi N, Baudin-Veronique J, Bougas S, Michailovich Y, Joachim-Contaret C, E, Verschraegen C, Nguyen NP. Preoperative [18]fluorodeoxyglucose-positron emission tomography/computed tomography in early stage breast cancer: Rates of distant metastases // World J Radiol. 2017 Jul 28; 9(7):312-320. doi: 10.4329/wjr.v9.i7.312.), а также фтор меченых аминокислот (Qi Y, Liu X, Li J, Yao H, Yuan S. Fluorine-18 labeled amino acids for tumor PET/CT imaging // Oncotarget. 2017 Aug 4; 8(36):60581-60588. doi: 10.18632/oncotarget.19943; McConathy J, Yu W, Jarkas N, Seo W, Schuster DM, Goodman MM. Radiohalogenated nonnatural amino acids as PET and SPECT tumor imaging agents. Med Res Rev. 2012; 32:868-905.; Langen KJ, S. Molecular transport mechanisms of radiolabeled amino acids for PET and SPECT. J Nucl Med. 2004; 45:1435-6; McConathy J. (FACBC) and Its Potential Use for Breast Cancer Imaging. J Nucl Med. 2016; 57:1329-30.; Tade FI, Cohen MA, Styblo TM, Odewole OA, Holbrook AI, Newell MS, Savir-Baruch B, Li X, Goodman MM, Nye JA, Schuster DM. Anti-3-18F-FACBC (18F-Fluciclovine) PET/CT of Breast Cancer: An Exploratory Study. J Nucl Med. 2016;57:1357-63.; Ulaner GA, Goldman DA, M, Pham H, Castillo R, Lyashchenko SK, Lewis JS, Dang C. Initial Results of a Prospective Clinical Trial of 18F-Fluciclovine PET/CT in Newly Diagnosed Invasive Ductal and Invasive Lobular Breast Cancers. J Nucl Med. 2016; 57:1350-6.)

Данные средства и способы нашли применение в клинике и могут быть эффективными методами для предоперационной постановки диагноза и определения оперативной тактики, однако в патологоанатомической практике для диагностики метастатических опухолей они не используются, кроме того применение ПЭТ и ПЭТ-КТ в клинической практике резко ограничено в связи с тем, что для их проведения необходимо дорогостоящее оборудование.

2. Известен способ оценки вероятности лимфогенного метастазирования инфильтрирующего протокового рака молочной железы, который заключается в том, что на препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, проводят морфологическое исследование инфильтративного компонента рака молочной железы с определением процентного содержания микроальвеолярных структур (MAC) по отношению к остальным выделяемым структурам. При их содержании менее 10% определяют низкую, при их содержании от 11% до 50% - умеренную, а при их содержании 51-75% и более - высокую вероятность лимфогенного метастазирования инфильтрирующего протокового рака молочной железы (патент РФ №2362165 на изобретение «Способ оценки вероятности лимфогенного метастазирования инфильтрирующего протокового рака молочной железы». Заявка: 2006121304/15, 15.06.2006. Опубликовано: 20.07.2009. Автор(ы): Завьялова М.В., Перельмутер В.М., Слонимская Е.М., Вторушин С.В.) (прототип).

Рассчитанные согласно таблице 3 описания данного изобретения значения чувствительности, специфичности и точности способа-прототипа (полученные в результате объединения подгрупп с отсутствием MAC и наличием их в количестве менее 10% в группу «отрицательное значение теста», а подгрупп с содержанием MAC 11-75% и более - в группу «положительное значение теста») составили соответственно: 0,503; 0,732; 0,614.

Раскрытие изобретения

Композиция для определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы содержит водные растворы толуидинового синего и альцианового синего, а также реактив Шиффа, содержащий фуксинсернистую кислоту, причем концентрация толуидинового синего, альцианового синего и фуксинсернистой кислоты в композиции таковы, что позволяют определить и дифференцировать на окрашенном композицией гистологическом препарате структуры и компоненты, содержащие вещества, имеющие альдегидные группы, в частности, нейтральные гликопротеины; структуры и компоненты, содержащие как вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, так и гликозаминогликаны; а также тучные клетки и очаги некроза опухоли.

Предлагаемая композиция, позволяющая выявить вышеуказанные объекты, предназначена для осуществления описанного ниже способа определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы.

