Способ выявления предрасположенности к заболеванию атеросклерозом на основе определения экспрессии генов, вовлеченных в накопление холестерина


G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)
G01N2800/50 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2698092:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и кардиологии, и предназначено для выявления предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличия доклинических признаков этой патологии. С помощью ПЦР-РВ измеряют уровень экспрессии генов, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, идентифицированных как IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15. Сравнивают полученные данные с аналогичными значениями уровня экспрессии тех же генов здоровых людей. Более высокий уровень экспрессии мРНК указанных генов свидетельствует о предрасположенности пациента к развитию атеросклероза на доклиническом этапе патологии. Изобретение упрощает прогноз прогрессирования заболевания и обеспечивает его более высокую прогностическую значимость.

 

Изобретение относится к медицине, медицинской генетике, кардиологии, а именно к ранней диагностике атеросклероза. Предложен способ генодиагностики и/или определения предрасположенности к атеросклерозу.

Атеросклероз представляет собой патологическое ремоделирование артерий, которое является основной причиной заболеваемости и смертности в развитых странах; эта патология лежит в основе инфаркта миокарда, инсульта и заболевания периферических артерий. Существует необходимость в прогностических и легко доступных маркерах атеросклероза, которые могут быть определены в образцах периферической крови. Как известно, наследственность определяет до 50% риска развития атеросклероза, но практически не учитывается в клинических шкалах оценки риска его развития. Генетические маркеры уже используются в практической медицине в виде Gene` с Risk Scores (Шкал оценки генетического риска), однако предсказательная ценность GRS в дополнении к клиническим шкалам оценки риска небольшая, поэтому применение шкал оценки генетического риска в настоящее время в профилактической медицине не рекомендовано. Тем не менее, представляется перспективным использовать генетические данные для улучшения прогноза развития клинических форм атеросклероза.

Известен способ выявления предрасположенности к развитию атеросклероза на доклиническом этапе путем генетического анализа, отличающийся тем, что определяют наличие фенотипов SS и FS локуса C'3, причем при наличии фенотипа SS локуса C'3 устанавливают генетическую предрасположенность к развитию атеросклеротических процессов, при наличии фенотипа FS локуса C'3, устанавливают генетическую предрасположенность к сдерживанию развития атеросклеротических процессов (патент 2367956, 20.09.2009 год). Способ осуществляют путем идентификации генетических полиморфных систем, методом вертикального электрофореза в нативных условиях в 7,5% полиакриламидном геле на электрофоретической ячейке PROTEAN II xi 2-D фирмы BIO-RAD с использованием генетического анализа. Однако предложенный способ не отличается высокой надежностью получаемых данных и практически не используется в медицинских целях.

Настоящее изобретение относится к идентификации ряда маркеров, обнаруживаемых в крови, и к их применению для упрощения доклинической диагностики и выявления предрасположенности к, атеросклерозу и, особенно, накопления внутриклеточного холестерина. Авторами приняты во внимание данные о том, что иммунный ответ вследствие взаимодействия клеток с модифицированным липопротеидами низкой плотности (ЛНП) стимулирует накопление внутриклеточных липидов [Kidani Y. and Bensinger S.J. Reviewing the impact of lipid synthetic flux on Th17 function // Curr Opin Immunol. 2017. T 46. C. 121-126; Ito A., Hong C., Oka K., Salazar J.V., Diehl C., Witztum J.L., Diaz M., Castrillo A., Bensinger S.J., Chan L. and Tontonoz P. Cholesterol Accumulation in CD11c+ Immune Cells Is a Causal and Targetable Factor in Autoimmune Disease // Immunity. 2016. T 45. C. 1311-1326; Kidani Y. and Bensinger S.J. Modulating Cholesterol Homeostasis to Build a Better T Cell // Cell Metab. 2016. T 23. C. 963-964; York A.G., Williams K.J., Argus J.P., Zhou Q.D., Brar G., Vergnes L., Gray E.E., Zhen A., Wu N.C., Yamada D.H., Cunningham C.R., Tarling E.J., Wilks M.Q., Casero D., Gray D.H., Yu A.K., Wang E.S., Brooks D.G., Sun R., Kitchen S.G., Wu T.T., Reue K., Stetson D.B. and Bensinger S.J. Limiting Cholesterol Biosynthetic Flux Spontaneously Engages Type I IFN Signaling // Cell. 2015. T 163. C. 1716-1729].

