Способ прогнозирования клинического течения гемофилии с уровнем активности факторов viii, ix


G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)
G01N2800/22 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2698453:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, основанной на генетическом методе выявления критериев, свидетельствующих о тяжести клинического течения гемофилии. Раскрыт способ прогнозирования клинического течения гемофилии с уровнем активности факторов VIII, XI < 1% путем исследования однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного обмена человека, включающий в себя комплексное определение полиморфизмов генов MTHFR:677, MTHFR:1298, MTR:2756, MTRR:66. При этом оценку генов в гомозиготном и гетерозиготном состояниях проводят в соответствии с балльной шкалой, присваивая генетическим факторам следующие значения: MTHFR:677 С/Т - 3 балла, MTHFR:677 Т/Т - 5 баллов, MTHFR:1298 А/С - 3 балла, MTHFR:1298 С/С - 5 баллов, MTR:2756 A/G - 1 балл, MTR:2756 G/G - 2 балла, MTRR:66 A/G - 1 балл, MTRR:66 G/G - 2 балла; при суммарном количестве баллов 10 и более дают прогноз легкого клинического течения, 5-9 баллов - средней тяжести, 4 балла и менее - тяжелого. Изобретение обеспечивает возможность назначения пациенту адекватной медикаментозной терапии и установления риска развития геморрагических осложнений у больных гемофилией. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, конкретно к способу прогнозирования клинического течения гемофилии с уровнем активности факторов VIII, IX <1% путем исследования однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного обмена человека. Способ включает в себя комплексное определение полиморфизмов генов MTHFR:677, MTHFR:1298, MTR:2756, MTRR:66. Способ обеспечивает раннюю диагностику особенностей клинического течения гемофилии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, основанной на генетическом методе выявления критериев, свидетельствующих о тяжести клинического течения гемофилии.

Цель изобретения - разработать способ оценки генетических факторов путем анализа полиморфизмов генов MTHFR:677 С>Т, MTHFR:1298 А>С, MTR:2756 A>G, MTRR:66 A>G у пациентов с тяжелой формой гемофилии А, В.

Гемофилия - это наследственное заболевание, возникающее в результате нарушения синтеза фактора свертывания крови VIII или IX (гемофилия А или В соответственно) [1, 2]. В зависимости от уровня активности фактора выделяют тяжелую форму заболевания (менее 1% от нормы), средней тяжести (1-5%), легкую (более 5% от нормы) [3]. Тяжесть геморрагических проявлений гемофилии определяется уровнем содержания в крови фактора VIII или IX и может варьировать.

Легкая форма без действия провоцирующих факторов протекает бессимптомно, но травма или инвазивные вмешательства сопровождаются геморрагическими проявлениями, требующими применения специфических препаратов. Гемофилия легкой степени тяжести нередко впервые выявляется в зрелом возрасте.

При средней степени тяжести спонтанные кровотечения и кровоизлияния возникают редко, тогда как тяжелая форма манифестирует в раннем детском возрасте спонтанными, часто рецидивными кровотечениями и кровоизлияниями в любые органы и ткани, вызывающими дегенеративные процессы и прогрессирующие изменения в суставах.

Даже при сходном уровне снижения коагуляционного фактора тяжесть клинического течения гемофилии у разных пациентов варьирует [4, 5]. Высказывались предположения, что интенсивность геморрагических проявлений болезни зависит от полиморфизма генов тромбофилии, в том числе генов фолатного обмена [6, 7].

К генам, регулирующим фолатный обмен, относятся мутации, ассоциированные с патологическим синтезом гомоцистеина. Гипергомоцистеинемия оказывает прямое повреждающее действие на эндотелиоциты, ингибирует активацию антитромбина III, экспрессию тромбомодулина и оксида азота, снижает синтез простациклина, повышает агрегационные и адгезивные свойства тромбоцитов и блокирует связывание тканевого активатора плазминогена эндотелиоцитами, что в целом повышает свертываемость крови [8, 9].

Известен способ прогнозирования потребности в концентрате фактора для профилактики кровотечений у больных гемофилией [10], основанный на исследовании носительства мутации фактора V Лейден, предрасполагающей к повышенной свертываемости крови. Недостатком способа является отсутствие информации о роли других мутаций генов тромбофилии, которые чаще встречаются в популяции и могут также воздействовать на течение гемофилии.