Для получения вышеуказанной композиции используют реактив Шиффа, содержащий 0,2-0,25% фуксинсернистой кислоты, рабочий раствор толуидинового синего, приготовленный путем разбавления водой в 10 раз профильтрованного маточного раствора толуидинового синего, полученного путем растворения в 100 мл воды 1 г сухого порошка красителя толуидинового синего, а также рабочий раствор альцианового синего, приготовленный путем разбавления водой в 10 раз профильтрованного маточного раствора альцианового синего, полученного путем растворения в 100 мл воды 1 г сухого порошка красителя альцианового синего, при этом реактив Шиффа, рабочий раствор толуидинового синего и рабочий раствор альцианового синего содержатся в композиции в соотношении 1/5/1.

Реактив Шиффа производит компания BioVitrum (Россия), а также компании Bio-Optica Milano spa (Italy); «Гемстандарт», «ЛабПоинт» и др., альциановый синий - Alzianblau 8 GS Loba Chemie Fischamend (Austria), толуидиновый синий - Диаэ-м современная лаборатория (Россия).

Реактив Шиффа применяют для качественного определения альдегидной группы органических соединений (https://dic.academic.ru/dic.nsf/ruwiki/1885557; http://chem21.info/info/1004125/; http://orgchem.ru/chem4/o346.htm).

На гистологических срезах структуры, содержащие альдегидные группы окрашиваются реактивом Шиффа в различные оттенки красного цвета (Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - Ленинград, Медицина, ленинградское отделение. - 1969. - 4240 с.).

Толуидиновый синий используют для выявления тучных клеток в препаратах разных тканей человека и животных. Гранулы внутри тучных клеток окрашиваются в фиолетовый цвет за счет метахроматического окрашивания.

Техническим результатом предлагаемой композиции является ее свойство выявлять метастазирующие опухоли молочной железы и обеспечить повышение чувствительности, специфичности и точности способа определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы.

Концентрация толуидинового синего и альцианового синего в заявляемой композиции, превышающая вышеуказанную, приводит в течение времени окрашивания к выпадению осадка из композиции, что делает невозможным интерпретацию результатов. Концентрация толуидинового синего и альцианового синего ниже вышеуказанной вызывает недостаточность прокрашивания препарата, что также затрудняет интерпретацию результатов.

Пример получения заявленной композиции

К 100 мл дистиллированной воды добавляют 1 г красителя толуидинового синего, раствор тщательно перемешивают (маточный раствор); к 1 мл профильтрованного маточного раствора толуидинового синего добавляют 9 мл дистиллированной воды и получают рабочий раствор толуидинового синего.

К 100 мл дистиллированной воды добавляют 1 г красителя альцианового синего, раствор тщательно перемешивают (маточный раствор альцианового синего); к 1 мл профильтрованного маточного раствора альцианового синего добавляют 9 мл дистиллированной воды и получают рабочий раствор альцианового синего.

Смешивают 1 мл реактива Шиффа, 5 мл рабочего раствора толуидинового синего, 1 мл рабочего раствора альцианового синего и получают готовую композицию.

Сущность способа определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы с помощью предлагаемой композиции заключается в следующем.

Срезы операционного материала молочной железы больной (больного), обработанного с целью получения срезов для морфологического исследования, окрашивают предлагаемой вышеописанной композицией для выявления структур и компонентов, содержащих вещества, имеющие альдегидные группы, в частности, нейтральные гликопротеины; структур, содержащих как вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, так и гликозаминогликаны; а также для выявления тучных клеток и очагов некроза опухоли.

На окрашенных препаратах оценивают в баллах наличие или отсутствие следующих признаков (а также степень выраженности некоторых из них):

наличие компактных включений, содержащих гликозаминогликаны и вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, в просветах опухолевых структур малого размера (признак «А»), (наличие войлокоподобных включений, содержащих гликозаминогликаны и вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, в просветах опухолевых структур малого размера не является признаком «А»),

наличие компактных включений, содержащих гликозаминогликаны и вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, в просветах опухолевых структур большого размера (признак «Б»), (наличие войлокоподобных включений, содержащих гликозаминогликаны и вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, в просветах опухолевых структур большого размера не является признаком «Б»),

наличие веществ с альдегидными группами, в частности, нейтральных гликопротеинов, в стенках и ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла (признак «В»),

наличие очагов некроза опухоли (признак «Г»),

наличие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления (признак «Д»),

наличие тучных клеток в строме опухоли (признак «Е»).

