Средство для подавления экспрессии генов, связанных с накоплением холестерина макрофагами человека



Владельцы патента RU 2698199:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии" (RU)

Изобретение относится к области медицины, кардиологии и генной терапии. Предложено средство для лечения атеросклероза, представляющее собой композицию для подавления экспрессии генов IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека. Композиция состоит из наночастиц Curdlan, выступающих в качестве носителя, и siRNA, специфичных по отношению к указанным генам. Изобретение обеспечивает создание малотоксичной композиции, подавляющей экспрессию генов IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15.

 

Изобретение относится к области медицины, кардиологии и генной терапии и может быть использовано для лечения атеросклероза путем регуляции генной экспрессии. Изобретение представляет собой композицию для подавления экспрессии генов посредством механизма интерференции РНК,- состоящую из наночастиц Curdlan для адресной доставки siRNA в макрофаги человека и собственно siRNA. Изобретение обеспечивает создание малотоксичной композиции, подавляющей экспрессию генов, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека.

Атеросклероз представляет собой патологическое ремоделирование артерий, которое является основной причиной заболеваемости и смертности в развитых странах; эта патология лежит в основе инфаркта миокарда, инсульта и заболевания периферических артерий. На сегодняшний день терапия атеросклероза включает применение лекарственных и хирургических воздействий, имеющих многочисленные недостатки и требующих дальнейшего совершенствования (Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. Российские рекомендации, IV пересмотр. / Москва, 2009 г. - 80 с.; Blumenthal R.S., Kapur N.K. Can a potent statin actually regress coronary atherosclerosis? // JAMA. - 2006. - Vol. 295. - P. 1583-1584; Blumenthal R.S., Michos E.D. The HALTS Trial - Halting Atherosclerosis or Halted Too Early? // N. Engl J. Med. 2009. - Vol. 361. - P. 2178-2180; Ibanez В., Badimon J.J., Garcia M.J. Diagnosis of Atherosclerosis by Imaging. // Am. J. Med. - 2009. - Vol. 22, Issue 1. - Supplement: S15-S25.; Klein L.W. Atherosclerosis Regression, Vascular Remodeling, and Plaque Stabilization. // J. Am. Coll. Cardiol. - 2007. - Vol. 49. - P. 271-273; Gustafsen C. et al. The Hypercholesterolemia-Risk Gene SORT1 Facilitates PCSK9 Secretion. // Cell Metabolism. - 2014 - Vol. 19, Issue 2, p. 310-318.).

Многие антиатеросклеротические препараты (например, статины) снижают проявления симптомов атеросклероза и являются достаточными для лечения некоторой части пациентов, но они не воздействуют на первопричины патогенетических звеньев заболевания. Таким образом, разработка новых подходов к лечению и профилактике атеросклероза остается актуальной задачей.

Недавнее открытие явления интерференции РНК (РНК-и) как одного из основных механизмов посттранскрипционной регуляции генов дало возможность использовать этот феномен для создания новых лекарственных средств, способных эффективно и безопасно подавлять экспрессию генов-мишеней. РНК-и позволяет специфически «выключать» экспрессию генов-мишеней с помощью молекул siRNA (small interfering RNA). Для эффективной доставки siRNA в клетки-мишени применяют специальные молекулы-носители, формирующие комплексы с siRNA. Комплексование приводит к компактизации молекул РНК, их защите от деградации клеточными РНКазами, что позволяет им эффективно проникать внутрь клетки и достигать нужной мишени.