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что атерогенез приводит к изменению параметров (активности, экспрессии) генов, которые могут быть определены в образцах крови человека. При проведении транскриптомного анализа макрофагов (одного из важнейших клеточных типов, участвующих в атерогенезе) были выявлены гены, активность которых существенно изменяется при взаимодействии клеток с модифицированными ЛНП. С помощью методов биоинформатики эти гены, тесно связанные с накоплением холестерина макрофагами человека, идентифицированы как IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15.

Таким образом, идентифицированные гены (маркеры, мастер-регуляторы), ответственные за накопление холестерина макрофагами человека, представляют значительный интерес для генодиагностики атеросклероза. Использование множественных маркеров упрощает прогноз прогрессирования заболевания и обеспечивает его более высокую прогностическую значимость.

Задача изобретения - расширение диагностических возможностей атеросклеротических процессов на доклиническом этапе за счет определения экспрессии генов, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека (IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15). Изменения экспрессии генов обусловлены накоплением внутриклеточных липидов при взаимодействии клеток с атерогенными ЛНП.

Поставленная задача решается следующим образом. Из макрофагов цельной крови человека выделяют тотальную РНК с использованием реагента Тризол (Invitrogen, США) согласно рекомендации производителя. С помощью метода обратной транскрипции анализируется мРНК (матричная РНК). Выделение мРНК для транскриптомного анализа осуществляется с использованием набора RNeasy mini-kit (Qiagen, США) согласно протоколу производителя. Синтез кДНК (кодоминантной ДНК) проводится с использованием набора реактивов ImProm-II™ Reverse Transcription System (Promega, США) в соответствии с рекомендациями фирмы-производителя.

Далее оценивается уровень экспрессии мРНК анализируемых генов методом ПЦР-РВ (полимеразной цепной реакции в режиме реального времени) на приборе 7500 Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, США). Для амплификации используется реакционная смесь и праймеры производства фирмы «Синтол» (Россия). В качестве флуорофора для детекции продуктов применяется интеркалирующий краситель SYBR Greenl. Уровень экспрессии мРНК анализируемых генов выравнивают по отношению к усредненным данным амплификации двух генов неизменного уровня экспрессии GAPDH иСАР1.

Более высокий уровень экспрессии мРНК 10 исследуемых генов по сравнению с аналогичными значениями контроля (гены макрофагов здоровых людей) свидетельствует о наличии предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличии доклинических признаков этой патологии.

Способ выявления предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличия доклинических признаков этой патологии путем измерения с помощью ПЦР-РВ уровня экспрессии генов, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, идентифицированных как IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15, и сравнения полученных данных с аналогичными значениями уровня экспрессии тех же генов здоровых людей, причем более высокий уровень экспрессии мРНК указанных генов свидетельствует о предрасположенности пациента к развитию атеросклероза на доклиническом этапе патологии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и молекулярной биологии. Предложен экспресс-тест на основе ПЦР для прогнозирования чувствительности образца опухоли головного мозга конкретного пациента к онколитическим вирусам.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. Способ прогнозирования течения хронической сердечной недостаточности (ХСН) заключается в исследовании цельной крови, при этом в цельной крови исследуют полиморфизм генов AGT и АСЕ и при наличии генотипа ТТ полиморфного маркера Met235Thr и аллели D гена АСЕ прогнозируют неблагоприятное течение ХСН.

Изобретение относится к области профилактической медицины, а именно к способу определения атерогенной активности пищевых продуктов, предусматривающему использование клеточной модели моноцитов-макрофагов, выделенных из крови здорового человека, для введения в нее сыворотки крови, взятой у добровольцев, получавших исследуемый пищевой продукт в течение определенного времени, с последующим измерением накопления холестерина в моноцитах-макрофагах модели под действием сыворотки крови и определением ее способности статистически достоверно повышать содержание холестерина в культивируемых клетках.