Оценивают нулем баллов отсутствие каждого из вышеуказанных признаков на срезах операционного материала молочной железы данной больной, а также оценивают в баллах степень выраженности признаков «А», «Б» и «В» и наличие признаков «Г», «Д» и «Е» на срезах операционного материала молочной железы больной.

Для признаков «А», «Б» и «В» очень слабую, слабую, умеренную и выраженную степень выраженности признаков оценивают одним, двумя, тремя и четырьмя баллами соответственно;

наличие признака «Г» оценивают четырьмя баллами;

наличие признака «Д» оценивают двумя баллами,

наличие признака «Е» оценивают отрицательной величиной - минус два балла.

Суммируют баллы по вышеприведенным признакам и при получении суммы баллов, равной 6 и выше, делают вывод о высоком метастатическом потенциале опухоли молочной железы, а при сумме баллов, равной 5 и менее, делают вывод о низком метастатическом потенциале опухоли молочной железы.

Очень слабым, слабым, умеренным и выраженным проявлением признака «А» является наличие соответственно 1-2, 3-5, 6-10, более 10 компактных включений в просветах разных опухолевых структур малого размера.

Очень слабым, слабым, умеренным и выраженным проявлением признака «Б» является наличие соответственно 1-2, 3-5, 6-10, более 10 компактных включений в просветах разных опухолевых структур большого размера.

Очень слабым, слабым, умеренным и выраженным проявлением признака «В» является наличие веществ с альдегидными группами, в частности, нейтральных гликопротеинов, в стенках или ближайшем окружении соответственно 1-2, 3-5, 6-10, более 10 сосудов микроциркуляторного русла.

Материал для патологоанатомического исследования вырезают из операционного материала молочной железы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к патологоанатомическим препаратам (Рак молочной железы. Практическое руководство для врачей / [Ю.Ю. Андреева и др.]; под ред. Г.А. Франка, Л.Э. Завалишиной, К.М. Пожарисского. - М.: Практическая медицина, 2014. - 176 с.), обрабатывают для патологоанатомического исследования и окрашивают предлагаемой композицией.

Предлагаемая композиция окрашивает структуры, содержащие вещества с альдегидными группами, в частности, нейтральные гликопротеины, но не содержащие гликозаминогликаны, в малиновый цвет. Так окрашиваются стенки и ближайшее окружение сосудов микроциркуляторного русла.

Структуры, содержащие и нейтральные гликопротеины, и гликозаминогликаны, окрашиваются предлагаемой композицией в различные оттенки от красновато-фиолетового до фиолетово-красноватого цвета - в результате сочетания ярко-красного окрашивания нейтральных гликопротеинов и синего окрашивания альциановым и толуидиновым синим гликозаминогликанов. Так окрашивается строма опухоли.

Толуидиновый синий окрашивает гранулы тучных клеток в фиолетовый цвет за счет метахроматического окрашивания. Ядра клеток толуидиновый синий окрашивает в цвет от голубого до синего в зависимости от степени конденсации хроматина.

Признаком «А», как указывалось выше, является наличие компактных включений в просветах опухолевых структур малого размера, образуемых опухолевыми клетками (тубулярные, ацинарные, солидные, трабекулярные др. опухолевые структуры) (определение «малый размер» относится к структурам диаметром до 150 нм). Компактные включения представляют собой секрет опухолевых клеток. В зависимости от соотношения в нем нейтральных гликопротеинов и гликозаминогликанов он может окрашиваться в цвета от красновато-фиолетового до фиолетово-красноватого. Наличие войлокоподобных включений аналогичного цвета в просветах опухолевых структур малого размера не является наличием признака «А».

Признаком «Б» является наличие компактных включений в просветах опухолевых структур большого размера (определение «большой размер» относится к структурам диаметром 150 нм и более). Цвет включений аналогичен указанному в предыдущем абзаце. Наличие войлокоподобных включений того же цвета в просветах опухолевых структур большого размера не является наличием признака «Б».

Наличие веществ с альдегидными группами, в частности, нейтральных гликопротеинов, в стенках или ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла (признак «В») обнаруживается по малиновой окраске стенок или ближайшего окружения сосудов микроциркуляторного русла.

Техническим результатом предлагаемого способа является его свойство выявлять метастазирующие опухоли молочной железы и обеспечивать повышение чувствительности, специфичности и точности определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы.

Обоснование изобретения

Материал и методы исследования

Исследование было проведено на операционном материале опухоли молочной железы 51 пациентки с инвазивным протоковым раком (ИПР) молочной железы (злокачественная опухоль) в возрасте 59 (54,3; 66,5) лет и операционном материале молочной железы 11 пациенток с фиброаденомой (ФАМ) (доброкачественная опухоль) в возрасте 48 (28,0; 56,8) лет.