Главными преимуществами использования препаратов на основе РНК-и являются высокая специфичность подавления экспрессии генов, вовлеченных в патогенез, а также высокая эффективность их подавления (до 90%), т.к. вводимые siRNA способны действовать в крайне низких концентрациях. Кроме того, привлекательной является сравнительная дешевизна методики. Синтез олигонуклеотидов в настоящее время вполне доступен и прост в масштабировании. Этот факт дает препаратам, созданным на базе siRNA, важное конкурентное преимущество, например, по сравнению с моноклональными антителами. Открытие РНК-интерференции дало новые возможности для регуляции экспрессии патогенетически значимых генов, в том числе и генов, вовлеченных в инициацию и развитие атеросклероза. РНК-и активируется молекулами siRNA, которые имеют нуклеотидную последовательность, комплементарную гену-мишени. Несмотря на сравнительно недавнее открытие РНК-и, уже имеются изобретения по применению данного подхода к терапии болезни Хантингтона, онкологических заболеваний, начались клинические исследования метода лечения дистрофии желтого пятна сетчатки с помощью siRNA.

Авторами настоящего изобретения обнаружено (неопубликованные данные), что атерогенез приводит к изменению параметров (активности, экспрессии) генов, которые могут быть определены в образцах крови человека. При проведении транскриптомного анализа макрофагов (одного из важнейших клеточных типов, участвующих в атерогенезе) были выявлены гены, активность которых существенно изменяется при взаимодействии клеток с модифицированными липопротеидами низкой плотности. С помощью методов биоинформатики эти гены, тесно связанные с накоплением холестерина макрофагами человека, идентифицированы как IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1,DUSP1 и IL15.

Таким образом, идентифицированные гены (маркеры, мастер-регуляторы), ответственные за накопление холестерина макрофагами человека, представляют значительный интерес для генотерапии атеросклероза с помощью РНК-интерференции.

Аналогом заявляемого изобретения является патент на изобретение №: 2563989 «Композиция для подавления экспрессии гена цитокина интерлейкина-4» (сентябрь 27, 2015), представляющая собой композицию, состоящую из катионного дендримерного пептида - LTP и двух молекул siRNA против гена IL-4 для подавления аллергического воспаления путем блокировки экспрессии гена провоспалительного цитокина IL-4.

Задачей предлагаемого изобретения является создание средства для лечения атеросклероза..

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание малотоксичной композиции, подавляющей экспрессию генов IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15.

Указанная задача решается, а технический результат достигается за счет того, что композиция для подавления экспрессии указанных генов посредством механизма интерференции РНК состоит из носителя (наночастиц Curdlan) и siRNA, поставляемых компанией Ambion (ThermoFisher). Выбор оптимальных молекул siRNA для композиции соответствует методу, описанному в статье (Lu Z.J. and Mathews D.H., 2008).

В свою очередь, получение наночастиц Curdlan осуществляли следующим образом (Ganbold Т, Baigude Н. Design of Mannose-Functionalized Curdlan Nanoparticles for Macrophage-Targeted siRNA Delivery. ACS Appl Mater Interfaces. 2018 May 2;10(17):14463-14474; Han J, Caia J, Borjihan W, Ganbolda T, Rana TM, Baigude H. Preparation of Novel Curdlan Nanoparticles for Intracellular siRNA Delivery. Carbohydrate polymers. 2015; 117:324-330). 6-Амино-6-дехсоид-кундлан (80 мг, 6AC-100) растворяли в 3 мл натрий-фосфатного буфера (PBS) (рН=9;0) и добавляли 1 мл раствора диэтилсульфоксида 4-изотиоцианатофенил. Добавляли альфа-Д-маннопиранозид (18,7 мг) с последующим перемешиванием при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем добавляли смесь гидрохлорид имидазол-4-уксусной кислоты (31,5 мг) и гидрохлорид 1-этил-3-карбодиимида (22,1 мг) в 0,1 М буфере MES (рН=6,0). Перемешивание продолжалось при комнатной температуре в течение 6 часов. После продукт чистили путем диализа (размер пор 3500) против деионизированной воды в течение 2 дней, обессоливающая колонка PD-10 (GE Healthcare) использовалась для дальнейшей очистки конечного продукта, который был получен при помощи сублимационной сушки.