Известен способ оценки влияния полиморфизма генов F2, F5, фибриногена, ITGA2, ITGB3, PAI-1 на возраст манифестации гемофилии [11], однако использование только возраста дебюта в качестве критерия недостаточно для установления связи генетических факторов с особенностями клинического течения заболевания.

Наиболее близко к предлагаемому изобретению - изучение генов MTHFR, F2, F5 и их влияния на геморрагические проявления у пациентов с гемофилией [12]. Этот способ охватывает несколько генетических факторов тромбофилии, но не включает в себя оценку аллелей генов MTR, MTRR как других предикторов гипергомоцистеинемии.

Комплексный анализ генов MTHFR, MTR, MTRR позволяет клиницисту прогнозировать особенности течения гемофилии и персонифицировать терапию.

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание способа прогнозирования клинического течения гемофилии с уровнем активности факторов VIII, IX <1% при исследовании однонуклеотидных полиморфизмов генов MTHFR, MTR, MTRR человека, что необходимо для назначения пациенту адекватной медикаментозной терапии и установления риска развития геморрагических осложнений у больных гемофилией.

Для достижения указанного результата в соответствии с прототипом исследуют однонуклеотидные полиморфизмы генов MTHFR:677 C>Т, MTHFR:1298 А>С, MTR:2756 A>G, MTRR:66 A>G человека. В отличие от аналога, в котором изучается только несколько полиморфизмов генов (MTHFR, F2, F5) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), в данном способе осуществляется комплексная оценка генов MTHFR:677 C>Т, MTHFR:1298 А>С, MTR:2756 A>G, MTRR:66 A>G и прогнозирование клинического течения гемофилии в соответствии с разработанной балльной шкалой.

В процессе проведения патентно-информационного поиска не выявлено источников, порочащих новизну предполагаемого изобретения.

Заявляемое изобретение разработано в лаборатории иммуногематологии ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в соответствии с планом научно-исследовательской работы.

Способ предусматривает следующую последовательность исследований:

Этап 1. Получение препаратов геномной ДНК из образца периферической крови больного гемофилией. Взятие, пробоподготовку, хранение материала и выделение ДНК проводят в соответствии с инструкцией к используемому комплекту для выделения ДНК из биологического материала.

Этап 2. Проведение процедуры типирования больного гемофилией. Анализ заключается в определении однонуклеотидных замен локусов генов MTHFR:677 C>Т, MTHFR:1298 А>С, MTR:2756 A>G, MTRR:66 A>G методом ПЦР с флуориметрической регистрацией продуктов в ходе процесса (ПЦР в реальном времени). Исследование осуществляют в соответствии со способом, описанным в инструкции к набору для ПЦР.

Этап 3. Оценка генотипа пациентов с присвоением выявленным полиморфизмам генов MTHFR:677 C>Т, MTHFR:1298 А>С, MTR:2756 A>G, MTRR:66 A>G определенного балла в зависимости от их корреляции с интенсивностью геморрагических проявлений (таблица 1).

Заключение о том, что клиническая манифестация тяжелой формы гемофилии будет соответствовать легкой форме, делают при суммарном количестве баллов 10 и более, средней форме - 5-9 баллов, тяжелой - 4 балла и менее.

Клинические примеры подтверждают возможность использования и эффективность предлагаемого способа при прогнозировании клинических проявлений тяжелой формы гемофилии.

Пример 1.

Больной С, 1981 г.р.

Диагноз: Гемофилия А, ингибиторная форма.

Первые геморрагические проявления наблюдались в 4 г., когда пациент впервые обратился в КНИИГиПК с посттравматической гематомой левой щеки. Уровень фактора VIII составил менее 1% от нормы (тяжелая форма). В детстве госпитализировался в среднем 2-3 раза/год по поводу посттравматических кровотечений (обычно гематомы мягких тканей, кровоизлияния в голеностопные суставы). Несмотря на то что пациент длительное время не получал адекватной современной терапии (в связи с тем, что концентрат фактора VIII стал доступен в России с 2007 г. для профилактического лечения по программе «7 нозологий»), у больного нет выраженных изменений опорно-двигательного аппарата, деформаций суставов. В 2000 г. выявлено наличие ингибитора в крови более 20БЕ (к 2017 г. снизился до 1-1,5 БЕ). Пациент получает профилактическое лечение 2000ЕД 2 раза/нед концентрат фактора VIII. Жалоб не предъявляет, спонтанные кровотечения беспокоят редко. Таким образом, можно сделать вывод о несоответствии клинической картины тяжести диагноза. Результаты типирования полиморфизмов генов фолатного цикла: MTHFR:677 Т/Т - 5 баллов, MTHFR:1298 А/С - 3 балла, MTR:2756 А/А - 0 баллов, MTRR:66 А/А - 0 баллов. Суммарное количество баллов - 8.