Регионарные лимфатические узлы с метастазами опухоли (от 1 до 15) были у 15 пациенток с инвазивным протоковым раком молочной железы. У 36 больных с инвазивным протоковым раком молочной железы метастазы в регионарные лимфатические узлы выявлены не были.

Операционный материал молочной железы больных с инвазивным протоковым раком или фиброаденомой (размером приблизительно 1 см³) фиксировали в 12% формалине, заливали в парафин. В случае подтверждения диагноза после морфологического исследования препаратов из залитых в парафин объектов делали серийные срезы толщиной 7 мкм. Предварительно обработанные йодной кислотой срезы молочной железы (стандартная обработка для высвобождения альдегидных групп, выявляемых реактивом Шиффа) окрашивали предлагаемой композицией в течение 10-20 мин., промывали в дистиллированной воде, обезвоживали в спиртах, просветляли и заключали в бальзам под покровное стекло. Данный способ окраски сохраняет свою информативность в течение месяца с момента окрашивания, в дальнейшем окраска постепенно выцветает.

Изучение препаратов и выявление предлагаемых признаков осуществлялось при увеличении микроскопа х400.

Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программного пакета для статистической обработки SPSS v 17.0 for Windows. Для сравнения независимых групп использовали критерий Крускала-Уоллиса с последующим межгрупповым сравнением с помощью критерия Манна-Уитни. Различия между значениями сравниваемых параметров расценивали как статистически значимые при р<0,05. Полученные в ходе исследования данные представлены как медиана (Me) и интерквартильный размах (Q₁; Q₃).

Результаты исследования

При морфологическом изучении гистологических препаратов, полученных с блоков образцов операционного материала опухоли, было отмечено, что наличие и количество выявляемых предлагаемой композицией структур, определяющих вышеуказанные признаки, у пациенток с инвазивным протоковым раком, имеющих метастазы в регионарные лимфатические узлы, отличается от таковых у пациенток с отсутствием последних (таблица 1).

Примечание:

* - достоверные отличия по сравнению с группой больных без метастазов при р<0,05;

** - достоверные отличия по сравнению с группой больных без метастазов при р<0,01;

*** - достоверные отличия по сравнению с группой больных без метастазов при р<0,001.

Чувствительность данного способа выявления метастазирующих опухолей молочной железы с помощью предлагаемой композиции составила 0,867, специфичность - 0,944, точность способа - 0,922, что превосходит аналогичные показатели прототипа.

Для уточнения качества предлагаемого способа определения метастатического потенциала опухоли молочной железы была построена ROC-кривая. Полученное значение площади под кривой (англ. Area Under Curve, AUC) было равно 0,932, что свидетельствовало об отличном качестве предлагаемой модели (Mossman D1, Somoza E. ROC curves, test accuracy, and the description of diagnostic tests // J Neuropsychiatry Clin Neurosci. 1991 Summer; 3(3):330-3; Hanley JA, McNeil BJ. The meaning and use of the area under a receiver operating characteristic (ROC) curve // Radiology. 1982 Apr; 143(1):29-36).

Клинические примеры

Больная А-ва. Патологоанатомическое заключение: инвазивный протоковый рак молочной железы.

При морфологическом изучении образцов операционного материала молочной железы были выявлены следующие признаки:

А - наличие компактных включений в просветах 5 опухолевых структур малого размера - 2 балла;

Б - наличие компактных включений в просвете 1 опухолевой структуры большого размера - 1 балл;

В - наличие ярко малиновой окраски в стенках или ближайшем окружении 19 сосудов микроциркуляторного русла - 4 балла;

Г - отсутствие очагов некроза опухоли - 0 баллов;

Д - отсутствие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления - 0 баллов;

Е - отсутствие тучных клеток в строме опухоли - 0 баллов.

Сумма баллов равнялась 7, что соответствовало высокому метастатическому потенциалу опухоли у данного пациента.

При исследовании регионарных лимфатических узлов в 4-х из них были выявлены метастазы опухоли.

Больная Е-на. Патологоанатомическое заключение: инвазивный протоковый рак молочной железы.