Полученный конечный продукт (1 мкг) смешивается с siRNA (25 мкМ), готовая композиция вводится в кровь пациентов из расчета 25 мг/кг. В предварительных экспериментах на лабораторных животных и пациентах-добровольцах показано, что заявляемое изобретение - малотоксичная композиция, подавляющая экспрессию генов IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15, может применяться как отдельно, так и в составе лекарственных препаратов для лечения атеросклероза. Средство для лечения атеросклероза, представляющее собой композицию для подавления экспрессии генов IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, за счет интерференции РНК, состоящую из наночастиц Curdlan, выступающих в качестве носителя, и siRNA, специфичных по отношению к указанным генам.

Средство для лечения атеросклероза, представляющее собой композицию для подавления экспрессии генов IL7R, IL7, TIGIT, CXCL8, F2RL1, EIF2AK3, TSPYL2, ANXA1, DUSP1 и IL15, тесно связанных с накоплением холестерина макрофагами человека, за счет интерференции РНК, состоящую из наночастиц Curdlan, выступающих в качестве носителя, и siRNA, специфичных по отношению к указанным генам.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к профилактике аллергий у младенцев. Предложена композиции, содержащая 2'-фукозиллактозу (2FL) в качестве единственного олигосахарида, для профилактики аллергий и/или лечения аллергий и/или снижения частоты возникновения или риска развития аллергий у младенца или ребенка младшего возраста, рожденного матерью с дефицитом по меньшей мере одного фукозилированного (-ых) олигосахарида (-ов) или вскармливаемого материнским молоком с дефицитом по меньшей мере одного фукозилированного (-ых) олигосахарида (-ов).

Изобретение относится к пиразолотиазоловому соединению, представленному формулой [I], где R1 представляет собой водород, С1-6алкил или С1-6алкокси; Z представляет собой -OR3 или -NR4R5; где R3 представляет собой С1-6алкил, С1-6алкил, замещенный С3-6циклоалкилом, С3-6циклоалкил, фенил или пиридил; R4 представляет собой водород или С1-6алкил; R5 представляет собой С1-6алкил, С3-6циклоалкил или насыщенную гетероциклическую группу, выбранную из оксана, пиперидина, пирролидина, оксетана, указанный С1-6алкил в R5 необязательно замещен одной или двумя группами, выбранными из группы, состоящей из следующих (1)-(5): (1) гидрокси,(2) С1-6алкокси и дифторС1-6алкокси, (3) С3-6циклоалкил, С3-6циклоалкил, замещенный (дифторС1-6алкокси)С1-6алкилом, и С3-6циклоалкил, замещенный С1-6алкоксиС1-6алкилом, (4) насыщенная гетероциклическая группа, выбранная из тетрагидропирана, необязательно замещенная (дифторС1-6алкокси)С1-6алкилом, и (5) фенил, замещенный фтором, и фенил, замещенный С1-6алкокси, указанный С3-6циклоалкил в R5 необязательно замещен одной или двумя группами, выбранными из группы, состоящей из следующих (1)-(3): гидрокси, (2) С1-6алкокси и дифторС1-6алкокси, и (3) нитрил, и указанные оксан, пиперидин, пирролидин, оксетан в R5 необязательно замещены одной группой, выбранной из группы, состоящей из следующих (1)-(3): (1) С1-6алкил, (2) С1-6алкилкарбонил, и (3) С1-6алкоксикарбонил; R2 представляет собой гидрокси или -NHR8, где R8 представляет собой гетероарил (пиримидин, тиазол), гетероарил (пиридин), необязательно замещенный фтором или С1-6алкилом, 1,2-оксазол, необязательно замещенный С1-6алкилом, или -COL1, -COOL2 или -SO2L3, указанный L1 представляет собой группу, выбранную из группы, состоящей из следующих (1)-(5): (1) С1-6алкил, дифторС1-6алкил и С1-6алкил, замещенный С1-6алкокси, (2) С3-6циклоалкил, (3) фенил, (4) пиридин и тиенил, и (5) С1-6диалкиламино и С3-6циклоалкиламино, указанный L2 представляет собой группу, выбранную из группы, состоящей из следующих (1)-(3): (1) С1-6алкил, моногалогенС1-6алкил, дигалогенС1-6алкил, тригалогенС1-6алкил, и С1-6алкил, замещенный С1-6алкокси, (2) С3-6циклоалкил, и (3) С1-6диалкиламиноС1-6алкил, и указанный L3 представляет собой С1-6алкил или С3-6циклоалкил, или его фармацевтически приемлемой соли или его гидрату.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения характеристики профиля антител и комплемента, включающего обеспечение образца, содержащего по меньшей мере один иммуноглобулин и нативный комплекс иммуноглобулин-C1q; обеспечение поверхности для анализа, содержащей покрытие из пищевых антигенов, при этом указанное покрытие из пищевых антигенов содержит первый пищевой антиген, второй пищевой антиген и третий пищевой антиген, которые были нанесены на указанную поверхность для анализа последовательно; приведение в контакт указанной поверхности для анализа по меньшей мере с частью указанного образца; приведение в контакт указанной поверхности для анализа со смесью антител, при этом указанная смесь антител содержит первое антитело, направленное на C1q, и второе антитело, направленное по меньшей мере на один из по меньшей мере одного типа иммуноглобулинов в указанном образце; и получение сигнала, характеризующего связывание и по меньшей мере одного иммуноглобулина и нативного комплекса иммуноглобулин-C1q из указанного образца с указанной поверхностью для анализа, при этом интенсивность сигнала, превышающая фоновый порог, характеризуется как положительный результат.