Заключение: Выявленный у больного полиморфизм генов фолатного обмена предрасполагает к течению гемофилии А средней тяжести.

Пример 2.

Больной Ж., 2014 г.р.

Диагноз: Гемофилия В.

Первые геморрагические проявления наблюдались в 1 мес, в виде постинъекционного кровотечения. При обследовании уровень фактора IX составил менее 1% от нормы (тяжелая форма). Находится на стационарном лечении в среднем 3-4 раза/год по поводу посттравматических кровотечений. Беспокоят спонтанные кровотечения на фоне адекватной заместительной терапии. Результаты типирования полиморфизмов генов фолатного цикла: MTHFR:-677 С/С - 0 баллов, MTHFR:1298 А/А - 0 баллов, MTR:2756 A/G - 1 балл, MTRR:66 A/G - 1 балл. Суммарное количество баллов - 2.

Заключение: Выявленный у больного полиморфизм генов фолатного обмена предрасполагает к тяжелому течению гемофилии В.

Список литературы:

1. Данилов И.П., Змачинский В.А., Цвирко Д.Г., и др. Гемофилия // Медицинские новости. - 2008. - №13. - С. 20-23.

2. Oldenburg J. Optimal treatment strategies for hemophilia: achievements and limitations of current prophylactic regimens // Blood. - 2015. - №125. - P. 2038-2044.

3. Triplett D.A. Coagulation and Bleeding Disorders: Review and Update // Clinical Chemistry. - 2000. №46:8(B). P. 1260-1269.

4. Jayandharan G.R., Srivastava A. The phenotypic heterogeneity of severe hemophilia // Semin Thromb Hemost. - 2008. - №34 (1). - P. 128-141.

5. Nogami K., Shima M. Phenotypic heterogeneity of hemostasis in severe hemophilia // Semin Thromb Hemost. - 2015. - №41 (8). - P. 826-831.

6. Franchini M., Montagnana M., Targher G. et al. Interpatient phenotypic inconsistency in severe congenital hemophilia: a systematic review of the role of inherited thrombophilia // Semin Thromb Hemost. - 2009. - №35 (3). - P. 307-312.

7. Момот А.П. Проблема тромбофилии в клинической практике // Российский журнал детской гематологии и онкологии (РЖДГиО). - 2015. - №2(1). - С. 36-48.

8. Лазаренко В.А., Бобровская Е.А., Сорокин А.В. Гипергомоцистеинемия: периферический атеросклероз и реконструктивная хирургия // Человек и его здоровье. - 2014. - №4. - С. 63-66.

9. Williams К.Т., Schalinske К.L. Homocysteine metabolism and its relation to health and disease // Biofactors. - 2010. - Vol. 36, №1. - P. 19-24.

10. Lee D.H., Walker I.R., Teitel J. et al. Effect of the factor V Leiden mutation on the clinical expression of severe hemophilia A // Thromb Haemost. - 2000. - №83 (3). - P. 387-391.

11. Poponina E., Butina E., Roitman E. et al. Correlation of the debut of clinical symptoms in hemophilia with hereditary factors of thrombophilia // Materials of 25th biennial international congress of thrombosis, Venice, 2018: 168.

12. Ahmed R., Kannan M., Choudhry V.P. et al. Does the MTHFR 677T allele alter the clinical phenotype in severe haemophilia A? // Thrombosis Research. - 2003. - №109(1). - P. 71-72.

Способ прогнозирования клинического течения гемофилии с уровнем активности факторов VIII, XI <1% путем исследования однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного обмена человека, включающий в себя комплексное определение полиморфизмов генов MTHFR:677, MTHFR:1298, MTR:2756, MTRR:66, отличающийся тем, что оценку генов в гомозиготном и гетерозиготном состояниях проводят в соответствии с разработанной балльной шкалой, присваивая генетическим факторам следующие значения: MTHFR:677 С/Т - 3 балла, MTHFR:677 Т/Т - 5 баллов, MTHFR:1298 А/С - 3 балла, MTHFR:1298 С/С - 5 баллов, MTR:2756 A/G - 1 балл, MTR:2756 G/G - 2 балла, MTRR:66 A/G - 1 балл, MTRR:66 G/G - 2 балла; при суммарном количестве баллов 10 и более дают прогноз легкого клинического течения, 5-9 баллов - средней тяжести, 4 балла и менее - тяжелого.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для ранней дифференциальной диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) от обострения хронического пиелонефрита.