При морфологическом изучении образцов операционного материала молочной железы были выявлены следующие признаки:

А - наличие компактных включений в просветах 21 опухолевой структуры малого размера - 4 балла;

Б - наличие компактных включений в просвете 8 опухолевых структур большого размера - 3 балла;

В - наличие малиновой окраски в стенках или ближайшем окружении 2 сосудов микроциркуляторного русла - 1 балл;

Г - наличие очага некроза опухоли - 4 балла;

Д - наличие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления - 2 балла;

Е - отсутствие тучных клеток в строме опухоли - 0 баллов.

Сумма баллов равнялась 14, что соответствовало высокому метастатическому потенциалу опухоли у данного пациента.

При исследовании регионарных лимфатических узлов в 7-ми из них были выявлены метастазы опухоли.

Больная Б-ко. Патологоанатомическое заключение: инвазивный протоковый рак молочной железы.

При морфологическом изучении образцов операционного материала молочной железы были выявлены следующие признаки:

А - наличие компактных включений в просвете 2 опухолевых структур малого размера - 1 балл;

Б - наличие компактных включений в просвете 4 опухолевых структур большого размера - 2 балла;

В - отсутствие малиновой окраски в стенках или ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла - 0 баллов;

Г - отсутствие очага некроза опухоли - 0 баллов;

Д - отсутствие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления - 0 баллов;

Е - отсутствие тучных клеток в строме опухоли - 0 баллов.

Сумма баллов равнялась 3, что соответствовало низкому метастатическому потенциалу опухоли у данного пациента.

При исследовании регионарных лимфатических узлов метастазы опухоли выявлены не были.

Больная Д-ва. Патологоанатомическое заключение: инвазивный протоковый рак молочной железы.

При морфологическом изучении образцов операционного материала молочной железы были выявлены следующие признаки:

А - отсутствие компактных включений в просвете опухолевых структур малого размера - 0 баллов;

Б - отсутствие компактных включений в просвете опухолевых структур большого размера - 0 баллов;

В - наличие малиновой окраски в стенках или ближайшем окружении 3 сосудов микроциркуляторного русла - 2 балла;

Г - отсутствие очага некроза опухоли - 0 баллов;

Д - отсутствие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления - 0 баллов;

Е - отсутствие тучных клеток в строме опухоли - 0 баллов.

Сумма баллов равнялась 2, что соответствовало низкому метастатическому потенциалу опухоли у данного пациента.

При исследовании регионарных лимфатических узлов метастазы опухоли выявлены не были.

Больная Г-ко. Патологоанатомическое заключение: фиброаденома молочной железы.

При морфологическом изучении образцов операционного материала молочной железы были выявлены следующие признаки:

А - наличие компактных включений в просвете 2 опухолевых структур малого размера - 1 балл;

Б - отсутствие компактных включений в просвете опухолевых структур большого размера - 0 баллов;

В - отсутствие малиновой окраски в стенках или ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла- 0 баллов;

Г - отсутствие очага некроза опухоли - 0 баллов;

Д - отсутствие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления - 0 баллов;

Е - отсутствие тучных клеток в строме опухоли - 0 баллов.

Сумма баллов равнялась 1, что соответствовало низкому метастатическому потенциалу опухоли у данного пациента.

При исследовании регионарных лимфатических узлов метастазы опухоли выявлены не были.

Больная В-ва. Патологоанатомическое заключение: фиброаденома молочной железы.

При морфологическом изучении образцов операционного материала молочной железы были выявлены следующие признаки:

А - отсутствие компактных включений в просвете опухолевых структур малого размера - 0 баллов;

Б - отсутствие компактных включений в просвете опухолевых структур большого размера - 0 баллов;

В - отсутствие малиновой окраски в стенках или ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла- 0 баллов;

Г - отсутствие очага некроза опухоли - 0 баллов;

Д - отсутствие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления - 0 баллов;

Е - отсутствие тучных клеток в строме опухоли - 0 баллов.

Сумма баллов равнялась 0, что соответствовало низкому метастатическому потенциалу опухоли у данного пациента.

При исследовании регионарных лимфатических узлов метастазы опухоли выявлены не были.

По литературным данным, у 70% больных раком выявляются метастазы, и в 90% случаев смерть от рака наблюдается в результате метастазов (Arvelo F, Sojo F, Cotte С. Cancer and the metastatic substrate // Ecancermedicalscience. 2016 Dec 8; 10:701. doi: 10.3332/ecancer.2016.701. Review). Этот факт подчеркивает актуальность своевременной диагностики метастатического поражения. Поэтому определение метастатического потенциала опухоли, т.е. способности опухоли к метастазированию, является важной клинико-диагностической задачей.