Настоящее изобретение относится соединению формулы (I) или его мезомерным формам: где mCat+ или mAn- представляет собой органический или неорганический положительно/отрицательно заряженный противоион, и m представляет собой целое число, составляющее от 0 до 2; р представляет собой целое число, составляющее от 1 до 2; q представляет собой целое число, составляющее от 1 до 5; alk представляет собой углеродную цепочку, содержащую от 1 до 5 атомов углерода; Y представляет собой О или СН2; Z представляет собой ОН; n представляет собой 0 или 1; X представляет собой ОН или О-; Ra1 представляет собой SO3- или дополнительный С6-цикл, сконденсированный с соседним атомом углерода, где дополнительный цикл содержит SO3-; Ra2 представляет собой Н; Rc1 представляет собой С1-С6 алкил; Rc2 представляет собой С1-С6 алкил или группу С1-С6 алкилсульфоновой кислоты.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для расшифровки вспышек бактериальных инфекций и определения источника заражения. Для этого проводят отбор биологического материала, выделяют и идентификацируют штаммы бактерий двумя способами: классическим бактериологическим методом и методом масс-спектрометрии с максимально высоким коэффициентом Score (2,2 и выше) с получением протеинограмм - белковых спектров штаммов.

Изобретение относится к области фармакогенетики и персонализированной медицины. Предложен способ анализа полиморфных маркеров в генах SLCO1B1, АРОЕ и АВСВ1 для определения индивидуальной чувствительности к статинам, предусматривающий следующие стадии: амплификацию с помощью мультиплексной одноэтапной ПЦР, обеспечение биочипа, гибридизацию флуоресцентно меченного ПЦР-продукта на биочипе и регистрацию и интерпретацию результатов гибридизации.

Группа изобретений относится к определению того, является ли источником зарегистрированных газовых сигналов болотный газ или коммунальный газ при поиске утечек коммунального газа в подземных трубопроводах.

Группа изобретений относится к области калибровки детектирующих устройств. Способ калибровки детектирующего устройства включает введение калибровочного образца, содержащего изофлуран, в детектирующее устройство; накопление экспериментальных данных, относящихся к детектированию отрицательных ионов мономера и димера изофлурана, образованных в результате ионизации калибровочного образца; и калибровку детектирующего устройства для детектирования известного целевого химиката на основании сравнения экспериментальных данных, накопленных для отрицательного иона мономера изофлурана, и экспериментальных данных, накопленных для отрицательного иона димера изофлурана.

Изобретение относится к устройству, содержащему интегрированный вычислительный элемент (ICE), расположенный для оптического взаимодействия с электромагнитным излучением от текучей среды и, таким образом, формирования оптически провзаимодействовавшего излучения, соответствующего характеристике текучей среды, и способу использования устройства.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления нарушений углеводного обмена на ранних стадиях и выявления скрытого диабета на фоне нормальных показателей глюкозы и гликозилированного гемоглобина.
Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене питания, и может быть использовано для оценки эффективности рационов лечебно-профилактического питания для работающих приоритетных профессий медной металлургии.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к созданию устройств с биочувствительным элементом на основе восстановленного оксида графена. Способ изготовления биологического сенсора на основе оксида графена включает формирование на подложке пленки графенсодержащего материала, паттернирование полученной пленки с образованием проводящего канала и модификацию поверхности пленки химическими соединениями.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для детекции туберкулеза у субъекта. Для этого в образце мокроты, полученной от субъекта, определяют уровень одного или нескольких биомаркеров, выбранных из группы, состоящей из антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL-1Ra), интерлейкина-10 (IL-10), интерлейкина-13 (IL-13), интерлейкина-15 (IL-15), фактора роста фибробластов (FGF), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF).

Изобретение относится к области медицины и молекулярной биологии. Предложен экспресс-тест на основе ПЦР для прогнозирования чувствительности образца опухоли головного мозга конкретного пациента к онколитическим вирусам.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ преимплантационной генетической диагностики анемии Фанкони у эмбриона, предусматривающий определение мутаций с.731Т>А (p.L244X), c.1844dupC и делеции 1-3 экзонов гена FANCA путем проведения прямой и косвенной диагностики.