Настоящее изобретение относится к стабильной водной фармацевтической суспензионной композиции с фиксированной дозой для назального введения человеку. Композиция содержит мометазона фуроат в виде частиц, гидрохлорид олопатадина в растворенном виде, гидроколлоид, выбранный из карбоксиметилцеллюлозы натрия и ксантановой камеди, воду и вспомогательные ингредиенты.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммунологии, и может быть использовано в медицине и диагностике состояний у млекопитающего, характеризующихся гиперчувствительностью к арахису или лесным орехам, которые содержат Ara h 1.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой противоопухолевое и антиметастатическое средство, обладающее противовоспалительным и противоаллергенным действием, представляющее собой хлоргидрат 2-изобутил-4,6-диметил-5-оксипиримидина формулы 1 .

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его стереоизомеру, или фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают свойствами ингибитора PI3-киназы, в частности PI3-киназы, представляющей собой PI3Kδ.

Изобретение относится к медицине и предназначено для уменьшения степени тяжести эозинофильного эзофагита. Субъекту вводят терапевтически эффективное количество терапевтической композиции, содержащей ингибитор рецептора интерлейкина-4 (ИЛ-4Р), а именно антитело к ИЛ-4Р или антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с ИЛ-4Р.
Группа изобретений относится к фармации и медицине. Предложено: таблетка для перорального введения для лечения аллергического или воспалительного состояния, содержащая, в мг на таблетку общей массой 206 мг: Монтелукаст натрия 10,4; Левоцетиризина дигидрохлорид 5,0 и вспомогательные ингредиенты; причём таблетка получена по способу, включающему стадии: a) смешивания монтелукаста натрия, моногидрата лактозы, микрокристаллической целлюлозы, безводного двухосновного фосфата кальция и кроскармеллозы натрия; b) растворения гидроксипропилцеллюлозы в растворителе с образованием связующего раствора; c) гранулирования смеси со стадии а) с применением связующего раствора со стадии b); d) смешивания гранул со стадии с) с левоцетиризина дигидрохлоридом, кроскармеллозой натрия и микрокристаллической целлюлозой; e) введения смазывающего вещества, представляющего собой стеарат магния, в смесь со стадии d); f) прессования продукта со стадии е) с получением таблетки и способ её получения.