Изобретение относится к определению комплемент-зависимой цитотоксичности композиции. Способ определения комплемент-зависимой цитотоксичности композиции, содержащей первый сайт связывания, который специфически связывается с первым эпитопом первого антигена, конъюгированный с первым полипептидом Fc-области человеческого происхождения, и второй сайт связывания, который специфически связывается со вторым эпитопом второго антигена, конъюгированный со вторым полипептидом Fc-области человеческого происхождения, включает следующие стадии: инкубацию человеческой клетки, экспрессирующей первый антиген или первый антиген и второй антиген, с композицией, добавление к смеси стадии (а) кроличьего комплемента, определение клеточного лизиса и, таким образом, определение комплемент-зависимой цитотоксичности композиции.
Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и кардиологии, и предназначено для выявления предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличия доклинических признаков этой патологии.
Изобретение относится к медицине, а именно к гигиене питания, и может быть использовано для оценки эффективности рационов лечебно-профилактического питания для работающих приоритетных профессий медной металлургии.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к созданию устройств с биочувствительным элементом на основе восстановленного оксида графена. Способ изготовления биологического сенсора на основе оксида графена включает формирование на подложке пленки графенсодержащего материала, паттернирование полученной пленки с образованием проводящего канала и модификацию поверхности пленки химическими соединениями.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для детекции туберкулеза у субъекта. Для этого в образце мокроты, полученной от субъекта, определяют уровень одного или нескольких биомаркеров, выбранных из группы, состоящей из антагониста рецептора интерлейкина-1 (IL-1Ra), интерлейкина-10 (IL-10), интерлейкина-13 (IL-13), интерлейкина-15 (IL-15), фактора роста фибробластов (FGF), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (G-CSF) и фактора роста эндотелия сосудов (VEGF).

Изобретение относится к области медицины и молекулярной биологии. Предложен экспресс-тест на основе ПЦР для прогнозирования чувствительности образца опухоли головного мозга конкретного пациента к онколитическим вирусам.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ преимплантационной генетической диагностики анемии Фанкони у эмбриона, предусматривающий определение мутаций с.731Т>А (p.L244X), c.1844dupC и делеции 1-3 экзонов гена FANCA путем проведения прямой и косвенной диагностики.

Изобретение относится к биотехнологии, аналитической химии и касается способа определения содержания β-казеина А1 и/или А2 групп в молоке, молочных продуктах, молочных составных продуктах, молокосодержащих продуктах.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике стадии фиброза печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом В. Согласно предлагаемому способу, в лимфоцитах периферической крови методом ДНК-комет определяют процент повреждений ДНК, осуществляют клинический и общетерапевтический биохимический анализ крови, с использованием предсказательной математической модели по результатам анализов пациентов с хроническим вирусным гепатитом B находят коэффициенты порядковой логистической регрессии с регуляризацией, с помощью которых рассчитывают значение вспомогательных показателей esl и es2 по следующим формулам: es1 = ехр(6,354-0,019*⋅Возраст - 0,096*⋅Лейкоциты - 0,066*⋅СОЭ - 0,770*⋅%ДНК в хвосте кометы); es2 = ехр(11,944-0,019*⋅Возраст - 0,096*⋅Лейкоциты - 0,066*⋅СОЭ - 0,770*⋅%ДНК в хвосте кометы), где ехр - экспоненциальная функция; возраст - возраст пациента, лет; СОЭ - скорость оседания эритроцитов, мм/ч; лейкоциты - содержание лейкоцитов в периферической крови пациента, 109/л; % ДНК в хвосте кометы - содержание ДНК в хвосте кометы лимфоцита, %.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ получения зоны характеризации аналитической пластины для проведения характеризации популяции микроорганизма в присутствии антимикробного агента методом MALDI, способ характеризации популяции микроорганизма (варианты), аналитическая пластина и средство для характеризации популяции микроорганизма, представляющее собой указанную пластину.
Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и кардиологии, и предназначено для выявления предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличия доклинических признаков этой патологии.