1. Композиция для окрашивания гистологических препаратов опухолевой ткани молочной железы при определении метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы, характеризующаяся тем, что содержит водные растворы толуидинового синего и альцианового синего, а также реактив Шиффа, содержащий фуксинсернистую кислоту, причем концентрации толуидинового синего, альцианового синего и фуксинсернистой кислоты в композиции таковы, что позволяют определить и дифференцировать на окрашенном композицией гистологическом препарате структуры, содержащие как нейтральные гликопротеины, так и гликозаминогликаны; а также тучные клетки и очаги некроза опухоли, и реактив Шиффа, содержащий 0,2-0,25% фуксинсернистой кислоты, рабочий раствор толуидинового синего, приготовленный путем разбавления водой в 10 раз профильтрованного маточного раствора толуидинового синего, полученного путем растворения в 100 мл воды 1 г сухого порошка красителя толуидинового синего, и рабочий раствор альцианового синего, приготовленный путем разбавления водой в 10 раз профильтрованного маточного раствора альцианового синего, полученного путем растворения в 100 мл воды 1 г сухого порошка красителя альцианового синего, находятся в композиции в соотношении 1/5/1.

2. Способ определения метастатического потенциала инвазивного протокового рака молочной железы, включающий обработку операционного материала молочной железы до получения срезов для морфологического исследования, отличающийся тем, что срезы окрашивают композицией по п. 1 для выявления структур, содержащих нейтральные гликопротеины; структур, содержащих как нейтральные гликопротеины, так и гликозаминогликаны; а также для выявления тучных клеток и очагов некроза опухоли; на окрашенных препаратах оценивают в баллах степень выраженности следующих признаков:

наличие компактных включений, содержащих нейтральные гликопротеины и гликозаминогликаны в просветах опухолевых структур диаметром до 150 нм (признак «А»);

наличие компактных включений, содержащих нейтральные гликопротеины и гликозаминогликаны в просветах опухолевых структур диаметром 150 нм и более (признак «Б»);

наличие нейтральных гликопротеинов в стенках и ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла (признак «В»);

наличие очагов некроза опухоли (признак «Г»);

наличие тучных клеток в зоне параканкрозного воспаления (признак «Д»);

наличие тучных клеток в строме опухоли (признак «Е»);

оценивают нулем баллов отсутствие каждого из вышеуказанных признаков на срезах операционного материала молочной железы,

оценивают в баллах степень выраженности признаков «А», «Б» и «В» и наличие признаков «Г», «Д» и «Е» на срезах операционного материала молочной железы;

наличие 1-2, 3-5, 6-10, более 10 компактных включений в просветах разных опухолевых структур диаметром менее 150 нм принимают как очень слабое, слабое, умеренное и выраженное проявление признака «А» соответственно;

наличие 1-2, 3-5, 6-10, более 10 компактных включений в просветах разных опухолевых структур диаметром более или равным 150 нм принимают как очень слабое, слабое, умеренное и выраженное проявление признака «Б» соответственно;

наличие нейтральных гликопротеинов в стенках или ближайшем окружении 1-2, 3-5, 6-10, более 10 сосудов микроциркуляторного русла принимают как очень слабое, слабое, умеренное и выраженное проявление признака «В» соответственно;

для признаков «А», «Б» и «В» очень слабую, слабую, умеренную и выраженную степень выраженности признаков оценивают одним, двумя, тремя и четырьмя баллами соответственно;

наличие признака «Г» оценивают четырьмя баллами;

наличие признака «Д» оценивают двумя баллами,

наличие признака «Е» оценивают отрицательной величиной - минус два балла;

суммируют баллы по вышеприведенным признакам и при получении суммы баллов, равной 6 и выше, делают вывод о высоком метастатическом потенциале опухоли молочной железы, а при сумме баллов, равной 5 и менее, делают вывод о низком метастатическом потенциале опухоли молочной железы.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что структуры, содержащие нейтральные гликопротеины, содержащиеся в стенках или ближайшем окружении сосудов микроциркуляторного русла, определяют по их малиновой окраске.

4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что тучные клетки определяют по метахроматическому фиолетовому цвету гранул тучных клеток.

5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что компактные включения в просветах опухолевых структур, содержащие нейтральные гликопротеины и гликозаминогликаны, определяют по их окрашиванию в цвета от красновато-фиолетового до фиолетово-красноватого.