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к эмульсионной композиции, содержащей дифлупреднат и цинк. А также относится к способу стабилизации эмульсионной композиции, содержащей дифлупреднат, включающему добавление образующего ион цинка соединения на стадии приготовления композиции.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к векторам на основе серотипа AAV-Rh74 аденоассоциированного вируса (AAV), содержащим полинуклеотидную последовательность, кодирующую фактор IX человека, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая искусственную мкРНК для подавления экспрессии гена-мишени, композицию и фармацевтическую композицию для подавления экспрессии гена-мишени, содержащие эффективное количество вышеуказанной искусственной мкРНК, способ подавления экспрессии гена-мишени, включающий применение искусственной мкРНК, способ лечения заболевания, включающий стадию введения искусственной мкРНК, применение искусственной мкРНК в лечении заболевания, где заболевание представляет собой злокачественную опухоль, фиброз легких или фиброз печени.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы лечения больного с диагностированным расстройством аутистического спектра (ASD) или синдромом ломкой X-хромосомы (FXS), включающие стадии приведения в контакт образца крови больного с антителом, которое селективно связывается с ERK 1 или ERK 2, введения акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата больному, определения, имеется ли изменение уровней ERK 1 или ERK 2 в крови больного и увеличения количества акампросата или фармацевтически приемлемой соли акампросата таким образом, чтобы снизился уровень по меньшей мере одного из ERK 1 и ERK 2 в периферической крови больного.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан антисмысловой олигомер длиной от 15 до 30 оснований для пропуска 44 экзона в гене дистрофина человека, содержащий нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7, 55, 8, 9, 106 и 6.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения субъекта-человека, имеющего опухоль. Для этого субъекту вводят альфавирус М1.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа повышения экспрессии гена сиртуина SIRT 7 в клетках млекопитающего, включающего приведение указанных клеток в контакт с по меньшей мере одним олигонуклеотидом, составляющим в длину от 10 до 30 нуклеотидов, который специфически гибридизуется с природной антисмысловой последовательностью SEQ ID NO: 23, с повышением, таким образом, экспрессии указанного полинуклеотида гена сиртуина SIRT7 в клетках млекопитающего.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ получения микровезикул, содержащих трансгенный продукт и/или лентивирусную РНК, содержащую трансген.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению слитых белков, связывающихся с PDGF и VEGF, и рекомбинантных вирусных частиц, кодирующих слитые белки, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в частности к определению показателя пролиферативной активности опухолевых клеток трипл-негативного рака молочной железы.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ предотвращения, ингибирования или лечения одного или нескольких симптомов мукополисахаридоза типа I (MPS I) у человека, включающий интратекальное введение нуждающемуся в этом человеку композиции, содержащей эффективное количество вектора на основе рекомбинантного аденоассоциированного вируса (rAAV), содержащего открытую рамку считывания, кодирующую альфа-L-идуронидазу, причем rAAV представляет собой rAAV9 или rAAVrh10.

Группа изобретений относится к области ядерной медицины. Набор для приготовления суспензии полипептидных биодеградабельных микрочастиц для проведения трансартериальной радиоэмболизации капилляров печени, находящихся в изотоническом 0,9% водном растворе хлорида натрия, меченных изотопом рения, состоящий из вспомогательных реагентов: антиоксиданта - аскорбиновой кислоты в количестве 10 мг; восстановителя рения до более низкого валентного состояния - хлорида олова дигидрата - 13,3 мг; эмульгатора - полисорбата-80 - 2,5 мг; полипептидного носителя радионуклидов - микросфер альбумина крови человека диаметром 20-40 мкм - 10 мг; трансхелатора и стабилизатора рН - K,Na- виннокислого (тартрат K, Na) - 18,9 мг; при этом все вспомогательные реагенты расфасованы по трем флаконам: во флаконе №1 содержится смесь восстановителя и антиоксиданта, во флаконе №2 содержится смесь полипептидного носителя атомов радионуклида и эмульгатора, во флаконе №3 содержится трансхелатор и стабилизатор рН, способствующий достижению величины рН суспензии полипептидных биодеградабельных микрочастиц, находящихся в изотоническом 0,9% водном растворе хлорида натрия, меченных изотопом рения, в интервале от 2 до 5, при этом содержимое каждого флакона стерильно и лиофилизировано.
Наверх