Изобретение относится к биотехнологии, аналитической химии и касается способа определения содержания β-казеина А1 и/или А2 групп в молоке, молочных продуктах, молочных составных продуктах, молокосодержащих продуктах.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике стадии фиброза печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом В. Согласно предлагаемому способу, в лимфоцитах периферической крови методом ДНК-комет определяют процент повреждений ДНК, осуществляют клинический и общетерапевтический биохимический анализ крови, с использованием предсказательной математической модели по результатам анализов пациентов с хроническим вирусным гепатитом B находят коэффициенты порядковой логистической регрессии с регуляризацией, с помощью которых рассчитывают значение вспомогательных показателей esl и es2 по следующим формулам: es1 = ехр(6,354-0,019*⋅Возраст - 0,096*⋅Лейкоциты - 0,066*⋅СОЭ - 0,770*⋅%ДНК в хвосте кометы); es2 = ехр(11,944-0,019*⋅Возраст - 0,096*⋅Лейкоциты - 0,066*⋅СОЭ - 0,770*⋅%ДНК в хвосте кометы), где ехр - экспоненциальная функция; возраст - возраст пациента, лет; СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/ч; лейкоциты - содержание лейкоцитов в периферической крови пациента, 109/л; % ДНК в хвосте кометы - содержание ДНК в хвосте кометы лимфоцита, %.

Изобретение относится к области медицины, в частности, к хирургии и представляет собой способ оценки готовности к выполнению пластического закрытия раны у больных с синдромом диабетической стопы путем исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что у больного после оперативного вмешательства в сыворотке крови, взятой из вены, ближайшей к очагу воспаления, определяют содержание фактора некроза опухоли (ФНО) один раз в три дня и при его значении ниже 8,21 пг/мл делают вывод о возможности выполнения пластического закрытия раны: проведения аутодермопластики или наложения 2-х швов.

Группа изобретений относится к области определения концентраций глюкозы и лактата в разбавленной крови, а также сыворотке и плазме крови. Планарный биосенсор для определения глюкозы и лактата в жидкой пробе включает размещенные на подложке хлоридсеребряный электрод сравнения, два рабочих электрода и вспомогательный электрод, размещенный между рабочими электродами.

Группа изобретений относится к области сбора и хранения биологического материала. Устройство для приема образца содержит сосуд; приемник, сообщающийся с сосудом для приема образца; и колпачок.

Изобретение относится к области металлографического анализа. Устройство содержит анод и катод, причем по меньшей мере часть катода содержит материал, содержащий металл M', значение Δ которого, определяемое следующей формулой, составляет 10 или больше, причем устройство содержит электролитическую ячейку для вмещения раствора электролита, содержащего химический агент, который образует комплексное соединение, содержащее упомянутый металл M' и неводный растворитель,Δ = pKsp[M'x'Ay'] - pKsp [MxAy] = (-log10 Ksp[M'x'Ay']) - (-log10Ksp[MxAy]),в котором произведение растворимости металлического соединения M'x'Ay' определяется как Ksp[M'x'Ay'], а произведение растворимости экстрагируемого металлического соединения MxAy, которое содержится в металлическом материале, определяется как Ksp[MxAy], и в котором M и M' являются различными металлическими элементами, A является одиночным атомом или атомной группой, образующей соединение с M или M', и x, x', y и y' представляют собой доли в составе соединения, определяемые в соответствии с валентностями M, M' и A, а произведение растворимости Ksp является значением в водном растворе при 25°C.

Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и кардиологии, и предназначено для выявления предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличия доклинических признаков этой патологии. С помощью ПЦР-РВ измеряют уровень экспрессии генов, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, идентифицированных как IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15. Сравнивают полученные данные с аналогичными значениями уровня экспрессии тех же генов здоровых людей. Более высокий уровень экспрессии мРНК указанных генов свидетельствует о предрасположенности пациента к развитию атеросклероза на доклиническом этапе патологии. Изобретение упрощает прогноз прогрессирования заболевания и обеспечивает его более высокую прогностическую значимость.

Наверх