Изобретение относится к области металлографического анализа. Устройство содержит анод и катод, причем по меньшей мере часть катода содержит материал, содержащий металл M', значение Δ которого, определяемое следующей формулой, составляет 10 или больше, причем устройство содержит электролитическую ячейку для вмещения раствора электролита, содержащего химический агент, который образует комплексное соединение, содержащее упомянутый металл M' и неводный растворитель,Δ = pKsp[M'x'Ay'] - pKsp [MxAy] = (-log10 Ksp[M'x'Ay']) - (-log10Ksp[MxAy]),в котором произведение растворимости металлического соединения M'x'Ay' определяется как Ksp[M'x'Ay'], а произведение растворимости экстрагируемого металлического соединения MxAy, которое содержится в металлическом материале, определяется как Ksp[MxAy], и в котором M и M' являются различными металлическими элементами, A является одиночным атомом или атомной группой, образующей соединение с M или M', и x, x', y и y' представляют собой доли в составе соединения, определяемые в соответствии с валентностями M, M' и A, а произведение растворимости Ksp является значением в водном растворе при 25°C.

Изобретение относится к аналитическому приборостроению и может быть использовано в устройствах для автоматического отбора и ввода проб жидкости, например, в газовый хроматограф.

Изобретение относится к газовой хроматографии и может быть использовано для концентрирования примесей методом твердофазной экстракции с последующей термодесорбцией в хроматографическую колонку для анализа примесей в нефтяной, газовой, нефтехимической отраслях промышленности, медицине, экологии и др.

Изобретение относится к области газохроматографического анализа ароматических углеводородов. Способ количественного газохроматографического анализа паров трет-бутилбензола в зараженном воздухе, согласно которому анализируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором пробы воздуха, зараженного парами трет-бутилбензола, отобранные на поглотительный раствор в поглотительном приборе со стеклянной пористой пластиной, отличается тем, что в качестве поглотительного раствора используют этиловый спирт.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики первично-резистентной формы секретирующей экстракраниальной герминогенной опухоли у детей, включающий определение инициального значения уровня альфафетопротеина (АФП) у пациента с морфологически верифицированной герминогенной опухолью и уровня АФП на фоне индукционной полихимиотерапии, отличающийся тем, что второе значение уровня АФП определяют после двух циклов индукционной полихимиотерапии на 40-43 дни лечения и используют приведенную на фиг.
Изобретение относится к состоящей из многих частей акриловой композиция холодного отверждения для металлографических форм для получения металлографической оболочки.

Изобретение относится к области медицины, в частности, к хирургии и представляет собой способ оценки готовности к выполнению пластического закрытия раны у больных с синдромом диабетической стопы путем исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что у больного после оперативного вмешательства в сыворотке крови, взятой из вены, ближайшей к очагу воспаления, определяют содержание фактора некроза опухоли (ФНО) один раз в три дня и при его значении ниже 8,21 пг/мл делают вывод о возможности выполнения пластического закрытия раны: проведения аутодермопластики или наложения 2-х швов.

Изобретение относится к устройствам отбора проб нефти и нефтепродуктов из резервуара. Стационарная система отбора проб с измерительным люком содержит с установочным фланцем 2 цилиндрический корпус 1, внутри которого расположен пробоотборник 3, закрепленный на перфорированной ленте 4 посредством подвеса 10.
Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской генетике и кардиологии, и предназначено для выявления предрасположенности пациента к атеросклерозу или наличия доклинических признаков этой патологии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, основанной на генетическом методе выявления критериев, свидетельствующих о тяжести клинического течения гемофилии. Раскрыт способ прогнозирования клинического течения гемофилии с уровнем активности факторов VIII, XI < 1 путем исследования однонуклеотидных полиморфизмов генов фолатного обмена человека, включающий в себя комплексное определение полиморфизмов генов MTHFR:677, MTHFR:1298, MTR:2756, MTRR:66. При этом оценку генов в гомозиготном и гетерозиготном состояниях проводят в соответствии с балльной шкалой, присваивая генетическим факторам следующие значения: MTHFR:677 СТ - 3 балла, MTHFR:677 ТТ - 5 баллов, MTHFR:1298 АС - 3 балла, MTHFR:1298 СС - 5 баллов, MTR:2756 AG - 1 балл, MTR:2756 GG - 2 балла, MTRR:66 AG - 1 балл, MTRR:66 GG - 2 балла; при суммарном количестве баллов 10 и более дают прогноз легкого клинического течения, 5-9 баллов - средней тяжести, 4 балла и менее - тяжелого. Изобретение обеспечивает возможность назначения пациенту адекватной медикаментозной терапии и установления риска развития геморрагических осложнений у больных гемофилией. 1 табл., 2 пр.

Наверх